WO2020016983A1 - 灌流培養用アタッチメント - Google Patents
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Definitions
- the present invention relates to an attachment for performing perfusion culturing in a closed culture vessel by mounting the culture vessel in an open system so that the culture vessel is sealed.
- the present invention has been conceived under such circumstances, and includes various culture medium exchanges and perfusion cultivation by attaching the cultivation container to an existing open-system culture container and sealing the culture container.
- the main object is to provide an attachment suitable for a culture device.
- the present invention employs the following technical means.
- the attachment for perfusion culture provided by the present invention has an opening at one end in a first direction, and is attached to a culture container having at least one bottomed cylindrical container portion extending in the first direction.
- a projection is provided which fits inside the container and protrudes toward the other side in the first direction.
- the sealing member includes a bottom wall portion that forms the protruding portion, and a cylindrical portion that extends from the bottom wall portion to the one side in the first direction and that is pressed into the container portion.
- a base member made of a hard material separate from the seal member, wherein the base member has a bottom wall constituting the projecting portion, and a cylindrical side wall rising from the bottom wall.
- An annular flange extending radially outward from an end of the side wall, wherein the seal member is interposed between the flange and the peripheral edge of the opening in the first direction, and It has a plate portion that can contact the entire periphery of the opening.
- the sealing member has a tubular portion extending from the plate portion to the other side in the first direction, and the tubular portion is press-fitted between the container portion and the side wall. Is done.
- a base member made of a hard material separate from the seal member, wherein the base member has a bottom wall constituting the projecting portion, and a cylindrical side wall rising from the bottom wall. , And the seal member is press-fitted between the container portion and the side wall.
- the base member is transparent.
- the seal member has the protrusion, and the protrusion has a transparent thin portion whose thickness is relatively smaller than other portions.
- each of the seal member flow paths faces a direction substantially perpendicular to the first direction.
- the plurality of flow paths in the seal member include a fluid introduction flow path for introducing a fluid from the outside to the inner space of the container, and a fluid from the inner space of the container to the outside. And a fluid outflow channel for outflow.
- the culture container includes a plurality of the container portions that are spaced apart from each other in an in-plane direction that is perpendicular to the first direction, and the seal member includes the protruding portion. It has a plurality of bottom wall parts and a plurality of cylindrical parts each extending from the bottom wall part to the one side in the first direction and being press-fitted into the container part.
- the culture container includes a plurality of the container portions that are spaced apart from each other in an in-plane direction perpendicular to the first direction, and is a hard member separate from the seal member.
- a base member made of a material, wherein the base member is accommodated inside the container portion and has a plurality of first members each having a bottom wall constituting the projecting portion and a cylindrical side wall rising from the bottom wall.
- the seal member has a plurality of tubular portions each extending from the plate portion to the other side in the first direction, and capable of inserting the first bottomed tubular portion,
- the tubular part is press-fitted between the container part and the side wall.
- the base member is transparent.
- the culture container includes a plurality of the container portions that are spaced apart from each other in an in-plane direction perpendicular to the first direction, and is a hard member separate from the seal member.
- a base member made of a material and having a plate-shaped pressing portion, wherein the sealing member is interposed between the pressing portion and a peripheral portion of each of the openings in the first direction, and a peripheral portion of each of the openings.
- a plurality of second bottomed tubular portions each having a plate portion capable of abutting on all the portions, a tubular portion extending from the plate portion to the other side in the first direction, and a bottom wall portion forming the protruding portion;
- each of the seal member flow paths faces a direction substantially perpendicular to the first direction.
- each of the flow paths in the seal member faces the one side in the first direction, and each of the pressing portions communicates with the one end of the flow path in the seal member. And a plurality of through paths penetrating in the first direction.
- the plurality of flow paths in the seal member include a plurality of fluid introduction flow paths for introducing a fluid from outside to the inner space of each of the plurality of container portions, and the plurality of containers.
- a plurality of fluid lead-out channels for leading a fluid to the outside from the inner space of each part.
- the seal member has at least one communication flow path for communicating the inner spaces of the container.
- the plurality of seal member flow paths, a fluid introduction flow path for introducing a fluid from the outside into the inner space of the first container portion of the plurality of container portions, And a fluid deriving flow path for deriving a fluid from the inner space of the second container part to the outside of the plurality of container parts, wherein the communication flow path is formed of the first container part.
- the container is provided so as to communicate with the inner space of the second container portion through the inner space of the adjacent container portion sequentially from the inner space.
- the communication flow path includes a groove formed on a surface of the plate portion facing the one side in the first direction.
- FIG. 2 is an exploded view of the perfusion culture system shown in FIG. 1.
- BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS It is a top view which shows 1st Embodiment of the attachment for perfusion culture which concerns on this invention, and the culture container unit provided with this.
- FIG. 4 is a sectional view taken along the line IV-IV in FIG. 3.
- FIG. 5 is a sectional view taken along line VV in FIG. 3.
- FIG. 4 is an exploded perspective view of the culture vessel unit shown in FIG.
- FIG. 6 is a cross-sectional view similar to FIG. 5, showing a state in which contents are stored in a culture vessel unit.
- FIG. 9 is a sectional view taken along line IX-IX in FIG. 8.
- FIG. 9 is an exploded perspective view of the culture vessel unit shown in FIG.
- FIG. 5 is a cross-sectional view similar to FIG. 4 showing a modification of the culture container unit and the attachment for perfusion culture shown in FIG. 3.
- FIG. 5 is a cross-sectional view similar to FIG. 4 showing a modification of the culture container unit and the attachment for perfusion culture shown in FIG. 3.
- FIG. 5 is a cross-sectional view similar to FIG. 4 showing a modification of the culture container unit and the attachment for perfusion culture shown in FIG. 3.
- FIG. 5 is a cross-sectional view similar to FIG.
- FIG. 4 shows a modification of the culture container unit and the attachment for perfusion culture shown in FIG. 3.
- FIG. 16 is a perspective view showing a state in which the attachment of the culture vessel unit shown in FIG. 15 is appropriately disassembled.
- FIG. 16 is a sectional view taken along the line XVIII-XVIII in FIG.
- FIG. 20 is a perspective view of the culture vessel unit shown in FIG. 19.
- FIG. 20 is an exploded perspective view of the culture vessel unit shown in FIG.
- FIG. 20 is a sectional view taken along the line XXII-XXII in FIG. 19. It is a top view which shows 3rd Embodiment of the attachment for perfusion culture which concerns on this invention, and the culture container unit provided with this.
- FIG. 24 is a perspective view of the culture vessel unit shown in FIG. 23.
- FIG. 24 is an exploded perspective view of the culture vessel unit shown in FIG. 23.
- FIG. 24 is a cross-sectional view of FIG. 23 taken along the line XXVI-XXVI.
- FIG. 24 is a sectional view taken along the line XXVII-XXVII in FIG. 23.
- FIGS. 1 and 2 show an example of a perfusion culture system including the perfusion culture attachment according to the present invention.
- the perfusion culture system A10 of the present embodiment includes a culture vessel unit 1A, a culture solution container 2, a vacuum vessel unit 3, a first flow path 41, a second flow path 42, a first connection means 51, It has a second connection means 52 and a constricted part 6.
- the perfusion culture system A10 supplies the new culture solution contained in the culture solution container 2 to the culture container unit 1A, and collects the old culture solution in the culture container unit 1A into the vacuum container unit 3. It is for doing.
- the culture vessel unit 1A includes a culture vessel 10A and an attachment 11A.
- the culture vessel 10A for example, an existing open culture vessel such as a dish (dish) or a well plate is used, and the present embodiment shows a case where the culture vessel 10A is a dish.
- the culture container 10A includes one container portion 100.
- the container portion 100 has a bottom plate 101 and a cylindrical shape having an opening 103 at an upper end (one end in the first direction) rising from the periphery of the bottom plate 101. It is constituted by the side plate 102.
- the upper surface of the bottom plate 101 is a flat cell culture surface for culturing cells.
- the cell culture surface (the upper surface of the bottom plate 101) is appropriately subjected to a surface treatment for improving cell adhesion as needed.
- Examples of the surface treatment include a corona discharge treatment and a plasma treatment (hydrophilization treatment).
- the attachment 11A is attached to the culture container 10A, and is for closing the opening 103 of the culture container 10A (container part 100) to seal the inner space of the container part 100.
- the attachment 11A is an example of an attachment for perfusion culture according to the present invention, and includes a base member 12 and a seal member 13 in the present embodiment.
- the base member 12 has a bottom wall 121, a cylindrical side wall 122 extending upright from the periphery of the bottom wall 121, and a flange 123.
- the bottom wall 121 fits inside the side plate 102 in the culture vessel 10A with a space from the side plate 102 and protrudes downward (the other side in the first direction).
- the bottom wall 121 constitutes a protrusion in the present invention.
- the flange 123 extends radially outward from the upper end of the side wall 122 and has an annular shape. The base member 12 having such a configuration overlaps with all the openings 103 of the culture vessel 10A in plan view.
- the culture vessel 10A and the base member 12 are made of, for example, a translucent or transparent hard plastic material.
- Suitable plastic materials include, but are not limited to, polystyrene, methylpentene, polycarbonate, cycloolefin polymers, cycloolefin copolymers, and other suitably transparent materials.
- the bottom plate 101 of the culture vessel 10A and the bottom wall 121 of the base member 12 are transparent.
- the bottom plate 101 and the bottom wall 121 are portions where the inside space of the culture vessel 10A can be visually recognized from the outside.
- the seal member 13 is, for example, a rubber molded product, and includes a vertically extending cylindrical portion 131, a plate portion 132, and an annular protrusion 133, as shown in FIGS.
- the seal member 13 is interposed between the side plate 102 of the culture container 10A (container part 100) and the side wall 122 or the flange 123 of the base member 12.
- the cylindrical portion 131 extends downward (the other side in the first direction) from the inner peripheral portion of the plate portion 132 and is fitted on the side wall 122 of the base member 12.
- the inner diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly smaller than the outer diameter of the side wall 122, whereby the cylindrical portion 131 (seal member 13) is pressed against the side wall 122 (base member 12).
- the annular projection 133 protrudes radially outward from the outer periphery of the cylindrical portion 131, and presses against the inner peripheral surface of the side plate 102 when the attachment 11A is attached to the culture vessel 10A.
- the cylindrical portion 131 is press-fitted between the side plate 102 (container portion 100) and the side wall 122 (base member 12).
- the plate portion 132 extends radially outward from the upper end of the cylindrical portion 131 and has an annular shape.
- the plate portion 132 overlaps the flange 123 of the base member 12 in a plan view. Further, when the attachment 11A is attached to the culture container 10A, the plate portion 132 abuts on the entire periphery of the opening 103 in the culture container 10A (container portion 100). With such a configuration, the base member 12 and the seal member 13 (attachment 11A) seal the inner space of the culture container 10A (container part 100).
- the seal member 13 has a fluid introduction channel 15 and a fluid exit channel 16.
- the fluid introduction flow path 15 is a flow path for introducing a fluid such as a culture solution from the outside of the container section 100 to the inner space of the container section 100.
- the fluid introduction channel 15 is configured by holes or grooves formed in the seal member 13. More specifically, the fluid introduction channel 15 is configured such that a hole formed in the plate portion 132 and a groove formed on the inner surface of the cylindrical portion 131 are connected.
- One end of the fluid introduction channel 15 is a fluid inlet 151 communicating to the outside, and the other end of the fluid introduction channel 15 communicates with the inside space of the sealed culture vessel 10A (vessel part 100).
- the fluid inlet 151 is oriented in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the fluid outlet channel 16 is a channel for leading a fluid from the space inside the container unit 100 to the outside of the container unit 100.
- the fluid outlet channel 16 is provided on the opposite side of the fluid inlet channel 15 with respect to the center of the seal member 13 in plan view.
- the fluid outlet channel 16 is configured such that a hole formed in the plate portion 132 and a groove formed on the inner surface of the cylindrical portion 131 are connected.
- One end of the fluid outlet channel 16 is a fluid outlet 161 communicating to the outside, and the other end of the fluid outlet channel 16 communicates with the inside space of the sealed culture vessel 10A (vessel part 100).
- the fluid outlet 161 faces in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the fluid inlet 151 and the fluid outlet 161 face opposite sides.
- the fluid introduction channel 15 and the fluid outlet channel 16 constitute a channel in the seal member according to the present invention.
- the seal member 13 is made of a material having flexibility and elasticity.
- the material constituting the seal member 13 include silicone rubber, natural rubber, urethane rubber, and elastomer resin. Although the details will be described later, in consideration of the contact between the sealing member 13 and the contents (for example, culture solution), a medical silicone rubber having no cytotoxicity and biocompatibility is more preferable as the material of the sealing member 13. .
- the hardness of the seal member 13 is preferably, for example, about 20 degrees to 40 degrees in rubber hardness.
- the culture solution container 2 shown in FIG. 1 is a closed container for storing a replacement culture solution.
- the culture solution container 2 is provided with an outlet 21 for extracting the contents.
- the culture solution container 2 is preferably configured to be flexible and changeable in volume. Examples of such a culture solution container 2 include a bellows-like container, a film-like container, a syringe, a laminated peeling bottle, and the like. In this embodiment, the case where the culture solution container 2 is a bellows-like container is shown.
- the vacuum container unit 3 is adjusted to be in a negative pressure state, and collects a culture solution and the like inside the culture container unit 1A.
- the vacuum container unit 3 is configured to include a tube 31 and a stopper 32.
- the tube 31 has a bottomed cylindrical shape having an open end 311 at the tip.
- the plug 32 closes the open end 311, and the inside of the sealed tube 31 is adjusted to a negative pressure state.
- Part of the stopper 32 is made of, for example, a rubber material capable of piercing a puncture needle.
- a blood collection tube that is a general-purpose product can be used as the vacuum container unit 3 having such a configuration.
- the first flow path 41 is a fluid flow path that connects between the culture vessel unit 1A and the culture solution container 2, and is formed of, for example, a flexible tube. One end of the first flow path 41 can communicate with the inside of the culture vessel unit 1A via the fluid inlet 151. The other end of the first flow path 41 can communicate with the inside of the culture solution container 2 via the outlet 21.
- the first connection means 51 shown in FIG. 1 is provided in the first flow path 41 and connects and connects the culture vessel unit 1A and the culture solution container 2 in a sealed state.
