WO2019211501A1

WO2019211501A1 - Composición de extractos vegetales con flavonoides para paliar los múltiples efectos de la contaminación del aire sobre la piel.

Info

Publication number: WO2019211501A1
Application number: PCT/ES2019/070280
Authority: WO
Inventors: Nuria CATURLA CERNUDA; Ana Peral Clement
Original assignee: Monteloeder S.L.
Priority date: 2018-04-30
Filing date: 2019-04-24
Publication date: 2019-11-07
Also published as: CN112512500A; KR20210005933A; JP2021530433A; EP3811926A4; ES2689105B2; ES2689105B8; EP3811926A1; US20210121391A1; ES2689105A1

Abstract

La presente invención aporta una composición para su uso en el tratamiento de los efectos de la contaminación ambiental sobre la piel o para la prevención del envejecimiento prematuro de la piel asociada a los efectos de la contaminación ambiental. Dicha composición comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol. En un modo preferente de realización la composición contiene alrededor de un 32 % en peso de extracto de romero con un contenido mínimo de 15 % en peso de diterpenos, alrededor de un 30 % en peso de extracto de hojas o fruto de olivo con un contenido mínimo de 16 % en peso de oleuropeina y un contenido mínimo de 5 % en peso de hidroxitirosol, alrededor de un 28 % en peso de extracto de Lippia citriodora con un contenido mínimo de 25 % en peso de verbascósido y alrededor de un 10 % en peso de extracto de Sophora japonica con un contenido mínimo de 40% en quercetina.

Description

TÍTULO DE LA INVENCIÓN

Composición de extractos vegetales con flavonoides para paliar los múltiples efectos de la contaminación del aire sobre la piel.

CAMPO TÉCNICO DE LA INVENCIÓN

La presente invención se enmarca dentro del campo técnico de productos para el tratamiento de las afecciones de la piel humana, en particular, para paliar los múltiples efectos de la contaminación del aire de las ciudades sobre la piel. No obstante, la presente composición, a pesar de estar específicamente formulada para paliar los múltiples efectos de la contaminación ambiental urbana, también puede ser comercializada y usada con diferentes indicaciones con notables efectos paliativos como, por ejemplo, como producto para retrasar el deterioro de la piel por el envejecimiento celular

ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN

La exposición crónica a la contaminación del aire de las ciudades produce simultáneamente múltiples efectos nocivos sobre la piel humana. Entre estos efectos perjudiciales se encuentran el envejecimiento prematuro de la piel, condiciones inflamatorias o alérgicas como la aparición de pieles atópicas, dermatitis, eczema, psoriasis o acné, llegando incluso a provocar cáncer de piel, entre las afecciones más graves que puede ocasionar (1 ).

La relación entre la contaminación ambiental con los efectos dañinos que ésta causa sobre la piel ha sido demostrada en numerosos estudios científicos durante los últimos años.

Por ejemplo, se ha comprobado científicamente que una variedad de contaminantes del aire, como el humo de tabaco, compuestos orgánicos volátiles (VOC’s de sus siglas en inglés), formaldehído, tolueno, dióxido de nitrógeno y materia particulada, actúan como factores de riesgo para el desarrollo o agravamiento de la dermatitis atópica, que es un proceso inflamatorio de la piel (2, 3, 4). Una posible explicación es que estos contaminantes del aire inducen estrés oxidativo en la piel, lo que conduce a la disfunción de su barrera protectora o la desregulación de la inmunidad. Además, se ha visto como la activación del receptor de hidrocarburos Arilo (AhR) parece estar también implicado (5, 6, 7). La contaminación del aire es un factor agravante en varias patologías inflamatorias de la piel, incluyendo el acné. Consecuentemente, suelen aparecen manchas oscuras en las pieles normales y acné en las pieles grasas durante períodos de contaminación ambiental muy elevada. Existe una correlación positiva entre la contaminación ambiental del aire y la aparición y evolución del acné porque en un estudio se ha establecido que, a mayor concentración de ciertos contaminantes atmosféricos, mayor es el número de consultas de pacientes por acné vulgaris y que a mayor concentración de ciertos contaminantes, también crece la secreción de sebo y el número de lesiones de acné (8, 9).

Además, la contaminación ambiental del aire provoca la oxidación del sebo cutáneo, lo cual intensifica los signos del acné. Además, la contaminación atmosférica combinada con polvo ambiental y rayos ultravioleta (UV) procedentes de la radiación solar resulta en la oxidación del escualeno, el componente principal del sebo.

La relación entre el envejecimiento prematuro cutáneo y la exposición a la contaminación ambiental del aire fue observada por primera vez en el estudio epidemiológico SAILA, realizado en mujeres caucásicas de avanzada edad, donde se encontró una correlación entre la mayor exposición a la materia particulada proveniente del tráfico y el mayor envejecimiento de la piel. En concreto, se correlacionó con la aparición de mayor cantidad y mayor profundidad de arrugas (pliegue naso-labial) así como un aumento en el número de manchas en las mejillas y la frente. De hecho, se observó una asociación entre la distancia de 100 m o menos a una carretera con tráfico con un 35% más manchas en la frente y un 15% más manchas o en las mejillas (10).

Pero no sólo la exposición a la materia particulada se asocia con un envejecimiento acelerado. También se ha visto una fuerte correlación entre el N0₂ y la formación de manchas en mujeres caucásicas (n = 806; SALIA). Estos resultados fueron confirmados también en mujeres chinas (n = 1 ,072; Taizhou longitudinal study cohort). Un aumento de 10 pg/m³ en N0₂ se asoció con un 25% más de manchas en las mujeres alemanas (p=0.003) y un 24% más en las mujeres chinas mayores de 50 años (1 1 ). Como dato adicional, muchas ciudades del Reino Unido presentan niveles tan altos de N0₂ que rebasan los límites legales, con Londres sobrepasando el límite anual en la primera semana de 2016, con unas concentraciones que alcanzan más de 200 microgramos de N0₂ por metro cúbico.

La contaminación ambiental del aire produce unos efectos a corto plazo sobre la piel, como por ejemplo, el aumento de la sequedad, el enrojecimiento e irritación y otros efectos más a largo plazo, como el envejecimiento prematuro, la degradación de colágeno además de la aparición de manchas y arrugas más profundas en la piel. Los productos actuales para el tratamiento y cuidado de la piel están desarrollados para cubrir el amplio espectro de efectos que ocasiona la contaminación ambiental del aire, habiendo actualmente algunos productos que son antiarrugas, otros anti-acné, otros hidratantes, etc. La aplicación de todos estos productos para paliar los efectos de la contaminación ambiental del aire sobre la piel conlleva un gasto significativo y la aplicación paralela o combinada de varias formulaciones sobre la piel, con el riesgo de ocasionar efectos indeseados, ya que dichas combinaciones no han sido testadas previamente.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

La presente invención se refiere a una composición para el tratamiento de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel, que comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

La invención también se refiere a una dosis de entre 0.1 a 1000 miligramos de una composición que comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

Además, la invención se refiere a una formulación para administración por vía parenteral, transdermal, oral o tópica, donde dicha formulación contiene una composición que comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

Otro aspecto de la presente invención se refiere al uso cosmético de dicha composición, que comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol, para paliar cosméticamente los efectos estéticos de la contaminación ambiental sobre la pie, para la prevención del envejecimiento prematuro de la piel asociada a los efectos de la contaminación del aire sobre la piel.

Otro aspecto adicional, se refiere a la composición que comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol, para uso como medicamento; en particular, para uso en el tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental.

Finalmente, la presente invención se refiere a un suplemento dietético, o a un nutricosmético que comprende dicha composición que diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS Figura 1. Gráfico que muestra el porcentaje de oxidación de los queratinocitos humanos (HaCaT) tratados con las composiciones 1 B de la invención, 2B y 3B con dos concentraciones distintas en comparación con las células sin tratar.

Figuras 2A, 2B y 2C. Gráficos que muestran el porcentaje de oxidación de queratinocitos humanos (HaCat) in vitro incubados con las tres formulaciones de la Tabla 1 (1 B de la invención, 2B y 3B) y expuestos a radiación ultravioleta tipo B (UVB), con intensidades de 800 y 1200 J/m² en comparación con muestras no tratadas y no irradiadas.

Figura 3. Gráfico que muestra los niveles relativos de IL-8 en queratinocitos humanos (HaCat) in vitro en comparación con las células irradiadas y sin tratar. Los queratinocitos se trataron con 10 pg / mi de las composiciones 1 B (de la invención), 2B y 3B, y se expusieron a radiación UVB (300 J / m2). Los datos se expresan como la media ± DE. La utilización de las diferentes composiciones se realizó durante y post irradiación y también sólo post irradiación.

Figuras 4A, 4B y 4C. Gráficos que muestran el porcentaje de melanina producido por melanocitos humanos tratados con las fórmulas de la Tabla 1 (1 B de la invención, 2b y 3B) en comparación con los melanocitos sin tratar.

Figura 5. El gráfico de barras representa la acumulación de ROS en las muestras de queratinocitos humanos (HaCat) tratados con la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) a concentraciones de 0.001 % y 0.005 % en peso y sometidos durante 24 horas a una exposición con material pulverulento urbano (Urban Dust UD) a una concentración de 400 pg/ml y posteriormente irradiados con UVA durante 25 minutos. Los datos han sido normalizados con respecto al control expuesto a la misma cantidad de UD y radiación UVA.

Figura 6. Gráfico que muestra el incremento de la concentración de malondialdehido (MDA) en explantes cutáneos ex vivo tras ser expuestos a una mezcla de contaminantes y sin tratar (barra control) y tratados con la fórmula 1 B de la invención (barra ZeroPollution).

Figura 7. Gráfico que muestra la concentración de IL1 -alpha en explantes cutáneos ex vivo. Primera columna: sin ser expuestos a la mezcla de contaminantes y sin tratamiento; segunda columna: tras ser expuestos a la mezcla de contaminantes y sin tratamiento; tercera columna: tras ser expuestos a la mezcla de contaminantes y con tratamiento con la composición 1 B de la invención (ZeroPollution).

Figura 8. Gráfico que muestra la expresión de AhR en explantes cutáneos ex vivo. Primera columna: sin ser expuestos a la mezcla de contaminantes y sin tratamiento; segunda columna: tras ser expuestos a la mezcla de contaminantes; y tercera columna: tras ser expuestos a la mezcla de contaminantes y con tratamiento con la composición 1 B de la invención (ZeroPollution).

Figura 9. Gráfico que muestra la expresión de proteína metalotioneina MT-H1 en explantes cutáneos ex vivo. Primera columna: sin ser expuestos a la mezcla de contaminantes; segunda columna: tras ser expuestos a la mezcla de contaminantes; y tercera columna: tras ser expuestos a la mezcla de contaminantes y con tratamiento con la composición 1 B de la invención (ZeroPollution).

Figura 10. Gráfico que muestra la hidratación de la piel medida como % de variación de la hidratación desde el comienzo del estudio, T0, a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (ZeroPollution, barras en negro sólido) o con placebo (barras con líneas horizontales).

Figura 11. Gráfico que muestra la pérdida de agua transepidermal medida como % de variación de la hidratación desde el comienzo del estudio, T0, a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (ZeroPollution, barras en negro sólido) o con placebo (barras con líneas horizontales).

Figura 12. Gráfico que muestra la variación en la secreción de sebo producida en contacto con contaminación a 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (ZeroPollution barras en negro sólido y placebo en barras con líneas horizontales).

Figura 13. Gráfico que muestra la variación de la elasticidad de la piel a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo (barras con líneas horizontales).

Figura 14. Variación en la firmeza de la piel (medida como disminución en valor absoluto de R0, como representación del incremento de la firmeza de la piel), a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo (barras con líneas horizontales).

Figura 15. Variación (en %) de la luminosidad de la piel (medida como valor de brillo en la mejilla) a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo (barras con líneas horizontales). Figura 16. Variación (en %) del valor de ITA medido en un punto oscuro a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo (barras con líneas horizontales).

Figura 17. Variación (en %) de la profundidad de las arrugas a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo (barras con líneas horizontales).

Figura 18. Variación (en %) de la uniformidad de la piel a los 14, 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo o (barras con líneas horizontales).

Figura 19. Variación (en %) de la producción de MDA a los 28, 56 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo o (barras con líneas horizontales).

Figura 20. Variación (en %) de FRAS (Antioxidante Férrico Reductor de saliva) a los 28 y 84 días de la utilización de la composición de la invención (barras en negro solido), frente a la utilización de un placebo (barras con líneas horizontales).

DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN

Un primer aspecto de la invención aporta una composición para el tratamiento de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel, dicha composición comprendiendo diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol. En una realización preferente la composición de la invención comprende ácido carnósico. Preferiblemente, la composición contiene ácido carnósico como diterpeno principal.

