WO2019142829A1 - プロテオグリカン及びこれを含む健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法 - Google Patents

プロテオグリカン及びこれを含む健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法 Download PDF

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WO2019142829A1
WO2019142829A1 PCT/JP2019/001124 JP2019001124W WO2019142829A1 WO 2019142829 A1 WO2019142829 A1 WO 2019142829A1 JP 2019001124 W JP2019001124 W JP 2019001124W WO 2019142829 A1 WO2019142829 A1 WO 2019142829A1
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WO
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proteoglycan
acetic acid
acid
acid solution
extraction
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Application number
PCT/JP2019/001124
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English (en)
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Inventor
田中 友香
達治 高橋
正人 米塚
Original Assignee
一丸ファルコス株式会社
株式会社角弘
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14Extraction; Separation; Purification
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans

Definitions

  • the present invention relates to a method for producing proteoglycan more efficiently and with high purity from a biological sample, and a method for producing a health food, a health drink, a pharmaceutical composition or a cosmetic composition comprising the same.
  • Proteoglycan is a glycoprotein in which several to several tens of glycosaminoglycans such as chondroitin sulfate and keratan sulfate are covalently linked to one core protein, and is widely used in the body such as skin and cartilage as an extracellular matrix. It is distributed.
  • Glycosaminoglycans have a long straight chain structure with no branching, are negatively charged because they have many sulfate and carboxyl groups, and glycosaminoglycan chains are elongated due to their electrical repulsion Take a shape.
  • Patent Document 1 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydrochloride
  • Patent Document 2 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydrochloride
  • Patent Document 2 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydrochloride
  • Patent Document 2 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydrochloride
  • Patent Document 2 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydrochloride
  • Patent Document 2 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydrochloride
  • Patent Document 2 a method for extracting proteoglycans from salmon nasal cartilage previously filed by the present applicants using guanidine hydro
  • proteoglycan various methods for producing proteoglycan have been investigated. Among them, by controlling the extraction temperature and the flow rate of the extraction solvent by a method using acetic acid which the present inventors have carried out, it is possible to increase the yield of proteoglycan while maintaining high purity even in the same extraction time.
  • the production methods of proteoglycan reported so far include selection of extraction solvent, processing method of biological sample as raw material and setting of extraction temperature, etc. There is no report on control.
  • the extraction of proteoglycan is recognized to some extent by the conventional method, it is not satisfactory from the time and economical point of view for securing the quantity due to the deterioration of quality and the low yield above all.
  • an object of the present invention is to provide a method for efficiently and inexpensively producing high purity proteoglycan from fish, molluscs, birds or mammals.
  • the present inventors controlled the extraction temperature and agitation speed by using acetic acid in the proteoglycan production process to extract proteoglycan, which is a glycoprotein complex, from cartilage tissue and other proteoglycans.
  • the present inventors have found that they can be produced from samples with high efficiency, high purity, and at low cost, and have led to the present invention.
  • the present invention includes the following items.
  • [Item 1] A method of extracting proteoglycans from a biological sample containing proteoglycans using an acetic acid solution, extracting the entire surface of the biological sample under fluidly contacting conditions of the acetic acid solution, and A method for producing proteoglycan, wherein the temperature of an acetic acid solution during extraction is 20 to 40 ° C.
  • [Item 2] The flow rate of the acetic acid solution is 0.04 to 10.0 cm / sec when extraction is carried out under the condition that the acetic acid solution is in fluid contact with the entire surface of the biological sample containing proteoglycan. The manufacturing method of proteoglycan as described in 1).
  • [Item 3] A method for producing proteoglycan according to any one of Items 1 or 2, which comprises the step of separating and purifying proteoglycan after the extraction step.
  • [Item 4] The method for producing a proteoglycan according to any one of Items 1 to 3, wherein the biological sample containing proteoglycan is fish, mollusc, avian or mammalian cartilage tissue, muscle tissue or skin tissue.
  • proteoglycan can be extracted and purified with high efficiency and high purity by an extremely simple method as compared with the conventional production method. Selection of extraction solvents, processing of biological samples as raw materials, setting of extraction temperature, etc. Concerns about the deterioration of quality due to the inclusion of impurities such as proteoglycan production methods, and groups for securing the yield There is no need to increase raw materials, and the cost reduction effect of maintaining quality and high yield is also large.
  • FIG. Fig. 6 shows the chondroprogenitor cell proliferation effect of the proteoglycan obtained in the present invention. It represents the cartilage differentiation action of the proteoglycan obtained in the present invention. It represents the cartilage calcification inhibitory action of the proteoglycan obtained in the present invention.
  • the biological sample containing proteoglycan in the present invention can be applied to, for example, cartilage tissue, muscle tissue or skin tissue of fish, molluscs, birds or mammals, among which cartilage tissue is preferable.
  • the cartilage tissue used in the present invention can utilize fish, mollusks, birds or mammals, in particular any of their disposal sites.
  • cartilage tissue means either cartilage alone or tissue around cartilage, such as bone, muscle tissue, skin tissue and the like.
  • those derived from the nasal cartilage tissue contained in the head of salmon are preferably used in view of the availability and cost and the like.
  • white salmon are treated as various processed products, it is possible to use a drained head.
  • fish-derived cartilage tissue such as trout, fly, shark and cod
  • mollusc-derived epidermis such as squid and octopus
  • bird-derived cartilage tissue such as chicken, and mammals derived from bovine and whale etc.
  • Cartilage tissue can also be utilized.
  • the acetic acid used in the present invention may be any for food, industrial and the like, but it is appropriately selected according to the purpose of use of the proteoglycan obtained.
  • the concentration of the acetic acid solution is 0.01 to 20% by weight, preferably 0.1 to 10% by weight, more preferably 1 to 8% by weight, and still more preferably 4 to 5% by weight.
  • the extraction be performed under the condition that the acetic acid solution is in fluid contact with the entire cartilage surface, and the flow of the acetic acid solution at this time causes the solution to flow so as to be 0.04 to 10.0 cm / sec. .
  • the flow rate is 0.04 to 5.0 cm / sec.
  • This flow is not only horizontal circular movement with a stirrer or a mixer, but also vertical flow by means of circulating the liquid, or flow in a certain direction such as flowing the liquid from one side to the other after placing the cartilage. Although it does not matter, it is possible to improve the extraction efficiency by always convecting the liquid.
  • the step of fluidly contacting the acetic acid solution with the biological sample may be carried out for a sufficient time to extract the proteoglycan in a desired yield or yield, continuously for a predetermined time during the extraction step. It may be intermittent or part of the extraction process.
  • the fluid contact time can be appropriately set in accordance with the extraction temperature and the flow rate of the acetic acid solution.
  • the solution after completion of extraction contains many residues after proteoglycan extraction, so it is preferable to remove them by filtration, centrifugation or other methods.
  • lipid components considered to be mixed are simply removed by adsorption.
  • the extract solution is recovered by solid-liquid separation of proteoglycan obtained from the solution after lipid removal using a separation membrane or the like having an appropriate molecular weight cut-off.
  • a separation membrane or the like having an appropriate molecular weight cut-off.
  • the obtained fractionated liquid may be made into a solid using a vacuum lyophilizer. Alternatively, it can be dried with a spray drier to obtain a powdery solid content.
  • the proteoglycans obtained by the present invention can be extracted and purified with high efficiency and high purity from biological samples such as salmon nasal cartilage by a very simple method. According to the present invention, it is not necessary to increase the amount of preparation and repetitive extraction conventionally required to obtain the necessary amount, which is a great merit in terms of time and economy.
  • the eluate at each temperature was filtered through a stainless steel mesh (150 ⁇ m) to remove insolubles.
  • an oil absorption mat made by Maeda Kogyo Co., Ltd., trade name "Oil adsorption sheet SP-1300N (DX)"
  • powdered cellulose made by Nippon Paper Industries, trade name "KC Flock W”
  • the solution was dialyzed thoroughly with a cellulose ester membrane dialysis tube having a molecular weight of 100,000 and freeze-dried to obtain proteoglycans of each extraction temperature. The results are shown in FIG.
  • FIG. 2 shows the result of observing the relationship between the extraction temperature and the molecular weight.
  • the molecular weight was almost the same at an extraction temperature of 4 ° C. to 40 ° C., and at 50 ° C. or higher, the molecular weight decreased and the proteoglycan was degraded. From these results, it was found that the extraction temperature was 20-40 ° C. and the extraction efficiency was the best.
  • the extract was filtered through a stainless steel mesh (150 ⁇ m) to remove insolubles.
  • an oil absorption mat made by Maeda Kogyo Co., Ltd., trade name "Oil adsorption sheet SP-1300N (DX)"
  • powdered cellulose made by Nippon Paper Industries, trade name "KC Flock W” -400 G ′ ′
  • the filtrate was dialyzed thoroughly with a cellulose ester membrane dialysis tube having a molecular weight of 100,000, and the obtained solution was lyophilized to obtain proteoglycan. 10 mg at 1 cm / sec and 25 mg proteoglycans at 5 cm / sec were obtained.
  • the eluate was filtered through a stainless steel mesh (150 ⁇ m) to remove insolubles.
  • an oil absorption mat made by Maeda Kogyo Co., Ltd., trade name "Oil adsorption sheet SP-1300N (DX)"
  • powdered cellulose made by Nippon Paper Industries, trade name "KC Flock W” -400 G ′ ′
  • the filtrate was dialyzed thoroughly with a cellulose ester membrane dialysis tube having a molecular weight of 100,000, and the obtained solution was lyophilized to obtain proteoglycan. Shown in.
  • the flow rates 0.04, 0.1, 1.0, 2.0, 5.0, and 10.0 cm / sec are higher than the immersion extraction with a flow rate of 0 cm / sec without agitation as shown in FIG.
  • the yield is shown.
  • the yield was lower than that of immersion extraction.
  • the molecular weight was constant regardless of the flow rate. From these results, it was found that the flow rate at the time of extraction was most efficient at 0.04 to 10.0 cm / sec.
  • an HPLC chromatogram of proteoglycan extracted at a flow rate of 2.0 cm / sec is shown in FIG.
  • the eluate was filtered through a stainless steel mesh (150 ⁇ m) to remove insolubles.
  • an oil absorption mat made by Maeda Kogyo Co., Ltd., trade name "Oil adsorption sheet SP-1300N (DX)"
  • powdered cellulose made by Nippon Paper Industries, trade name "KC Flock W” -400 G ′ ′
  • the filtrate was dialyzed thoroughly with a cellulose ester membrane dialysis tube having a molecular weight of 100,000, and the obtained solution was lyophilized to obtain 1.5 g of proteoglycan.
  • the eluate was filtered through a stainless steel mesh (150 ⁇ m) to remove cartilage.
  • an oil absorption mat made by Maeda Kogyo Co., Ltd., trade name "Oil adsorption sheet SP-1300N (DX)"
  • powdered cellulose made by Nippon Paper Industries, trade name "KC Flock W” -400 G ′ ′
  • the filtrate was dialyzed thoroughly with a cellulose ester membrane dialysis tube having a molecular weight of 100,000, and the obtained solution was lyophilized to obtain 30 mg of proteoglycan.
  • the HPLC chromatogram of the obtained proteoglycan was as shown in FIG.
  • the extraction of proteoglycan with acetic acid increases the yield at 20 to 40 ° C more than low temperature or 50 ° C or more, and the flow rate is 0.04 to 10.0 cm / sec at the time of extraction rather than immersion. It was confirmed that the yield was increased while maintaining the quality by bringing the solution into fluid contact. In addition, the yield was low even if extraction was performed with an alkaline solution according to this method, and the same effect was not obtained.
  • ATDC5 (RIKEN) was seeded at 5 ⁇ 10 4 cells / well in a 12-well culture plate, replaced with 5% serum and DMEM / F12 (added transferrin, sodium selenium), and then conditioned to 5% CO 2 at 37 ° C. The cells were cultured for 7 days to make them confluent. Thereafter, each sample was added to 50 ⁇ g / mL and cultured for 21 days, and after culturing, the cartilage differentiation ability was evaluated by quantitatively analyzing an image obtained by staining with Alcian blue and using WinROOF. [result] The test results are shown in FIG.
  • the samples (A) and (B) showed a significant cartilage differentiation promoting action independent of insulin. From these results, it is considered that the proteoglycan obtained in the present invention is useful as an excellent cartilage differentiation promoting agent having high purity and quality compared to proteoglycan obtained by the conventional method.
  • ATDC 5 (RIKEN) is seeded at 5 ⁇ 10 4 cells / well in 12-well culture plate, and conditioned at 5% CO 2 and 37 ° C. using 5% serum and DMEM / F12 (transferrin, sodium selenium added) The cells were cultured for 7 days to make them confluent. Thereafter, the cells were further cultured for 21 days under insulin addition conditions to form cartilage. After that, add each sample to 50 ⁇ g / mL, and culture for another 24 days under the conditions of 3% CO 2 and 37 ° C using 5% serum and ⁇ -MEM (transferrin, sodium selenium, added with insulin).
  • a health food or health drink a cosmetic composition, a pharmaceutical composition or the like using the proteoglycan obtained by the present invention.
  • health-oriented processed food for any purpose such as nutrition, nourishment, fatigue recovery, constitution improvement, beauty and slimming, nutrition support Other than food and drink, sprinkled, herb salt, sauce, seasoning such as dressing, jelly, gum, candy, yogurt, tablets, general taste food such as soft drink, drink, injection medicine, medication taken up.
  • the method for producing a health food, health drink, pharmaceutical composition or cosmetic composition containing proteoglycan according to one embodiment of the present invention, (A) contacting a biological sample containing proteoglycan with 0.01 to 20% by weight acetic acid solution under flowing conditions to extract proteoglycan into the acetic acid solution, wherein the acetic acid solution is biologically Flowing over the surface of the sample, and the temperature of the acetic acid solution during extraction is 20 to 40 ° C. (B) separating and purifying proteoglycan from an acetic acid solution after extraction, and (c) adding the separated and purified proteoglycan to a base material of the health food, health drink, or cosmetic composition. It is characterized by In a preferred embodiment, the purified proteoglycan is characterized in that it has an improved action on promoting proliferation of chondroprogenitor cells, promoting cartilage differentiation and / or suppressing cartilage calcification.