- the first connecting means 51 can separate the culture vessel unit 1A and the culture solution container 2 in a sealed state from each other (see FIG. 2).
- the first connection means 51 having such a configuration is realized by, for example, a luer lock connection structure having a female luer connector 511 and a male luer connector 512.
- the first flow path 41 has a partial flow path 411 connected to the culture vessel unit 1A (fluid inlet 151) and a partial flow path connected to the culture solution container 2 (outlet 21).
- a female luer connector 511 is provided at the tip of the partial flow path 411
- a male luer connector 512 is provided at the tip of the partial flow path 412.
- the second flow path 42 is a fluid flow path that connects between the culture vessel unit 1A and the vacuum vessel unit 3, and is made of, for example, a flexible tube.
- One end of the second flow path 42 can communicate with the inside of the culture vessel unit 1A via the fluid outlet 161.
- a puncture needle 43 that can puncture the stopper 32 of the vacuum container unit 3 is attached to the other end of the second channel 42.
- the other end of the second flow path 42 can communicate with the inside of the vacuum container unit 3 (tube 31) via the puncture needle 43.
- the second connection means 52 shown in FIG. 1 is provided in the second flow path 42, and connects and connects the culture vessel unit 1A and the vacuum vessel unit 3 in a sealed state. Further, the second connection means 52 can separate the culture vessel unit 1A and the vacuum vessel unit 3 from each other in a sealed state (see FIG. 2).
- the second connection means 52 having such a configuration is realized by a luer lock connection structure having a female luer connector 521 and a male luer connector 522, for example.
- the second flow path 42 includes a partial flow path 421 connected to the culture vessel unit 1A (fluid outlet 161) and a partial flow path 422 connected to the vacuum vessel unit 3. You.
- a female luer connector 521 is provided at the tip of the partial flow path 421, and a male luer connector 522 is provided at the tip of the partial flow path 422.
- the puncture needle 43 is attached to the end of the partial flow path 422.
- the puncture needle 43 is surrounded by a cylindrical holder 44 to prevent danger.
- the inner diameter of the holder 44 is larger than the outer diameter of the tube 31, and as understood from FIGS. 1 and 2, by inserting the tube 31 (vacuum vessel unit 3) into the holder 44, Puncture needle 43 can be safely punctured.
- the constriction 6 is provided in at least one of the first channel 41 and the second channel 42.
- the constricted portion 6 has a portion where the cross section of the flow path is narrowed, and adjusts the flow rate of the fluid passing through the constricted portion 6 to a desired value.
- the constricted portion 6 is formed of a columnar body having fine holes penetrating in the longitudinal direction.
- the diameter of the micropores for example, about 0.02 to 0.05 mm
- the length of the micropores the length in the longitudinal direction: for example, about 5 to 20 mm
- the flow rate of a culture solution or the like can be adjusted.
- the constricted portion 6 is provided in a partial flow path 422 of the second flow path 42.
- the attachment 11A of the present embodiment accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture container unit 1A configured to be attached to an open culture container 10A, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the culture cells and culture solution contained in the culture container 10A are not particularly limited.
- the culture vessel 10A (vessel part 100), and the inside of the vessel part 100 is filled with a culture solution.
- the seeding of the cells may be performed by removing the attachment 11A from the culture container 10A and directly injecting the culture solution containing the cells into the culture container 10A, but may also be performed using the perfusion culture system A10. .
- a culture solution container 2 containing a culture solution containing cells to be cultured is prepared, and the culture solution container 2 is removed. Connect with culture vessel unit 1A.
- a syringe is prepared in place of the vacuum container unit 3, and the syringe is connected to the culture container unit 1A. Then, the culture solution (including cells) in the culture solution container 2 is guided into the culture container unit 1A by pulling the piston to make the inside of the syringe negative pressure, and the inside of the culture container 10A and the culture container unit 1A and the syringe And the flow path between them is filled with the culture solution.
- FIG. 7 shows a state where the inside of the culture vessel 10A (vessel part 100) is filled with the culture solution M1. After filling the culture vessel unit 1A with the culture solution, the connection between the culture vessel unit 1A and the culture solution container 2 and the connection between the culture vessel unit 1A and the syringe are respectively separated.
- the cells in the culture vessel unit 1A adhere to the cell culture surface (the upper surface of the bottom plate 101) over time, and start to proliferate.
- the upper surface of the bottom plate 101 has been subjected to the above-described surface treatment for improving the cell adhesion, the cells adhere more reliably to the cell culture surface. Therefore, such a configuration is preferable for appropriately promoting cell culture in the culture vessel unit 1A.
- the culture vessel unit 1A communicates with the culture solution container 2 via the first flow path 41, and the culture vessel unit 1A communicates with the vacuum vessel unit 3 via the second flow path 42. Then, the old culture solution in the culture vessel unit 1A moves into the vacuum vessel unit 3 via the second flow path 42 by the suction force of the vacuum vessel unit 3 whose inside is in a negative pressure state, and the culture fluid container 2 The new culture solution moves into the culture vessel unit 1A via the first flow path 41. When the exchange of the culture solution in the culture vessel unit 1A is completed, the first connection means 51 and the second connection means 52 are returned from the connected state to the separated state.
- the attachment 11A (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the culture container 10A (the container portion 100), and the flexible seal member 13 plays a role in sealing the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- the culture solution in the culture vessel unit 1A can be replaced by a one-touch operation such as changing the first connection means 51 and the second connection means 52 from the separated state to the connected state. Further, the culture solution exchange operation can be performed while the culture vessel unit 1A is in the closed state, and the risk of contamination can be avoided. Therefore, according to the culture vessel unit 1A to which the attachment 11A is attached, it is possible to reduce the operation burden on the operator and to ensure the quality of the cells when exchanging the culture solution.
- the culture solution in the culture vessel unit 1A can be exchanged without using an electric device such as a controller or a power supply. Therefore, the perfusion culture system A10 can be downsized without any fear of failure.
- the open culture container 10A can be made into a closed culture container unit 1A. Therefore, even if the culture vessel unit 1A is tilted, no inconvenience such as liquid leakage occurs. Therefore, the culture vessel unit 1A maintains the cell culture state by closing the tubes (partial flow path 411 and partial flow path 421) by heat sealing or the like with the culture solution container 2 and the vacuum vessel unit 3 removed. It is possible to transport while.
- the attachment 11A has a bottom wall 121 (projection), and the bottom wall 121 projects downward (the other side in the first direction) inside the culture vessel 10A (vessel part 100). According to such a configuration, the accommodation space for the culture solution in the culture container 10A (container unit 100) is reduced, and the amount of the culture solution used in cell culture can be reduced.
- the attachment 11A includes a flexible sealing member 13 and a base member 12 made of a hard material separate from the sealing member 13.
- the plate portion 132 of the seal member 13 is interposed between the flange 123 of the base member 12 and the peripheral portion of the opening 103 of the culture container 10A (container portion 100). , And comes into contact with the entire periphery of the opening 103.
- the seal member 13 can seal the culture container 10A (container part 100) while being supported by the base member 12.
- the cylindrical portion 131 of the seal member 13 is press-fitted between the side plate 102 of the culture vessel 10A and the side wall 122 of the base member 12.
- the culture vessel 10A can be appropriately sealed by simply attaching the attachment 11A to the culture vessel 10A.
- the bottom plate 101 of the culture vessel 10A and the bottom wall 121 of the base member 12 are transparent. Thereby, the state inside the culture vessel unit 1A can be observed from either the upper part or the lower part of the culture vessel unit 1A via the transparent bottom wall 121 or the bottom plate 101. With such a configuration, irradiation light can be transmitted regardless of whether the light source is above or below, and cells can be observed using various types of microscopes such as an optical microscope and a phase contrast microscope.
- the bottom wall 121 of the base member 12 protrudes downward.
- the culture solution in the culture vessel unit 1A comes into contact with the surface of the bottom wall 121.
- the liquid surface of the culture solution becomes flat due to the underwater eyeglass effect, irregular reflection of irradiation light is suppressed, and the microscope is easily focused.
- the fluid inlet 151 and the fluid outlet 161 communicating with the outside are substantially perpendicular to the vertical direction (first direction). Facing the direction. According to such a configuration, the size of the culture vessel unit 1A in which the attachment 11A is mounted can be reduced in the vertical direction (first direction), and the culture vessel unit 1A can be downsized.
- FIGS. 8 to 14 show modifications of the culture vessel unit 1A and the attachment 11A described above.
- the structure of the attachment perfusion culture attachment
- FIGS. 8 to 14 show modifications of the culture vessel unit 1A and the attachment 11A described above.
- the structure of the attachment perfusion culture attachment
- FIG. 8 the same or similar elements as those of the above-described embodiment are denoted by the same reference numerals, and the description will be appropriately omitted.
- the arrangement of the fluid introduction channel 15 and the fluid exit channel 16 provided in the seal member 13 is different from that of the above-described attachment 11A.
- the shapes of the member 13) and the flange 123 (base member 12) are different from those of the above-described embodiment.
- the fluid outlet channel 16 is provided on the opposite side of the fluid inlet channel 15 with respect to the center of the seal member 13 in a plan view.
- the fluid outlet channel 16 is provided relatively close.
- the fluid inlet 151 and the fluid outlet 161 communicating to the outside in the fluid introduction channel 15 and the fluid outlet channel 16 are both oriented in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction). Face the same direction.
- the attachment 11B of this modification accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture vessel unit 1B configured to be attached to an open culture vessel 10A, and maintains the cell culture state. Used to make exchanges.
- the attachment 11B In the culture vessel unit 1B, by attaching the attachment 11B to the existing open-system culture vessel 10A, cell culture in a closed state is possible.
- the attachment 11B (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the culture container 10A (the container portion 100), and the flexible seal member 13 plays a role in sealing the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- attachment 11B and the culture vessel unit 1B of the present modification the same operation and effects as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- the cylindrical portion 131 is not provided in the seal member 13, and the seal member 13 is not press-fitted between the culture vessel 10A and the base member 12. By pressing the base member 12 downward, the culture container 10A (container part 100) can be sealed.
- the attachment 11C of this modification accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture vessel unit 1C configured to be attached to an open culture vessel 10A, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the attachment 11C In the culture vessel unit 1C, by attaching the attachment 11C to the existing open culture vessel 10A, cell culture in a closed state is possible.
- the attachment 11C (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the culture container 10A (the container portion 100), and the flexible seal member 13 plays a role in sealing the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- attachment 11C and the culture vessel unit 1C of the present modification the same operation and effect as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- the seal member 13 has a bottom wall portion.
- the bottom wall portion 134 is connected to the lower end of the cylindrical portion 131 and closes the inside of the cylindrical portion 131.
- the central portion of the bottom wall portion 134 is a thin portion 135 having a relatively small thickness, and the thin portion 135 is transparent.
- the cylindrical portion 131 is not provided with the annular protrusion 133, and there is a gap between the cylindrical portion 131 and the side plate 102 of the culture vessel 10A, and the cylindrical portion 131 is not press-fitted.
- the base member 12 does not include the bottom wall 121 and the side wall 122 but includes only the annular flange 123. Thus, the seal member 13 is not press-fitted between the culture container 10A and the base member 12. In the attachment 11D having such a configuration, the culture container 10A (container portion 100) can be sealed by pressing the base member 12 downward.
- the attachment 11D of this modification accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture container unit 1D configured to be attached to an open culture container 10A, and maintains the cell culture state. Used to make exchanges.
- the culture vessel unit 1D by attaching the attachment 11D to the existing open culture vessel 10A, it is possible to perform cell culture in a closed state.
- the attachment 11D (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the culture container 10A (the container portion 100), and the flexible seal member 13 plays a role in sealing the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- attachment 11D and the culture vessel unit 1D of the present modification the same operation and effect as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- the attachment 11E shown in FIG. 13 does not include the base member 12, but includes only the seal member 13.
- the seal member 13 has a bottom wall portion 134 which is connected to the lower end of the cylindrical portion 131 and closes the inside of the cylindrical portion 131.
- the central portion of the bottom wall portion 134 is a thin portion 135 having a relatively small thickness, and the thin portion 135 is transparent.
- the outer diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly larger than the inner diameter of the side plate 102.
- the attachment 11E of this modification accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture container unit 1E that is configured to be mounted on an open culture container 10A, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the attachment 11E covers the opening 103 of the culture container 10A (container part 100), and the flexible seal member 13 plays a role in sealing the inner space of the container part 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- attachment 11E and the culture vessel unit 1E of the present modification the same operation and effect as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- the seal member 13 is not provided with the plate portion 132, and the seal member 13 includes only the cylindrical portion 131.
- the cylindrical portion 131 is fitted on the side wall 122 of the base member 12, and the inner diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly smaller than the outer diameter of the side wall 122.
- the cylindrical portion 131 (the seal member 13) is pressed and held on the side wall 122 (the base member 12).
- the upper end of the cylindrical portion 131 is in contact with the flange 123 of the base member 12, and the vertical positioning of the cylindrical portion 131 (seal member 13) with respect to the base member 12 is performed by this configuration.
- the outer diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly larger than the inner diameter of the side plate 102 in the culture vessel 10A (vessel 100).
- the cylindrical portion 131 is press-fitted between the side plate 102 (container portion 100) and the side wall 122 (base member 12).
- the attachment 11F of this modified example accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture container unit 1F configured by being mounted on an open culture container 10A, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the attachment 11F (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the culture container 10A (the container portion 100), and the flexible seal member 13 serves to seal the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- attachment 11F and the culture vessel unit 1F of the present modification the same operation and effects as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- FIGS. 15 to 18 show another embodiment (second embodiment) of the attachment for perfusion culture according to the present invention and a culture vessel unit provided with the attachment.
- the culture vessel unit 1G of this embodiment includes a culture vessel 10B and a plurality of attachments 11G.
- FIGS. 15 and 16 show a state in which the attachment 11G is attached to the culture vessel 10B.
- FIG. 17 is a perspective view of the attachment 11G in an appropriately disassembled state.
- the culture container 10B corresponds to a so-called well plate, and has a plurality of (six in the present embodiment) wells as the container unit 100.