En una realización la composición para uso en el tratamiento de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel comprende ácido carnósico, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

Una composición como la descrita anteriormente es adecuada para tratar los efectos de la contaminación del aire sobre la piel porque produce una combinación de efectos sobre la misma necesarios para paliar o contrarrestar todos los efectos nocivos de la contaminación del aire. Es decir, una composición como la descrita previamente tiene unos importantes y marcados efectos antioxidantes, anti-inflamatorios, anti envejecimiento y blanqueantes sobre la piel humana, es decir, dicha composición proporciona tanto efectos cosméticos (antienvejecimiento) como farmacéuticos (anti inflamatorio). Con ello se evita tener que aplicar diversos productos simultáneamente para combatir y/o evitar todas las afecciones asociadas a la contaminación ambiental, como son la inflamación, el aumento del acné, la dermatitis crónica, psoriasis, etc. El uso de una composición como la que se ha descrito anteriormente puede ser preventivo o para tratar condiciones existentes de la piel.

Por tanto, una realización se refiere a una composición que comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

En una realización, la composición de la invención comprende una proporción individual de 2,5 a 5 en peso de diterpenos, oleuropeina, verbascósido y quercetina a hidroxitirosol, aproximadamente. Es decir, en una realización la composición de la invención comprende una proporción de 2,5 a 5 de diterpenos a hidroxitirosol, una proporción de 2,5 a 5 de oleuropeina a hidroxitirosol, una proporción de 2,5 a 5 de verbascósido a hidroxitirosol y una proporción de 2,5 a 5 de quercetina a hidroxitirosol. Preferiblemente, la proporción en peso de diterpenos a hidroxitirosol es alrededor de 3, la proporción en peso de oleuropeina a hidroxitirosol es alrededor de 3, la proporción en peso de verbascósido a hidroxitirosol es alrededor de 4,5 y la proporción en peso de quercetina a hidroxitirosol es alrededor de 2,5.

A efectos de la presente invención los términos“aproximadamente” y“alrededor de” referidas a un valor numérico, relación o porcentaje indican que dicho valor numérico, relación o porcentaje, puede variar ±10% de su valor. Así, alrededor de 2,5 incluye los todos los valores comprendidos entre 2,25 a 2,75, es decir, por ejemplo 2,25; pero también 2,257; 2,31 ; 2,54; 2,5; 2,62; 2,63; 2,7; 2,75, etc. y todos los valores comprendidos entre estos.

Estas proporciones confieren a la composición un equilibrio adecuado entre los efectos antioxidantes, anti-inflamatorios, anti-envejecimiento y blanqueante o anti-pigmentación excesiva para que el tratamiento o la prevención de las distintas afecciones causadas por la contaminación ambiental sea efectivo o tangible con un solo producto.

Una composición con las características mencionadas anteriormente es posible obtenerla mediante la combinación de extractos de diferentes plantas. Cada extracto puede aportar uno o varios de los ingredientes activos, o una parte del total de los ingredientes activos.

En una realización, la fuente de quercetina es uno o una combinación de extractos de plantas, como, por ejemplo, extractos de cebolla, hinojo, eneldo, arándano o crisantemo, pero la fuente preferida de quercetina es un extracto de Sophora japónica con un contenido mínimo de 40% en peso de quercetina. En una realización preferente, la composición comprende un extracto de Sophora japónica con un contenido mínimo de 40% en peso de quercetina. Preferentemente, el extracto de Sophora japónica aporta un contenido mínimo de quercetina de 3,5% en el peso total de la composición de la invención.

Un extracto de Sophora japónica con un contenido mínimo de 40% en peso de quercetina es un ingrediente beneficioso para esta composición porque aporta una gran concentración de quercetina en relación a su coste de producción y peso y permite obtener concentraciones satisfactorias del resto de ingredientes activos.

La quercetina es un flavonoide perteneciente a la familia de los flavonoles. Se encuentra principalmente en cebollas, uvas, bayas, cerezas, brócoli y frutas cítricas. La quercetina es un potente antioxidante con alta actividad para eliminar radicales libres además de tener una buena actividad antiinflamatoria. Otra propiedad interesante de la quercetina es que hay estudios donde se ha visto que reduce la capacidad de la liberación de histamina (12). Varios estudios han demostrado que ciertos agentes contaminantes como las partículas de diésel aumentan los niveles de histamina, aumentando las reacciones alérgicas de aquellos que se encuentran en lugares de alta polución.

En una realización, la fuente de diterpenos es uno o una combinación de extractos de plantas. Los diterpenos tienen un marcado efecto anti-inflamatorio, lo cual es muy beneficioso para una composición indicada a paliar los efectos de la contaminación ambiental sobre la piel.

El ácido carnósico es un diterpeno encontrado en numerosas plantas fácilmente disponibles y por tanto es un diterpeno adecuado para ser usado en esta formulación por su coste adecuado y abundancia. En una realización, la fuente de ácido carnósico es un extracto o una combinación de extractos de romero, salvia, orégano, melisa o tomillo, por ejemplo.

Preferiblemente, la composición comprende un extracto de romero con un contenido mínimo de 15% en peso de diterpenos. Dicho extracto aporta una gran concentración de diterpenos en relación a su coste de producción y peso y permite obtener concentraciones satisfactorias del resto de ingredientes activos. Preferentemente dicho extracto de romero aporta un contenido mínimo de diterpenos de 4,5 % en el peso total de la composición de la invención.

El ácido carnósico tiene, además de una potente actividad antioxidante, una importante actividad anti-inflamatoria, debido a que elimina interleucinas, bloquea o inhibe la liberación de óxido nitroso y el ciclo de la tirosina-quinasa. El ácido carnósico también tiene propiedades anti-adipogénicas y previene el envejecimiento prematuro de la piel mediante la inhibición de la oxidación de lípidos cutáneos o mediante mecanismos biofilácticos.

En una realización, la fuente de oleuropeina es un extracto o una combinación de extractos de plantas, como por ejemplo extractos de hoja o fruto de olivo o extractos de árgano o de fresno. Preferiblemente, la composición comprende un extracto de olivo con un contenido mínimo de 16 % en peso de oleuropeina. Preferentemente, el extracto de olivo aporta un contenido mínimo de 4,5 % en peso de oleuropeina en el peso total de la composición de la invención.

Un extracto de olivo con un contenido mínimo de 16 % en peso de oleuropeina es una fuente muy adecuada de oleuropeina porque los extractos de olivo son fáciles de producir a un coste adecuado y es un árbol muy abundante en la cuenca mediterránea. Además, un contenido de al menos un 16 % en peso de oleuropeina es suficiente para garantizar una adecuada bioactividad al ser combinado con otros extractos.

La oleuropeina presenta una importante actividad antioxidante ejercida mediante diversos mecanismos. Principalmente, la oleuropeina mejora la estabilidad de los radicales libres mediante la formación de enlaces de hidrógeno entre el hidrógeno libre del grupo hidroxilo y sus radicales fenóxilos.

Asimismo, la oleuropeina presenta efectos anti-inflamatorios mediante la actividad de la lipooxigenasa, la producción de leucotrieno B4, la inhibición de la biosíntesis de citoquinas pro-inflamatorias o la modulación de parámetros de la inflamación.

En una realización, la fuente de hidroxitirosol es un extracto o una combinación de extractos de plantas, como por ejemplo extractos de hoja o fruto de olivo o extractos de árgano o de fresno. Preferiblemente, la composición comprende un extracto de olivo con un contenido mínimo de 5 % en peso de hidroxitirosol. Preferentemente, el extracto de olivo aporta un contenido mínimo de hidroxitirosol de 1 ,5% en el peso total de la composición de la invención.

Un extracto de olivo con un contenido mínimo de 5 % en peso de hidroxitirosol es una fuente muy adecuada de hidroxitirosol porque los extractos de olivo son fáciles de producir a un coste adecuado y es un árbol muy abundante en la cuenca mediterránea. Además, un contenido de al menos un 5 % en peso de hidroxitirosol es suficiente para garantizar una adecuada bioactividad al ser combinado con otros extractos.

La gran actividad antioxidante del hidroxitirosol es atribuida al fragmento molecular o- dihidroxifenilo gracias a su capacidad de inhibir los efectos de los radicales libres y a su poder reductos del ion Fe³⁺. Las propiedades antioxidantes de los o-difenoles están asociadas con su capacidad de formar enlaces de hidrógeno intramoleculares entre el grupo hidroxilo y el radical fenoxilo; por lo tanto, el grupo catecol evita la propagación en cadena mediante la donación de un hidrógeno radical a los radicales alquilperóxidos formados en el paso de iniciación de la oxidación de los lípidos.

La inflamación y sus consecuencias juegan un papel crucial en las afecciones de la piel. Se ha demostrado que el hidroxitirosol inhibe la producción de las moléculas proinflamatorias leucotrienos y la actividad del araquidonato de lipooxigenasa. Recientemente se ha publicado que un extracto que contiene 20 % en peso de hidroxitirosol inhibe la hinchazón inflamatoria y la hiperalgesia y suprime la citoquina proinflamatoria en un modelo de inflamación en ratas.

En una realización, la fuente de verbascósido es un extracto o una combinación de extractos de plantas, como por ejemplo extractos de hoja o fruto de olivo, Buddleja globosa, Lippia citriodora, Plántago lanceolata, Cistanche tubulosa, fíehmannia glutinosa, etc. Preferiblemente, la composición comprende un extracto de Lippia Citriodora con un contenido mínimo de 25 % en peso de verbascósido. Preferentemente, el extracto de Lippia Citriodora aporta un contenido mínimo de verbascósido de 6,5 % en el peso total de la composición de la invención.

Un extracto de Lippia citriodora con un contenido mínimo de 25 % en peso de verbascósido es una fuente muy adecuada de verbascósido porque los extractos de esta planta son fáciles de producir a un coste adecuado debido a que es una planta muy abundante en la cuenca mediterránea. Además, un contenido de al menos un 25 % en peso de verbascósido es suficiente para garantizar una adecuada bioactividad al ser combinado con otros extractos.

El verbascósido, también conocido como acetósido, presenta actividad antioxidante, anti inflamatoria, blanqueante, fotoprotectora y actividad quelante. La actividad antioxidante ha sido demostrada en numerosos estudios. La actividad anti-inflamatoria ha sido demostrada en un estudio in vitro sobre cultivos de queratinocitos humanos, en el que el verbascósido fue capaz de reducir, con una respuesta dependiente a la dosis, la liberación de quimioquinas pro-inflamatorias (13). El verbascósido inhibe la actividad de la tirosinasa y la producción de melanina en células de melanoma B16, según un estudio de Young et al. (13, 14).

En una realización de la invención, la composición comprende entre 25% a 40% en peso de extracto de romero que aporta un contenido mínimo de diterpenos de 4,5 % en el peso total de la composición, entre 20% a 40% en peso de extracto de hojas o fruto de olivo que aporta un contenido mínimo de oleuropeina de 4,5 % en el peso total de la composición y un contenido mínimo de hidroxitirosol de 1 ,5% en el peso total de la composición, entre 20% y 35% en peso de extracto de Lippia citriodora que aporta un contenido mínimo de verbascósido de 6,5 % en el peso total de la composición y entre 5% y 25% en peso de extracto de Sophora japónica que aporta un contenido mínimo de quercetina de 3,5% en el peso total de la composición.

Preferentemente, la composición comprende alrededor de un 32 % en peso de extracto de romero que aporta un contenido mínimo de diterpenos de 4,5 % en el peso total de la composición, alrededor de un 30 % en peso de extracto de hojas o fruto de olivo que aporta un contenido mínimo de oleuropeina de 4,5 % en el peso total de la composición y un contenido mínimo de hidroxitirosol de 1 ,5% en el peso total de la composición, alrededor de un 28 % en peso de extracto de Lippia citriodora que aporta un contenido mínimo de verbascósido de 6,5 % en el peso total de la composición y alrededor de un 10 % en peso de extracto de Sophora japónica que aporta un contenido mínimo de quercetina de 3,5 % en el peso total de la composición.

En una realización, la composición comprende un contenido mínimo de diterpenos de 4,5 % (peso/peso), un contenido mínimo de oleuropeina de 4,5 % (peso/peso), un contenido mínimo de hidroxitirosol de 1 ,5% (peso/peso), un contenido mínimo de verbascósido de 6,5 % (peso/peso) y un contenido mínimo de quercetina de 3,5 % (peso/peso), en el peso total de la composición.

Mas preferiblemente la composición comprende alrededor de un 32 % en peso de extracto de romero con un contenido mínimo de 15 % en peso de diterpenos, alrededor de un 30 % en peso de extracto de hojas o fruto de olivo con un contenido mínimo de 16 % en peso de oleuropeina y un contenido mínimo de 5 % en peso de hidroxitirosol, alrededor de un 28 % en peso de extracto de Lippia citriodora con un contenido mínimo de 25 % en peso de verbascósido y alrededor de un 10 % en peso de extracto de Sophora japónica con un contenido mínimo de 40% en quercetina.