  • the pharmaceutical or cosmetic composition include 1) topical or systemic external preparations for external use, skin cleansing agents, skin cosmetics, 2) pharmaceutical or cosmetic preparations to be applied to scalp and hair, 3) Medicinal or cosmetic bath preparations used by pouring in bath water, 4) Deodorant and deodorant for human body, 5) Medicinal or cosmetic oral preparations such as toothpaste, mouthwash and gargle, 6) It can be used by appropriately blending into a sheet for skin sticking, a sheet for makeup, a cotton for makeup, a sanitary product, sanitary cotton, a wet tissue and the like.
  • Ampoules, capsules, powders (powders), granules, solids, solutions, gels, bubbles, emulsions, sheets, mists, sprays, etc. can be in the form of a suitable external preparation for use.
  • Such external preparations include external preparations for creams, gels, ointments, liquids, etc., lotions, emulsions, creams, ointments, gels, lotions, oils, packs, mists, cosmetic sheets for face makeup, etc. , Shaves, face wash, skin cleansers (including soaps), shampoos, rinses, hair treatments, hair setting agents, perming agents, hair tonics, hair dyes, medicated or cosmetic hairs such as hair growth and hair raising agents , Foundation, lipstick, blusher, eye shadow, eyeliner, mascara and other makeup cosmetics, perfumes, skin deodorant, antiperspirant, bath agent, mouthwash, toothpaste, mouth freshener, etc. .
  • Health food or health drink is produced by adding proteoglycan produced by the above method to a base material optionally selected and blended with the components and additives exemplified below. be able to.
  • Waxes beeswax, carnauba wax, spermaceti wax, lanolin, liquid lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, candelilla wax, montan wax, shellac wax, rice wax and the like.
  • Alcohols Natural alcohols such as ethanol, isopropionol, lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol, phytosterol, phenoxyethanol, etc.
  • Synthetic alcohols such as 2-hexyldecanol, isostearyl alcohol, 2-octyldodecanol .
  • Esters isopropyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, myristyl myristate, oleyl oleate, decyl oleate, octyldodecyl myristate, hexyl decyl dimethyl octanoate, cetyl lactate, myristyl lactate Diethyl phthalate, dibutyl phthalate, lanolin acetate, ethylene glycol monostearate, propylene glycol monostearate, propylene glycol dioleate, etc.
  • Metal soaps Aluminum stearate, magnesium stearate, zinc stearate, calcium stearate, zinc palmitate, magnesium myristate, zinc laurate, zinc undecylenate and the like.
  • gum saccharides or water-soluble polymer compounds gum arabic, benzoin gum, dammar gum, guaiac fat, irish candy, karaya gum, tragant gum, carob gum, quinseed, agar, casein, lactose, fructose, sucrose or an ester thereof Trehalose or derivatives thereof, dextrin, gelatin, pectin, starch, carrageenan, carboxymethyl chitin or chitosan, hydroxyalkyl (C2 to C4) chitin or chitosan having alkylene (C2 to C4) oxides such as ethylene oxide added, low molecular weight chitin Or chitosan, chitosan salt, sulfated chitin or chitosan, phosphorylated chitin or chitosan, alginic acid or a salt thereof, hyaluronic acid or a salt thereof, chondroitin sulfate or
  • Surfactants Anionic surfactants (alkyl carboxylates, alkyl sulfonates, alkyl sulfates, alkyl phosphates), cationic surfactants (alkyl amines, alkyl quaternary ammonium salts), amphoteric Surfactant: Carboxylic acid type amphoteric surfactant (amino type, betaine type), sulfuric acid ester type amphoteric surfactant, sulfonic acid type amphoteric surfactant, phosphoric acid type amphoteric surfactant, nonionic surfactant ( Ether type nonionic surfactant, ether ester type nonionic surfactant, ester type nonionic surfactant, block polymer type nonionic surfactant, nitrogen containing type nonionic surfactant, and other surfactants (others) Natural surfactants, derivatives of protein hydrolysates, polymeric surfactants, surfactants containing titanium and silicon, fluorine Carbon based surfactants
  • Vitamin A group retinol, retinal (vitamin A1), dehydro retinal (vitamin A2), carotene, lycopene (provitamin A), vitamin B group: thiamine hydrochloride, thiamine sulfate (vitamin B1), Riboflavin (vitamin B2), pyridoxine (vitamin B6), cyanocobalamin (vitamin B12), folates, nicotinic acids, pantothenic acids, biotins, choline, inositols, vitamin C group: vitamin C acid or derivatives thereof, vitamin D group: Ergocalciferol (Vitamin D2), Cholecalciferol (Vitamin D3), Dihydrotachysterol, Vitamin E group: Vitamin E or derivatives thereof, Ubiquinones, Vitamin K group: Phytonadione (Vitamin K1), Menaquinone (Vitamin K2) , Menadione (vitamin
  • the solvent used for the extraction may be selected in consideration of the purpose of use, the type of the product to be provided, or the processing to be performed later, etc.
  • Lower alcohols such as water, methanol, ethanol, propyl alcohol, isopropyl alcohol, butanol, isobutanol or hydrous lower alcohols, polyhydric alcohols such as propylene glycol, 1,3-butylene glycol, glycerin or hydroalcohols, acetone
  • organic solvents such as ethyl acetate.
  • cosmetics When using additives derived from plant or animal materials for external use for systemic use or topical use, cosmetics, moisturizing, improvement of feel and texture, imparting of softness, alleviating irritation including skin and hair protection. , Alleviation of stress due to aroma, cell activation (cell aging prevention), suppression of inflammation, improvement of skin and hair quality, prevention of rough skin and its improvement, hair growth, hair growth, hair loss prevention, addition of gloss, cleaning effect, fatigue
  • cosmetic effects such as relaxation, blood flow promotion, and hot bath effects
  • other effects such as incense, deodorization, thickening, preservative, and buffering can also be expected.
  • Foods and beverages health benefits such as nutritional supplementation, fatigue recovery, tonicity, cell activation (cell aging prevention) and cosmetic effects, improvement of taste, color tone and aroma, addition of gloss, stabilization, thickening, preservation, etc. It can be used for the purpose of In addition to this, in addition to expecting various cosmetic and pharmaceutical effects of each of the raw materials known so far, by combining them, it is intended to enhance the desired effects or to achieve multi-functional effects. It is also possible to make it a product that
  • Specific plants (crude drugs) to be used as raw materials include, for example, almonds (tonms), eyes (mushrooms), aokuzazu (seishou), aoki (aoki), aogiri or kenashi aogiri (mochi), aokutsu rafter (wood moth) , Aotema, Acacia, Akashama (red flax), Akasuri "fruit", Red clover, Red grapes, Akaminoki (logwood), Akamegashiwa (Red bud), Akaminokane or Akane or Akane (Abies carp root), Akaja Gio or Diow (Georax), Agi (Ami), Akira Karamatsu, Akinire (scarve), Aguai Gussu, Agua He (Ami Hemp), Akebi (Kotsu), Asa (Makohito), Maruba Asagao or Asagao (Kureushiko), Hydr
  • seaweeds green algae: Chlorella vulgaris, Chlorella pirenoidosa, Chlorella ellipsoidea, Aoroni (usubaa nori, susiao nonori, hira aonori, boua anori, Hosoeda aonori), Anorax (Aoosa)], seaweed (Macomb, Resil Sibe, Hosome kombu, Mitsuishi Kombu), Wakame, Hirome, Oo wakame, Giant Kelp (Macrocystis pirifera, Macrocystis integiforia, Neociticus leuttokeana), Hijiki, Hibamata, Umi Uchiwa, Usbius Miuchiwa, Kire Bano Sea urchin, Akaba Miuchichi, Kona Miuchichi, Okinauchichika, Usukiuchichiwa, Etsukaumiuchichiwa], seaweed [red algae: He
  • algae for example, green algae (Chlamydomonas: Chlamydomonas, Aka-yukimo, Dunariella: Dunaliella, Chlorococcus, Chlorococcus, Quanumimo: Culanomimo, Borvox, Borobox, Volvox, Palmera, Yomushimo, Omidoro, Hizaori Aumodoro, turugimidoro, Hibimidoro, Hyosseria: Anaaosa, Ami Aosa, Ami Aosa, Nagaa Osa, Kawanoris spp .: Anemonefish, Fritella spp., Siogusa Genus: Asclepacea, Anemone, Marimo, Valonia Genus, Tamamalloynia, : Scutellaria spp., Iwata spp .: Hashiwa-ta-ta, Azurego-ta-ta, Heraiwa-ta, Crop
  • Cyanobacteria Shuizenji nori: Suizenjinori, blue-green algae, Neridumus: Kawatake, Ishikage), Hassai, Uremeo, Rasenmo (Spirulina): Spirulina, Trichodesmium (Aikahoshio), etc.
  • Brown algae (Pyraella: Pilaera, Siomidro: Isogravus: isograpes, Isogawala: Isogawala, Scutellaria: Gunssen ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ ⁇ : ⁇ ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ ⁇ , Sanadagusa: Sanadagusa, Fuchurinamiji, Commonangusa: Haemugusa, Yahazugusa: Ezoyahaz, Yahazugusa, Ulaboshiyazu, Digamigusa, Umiuchika, Uumiuchiwa Metalicus, and it is used.
  • Red algae (Bornerus spp .: Bovine cormorant, Funorinoboschi, Amaranth spp .: Asabixanoli, Susabori, Upop Ruinoli, Oryza lava, Tasa, Fierytasa, Benitasa, Rhodoctona: Myrnoboconi, Akebonoomozuku: Akebo nomozu Genus: Tussockmonri, Tussock Monoli, Duckweed Shiranori, Beechnock Genus: Benimozuku, Hoso Beni Mozuku, Pinus spruce, Sakamatsu, Fusanori: Fusanori, Nisefsanori, Nisefusanami, Sodegalami, Gulls Genus: Tami Tadaki, Kagi Kenori Genus: Kaginori, Kagi Kenori, Tengusa Genus: Himetengusa, Haitengusa, Oobusa, Nambu Samurai,
  • Isomokka iso mokka, yukari genus: Yukari, hosoyokari, ibaranori genus: ibaranori, cyperus, taiibara, taiibara, guaibaranori, kijinoo genus: Kijinao, isodanshu genus: isodanshu, atsubanori: oshibanori, ogoriori ,, Miso Okonori, Kabanori, Benio Gonori, Fukure Shinori, Murasaki Kabanori, Shinkai Kaba Nori, Toge Kaba Nori, Kata Ogonori, Ryukyu Uo Nori, Erio orori, Itsutsuguinou, Yumigata Ogo nori, Kubi Reo, Nori Mosa Ogo nori, Kinuka Bano Li, Tengu Samo Doki genus: Hachijo Uo Teng, Fushi Kle Nori: Fushi Kle,
  • Heius banoli Cagius banoli, Jereus banoli, Susius banoli, Heius banoli, Usbanolimodoki: Usbanolimodoki, Ayanishiki: Aya Hermit crabs, ayayannus genera: ayatiane, dadia genera: enacidadia, sagedadia genera: isohagi, sikadadia, dazimodoki: dajimodoki, atogusa genera: muroitegusa, amyglossia, macri genera: macri, ariaceae genera: perianthus, yunai, perianthus, , Sasorhus sinensis, Sozo: ⁇ ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ :: ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ :: ⁇ ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ ⁇ , ⁇ :: ⁇ ⁇
  • Axle algae (Phyllus spp., Scutellaria spp., Hossylum spp .: Prunus spp., Liquonotanus spp., Flasks spp .: Hempen flasks, Chabo flask moss, Tripera sp. Etc.), yellow algae (Hydrolimus sp .: Hikarimo etc.) etc.
  • water-soluble elastin derivatives keratin and its degradation products or derivatives thereof, silk proteins and degradation products thereof or derivatives thereof, porcine or bovine hemocyte protein degradation products (globin peptides), bovine or porcine hemoglobin degradation products (hemin) , Hematin, heme, protoheme, heme iron etc.), milk, casein and its degradation products or derivatives thereof, skimmed milk powder and its degradation products or their derivatives , Lactoferrin or decomposed product thereof, egg ingredients, fish hydrolyzate, nucleic acid-related substance (ribonucleic acid, deoxyribonucleic acid), or the like.
  • any sites, cells, tissues, organs, metabolites, etc. derived from gene recombinants or cell fusions can also be used.
  • undifferentiated cell groups, cell groups in the process of differentiation, and the like obtained by cell culture of arbitrary sites, cells, tissues, organs and the like can be used.
  • Marine components Seawater such as deep water, for example, seawater salt, seawater dried matter, inorganic salt (sodium chloride, magnesium chloride, potassium chloride etc.) obtained from Dead Sea or Atlantic or Pacific Ocean, sea mud or mud Seaweed or mud (eg, silicon dioxide, titanium dioxide, aluminum oxide, iron oxide, iron oxide, manganese oxide, sodium oxide, potassium oxide, etc.), for example, Italy fango, Germany fango, Eifelfango, Kon fango, etc.
  • Microbial culture metabolite Yeast metabolite, yeast extract, bacterial metabolite, bacterial extract, mold or actinomycete metabolite, mold or actinomycete extract, natto fungus metabolite, natto extract, rice fermented extract Fermented extract of rice bran (red yeast, white mustard), euglena extract or degradation product thereof or water soluble derivative thereof, trehalose or derivative thereof, lactic acid fermented product of raw milk or skimmed milk powder, fermented product of leguminous plant lactic acid bacteria, coconut plant Lactic acid bacteria fermented products etc.