- Each of the plurality of container parts 100 is constituted by a common long rectangular bottom plate 101 and a cylindrical side plate 102 standing from an appropriate position of the bottom plate 101 and having an opening 103 at an upper end (one side end in the first direction). ing.
- These container portions 100 are spaced apart from each other in an in-plane direction perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the upper surface of the bottom plate 101 corresponding to each container 100 is a flat cell culture surface for culturing cells.
- the cell culture surface (the upper surface of the bottom plate 101) is appropriately subjected to a surface treatment for improving cell adhesion as needed.
- Examples of the surface treatment include a corona discharge treatment and a plasma treatment (hydrophilization treatment).
- the attachment 11G is attached to each container 100 of the culture container 10B, and is for closing the opening 103 of the container 100 to seal the inner space of the container 100.
- the attachment 11G includes a base member 12 and a seal member 13, and the specific configuration thereof is similar to that of the attachment 11B described above with reference to FIGS.
- the base member 12 has a bottom wall 121, a cylindrical side wall 122 extending upright from the periphery of the bottom wall 121, and a flange 123.
- the bottom wall 121 is accommodated inside the side plate 102 of the container part 100 with a distance from the side plate 102 and protrudes downward (the other side in the first direction).
- the bottom wall 121 constitutes a protrusion in the present invention.
- the flange 123 extends radially outward from the upper end of the side wall 122 and has an annular shape. The base member 12 having such a configuration overlaps with all the openings 103 of the container part 100 in a plan view.
- the base member 12 further has a holding tube portion 124 and an extension piece 125.
- the holding tube portion 124 extends upright from the outer peripheral edge of the flange 123, and is a portion that the operator holds by hand.
- the extension piece 125 is a portion that extends radially outward from the outer periphery of the upper end portion.
- a pair of extending pieces 125 are provided so as to sandwich the axis of the holding tube portion 124.
- the culture vessel 10B and the base member 12 are formed of, for example, a translucent or transparent hard plastic material.
- Suitable plastic materials include, but are not limited to, polystyrene, methylpentene, polycarbonate, cycloolefin polymer, cycloolefin copolymer, and other suitably transparent materials.
- the bottom plate 101 of the culture vessel 10B and the bottom wall 121 of the base member 12 are transparent.
- the bottom plate 101 and the bottom wall 121 are portions where the inner space of each container 100 can be visually recognized from the outside.
- the seal member 13 is, for example, a rubber molded product, and has a vertically extending cylindrical portion 131 and a plate portion 132 as shown in FIG.
- the seal member 13 is interposed between the side plate 102 of the culture container 10B (container part 100) and the side wall 122 or the flange 123 of the base member 12.
- the cylindrical portion 131 extends downward (the other side in the first direction) from the inner peripheral portion of the plate portion 132 and is fitted on the side wall 122 of the base member 12.
- the inner diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly smaller than the outer diameter of the side wall 122, whereby the cylindrical portion 131 (seal member 13) is pressed against the side wall 122 (base member 12).
- the outer diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly larger than the inner diameter of the side plate 102 of the container 100.
- the plate portion 132 extends radially outward from the upper end of the cylindrical portion 131 and has an annular shape.
- the plate portion 132 overlaps the flange 123 of the base member 12 in a plan view.
- the attachment 11G is attached to the culture container 10B (container portion 100)
- the plate portion 132 abuts on the entire periphery of the opening 103 in the container portion 100. With such a configuration, the base member 12 and the seal member 13 (attachment 11G) seal the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 has a fluid introduction channel 15 and a fluid exit channel 16.
- the fluid introduction channel 15 is configured by holes or grooves formed in the seal member 13. More specifically, the fluid introduction channel 15 is configured such that a hole formed in the plate portion 132 and a groove formed on the inner surface of the cylindrical portion 131 are connected.
- One end of the fluid introduction channel 15 is a fluid inlet 151 that communicates with the outside, and the other end of the fluid introduction channel 15 communicates with the inside space of the sealed container 100.
- the fluid inlet 151 is oriented in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the fluid outlet channel 16 is provided relatively close to the fluid inlet channel 15, and a hole formed in the plate portion 132 is connected to a groove formed on the inner surface of the cylindrical portion 131. Configuration.
- One end of the fluid outlet channel 16 is a fluid outlet 161 that communicates with the outside, and the other end of the fluid outlet channel 16 communicates with the inside space of the sealed container 100.
- the fluid outlet 161 faces in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the fluid inlet 151 and the fluid outlet 161 face in the same direction.
- the fluid introduction channel 15 and the fluid outlet channel 16 constitute a channel in the seal member according to the present invention.
- the seal member 13 is made of a material having flexibility and elasticity.
- the material constituting the seal member 13 include silicone rubber, natural rubber, urethane rubber, and elastomer resin.
- the material of the seal member 13 is more preferably a silicone silicone rubber having no cytotoxicity and biocompatibility.
- the hardness of the seal member 13 is preferably, for example, about 20 degrees to 40 degrees in rubber hardness.
- the attachment 11G of the present embodiment accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture vessel unit 1G configured to be attached to an open culture vessel 10B, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the attachment 11G In the culture vessel unit 1G, by attaching the attachment 11G to the existing open culture vessel 10B (vessel part 100), cell culture in a sealed state is possible.
- the attachment 11 ⁇ / b> G covers the opening 103 of the container 100, and the flexible seal member 13 has a role of sealing the inner space of the container 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- the culture container 10B has a plurality of container portions 100, and a plurality of attachments 11G can be separately mounted on each of these container portions 100.
- the perfusion culture under different culture conditions can be performed in parallel. It is possible to do.
- attachment 11G and the culture vessel unit 1G of the present embodiment the same operation and effect as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exerted.
- FIGS. 19 to 22 show another embodiment (third embodiment) of the attachment for perfusion culture according to the present invention and a culture vessel unit provided with the attachment.
- the culture vessel unit 1H of the present embodiment includes a culture vessel 10B and an attachment 11H. 19 and 20 show a state where the attachment 11H is attached to the culture vessel 10B.
- FIG. 21 is an exploded perspective view of the culture vessel unit 1H.
- the culture vessel 10B according to the present embodiment is equivalent to a so-called well plate and has a plurality of vessel parts 100, and is the same as the culture vessel 10B according to the second embodiment described with reference to FIGS. Therefore, the description thereof will be appropriately omitted.
- the attachment 11H is attached to the plurality of container portions 100 of the culture container 10B, and is for closing the opening 103 of each of the container portions 100 to seal the inner space of the container portion 100.
- the attachment 11H includes a base member 12 and a seal member 13.
- the attachment 11H of the present embodiment is configured to be able to collectively close the openings 103 of the plurality of container portions 100, and in this point, is largely different from the attachment 11G of the above embodiment.
- the base member 12 has a holding portion 120A and a plurality of first bottomed cylindrical portions 120B.
- the holding portion 120A is in the shape of a long rectangular flat plate, and has a size corresponding to the size of the culture vessel 10B in plan view.
- the plurality of first bottomed cylindrical portions 120B are arranged so as to correspond to the plurality of container portions 100, respectively, and can each enter the inside of the container portion 100.
- the first bottomed tubular portion 120B has a bottom wall 121 and a tubular side wall 122 extending upright from the periphery of the bottom wall 121. Each bottom wall 121 fits inside the side plate 102 in the container part 100 with a space from the side plate 102 and protrudes downward (the other side in the first direction).
- the bottom wall 121 constitutes a protrusion in the present invention.
- the upper end of each side wall 122 is connected to the holding portion 120A.
- the holding portion 120A connected to each side wall 122 extends outward from the upper end of each side wall 122 and is integrally connected.
- the culture vessel 10B and the base member 12 are formed of, for example, a translucent or transparent hard plastic material.
- Suitable plastic materials include, but are not limited to, polystyrene, methylpentene, polycarbonate, cycloolefin polymer, cycloolefin copolymer, and other suitably transparent materials.
- the bottom plate 101 of the culture vessel 10B and the bottom wall 121 of the base member 12 are transparent.
- the bottom plate 101 and the bottom wall 121 are portions where the inner space of each container 100 can be visually recognized from the outside.
- the seal member 13 is, for example, a rubber molded product, and has a plate portion 130A and a plurality of cylindrical portions 131 as shown in FIGS.
- the plate portion 130A is in the shape of a long rectangular flat plate, and has a size corresponding to the size of the culture vessel 10B in plan view.
- the plurality of cylindrical portions 131 are arranged so as to correspond to the plurality of container portions 100, respectively, and are respectively lower (from the other side in the first direction) from the inner peripheral portion of the through opening provided at an appropriate position of the plate portion 130A. Extends to.
- the first bottomed cylindrical portion 120B of the base member 12 can be inserted inside the cylindrical portion 131, and the inner diameter of the cylindrical portion 131 in the natural state is slightly smaller than the outer diameter of the side wall 122. Thereby, the cylindrical portion 131 (the seal member 13) is pressed and held on the side wall 122 (the base member 12).
- Each cylindrical part 131 can be inserted inside the container part 100, and the outer diameter of the cylindrical part 131 in the natural state is slightly larger than the inner diameter of the side plate 102 in the container 100.
- each cylindrical portion 131 is press-fitted between the side plate 102 (container portion 100) and the side wall 122 (base member 12).
- the plate portion 130A overlaps with the pressing portion 120A of the base member 12 in a plan view. Further, when the attachment 11H is attached to the culture container 10B (container portion 100), the plate portion 130A is interposed between the holding portion 120A and the peripheral portion of the opening 103 in each container portion 100, and the peripheral portion of each opening 103. Contact with everything. With such a configuration, the base member 12 and the seal member 13 (attachment 11H) seal the inner space of each of the plurality of container portions 100.
- the seal member 13 has a fluid introduction channel 15 and a fluid exit channel 16.
- the seal member 13 has a plurality of fluid introduction channels 15 and a plurality of fluid exit channels 16 corresponding to the plurality of container portions 100.
- a pair of fluid introduction channels 15 and a fluid exit channel 16 are provided corresponding to each container 100.
- the fluid introduction channel 15 is configured by holes or grooves formed in the seal member 13. More specifically, the fluid introduction channel 15 is configured such that a hole formed in the plate portion 130A and a groove formed on the inner surface of the cylindrical portion 131 are connected.
- One end of the fluid introduction channel 15 is a fluid inlet 151 that communicates with the outside, and the other end of the fluid introduction channel 15 communicates with the inside space of the sealed container 100.
- the fluid inlet 151 is oriented in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the fluid outlet channel 16 is provided relatively close to the fluid inlet channel 15, and a hole formed in the plate portion 130A and a groove formed on the inner surface of the cylindrical portion 131 are connected. Configuration. One end of the fluid outlet channel 16 is a fluid outlet 161 that communicates with the outside, and the other end of the fluid outlet channel 16 communicates with the inside space of the sealed container 100.
- the fluid outlet 161 faces in a direction substantially perpendicular to the vertical direction (first direction).
- the fluid inlet 151 and the fluid outlet 161 of the pair of the fluid introduction channel 15 and the fluid exit channel 16 face in the same direction.
- the fluid introduction channel 15 and the fluid outlet channel 16 constitute a channel in the seal member according to the present invention.
- the seal member 13 is made of a material having flexibility and elasticity.
- the material constituting the seal member 13 include silicone rubber, natural rubber, urethane rubber, and elastomer resin.
- the material of the seal member 13 is more preferably a silicone silicone rubber having no cytotoxicity and biocompatibility.
- the hardness of the seal member 13 is preferably, for example, about 20 degrees to 40 degrees in rubber hardness.
- the attachment 11H of the present embodiment accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture vessel unit 1H configured to be attached to an open culture vessel 10B, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the attachment 11H In the culture container unit 1H, by attaching the attachment 11H to the existing open system culture container 10B (container unit 100), cell culture in a sealed state is possible.
- the attachment 11H (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the container portion 100, and the flexible seal member 13 has a role of sealing the inner space of the container portion 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- the culture container 10B has a plurality of container portions 100, and the plurality of container portions 100 can be collectively hermetically sealed by mounting a single attachment 11H to the culture container 10B. According to such a configuration, with respect to the culture container 10B including the plurality of container units 100, all the container units 100 can be sealed by a simple operation.
- the culture solution container 2 and the vacuum container unit 3 to be connected are different from each other for each of the fluid introduction flow path 15 and the fluid derivation flow path 16 corresponding to the container section 100, thereby being different. Perfusion culture under culture conditions can be performed in parallel.
- attachment 11H and the culture vessel unit 1H of the present embodiment the same operation and effect as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- FIGS. 23 to 27 show another embodiment (fourth embodiment) of the attachment for perfusion culture according to the present invention and a culture vessel unit provided with the attachment.
- the culture vessel unit 1J of the present embodiment includes a culture vessel 10B and an attachment 11J.
- FIGS. 23 and 24 show a state in which the attachment 11J is attached to the culture vessel 10B.
- FIG. 25 is an exploded perspective view of the culture vessel unit 1J.
- the culture vessel 10B according to the present embodiment is equivalent to a so-called well plate and has a plurality of vessel parts 100, and is the same as the culture vessel 10B according to the second embodiment described with reference to FIGS. Therefore, the description thereof will be appropriately omitted.
- the attachment 11J is mounted on the plurality of container portions 100 of the culture container 10B, and is for closing the opening 103 of each of the container portions 100 to seal the inner space of the container portion 100.
- the attachment 11J includes a base member 12 and a seal member 13.
- the attachment 11J of the present embodiment is configured to be able to collectively close the openings 103 of the plurality of container portions 100, similarly to the attachment 11H described above.
- the specific configuration of the base member 12 and the seal member 13 is significantly different from that of the attachment 11H, and the path through which the culture solution flows when the culture solution is exchanged is different from that of the attachment 11H.
- the base member 12 substantially includes only the holding portion 120A.
- the holding portion 120A is in the shape of a long rectangular flat plate, and has a size corresponding to the size of the culture vessel 10B in plan view.
- a plurality of through holes 126 penetrating in the thickness direction are formed in the holding portion 120A.
- the plurality of through holes 126 are formed at positions corresponding to the plurality of container units 100, respectively.
- a plurality (two in the present embodiment) of through-paths 127 penetrating in the thickness direction (first direction) are provided at appropriate places of the holding portion 120A. The significance of the through hole 126 and the through passage 127 will be described later.