Las composiciones descritas en el presente documento muestran un equilibrio adecuado entre los efectos antioxidantes, antiinflamatorios y blanqueantes sobre la piel, tal y como demuestran nuestros estudios de actividad antioxidante en queratinocitos en presencia y en ausencia de radiación UV, de actividad anti-inflamatoria en queratinocitos expuestos a radiación UV y de actividad blanqueante en melanocitos. Es muy conveniente poder tener las funciones antioxidante, anti-inflamatoria y blanqueante equilibradas en una sola composición, ya que es posible paliar los múltiples efectos de la contaminación ambiental del aire sobre la piel mediante la aplicación de un solo producto, que ha sido testado adecuadamente. En cambio, si se intenta tratar los múltiples efectos de la contaminación ambiental del aire sobre la piel mediante la aplicación de diversos productos para cada efecto, incrementa el riesgo de que se usen productos incompatibles entre sí, ya que su uso conjunto no ha sido evaluado previamente, y es posible que el tratamiento usado produzca un efecto peor que el problema inicial. Además, el hecho de usar un solo producto conlleva un menor coste para el cuidado diario de la piel.

La composición de la presente invención puede ser administrada por vía parenteral, transdermal, oral o tópica.

Una realización se refiere al uso como cosmético de la composición de la presente invención.

Por tanto, una realización se refiere al uso como cosmético de la composición de la presente invención para paliar cosméticamente los efectos estéticos de la contaminación ambiental sobre la piel.

Otra realización se refiere a la composición de la presente invención para uso como cosmético con efectos estéticos antioxidante, antiinflamatorio, tomando este efecto no como un tratamiento terapéutico sino meramente estético, antienvejecimiento y blanqueante sobre la piel.

Preferentemente, dicho uso comprende administrar una dosis oral de entre 0,1 g y 1 g (1000 mg) diarios de la composición de la invención, descrita en el presente documento. Más preferentemente la dosis oral es de 250 mg diarios.

Así una realización se refiere al uso de la composición de la invención, descrita en el presente documento, para la elaboración de un producto cosmético antioxidante, antiinflamatorio, tomando este efecto no como un tratamiento terapéutico sino meramente estético, antienvejecimiento y blanqueante de la piel.

Una realización se refiere a la composición de la invención, descrita en el presente documento, para uso como medicamento.

Particularmente, una realización se refiere a la composición de la invención, descrita en el presente documento, para uso en el tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental. Preferentemente, dicho uso comprende administrar una dosis oral de entre 0,1 g y 1 g (1000 mg) diarios de la composición de la invención, descrita en el presente documento. Más preferentemente la dosis oral es de 250 mg diarios. Preferentemente, dichas afecciones se seleccionan del grupo que consiste en inflamación, acné, dermatitis crónica y la psoriasis.

Otra realización se refiere al uso de la composición de la invención, descrita en el presente documento, para la elaboración de un medicamento para uso en el tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental.

Otra realización se refiere a un método de tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental, que comprende administrar a un sujeto una cantidad efectiva de la composición de la invención, descrita en el presente documento.

Se entiende como cantidad efectiva, a efectos de la presente invención, como aquella que proporciona un efecto terapéutico sin proporcionar efectos tóxicos inaceptables en el paciente. La cantidad o dosis efectiva de la composición depende de, por ejemplo, la afección tratada, la edad, peso y condición clínica del paciente tratado, la forma de administración, el historial clínico del paciente, la severidad de la afección tratada y la potencia de la composición administrada. Preferentemente, dicha cantidad o dosis efectiva es una dosis oral de entre 0,1 g y 1 g (1000 mg) diarios de la composición de la invención, descrita en el presente documento.

La composición descrita anteriormente puede ser administrada a una dosis entre 0,1 g y 1 g diarios. Esta dosis es considerada segura según los estudios de toxicidad realizados y presentados en el ejemplo 4.

Preferiblemente, la dosis oral diaria es de 250 mg /día. Esta dosis produce efectos significativos y observables en la paliación de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel en comparación con modelos o personas no tratadas cosmética o farmacéuticamente con dicha composición.

Otro segundo aspecto de la invención aporta una composición para su uso en la prevención del envejecimiento prematuro de la piel asociada a los efectos de la contaminación del aire sobre la piel, dicha composición comprendiendo diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol. Dicho uso, cosmético, proporciona una reducción de los efectos de la contaminación, previniendo, por tanto, el envejecimiento prematuro de la piel.

Las características de la composición, en general, y en particular en lo que se refiere a su composición, la proporción entre sus componentes y la fuente de los mismos, del primer aspecto de la invención son igualmente aplicables a la composición del segundo aspecto de la invención. En una realización más en particular, la administración de las composiciones de la presente invención se selecciona de entre formulaciones que la contienen destinadas para administración por vía oral, tópica, transdérmica o parenteral.

Preferentemente, las composiciones de la presente invención pueden ser administrada por vía oral conteniendo uno o más vehículos o excipientes fisiológicamente compatibles, en forma sólida o líquida. Así otro aspecto de la invención se refiere a una formulación que comprende la composición de la invención, tal como se describe en el presente documento, y uno o más vehículos o excipientes fisiológicamente compatibles.

Una realización se refiere a una formulación farmacéutica que comprende la composición de la invención, tal como se describe en el presente documento, y uno o más vehículos o excipientes farmacéuticamente aceptables.

Otra realización se refiere a una formulación cosmética que comprende la composición de la invención, tal como se describe en el presente documento, y uno o más vehículos o excipientes cosméticamente aceptables.

En una realización particular dicha formulación cosmética es un suplemento dietético. Una realización de la invención se refiere, por tanto, a un suplemento dietético que comprende la composición de la invención, tal como se describe en el presente documento. Otra realización se refiere al uso de dicho suplemento dietético para paliar cosméticamente los efectos estéticos sobre la piel causados por la contaminación ambiental.

En otra realización particular dicha formulación cosmética es un nutricosmético. Una realización de la invención se refiere, por tanto, a un nutricosmético que comprende la composición de la invención, tal como se describe en el presente documento. Otra realización se refiere al uso de dicho nutricosmético para paliar cosméticamente los efectos estéticos sobre la piel causados por la contaminación ambiental.

El término nutricosmético se refiere, a efectos de la presente invención a un alimento, o parte de un alimento, que proporciona efectos cosméticos al ser ingerido.

Así una realización se refiere al uso de la formulación cosmética, descrita en el presente documento, para la elaboración de un producto cosmético antioxidante, antiinflamatorio, antienvejecimiento y blanqueante de la piel.

Otra realización se refiere al uso de la formulación farmacéutica, descrita en el presente documento, para la elaboración de un medicamento para uso en el tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental. Particularmente, una realización se refiere a la formulación farmacéutica, descrita en el presente documento, para uso en el tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental.

Otra realización se refiere a un método de tratamiento o la prevención de afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental, que comprende administrar a un sujeto la formulación cosmética o farmacéutica de la invención, descritas en el presente documento.

Estas formulaciones pueden contener componentes convencionales tales como excipientes, vehículos o agentes de unión, cargas, lubricantes y agentes humectantes fisiológicamente aceptables. Las formulaciones pueden tomar cualquier forma apropiada y pueden ser administradas por vía oral, nasal, tópica o parenteral, tales como cremas, ungüentos, vaporizadores, comprimidos, grageas, cápsulas, pastillas para chupar, disoluciones aceitosas o acuosas, suspensiones, emulsiones o en forma en polvo seco adecuada para la reconstitución con agua u otro medio líquido adecuado antes del uso, para la liberación inmediata o controlada.

Para elaborar dichas formulaciones, se puede utilizar técnicas convencionales para la preparación de composiciones farmacéuticas o cosméticas. Cuando el vehículo sirve como disolvente, puede ser sólido, semi-sólido o líquido y actuar como excipiente o medio para dicho compuesto activo. La composición de interés puede ser adsorbido en un medio granular sólido. Algunos ejemplos de vehículos adecuados son agua, soluciones salinas, alcoholes, polietilenglicoles, aceite de ricino polihidroxietoxilado, aceite de cacahuete, aceite de oliva, lactosa, térra alba, sacarosa, ciclodextrinas, amilosa, estearato de magnesio, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, ácido esteárico, éteres de alquilo de celulosa, ácido silicio, ácidos grasos, aminas de ácidos grasos, monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos, esteres grasos de pentaeritrol, polietileno, hidroximetilcelulosa, celulosa microcristalina y polivinilpirrolidona.

Para preparar formulaciones sólidas como comprimidos, el compuesto de interés se mezcla en una formulación con otros ingredientes convencionales tales como talco, estearato de magnesio, fosfato bicálcico, silicato de aluminio y magnesio, almidón, lactosa, acacia, metilcelulosa, celulosa microcristalina y materiales similares funcionalmente tales como vehículos y diluyentes farmacéuticos.

Las formas orales líquidas para la administración también pueden contener determinados aditivos tales como edulcorantes, aromatizantes, conservantes y agentes emulsionantes. Las formulaciones líquidas no acuosas para la administración oral pueden formularse también, conteniendo por ejemplo aceites comestibles. Tales formulaciones líquidas pueden encapsularse de manera conveniente en, por ejemplo, cápsulas de gelatina en una cantidad de dosificación unitaria.

Las cápsulas pueden ser preparadas mezclando el compuesto de interés con un disolvente inerte farmacéuticamente y rellenando la mezcla en una gelatina dura de tamaño apropiado. Cápsulas blandas se preparan con máquinas de encapsulación de suspensiones del compuesto de interés con un aceite vegetal, una parafina ligera o un aceite inerte aceptables. Pueden ser preparadas también, formas de dosificación líquidas tales como jarabes, elixires y suspensiones. Las formas solubles en agua pueden ser disueltas en un vehículo acuoso junto con azúcar, aromas saborizantes y conservantes para formar un jarabe. Un elixir es preparado usando un vehículo hidroalcohólico (p.ej. etanol) con edulcorantes adecuados tales como azúcar o sacarina, junto con agentes aromáticos saborizantes. Las suspensiones pueden ser preparadas con un vehículo acuoso y la ayuda de un agente de suspensión tal como acacia, tragacanto, metilcelulosa y similares.

En una realización, dicha composición para uso cosmético de acuerdo con la invención es administrada por vía oral en una dosis de entre 0.1 a 1000 miligramos al día. Preferentemente la dosis es de 250 miligramos. En particular dicha composición para uso cosmético de acuerdo con la invención, es administrada en un suplemento dietético o como nutricosmético que comprende una dosis de entre 0.1 a 1000 miligramos para ser administrada por vía oral.

En una realización dicho suplemento dietético comprende excipientes adicionales, preferentemente agua, soluciones salinas, alcoholes, polietilenglicoles, aceite de ricino polihidroxietoxilado, aceite de cacahuete, aceite de oliva, lactosa, térra alba, sacarosa, ciclodextrinas, amilosa, estearato de magnesio, talco, gelatina, agar, pectina, acacia, ácido esteárico, éteres de alquilo de celulosa, ácido silicio, ácidos grasos, aminas de ácidos grasos, monoglicéridos y diglicéridos de ácidos grasos, esteres grasos de pentaeritrol, polietileno, hidroximetilcelulosa, celulosa microcristalina o polivinilpirrolidona,

En otra realización adicional dicho suplemento dietético es una cápsula. Preferentemente una cápsula de gelatina dura.

Las composiciones de la presente invención pueden ser administradas por vía parenteral en combinación con vehículos líquidos inyectables convencionales, tales como agua o alcoholes adecuados. Los adyuvantes farmacéuticos convencionales para inyección, tales como agentes estabilizadores, agentes solubilizantes y tampones pueden incluirse en tales formulaciones inyectables. La composición de la presente invención puede ser administra por vía intramuscular, por vía intraperitoneal o por vía intravenosa.

Igualmente, las composiciones de la presente invención pueden ser administradas por vía tópica, las formulaciones de aplicación tópica conteniendo uno o más vehículos o excipientes fisiológicamente compatibles con la piel, en forma líquida, aerosol, crema, etc.

Para preparar formulaciones de aplicación tópica, la composición de la invención se incluye en un vehículo dermatológicamente aceptable. La cantidad de composición a administrar y la cantidad de composición en la formulación de uso tópico depende del vehículo, del sujeto al que se administra, los efectos deseados y de la estabilidad de la formulación. Así, el experto en la materia sabrá emplear la preparación apropiada conteniendo la cantidad apropiada de la composición de la invención y seleccionará la cantidad de formulación a administra, dependiendo de las condiciones anteriormente indicadas.

Preferentemente, dicha composición para uso cosmético de acuerdo con la invención es administrada por vía tópica en un producto cosmético que comprende 0,05 % a 2 % en peso de la composición de la invención. Preferentemente, de 0,1% a 1% el producto cosmético comprende de 0,1 % a 1 % de la composición de la invención, para ser administrado por vía tópica.