  • Inorganic pigments Silica, magnesium silicate, talc, kaolin, bentonite, mica, mica titanium, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, calcium oxide, calcium carbonate, magnesium carbonate, yellow iron oxide, Bengala, black iron oxide, gunjo, chromium oxide, chromium hydroxide, carbon black, calamine etc.
  • UV absorbing / blocking agent benzophenone derivative (2-hydroxy-4-methoxybenzophenone, 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone-5-sulfonic acid, sodium 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone-5-sulfonate, dihydroxy Dimethoxybenzophenone, sodium dihydroxydimethoxybenzophenone-sodium sulfonate, 2,4-dihydroxybenzophenone, tetrahydroxybenzophenone etc.
  • paraaminobenzoic acid derivatives paraaminobenzoic acid, ethyl paraaminobenzoate, glyceryl paraaminobenzoate, amyl paradimethylaminobenzoate, Octyl paradimethylaminobenzoate etc.
  • methoxycinnamic acid derivative ethyl paramethoxycinnamate, isopropyl paramethoxycinnamate, paramethoxycinnamic acid Octyl, 2-ethoxyethy
  • Whitening agents Paraaminobenzoic acid derivatives, salicylic acid derivatives, anthranilic acid derivatives, coumarin derivatives, amino acid compounds, benzotriazole derivatives, tetrazole derivatives, imidazoline derivatives, pyrimidine derivatives, dioxane derivatives, camphor derivatives, furan derivatives, pyrone derivatives, Nucleic acid derivative, allantoin derivative, nicotinic acid derivative, vitamin C or derivative thereof (vitamin C phosphate ester magnesium salt, vitamin C glucoside, etc.), vitamin E or derivative thereof, kojic acid or derivative thereof, oxybenzone, benzophenone, arbutin, guaiazulene, Shikonin, baicalin, baicalein, berberine, placenta extract, ellagic acid, rucinol etc.
  • Tyrosinase activity inhibitor Vitamin C or derivative thereof (vitamin C phosphate magnesium salt, vitamin C glucoside, etc.), hydroquinone or derivative thereof (hydroquinone benzyl ether, etc.), kojic acid or derivative thereof, vitamin E or derivative thereof, N-acetyltyrosine or its derivative, glutathione, hydrogen peroxide, zinc peroxide, placenta extract, ellagic acid, arbutin, rucinol, silk extract, plant extract (camomile, mulberry, gardenia, toucan, weeping rice, Clara, yomoki, honeysuckle) , Yellowfin, dokudami, matsuhodo, hakutomugi, hop, hawthorn, eucalyptus, eucalyptus, birch,retea, keihi, mankeissi, hamamelis, yamaguwa, longevity, bellflower, toshishi,
  • Astringent Succinic acid, allantoin, zinc chloride, zinc sulfate, zinc oxide, calamine, zinc paraphenol sulfonate, potassium aluminum sulfate, resorcinol, ferric chloride, tannic acid (including catechin compounds) and the like.
  • Peroxide lipid formation inhibitor ⁇ -carotene plant extract (sesame cell culture, sesame cultured cells, vitiligo, hyperglossia, hamamelis, clove, melissa, emmexica, birch, salvia, rosemary, south heaven, agez, ginkgo, green tea) and the like.
  • Anti-inflammatory agents ictamol, indomethacin, kaolin, salicylic acid, sodium salicylate, methyl salicylate, acetylsalicylic acid, diphenhydramine hydrochloride, d-camphor, dl-camphor, hydrocortisone, guaiazulene, camazulene, chlorpheniramine maleate, glycyrrhizin acid or its Salt, glycyrrhetinic acid or its salt, licorice extract, shikon extract, Agetsu extract, propolis etc.
  • Antibacterial, disinfecting and disinfecting agents Acrynol, sulfur, calcium gluconate, chlorhexidine gluconate, sulfamine, mercurochrome, lactoferrin or a hydrolyzate thereof, alkyl diaminoethyl glycine chloride solution, triclosan, sodium hypochlorite, chloramine T, Salachi powder, iodine compound, iodoform, sorbic acid or its salt, propionic acid or its salt, salicylic acid, dehydroacetic acid, parahydroxybenzoic acid esters, undecylenic acid, thiamine lauryl sulfate, thiamine lauryl nitrate, phenol, cresol, p -Chlorophenol, p-chloro-m-xylenol, p-chloro-m-cresol, thymol, phenethyl alcohol, O-phenylphenol, Irgasan CH3565, halocar
  • photosensitizer No. 201 photosensitizer No. 401, N- long chain acyl basic amino acid derivative and its acid shark salts, zinc oxide, hinokitiol, Sophora root, propolis, and the like.
  • Humectant Glycerin propylene glycol, 1,3-butylene glycol, hyaluronic acid or salts thereof, polyethylene glycol, chondroitin sulfate or salts thereof, water-soluble chitin or derivatives thereof or chitosan derivatives, pyrrolidone carboxylic acid or salts thereof, lactic acid Sodium, mini sasanishiki extract, natto bacteria metabolite, natto extract, larch water, white birch (white birch) or sap of sap of red pine, plant-derived ceramide, animal-derived ceramide
  • Elastase activity inhibitor Fluorophosphoric acid diisopropyl, plant extract (Augon, Hypericum vulgaris, Clara, Persimmon leaf, Kakihi, Gennox japonicus, Comfrey, Salvia, Salix palustris L., Boiled horse mackerel, B. napus), seaweed extract, etc.
  • Estrogen Estron, estradiol, ethynyl estradiol etc.
  • isoflavone isoflavone, oxendolone etc.
  • Peripheral vascular blood flow promoter Vitamin E or derivatives thereof Peripheral vascular blood flow promoter Vitamin E or derivatives thereof, cerebrum extract, garlic extract, ginseng extract, aloe extract, gentian extract, touki extract, cephalantin, carpronium chloride, minoxidil etc.
  • Metabolic activator Photosensitizer 301 hinokitiol, pantothenic acid or a derivative thereof, allantoin, placenta extract, biotin, pentadecanoic acid glyceride and the like.
  • Keratolytic agent Resorcinol, salicylic acid, lactic acid, urea and the like.
  • Oxidizing agent Hydrogen peroxide solution, sodium persulfate, ammonium persulfate, sodium perborate, urea peroxide, sodium percarbonate, sodium tripolyphosphate peroxide, sodium bromate, potassium bromate, sodium pyrophosphate pyrophosphate, Sodium peroxide, sodium silicate hydrogen peroxide adduct, sodium sulfate hydrogen peroxide adduct, sodium chloride hydrogen peroxide adduct, ⁇ -tyrosinase enzyme solution, mushroom extract, etc.
  • Hair remover Inorganic reducing agents such as strontium sulfate, sodium sulfide, barium sulfide and calcium sulfide, thioglycolic acid or salts thereof (calcium thioglycolate, sodium thioglycollate, lithium thioglycollate, magnesium thioglycollate , Strontium thioglycollate) etc.