- the culture vessel 10B and the base member 12 are formed of, for example, a translucent or transparent hard plastic material. Suitable plastic materials include, but are not limited to, polystyrene, methylpentene, polycarbonate, cycloolefin polymer, cycloolefin copolymer, and other suitably transparent materials.
- Suitable plastic materials include, but are not limited to, polystyrene, methylpentene, polycarbonate, cycloolefin polymer, cycloolefin copolymer, and other suitably transparent materials.
- at least the bottom plate 101 of the culture vessel 10B is transparent. Thereby, the bottom plate 101 is a portion where the inner space of each container part 100 can be visually recognized from the outside.
- the seal member 13 is, for example, a rubber molded product, and has a plate portion 130A and a plurality of second bottomed cylindrical portions 130B as shown in FIGS.
- the plate portion 130A is in the shape of a long rectangular flat plate, and has a size corresponding to the size of the culture vessel 10B in plan view.
- the plurality of second bottomed cylindrical portions 130B are arranged so as to correspond to the plurality of container portions 100, respectively, and can each enter the inside of the container portion 100.
- the second bottomed cylindrical portion 130B has a cylindrical portion 131 and a bottom wall portion 134.
- the cylindrical portion 131 extends downward (the other side in the first direction) from an inner peripheral portion of a through opening provided at an appropriate position of the plate portion 130A.
- the bottom wall portion 134 is connected to the lower end of the cylindrical portion 131 and closes the inside of the cylindrical portion 131.
- the central portion of the bottom wall portion 134 is a thin portion 135 having a relatively small thickness, and
- the plate portion 130A overlaps with the pressing portion 120A of the base member 12 in plan view.
- the plate part 130A is interposed between the holding part 120A and the peripheral part of the opening 103 in each container part 100, and the peripheral part of each opening 103 is provided. Contact with everything.
- the plurality of container portions 100 can be sealed by pressing the base member 12 downward.
- the thin portion 135 of each of the second bottomed cylindrical portions 130B of the seal member 13 overlaps any one of the plurality of through holes 126 formed in the holding portion 120A in a plan view. Thereby, it is possible to observe the situation inside each container 100 from above (outside) the attachment 11J via the through hole 126 and the transparent thin portion 135.
- the seal member 13 further has the extension piece 128 and the protrusion 129.
- the extension piece 128 extends outward from each of the four sides of the outer peripheral edge of the holding portion 120A, and is a portion for the operator to pick by hand.
- the protrusion 129 protrudes upward from the upper surface of each extension piece 128, and abuts or approaches four sides of the outer peripheral edge of the holding portion 120A of the base member 12 when the attachment 11J is attached.
- the configuration having such protrusions 129 plays a role of positioning the base member 12 and the seal member 13 relative to each other when the attachment 11J is attached.
- the seal member 13 has a fluid introduction channel 15 and a fluid exit channel 16.
- the seal member 13 corresponds to one fluid introduction channel 15 corresponding to one container part 100 (first container part) and one other container part 100 (second container part). And one fluid outlet channel 16.
- the fluid introduction channel 15 and the fluid outlet channel 16 are configured by holes penetrating in the thickness direction (the up-down direction, that is, the first direction) of the plate portion 130A.
- the fluid introduction channel 15 is provided near one second bottomed cylindrical portion 130B.
- One end (upper end) of the fluid introduction channel 15 is a fluid inlet 151 communicating with the outside.
- the other end (lower end) of the fluid introduction channel 15 communicates with the inner space of the sealed container part 100 (first container part).
- the fluid inlet 151 faces upward (one side in the first direction).
- the fluid outlet channel 16 is provided in the vicinity of another second bottomed cylindrical portion 130B.
- One end (upper end) of the fluid outlet channel 16 is a fluid outlet 161 communicating with the outside.
- the other end (lower end) of the fluid outlet channel 16 communicates with the inner space of the sealed container 100 (second container).
- the fluid outlet 161 faces upward (one side in the first direction).
- the fluid introduction channel 15 and the fluid exit channel 16 respectively overlap with the through channels 127 formed in the base member 12 (pressing portion 120A) in plan view.
- the fluid inlet 151 and the fluid outlet 161 are each in communication with the through passage 127 and communicate with the outside via the through passage 127.
- the fluid introduction channel 15 and the fluid outlet channel 16 constitute a channel in the seal member according to the present invention.
- the seal member 13 has a plurality of communication channels 17.
- the communication flow path 17 is a flow path that connects the inner spaces of the pair of adjacent container units 100 to each other.
- the communication channel 17 is configured by a hole or a groove formed in the seal member 13. More specifically, the communication channel 17 is constituted by a pair of holes 171 formed in the plate portion 130A and a groove 172. The pair of holes 171 each extend in the thickness direction of the plate portion 130A. The lower ends of the pair of holes 171 communicate with the inner space of the pair of adjacent container units 100.
- the groove 172 is formed on an upper surface (a surface facing one side in the first direction) of the plate portion 130A.
- Both ends of the groove 172 are connected to upper ends of the pair of holes 171.
- the base member 12 pressing portion 120A
- the upper end of the groove 172 is closed, and the communication flow path 17 communicates the inner spaces of the adjacent container portions 100.
- the plurality of communication flow paths 17 extend from the inner space of the container section 100 (first container section) with which the lower end of the fluid introduction flow path 15 communicates, to the adjacent container section.
- the lower end of the fluid outlet channel 16 is provided so as to communicate with the inner space of the container 100 (second container) communicating with the lower end of the fluid outlet channel 16 sequentially through the inner space of the container 100.
- the seal member 13 is made of a material having flexibility and elasticity.
- the material constituting the seal member 13 include silicone rubber, natural rubber, urethane rubber, and elastomer resin.
- the material of the seal member 13 is more preferably a silicone silicone rubber having no cytotoxicity and biocompatibility.
- the hardness of the seal member 13 is preferably, for example, about 20 degrees to 40 degrees in rubber hardness.
- the attachment 11J of the present embodiment accommodates cultured cells and a culture solution inside a closed culture vessel unit 1J configured to be mounted on an open culture vessel 10B, and maintains the culture state of the cell culture medium. Used to make exchanges.
- the attachment 11J In the culture container unit 1J, by attaching the attachment 11J to the existing open culture container 10B (container unit 100), cell culture in a sealed state is possible.
- the attachment 11J (the base member 12 and the seal member 13) covers the opening 103 of the container 100, and the flexible seal member 13 plays a role of sealing the inner space of the container 100.
- the seal member 13 is formed with a fluid introduction channel 15 and a fluid outlet channel 16 (inside the seal member), and the culture vessel is formed using the fluid inlet channel 15 and the fluid outlet channel 16.
- the culture container 10B has a plurality of container portions 100, and the plurality of container portions 100 can be collectively hermetically sealed by attaching a single attachment 11J to the culture container 10B. According to such a configuration, with respect to the culture container 10B including the plurality of container units 100, all the container units 100 can be sealed by a simple operation.
- a plurality of communication flow paths 17 are provided in the plate portion 130A (the seal member 13).
- the lower end of the fluid outlet channel 16 sequentially passes from the inner space of the container unit 100 (first container unit) to which the lower end of the fluid introduction channel 15 communicates with the inner space of the adjacent container unit 100. Communicates with the inside space of the container part 100 (the second container part) communicating with the second part.