Mecanismos moleculares de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel

La contaminación atmosférica, en combinación con el ozono y los rayos UV, alteran el equilibrio existente entre la producción y la eliminación de especies reactivas del oxígeno (ROS) lo cual lleva consigo la inducción de una respuesta inflamatoria. El estrés crónico inducido por la contaminación atmosférica impacta y altera la integridad de la barrera cutánea hasta tal punto que puede generar o empeorar ciertas patologías (sensibilidad, irritabilidad, deshidratación, trastornos de pigmentación, dermatitis, acné, etc. (15).

El ozono actúa principalmente sobre el estrato córneo por el contrario las partículas (PM) contienen una serie de moléculas químicas tóxicas, como los hidrocarburos aromáticos policíclicos (HAP), que al contacto con la piel, pueden penetrar en la piel y dañar la piel en un nivel más profundo, actuando directamente sobre los queratinocitos y melanocitos por ejemplo mediante a la unión al AhR (receptor de hidrocarburo arilo) cuya activación desencadena la expresión de genes implicados en acelerar el envejecimiento de la piel, la pigmentación y estrés oxidativo que causa la inflamación de la piel (15). De esta manera, un compuesto capaz de inhibir la activación del receptor de hidrocarburos de arilo (Ahr) que está relacionado con la inflamación de la piel (hipersensibilidad al prurito) y con la aparición de manchas y el empeoramiento de las ya existentes es una buena estrategia para conseguir obtener una composición anti contaminación.

En este sentido, uno de los objetivos de composición de la invención es que sea capaz de inhibir la sobreactivación del receptor AhR que tiene lugar como consecuencia de la contaminación del aire.

Como ya se ha mencionado, uno de los mecanismos por el cual la contaminación ambiental del aire puede causar daños en la piel incluye la activación del receptor aril- hidrocarburo (AhR). Los contaminantes del aire ambiental generan radicales libres, respuestas immuno-inflamatorias cutáneas, causan la activación de mecanismos dependientes del receptor AhR y alteran la microflora cutánea.

Diversos estudios científicos han demostrado la implicación de la activación del receptor AhR en varias afecciones de la piel. Un estudio sobre la implicación de la activación del receptor AhR en ratones transgénicos demostró que la activación de la transcripción de AhR provocó lesiones cutáneas inflamatorias similares a la dermatitis atópica. El análisis genético por microarray de la piel del ratón mostró una sobreexpresión de genes asociados con la inflamación. Los resultados de este estudio demuestran que la activación de AhR puede estar implicada en el desarrollo de enfermedades inflamatorias de la piel.

AhR es un factor citosólico de transcripción activado por ligandos que se encuentra en varios tipos de células cutáneas que regulan la inflamación proliferativa celular y la melanogénesis, incluyendo queratinocitos, fibroblastos y melanocitos (16, 17). El receptor AhR no activado se encuentra en un complejo proteínico citosólico y al unirse con un ligando, el complejo se disocia, causando la traslocación del AhR al núcleo donde estimula la expresión de los genes que contienen el elemento de respuesta xenobiótico (XRE). Los genes que contienen el XRE incluyen las enzimas de detoxificación citocromo P450 (CYP) (13). La activación de AhR juega un papel mediador en los efectos bioquímicos y tóxicos de los contaminantes del aire que actúan como ligandos, tales como dioxinas, ozono e hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAH), llegando a influenciar procesos biológicos celulares tales como el crecimiento y la diferenciación y se ha demostrado recientemente que pueden inducir la proliferación de melanocitos y por tanto el oscurecimiento de la piel de ratones (18). El hidrocarburo policíclico aromático 2,3,7,8-tetraclorodibenzo-p-dioxina (TCDD) tiene diversos efectos patológicos en humanos mediante la activación del receptor AhR. El mecanismo primario subyacente a los cambios en la expresión genética inducida por TCDD es la activación del ciclo de transcripción que implica el receptor AhR y el translocador de AhR (Arnt). AhR y Arnt son factores de transcripción implicados en la regulación del desarrollo, la señalización de la hipoxia y los ritmos circadianos, y pertenecen a la familia de proteínas que se encuentra en el citoplasma en un complejo inactivo con proteínas auxiliares.

Una vez unido al TCDD, el AhR se disocia de algunas de las proteínas del complejo inactivo y se traslada al núcleo donde se dimeriza con Arnt. El heterodímero AhR/Arnt activa la transcripción de genes metabolizantes xenobióticos, algunos de los cuales codifican proteínas implicadas en el control del crecimiento, citoquinas, transcripción nuclear y reguladores de la proteólisis de la matriz extracelular (19).

El ciclo del AhR es activado por el TCDD y por el ácido trans-retinoico (all-trans retinóle acid), los cuales incrementan la expresión de MMP-1 en queratinocitos humanos normales, lo que sugiere que la inducción de MMP es un mecanismo común que subyace las patologías inducidas por el TCDD (20).

Se ha demostrado que el AhR es un regulador de la melanogénesis. Diversos estudios han examinado el papel del AhR, y un ejemplo es un estudio en el cual los melanocitos de donantes humanos fueron expuestos al TCDD y posteriormente se midió in-vitro la actividad de la tirosinasa y el contenido en melanina. Tras 5 días de exposición a TCDD, los melanocitos mostraron un nivel elevado de la actividad de la tirosinasa y un incremento de tres veces en la cantidad de melanina intracelular. Un experimento similar llevado a cabo en células de melanoma humanas FM55 demostró que el TCDD incrementa significativamente el contenido de melanina, confirmando que el ciclo melanogénico fue sobreregulado por la activación de AhR (21 ).

AhR también ha sido identificado como un sensor de ozono. El ozono induce la translocación nuclear del AhR e incrementa la expresión de AhR por parte del mRNA. Además, el ozono incrementa significativamente la expresión proteica y mRNA de isoformas de CYP1. Las enzimas de CYP1 metabolizan compuestos que son más tóxicos que los respectivos compuestos originales y activan muchos compuestos xenobióticos procancerígenos (22).

Con el objeto de analizar la implicación del AhR en el envejecimiento de la piel inducido por el humo del tabaco (también considerado agente contaminante), fibroblastos primarios humanos fueron expuestos a un extracto de humo de tabaco soluble en hexano. Este extracto incrementó significantemente la inducción de MMP-1 en un cultivo de fibroblastos humanos, en paralelo a una sobreexpresión del citocromo P1 B1 . Una reducción de la cantidad de AhR suprimió la elevada transcripción del gen dependiente de AhR, CYP1 A1/CYP1 B1 , inducida por el extracto. La inducción de MMP-1 y de CYP1 B1 fue suprimida por los inhibidores del ciclo del AhR 3-metoxi-4-nitroflavona y a- naftoflavona. Estos estudios sugieren que el extracto de humo de tabaco soluble en hexano induce la sobreexpresión de MMP-1 en fibroblastos cutáneos humanos mediante la activación del ciclo del AhR. Por tanto, el ciclo del AhR podría estar implicado de forma patogénica en el envejecimiento de la piel causado por factores externos (23).

Mientras la correlación entre la contaminación del aire y la predominancia y seriedad de la dermatitis atópica es bien conocida, el mecanismo que subyace no lo es tanto. En la actualidad los síntomas de la dermatitis atópica se tratan con compuestos esteroideos. Sin embargo, en muchos casos, el picor persiste. Uno de los causantes sería la activación del receptor AhR en respuesta a los contaminantes del aire, tales como materia particulada derivada del tráfico. El AhR activado induce la expresión del factor neurotrófico artemin en los queratinocitos, lo que induce hiper-enervación de la epidermis, resultando en una hipersensibilidad al picor. El rascado posterior conlleva una alteración de la barrera cutánea y una penetración de antígenos acrecentada, lo que implica la sensibilización y favorece la predisposición a otras enfermedades alérgicas (24).

EJEMPLOS

Los ejemplos descritos a continuación tienen carácter ilustrativo y no pretenden limitar el ámbito de la presente invención.

EJEMPLO 1. Estudios del efecto anti-oxidante, anti-inflamatorio y blanqueante de composiciones de extractos con elevado contenido en flavonoides.

TABLA 1. Componentes de las tres composiciones examinadas en el ejemplo 1.

Se han llevado a cabo ensayos preliminares para determinar la actividad paliativa de diferentes composiciones sobre los efectos de la contaminación del aire sobre la piel, teniendo en cuenta que los procesos de oxidación e inflamación son muy importantes en la generación del daño que la polución causa en la piel.

Además, se han hecho estudios de la capacidad de las distintas composiciones para inhibir la producción de melanina, dado que la contaminación del aire aumenta la pigmentación y la aparición de manchas en la piel.

La Tabla 1 muestra los componentes y su concentración en cada composición examinada en los estudios preliminares. En la Tabla 1 se recoge los componentes de las tres composiciones testadas y se indican los mg de flavonoides por 100 mg de producto o la cantidad final que cada uno de los extractos aporta a la composición.

El aporte total de flavonoides de cada una de las composiciones es el mismo, en torno a 31 mg por 100 mg de composición o producto final. Todas las composiciones contienen la misma cantidad de extracto de Sophora japónica y de romero (siempre aportando el mismo contenido de flavonoides).

En el estudio, cultivos in vitro de queratinocitos humanos fueron expuestos a cada una de las tres composiciones, usando dos concentraciones distintas de cada una de ellas y se midió la oxidación basal. Los datos son expresados como medias aritméticas ± la desviación estándar (DE). Los niveles de significatividad son: ^* (p< 0,05), ^** (p<0,01 ), (p<0,001 ) and ^**** (p<0,0001 ) en comparación con el cultivo control que no fue tratado con ninguna composición.

Como se puede observar en la Figura 1 tanto la composición 1 B como 2B redujeron de manera significativa el porcentaje de oxidación de los queratinocitos (HaCaT) en comparación con las células sin tratar (barra negra). Por el contrario, la formula 3B no fue capaz de reducir la oxidación celular basal a ninguna de las dos concentraciones estudiadas.

Cuando comparamos las composiciones entre sí no se observan diferencias significativas entre el efecto antioxidante de las fórmulas 1 B y 2B pero sí con la 3B, a ambas concentraciones.

En otro test, cuyos resultados se muestran en las Figuras 2A, 2B y 2C, se midió la actividad antioxidante de las tres composiciones de la Tabla 1 sobre queratinocitos humanos cultivados in vitro y expuestos a radiación ultravioleta tipo B (UVB), con intensidades de 800 y 1200 J/m².

Los datos son expresados como medias aritméticas ± la desviación estándar. Los niveles de significatividad son: ^* (p< 0,05), ^** (p<0,01 ), ^*** (p<0,001 ) and ^**** (p<0,0001 ) en comparación con el cultivo control que recibió la misma intensidad de radiación y que no fue tratado con ninguna composición. La Tabla 2, a continuación, muestra el porcentaje de inhibición de la oxidación en comparación con su respectivo control.

Tabla 2. Porcentaje de inhibición de la oxidación en comparación con su respectivo control.

Todas las composiciones testadas inhibieron de manera significativa la oxidación provocada por la radiación UV tipo B. Sin embargo, fue la composición 1 B a una concentración de 200 pg/mL la que inhibió, casi por completo, la oxidación provocada por la radiación UV, en un porcentaje significativamente mayor que las composiciones 2B y 3B.

En la Figura 3 se muestran los resultados del estudio de la actividad anti-inflamatoria de las tres composiciones de la Tabla 1. En este test se midió la cantidad de IL-8, es decir interleucina 8, producida por queratinocitos humanos expuestos a radiación UVB de intensidad 300 J/m² y tratados con las composiciones de la Tabla 1 con una concentración de 10 pg/mL.

Los datos son expresados como medias aritméticas ± la desviación estándar. Los niveles de significatividad estadística son: ^* (p<0,05), ^** (p<0,01 ), ^*** (p<0,001 ) and ^**** (p<0,0001 ) en comparación con el cultivo control que recibió la misma intensidad de radiación y que no fue tratado con ninguna composición.

La interleucina 8 es una citoquina que producen los queratinocitos y otras células y que está asociada a los procesos inflamatorios.

En la Figura 3 se observa que tanto la composición 1 B como 2B redujeron de manera significativa el porcentaje de inflamación (expresión IL-8 alfa) de los queratinocitos (FlaCaT) en comparación con las células sin tratar (barra negra) tanto cuando estas fueron incubadas durante y post irradiación como cuando fueron incubadas sólo post irradiación.

Por el contrario, la composición 3B sólo fue capaz de inhibir significativamente la producción de la citoquina IL-8 alfa cuando los queratinocitos fueron incubados con la composición después de la radiación.

En las Figuras 4A, 4B y 4C se muestran los resultados del estudio de la actividad blanqueante de las composiciones de la Tabla 1. Los gráficos representan el porcentaje de melanina producido por melanocitos tratados con las composiciones de la Tabla 1 en comparación con los melanocitos sin tratar, en las mismas condiciones de cultivo.