  • Flavors Natural animal flavors such as musk, civet, kathrium, ambergris, anise essential oil, angelica essential oil, ylang ylang essential oil, iris essential oil, fennel essential oil, orange essential oil, cananga essential oil, caraway essential oil, cardamom essential oil, guaiac wood essential oil, Cumin essential oil, black letter essential oil, cinnamon essential oil, cinnamone essential oil, geranium essential oil, copaiba balsam essential oil, coriander essential oil, shioso essential oil, cedarwood essential oil, citronella essential oil, jasmine essential oil, gingergrass essential oil, cedar essential oil, spearmint essential oil, Daigo incense essential oil, tuberose essential oil, clove essential oil, orange flower essential oil, winter green essential oil, torubalsam essential oil, batchurie essential oil, rose essential oil, rose taro essential oil, persimmon essential oil, hiba essential oil, birch essential oil, puchigren essential oil, bay essential
  • Red cabbage pigment red rice pigment, red bean pigment, anatase pigment, red pigment, turmeric pigment, enj pigment, krill pigment, green pigment, caramel, gold, silver, gardenia pigment, corn pigment, onion pigment , Tamarind pigment, spirulina pigment, buckwheat whole herb pigment, cherry pigment, nori pigment, hibiscus pigment, grape juice pigment, marigold pigment, purple imo pigment, purple yam pigment, lac pigment, rutin etc.
  • Sweetener Sugar sweet tea, fructose, arabinose, galactose, xylose, stevia, mannose, maltose, honey, glucose, miraculin, monelin, licorice extract and the like.
  • Proteoglycans extracted from cartilage tissue, muscle tissue or skin tissue of fish, molluscs, birds or mammals according to the present invention are chondroprogenitor cell proliferation promotion, cartilage differentiation promotion, and cartilage calcification suppression more efficiently and with high purity. It has such excellent effects.
  • the proteoglycan obtained by the present invention can be used as a raw material for health food, health drink, pharmaceutical composition and cosmetic composition.

Abstract

魚類、軟体動物、鳥類もしくは哺乳類の軟骨組織、筋肉組織又は皮膚組織より抽出されるプロテオグリカンをより効率的で、かつ高純度に製造する方法を提供する。 プロテオグリカンを含有する生物学的試料から、酢酸溶液を用いてプロテオグリカンを抽出する工程で、当該生物学的試料の表面全体を酢酸溶液が流動的に接触するよう、好ましくは抽出液の対流速度を0.04~10.0cm/secとなるように制御し、且つ抽出中の酢酸溶液の温度を20~40℃に制御することを特徴とするプロテオグリカンの製造方法。

Description

プロテオグリカン及びこれを含む健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法 クロスリファレンス
 本出願は、2018年1月17日に日本国において出願された特願2018-005283号に基づく優先権を主張するものであり、当該出願に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。また、本願において引用した全ての特許、特許出願及び文献に記載された内容は全て、参照によりそのまま本明細書に援用される。
 本発明は、生物学的試料からプロテオグリカンをより効率的かつ高い純度で抽出する製造方法及びこれを含む健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法に関する。
 プロテオグリカンは、1本のコアタンパク質にコンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸等のグリコサミノグリカンが数本から数十本、共有結合した糖タンパク質であり、細胞外マトリックスの一つとして皮膚や軟骨など体内の広く分布している。
 グリコサミノグリカンは分岐をもたない長い直鎖構造を持ち、多数の硫酸基とカルボシキル基を持つため負に荷電しており、グリコサミノグリカン鎖はその電気的反発力のために伸びた形状をとる。また、糖の持つ水親和性により、多量の水を保持し、弾力や衝撃への耐性といった軟骨特有の機能を担っている。これまで、高純度のプロテオグリカンを効率よく製造する方法が研究されてきた。
 例えば、本出願人らが先に出願したサケ鼻軟骨からグアニジン塩酸塩を用いてプロテオグリカンを抽出する方法(特許文献1)や、酢酸を用いる方法(特許文献2)が知られている。その他に、アルカリを用いる方法(特許文献3)、クエン酸を用いる方法(特許文献4)、水を用いる方法(特許文献5)、界面活性剤の水溶液を用いる方法(特許文献6)などが報告されている。
 このように、プロテオグリカンの製造方法は種々検討されてきた。その中で本出願人らが実施してきた酢酸を用いる方法で抽出温度と抽出溶媒の流速を制御することにより、同じ抽出時間でも高い純度のままプロテオグリカンの収率を上げることができる。これまで報告されているプロテオグリカンの製造方法は、抽出溶媒の選択、原料となる生物学的試料の処理法や抽出温度の設定などがあるが、抽出温度の設定に加えて抽出液の対流速度の制御を行なっている報告はない。従来行なわれてきた方法ではある程度のプロテオグリカンの抽出は認められるが、品質の低下や何よりも収率の低さによる数量確保の為の時間的、経済的な観点からも満足するものではなかった。
特開2001-172296号公報 特開2002-69097号公報 国際公開2007/094248号 特開2012-236776号公報 国際公開2012/099216号 特開2014-9164号公報
 そこで本発明は、魚類、軟体動物、鳥類又は哺乳類から高純度のプロテオグリカンを効率的、かつより安価に製造する方法を提供することを目的とする。
 本発明者らは、プロテオグリカンの製造工程で酢酸を用いて、抽出温度と撹拌速度を制御して抽出することにより、糖タンパク質複合体であるプロテオグリカンを軟骨組織、その他のプロテオグリカンを含有する生物学的試料から高効率かつ高純度に、かつより安価に製造できることを見出し、本発明に至った。
 すなわち本発明は、以下の項を含む。
[項1]プロテオグリカンを含有する生物学的試料から、酢酸溶液を用いてプロテオグリカンを抽出する方法で、当該生物学的試料の表面全体を酢酸溶液が流動的に接触する条件で抽出を行い、且つ抽出中の酢酸溶液の温度が、20~40℃であることを特徴とするプロテオグリカンの製造方法。
[項2]プロテオグリカンを含有する生物学的試料の表面全体を酢酸溶液が流動的に接触する条件で抽出を行う際の酢酸溶液の流速が、0.04~10.0cm/sec である、項1記載のプロテオグリカンの製造方法。
[項3]抽出工程の後にプロテオグリカンを分離精製する工程を含む、項1又は2の何れかに記載のプロテオグリカンの製造方法。
[項4]プロテオグリカンを含有する生物学的試料が、魚類,軟体動物,鳥類,又は哺乳類の軟骨組織、筋肉組織、若しくは皮膚組織である項1~3の何れかに記載のプロテオグリカンの製造方法。
 本発明による製造方法は、従来の製造方法に比べ、プロテオグリカンを極めて簡単な方法で、高効率かつ高純度に抽出・精製することができる。抽出溶媒の選択、原料となる生物学的試料の処理や抽出温度の設定などこれまで報告されているプロテオグリカンの製造方法のような夾雑物の含有による品質の低下の懸念や収量確保の為の基原料の増加を必要とせず、品質の維持と高収率によるコスト削減効果も大きい。
製造例1による温度とプロテオグリカンの収率を示す図である。 製造例1による温度とプロテオグリカンの分子量を示す図である。 製造例2による流速とプロテオグリカンの収率を示す図である。 製造例2による流速とプロテオグリカンの分子量を示す図である。 製造例2で得られたプロテオグリカン(流速2.0cm/sec)のHPLCクロマトグラムである。 比較製造例1で得られたプロテオグリカンのHPLCクロマトグラムである。 本発明で得られたプロテオグリカンの軟骨前駆細胞増殖作用を表す。 本発明で得られたプロテオグリカンの軟骨分化作用を表す。 本発明で得られたプロテオグリカンの軟骨石灰化抑制作用を表す。
 本発明におけるプロテオグリカンを含む生物学的試料とは、例えば魚類、軟体動物、鳥類又は哺乳類の軟骨組織、筋肉組織もしくは皮膚組織に対して適用することができるが、その中でも軟骨組織が好ましい。本発明において使用される軟骨組織は、魚類、軟体動物、鳥類もしくは哺乳類、特にそれらの廃棄部位のいずれも利用することができる。本発明において軟骨組織とは、軟骨単独あるいは軟骨周辺部位、例えば骨、筋肉組織、皮膚組織等を含む組織のいずれも意味する。
 本発明においては、入手の容易性、及びコストの面などからサケの頭部に含まれる鼻軟骨組織由来のものが好適に用いられ、特に、青森県沿岸や北海道沿岸等で漁獲されたサケ(主にシロサケ)が、様々な加工品として処理される際、排出される頭部を使用することができる。
 また本発明では、サケの他、マス、エイ、サメ、タラ等の魚類由来軟骨組織、イカ、タコ等の軟体動物由来表皮、ニワトリ等の鳥類由来軟骨組織、さらにウシやクジラ等の哺乳動物由来軟骨組織も利用することができる。
 本発明で使用する酢酸としては食品用、工業用等何れでもよいが、その得られるプロテオグリカンの使用目的によって適宜選択する。酢酸溶液の濃度は、0.01~20重量%、好ましくは0.1~10重量%、より好ましくは1~8重量%、さらに好ましくは4~5重量%である。
 酢酸溶液への軟骨の抽出は、20~40℃で行なう。低温度に加温することによりプロテオグリカンの分解は殆ど起きないまま、糖タンパク質複合体として効率よく抽出できる。
 抽出は軟骨表面全体を酢酸溶液が流動的に接触する条件で行い、この際の酢酸溶液の流速が、0.04~10.0cm/secとなるように液に流れを起こすことが重要である。好ましくは流速が0.04~5.0cm/secであることが望ましい。この流れはスターラーやミキサーによる水平方向の円運動だけでなく、液を循環させるなどの方法により垂直方向、さらに軟骨を置いた上に一方から他方へ液を流すような一定方向の流れなど何れでも構わないが、液が常に対流することで抽出効率の向上が可能である。酢酸溶液が生物学的試料と流動的に接触する工程は、所望の収率又は収量でプロテオグリカンを抽出するために十分な時間実施すればよく、抽出工程中連続して、所定の時間をおいて間欠的に、又は抽出工程の一部であってもよい。この流動的に接触する時間は、抽出温度や酢酸溶液の流速に合わせて適宜設定することができる。抽出が終了した溶液はプロテオグリカンを抽出した後の残渣を多く含むことから、これらをろ過、遠心分離、その他の方法で取り除くことが好ましい。
 次に、プロテオグリカン抽出液を粉末セルロース及び/又は吸油マットなどを用いることにより、混入すると考えられる脂質成分を簡便に吸着除去する。
 脂質除去後の液から得られるプロテオグリカンは適当な分画分子量を有する分離膜等で固液分離することにより、抽出液を回収する。この操作において、5万以上の分離膜等を使用すれば液相から低分子量の夾雑物(コラーゲン等)も除去することができ、プロテオグリカンの純度を上げることが可能である。好ましくは、10万以上の分離膜等を用いることが望ましい。さらに、得られた分画液は真空凍結乾燥機を用いて固形物にしてもよい。あるいは、スプレードライヤーで乾燥させ、粉末状固形分とすることもできる。
 本発明により得られたプロテオグリカンは極めて簡単な方法でサケ鼻軟骨等の生物学的試料から高効率かつ高純度に抽出、精製できる。本発明により従来、必要量を得る為に行っていた仕込み量の増加や繰り返し抽出が必要なく、時間的にも経済的にも大きなメリットとなる。