- attachment 11J and the culture vessel unit 1J of the present embodiment the same operation and effects as those of the above-described attachment 11A and culture vessel unit 1A are exhibited.
- the seal member 13 has the configuration having the plurality of communication flow paths 17, but the present invention is not limited to this.
- the plurality of communication channels 17 may not be provided, and a plurality of pairs of the fluid introduction channels 15 and the fluid outlet channels 16 corresponding to the plurality of container portions 100 of the culture container 10B may be provided. Good.
- the attachment 11J there is a gap between the cylindrical portion 131 of the seal member 13 and the side plate 102 of the container portion 100, and the cylindrical portion 131 is not press-fitted, but the cylindrical portion 131 is press-fitted into the container portion 100.
- the outer diameter of each of the plurality of cylindrical portions 131 in the natural state may be slightly larger than the inner diameter of the side plate 102 (container portion 100).
- the base member 12 including the pressing portion 120A is not necessarily required, and a configuration without the base member 12 may be adopted.
- the attachment for perfusion culture according to the present invention can be used for various culture devices.
- a means for supplying, recovering, or perfusing the culture solution to a culture vessel unit in which the attachment for perfusion culture according to the present invention is mounted on a culture vessel for example, a liquid feed unit using various pumps such as a tube pump and a syringe pump is used. It is preferably available.
- A10 Perfusion culture system M1 Culture solutions 1A, 1B, 1C, 1D, 1E, 1F, 1G, 1H, 1J Culture container unit 10A, 10B Culture container 100 Container unit 101 Bottom plate 102 Side plate 103 Openings 11A, 11B, 11C, 11D, 11E , 11F, 11G, 11H, 11J attachment (attachment for perfusion culture) 12 Base member 120A Holding part 120B First bottomed cylindrical part 121 Bottom wall (projecting part) 122 Side wall 123 Flange 124 Nipping tube part 125 Extension piece 126 Through hole 127 Through path 128 Extension piece 129 Projection 13 Seal member 130A Plate part 130B Second bottomed cylinder part 131 Cylindrical part (cylindrical part) 132 Plate part 133 Annular projection 134 Bottom wall part (projection part) 135 Thin portion 15 Fluid introduction channel 151 Fluid inlet 16 Fluid outlet channel 161 Fluid outlet 17 Connection channel 171 Hole 172 Groove 2 Culture solution container 21 Outlet 3 Vacuum container unit 31 Tube 3
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Abstract
【課題】既存の開放系の培養容器に装着し、当該培養容器を密閉状態にして灌流培養を行うためのアタッチメントを提供する。 【解決手段】本発明の灌流培養用アタッチメントは、上端に開口103を有し、かつ上下方向に延びる有底筒状の容器部100を少なくとも一つ備えた培養容器10Aに装着され、開口103を塞いで容器部100の内側空間を密閉して灌流培養を行うためのアタッチメント11Aであって、可撓性を有するシール部材13を備え、シール部材13は、各々の一端が外部に通じ、かつ他端が容器部100の上記内側空間に通じる、複数のシール部材内流路15,16を有する。
Description
本発明は、開放系の培養容器に装着することで密閉状態とし、当該密閉された培養容器において灌流培養を行うためのアタッチメントに関する。
再生医療の実用化等に向けて細胞培養技術の進化が求められているが、現在、多くの細胞製品の研究開発現場において、培養容器は既存の研究用製品(ウェルプレート、ディッシュ)が流用されている。その背景には、従来の研究過程においてその性能に実績のある容器が好まれるという事情がある。しかしながら、これらの培養容器は通気状態で培養を行うことを目的に設計されたものであり、蓋があっても載せるだけで密閉はできない。これら従来の開放系の培養容器は、研究を目的にした細胞培養用途には汎用性が高いが、医療を目的にした細胞培養用途には、人の手で蓋の開閉をしながら作業を行うため、コンタミネーションのリスクがあった。そして、細胞の品質確保上の問題と、取り扱いに専門技術が必要であることから人的労力やコストの問題もあった。
昨今、人の手による細胞播種や培養液(培地)交換、回収などの手間を無くす自動培養装置や、一定の速度で培養液を供給し、同時に同量の培養液を抜き取る自動灌流培養装置が種々開発されている(例えば、特許文献1,2を参照)。例えば研究者の手業を習得したAIロボット装置が既存の培養容器を操作することは容易であるが、人の操作を再現する装置はどうしても大掛かりになるので、一般的な中小規模の研究室であれば導入コストの課題がある。その反面、簡易な装置では、その装置に合わせた専用容器が必要になって、既存の培養容器が使用できないという課題があった。
本発明は、このような事情のもとで考え出されたものであって、既存の開放系の培養容器に装着し、当該培養容器を密閉状態にして様々な培養液交換や灌流培養を含む培養装置に適合するアタッチメントを提供することを主たる課題とする。
上記の課題を解決するため、本発明では、次の技術的手段を採用した。
本発明によって提供される灌流培養用アタッチメントは、第1方向の一方側端に開口を有し、かつ上記第1方向に延びる有底筒状の容器部を少なくとも一つ備えた培養容器に装着され、上記開口を塞いで上記容器部の内側空間を密閉して灌流培養を行うためのアタッチメントであって、可撓性を有するシール部材を備え、上記シール部材は、各々の一端が外部に通じ、かつ他端が上記容器部の上記内側空間に通じる、複数のシール部材内流路を有する。
好ましい実施の形態においては、上記容器部の内側に収まり、かつ上記第1方向の他方側に向かって突き出る突出部を有する。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材は、上記突出部を構成する底壁部と、上記底壁部から上記第1方向の上記一方側に延び、かつ上記容器部に圧入される筒状部とを有する。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材とは別体の硬質材料からなるベース部材を備え、上記ベース部材は、上記突出部を構成する底壁と、この底壁から起立する筒状の側壁と、この側壁の端部から径方向外方に延出する環状のフランジと、を有し、上記シール部材は、上記第1方向において上記フランジと上記開口の周縁部との間に介在し、かつ上記開口の周縁部すべてと当接しうるプレート部を有する。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材は、上記プレート部から上記第1方向の上記他方側に延びる筒状部を有し、上記筒状部は、上記容器部と上記側壁との間に圧入される。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材とは別体の硬質材料からなるベース部材を備え、上記ベース部材は、上記突出部を構成する底壁と、この底壁から起立する筒状の側壁と、を有し、上記シール部材は、上記容器部と上記側壁との間に圧入される。
好ましい実施の形態においては、上記ベース部材は、透明である。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材が上記突出部を具備しており、当該突出部は、他の部位よりも相対的に厚さが小とされた透明の薄肉部を有する。
好ましい実施の形態においては、上記各シール部材内流路における上記一端は、上記第1方向に対して実質的に直角である方向を向いている。
好ましい実施の形態においては、上記複数のシール部材内流路は、外部から上記容器部の上記内側空間に流体を導入するための流体導入流路と、上記容器部の上記内側空間から外部に流体を導出するための流体導出流路と、を含む。
好ましい実施の形態においては、上記培養容器は、上記第1方向に対して直角である面内方向において互いに離間配置された複数の上記容器部を備えており、上記シール部材は、上記突出部を構成する複数の底壁部と、各々が上記底壁部から上記第1方向の上記一方側に延び、かつ上記容器部に圧入される複数の筒状部と、を有する。
好ましい実施の形態においては、上記培養容器は、上記第1方向に対して直角である面内方向において互いに離間配置された複数の上記容器部を備えており、上記シール部材とは別体の硬質材料からなるベース部材を備え、上記ベース部材は、上記容器部の内側に収まり、上記突出部を構成する底壁、およびこの底壁から起立する筒状の側壁を各々が有する複数の第1有底筒部と、上記各側壁の端部から外側に延びて一体とされた板状の押さえ部と、を有し、上記シール部材は、上記第1方向において上記押さえ部と上記各開口の周縁部との間に介在し、かつ上記各開口の周縁部すべてと当接しうるプレート部を有する。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材は、各々が上記プレート部から上記第1方向の上記他方側に延び、かつ上記第1有底筒部を内挿しうる複数の筒状部を有し、上記筒状部は、上記容器部と上記側壁との間に圧入される。
好ましい実施の形態においては、上記ベース部材は、透明である。
好ましい実施の形態においては、上記培養容器は、上記第1方向に対して直角である面内方向において互いに離間配置された複数の上記容器部を備えており、上記シール部材とは別体の硬質材料からなり、板状の押さえ部を有するベース部材を備え、上記シール部材は、上記第1方向において上記押さえ部と上記各開口の周縁部との間に介在し、かつ上記各開口の周縁部すべてと当接しうるプレート部と、上記プレート部から上記第1方向の上記他方側に延びる筒状部、および上記突出部を構成する底壁部を各々が有する複数の第2有底筒部と、を有する。
好ましい実施の形態においては、上記各シール部材内流路における上記一端は、上記第1方向に対して実質的に直角である方向を向いている。
好ましい実施の形態においては、上記各シール部材内流路における上記一端は、上記第1方向の上記一方側を向いており、上記押さえ部は、各々が上記シール部材内流路の上記一端に連通し、かつ上記第1方向に貫通する、複数の貫通路を有する。
好ましい実施の形態においては、上記複数のシール部材内流路は、外部から上記複数の上記容器部それぞれの上記内側空間に流体を導入するための複数の流体導入流路と、上記複数の上記容器部それぞれの上記内側空間から外部に流体を導出するための複数の流体導出流路と、を含む。
好ましい実施の形態においては、上記シール部材は、上記容器部の上記内側空間どうしを連通させる少なくとも一つの連絡流路を有する。
好ましい実施の形態においては、上記複数のシール部材内流路は、上記複数の上記容器部のうち第1の上記容器部の上記内側空間に外部から流体を導入するための流体導入流路と、上記複数の上記容器部のうち第2の上記容器部の上記内側空間から外部に流体を導出するための流体導出流路と、を含み、上記連絡流路は、上記第1の上記容器部の上記内側空間から隣接する上記容器部の上記内側空間を順次経て上記第2の上記容器部の上記内側空間に通じるように設けられる。
好ましい実施の形態においては、上記連絡流路は、上記プレート部における上記第1方向の上記一方側を向く面に形成された溝を含んで構成される。
本発明のその他の特徴および利点は、添付図面を参照して以下に行う詳細な説明によって、より明らかとなろう。
以下、本発明の好ましい実施の形態を図面を参照しつつ具体的に説明する。
図1、図2は、本発明に係る灌流培養用アタッチメントを備えて構成された灌流培養システムの一例を示している。本実施形態の灌流培養システムA10は、培養容器ユニット1Aと、培養液収容体2と、真空容器ユニット3と、第1流路41と、第2流路42と、第1接続手段51と、第2接続手段52と、狭窄部6と、を備えている。詳細は後述するが、灌流培養システムA10は、培養液収容体2に収容された新しい培養液を培養容器ユニット1Aに供給しつつ、培養容器ユニット1A内の古い培養液を真空容器ユニット3に回収するためのものである。
図1、図4~図6に示すように、本実施形態(第1実施形態)において、培養容器ユニット1Aは、培養容器10Aと、アタッチメント11Aと、を備える。培養容器10Aとしては、例えばディッシュ(シャーレ)やウェルプレートなど既存の開放系の培養容器が用いられ、本実施形態では培養容器10Aがディッシュの場合を示している。培養容器10Aは、1つの容器部100を備え、当該容器部100は、は底板101と、この底板101の周縁から起立して上端(第1方向一方側端)に開口103を有する円筒状の側板102とによって構成されている。
底板101の上面は、細胞を培養するための平坦な細胞培養面である。この細胞培養面(底板101の上面)には、必要に応じて細胞接着性を向上させるための表面処理が適宜施される。当該表面処理としては、例えばコロナ放電処理、プラズマ処理(親水化処理)などを挙げることができる。
アタッチメント11Aは、培養容器10Aに装着され、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いで容器部100の内側空間を密閉するためのものである。アタッチメント11Aは、本発明に係る灌流培養用アタッチメントの一例であり、本実施形態においてベース部材12およびシール部材13を含む。
ベース部材12は、底壁121と、この底壁121の周縁から起立状に延びる円筒状の側壁122と、フランジ123とを有する。底壁121は、培養容器10Aにおける側板102の内側に当該側板102と間隔を隔てて収まるとともに下方側(第1方向他方側)に突き出ている。底壁121は、本発明で言う突出部を構成する。フランジ123は、側壁122の上端から径方向外方に延出しており、環状とされている。かかる構成のベース部材12は、平面視において培養容器10Aの開口103のすべてと重なっている。
培養容器10Aおよびベース部材12は、例えば半透明または透明の硬質プラスチック材料により形成されている。当該プラスチック材料としては、例えばポリスチレンやメチルペンテンのほか、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマーなどの、好適には透明性を有する材料が用いられるが、これらに限定されない。
本実施形態において、少なくとも培養容器10Aの底板101およびベース部材12の底壁121は透明とされている。これにより、底板101および底壁121は、外部から培養容器10Aの内側空間が視認可能な部位である。
シール部材13は、例えばゴム成形品であり、図4、図5に示すように、上下に延びる円筒部131と、プレート部132と、環状突起133とを有する。シール部材13は、培養容器10A(容器部100)の側板102とベース部材12の側壁122ないしフランジ123との間に介在している。円筒部131は、プレート部132の内周部から下方側(第1方向他方側)に延びており、ベース部材12の側壁122に外嵌されている。円筒部131の自然状態における内径寸法は側壁122の外径寸法よりも僅かに小であり、これにより円筒部131(シール部材13)は側壁122(ベース部材12)に圧接保持されている。環状突起133は、円筒部131の外周から径方向外方に突出しており、培養容器10Aへのアタッチメント11A装着時において側板102の内周面に圧接している。これにより、アタッチメント11A装着時において、円筒部131は、側板102(容器部100)と側壁122(ベース部材12)との間に圧入されている。プレート部132は、円筒部131の上端から径方向外方に延出しており、環状とされている。プレート部132は、平面視においてベース部材12のフランジ123と重なっている。また、培養容器10Aへのアタッチメント11A装着時において、プレート部132は、培養容器10A(容器部100)における開口103の周縁部すべてと当接する。このような構成により、ベース部材12およびシール部材13(アタッチメント11A)は、培養容器10A(容器部100)の内側空間を密閉する。
シール部材13は、流体導入流路15および流体導出流路16を有する。流体導入流路15は、容器部100の外部から容器部100の内側空間に培養液などの流体を導入するための流路である。本実施形態では、流体導入流路15は、シール部材13に形成された孔や溝によって構成される。より詳細には、流体導入流路15は、プレート部132に形成された孔と円筒部131の内面に形成された溝とがつながる構成とされる。流体導入流路15の一端は外部に通じる流体流入口151とされており、流体導入流路15の他端は密閉された培養容器10A(容器部100)の内側空間に通じている。流体流入口151は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。