Los datos son expresados como medias aritméticas ± la desviación estándar. Los niveles de significatividad son: ^* (p<0,05), ^** (p<0,01 ), ^*** (p<0,001 ) and ^**** (p<0,0001 ) en comparación con el cultivo control de melanocitos que no fue tratado con ninguna composición.

Tanto la composición 2B como la 3B a las concentraciones testadas no fueron capaces de inhibir la producción de melanina de forma estadísticamente significativa, a las concentraciones testadas. Sólo la composición 1 B presentó dicha capacidad y por tanto cumple un requisito importante a la hora de obtener una composición para su uso en el tratamiento de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel, ya que uno de los efectos descritos es el aumento de la pigmentación en personas expuestas a una contaminación crónica del aire.

Determinación del contenido en flavonoides de los extractos

Análisis con HPLC de los compuestos fenólicos de los extractos de Lippia citriodora y olivo

- Preparación estándar de la curva de calibrado

Las curvas de calibrado se preparan con distintas concentraciones de estándares de oleuropeina, hidroxitirosol y verbascósido. La pureza asignada a cada estándar es la que aparece en el certificado de análisis del estándar.

- Preparación de las muestras secas

Las muestras se disuelven en dimetilsulfóxido (DMSO) en una concentración de 5 mg / mi. La disolución resultante se filtra con una membrana de nylon de 0,45 pm.

- Método de HPLC

Columna: LiChrospher 100-C18 (250x4.0 mm i.d.) con un tamaño de partícula medio de 5 pm. Flujo de fase móvil: 1 ml/min. Temperatura: 30 °C. Volumen de inyección: 20 mI.

- Fase móvil. Disolvente A: ácido acético 2.5 % en peso.

Disolvente B: Acetonitrilo

Gradiente:

El cambio en absorbancia se monitoriza a 280 nm y a 330 nm.

La oleuropeina, el hidroxitirosol y el verbascósido se identifican por comparación de los tiempos de retención con el estándar correspondiente. La concentración se calcula por interpolación en la curva de calibrado.

Análisis con HPLC de los compuestos fenólicos del extracto de romero. Diterpenos Preparación del estándar del ácido carnósico CA

Se disuelve el estándar en DMSO en una proporción de 0.2 mg por mi. La disolución resultante se filtra con una membrana de nylon de 0,45 pm.

Preparación de las muestras secas

Las muestras se disuelven en dimetilsulfóxido (DMSO) en una concentración de 1 mg / mi. La disolución resultante se filtra con una membrana de nylon de 0,45 pm.

Método de HPLC

Columna: LiChrospher 100-C18 (250x4.0 mm i.d.) con un tamaño de partícula medio de 5 pm. Flujo de fase móvil: 1 ml/min. Temperatura: 30 °C. Volumen de inyección: 20 pl.

Fase móvil. 500 mi de agua, 935 mi de acetonitrilo, 2,5 mi ácido fosfórico, 0,16 g de sal de disodio de EDTA dihidratada.

El cambio en absorbancia se monitoriza a 230 nm con un detector UV-Vis DAD.

Cálculos. El ácido carnósico (CA) y el carnosol (COL) fueron identificados por comparación de sus tiempos de retención con los estándares correspondientes.

% ácido carnósico: (ArCAPb/ArCAStd) x (Wt Std/Wt Pb) x pureza del estándar de CA Donde:

ArCAPb: área del pico de CA en la muestra.

ArCAStd: área del pico de CA del estándar.

Wt Pb: peso de la muestra en mg.

Wt Std: peso de estándar de CA en mg.

% carnosol = (ArCOLPb/ArCAStd) x (Wt Std/Wt Pb) x pureza del estándar de CA x 0.90 Donde:

ArCOLPb: área del pico de COL en la muestra.

ArCAStd: área del pico de CA del estándar.

Wt Pb: peso de la muestra en mg.

Wt Std: peso de estándar de CA en mg.

Análisis con HPLC de los compuestos fenólicos del extracto de Sophora japónica. Quercetina.

Preparación del estándar de la quercetina

Se disuelve el estándar en DMSO en una proporción de 0.2 mg por mi. La disolución resultante se filtra con una membrana de nylon de 0,45 pm. Preparación de las muestras secas

Las muestras se disuelven en dimetilsulfóxido (DMSO) en una concentración de 1 mg / mi. La disolución resultante se filtra con una membrana de nylon de 0,45 pm. Método de HPLC

Columna: LiChrospher 100-RP18 (250x4.0 mm i.d.) con un tamaño de partícula medio de 5 pm. Flujo de fase móvil: 1 .3 ml/min. Temperatura: 50 °C. Volumen de inyección: 20 pl.

Fase móvil. Metanohacetonitrilo: ácido acético: agua en proporciones 10:10:5:75. Método ¡socrático.

El cambio en absorbancia se monitoriza a 259 nm con un detector UV-Vis DAD.

La quercetina se identifica por comparación de los tiempos de retención con el estándar correspondiente. La concentración se calcula por interpolación en la curva de calibrado.

EJEMPLO 2. Estudio in vitro de la actividad antioxidante y protectora celular de la composición 1 B de la invención contra los efectos de la radiación ultravioleta y partículas pulverulentas urbanas sobre queratinocitos humanos

Los organismos vivos están expuestos a los contaminantes del aire y éstos tienen unos importantes efectos sobre la piel humana. Los contaminantes del aire se presentan como sólidos, líquidos, gases y materia particulada (PM). Éstos son absorbidos directamente por la piel hasta alcanzar los tejidos subcutáneos o a través de los folículos capilares o de las células sudoríferas/sebáceas. La rápida urbanización y el gran incremento del consumo energético en todo el mundo exponen a los humanos a cantidades crecientes de contaminación ambiental del aire. La piel, que constituye el mayor y más externo órgano del cuerpo, actúa como una barrera física, química e inmunológica contra estos factores ambientales.

Los contaminantes del aire ejercen un efecto nocivo sobre la piel mediante un aumento del estrés oxidativo que se actúa contra a las defensas antioxidantes de la piel. Se generan radicales libres y especies reactivas oxigenadas que interactúan con las membranas plasmáticas ricas en lípidos para iniciar la cascada de reacciones de peroxidación de lípidos. Las especies reactivas oxigenadas también estimulan la liberación de mediadores pro-inflamatorios, lo que resulta en la acumulación de neutrófilos y otras células fagocíticas que a su vez generan más radicales libres, lo que resulta en un círculo vicioso. Además, los contaminantes del aire inducen graves alteraciones de la función normal de los lípidos, ácido desoxirribonucleico y/o proteínas de la piel humana mediante daño oxidativo, provocando envejecimiento extrínseco de la piel, condiciones inflamatorias o alérgicas de la piel, tales como dermatitis de contacto, dermatitis atópica, psoriasis, acné y cáncer de piel. De la misma forma, la piel humana está expuesta repetidamente a radiación ultravioleta que influye en la función y supervivencia de muchos tipos de células y se considera el principal factor causante de la inducción del envejecimiento de la piel. La exposición aguda de la piel humana a la radiación UV causa quemaduras de sol, pigmentación alterada, inflamación, supresión de la inmunidad y daño del tejido conectivo cutáneo.

Estudios recientes han demostrado que la luz solar y la contaminación del aire pueden producir sinérgicamente estrés en la piel, acelerar el estrés oxidativo (mayor producción de especies reactivas oxigenadas ROS, peroxidación y peroxidación de escualeno), incrementar el agotamiento de vitamina E del estrato córneo de la piel, aumentar la respuesta inflamatoria e incluso aumentar el riesgo de cáncer de piel. Estudios recientes demuestran que la radiación ultravioleta de tipo A (UVA) combinada con contaminantes del aire (incluyendo el humo del tabaco) incrementa significativamente el riesgo de cáncer de piel.

También se destaca que los contaminantes del aire agravan el daño provocado por la luz y que existe una necesidad de estrategias específicas para el cuidado de la piel en zonas con mucha contaminación ambiental del aire.

En este ejemplo, cultivos de queratinocitos humanos fueron expuestos a material pulverulento urbano y radiación UVA para investigar la respuesta celular al estrés oxidativo inducido y comprobar el potencial de la composición 1 B de la invención (denominada ZeroPollution) para contrarrestar el daño inducido.

Las células vivas fueron contadas en una cámara Bürker bajo microscopio. Las células HaCaT fueron cultivadas durante la noche en una placa de 96 pocilios con medio de cultivo. Tras 24 horas, se retiró el medio de cultivo y fue sustituido por un nuevo medio de cultivo suplementado con 400 mg/ml de materia pulverulenta urbana (“Urban Dust” UD) y composición 1 B en cantidades de 0,005 % y 0,001 % en peso.

Se evaluó la acumulación de especies reactivas oxigenadas (%ROS) en un replicado biológico, con ocho replicados experimentales (tanto para la composición de la invención como en los controles), tras ser expuestos a materia pulverulenta urbana. Tras 24 horas de incubación, el medio de cultivo de todos los pocilios fue sustituido por una mezcla PBS y un master de detección de ROS. Posteriormente, las muestras fueron irradiadas con UVA durante 25 minutos a una intensidad de 6.9 J/cm². Los controles no irradiados fueron mantenidos en la oscuridad durante este tiempo. Tras dos horas de la adición de la mezcla de detección de ROS, se midió la concentración de ROS de las muestras mediante espectrometría, incluyendo dos pocilios control sin células, para obtener un control blanco. Las ROS intracelulares acumuladas reaccionan con un sensor fluorogénico ubicado en el citoplasma, resultando en un producto fluorométrico en cantidades proporcionales a la cantidad de ROS presente. La cuantificación fluorométrica fue medida a una excitación de 490 nm de longitud de onda y a una emisión de 525 nm de longitud de onda.

En paralelo, se realizó un análisis de viabilidad celular mediante la reducción metabólica del bromuro de 3-(4,5- dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazol ( MTT) para evaluar la mortalidad celular inducida por el material pulverulento urbano y la radiación UVA, con objeto de normalizar los niveles de ROS medidos a la cantidad de células vivas en cada una de las condiciones específicas. En los ensayos MTT se siguió el protocolo no. 17 del Centro Europeo para la Validación de Métodos Alternativos (ECVAM).

En los ensayos de viabilidad celular, los resultados muestran que la utilización de la composición 1 B durante 24 horas presenta citotoxicidad significativa en células HaCaT a concentraciones igual o superiores a 0,01 en peso, mientras que no se observaron efectos significativos a concentraciones igual o menores de 0,0025 % en peso, en comparación con la muestra control, De acuerdo con los resultados, las concentraciones 0,001 % en peso y 0,005 % en peso fueron seleccionadas para estudios posteriores.

Los resultados de este ensayo indican que el material pulverulento urbano junto con la radiación UVA incrementaron el estrés oxidativo en 13.2 ± 0.8 veces, en comparación con la muestra control sin tratar. Las muestras que fueron tratadas con la composición 1 B (ZeroPollution) a concentraciones 0,001 % y 0,005 % en peso redujeron significativamente los niveles de ROS en 25,4±7,2 % y 29,3±6,2, respectivamente. Al sustraer los valores de base de estrés oxidativo a todas las muestras, los resultados indican que la utilización de la composición 1 B a concentraciones de 0,001 % y 0,005% en peso protege las células incubadas de los efectos oxidativos de la materia pulverulenta urbana y de la radiación UVA, reduciendo el estrés oxidativo en 27,3 ± 7,8 % y 31 ,5 ± 6,7%, respectivamente, en comparación con la muestra control expuesta a dichos factores ambientales. Este hecho se ve reflejado en la Figura 5.

El gráfico de barras de la Figura 5 representa la acumulación de ROS en las muestras de queratinocitos humanos (FlaCat) tratados con la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) a concentraciones de 0,001 % y 0,005 % en peso y sometidos durante 24 horas a exposición de material pulverulento urbano (Urban Dust UD) a una concentración de 400 pg/ml y posteriormente irradiados con UVA durante 25 minutos. Los datos han sido normalizados con respecto al control expuesto a la misma cantidad de UD y radiación UVA.

^* Representa la significatividad estadística con un valor de p < 0,05. ^** Representa la significatividad estadística con un valor de p < 0,01 . ^*** Representa la significatividad estadística con un valor de p < 0,001. ^**** Representa la significatividad estadística con un valor de p < 0,0001.

EJEMPLO 3. Evaluación ex vivo de la actividad anti-contaminación del aire de la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) en explantes vivos de piel humana.