 さらに、本発明で得られたプロテオグリカンの軟骨前駆細胞増殖作用、軟骨分化促進作用及び軟骨石灰化抑制作用において評価した結果、いずれの試験においても従来の酢酸を使用して低温で浸漬抽出されたプロテオグリカンと同等以上の効果が得られ、従来法で得られるプロテオグリカンに比べ純度の高い品質を有することが確認された。以下に、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
(製造例1)
 -30℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を400g用意し、出発原料とした。5重量%の酢酸水溶液2000gに出発原料を投入し、抽出温度を4℃、20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃で72時間抽出した。
 それぞれの温度における溶出液をステンレススチールメッシュ(150μm)でろ過し、不溶物を除去した。次に、吸油マット(前田工繊社製、商品名「油吸着シートSP-1300N(DX)」で液上層の油を吸着させた後、粉末セルロース(日本製紙社製、商品名「KCフロックW-400G」)を加え30分撹拌後ろ過した。ろ液を分子量10万のセルロースエステルメンブラン透析チューブで十分に透析し、得られた液を凍結乾燥し、各抽出温度のプロテオグリカンを得た。その結果を図1に示す。
 結果は図1に示すように20℃~40℃の抽出温度において高い収率を示した。4℃及び50℃以上の加熱は収率が低下した。さらに、図2に、抽出温度と分子量の関係を観察した結果を示した。抽出温度4℃~40℃は分子量がほぼ同等で、50℃以上では分子量が低下し、プロテオグリカンが分解していた。これらの結果により抽出温度は20~40℃が最も抽出効率が良いことが判明した。
(製造例2)
 -30℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を16g用意し、出発原料とした。この出発原料と5重量%の酢酸水溶液80gを縦向きに設置したオープンカラムに入れ、下部からシリコンチューブでポンプを接続し、カラムの上部にチューブをゴム栓でつないで液が一定の速さで循環するようにした。カラムの中に液の速さが1cm/sec、5cm/secになるようポンプで調整し、6時間循環させ抽出を行なった。
 この抽出液をステンレススチールメッシュ(150μm)でろ過し、不溶物を除去した。次に、吸油マット(前田工繊社製、商品名「油吸着シートSP-1300N(DX)」で液上層の油を吸着させた後、粉末セルロース(日本製紙社製、商品名「KCフロックW-400G」)を加え30分撹拌後ろ過した。ろ液を分子量10万のセルロースエステルメンブラン透析チューブで十分に透析し、得られた液を凍結乾燥し、プロテオグリカンを得た。抽出時の流速が1cm/secでは10mg、5cm/secでは25mgのプロテオグリカンが得られた。
 さらに流速をあげて検討をするにはカラムを用いた抽出条件では難しいため、撹拌による液の流速で検討を実施した。-30℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を400g用意し、出発原料とした。この出発原料と5重量%の酢酸水溶液2000gに出発原料を投入し、40℃で流速が0(浸漬)、0.04、0.1、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0cm/secとなるように撹拌しながら72時間抽出した。
 この溶出液をステンレススチールメッシュ(150μm)でろ過し、不溶物を除去した。次に、吸油マット(前田工繊社製、商品名「油吸着シートSP-1300N(DX)」で液上層の油を吸着させた後、粉末セルロース(日本製紙社製、商品名「KCフロックW-400G」)を加え30分撹拌後ろ過した。ろ液を分子量10万のセルロースエステルメンブラン透析チューブで十分に透析し、得られた液を凍結乾燥し、プロテオグリカンを得た。その結果を図3に示す。
 結果は図3に示すように撹拌を行なわない流速0cm/secの浸漬抽出に比べ、流速0.04、0.1、1.0、2.0、5.0、10.0cm/secは高い収率を示した。しかし、流速20.0cm/secでは浸漬抽出よりも収率は低下した。さらに、図4に示すように、流速における分子量の関係を観察したところ、流速に関わらず分子量は一定であった。これらの結果により抽出時の流速は0.04~10.0cm/secが最も効率が良いことが判明した。また、流速2.0cm/secで抽出されたプロテオグリカンのHPLCクロマトグラムを図5に示した。
(製造例3)
 国内産鶏のヤゲン軟骨から手作業で肉片を除去した軟骨を50g用意し、出発原料とした。4重量%の酢酸水溶液250gに出発原料を投入し、40℃で流速が2.0cm/secとなるように撹拌しながら72時間抽出した。
 この溶出液をステンレススチールメッシュ(150μm)でろ過し、不溶物を除去した。次に、吸油マット(前田工繊社製、商品名「油吸着シートSP-1300N(DX)」で液上層の油を吸着させた後、粉末セルロース(日本製紙社製、商品名「KCフロックW-400G」)を加え30分撹拌後ろ過した。ろ液を分子量10万のセルロースエステルメンブラン透析チューブで十分に透析し、得られた液を凍結乾燥し、1.5gのプロテオグリカンを得た。
(比較製造例1)
 -30℃で冷凍保管したシロサケの頭部から摘出した鼻軟骨を40g用意し、出発原料とした。軟骨を包丁で5mm程度にスライスしたものをアセトンに浸漬し、鼻軟骨から脱脂、脱水を行なった。処理後の鼻軟骨を減圧乾燥し、12gの乾燥軟骨を得た。この乾燥軟骨を0.06N水酸化ナトリウム溶液200gに投入し、40℃で流速が2.0cm/secとなるように撹拌しながら72時間抽出した。
 この溶出液をステンレススチールメッシュ(150μm)でろ過し、軟骨を除去した。次に、吸油マット(前田工繊社製、商品名「油吸着シートSP-1300N(DX)」で液上層の油を吸着させた後、粉末セルロース(日本製紙社製、商品名「KCフロックW-400G」)を加え30分撹拌後ろ過した。ろ液を分子量10万のセルロースエステルメンブラン透析チューブで十分に透析し、得られた液を凍結乾燥して、プロテオグリカン30mgを得た。HPLCにて得られたプロテオグリカンのHPLCクロマトグラムは図6のとおりであった。
 以上行った製造例のそれぞれの製造方法によるプロテオグリカンの収率のまとめを表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 表1に示したとおり、プロテオグリカンの酢酸による抽出は低温や50℃以上よりも20~40℃において収率が増加し、さらに浸漬するよりも抽出時に流速が0.04~10.0cm/secとなるように液を流動的に接触させることによって品質はそのままに収率が増加することが確認された。また、本法によりアルカリ溶液で抽出を行なっても収率は低く、同様の効果は得られなかった。
(プロテオグリカンの測定)
 製造例2(流速2.0cm/sec)及び比較製造例1で得たプロテオグリオカンのHPLC分析条件は以下のとおりである。
1)カラム:TSKgel G5000-PWXL Φ7.8mm×300mm(東ソー社製)
2)溶出液:pH6.8 リン酸緩衝液
  流速:0.5mL/min
  カラム温度:40℃
3)検出器:示唆屈折率検出器(RID-10A 島津製作所社製)
4)導入量:50μL
5)分子量マーカー:Shodex STANDARD P-82(昭和電工社製)
(軟骨前駆細胞増殖作用の評価)
 軟骨基質は加齢により変性し、さらに変形性関節症を発症した軟骨組織では軟骨細胞数が減少しており、それに伴い軟骨基質をつくることができなくなり、軟骨がすり減ることが知られている。軟骨多段階分化モデルのATDC5を用いて軟骨前駆細胞増殖に及ぼす作用について評価を行った。
[試料]
A:製造例2で得たプロテオグリカン(40℃・流速2.0cm/sec抽出)
試料は、最終培地添加濃度になるように調製して添加した。比較対照として、
B:製造例2で得たプロテオグリカン(40℃・浸漬抽出)
C:比較製造例1で得たプロテオグリカン
を試験に供した。また、コントロールは非添加とした。
[試験方法]
ATDC5(理化学研究所)に1200cells/wellで96well培養プレートに播種し、24時間後に0.5%血清及びDMEM/F12(transferrin, sodium selenite添加)に置換し、試料を125μg/mLになるように添加、5%CO、37℃の条件にて7日間培養を行った。培養後、細胞数をMTT法により測定し、コントロールを100とした際の相対値により各試料の軟骨細胞増殖促進作用を解析した。
[結果]
試験結果を図7に示す。試料(C)と比べ、試料(A)、(B)には、有意な軟骨前駆細胞増殖促進作用が認められた。本発明で得られたプロテオグリカンは、従来法で得られるプロテオグリカンに比べ純度の高い品質を有する優れた軟骨前駆細胞増殖促進剤として有用であると考えられた。
(軟骨分化促進作用の評価)
 軟骨多段階分化モデルのATDC5を用いて、軟骨分化促進に及ぼす作用について評価を行った。
[試料]
A:製造例2で得たプロテオグリカン(40℃・流速2.0cm/sec抽出)
試料は、最終培地添加濃度になるように調製して添加した。比較対照として、
B:製造例2で得たプロテオグリカン(40℃・浸漬抽出)
C:比較製造例1で得たプロテオグリカン
を試験に供した。また、コントロールは非添加とし、ポジティブコントロールにはインスリン10μg/mLを試験に供した。
[試験方法]
ATDC5(理化学研究所)を5×10cells/wellで12well培養プレートに播種し、5%血清及びDMEM/F12(transferrin, sodium selenite 添加)に置換し、5%CO、37℃の条件にて7日間培養を行いコンフルエントの状態にした。その後、各試料を50μg/mLになるように添加して21日間培養を行い、培養後、アルシアンブルーで染色し取得した画像をWinROOFにて定量解析することによって軟骨分化能を評価した。
[結果]
試験結果を図8に示す。試料(C)に比べ、試料(A)、(B)は、インスリン非依存的に有意な軟骨分化促進作用が認められた。この結果から本発明で得られたプロテオグリカンは、従来法で得られるプロテオグリカンに比べ純度の高い品質を有する優れた軟骨分化促進剤として有用であると考えられた。
(軟骨石灰化抑制作用の評価)
 軟骨基質は加齢により変性し、さらに変形性関節症を発症した軟骨組織では、軟骨細胞数が減少しており、それに伴い軟骨基質をつくることができなくなり、軟骨がすり減る。また、軟骨の異所石灰化を起こすことで骨同士がこすれ合うようになり、症状が進行することが知られている。軟骨多段階分化モデルのATDC5を用いて石灰化抑制に及ぼす作用について評価を行った。
[試料]
A:製造例2で得たプロテオグリカン(40℃・流速2.0cm/sec抽出)
試料は、最終培地添加濃度になるように調製して添加した。比較対照として、
B:製造例2で得たプロテオグリカン(40℃・浸漬抽出)
C:比較製造例1で得たプロテオグリカンを試験に供した。また、コントロールは非添加とした。
[試験方法]
ATDC5(理化学研究所)を5×10cells/wellで12well培養プレートに播種し、5%血清及びDMEM/F12(transferrin, sodium selenite 添加)を用いて、5%CO、37℃の条件にて7日間培養を行いコンフルエントの状態にした。その後、インスリン添加条件にて、さらに21日間培養し、軟骨を形成した。その後、各試料を50μg/mLになるように添加し、5%血清及びα-MEM (transferrin, sodium selenite,インスリン添加)を用い、3%CO、37℃の条件にてさらに24日間培養を行い、培養後、アリザリンレッドで石灰化部位を染色し、取得した画像をWinROOFにて定量解析することによって軟骨石灰化抑制能を評価した。さらに、アルシアンブルー染色にて培養52日目の軟骨状態を評価した。
[結果]
試験結果を図9に示す。試料(C)に比べ、試料(A)、(B)は、顕著な軟骨石灰化抑制が認められた。これらの結果から、本発明で得られたプロテオグリカンは、従来法で得られるプロテオグリカンに比べ純度の高い品質を有する優れた軟骨石灰化抑制剤として有用であると考えられた。
 従って、本発明の他の観点において、本発明により得られたプロテオグリカンを用いた健康食品又は健康飲料、化粧料組成物又は医薬品組成物等が提供される。これらの具体例としては、運動器系の改善を主たる目的としたものに限らず、栄養補給,滋養強壮,疲労回復,体質改善,美容・痩身等のあらゆる目的の健康志向の加工食品、栄養補助食品やドリンクの他,ふりかけ、ハーブソルト、ソース、ドレッシング等の調味料,ゼリー、ガム、キャンディ、ヨーグルト、タブレット、清涼飲料水等の一般嗜好食品又は飲料,注射薬剤,服用薬剤が上げられる。
 すなわち、本発明の1つの実施形態におけるプロテオグリカンを含む健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法は、
(a)プロテオグリカンを含む生物学的試料を、0.01~20重量%の酢酸溶液と流動条件下に接触させてプロテオグリカンを酢酸溶液中に抽出する工程、ここで、この酢酸溶液は生物学的試料の表面全体を流動し、且つ抽出中の酢酸溶液の温度が20~40℃であり、
(b)抽出後の酢酸溶液からプロテオグリカンを分離精製する工程、及び
(c)前記分離精製されたプロテオグリカンを、前記健康食品、健康飲料、又は化粧料組成物の基材に添加する工程を含むことを特徴とする。
 好ましい実施形態において、前記精製されたプロテオグリカンが、軟骨前駆細胞の増殖促進、軟骨分化促進及び/又は軟骨石灰化抑制において改善された作用を有することを特徴とする。
 医薬品又は化粧料組成物の具体例としては、1)局所又は全身用の薬用外用剤、皮膚洗浄料、皮膚化粧料類、2)頭皮・頭髪に適用する薬用又は化粧用の製剤類、3)浴湯に投じて使用する薬用又は化粧用の浴用剤、4)人体用の消臭・防臭剤、5)歯みがき剤、洗口剤、含嗽剤等の薬用又は化粧用の口腔用剤、6)皮膚貼付用シート、化粧用シート、化粧用コットン、衛生用品、衛生綿類、ウエットティッシュなどに適宜配合して使用できる。アンプル、カプセル、粉末(パウダー)、顆粒、固形、溶液、ゲル、気泡、エマルジョン、シート、ミスト、スプレー剤など利用上の適当な外用剤形態とすることができる。