流体導出流路16は、容器部100の内側空間から容器部100の外部に流体を導出するための流路である。本実施形態では、流体導出流路16は、平面視においてシール部材13の中心を挟んで流体導入流路15の反対側に設けられている。本実施形態では、流体導出流路16は、プレート部132に形成された孔と円筒部131の内面に形成された溝とがつながる構成とされる。流体導出流路16の一端は外部に通じる流体流出口161とされており、流体導出流路16の他端は密閉された培養容器10A(容器部100)の内側空間に通じている。流体流出口161は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。上記の流体流入口151と流体流出口161とは、互いに反対側を向く。上記の流体導入流路15および流体導出流路16は、本発明で言うシール部材内流路を構成する。
シール部材13は、可撓性、弾力性を有する素材によって構成されている。シール部材13を構成する素材としては、例えば、シリコーンゴム、天然ゴム、ウレタンゴム、エラストマー樹脂などが挙げられる。詳細は後述するがシール部材13と、内容物(例えば培養液)との接触を考慮すると、シール部材13の素材としては、細胞毒性が無く、かつ生体適合性を有する医療用シリコーンゴムがより好ましい。また、シール部材13の硬さについては、例えばゴム硬度が20度~40度程度であるのが好ましい。
図1に示した培養液収容体2は、交換用の培養液を収容するための密閉状の容器体である。培養液収容体2には、内容物を導出するための導出口21が設けられている。本実施形態では、培養液収容体2は、好ましくは可撓性を有し容積変化可能に構成されている。そのような培養液収容体2としては、例えば蛇腹状容器、フィルム状容器、シリンジ、積層剥離ボトル等を挙げることができる。本実施形態では、培養液収容体2が蛇腹状容器の場合を示している。
真空容器ユニット3は、内部が負圧状態に調整され、培養容器ユニット1Aの内部にあった培養液等を回収するものである。本実施形態では、真空容器ユニット3は、管体31および栓32を含んで構成される。管体31は、先端に開口端311を有する有底円筒状とされている。栓32は、開口端311を閉塞しており、密閉状とされた管体31の内部が負圧状態に調整される。栓32は、その一部が例えば穿刺針を穿刺可能なゴム材料によって構成される。このような構成の真空容器ユニット3としては、例えば汎用品である血液採取管を用いることができる。
第1流路41は、培養容器ユニット1Aおよび培養液収容体2の間をつなぐ流体流路であり、例えば可撓性を有するチューブにより構成される。第1流路41の一端は、流体流入口151を介して培養容器ユニット1Aの内部に連通可能である。第1流路41の他端は、導出口21を介して培養液収容体2の内部に連通可能である。
図1に示した第1接続手段51は、第1流路41に設けられており、培養容器ユニット1Aおよび培養液収容体2を密閉状態で連通接続させる。また、第1接続手段51は、培養容器ユニット1Aおよび培養液収容体2を互いに密閉状態で分離可能である(図2参照)。このような構成の第1接続手段51は、例えば雌ルアーコネクタ511および雄ルアーコネクタ512を有するルアーロック接続構造により実現される。図1、図2に示した構成では、第1流路41は、培養容器ユニット1A(流体流入口151)につながる部分流路411と、培養液収容体2(導出口21)につながる部分流路412とにより構成される。そして、例えば部分流路411の先端に雌ルアーコネクタ511が設けられ、部分流路412の先端に雄ルアーコネクタ512が設けられる。
第2流路42は、培養容器ユニット1Aおよび真空容器ユニット3の間をつなぐ流体流路であり、例えば可撓性を有するチューブにより構成される。第2流路42の一端は、流体流出口161を介して培養容器ユニット1Aの内部に連通可能である。第2流路42の他端には、真空容器ユニット3の栓32に穿刺可能な穿刺針43が取り付けられている。第2流路42の他端は、穿刺針43を介して真空容器ユニット3(管体31)の内部に連通可能である。
図1に示した第2接続手段52は、第2流路42に設けられており、培養容器ユニット1Aおよび真空容器ユニット3を密閉状態で連通接続させる。また、第2接続手段52は、培養容器ユニット1Aおよび真空容器ユニット3を互いに密閉状態で分離可能である(図2参照)。このような構成の第2接続手段52は、例えば雌ルアーコネクタ521および雄ルアーコネクタ522を有するルアーロック接続構造により実現される。図1、図2に示した構成では、第2流路42は、培養容器ユニット1A(流体流出口161)につながる部分流路421と、真空容器ユニット3につながる部分流路422とにより構成される。そして、例えば部分流路421の先端に雌ルアーコネクタ521が設けられ、部分流路422の先端に雄ルアーコネクタ522が設けられる。
なお、上記した穿刺針43は、部分流路422の端部に取り付けられている。また、穿刺針43は危険防止のため筒状のホルダ44により囲われている。ホルダ44の内径は管体31の外径よりも大であり、図1、図2より理解されるように、管体31(真空容器ユニット3)をホルダ44内に挿し込むことにより、栓32に穿刺針43を安全に穿刺することが可能である。
狭窄部6は、第1流路41および第2流路42の少なくともいずれか一方に設けられている。狭窄部6は、流路断面が狭められた部位を有しており、当該狭窄部6を通過する流体の流量が所望となるように調整するものである。
本実施形態において、狭窄部6は、長手方向に微細孔が貫通した柱状体により構成される。当該微細孔の孔径(例えば0.02~0.05mm程度)や当該微細孔の長さ(長手方向の寸法:例えば5~20mm程度)を適宜選択することにより、狭窄部6を通過する流体(培養液等)の流量が調整可能である。図1、図2に示すように、本実施形態において、狭窄部6は、第2流路42の部分流路422に設けられている。
次に、本実施形態の作用について説明する。
本実施形態のアタッチメント11Aは、開放系の培養容器10Aに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Aの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。なお、培養容器10A(容器部100)に収容される培養細胞や培養液については、特に限定されるものではない。
培養容器ユニット1Aを用いた細胞培養では、まず、培養容器10A(容器部100)内に培養する細胞を播種し、容器部100内を培養液で満たす。細胞の播種は、アタッチメント11Aを培養容器10Aから取り外し、培養容器10A内に細胞の入った培養液を直接注入することにより行ってもよいが、灌流培養システムA10を用いて行うことも可能である。
詳細な図示説明は省略するが、灌流培養システムA10を用いて細胞の播種を行う場合、培養する細胞が入った培養液を収容した培養液収容体2を準備し、当該培養液収容体2を培養容器ユニット1Aとつなぐ。また、真空容器ユニット3に代えてシリンジを準備し、当該シリンジを培養容器ユニット1Aとつなぐ。そして、ピストンを引いて当該シリンジ内部を負圧にすることで培養液収容体2内の培養液(細胞を含む)を培養容器ユニット1A内に導き、培養容器10A内と培養容器ユニット1Aおよびシリンジの間の流路とに培養液を満たす。図7は、培養容器10A(容器部100)内を培養液M1で満たした状態を示している。培養容器ユニット1A内を培養液で満たした後、培養容器ユニット1Aと培養液収容体2との間の接続および培養容器ユニット1Aとシリンジとの間の接続を、それぞれ分離する。
培養容器ユニット1A(培養容器10A)内の細胞は、時間が経過すると細胞培養面(底板101の上面)に接着し、増殖が始まる。底板101の上面に上記した細胞接着性を向上させるための表面処理が施されていると、細胞がより確実に細胞培養面に接着する。したがって、このような構成は、培養容器ユニット1A内において細胞培養を適切に進行させる上で好ましい。
培養容器ユニット1A内の培養液については、培養細胞の増殖にともない栄養分が減少し、培養細胞から排出された老廃物が増える。このため、培養容器ユニット1A内の培養液は適宜交換する必要がある。細胞培養中に培養容器ユニット1A内の培養液を交換する際、交換用の培養液が収容された培養液収容体2と、真空容器ユニット3と、狭窄部6、穿刺針43を有する部分流路422と、を準備する(図2参照)。そして、培養容器ユニット1Aと培養液収容体2との間の第1接続手段51、および培養容器ユニット1Aと真空容器ユニット3との間の第2接続手段52について、それぞれ分離された状態(図2参照)から図1に示すように接続された状態にする。
ここで、培養容器ユニット1Aと培養液収容体2とが第1流路41を介して連通し、培養容器ユニット1Aと真空容器ユニット3とが第2流路42を介して連通する。そうすると、内部が負圧状態とされた真空容器ユニット3の吸引力により培養容器ユニット1A内の古い培養液が第2流路42を介して真空容器ユニット3内に移動し、培養液収容体2内の新しい培養液が第1流路41を介して培養容器ユニット1A内に移動する。培養容器ユニット1A内の培養液の交換が完了すれば、第1接続手段51および第2接続手段52を接続状態から分離状態に戻す。
培養容器ユニット1Aにおいては、既存の開放系の培養容器10Aにアタッチメント11Aを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11A(ベース部材12およびシール部材13)は、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Aに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
上記のように第1接続手段51および第2接続手段52を分離状態から接続状態にするといったワンタッチ操作により、培養容器ユニット1A内の培養液を交換することができる。また、培養容器ユニット1Aが閉鎖状態のまま培養液交換作業を行うことができ、コンタミネーションのリスクを回避することができる。したがって、アタッチメント11Aが装着された培養容器ユニット1Aによれば、培養液の交換に際し、作業者の操作負担を減らすとともに、細胞の品質確保を実現することができる。また、培養容器ユニット1Aを備えて構成された灌流培養システムA10においては、コントローラや電源などの電気系の機器を用いることなく、培養容器ユニット1A内の培養液を交換することが可能である。したがって、灌流培養システムA10は、故障の心配がなく、小型化が実現される。
上記のように、アタッチメント11Aを用いれば開放系の培養容器10Aを密閉状態の培養容器ユニット1Aとすることができる。このため、当該培養容器ユニット1Aを傾けても液漏れ等の不都合が生じることはない。したがって、培養容器ユニット1Aは、培養液収容体2および真空容器ユニット3を取り外した状態でチューブ類(部分流路411や部分流路421)をヒートシール等により閉塞すれば、細胞培養状態を維持しながら輸送することが可能である。
アタッチメント11Aは、底壁121(突出部)を有しており、当該底壁121は、培養容器10A(容器部100)の内側において下方側(第1方向他方側)に向かって突き出ている。このような構成によれば、培養容器10A(容器部100)内における培養液の収容空間が減じられており、細胞培養に際し培養液の使用量の削減を図ることができる。
アタッチメント11Aは、可撓性を有するシール部材13と、シール部材13とは別体の硬質材料からなるベース部材12とを備える。そして、アタッチメント11Aを培養容器10Aに装着した状態において、シール部材13のプレート部132は、ベース部材12のフランジ123と培養容器10A(容器部100)の開口103の周縁部との間に介在し、当該開口103の周縁部すべてと当接する。このような構成によれば、シール部材13は、ベース部材12にサポートされながら培養容器10A(容器部100)を密閉することができる。また、アタッチメント11A装着時には、シール部材13の円筒部131は、培養容器10Aの側板102とベース部材12の側壁122との間に圧入されている。これにより、培養容器10Aにアタッチメント11Aを装着するだけで当該培養容器10Aを適切に密閉状態にすることができる。
本実施形態において、培養容器10Aの底板101およびベース部材12の底壁121は透明である。これにより、培養容器ユニット1Aの上部または下部のいずれからも、透明な底壁121あるいは底板101を介して培養容器ユニット1A内の状況を観察することが可能である。このような構成であれば、光源が上下いずれにあっても照射光を透過でき、光学顕微鏡、位相差顕微鏡など様々なタイプの顕微鏡を用いて細胞の観察が可能である。
本実施形態において、ベース部材12の底壁121は、下方側に突き出ている。このように、底壁121を低位置に配置することにより、培養容器ユニット1A内の培養液が底壁121の表面に接触する。これにより、当該培養液の液面が水中眼鏡効果でフラットになり、照射光の乱反射を抑制し、顕微鏡の焦点を合わせやすいといった効果が期待できる。
シール部材13に設けられた流体導入流路15および流体導出流路16において、外部に通じる流体流入口151および流体流出口161は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。このような構成によれば、アタッチメント11Aが装着された培養容器ユニット1Aにおいて上下方向(第1方向)の寸法を小さくすることができ、当該培養容器ユニット1Aの小型化を図ることができる。
図8~図14は、上記した培養容器ユニット1Aおよびアタッチメント11Aの変形例を示している。これらの図においてアタッチメント(灌流培養用アタッチメント)の構成のみが上記したアタッチメント11Aと異なっている。なお、図8以降の図面においては、上記実施形態と同一または類似の要素には同一の符号を付しており、適宜説明を省略する。
図8~図10に示したアタッチメント11Bにおいて、シール部材13に設けられた流体導入流路15および流体導出流路16の配置が上記のアタッチメント11Aと異なっており、これにともないプレート部132(シール部材13)およびフランジ123(ベース部材12)の形状が上記実施形態と異なっている。
上記のアタッチメント11Aでは、流体導出流路16は、平面視においてシール部材13の中心を挟んで流体導入流路15の反対側に設けられていたが、本変形例において、流体導入流路15および流体導出流路16は比較的近接して設けられている。これら流体導入流路15および流体導出流路16において外部に通じる流体流入口151および流体流出口161は、いずれも上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いており、互いに同一方向を向く。
本変形例のアタッチメント11Bは、開放系の培養容器10Aに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Bの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Bにおいては、既存の開放系の培養容器10Aにアタッチメント11Bを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11B(ベース部材12およびシール部材13)は、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Bに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
その他にも、本変形例のアタッチメント11Bおよび培養容器ユニット1Bにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図11に示したアタッチメント11Cにおいて、シール部材13には、円筒部131が設けられておらず、シール部材13は培養容器10Aとベース部材12との間に圧入されていない。ベース部材12を下方に押圧することにより、培養容器10A(容器部100)を密閉することができる。
本変形例のアタッチメント11Cは、開放系の培養容器10Aに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Cの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Cにおいては、既存の開放系の培養容器10Aにアタッチメント11Cを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11C(ベース部材12およびシール部材13)は、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Cに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
その他にも、本変形例のアタッチメント11Cおよび培養容器ユニット1Cにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図12に示したアタッチメント11Dにおいて、シール部材13は底壁部134を有する。底壁部134は、円筒部131の下端につながり、当該円筒部131の内側を塞いでいる。底壁部134の中央部分は相対的に厚さが小とされた薄肉部135であり、当該薄肉部135は透明である。その一方、円筒部131には環状突起133が設けられておらず、また、円筒部131と培養容器10Aの側板102との間には隙間があり、円筒部131は圧入されていない。ベース部材12においては、底壁121および側壁122を具備しておらず、環状のフランジ123のみを備える。これにより、シール部材13は培養容器10Aとベース部材12との間に圧入されていない。このような構成のアタッチメント11Dにおいて、ベース部材12を下方に押圧することにより、培養容器10A(容器部100)を密閉することができる。
本変形例のアタッチメント11Dは、開放系の培養容器10Aに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Dの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Dにおいては、既存の開放系の培養容器10Aにアタッチメント11Dを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11D(ベース部材12およびシール部材13)は、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Dに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
その他にも、本変形例のアタッチメント11Dおよび培養容器ユニット1Dにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図13に示したアタッチメント11Eは、ベース部材12を具備しておらず、シール部材13のみを備える。図12に示した上記アタッチメント11Dと同様に、シール部材13は、円筒部131の下端につながり、当該円筒部131の内側を塞ぐ底壁部134を有する。底壁部134の中央部分は相対的に厚さが小とされた薄肉部135であり、当該薄肉部135は透明である。本変形例において、円筒部131の自然状態における外径寸法は側板102の内径寸法よりも僅かに大である。これにより、培養容器10Aへのアタッチメント11E装着時において、円筒部131は側板102(培養容器10A)に圧入されている。
本変形例のアタッチメント11Eは、開放系の培養容器10Aに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Eの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Eにおいては、既存の開放系の培養容器10Aにアタッチメント11Eを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11E(シール部材13)は、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Eに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