El objetivo de este estudio es la evaluación de la actividad anti-contaminación del aire de la composición 1 B de la Tabla 1 sobre explantes vivos de piel humana tras haber sido tratados con una mezcla de contaminantes. Tras la aplicación ex vivo de los explantes con la composición 1 B (ZeroPollution) y una disolución de metales pesados, hidrocarburos y partículas de diésel, la actividad anti-contaminación del aire fue evaluada mediante: ensayo bioquímico de malonaldehido, inmunotinción del receptor de hidrocarburos de arilo (AhR), inmunotinción de metalotioneina MT-1 H, ensayo cuantitativo bioquímico de interleucina-1 alfa (IL-1 a)

Se obtuvieron 19 explantes de piel humana de un diámetro medio de 12 mm mediante abdominoplastia en una mujer caucasiana de 56 años. Los explantes fueron mantenidos vivos en un medio de cultivo (medio para explantes BIO-EC) en condiciones adecuadas de atmósfera, temperatura y humedad.

El día 0, los explantes fueron colocados en 2 mL de medio de cultivo con y sin el producto (composición 1 B) a una concentración de 200 pg/mL. Las muestras de control no recibieron ningún tratamiento. El medio de cultivo (con y sin el producto a testar) fue renovado con medio fresco de cultivo el primer día con 1 mL por pocilio y el segundo día con 2 mL por pocilio tras la exposición a los contaminantes.

El segundo día, los explantes fueron colocados en una placa de cultivo especial para explantes cutáneos y colocados en el sistema PolluBox®. Se vaporizaron 3 mL de disolución de contaminantes (mezcla de metales pesados, hidrocarburos y partículas diésel) durante una hora y media. PolluBox® permite vaporizar contaminantes en forma de nube para contactar solamente la superficie de la piel y así replicar las condiciones fisiológicas tan fielmente como sea posible. Durante la exposición, las muestras de control (no expuestas a contaminación) fueron colocadas en una placa de cultivo de 12 pocilios con 900 pl de una disolución de HBBS por pocilio. Al final de la exposición, todos los explantes fueron colocados de nuevo en el incubador en condiciones de cultivo estándar, en 2 ml_ de BEM fresco por pocilio.

En el día 0 (DO), los tres explantes del lote T0 fueron recogidos y cortados en dos partes. Una parte fue colocada en formalina tamponada y la otra parte fue congelada a -80 °C.

El día 3, tres explantes de cada lote fueron recogidos y tratados de la misma forma que los explantes del día 0, y 2 ml_ de medio de cultivo de cada lote fueron recogidos y almacenados a -80 °C para los ensayos de MDA y IL1 a.

Procesado histológico: tras la fijación durante 24 horas en formalina tamponada, las muestras fueron deshidratadas e impregnadas con parafina con el aparato procesador de tejidos Leica TP1020. Las muestras fueron fijadas con la estación de inclusión en parafina Leica EG 1 160. Se efectuaron disecciones de 5 pm de espesor con un micrótomo de tipo Minot Leica RM 2125, y las disecciones se montaron en placas histológicas de vidrio Superfrost®.

Las observaciones al microscopio se realizaron con un microscopio Leica DMLB o un Olympus BX43. Las imágenes fueron digitalizadas con una cámara numérica Olympus DP72 con el software de almacenamiento CelID y los análisis de las imágenes se hicieron en de 9 a 12 imágenes por cada lote.

Ensayo bioquímico de MDA

El día 3, se midió el MDA contenido en el medio de cultivo. Se analizaron 4 explantes por lote.

El ensayo de MDA se realizó con un método mejorado del ensayo TBARs. El MDA fue detectado en medio HBSS (Solución Salina de Hank^'s) mediante adición de una disolución de TBARs (ácido tiobarbitúrico, ácido hidroclórico y ácido tricloroacético) e incubado en un baño de agua a 80 °C durante 15 minutos. El MDA fue extraído mediante extracción líquido/líquido con butanol. El MDA en butanol fue medido por espectrofluorometría a una longitud de onda de excitación de 515 nm y de emisión de 550 nm, utilizando un lector de micro-placas Tecan Infinite M200 Pro. La concentración de MDA es expresada en nmoles de MDA/ mi de medio de cultivo.

Inmunotinción de AhR

La inmunotinción de AhR fue realizada sobre disecciones parafinadas con un anticuerpo monoclonal anti-AhR (Thermo Scientific, ref. MA1 -514, clon RPT1 ), diluido 1 :50 en PBS- BSA 0,3%-Tween 20 0,05% durante 1 hora a temperatura ambiente con el Sistema Vectastain RTU Universal VECTOR estreptavidina/biotina y revelado con VIP (laboratorios Vector, ref. SK4600), que es un sustrato violeta de peroxidasa.

Inmunotinción de MT-1 H

La inmunotinción de MT-1 H se realizó sobre disecciones parafinadas con un anticuerpo monoclonal anti-MT1 H (Dako, ref. M0639, clon E9), diluido 1 :200 en PBS-BSA 0,3%- Tween 20 0,05% durante 1 hora a temperatura ambiente con el Sistema Vectastain RTU Universal VECTOR estreptavidina/biotina y revelado con VIP (laboratorios Vector, ref. SK4600), que es un sustrato violeta de peroxidasa.

Ensayo bioquímico de IL1 - a

El ensayo bioquímico de IL1 - a se llevó a cabo con el kit ELISA de IL1 -a humano (Cayman). En concordancia con las indicaciones del suministrador del kit, el medio de cultivo y el standard de IL1 -a fueron incubados durante la noche a 4 ¾ con un anticuerpo conjugado de acetilcolinesterasa:Fab' (AChE/Fab'), el cual se une selectivamente a IL-1 a en pocilios que contienen anticuerpo IL1 - a inmovilizado. Tras el lavado de los pocilios, la reacción fue revelada con una disolución que contenía el sustrato AChE durante 40 minutos. Se midió la absorbancia 412 nm con el lector de micro-placas M200Pro Tecan y el software Magellan7.

Resultados

MDA

El malondialdehido (MDA) es un producto que se forma en la peroxidación de los lípidos de las membranas celulares. Los radicales libres inducidos por el estrés oxidativo (UVA, contaminantes, metales pesados, pesticidas...) degradan los lípidos poliinsaturados y generan hidroperóxidos, lo cual resulta en la formación de radicales intermedios y aldehidos, particularmente MDA.

El malondialdehido es uno de varios productos finales de bajo peso molecular formados por la descomposición de ciertos productos primarios y secundarios de la peroxidación de los lípidos (25).

Como se puede observar en la Figura 6, en el día 3, la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) reduce significativamente en un 103 %^* (p<0.05) el aumento de MDA producido por la mezcla de contaminantes. Esto significa que la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) inhibe totalmente el estrés oxidativo producido por los contaminantes.

IL1-alpha

IL1 -alpha participa en la respuesta inmunológica y en los procesos inflamatorios. La concentración de interleucinas liberadas en el medio de cultivo se usa para medir la respuesta inflamatoria inducida por la exposición a los contaminantes, para poder evaluar así la actividad protectora de la composición 1 B de la invención (ZeroPollution).

Como se observa en la Figura 7, la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) reduce significativamente en un 82 % ^* (p<0.05) la cantidad de IL1 -alpha liberada tras la exposición a la mezcla de contaminantes.

Expresión de AhR

El receptor aril-hidrocarburo (AhR) es un factor transcripcional implicado en la respuesta molecular consiguiente a la exposición a diversos compuestos, incluyendo hidrocarburos policíclicos aromáticos (PAHs), ozono y polifenoles de las plantas (26, 22). En circunstancias normales, AhR está unido en el citoplasma a un complejo proteico compuesto por HSP90, c-scr y otras proteínas acompañantes. En presencia de los contaminantes mencionados anteriormente, AhR se disocia del complejo proteico, es translocado al núcleo donde se dimeriza con ARNT sobre secuencias promotoras que están activadas específicamente en respuesta a xenobióticos. Los genes objetivo de AhR son citocromo P450 (CYP) 1 ^a1 , CYP1A2 y CYP1 B1. Paralelamente, los contaminantes del aire, incluyendo los hidrocarburos policíclicos aromáticos, son capaces de estimular un aumento de la actividad ligante al DNA de NF-kB, que a su vez es capaz de estimular la expresión del gen que codifica AhR (27, 28).

El AhR es expresado por varios tipos de células, incluyendo los queratinocitos, los melanocitos, las células Langehans y las células T (29).

Uno de los mecanismos por el cual la contaminación del aire produce daños en la piel es mediante la activación del receptor AhR, como se ha descrito anteriormente.

Como se observa en la Figura 8, el día 3 la exposición a los contaminantes induce un aumento significativo del 60 % ^**(p<0,01 ) de la expresión de AhR. La aplicación de la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) produce un descenso significativo del 87% ^**(p<0,01 ) en la expresión del AhR, comparado con los explantes expuestos solamente a los contaminantes.

Expresión de MT-1 H La proteína metalotioneina (MT-1 H) se usa como marcador de la exposición a metales pesados y estrés oxidativo.

Las metalotioneinas (MTs) son un grupo de proteínas ampliamente distribuidas en los tejidos que regulan el metabolismo de los metales, la captura de los radicales libres y también participan en reacciones inmunológicas. La metalotioneina 1 (MT-1 H) es una proteína única estable al calor de bajo peso molecular (6 kDa) sin aminoácidos aromáticos. Debido a su gran afinidad a unirse a y ser inducida por metales esenciales como el zinc y el cobre y otros metales nocivos como el cadmio y el mercurio, se cree que juega un papel importante en la función homeostática de metales esenciales y en la detoxificación de metales tóxicos.

Como se observa en la Figura 9, el marcador MT-H1 no aumentó a pesar de la presencia de contaminantes, lo que sugiere que la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) muestra un efecto protector sobre la piel.

El día 3 de exposición, los contaminantes provocan un aumento del 63% ^**(p<0,01 ) en la expresión de MT-H1 . La aplicación de la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) produce una reducción significativa de 40 % ^**(p<0,01 ) en la expresión de MT-H1 , comparada con los explantes expuestos únicamente a los contaminantes.

EJEMPLO 4. Determinación de la toxicidad oral aguda de la composición 1 B de la invención (ZeroPollution).

El objetivo de este estudio es evaluar la toxicidad oral aguda de la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) mediante el método “Acute Toxic Class Method” (limit test, OECD guideline no. 423) aplicado a ratas hembra del tipo Sprague-Dawley. El nivel de dosis inicial fue de 2000 mg/kg de peso corporal, ya que se consideró probable que no produciría muertes. Este método permite clasificar la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) según el Sistema Global Armonizado (GHS) para la determinación de la toxicidad de productos químicos.

Resumen del estudio. El“limit test” está basado en un procedimiento realizado paso a paso con una dosis inicial de 2000 g/kg de peso corporal, llevado a cabo con 6 animales en dos pasos (tres animales por paso). Las dosis siguientes hubieran sido 300, 50 y 5 mg/kg de peso corporal. Tras un periodo de observación de 14 días, la mortalidad debida a la composición 1 B administrada en el primer paso se usa para decidir si se continua con la siguiente dosis en un paso siguiente y para clasificar la sustancia de acuerdo con una clasificación internacional. La administración de la siguiente dosis no se realiza hasta que se ha determinado la tasa de supervivencia de los animales administrados con la dosis previa.

Como ninguno de los animales murió durante el periodo de observación, se puede concluir que la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) puede ser clasificada en la Categoría 5 o “Sin clasificar” del Sistema de Clasificación Global Armonizado para sustancias químicas y mezclas.

EJEMPLO 5. Evaluación clínica instrumental de la eficacia de un suplemento dietético que comprende la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) para uso en la prevención y/o tratamiento de los efectos causados por la contaminación del aire en la piel.

Se estudió, en un ensayo monocéntrico, aleatorio, doble ciego, frente a un placebo, el efecto de la composición de la invención como protectora de contaminantes ambientales después de su uso durante 12 semanas en 100 mujeres.

A todos los participantes se les proporciona una crema para uso diario. Las cremas (placebo y composición 1 B de la invención) se suministraron con un empaquetado anónimo. Se recogieron datos a las 2, 4, 8 y 12 semanas del ensayo. Se estudiaron (a) la capacidad antioxidante total en saliva y (b) el daño oxidativo en la piel.

Además, se estudiaron varios parámetros relacionados con el envejecimiento de la piel: (a) hidratación de la piel, (b) luminosidad de la piel, (c) elasticidad de la piel, (d) pérdida de agua trans epidérmica, (f) pigmentación de la piel, (g) contenido en sebo de la piel y (h) perfilometría de la piel (rugosidad).

Se pidió a los participantes que respectaran los siguientes requisitos:

no utilizar ningún cosmético al menos durante dos días antes del comienzo del estudio;

no tomar el sol (de forma natural o con fuentes artificiales de UV) durante todo el periodo del estudio;

solamente utilizar el producto suministrado y no utilizar ningún otro cosmético.

La condición para abandonar el estudio fue la presencia de reacciones adversas o reacciones de intolerancia en un porcentaje elevado de sujetos. No se reemplazaron posibles abandonos.