 このような外用剤には、クリーム、ゲル、軟膏、液状等の薬用外用剤類、化粧水、乳液、クリーム、軟膏、ジェル、ローション、オイル、パック、ミスト、顔面用化粧シートなどの基礎化粧料、ひげ剃り用剤、洗顔料、皮膚洗浄料(石けん類を含む)、シャンプー、リンス、ヘアートリートメント、整髪料、パーマ剤、ヘアートニック、染毛料、育毛・養毛料などの薬用又は化粧用頭髪料、ファンデーション、口紅、頬紅、アイシャドウ、アイライナー、マスカラなどのメークアップ化粧料、香水類、皮膚用消臭剤、制汗剤、入浴剤、マウスウォッシュ、歯磨き剤、口中清涼剤等が含まれる。
 健康食品又は健康飲料,医薬品組成物,化粧料組成物は、上記方法により製造したプロテオグリカンを必要に応じて下記に例示する成分や添加剤を任意に選択し配合した基材に添加して製造することができる。
(1)各種油脂類
 アボガド油、アーモンド油、ウイキョウ油、エゴマ油、オリーブ油、オレンジ油、オレンジラファー油、ゴマ油、カカオ脂、カミツレ油、カロット油、キューカンバー油、牛脂脂肪酸、ククイナッツ油、サフラワー油、シア脂、液状シア脂、大豆油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、パーシック油、ヒマシ油、綿実油、落花生油、タートル油、ミンク油、卵黄油、パーム油、パーム核油、モクロウ、ヤシ油、牛脂、豚脂、スクワレン、スクワラン、プリスタン又はこれら油脂類の水素添加物(硬化油等)等。
(2)ロウ類
 ミツロウ、カルナバロウ、鯨ロウ、ラノリン、液状ラノリン、還元ラノリン、硬質ラノリン、カンデリラロウ、モンタンロウ、セラックロウ、ライスワックス等。
(3)鉱物油
 流動パラフィン、ワセリン、パラフィン、オゾケライド、セレシン、マイクロクリスタンワックス等。
(4)脂肪酸類
 ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ドコサヘキサエン酸、エイコサペンタエン酸、12-ヒドロキシステアリン酸、ウンデシレン酸、トール油、ラノリン脂肪酸等の天然脂肪酸、イソノナン酸、カプロン酸、2-エチルブタン酸、イソペンタン酸、2-メチルペンタン酸、2-エチルヘキサン酸、イソペンタン酸等の合成脂肪酸。
(5)アルコール類
 エタノール、イソピロパノール、ラウリルアルコール、セタノール、ステアリルアルコール、オレイルアルコール、ラノリンアルコール、コレステロール、フィトステロール、フェノキシエタノール等の天然アルコール、2-ヘキシルデカノール、イソステアリルアルコール、2-オクチルドデカノール等の合成アルコール。
(6)多価アルコール類
 酸化エチレン、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、エチレングリコールモノエチルエーテル、エチレングリコールモノブチルエーテル、ジエチレングリコールモノメチルエーテル、ジエチレングリコールモノエチルエーテル、ポリエチレングリコール、酸化プロピレン、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、ペンチルグリコール、グリセリン、ペンタエリトリトール、トレイトール、アラビトール、キシリトール、リビトール、ガラクチトール、ソルビトール、マンニトール、ラクチトール、マルチトール等。
(7)エステル類
 ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸ブチル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸ミリスチル、オレイン酸オレイル、オレイン酸デシル、ミリスチン酸オクチルドデシル、ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル、乳酸セチル、乳酸ミリスチル、フタル酸ジエチル、フタル酸ジブチル、酢酸ラノリン、モノステアリン酸エチレングリコール、モノステアリン酸プロピレングリコール、ジオレイン酸プロピレングリコール等。
(8)金属セッケン類
 ステアリン酸アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリン酸カルシウム、パルミチン酸亜鉛、ミリスチン酸マグネシウム、ラウリン酸亜鉛、ウンデシレン酸亜鉛等。
(9)ガム質、糖類又は水溶性高分子化合物
 アラビアゴム、ベンゾインゴム、ダンマルゴム、グアヤク脂、アイルランド苔、カラヤゴム、トラガントゴム、キャロブゴム、クインシード、寒天、カゼイン、乳糖、果糖、ショ糖又はそのエステル、トレハロース又はその誘導体、デキストリン、ゼラチン、ペクチン、デンプン、カラギーナン、カルボキシメチルキチン又はキトサン、エチレンオキサイド等のアルキレン(C2~C4)オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル(C2~C4)キチン又はキトサン、低分子キチン又はキトサン、キトサン塩、硫酸化キチン又はキトサン、リン酸化キチン又はキトサン、アルギン酸又はその塩、ヒアルロン酸又はその塩、コンドロイチン硫酸又はその塩、ヘパリン、エチルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシエチルセルロース、カルボキシエチルセルロースナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ニトロセルロース、結晶セルロース、ポリビニルアルコール、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメタアクリレート、ポリアクリル酸塩、ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイド等のポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物、カルボキシビニルポリマー、ポリエチレンイミン等。
(10)界面活性剤
 アニオン界面活性剤(アルキルカルボン酸塩、アルキルスルホン酸塩、アルキル硫酸エステル塩、アルキルリン酸エステル塩)、カチオン界面活性剤(アルキルアミン塩、アルキル四級アンモニウム塩)、両性界面活性剤:カルボン酸型両性界面活性剤(アミノ型、ベタイン型)、硫酸エステル型両性界面活性剤、スルホン酸型両性界面活性剤、リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤(エーテル型非イオン界面活性剤、エーテルエステル型非イオン界面活性剤、エステル型非イオン界面活性剤、ブロックポリマー型非イオン界面活性剤、含窒素型非イオン界面活性剤)、その他の界面活性剤(天然界面活性剤、タンパク質加水分解物の誘導体、高分子界面活性剤、チタン・ケイ素を含む界面活性剤、フッ化炭素系界面活性剤)等。
(11)各種ビタミン類
 ビタミンA群:レチノール、レチナール(ビタミンA1)、デヒドロレチナール(ビタミンA2)、カロチン、リコピン(プロビタミンA)、ビタミンB群:チアミン塩酸塩、チアミン硫酸塩(ビタミンB1)、リボフラビン(ビタミンB2)、ピリドキシン(ビタミンB6)、シアノコバラミン(ビタミンB12)、葉酸類、ニコチン酸類、パントテン酸類、ビオチン類、コリン、イノシトール類、ビタミンC群:ビタミンC酸又はその誘導体、ビタミンD群:エルゴカルシフェロール(ビタミンD2)、コレカルシフェロール(ビタミンD3)、ジヒドロタキステロール、ビタミンE群:ビタミンE又はその誘導体、ユビキノン類、ビタミンK群:フィトナジオン(ビタミンK1)、メナキノン(ビタミンK2)、メナジオン(ビタミンK3)、メナジオール(ビタミンK4)、その他、必須脂肪酸(ビタミンF)、カルニチン、フェルラ酸、γ-オリザノール、オロット酸、ビタミンP類(ルチン、エリオシトリン、ヘスペリジン)、ビタミンU等。
(12)各種アミノ酸類 バリン、ロイシン、イソロイシン、トレオニン、メチオニン、フェニルアラニン、トリプトファン、リジン、グリシン、アラニン、アスパラギン、グルタミン、セリン、システイン、シスチン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ヒドロキシリジン、アルギニン、オルニチン、ヒスチジン等や、それらの硫酸塩、リン酸塩、硝酸塩、クエン酸塩、或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体等。
(13)植物又は動物系原料由来の種々の添加物
 これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工(例えば、粉砕、製粉、洗浄、加水分解、醗酵、精製、圧搾、抽出、分画、ろ過、乾燥、粉末化、造粒、溶解、滅菌、pH調整、脱臭、脱色等を任意に選択、組合わせた処理)を行い、各種の素材から任意に選択して供すれば良い。
 植物又は動物系原料由来の添加物を得るにあたり、抽出を行う際に用いる溶媒については、供する製品の使用目的、種類、或いは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、通常では、水、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール、ブタノール、イソブタノール等の低級アルコール或いは含水低級アルコール、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、グリセリン等の多価アルコール或いは含水多価アルコール、アセトン、酢酸エチル等の各種有機溶媒の中から選ばれる1種若しくは2種以上の混液を用いるのが望ましい。但し、用途により有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用したり、あるいは抽出後に除去しやすいエタノールを採用し、単独又は水との任意の混液で用いたりすれば良く、又、搾取抽出したものでも良い。
 植物又は動物系原料由来の添加物を、全身用又は局所用の外用剤、化粧品類に供する場合、皮膚や頭髪の保護をはじめ、保湿、感触・風合いの改善、柔軟性の付与、刺激の緩和、芳香によるストレスの緩和、細胞賦活(細胞老化防止)、炎症の抑制、肌質・髪質の改善、肌荒れ防止及びその改善、発毛、育毛、脱毛防止、光沢の付与、清浄効果、疲労の緩和、血流促進、温浴効果等の美容的効果のほか、香付け、消臭、増粘、防腐、緩衝等の効果も期待できる。
 飲食品類においては、栄養補給、疲労回復、強壮、細胞賦活(細胞老化防止)等の健身並びに美容的効果をはじめ、味覚の改善、色調や芳香、光沢の付与、安定化、増粘、防腐等の目的で使用することができる。更にこの他にも、これまでに知られている各原料素材の様々な美容的、薬剤的効果を期待し、これらを組合わせることによって目的とする効果の増進を図ったり、多機能的な効果を期待した製品とすることも可能である。
 原料とする具体的な植物(生薬)としては、例えば、アーモンド(へん桃)、アイ(藍葉)、アオカズラ(清風藤)、アオキ(青木)、アオギリ又はケナシアオギリ(梧桐)、アオツヅラフジ(木防巳)、アオテンマ、アカシア、アカショウマ(赤升麻)、アカスグリ「果実」、アカツメクサ、アカブドウ、アカミノキ(ログウッド)、アカメガシワ(赤芽柏)、アカミノアカネ又はセイヨウアカネ又はアカネ(茜草根)、アカヤジオウ又はジオウ(地黄)、アギ(阿魏)、アキカラマツ、アキニレ(榔楡皮)、アグアイー・グァスー、アグアヘ(オオミテングヤシ)、アケビ(木通)、アサ(麻子仁)、マルバアサガオ又はアサガオ(牽牛子)、アジサイ(紫陽花)、アシタバ(明日葉)、アズキ(赤小豆)、アスナロ、アセロラ、アセンヤク(阿仙薬)、アチラ(ショクヨウカンナ)、アニス、アビウ、アビウラーナ、アブラナ、アベマキ「果実」、アボカド、アマ、アマチャ(甘茶)、アマチャヅル、アマドコロ(玉竹)、アマナ(光慈姑)、アマランサス(ヒユ、ハゲイトウ、ヒモゲイトウ、センニンコク、スギモリゲイトウ、ホソアオゲイトウ、アオゲイトウ、ハリビユ、アオスズラン、アマラントウス・ヒポコンドリアクス)、アミガサユリ又はバイモ(貝母)、アリストロメリア(ユリズイセン)、アルカナ(アルカンナ)、アルガローボ(キャベ)、アルテア、アルニカ、アルピニア又はカツマダイ(ソウズク)、アロエ(蘆薈)、アロエベラ、アンジェリカ、アンズ又はホンアンズ(杏仁)、アンソッコウ(安息香)、イエローサポテ、イガコウゾリナ(地胆頭)、イカリソウ又はヤチマタイカリソウ(インヨウカク)、イグサ(灯心草)、イタドリ(虎杖根)、イチイ(一位)、イチゴ、イチジク(無花果「果実、葉」)、イチハツ(一初)、イチビ(冬葵子)、イチヤクソウ(一薬草)、イチョウ(銀杏「種子、葉」)、イトヒメハギ(遠志)、イナゴマメ、イヌナズナ(テイレキシ)、イヌビユ(ホナガイヌビユ)、イネ「種子、種皮」、イノンド「種子」、イブキジャコウソウ、イラクサ、イランイラン、イワタバコ(岩萵苣)、イワヒバ又はイワマツ(巻柏)、インゲンマメ、ウーロン茶、ウイキョウ(茴香)、ウィート(チブサノキ)、ウキヤガラ(三稜)、ウグイスカグラ「果実」、ヒメウイキョウ、ウコン(鬱金)、ウキクサ(浮萍)、ウスバサイシン又はケイリンサイシン又はオウシュウサイシン(細辛)、ウスベニアオイ、ウスベニタチアオイ、ウチョウラン、ウツボグサ(夏枯草)、ウド又はシシウド(羌活、独活、唐独活)、ウニャデガト(ウンカリア、キャッツクロー)、ウバ茶、ウメ(烏梅「種子、果肉」)、ウラジロガシ、ウワウルシ(クサコケモモ)、ウンシュウミカン(陳皮)、ウンボク、エストラゴン、エゾウコギ(蝦夷五加)、エゾスズラン、エチナシ(ホソバムラサキバレンギク)、エニシダ、エノキタケ(榎茸)、エビスグサ又はカッシア・トーラ(決明子)、エルカンプレ、エルダーベリー「果実」、エレミ、エリンギィ又はプレロータスエリンジ、エンジュ(槐花、槐花米)、エンドウ、オウギ又はキバナオウギ(黄耆)、ナルコユリ又はカギクルマバナルコユリ(黄精)、オウヒササノユキ又はササノユキ、オウレン(黄連)、オオガタホウケン、オオカラスウリ(カロコン)、オオグルマ(土木香)、オオツヅラフジ(防己)、オオバコ(車前子、車前草)、オオバナアザミ(祁州漏芦、白頭翁)、オオハシバミ(榛子)、オオハシラサボテン、オオバナオケラ又はオケラ(白朮)、オオバナサルスベリ(バナバ)、オオバヤシャブシ「果実」、オオホシグサ(穀精草)、オオミアカテツ、オオミサンザシ又はサンザシ(山査子)、オオミヤシ、オオムギ(大麦)、オカ、オカゼリ(蛇床子)、オクラ「果実」、オグルマ(旋覆)、オクルリヒゴタイ(禹州漏芦、藍刺頭)、オタネニンジン又はトチバニンジン (人参)、オトギリソウ又はコゴメバオトギリソウ又はセイヨウオトギリソウ(弟切草)、オドリコソウ(続断)、オナモミ(蒼耳子)、オニグルミ、オニドコロ又はトコロ又はナガドコロ(ヒカイ)、オニノヤガラ(天麻)、オニユリ又はササユリ又はハカタユリ(百合)、オノエラン、オノニス、オヒョウ(裂葉楡)、オミナエシ(敗醤)、オユーコ、オランダカラシ(クレソン)、オランダゼリ、オランダビユ、オランダミツバ、オリーブ「果実、種子、葉」、オレガノ、オレンジ「果実、果皮」、カイケイジオウ(熟地黄)、カカオ「果実、果皮、種子」、カキ(柿蒂「葉」)、カギカズラ(釣藤鈎)、カキドオシ又はカントリソウ(蓮銭草)、カキラン、ガクアジサイ、カシア、カジノキ(楮実「果実」)、ガジュツ(莪朮)、カシワ(槲樹、槲葉)、カスカリラ、カスカラサグラダ、カスミソウ、カセンソウ、カニクサ(金沙藤)、カニーワ、カーネーション、カノコソウ(吉草根)、カバ、カバノキ又はシダレカンバ(白樺)、ガーベラ、カボチャ、カポックノキ「種子」、カホクサンショウ(蜀椒)、ガマ(蒲黄)、カミツレ又はローマカミツレ、カミヤツデ(通草)、カムカム(カモカモ)、カラー、カラクサケマン、カラスウリ又はシナカラスウリ(王瓜)、カラスビシャク(半夏)、カラスムギ、ガラナ「種子」、カラホオ(厚朴)、カラヤ、ガリュウ、カリン(木瓜)、ガルシニア、カワミドリ、カワラサイコ(委陵菜、翻白草)、カワヂシャ、カワラタケ、カワラナデシコ(石竹)又はエゾカワラナデシコ(瞿麦、瞿麦子)、カワラニンジン(青蒿)、カワラヨモギ(茵チン蒿)、カンスイ(甘遂)、カンゾウ(甘草)、カンタラアサ、カンデリラ、カントウ、カンナ、カンラン、キイチゴ(エゾイチゴ、オランダイチゴ、エビガライチゴ、ナワシロイチゴ、モミジイチゴ、ヨーロッパキイチゴ)、キウイ「果実、葉」、キカラスウリ(瓜呂根)、キキョウ(桔梗、桔梗根)、キク(菊花、シマカンギク、チョウセンノギク)、キクタニギク、キササゲ(梓実)、ギシギシ(羊蹄根)、キジツ(枳実)、キズタ、キダチアロエ、キダチハッカ、キナ、キナノキ(シンコーナ、アカキナノキ)、キヌア(キノア)、キハダ(黄柏)、キマメ、ギムネマ・シルベスタ、キメンカク、キャベツ、キャベブ「未熟果」、キャラウェー、キュウリ、ギョリュウ(西河柳、てい柳)、キラジャ・サポナリア、キラヤ、キランソウ(金瘡小草)、キンカン「果実」、キンキジュ、ギンセカイ、キンブセン、キンマ、キンミズヒキ(仙鶴草)、キンラン、ギンラン、キンリョウヘン、グァペーバ・ヴェルメーリャ、グアバ「果実」、グアユーレ、クェルクス・インフェクトリア(没食子)、ククイナッツ、クゲヌマラン、クコ(枸杞、枸杞子、枸杞葉、地骨皮)、クサスギカズラ(天門冬)、クズ(葛根)、クスノキ、グースベリー「果実」、クソニンジン(黄花蒿)、クティティリバー、クチナシ(山梔子)、クヌギ(樸ソウ)、クプアス、クベバ、クマザサ、クマツヅラ(馬鞭草)、クララ(苦参)、クランベリー「果実」、クリ「種子、果実、渋皮」、クルクリゴ・ラチフォリア「果実」、グレープフルーツ「果実・葉」、クロウメモドキ、クロガネモチ(救必応)、カメバヒキオコシ又はクロバナヒキオコシ又はヒキオコシ(延命草)、クローブ(丁子、丁香)、グンバイナズナ(セキメイ、セキメイシ)、ケイガイ(荊芥、荊芥穂)、ケイトウ(鶏冠花、鶏冠子)、ゲッカビジン、ゲッケイジュ(月桂樹)、ケナシサルトリイバラ(土茯苓、山帰来)、ゲンチアナ、ゲンノショウコ(老鸛草)、ケンポナシ(キグシ)、コウキセッコク、キシュウミカン(コウジ、タチバナ、オオベニミカン、フクレミカン、サガミコウジ、ポンカン、サンタラ(橘皮))、コウシンバラ(月季花)、コウスイハッカ、コウゾ「果実」、コウチャ(紅茶)、コウホネ(川骨)、コウホン(藁本、唐藁本)、コウリャン、コウリョウキョウ(高良姜)、コエンドロ「果実」、コオウレン(胡黄連)、コガネバナ(黄ゴン)、コケモモ(越橘)、ココヤシ「果実」、ゴシュユ(呉茱萸)、ゴショイチゴ(覆盆子)、コショウ(胡椒)、コスモス、コパイババルサム、コーヒー「種子、葉」、コブシ又はモクレン(辛夷)、ゴボウ(牛蒡、牛蒡子)、コボタンヅル、ゴマ(胡麻)、ゴマノハグサ(玄参)、ゴミシ(五味子)、サネカズラ又はビナンカズラ又はマツブサ、コムギ(小麦)、米又は米糠「赤糠、白糠」、コメ油、コーラ・アクミナタ「種子」、コーラ・ベラ「種子」、コロニーリャ、コロハ「果実」、コロンボ、コンズランゴ、コンブ、コンニャク、コンフリー(鰭張草)、サイザル(サイザルアサ)、サイハイラン、サカネラン(エゾサカネラン)、サキシマボタンヅル又はシナボタンヅル又はシナセンニンソウ(威霊仙)、サクラ(オオシマザクラ、ヤマザクラ、オオヤマザクラ、エドヒガシ、マメザクラ、ミヤマザクラ、ソメイヨシノ、タカネザクラ、カスミザクラ、コヒガン、サトザクラ、カンザクラ「葉、花、果実、樹皮(桜皮)」)、サクランボ、ザクロ、ササ、ササバギンラン、サザンカ、サジオモダカ(沢瀉)、サツマイモ、サトウキビ、サトウダイコン、サネブトナツメ(酸棗仁)、サフラン(番紅花、西紅花)、サポジラ、サポテアマリヨ、ザボン「果実」、サボンソウ、サーモンベリー「果実」、サラシナショウマ(升麻)、サランシトウ(砂藍刺頭)、サルビア(セージ)、サワギキョウ(山梗菜)、サワグルミ(山胡桃)、サンカクサボテン、サングレデグラード(クロトン)、サンシクヨウソウ、サンシチニンジン(三七人参)、サンシュユ(山茱萸)、サンショウ(山椒)、サンズコン(山豆根)、シア(カリテ)、シアノキ「果実」、シイタケ(椎茸)、シオン(紫苑)、シカクマメ、ジキタリス、シクンシ(使君子)、シソ又はアオジソ又はチリメンジソ又はカタメンジソ(紫蘇葉、紫蘇子)、シタン、シナノキ、シナホオノキ、シナレンギョウ(連翹)、シメジ(ヒンシメジ、シャカシメジ、ハタケシメジ、オシロイシメジ、ブナシメジ、ホンジメシ、シロタモギタケ)、シモクレン(辛夷)、シモツケソウ、ジャガイモ、シャジン(沙参)、ジャスミン(マツリカ)、ジャノヒゲ(麦門冬)、ジュウロクササゲ、シュクコンカスミソウ、シュクシャミツ(砂仁、縮砂)、ジュズダマ、シュロ「果実」、シュンラン、ジョウオウヤシ、ショウガ(生姜)、ジョウザンアジサイ(常山)、ショウブ(菖蒲、菖蒲根)、ショズク「果実」、シラカシ「種子」、シラン(ビャッキュウ)、シロゴチョウ「種子」、シロツメクサ(クローバー)、シロトウアズキ(鶏骨草)、シロバナイリス(ニオイイリス)、シロバナツタ「花」、シロバナルーピン、シロミナンテン(南天実)、シンコナサクシルブラ、ジンチョウゲ(瑞香、瑞香花、沈丁花)、シンナモン、シンナモムム・カッシア(桂皮)、スイカ(西瓜)、スイカズラ(金銀花、忍冬)、スイバ(酸模)、スイムベリー「果実」、スターアップル、ステビア、ストロベリー「果実」、スズサイコ(徐長卿)、スギナ(問荊)、スベリヒユ(馬歯けん、馬歯けん子)、スモモ「果実」、スルガラン(オラン)、セイヨウアカマツ「球果」、セイヨウカラマツ、セイヨウキズタ、セイヨウグルミ、セイヨウサンザシ、セイヨウスノキ、セイヨウタンポポ、セイヨウトチノキ(マロニエ)、セイヨウナシ「果実」、セイヨウナツユキソウ、セイヨウニワトコ(エルダー)、セイヨウネズ(ジュニパー、杜松)、セイヨウノコギリソウ(ミルフォイル)、セイヨウバラ、セイヨウフウチョウボク、セイヨウヤドリギ、セイヨウハッカ又はセイヨウヤマハッカ、セイヨウワサビ、セキショウ(石菖根)、セッコク(サクラセッコク、コウキセッコク、オオバナセッコク、オキナワセッコク、ホンセッコク、コチョウセッコク、シカクセッコク、キバナノセッコク)(デンドロビウム、石斛)、セドロン(ボウシュウボク)、ゼニアオイ、ヒロハセネガ、セネガ、セリ、セロリ、センキュウ(川キュウ)、センシンレン(穿心連)、センダン、センニンサボテン、センナ「果実、葉」、センニンソウ(大蓼)、センブリ(当薬)、センボク、ソウカ(草果)、ゾウゲチュウ、ソシンロウバイ、ソバ「種実」、ソメモノイモ、ソラマメ、ダイオウ(大黄)、大根、大豆、ダイダイ(橙皮、枳実)、タカサゴルリヒゴタイ(東南藍刺頭)、タカサブロウ(旱蓮草)、タカトウダイ(大戟)、タカワラビ(狗脊)
、ダークスィートチェリー「果実」、タチアオイ、タチジャコウソウ(タイム、百里香)、タチドコロ(ヒカイ)、タチヤナギ、タマリンド「種子」、タマネギ、タムシバ(辛夷)、タラノキ「果実、葉、根皮」、タラヨウ(大葉冬青、一葉茶、苦丁茶、苦灯茶)、ダリア(テンジクボタン)、タルウィ、タンキリマメ、タンシウチワ、タンジン(丹参)、タンポポ(蒲公英)又はシロバナタンポポ又はモウコタンポポ、ダンマル、チェリー「果実」、チガヤ「果実、根、芽」、チクセツニンジン(竹節人参)、チコリ、チャンカピエドラ(キダチコミカンソウ)、チューリップ、チョコノステイ、チョウセンアザミ(アーティチョーク)、チョウセンダイオウ(大黄)、チョウセンニレ(蕪夷)、チョウセンヨモギ(艾葉)、チョレイマイタケ(猪苓)、チョロギ、ツキミソウ、ツクシサカネラン、ツクリタケ(マッシュルーム)、ツチアケビ、ツバキ、ツボクサ、ツメクサ(漆姑草)、ツユクサ(鴨跖草)、ツルアズキ(赤小豆)、ツルツチアケビ、ツルドクダミ(何首烏)、ツルナ(蕃杏)、ツルニンジン(四葉参)、ツルマメ、ツワブキ、デイコ、テウチグルミ、デュベリー「果実」、テングサ、テンチャ(甜茶)、テンダイウヤク(烏薬)、トウガ(冬瓜子)、トウカギカズラ、トウガラシ(番椒)、トウキ(当帰)、トウキンセンカ(マリーゴールド)、トウサイカチ、トウナベナ(川断)、トウモロコシ又はトウモロコシ毛(南蛮毛)、トウネズミモチ(女貞子)、トウリンドウ又はチョウセンリンドウ(竜胆)、トクサ(木賊)、ドクダミ(十薬)、トコン(吐根)、トシシ又はマメダオシ又はネナシカズラ、トチュウ(杜仲「樹皮、葉、根」)、トネリコ(秦皮)、トマト、トラガント、トリアカンソス「種子」、トルコキキョウ、トルメンチラ、ドロノキ、トロロアオイ、トンカマメ、ナイゼリアベリー「果実」、ナガイモ又はヤマノイモ(山薬)、ナギイカダ(ブッチャーブルーム)、ナギナタコウジュ、ナズナ、ナタネ、ナタマメ又はタテハキ(刀豆)、ナツミカン、ナツメ(大棗)、ナニワイバラ(金桜子)、ナベナ(続断)、ナメコ、ナンキンマメ(落花生)、ナンテン(南天実)、ナンバンカラムシ(苧麻)、ニオイスミレ、ニガキ(苦木)、ニガヨモギ(苦艾)、ニクズク、ケイ又はニッケイ又はセイロンニッケイ又はヤブニッケイ(桂皮)又はケイシ(桂枝)、ニョホウチドリ、ニラ(韮子)、ニワトコ(接骨木「果実、花、茎、葉」)、ニンニク(大蒜)、ヌルデ(五倍子)、ネギ、ネムノキ又はネブ又はネビ又はネムリノキ又はジゴクバナ(合歓)、ノアザミ(大薊)、ノイバラ(営実)、ノウゼンカズラ(凌霄花)、ノゲイトウ、ノコギリソウ、ノダケ(前胡)、ノバラ、ノモモ、パイナップル「果実」、ハイビスカス(ブッソウゲ、フウリンブッソウゲ、ローゼル)、ハイリンドウ、ハウチワ、パウ・ドーセ、ハカマウラボシ(骨砕補)、ハクカユマトウ、ハクサンチドリ、ハクセン(白癬皮)、ハクルベリー「果実」、ハコベ(繁縷)、ハシバミ(榛子)、ハシリドコロ(ロート根)、バジル、ハス(蓮、蓮肉、蓮子)、パセリ(オランダゼリ)、ハダカムギ、バタタ、ハチク又はマダケ(竹茹)、パチョリー、ハッカ(薄荷、薄荷葉)、ハッショウマメ、ハトムギ(ヨクイニン)、ハナスゲ(知母)、バナナ、ハナハッカ、ハナビシ(シツリシ、シシツリ)、バニラビンズ、パパイヤ、ハハコグサ(鼠麹草)、パハロボボ、ハブ「全草、茎、葉」、パプリカ、ハマカキラン、ハマゴウ又はミツバハマゴウ(蔓荊子)、ハマスゲ(香附子)、ハマビシ(シツ莉子)、ハマナス(マイカイ花)、ハマボウフウ(浜防風)、ハマメリス、パーム、バラ(薔薇)、バラータ、バラタゴムノキ、ハラタケ(ハラタケ、シロオオハラタケ、ウスキモリノカサ)、ハラン、パリウルス(セイヨウハマナツメ)、パリエタリア、ハルカンラン、バルサミーナ(ツルレイシ、ニガウリ)、ハルニレ(楡皮、楡白皮、楡葉)、バルバスコ、ハルリンドウ、ハンダイカイ(胖大海)、パンノキ、ヒオウギ(射干)、ヒカゲツルニンジン(党参)、ピーカンナッツ、ヒガンバナ(石蒜、蔓珠沙華)、ヒグルマダリア、ヒゴタイ、ヒシ(菱実)、ピスタチオ、ビート、ヒトツバ(石葦)、ヒトツバエニシダ、ヒナギク(デージー)、ヒナタイノコズチ(牛膝)、ヒナチヨドリ、ヒノキ、ヒバ、ヒマシ、ヒマワリ、ピーマン、ヒメウズ(天葵)、ヒメガマ(香蒲)、ヒメマツタケ(カワリハラタケ、ヒロマツタケ)、ヒメムヨウラン、ピメンタ「果実」、ビャクシ、ビャッキュウ、ヒユ「果実」、ヒヨコマメ、ヒラマメ、ビロウドアオイ、ヒロハオキナグサ(白頭翁)、ビワ「果実、葉、茎」、ビンロウ(大服皮、檳榔子)、プーアル茶、フウトウカズラ(南籐)、フキ、フキタンポポ(款冬花、款冬葉)、フジバカマ(蘭草)、フジマメ(扁豆)、フジモドキ(チョウジザクラ、芫花)、ブドウ「果実、果皮、種子、葉」、ブナ、フユムシナツクサタケ(冬虫夏草)、ブラジルカンゾウ、ブラジルニンジン、ブラジルヤシ、ブラジルゾウゲヤシ、ブラックカーラント「果実」、ブラックベリー、ブラーニェン、プラム「果実」、フルセラリア、ブルーベリー(セイヨウヒメスノキ)、プルーン、フローラルブランカ、ブロンドサイリウム、ブンドウ(緑豆)、ヘーゼルナッツ、ヘチマ、ヘツカラン、ベニバナ(紅花)、ヘネケン、ベラドンナ、ベリー「果実」、ペルセア、ペルビアンバーグ、ペレスキア・グランディフォリア、ベンケイソウ又はイキクサ(景天)、ボイセンベリー「果実」、ホウキギ又はニワクサ又はネンドウ又はハハキギ・コキア(地膚子)、ホウサイラン、ホウセンカ(鳳仙、急性子、透骨草)、ポウテリア・サポタ、ポウテリア・ルクマ、ホウノキ、ボウフウ(防風)、ホウレンソウ、ホオズキ(登呂根)、ホオノキ(和厚朴、朴)、ボケ(木瓜)、ホソバアブラギク(苦ヨク)、ホソバオグルマ、ホソバナオケラ(蒼朮)、ホソバノキリンソウ(景天三七)、ホソババレンギク、ボダイジュ(菩醍樹)、ボタン(牡丹「花、葉、茎、樹皮」)、ボタンピ(牡丹皮)、ホップ、ホホバ、ボリジ(ルリチシャ)、ボルドー、ホワートルベリー「果実」、ホンオニク(肉じゅ蓉、大芸)、ホンセッコク(鉄皮石斛、雀山石斛)、マイズルテンナンショウ(天南星)、マイタケ(舞茸)、マオウ(麻黄)、