その他にも、本変形例のアタッチメント11Eおよび培養容器ユニット1Eにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図14に示したアタッチメント11Fにおいて、シール部材13にはプレート部132が設けられておらず、シール部材13は円筒部131のみを備える。円筒部131は、ベース部材12の側壁122に外嵌されており、円筒部131の自然状態における内径寸法は側壁122の外径寸法よりも僅かに小である。これにより、円筒部131(シール部材13)は、側壁122(ベース部材12)に圧接保持されている。なお、本変形例では、円筒部131の上端がベース部材12のフランジ123に当接しており、この構成によりベース部材12に対する円筒部131(シール部材13)の上下方向における位置決めがなされる。
また、円筒部131の自然状態における外径寸法は、培養容器10A(容器部100)における側板102の内径寸法よりも僅かに大である。これにより、アタッチメント11F装着時において、円筒部131は、側板102(容器部100)と側壁122(ベース部材12)との間に圧入されている。
本変形例のアタッチメント11Fは、開放系の培養容器10Aに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Fの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Fにおいては、既存の開放系の培養容器10Aにアタッチメント11Fを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11F(ベース部材12およシール部材13)は、培養容器10A(容器部100)の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Fに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
その他にも、本変形例のアタッチメント11Fおよび培養容器ユニット1Fにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図15~図18は、本発明に係る灌流培養用アタッチメントおよびこれを具備する培養容器ユニットの他の実施形態(第2実施形態)を示している。本実施形態の培養容器ユニット1Gは、培養容器10Bと、複数のアタッチメント11Gと、を備える。図15、図16は、培養容器10Bにアタッチメント11Gを装着した状態を示す。図17は、アタッチメント11Gを適宜分解した状態の斜視図である。
培養容器10Bは、いわゆるウェルプレートに相当するものであり、複数(本実施形態では6つ)の容器部100としてのウェルを有する。複数の容器部100は、各々、共通の長矩形状の底板101と、この底板101の適所から起立して上端(第1方向一方側端)に開口103を有する円筒状の側板102とによって構成されている。これら容器部100は、上下方向(第1方向)に対して直角である面内方向において互いに離間配置されている。
各容器部100に対応する底板101の上面部分は、細胞を培養するための平坦な細胞培養面である。この細胞培養面(底板101の上面)には、必要に応じて細胞接着性を向上させるための表面処理が適宜施される。当該表面処理としては、例えばコロナ放電処理、プラズマ処理(親水化処理)などを挙げることができる。
アタッチメント11Gは、培養容器10Bの各容器部100に装着され、容器部100の開口103を塞いで当該容器部100の内側空間を密閉するためのものである。アタッチメント11Gは、ベース部材12およびシール部材13を備えており、その具体的構成については、図8~図10を参照して上記したアタッチメント11Bと近似する。
ベース部材12は、底壁121と、この底壁121の周縁から起立状に延びる円筒状の側壁122と、フランジ123とを有する。底壁121は、容器部100における側板102の内側に当該側板102と間隔を隔てて収まるとともに下方側(第1方向他方側)に突き出ている。底壁121は、本発明で言う突出部を構成する。フランジ123は、側壁122の上端から径方向外方に延出しており、環状とされている。かかる構成のベース部材12は、平面視において容器部100の開口103のすべてと重なっている。
本実施形態において、ベース部材12は、摘持用筒部124および延出片125をさらに有する。摘持用筒部124は、フランジ123の外周縁から起立状に延びており、作業者が手で摘み持つための部位である。延出片125は、上端部外周から径方向外方に延びる部位である。本実施形態では、摘持用筒部124の軸心を挟んで一対の延出片125が設けられている。
培養容器10Bおよびベース部材12は、例えば半透明または透明の硬質プラスチック材料により形成されている。当該プラスチック材料としては、例えばポリスチレンやメチルペンテンのほか、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマーなどの、好適には透明性を有する材料が用いられるが、これらに限定されない。
本実施形態において、少なくとも培養容器10Bの底板101およびベース部材12の底壁121は透明とされている。これにより、底板101および底壁121は、外部から各容器部100の内側空間が視認可能な部位である。
シール部材13は、例えばゴム成形品であり、図18に示すように、上下に延びる円筒部131と、プレート部132とを有する。シール部材13は、培養容器10B(容器部100)の側板102とベース部材12の側壁122ないしフランジ123との間に介在している。円筒部131は、プレート部132の内周部から下方側(第1方向他方側)に延びており、ベース部材12の側壁122に外嵌されている。円筒部131の自然状態における内径寸法は側壁122の外径寸法よりも僅かに小であり、これにより円筒部131(シール部材13)は側壁122(ベース部材12)に圧接保持されている。また、円筒部131の自然状態における外径寸法は、容器部100における側板102の内径寸法よりも僅かに大である。これにより、アタッチメント11G装着時において、円筒部131は、側板102(容器部100)と側壁122(ベース部材12)との間に圧入されている。プレート部132は、円筒部131の上端から径方向外方に延出しており、環状とされている。プレート部132は、平面視においてベース部材12のフランジ123と重なっている。また、培養容器10B(容器部100)へのアタッチメント11G装着時において、プレート部132は、容器部100における開口103の周縁部すべてと当接する。このような構成により、ベース部材12およびシール部材13(アタッチメント11G)は、容器部100の内側空間を密閉する。
シール部材13は、流体導入流路15および流体導出流路16を有する。本実施形態では、流体導入流路15は、シール部材13に形成された孔や溝によって構成される。より詳細には、流体導入流路15は、プレート部132に形成された孔と円筒部131の内面に形成された溝とがつながる構成とされる。流体導入流路15の一端は外部に通じる流体流入口151とされており、流体導入流路15の他端は密閉された容器部100の内側空間に通じている。流体流入口151は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。
本実施形態では、流体導出流路16は、流体導入流路15に比較的近接して設けられており、プレート部132に形成された孔と円筒部131の内面に形成された溝とがつながる構成とされる。流体導出流路16の一端は外部に通じる流体流出口161とされており、流体導出流路16の他端は密閉された容器部100の内側空間に通じている。流体流出口161は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。上記の流体流入口151と流体流出口161とは、互いに同一方向を向く。上記の流体導入流路15および流体導出流路16は、本発明で言うシール部材内流路を構成する。
シール部材13は、可撓性、弾力性を有する素材によって構成されている。シール部材13を構成する素材としては、例えば、シリコーンゴム、天然ゴム、ウレタンゴム、エラストマー樹脂などが挙げられる。シール部材13と、内容物(例えば培養液)との接触を考慮すると、シール部材13の素材としては、細胞毒性が無く、かつ生体適合性を有する医療用シリコーンゴムがより好ましい。また、シール部材13の硬さについては、例えばゴム硬度が20度~40度程度であるのが好ましい。
本実施形態のアタッチメント11Gは、開放系の培養容器10Bに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Gの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Gにおいては、既存の開放系の培養容器10B(容器部100)にアタッチメント11Gを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11G(ベース部材12およびシール部材13)は、容器部100の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Gに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
また、本実施形態では、培養容器10Bは複数の容器部100を有し、これら容器部100それぞれに複数のアタッチメント11Gを各別に装着することが可能である。このような構成によれば、例えば容器部100に装着するアタッチメント11G毎に、接続する培養液収容体2や真空容器ユニット3を適宜異ならせることで、異なる培養条件での灌流培養を並行して行うことが可能である。
その他にも、本実施形態のアタッチメント11Gおよび培養容器ユニット1Gにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図19~図22は、本発明に係る灌流培養用アタッチメントおよびこれを具備する培養容器ユニットの他の実施形態(第3実施形態)を示している。本実施形態の培養容器ユニット1Hは、培養容器10Bと、アタッチメント11Hと、備える。図19、図20は、培養容器10Bにアタッチメント11Hを装着した状態を示す。図21は、培養容器ユニット1Hの分解斜視図である。なお、本実施形態における培養容器10Bは、いわゆるウェルプレートに相当するもので複数の容器部100を有するが、図15~図18を参照して説明した上記第2実施形態における培養容器10Bと同一の構成であるので、その説明を適宜省略する。
アタッチメント11Hは、培養容器10Bの複数の容器部100に装着され、これら容器部100のそれぞれの開口103を塞いで当該容器部100の内側空間を密閉するためのものである。アタッチメント11Hは、ベース部材12およびシール部材13を備えている。
本実施形態のアタッチメント11Hは、複数の容器部100の各開口103を一括して塞ぐことが可能に構成されており、この点において上記実施形態のアタッチメント11Gと大きく異なる。
具体的には、ベース部材12は、押さえ部120Aと、複数の第1有底筒部120Bとを有する。押さえ部120Aは、長矩形の平板状とされており、培養容器10Bの平面視サイズに対応するサイズとされている。複数の第1有底筒部120Bは、複数の容器部100それぞれに対応するように配置されており、各々、容器部100の内側に進入可能である。第1有底筒部120Bは、底壁121と、この底壁121の周縁から起立状に延びる筒状の側壁122とを有する。各底壁121は、容器部100における側板102の内側に当該側板102と間隔を隔てて収まるとともに下方側(第1方向他方側)に突き出ている。底壁121は、本発明で言う突出部を構成する。各側壁122の上端部は押さえ部120Aにつながっている。図21、図22からも理解されるように、各側壁122につながる押さえ部120Aは、各側壁122の上端部から外側に延びて一体的につながっている。
培養容器10Bおよびベース部材12は、例えば半透明または透明の硬質プラスチック材料により形成されている。当該プラスチック材料としては、例えばポリスチレンやメチルペンテンのほか、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマーなどの、好適には透明性を有する材料が用いられるが、これらに限定されない。
本実施形態において、少なくとも培養容器10Bの底板101およびベース部材12の底壁121は透明とされている。これにより、底板101および底壁121は、外部から各容器部100の内側空間が視認可能な部位である。
シール部材13は、例えばゴム成形品であり、図21、図22に示すように、プレート部130Aと、複数の円筒部131とを有する。プレート部130Aは、長矩形の平板状とされており、培養容器10Bの平面視サイズに対応するサイズとされている。複数の円筒部131は、複数の容器部100それぞれに対応するように配置されており、各々、プレート部130Aの適所に設けられた貫通開口の内周部から下方側(第1方向他方側)に延びている。円筒部131の内側にはベース部材12の第1有底筒部120Bを挿入可能であり、また、円筒部131の自然状態における内径寸法は側壁122の外径寸法よりも僅かに小である。これにより、円筒部131(シール部材13)は側壁122(ベース部材12)に圧接保持される。各円筒部131は容器部100の内側に挿入可能であり、円筒部131の自然状態における外径寸法は、容器部100における側板102の内径寸法よりも僅かに大である。これにより、アタッチメント11H装着時において、各円筒部131は、側板102(容器部100)と側壁122(ベース部材12)との間に圧入されている。プレート部130Aは、平面視においてベース部材12の押さえ部120Aと重なっている。また、培養容器10B(容器部100)へのアタッチメント11H装着時において、プレート部130Aは、押さえ部120Aと各容器部100における開口103の周縁部との間に介在し、各開口103の周縁部すべてと当接する。このような構成により、ベース部材12およびシール部材13(アタッチメント11H)は、複数の容器部100それぞれの内側空間を密閉する。
シール部材13は、流体導入流路15および流体導出流路16を有する。本実施形態において、シール部材13は、複数の容器部100に対応して複数ずつの流体導入流路15および流体導出流路16を有する。各容器部100に対応して、一対の流体導入流路15および流体導出流路16が設けられている。本実施形態では、流体導入流路15は、シール部材13に形成された孔や溝によって構成される。より詳細には、流体導入流路15は、プレート部130Aに形成された孔と円筒部131の内面に形成された溝とがつながる構成とされる。流体導入流路15の一端は外部に通じる流体流入口151とされており、流体導入流路15の他端は密閉された容器部100の内側空間に通じている。流体流入口151は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。
本実施形態では、流体導出流路16は、流体導入流路15に比較的近接して設けられており、プレート部130Aに形成された孔と円筒部131の内面に形成された溝とがつながる構成とされる。流体導出流路16の一端は外部に通じる流体流出口161とされており、流体導出流路16の他端は密閉された容器部100の内側空間に通じている。流体流出口161は、上下方向(第1方向)に対して実質的に直角である方向を向いている。対をなす流体導入流路15および流体導出流路16において、流体流入口151と流体流出口161とは、互いに同一方向を向く。上記の流体導入流路15および流体導出流路16は、本発明で言うシール部材内流路を構成する。
シール部材13は、可撓性、弾力性を有する素材によって構成されている。シール部材13を構成する素材としては、例えば、シリコーンゴム、天然ゴム、ウレタンゴム、エラストマー樹脂などが挙げられる。シール部材13と、内容物(例えば培養液)との接触を考慮すると、シール部材13の素材としては、細胞毒性が無く、かつ生体適合性を有する医療用シリコーンゴムがより好ましい。また、シール部材13の硬さについては、例えばゴム硬度が20度~40度程度であるのが好ましい。
本実施形態のアタッチメント11Hは、開放系の培養容器10Bに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Hの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Hにおいては、既存の開放系の培養容器10B(容器部100)にアタッチメント11Hを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11H(ベース部材12およびシール部材13)は、容器部100の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Hに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
また、本実施形態では、培養容器10Bは複数の容器部100を有し、単一のアタッチメント11Hを培養容器10Bに装着することで複数の容器部100を一括して密閉封止可能である。このような構成によれば、複数の容器部100を具備する培養容器10Bについて、簡単な操作によってすべての容器部100を密閉状態にすることができる。また、本実施形態によれば、例えば容器部100に対応する流体導入流路15および流体導出流路16毎に、接続する培養液収容体2や真空容器ユニット3を適宜異ならせることで、異なる培養条件での灌流培養を並行して行うことが可能である。
その他にも、本実施形態のアタッチメント11Hおよび培養容器ユニット1Hにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
図23~図27は、本発明に係る灌流培養用アタッチメントおよびこれを具備する培養容器ユニットの他の実施形態(第4実施形態)を示している。本実施形態の培養容器ユニット1Jは、培養容器10Bと、アタッチメント11Jと、備える。図23、図24は、培養容器10Bにアタッチメント11Jを装着した状態を示す。図25は、培養容器ユニット1Jの分解斜視図である。なお、本実施形態における培養容器10Bは、いわゆるウェルプレートに相当するもので複数の容器部100を有するが、図15~図18を参照して説明した上記第2実施形態における培養容器10Bと同一の構成であるので、その説明を適宜省略する。
アタッチメント11Jは、培養容器10Bの複数の容器部100に装着され、これら容器部100のそれぞれの開口103を塞いで当該容器部100の内側空間を密閉するためのものである。アタッチメント11Jは、ベース部材12およびシール部材13を備えている。
本実施形態のアタッチメント11Jは、上記のアタッチメント11Hと同様に、複数の容器部100の各開口103を一括して塞ぐことが可能に構成されている。その一方、ベース部材12およびシール部材13の具体的構成が上記アタッチメント11Hと大きく異なっており、培養液交換時に当該培養液が流れる経路がアタッチメント11Hの場合と異なる。
本実施形態において、ベース部材12は、実質的に押さえ部120Aのみを備えている。押さえ部120Aは、長矩形の平板状とされており、培養容器10Bの平面視サイズに対応するサイズとされている。この押さえ部120Aには、厚さ方向に貫通する複数の貫通孔126が形成されている。複数の貫通孔126は、複数の容器部100それぞれに対応する位置に形成されている。また、本実施形態において、押さえ部120Aの適所には、厚さ方向(第1方向)に貫通する複数(本実施形態では2つ)の貫通路127が設けられている。貫通孔126および貫通路127の意義については後述する。
培養容器10Bおよびベース部材12は、例えば半透明または透明の硬質プラスチック材料により形成されている。当該プラスチック材料としては、例えばポリスチレンやメチルペンテンのほか、ポリカーボネート、シクロオレフィンポリマー、シクロオレフィンコポリマーなどの、好適には透明性を有する材料が用いられるが、これらに限定されない。本実施形態において、少なくとも培養容器10Bの底板101は透明とされている。これにより、底板101は、外部から各容器部100の内側空間が視認可能な部位である。