Los criterios de inclusión fueron: mujeres sanas, de entre 35 a 65 años, 50% asiáticas y 50% caucásicas, 50% de voluntarias con piel sensible, trabajo en el exterior al menos 2 horas al día, que hayan estado durante un período de tiempo adecuado sin participar en un estudio similar, que aceptaran no usar productos que pudieran interferir con el producto del estudio, que aceptaran no tomar el sol (o usar luces solares) durante el estudio si no estaban protegidas de manera adecuada, que no cambiaran de método anticonceptivo durante el estudio, que estuvieran dispuestas a cumplir las reglas del estudio y que estuvieran dispuestas a utilizar el producto y jabón neutro suministrados..

Se excluyeron los sujetos que no cumplían los criterios de inclusión, o que tuvieran un historial de piel atópica o hipersensible, alergia a cosméticos, jabones o a medicaciones para la piel o de protección solar, así como sujetos que se hubieran sometido a tratamiento láser o a peeling químico en los últimos 2 años antes del estudio, sujetos que hubieran utilizado productos cosméticos o farmacéuticos para la cara en el día de comienzo del estudio, sujetos con desórdenes alimentarios, alergias o intolerancias alimentarias, sujetos con un sistema inmune alterado debido a enfermedades inmunodepresoras como el sida, VIH o que usen medicamentos inmunodepresores, que se encontraran en tratamiento farmacológico que se sepa que interfiere con el producto o que tiene un efecto en el metabolismo, que sufran varias enfermedades severas simultaneas, drogadicción, alcoholismo, mujeres que estén embarazadas o amamantando, sujetos protegidos por la ley (bajo custodia, hospitalizados en una institución privada o pública, por una razón diferente a la investigación o encarcelados), que no sean capaces de comunicar o cooperar con los investigadores por problemas de idioma, desarrollo intelectual o desordenes en la función cerebral, o por otros motivos que identifique el investigador.

Se definieron como eventos adversos aquellas ocurrencias medicas con síntomas desfavorables o enfermedades asociadas temporalmente con el uso del producto, sean o no causadas por el uso de dicho producto. Los eventos adversos fueron monitorizados y hasta su resolución. Se asignó un mismo investigador dermatológico a cada sujeto durante todo el estudio. Se estudió la tolerabilidad del producto de manera detallada, así como cualquier molestia y, se informaron todas las posibles reacciones de intolerancia, así como cualquier efecto no esperado. En caso de que un efecto secundario fuera clasificado como severo, se procedió a la exclusión del sujeto y dicho efecto secundario fue monitorizado hasta su resolución.

Cada sujeto del estudio se identificó con un código personal que no puede ser asociado con ningún otro sujeto durante el estudio.

De acuerdo con la declaración de Helsinki (1964), los sujetos tienen derecho a salir del estudio en cualquier momento y por cualquier motivo, que será evaluado y clasificado. El investigador también puede excluir en cualquier momento a un sujeto por motivos justificados. Sin embargo, para evitar problemas de interpretación de los resultados en caso de una salida de sujetos en porcentaje elevado, se intentará evitar la salida de los sujetos en la mayor medida posible. No se reemplazaron sujetos durante el estudio.

Todos los sujetos con eventos adversos ya fueran relacionados o no con el estudio, fueron monitorizados para determinar su evolución, hasta que el evento se haya estabilizado o resuelto, incluso si el periodo de observación ya hubiera acabado.

El producto se administró en forma de cápsula de gelatina dura (N° 0 azul) una vez al día 30 minutos antes del desayuno.

Se utilizó un modelo estadístico apropiado basado en la distribución de los datos, incluyendo comparaciones frente al momento inicial. Valores p<0,05 se consideran significativos estadísticamente. Los sujetos responderán un cuestionario a las semanas 4 y 12 del estudio y un informe diario (días 0 a 27).

La capsula con el producto activo comprendía con 250 mg de la composición de la invención (1 B del ejemplo 1 ) comprendía una composición con 250 mg de la composición 1 B de la invención y 120 mg de celulosa microcristalina.

La capsula de placebo comprendía 250 mg de maltodextrina y 120 mg de celulosa microcristalina.

Los productos fueron conservados a temperatura ambiente (menor de 30°C), protegidos de luz directa, del calor y de agua.

Un bioestadístico generó y guardó, en un lugar seguro, una lista aleatorizada limitada usando el software PASS 2008 (PASS, LLC. Kaysville, UT, USA) en un servidor Windows Server 2008 R2 Standard SP1 64 bit Edition (Microsoft, USA). La secuencia de aleatorización del producto (o placebo) se estratificó usando un % máximo de desviación de 10% usando un ratio de distribución de 1 :2. La distribución se ocultó en sobres opacos y cerrados, indicando la distribución del tratamiento, en base al número asignado a cada sujeto al comenzar el estudio. Un técnico independiente proporcionó el activo o el placebo de acuerdo con el numero asignado a cada sujeto.

Para evaluar la eficacia del producto, se proporcionó un cuestionario de evaluación subjetiva a cada usuario a las 4 y 12 semanas del inicio del estudio, y además se efectuaron las siguientes medidas:

Hidratación de la piel: La contaminación altera la función de barrera de la piel, causando que la piel se vuelva seca y sensible. Por tanto, se evaluó tanto la hidratación de la piel, como la pérdida de agua transepidérmica durante el estudio.

La evaluación de la hidratación de la piel se midió en 5 puntos de la mejilla derecha y utilizó el método Corneometer® CM 825 (Courage+Khazaka, electronic GmbH), basado en la constante dieléctrica del agua. Utiliza una sonda que mide los cambios en la capacitancia en función del contenido en humedad de la piel. Un campo eléctrico penetra en las primeras capas de la piel y determina la dielectricidad.

La figura 10 muestra que la composición 1 B de la invención proporcionó un incremento significativo en la hidratación de la piel desde el comienzo del estudio (medida como % de variación de la hidratación con respecto al comienzo del estudio, T0).

Además, la figura 1 1 muestra como la composición 1 B de la invención reforzó la barrera de la epidermis reduciendo de manera significativa la pérdida de agua transepidermal (medida como % de variación de la hidratación con respecto al comienzo del estudio, T0).

Al final del estudio, el 82% de los pacientes tratados con la composición 1 B de la invención percibieron una mejora en la sensibilidad de la piel y un 84% de ellos percibieron una sensación de protección de la piel. Además, el 86% de los tratados con la composición 1 B de la invención siente que su piel está más hidratada.

Evaluación del sebo de la piel

La piel expuesta a contaminación secreta una cantidad mayor de sebo, provocando, ¡unto con un aumento de la inflamación, una mayor incidencia del acné.

Se utilizó el aparato Sebumeter® (Sebumeter 815, Courage+Khazaka GmbH). Dicho método utiliza como principio la fotometría. El sebo de la piel fue recogido en una cinta sintética de 64 mm², contenida en un caset, a continuación, la cabeza de medición del caset se insertó en la apertura del aparato, en el cual una célula fotoeléctrica mide la transparencia. La transmisión de luz representa el contenido de sebo en la superficie del área medida. Un microprocesador calculó el resultado, indicado como pg sebo/cm² de piel.

La figura 12 muestra como la composición 1 B de la invención redujo la secreción de sebo que se produce al estar expuesta a la contaminación. Además, el 82% de los sujetos tratados percibieron una mejora en las imperfecciones de la piel, tal como en la dilatación de los poros o en la disminución de puntos negros.

Elasticidad y firmeza de la

La medida de la elasticidad y firmeza de la piel se realizó en piel de la mejilla utilizando un método de succión que crea una presión negativa que deforma la piel mecánicamente (método Cutometer®). Se creó una presión negativa de 450 mbar atrayendo la piel en la apertura de una sonda durante 2 segundos y dejándola libre otra vez después de 2 segundos. Se determinó la profundidad de penetración dentro de la sonda, mediante un sistema de medición óptico (sin contacto). El sistema óptico consiste de una fuente de luz y un receptor de luz, así como de dos primas enfrentados que proyectan luz desde el transmisor al receptor. La intensidad de la luz varía en función de la profundidad de penetración de la piel. La resistencia de la piel a la presión negativa y su habilidad para volver a la posición original se representa con curvas (profundidad de penetración en mm/tiempo) en tiempo real durante la evaluación. El aparato usado es un Cutometer® MPA 580 (Courage+Khazaka, electronic GmbH). Los indicadores biomecánicos escogidos han sido:

R2: Elasticidad total de la piel. Porción entre amplitud máxima y capacidad de redeformación de la piel (elasticidad bruta)

R0: Extensibilidad máxima de la piel (tono/firmeza). Cuanto menor sea el parámetro más resistencia a la deformación emite la piel.

Cuanto menor sea el parámetro R0 más resistencia a la deformación tiene la piel. De esta manera, una disminución en el valor de R0 implica, en valores absolutos, un aumento de la firmeza de la piel.

La figura 13 muestra como la composición 1 B de la invención produce un incremento significativo de la elasticidad total de la piel en comparación con la utilización de un placebo (datos tomados a los 14, 28, 56 y 84 días de utilización).

La composición 1 B de la invención produjo, además, un aumento significativo en la firmeza de la piel (medida como disminución en valor absoluto de RO, como representación del incremento de la firmeza de la piel), tal como se aprecia en la figura 14, en datos tomados a los 14, 28, 56 y 84 días de utilización.

Además, en el cuestionario de evaluación subjetiva al final del estudio mostró que el 82% de los sujetos que tomaron la composición 1 B de la invención percibieron un aumento en la firmeza de la piel y una complexión más sana.

Color de la piel v luminosidad. La contaminación también es responsable de un incremento de los desórdenes de pigmentación. De hecho, la contaminación proveniente del tráfico, o el hollín, pueden incrementar las manchas en la piel hasta un 20%.

La luminosidad y color de la piel se midieron usando un espectrofotómetro/colorímetro CM 700D (Konica Minolta). El valor de ITA (por sus siglas en inglés, Individual Topology Angle) define grado de pigmentación de la piel y se calculó usando los valores L y b (del espacio de color L, a, b) obtenidos en el espectrofotómetro, con la fórmula ITA= [ArcTan(L-50)/b]180/n.

La luminosidad de la piel fue definida usando el valor de brillo que se definió como la proporción entre la luz reflejada y la dispersada (a mayor luz reflejada mayor brillo, mientras que superficies más rugosas dispersan más la luz, dando lugar a valores de brillo menores).

El valor de ITA fue medido en una zona con hiperpigmentación, mientras que la luminosidad se midió en la mejilla.

El contenido en pigmentación de la piel se midió con el Mexameter MX18 (Courage+Khazaka). La sonda del Mexameter® MX 18 emite a tres longitudes de onda específicas. Un receptor mide la luz reflejada por la piel. Dado que es conocida la cantidad de luz emitida, se pudo calcular la cantidad de luz absorbida por la piel. La melanina se mide a longitudes de onda específicas.

La figura 15 refleja el incremento (en %) con respecto al comienzo del estudio en la luminosidad de la piel (medida como valor de brillo en la mejilla) después de la utilización de la composición 1 B de la invención frente a la utilización de un placebo, durante 14, 28, 56 y 84 días.

La figura 16 representa el aumento (en %) del valor de ITA medido en una zona con hiperpigmentación después de la utilización de la composición 1 B de la invención frente a la utilización de un placebo, durante 14, 28, 56 y 84 días.

Tal como se aprecia en las figuras 15 y 16, el uso de la composición 1 B de la invención produjo una piel más luminosa, mientras que la coloración de la manchas disminuyó significativamente.

Perfilometría de la piel (rugosidad)

Estudios epidemiológicos evidencian que la exposición a la contaminación ambiental está asociado a un mayor grado de manifestación de arrugas. Se midió la suavidad (parámetro ra) y la profundidad de las arrugas en la zona de las patas de gallo, usando un sistema de imagen microtopográfica 3D Primoslite GFMesstechnik GmbH). La superficie de la piel fue reconstruida usando un algoritmo para general imágenes en 3D. El reposicionamiento de los sujetos se aseguró usando un aparato de reposicionamiento (Canfield Scientific); mientras antes/después el emparejamiento de imágenes fue asegurado mediante una característica de superposición del software de análisis de imagen. Tal como se aprecia en las figuras 17 y 18, el uso de la composición 1 B de la invención produjo una piel más suave y uniforme, mientras la profundidad de las líneas y arrugas disminuyó significativamente.

Análisis bioquímico

Se midieron las siguientes características usando métodos bioquímicos estándar: capacidad antioxidante total mediante FRAP (por sus siglas en inglés Ferric Reducing Antioxidant Power) y el ensayo MDA (en decapado de la piel).

Decapado de la piel

Se tomaron capas de la piel usando laminas Corneofix® (Courage+Khazaka electronic GmbH). Esta técnica permite recoger diferentes capas del estrato corneo. La capa 2 y 3 se recogieron y a continuación se preservaron a -80 °C para análisis subsecuente por FRAP.