シール部材13は、例えばゴム成形品であり、図25、図26に示すように、プレート部130Aと、複数の第2有底筒部130Bとを有する。プレート部130Aは、長矩形の平板状とされており、培養容器10Bの平面視サイズに対応するサイズとされている。複数の第2有底筒部130Bは、複数の容器部100それぞれに対応するように配置されており、各々、容器部100の内側に進入可能である。第2有底筒部130Bは、円筒部131および底壁部134を有する。円筒部131は、プレート部130Aの適所に設けられた貫通開口の内周部から下方側(第1方向他方側)に延びている。底壁部134は、円筒部131の下端につながり、当該円筒部131の内側を塞いでいる。底壁部134の中央部分は相対的に厚さが小とされた薄肉部135であり、当該薄肉部135は透明である。
プレート部130Aは、平面視においてベース部材12の押さえ部120Aと重なっている。また、培養容器10B(容器部100)へのアタッチメント11J装着時において、プレート部130Aは、押さえ部120Aと各容器部100における開口103の周縁部との間に介在し、各開口103の周縁部すべてと当接する。その一方、本実施形態において、円筒部131と容器部100における側板102との間には隙間があり、円筒部131は圧入されていない。このような構成のアタッチメント11Jにおいて、ベース部材12を下方に押圧することにより、複数の容器部100を密閉することができる。
アタッチメント11Jの装着時には、平面視において、シール部材13の各第2有底筒部130Bの薄肉部135は、押さえ部120Aに形成された複数の貫通孔126のいずれかと重なっている。これにより、アタッチメント11Jの上方(外部)から貫通孔126および透明な薄肉部135を介して各容器部100の内部の状況を観察することが可能である。
本実施形態において、シール部材13は、延出片128および突起129をさらに有する。延出片128は、押さえ部120Aの外周縁4辺それぞれから外側に延びており、作業者が手で摘むための部位である。突起129は、各延出片128の上面から上方に突出しており、アタッチメント11J装着時にベース部材12の押さえ部120Aの外周縁4辺に当接あるいは近接する。このような突起129を有する構成は、アタッチメント11J装着時のベース部材12およびシール部材13相互の位置決めの役割を担う。
シール部材13は、流体導入流路15および流体導出流路16を有する。本実施形態において、シール部材13は、1つの容器部100(第1の容器部)に対応する1つの流体導入流路15と、他の1つの容器部100(第2の容器部)に対応する1つの流体導出流路16とを有する。流体導入流路15および流体導出流路16は、プレート部130Aの厚さ方向(上下方向、即ち第1方向)に貫通する孔によって構成される。
流体導入流路15は、1つの第2有底筒部130Bの近傍に設けられている。流体導入流路15の一端(上端)は、外部に通じる流体流入口151とされている。流体導入流路15の他端(下端)は、密閉された容器部100(第1の容器部)の内側空間に通じている。流体流入口151は、上方(第1方向一方側)を向いている。流体導出流路16は、他の1つの第2有底筒部130Bの近傍に設けられている。流体導出流路16の一端(上端)は、外部に通じる流体流出口161とされている。流体導出流路16の他端(下端)は、密閉された容器部100(第2の容器部)の内側空間に通じている。流体流出口161は、上方(第1方向一方側)を向いている。
アタッチメント11Jの装着時には、平面視において、流体導入流路15および流体導出流路16は、それぞれベース部材12(押さえ部120A)に形成された貫通路127と重なっている。これにより、流体流入口151および流体流出口161は、それぞれ貫通路127と連通しており、貫通路127を介して外部に通じている。上記の流体導入流路15および流体導出流路16は、本発明で言うシール部材内流路を構成する。
本実施形態において、シール部材13は、複数の連絡流路17を有する。連絡流路17は、隣接する一対の容器部100の内側空間を相互に連通させる流路である。本実施形態では、連絡流路17は、シール部材13に形成された孔や溝によって構成される。より詳細には、連絡流路17は、プレート部130Aに形成された一対の孔171と、溝172とによって構成される。上記一対の孔171は、それぞれプレート部130Aの厚さ方向に延びている。一対の孔171の下端は、隣接する一対の容器部100における内側空間に通じている。溝172は、プレート部130Aにおける上面(第1方向の一方側を向く面)に形成されている。溝172の両端は、上記一対の孔171の上端につながっている。プレート部130Aにベース部材12(押さえ部120A)が重ねられることにより溝172の上端が塞がれ、連絡流路17は隣接する容器部100の内側空間どうしを連通させる。
図25~図27からも理解されるように、複数の連絡流路17は、流体導入流路15の下端が連通する容器部100(第1の容器部)の内側空間から、隣接する容器部100の内側空間を順次経て流体導出流路16の下端が連通する容器部100(第2の容器部)の内側空間に通じるように設けられている。
シール部材13は、可撓性、弾力性を有する素材によって構成されている。シール部材13を構成する素材としては、例えば、シリコーンゴム、天然ゴム、ウレタンゴム、エラストマー樹脂などが挙げられる。シール部材13と、内容物(例えば培養液)との接触を考慮すると、シール部材13の素材としては、細胞毒性が無く、かつ生体適合性を有する医療用シリコーンゴムがより好ましい。また、シール部材13の硬さについては、例えばゴム硬度が20度~40度程度であるのが好ましい。
本実施形態のアタッチメント11Jは、開放系の培養容器10Bに装着して構成された密閉状の培養容器ユニット1Jの内部に培養細胞と培養液を収容し、細胞培養状態を維持しながら培養液の交換を行うのに使用される。
培養容器ユニット1Jにおいては、既存の開放系の培養容器10B(容器部100)にアタッチメント11Jを装着することで密閉状態での細胞培養が可能である。アタッチメント11J(ベース部材12およびシール部材13)は、容器部100の開口103を塞いでおり、可撓性のシール部材13が容器部100の内側空間を封止する役割を担う。また、シール部材13には、流体導入流路15および流体導出流路16(シール部材内流路)が形成されており、これら流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Jに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、密閉状態での灌流培養が可能である。
本実施形態では、培養容器10Bは複数の容器部100を有し、単一のアタッチメント11Jを培養容器10Bに装着することで複数の容器部100を一括して密閉封止可能である。このような構成によれば、複数の容器部100を具備する培養容器10Bについて、簡単な操作によってすべての容器部100を密閉状態にすることができる。
また、本実施形態において、プレート部130A(シール部材13)には、複数の連絡流路17が設けられている。これら連絡流路17により、流体導入流路15の下端が連通する容器部100(第1の容器部)の内側空間から、隣接する容器部100の内側空間を順次経て流体導出流路16の下端が連通する容器部100(第2の容器部)の内側空間まで通じている。このような構成によれば、流体導入流路15および流体導出流路16を利用して培養容器ユニット1Jに培養液収容体2および真空容器ユニット3を接続することで、複数の容器部100に順次新しい培養液を送り込むことができる。したがって、本実施形態によれば、複数の容器部100について一括して培養液の交換が可能であり、複数の容器部100において同じ培養条件での灌流培養を並行して行うのに適する。
その他にも、本実施形態のアタッチメント11Jおよび培養容器ユニット1Jにおいて、上記のアタッチメント11Aおよび培養容器ユニット1Aと同様の作用効果を奏する。
以上、本発明の具体的な実施形態を説明したが、本発明はこれに限定されるものではなく、発明の思想から逸脱しない範囲内で種々な変更が可能である。本発明に係る灌流培養用アタッチメントの各部の具体的な構成は、種々に設計変更自在である。
図23~図27を参照して説明した上記第4実施形態のアタッチメント11Jにおいて、シール部材13が複数の連絡流路17を有する構成とされていたが、本発明はこれに限定されない。例えば、アタッチメント11Jのシール部材13において、複数の連絡流路17を設けず、培養容器10Bの複数の容器部100に対応した複数対の流体導入流路15および流体導出流路16を設けてもよい。
また、上記アタッチメント11Jにおいて、シール部材13の円筒部131と容器部100における側板102との間には隙間があり、円筒部131は圧入されていなかったが、円筒部131を容器部100に圧入するように構成してもよい。円筒部131を容器部100に圧入する構成にする場合、複数の円筒部131それぞれの自然状態における外径寸法を側板102(容器部100)の内径寸法よりも僅かに大きくしておけばよい。なお、各円筒部131を容器部100に圧入する構成にする場合、押さえ部120Aを含んで構成されたベース部材12は必ずしも必要でなく、ベース部材12を具備しない構成としてもよい。
上記実施形態において、アタッチメント11Aを具備する培養容器ユニット1Aを真空容器ユニット3に接続して使用する場合について説明したが、本発明はこれに限定されない。本発明に係る灌流培養用アタッチメントは、様々な培養装置に使用することが可能である。本発明に係る灌流培養用アタッチメントが培養容器に装着された培養容器ユニットに培養液を供給、回収、あるいは灌流させる手段としては、例えばチューブポンプ、シリンジポンプ等種々のポンプを用いた液送ユニットが好適に利用可能である。
A10 灌流培養システム
M1 培養液
1A,1B,1C,1D,1E,1F,1G,1H,1J 培養容器ユニット
10A,10B 培養容器
100 容器部
101 底板
102 側板
103 開口
11A,11B,11C,11D,11E,11F,11G,11H,11J アタッチメント(灌流培養用アタッチメント)
12 ベース部材
120A 押さえ部
120B 第1有底筒部
121 底壁(突出部)
122 側壁
123 フランジ
124 摘持用筒部
125 延出片
126 貫通孔
127 貫通路
128 延出片
129 突起
13 シール部材
130A プレート部
130B 第2有底筒部
131 円筒部(筒状部)
132 プレート部
133 環状突起
134 底壁部(突出部)
135 薄肉部
15 流体導入流路
151 流体流入口
16 流体導出流路
161 流体流出口
17 連絡流路
171 孔
172 溝
2 培養液収容体
21 導出口
3 真空容器ユニット
31 管体
311 開口端
32 栓
41 第1流路
411 部分流路
412 部分流路
42 第2流路
421 部分流路
422 部分流路
43 穿刺針
44 ホルダ
51 第1接続手段
511 雌ルアーコネクタ
512 雄ルアーコネクタ
52 第2接続手段
521 雌ルアーコネクタ
522 雄ルアーコネクタ
6 狭窄部
M1 培養液
1A,1B,1C,1D,1E,1F,1G,1H,1J 培養容器ユニット
10A,10B 培養容器
100 容器部
101 底板
102 側板
103 開口
11A,11B,11C,11D,11E,11F,11G,11H,11J アタッチメント(灌流培養用アタッチメント)
12 ベース部材
120A 押さえ部
120B 第1有底筒部
121 底壁(突出部)
122 側壁
123 フランジ
124 摘持用筒部
125 延出片
126 貫通孔
127 貫通路
128 延出片
129 突起
13 シール部材
130A プレート部
130B 第2有底筒部
131 円筒部(筒状部)
132 プレート部
133 環状突起
134 底壁部(突出部)
135 薄肉部
15 流体導入流路
151 流体流入口
16 流体導出流路
161 流体流出口
17 連絡流路
171 孔
172 溝
2 培養液収容体
21 導出口
3 真空容器ユニット
31 管体
311 開口端
32 栓
41 第1流路
411 部分流路
412 部分流路
42 第2流路
421 部分流路
422 部分流路
43 穿刺針
44 ホルダ
51 第1接続手段
511 雌ルアーコネクタ
512 雄ルアーコネクタ
52 第2接続手段
521 雌ルアーコネクタ
522 雄ルアーコネクタ
6 狭窄部
Claims (21)
- 第1方向の一方側端に開口を有し、かつ上記第1方向に延びる有底筒状の容器部を少なくとも一つ備えた培養容器に装着され、上記開口を塞いで上記容器部の内側空間を密閉して灌流培養を行うためのアタッチメントであって、
可撓性を有するシール部材を備え、
上記シール部材は、各々の一端が外部に通じ、かつ他端が上記容器部の上記内側空間に通じる、複数のシール部材内流路を有する、灌流培養用アタッチメント。 - 上記容器部の内側に収まり、かつ上記第1方向の他方側に向かって突き出る突出部を有する、請求項1に記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記シール部材は、上記突出部を構成する底壁部と、上記底壁部から上記第1方向の上記一方側に延び、かつ上記容器部に圧入される筒状部とを有する、請求項2に記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記シール部材とは別体の硬質材料からなるベース部材を備え、
上記ベース部材は、上記突出部を構成する底壁と、この底壁から起立する筒状の側壁と、この側壁の端部から径方向外方に延出する環状のフランジと、を有し、
上記シール部材は、上記第1方向において上記フランジと上記開口の周縁部との間に介在し、かつ上記開口の周縁部すべてと当接しうるプレート部を有する、請求項2に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記シール部材は、上記プレート部から上記第1方向の上記他方側に延びる筒状部を有し、
上記筒状部は、上記容器部と上記側壁との間に圧入される、請求項4に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記シール部材とは別体の硬質材料からなるベース部材を備え、
上記ベース部材は、上記突出部を構成する底壁と、この底壁から起立する筒状の側壁と、を有し、
上記シール部材は、上記容器部と上記側壁との間に圧入される、請求項2に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記ベース部材は、透明である、請求項4ないし6のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記シール部材が上記突出部を具備しており、
当該突出部は、他の部位よりも相対的に厚さが小とされた透明の薄肉部を有する、請求項2または3に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記各シール部材内流路における上記一端は、上記第1方向に対して実質的に直角である方向を向いている、請求項1ないし8のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記複数のシール部材内流路は、外部から上記容器部の上記内側空間に流体を導入するための流体導入流路と、上記容器部の上記内側空間から外部に流体を導出するための流体導出流路と、を含む、請求項1ないし9のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記培養容器は、上記第1方向に対して直角である面内方向において互いに離間配置された複数の上記容器部を備えており、
上記シール部材は、上記突出部を構成する複数の底壁部と、各々が上記底壁部から上記第1方向の上記一方側に延び、かつ上記容器部に圧入される複数の筒状部と、を有する、請求項2に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記培養容器は、上記第1方向に対して直角である面内方向において互いに離間配置された複数の上記容器部を備えており、
上記シール部材とは別体の硬質材料からなるベース部材を備え、
上記ベース部材は、上記容器部の内側に収まり、上記突出部を構成する底壁、およびこの底壁から起立する筒状の側壁を各々が有する複数の第1有底筒部と、
上記各側壁の端部から外側に延びて一体とされた板状の押さえ部と、を有し、
上記シール部材は、上記第1方向において上記押さえ部と上記各開口の周縁部との間に介在し、かつ上記各開口の周縁部すべてと当接しうるプレート部を有する、請求項2に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記シール部材は、各々が上記プレート部から上記第1方向の上記他方側に延び、かつ上記第1有底筒部を内挿しうる複数の筒状部を有し、
上記筒状部は、上記容器部と上記側壁との間に圧入される、請求項12に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記ベース部材は、透明である、請求項12または13に記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記培養容器は、上記第1方向に対して直角である面内方向において互いに離間配置された複数の上記容器部を備えており、
上記シール部材とは別体の硬質材料からなり、板状の押さえ部を有するベース部材を備え、
上記シール部材は、上記第1方向において上記押さえ部と上記各開口の周縁部との間に介在し、かつ上記各開口の周縁部すべてと当接しうるプレート部と、上記プレート部から上記第1方向の上記他方側に延びる筒状部、および上記突出部を構成する底壁部を各々が有する複数の第2有底筒部と、を有する、請求項2に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記各シール部材内流路における上記一端は、上記第1方向に対して実質的に直角である方向を向いている、請求項11ないし15のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記各シール部材内流路における上記一端は、上記第1方向の上記一方側を向いており、
上記押さえ部は、各々が上記シール部材内流路の上記一端に連通し、かつ上記第1方向に貫通する、複数の貫通路を有する、請求項12ないし15のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記複数のシール部材内流路は、外部から上記複数の上記容器部それぞれの上記内側空間に流体を導入するための複数の流体導入流路と、上記複数の上記容器部それぞれの上記内側空間から外部に流体を導出するための複数の流体導出流路と、を含む、請求項11ないし17のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記シール部材は、上記容器部の上記内側空間どうしを連通させる少なくとも一つの連絡流路を有する、請求項11ないし15のいずれかに記載の灌流培養用アタッチメント。
- 上記複数のシール部材内流路は、上記複数の上記容器部のうち第1の上記容器部の上記内側空間に外部から流体を導入するための流体導入流路と、上記複数の上記容器部のうち第2の上記容器部の上記内側空間から外部に流体を導出するための流体導出流路と、を含み、
上記連絡流路は、上記第1の上記容器部の上記内側空間から隣接する上記容器部の上記内側空間を順次経て上記第2の上記容器部の上記内側空間に通じるように設けられる、請求項19に記載の灌流培養用アタッチメント。 - 上記連絡流路は、上記プレート部における上記第1方向の上記一方側を向く面に形成された溝を含んで構成される、請求項19または20に記載の灌流培養用アタッチメント。
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