Malondialdehido (MDA) y 4-hidroxinonenal son los dos productos mayoritarios de la peroxidación lipídica, por lo que su concentración en un sistema biológico puede ser utilizada como índice del daño lipo-peróxido. Para determinar los niveles de lipo- peróxidos se utilizó el método de Erdelmeier y col. (1998) basado en la capacidad del cromógeno N-metil-2-fenilindol de reaccionar con MDA a 45 °C y pH ácido para producir un cromóforo con un pico de absorción a 586 nm:

Los niveles de lipo-peróxidos se midieron después de la inducción de la descomposición de hidroperóxidos inestables, producida por procesos oxidativos mediante la utilización de un agente pro-oxidativo (CuS04 500 mM). La composición 1 B de la invención (ZeroPollution) redujo la producción de MDA, como medida de la peroxidación de la piel a los 28, 56 y 84 días de su utilización, tal como se muestra en la figura 19.

FRAS (Antioxidante Férrico Reductor de saliva).

El ensayo FRAS es una medida directa del poder reductor de un sistema y es un valor indirecto de la capacidad del organismo para resistir daño oxidativo. La reducción a pH ácido del complejo TPTZ-Fe(ll) al de Fe(lll) se caracteriza por un color azul intenso. La reacción se monitoriza midiendo la absorbancia de la disolución a 595 nm. Las absorbancias recogidas se comparan a la de una curva estándar de Fe(ll) conocida. Los resultados son directamente proporcionales a la capacidad reductora total de los antioxidantes de la mezcla.

La figura 20 muestra como la composición 1 B de la invención (ZeroPollution) produjo un incremento de FRAS, mostrando así capacidad antioxidante a los 28 y aún mayor, a los 84 días de su utilización.

El resultado de todas estas medidas se recoge, a continuación, en la tabla 3:

Tabla 3

^*EI parámetro Ra está relacionado con la suavidad de la piel: una disminución en el valor de Ra puede ser expresada en valor absoluto como un aumento en la suavidad de la piel.

^**EI parámetro R0 está relacionado con la firmeza de la piel: una disminución del valor de R0 puede ser expresada en valor absoluto como un aumento en la firmeza de la piel.

^***La producción de MDA es una medida del daño oxldatlvo en la epidermis

^****EI valor de FRAS se relaciona con la capacidad antloxldante slstémlca medida en muestras de saliva.

s: estadísticamente significativo vs. T0 | ns: no estadísticamente significativo vs. T0

REFERENCIAS

(1 ) Krutmann J. et al. Environmentally induced (extrinsic) skin aging. Hautarzt.2016 Feb;

67(2):99-102.

(2) Morgenstern, V. et al. Atopic diseases, allergic sensitization, and exposure to traffic- related air pollution in children. Am. J. Respir. Crit. Care Med. 177, 1331-1337

(2008).

(3) Song, S. et al. Acute health effects of urban fine and ultrafine particles on children with atopic dermatitis. Environ. Res. 1 1 1 , 394-399 (201 1 ). (4) Kim, J. et al. Symptoms of atopic dermatitis are influenced by outdoor air pollution. J. Allergy Clin. Immunol. 132, 495^199 (2013).

(5) Van Den Bogaard, E.H. et al. Coal tar induces AHR-dependent skin barrier repair in atopic dermatitis. J. Clin. Invest. 123, 917-927 (2013).

(6) Kim, H.O., Kim, J.H., Chung, B.Y., Choi, M.G. ; Park, C.W. Increased expression of the aryl hydrocarbon receptor in patients with chronic inflammatory skin diseases. Exp. Dermatol. 23, 278-281 (2014).

(7) DiMeglio, P. et al. Activation of the aryl hydrocarbon receptor dampens the severity of inflammatory skin conditions. Immunity 40, 989-1001 (2014).

(8) Jean Krutmann, Dominique Moyal, Wei Liu, Sanjiv Kandahari, Geun-Soo Lee, Noppakun Nopadon, Leihong Flora Xiang y Sophie Seité.“Pollution and acné: is there a link?” Clinical, Cosmetic and Investigational Dermatology. May 2017

(9) Ju Q, Zouboulis CC, Xia L. Environmental pollution and acné: Chloracne. Dermato- endocrinology. 2009;1 (3):125-128

(10) Vierkoler A et al. Airborne particle exposure and extrinsic skin aging, J. Invest.

Dermatol. 130 (12) (2010) 2719-2726.

(1 1 ) Hüls A et al. Traffic-Related Air Pollution Contributes to Development of Facial Lentigines: Further Epidemiological Evidence from Caucasians and Asians. J. Invest. Dermatol. 2016 May; 136(5):1053-6.

(12) Weng, Zuyi et al. Quercetin Is More Effective than Cromolyn in Blocking Human Mast Cell Cytokine Release and Inhibits Contact Dermatitis and Photosensitivity in Humans. Ed. Christian Taube. PLoS ONE 7.3 (2012): e33805. PMC. Web. 15 Sept. 2017.

(13) Sim, H.S.S. and S.S., Acetoside inhibits a-MSH- induced melanin production in B16 melanoma cells by inactivation of adenyl cyclase. Journal of Pharmacy and

Pharmacology 2009. 61 : p. 1347-1351.

(14) Young-Ok Sona, S.-A.L.e.a., Acteoside inhibits melanogenesis in B16F10 cells through ERK activation and tyrosinase down-regulation. Journal of Pharmacy and Pharmacology 201 1. 63: p. 1309-1319.

(15) Mancebo SE, Wang SQ. Recognizing the impact of ambient air pollution on skin health. J Eur Acad Dermatol Venereol. 2015 Dec;29(12):2326-32. (16) Mulero-Navarro S, Fernandez-Salguero PM. New Trends in Aryl Hydrocarbon Receptor Biology. Frontiers in Cell and Developmental Biology.

(17) Abel J, Flaarmann-Stemmann T. An introduction to the molecular basics of aryl hydrocarbon receptor biology. Biol Chem. 2010 Nov;391 (1 1 ):1235-48.

(18) Krutmann J, Jux B, Luecke S, Fritsche E, Abel J, Essel C, Rannug A. Involvement of arylhydrocarbon receptor (AhR-) signaling in skin melanogenesis. J Invest Dermatol 2008;128:S22

(19) Morita A, Torii K, Maeda A, Yamaguchi Y. Molecular basis of tobáceo smoke-induced premature skin aging. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009 Aug;14(1 ):53-5.

(20) Murphy KA, Villano CM, Dorn R, White LA. Interaction between the aryl hydrocarbon receptor and retinoic acid pathways increases matrix metalloproteinase-1 expression in keratinocytes. J Biol Chem. 2004 Jun 1 1 ;279(24):25284-93.

(21 ) Luecke S, Backlund M, Jux B, Esser C, Krutmann J, Rannug A. The aryl hydrocarbon receptor (AFIR), a novel regulator of human melanogenesis. Pigment. Cell Melanoma Res. 2010 Dec;23(6):828-33.

(22)Afaq F, Zaid MA, Pelle E, Khan N, Syed DN, Matsui MS, Maes D, Mukhtar H. Aryl hydrocarbon receptor is an ozone sensor in human skin. J Invest Dermatol. 2009 Oct;129(10):2396-403.

(23) Ono Y, Torii K, Fritsche E, Shintani Y, Nishida E, Nakamura M, Shirakata Y, Flaarmann-Stemmann T, Abel J, Krutmann J, Morita A. Role of the aryl hydrocarbon receptor in tobáceo smoke extract-induced matrix metalloproteinase-1 expression. Exp. Dermatol. 2013 May 22(5):349-53.

(24) Hidaka T, Ogawa E, Kobayashi EH, Suzuki T, Funayama R, Nagashima T, Fujimura, T, Aiba S, Nakayama K, Okuyama R, Yamamoto M. The aryl hydrocarbon receptor AhR links atopic dermatitis and air pollution vía induction of the neurotrophic factor artemin. Nat Immunol. 2017 Jan;18(1 ):64-73

(25) Janero D.R. Malondialdehyde and thiobarbituric acid-reactivity as diagnostic índices of lipid peroxidation and peroxidative tissue injury. Free Radie Biol Med. 1990; 9(6):515-40.

(26) Flaarmann-Stemmann T, Abel J, Fritsche E, Krutmann J. The AhR-Nrf2 pathway in keratinocytes: on the road to chemoprevention. J Invest Dermatol. 2012 Jan;132(1 ):7- 9. (27) Champion S. et ai., Activation of the NFKB Pathway Enhances AhR Expression in Intestinal Caco-2 Cells, ISRN Toxicology Volume 2013 (2013).

(28) Tauchi et al., 2005. Constitutive Expression of Aryl Hydrocarbon Receptor in Keratinocytes Causes Inflammatory Skin Lesions, Molecular and cellular biology, Nov. 2005, p. 9360-9368.

(29) Furue et al., 2014. Role of AhR/ARNT system in skin homeostasis Arch Dermatol Res. 306:769-779

Claims

REIVINDICACIONES

1 . Composición para el tratamiento de los efectos de la contaminación del aire sobre la piel, caracterizada porque dicha composición comprende diterpenos, oleuropeina, verbascósido, quercetina e hidroxitirosol.

2. Composición según la reivindicación 1 que comprende entre 25% a 40% en peso de extracto de romero que aporta un contenido mínimo de 4,5 % en peso de diterpenos en la fórmula final, entre 20% a 40% en peso de extracto de hojas o fruto de olivo que aporta un contenido mínimo de 4,5 % en peso de oleuropeina y un contenido mínimo de 1 ,5% en peso de hidroxitirosol en la fórmula final, entre 20% y 35% en peso de extracto de Lippia citriodora que aporta un contenido mínimo de 6,5 % en peso de verbascósido en la fórmula final y entre 5% y 25% en peso de extracto de Sophora japónica que aporta un contenido mínimo de 3,5 % en quercetina en la fórmula final.

3. Composición según la reivindicación 1 o la reivindicación 2 que comprende una proporción individual de aproximadamente 2,5 a 5 en peso de diterpenos, oleuropeina, verbascósido y quercetina, respectivamente con respecto a hidroxitirosol.

4. Composición según la reivindicación 3 en la que la proporción en peso de diterpenos a hidroxitirosol es alrededor de 3, la proporción en peso de oleuropeina a hidroxitirosol es alrededor de 3, la proporción en peso de verbascósido a hidroxitirosol es alrededor de 4.5 y la proporción en peso de quercetina a hidroxitirosol es alrededor de 2.5.

5. Composición según cualquier reivindicación anterior que comprende un extracto de Sophora japónica con un contenido mínimo de 40% en peso de quercetina.

6. Composición según cualquier reivindicación anterior que comprende ácido carnósico.

7. Composición según cualquier reivindicación anterior que comprende un extracto de romero con un contenido mínimo de 15% en peso de diterpenos.

8. Composición según cualquier reivindicación anterior que comprende un extracto de olivo con un contenido mínimo de 16 % en peso de oleuropeina.

9. Composición según cualquier reivindicación anterior que comprende un extracto de olivo con un contenido mínimo de 5 % en peso de hidroxitirosol.

10. Composición según cualquier reivindicación anterior que comprende un extracto de Lippia citriodora con un contenido mínimo de 25 % en peso de verbascósido.

1 1. Composición según las reivindicaciones 1 a 10 para su uso en la prevención del envejecimiento prematuro de la piel asociada a los efectos de la contaminación del aire.

12. Dosis de entre 0,1 a 1000 miligramos de la composición según la reivindicación 10.

13. Dosis de 250 miligramos de la composición de la composición según la reivindicación 10.

14. Formulación para administración por vía parenteral, transdermal, oral o tópica que comprende una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10.

15. Suplemento dietético que comprende una composición de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 10.

16. Nutricosmético que comprende que comprende una composición de acuerdo con las reivindicaciones 1 a 10.

17. Composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso como medicamento.

18. Composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, para uso en la prevención y/o tratamiento de las afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental.

19. Composición para uso, de acuerdo con la reivindicación 18, en las afecciones de la piel causadas por la contaminación ambiental se seleccionan entre inflamación, acné, dermatitis crónica y psoriasis.

20. Composición para uso, de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 18 o 19, en donde dicha composición es administrada por vía oral en una dosis de entre 0,1 a 1000 miligramos al día.

21. Uso de la composición de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, como cosmético.

22 Uso de acuerdo con la reivindicación 21 , para paliar cosméticamente los efectos estéticos sobre la piel de la contaminación ambiental.

23. Uso de acuerdo con la reivindicación 21 o 22, como cosmético con efectos antioxidantes, antiinflamatorios, tomando este efecto no como un tratamiento terapéutico sino meramente estético, antienvejecimiento y blanqueante sobre la piel.

24. Uso de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 21 a 23, en donde dicha composición es administrada por vía oral en una dosis de entre 0,1 a 1000 miligramos al día.