マカ、マカデミアナッツ、マーガレット(モクシュンギク)、マクリ(海人草)、マグワ(桑白皮「樹皮、葉」)、マグノリア・スプレンゲリ、マサランヅーバ、マサランズーバ・ド・セアラー、マシェイラ・デ・ボイ、マシュア(タマノウゼンハレン、キュウコンキンレンカ)、マタタビ(木天蓼)、マツカサ、松「葉、樹皮、根」、マッタ・オーリョ、マツホド(茯苓)、マティコ(コルドンシージョ)、マヨラム(ハナハッカ)、マルバノジャジン(苦参)、マルベリー「果実」、マルメロ、マレイン(ビロウドモウズイカ)、マンゴー、マンゴスチン、マンサーニャ(アンデスカミツレ)、マンシュウグルミ、マンダリン「果実」、マンネンタケ(霊芝)、キジツ(枳実「果実」)、ミシマサイコ(柴胡)、ミズオオバコ又はミズアサガオ(竜舌草)、ミゾカクシ(半辺蓮)、ミソハギ(千屈菜)、ミチヤナギ又はニワヤナギ(篇蓄)、ミツガシワ、ミツバ、ミドリサポテ、ミドリハッカ、ミモザ、ミョウガ、ミラクルフルーツ「果実」、ミルラ、ミロバラン、ムギワラギク、ムクゲ(木槿)、ムクノキ、ムクロジ(延命皮)、ムニャ、ムラサキ(紫根)、ムラサキシキブ又はオオムラサキシキブ(紫珠)、ムラサキトウモロコシ、ムラサキナツフジ(昆明鶏血藤)、メガカンサ・オプンティカ、メハジキ(益母草)、メボウギ、メラロイカ、メリッサ、メリロート、メロン「果実」、モウコヨモギ、モウソウチク、モクキリン、モジェ(コショウボク)、モチノキ、モッコウ(木香)、モミジバダイオウ、モモ(桃「葉、種子、花、果実」)、モヤシ、モレロチェリー「果実」、モロヘイヤ(黄麻)、ヤカワムラサキイモ、ヤクチ(益智)、ヤグルマソウ(ヤグルマギク)、ヤグルマハッカ、ヤーコン、ヤシャブシ(矢車)又はヒメヤシャブシ又はオオバヤシャブシ「果実、果皮、果穂」、ヤチヤナギ、ヤツデ(八角金盤)、ヤドリギ(柳寄生)、ヤナギ(カワヤナギ、タチヤナギ、シダレヤナギ、アカメヤナギ、ネコヤナギ、イヌコリヤナギ、キヌヤナギ、コリヤナギ、ウンリュウヤナギ、ミヤマヤナギ、ヤシ、ヤマヤナギ、オオバヤナギ、タイリクキヌヤナギ、キツネヤナギ、ドロノキ)、ヤナギタデ「葉、茎」、ヤブガラシ、ヤブコウジ(紫金牛)、ヤブタバコ(鶴虱、天名精)、ヤマゴボウ(商陸)、ヤマハンノキ(山榛)、ヤマモモ(楊梅皮)、ヤマヨモギ、ユーカリ、ユキノシタ(虎耳草)、ユッカ又はフレビフォリア、ユズ「果実」、ユリ、ヨロイグサ、ヨモギ(艾葉)、ライガン(雷丸)、ライム「果実」、ライムギ、ラカンカ「果実」、ラズベリー「葉、果実」、ラタニア(クラメリア)、ラッキョウ又はエシャロット(薤白)、ラベンダー、リュウガン(竜眼肉)、リュウゼツラン(アオノリュウゼツラン、フクリンリュウゼツラン)、リョクチャ(緑茶)、リンゴ「果実、種子、葉、根」、リンドウ、ルバス又はスアビシムス(甜涼)、ルリタマアザミ(ウラジロヒゴタイ、新彊藍刺頭)、レイシ(茘枝、茘枝核)、レタス(チシャ)、レッドカーラント「果実」、レッドピタヤ、レモン「果実」、レモングラス、レンギョウ又はシナレンギョウ(連翹)、レンゲソウ、ロウバイ(蝋梅)、ロウヤシ、ロコン(ヨシ、蘆根)、ローガンベリー「果実」、ローズマリー(マンネンロウ)、ローズヒップ(ノバラ)、ワサビ、ワタフジウツギ(密蒙花)、ワレモコウ(地楡)等が挙げられる。
 海藻類としては、海藻[緑藻類:クロレラ・ブルガリス、クロレラ・ピレノイドサ、クロレラ・エリプソイデイア、アオノリ(ウスバアオノリ、スジアオノリ、ヒラアオノリ、ボウアオノリ、ホソエダアオノリ)、アナアオサ(アオサ)]、海藻[褐藻類:コンブ(マコンブ、リシリコンブ、ホソメコンブ、ミツイシコンブ)、ワカメ、ヒロメ、アオワカメ、ジャイアントケルプ(マクロシスティス・ピリフェラ、マクロシスティス・インテグリフォリア、ネオシティス・ルエトケアーナ)、ヒジキ、ヒバマタ、ウミウチワ、ウスバウミウチワ、キレバノウミウチワ、アカバウミウチワ、コナウミウチワ、オキナウチワ、ウスユキウチワ、エツキウミウチワ]、海藻[紅藻類:ヒジリメン、マクサ(テングサ)、ヒラクサ、オニクサ、オバクサ、カタオバクサ、ヤタベグサ、ユイキリ、シマテングサ、トサカノリ、トゲキリンサイ、アマクサキリンサイ、キリンサイ、ビャクシンキリンサイ、ツノマタ、オオバツノマタ、トチャカ(ヤハズツノマタ)、エゾツノマタ、トゲツノマタ、ヒラコトジ、コトジツノマタ、イボツノマタ、マルバツノマタ、ヒラコトジ、スギノリ、シキンノリ、カイノリ、ヤレウスバノリ、カギウスバノリ、スジウスバノリ、ハイウスバノリ、アカモミジノリ]等が代表的なものとして挙げられる。
 その他の藻類、例えば、緑藻類(クラミドモナス属:クラミドモナス、アカユキモ、ドゥナリエラ属:ドゥナリエラ、クロロコッカス属:クロロコッカス、クワノミモ属:クワノミモ、ボルボックス属:オオヒゲマワリ、ボルボックス、パルメラ属、ヨツメモ属、アオミドロ属:ヒザオリ、アオミドロ、ツルギミドロ属、ヒビミドロ属:ヒビミドロ、アオサ属:アナアオサ、アミアオサ、ナガアオサ、カワノリ属:カワノリ、フリッチエラ属、シオグサ属:オオシオグサ、アサミドリシオグサ、カワシオグサ、マリモ、バロニア属:タマゴバロニア、タマバロニア、マガタマモ属:マガタマモ、イワヅタ属:フサイワヅタ、スリコギヅタ、ヘライワヅタ、クロキヅタ、ハネモ属、ミル属:ミル、クロミル、サキブチミル、ナガミル、ヒラミル、カサノリ属:カサノリ、ジュズモ属:フトジュズモ、タマジュズモ、ミゾジュズモ、ミカヅキモ属、コレカエテ属、ツヅミモ属、キッコウグサ属:キッコウグサ、ヒトエグサ属:ヒトエグサ、ヒロハノヒトエグサ、ウスヒトエグサ、モツキヒトエ、サヤミドロ属、クンショウモ属、スミレモ属:スミレモ、ホシミドロ属、フシナシミドロ属等)。
 藍藻類(スイゼンジノリ属:スイゼンジノリ、アオコ属、ネンジュモ属:カワタケ、イシクラゲ、ハッサイ、ユレモ属、ラセンモ(スピルリナ)属:スピルリナ、トリコデスミウム(アイアカシオ)属等)。
 褐藻類(ピラエラ属:ピラエラ、シオミドロ属:ナガミシオミドロ、イソブドウ属:イソブドウ、イソガワラ属:イソガワラ、クロガシラ属:グンセンクロガシラ、カシラザキ属:カシラザキ、ムチモ属:ムチモ、ヒラムチモ、ケベリグサ、アミジグサ属:アミジグサ、サキビロアミジ、サナダグサ属:サナダグサ、フクリンアミジ、コモングサ属:コモングサ、ヤハズグサ属:エゾヤハズ、ヤハズグサ、ウラボシヤハズ、ジガミグサ属:ジガミグサ、ウミウチワ属:ウミウチワ、コナウミウチワ、アカバウミウチワ、ナミマクラ属:ヒルナミマクラ、ソメワケグサ属:ソメワケグサ、ナバリモ属:ナバリモ、チャソウメン属:モツキチャソウメン、マツモ属:マツモ、ナガマツモ属:ナガマツモ、オキナワモズク属:オキナワモズク、ニセフトモズク属:ニセフトモズク、フトモズク属:フトモズク、イシモズク属:イシモズク、クロモ属:クロモ、ニセモズク属:ニセモズク、モズク属:モズク、イシゲ属:イシゲ、イロロ、イチメガサ属:イチメガサ、ケヤリ属:ケヤリ、ウミボッス属:ウミボッス、ウルシグサ属:ウルシグサ、ケウルシグサ、タバコグサ、コンブモドキ属:コンブモドキ、ハバモドキ属:ハバモドキ、ハバノリ属:ハバノリ、セイヨウハバノリ属:セイヨウハバノリ、コモンブクロ属:コモンブクロ、エゾブクロ属:エゾブクロ、フクロノリ属:フクロノリ、ワタモ、チシマフクロノリ属:チシマフクロノリ、カゴメノリ属:カゴメノリ、ムラリドリ属:ムラチドリ、サメズグサ属:サメズグサ、イワヒゲ属:イワヒゲ、ヨコジマノリ属:ヨコジマノリ、カヤモノリ属:カヤモノリ、ウイキョウモ属:ウイキョウモ、ツルモ属:ツルモ、アナメ属:アナメ、スジメ属:スジメ、ミスジコンブ属:ミスジコンブ、アツバミスジコンブ、コンブ属:ガツガラコンブ、カキジマコンブ、オニコンブ、ゴヘイコンブ、ナガコンブ、エンドウコンブ、オオチヂミコンブ、トロロコンブ属:トロロコンブ、アントクメ属:アントクメ、カジメ属:カジメ、ツルアラメ、クロメ、キクイシコンブ属:キクイシコンブ、ネジレコンブ属:ネジレコンブ、クロシオメ属:クロシオメ、ネコアシコンブ属:ネコアシコンブ、アラメ属:アラメ、アイヌワカメ属:アイヌワカメ、チガイソ、オニワカメエゾイシゲ属:エゾイシゲ、ヤバネモク属:ヤバネモク、ラッパモク属:ラッパモク、ジョロモク属:ウガノモク、ジョロモク、ヒエモク、ホンダワラ属:タマナシモク、イソモク、ナガシマモク、アカモク、シダモク、ホンダワラ、ネジモク、ナラサモ、マメタワラ、タツクリ、ヤツマタモク、ウミトラノオ、オオバモク、フシズシモク、ハハキモク、トゲモク、ヨレモク、ノコギリモク、オオバノコギリモク、スギモク属:スギモク、ウキモ属:オオウキモ、ブルウキモ属:ブルウキモ、カヤモノリ属:カヤモノリ等)。
 紅藻類(ウシケノリ属:ウシケノリ、フノリノウシケ、アマノリ属:アサクサノリ、スサビノリ、ウップルイノリ、オニアマノリ、タサ、フイリタサ、ベニタサ、ロドコルトン属:ミルノベニ、アケボノモズク属:アケボノモズク、コナハダ属:ハイコナハダ、ヨゴレコナハダ、アオコナハダ、ウミゾウメン属:ウミゾウメン、ツクモノリ、カモガシラノリ、ベニモズク属:ベニモズク、ホソベニモズク、カサマツ属:カサマツ、フサノリ属:フサノリ、ニセフサノリ属:ニセフサノリ、ソデガラミ属:ソデガラミ、ガラガラ属:ガラガラ、ヒラガラガラ、ヒロハタマイタダキ属:ヒロハタマイタダキ、タマイタダキ属:タマイタダキ、カギケノリ属:カギノリ、カギケノリ、テングサ属:ヒメテングサ、ハイテングサ、オオブサ、ナンブグサ、コヒラ、ヨヒラ、キヌクサ、ヒビロウド属:ヒビロウド、ヒメヒビロウド、イソムメモドキ属:イソムメモドキ、 ミチガエソウ属:ミチガエソウ、リュウモンソウ属:リュウモンソウ、ヘラリュウモン、ニセカレキグサ属:ニセカレキグサ、オキツバラ属:オオバオキツバラ、アカバ属:アカバ、マルバアカバ、ナミノハナ属:ホソバナミノハナ、ナミノハナ、サンゴモドキ属:ガラガラモドキ、シオグサゴロモ属:シオグサゴロモ、イワノカワ属:エツキイワノカワ、カイノカワ属:カイノカワ、カニノテ属:カニノテ、サンゴモ属:サンゴモ、ムカデノリ属:ムカデノリ、スジムカデ、カタノリ、ヒラムカデ、キョウノヒモ、サクラノリ、ニクムカデ、タンバノリ、ツルツル、フダラク、マルバフダラク、イソノハナ属:ヌラクサ、クロヌラクサ、オオムカデノリ、ヒラキントキ属:ヒラキントキ、マタボウ属:マタボウ、キントキ属:チャボキントキ、キントキ、マツノリ、コメノリ、トサカマツ、ヒトツマツ、フシキントキ、ツノムカデ、ナガキントキ、スジムカデ、カクレイト属:オオバキントキ、イトフノリ属:イトフノリ、ナガオバネ属:ナガオバネ、フノリ属:ハナフノリ、フクロフノリ、マフノリ、カレキグサ属:カレキグサ、トサカモドキ属:ホソバノトサカモドキ、ヒロハノトサカモドキ、ヤツデガタトサカモドキ、クロトサカモドキ、ネザシノトサカモドキ、ユウソラ、エツキノトサカモドキ、ナンカイトサカモドキ、ヒメトサカモドキ、キヌハダ属:キヌハダ、エゾトサカ属:エゾトサカ、ツカサノリ属:エナシカリメニア、オオツカサノリ、ハナガタカリメニア、ホウノオ属:ホウノオ、ヒカゲノイト属:ヒカゲノイト、ウスギヌ、ニクホウノオ属:ニクホウノオ、ベニスナゴ属:ベニスナゴ、ススカケベニ属:ススカケベニ、オカムラグサ属:ヤマダグサ、ミリン属:ミリン、ホソバミリン、トサカノリ属:キクトサカ、エゾナメシ属:エゾナメシ、イソモッカ属:イソモッカ、ユカリ属:ユカリ、ホソユカリ、イバラノリ属:イバラノリ、サイダイバラ、タチイバラ、カギイバラノリ、キジノオ属:キジノオ、イソダンツウ属:イソダンツウ、アツバノリ属:アツバノリ、オゴノリ属:オゴノリ、ツルシラモ、シラモ、オオオゴノリ、ミゾオコノリ、カバノリ、ベニオゴノリ、フクレシノリ、ムラサキカバノリ、シンカイカバノリ、トゲカバノリ、カタオゴノリ、リュウキュウオゴノリ、セイヨウオゴノリ、イツツギヌ、ユミガタオゴノリ、クビレオゴノリ、モサオゴノリ、キヌカバノリ、テングサモドキ属:ハチジョウテングサモドキ、フシクレノリ属:フシクレノリ、ナミイワタケ属:ナミイワタケ、カイメンソウ属:カイメンソウ、オキツノリ属:オキツノリ、サイミ属:イタニグサ、サイミ、ハリガネ、ハスジグサ属:ハスジグサ、スギノリ属:イカノアシ、ホソイボノリ、ノボノリ、クロハギンナンソウ属:クロハギンナンソウ、アカバギンナンソウ属:アカバギンナンソウ、ヒシブクロ属:ヒシブクロ、マダラグサ属:トゲマダラ、エツキマダラ、タオヤギソウ属:タオヤギソウ、ハナサクラ、フクロツナギ属:フクロツナギ、スジコノリ、ハナノエダ属:ハナノエダ、ヒラタオヤギ属:ヒラタオヤギ、ダルス属:ダルス、マサゴシバリ、アナダルス、ウエバグサ属:ウエバグサ、ベニフクロノリ属:ベニフクロノリ、フシツナギ属:フシツナギ、ヒメフシツナギ、ヒロハフシツナギ、ワツナギソウ属:ヒラワツナギソウ、ウスバワツナギソウ、イギス属:イギス、ケイギス、ハリイギス、ハネイギス、アミクサ、エゴノリ属:エゴノリ、フトイギス、サエダ属:サエダ、チリモミジ属:チリモミジ、コノハノリ科:ハブタエノリ、コノハノリ、スズシロノリ、ウスベニ属:ウスベニ、ハスジギヌ属:ハスジギヌ、ナガコノハノリ属:ナガコノハノリ、スジギヌ属:スジギヌ、アツバスジギヌ、ハイウスバノリ属:カギウスバノリ、ヤレウスバノリ、スジウスバノリ、ハイウスバノリ、ウスバノリモドキ属:ウスバノリモドキ、アヤニシキ属:アヤニシキ、アヤギヌ属:アヤギヌ、ダジア属:エナシダジア、シマダジア属:イソハギ、シマダジア、ダジモドキ属:ダジモモドキ、イトグサ属:モロイトグサ、フトイグサ、マクリ属:マクリ、ヤナギノリ属:ハナヤナギ、ユナ、ヤナギノリ、モツレユナ、ベニヤナギコリ、モサヤナギ、ササバヤナギノリ、ソゾ属:クロソゾ、コブソゾ、ハネソゾ、ソゾノハナ、ハネグサ属:ハネグサ、ケハネグサ、コザネモ属:コザネモ、イソムラサキ、ホソコザネモ、ヒメゴケ属:ヒメゴケ、クロヒメゴケ、ヒオドシグ属:キクヒオドシ、ヒオドシグサ、ウスバヒオドシ、アイソメグサ属:アイソメグサ、スジナシグサ属:スジナシグサ、イソバショウ属:イソバショウ、フジマツモ属:フジマツモ、ノコギリヒバ属:ハケサキノコギリヒバ、カワモズク属:カワモズク、アオカワモズク、ヒメカワモズク、イデユコゴメ属:イデユコゴメ、オキチモズク属:オキチモズク、イトグサ属、チノリモ属:チノリモ、チスジノリ属:チスジノリ等)。
 車軸藻類(シャジクモ属、シラタマモ属、ホシツリモ属:ホシツリモ、リクノタムヌス属、フラスコモ属:ヒメフラスコモ、チャボフラスコモ、トリペラ属等)、黄色藻類(ヒカリモ属:ヒカリモ等)等。
 動物系原料由来の素材としては、鶏冠抽出物、牛又は豚、人の胎盤抽出物、牛又は豚の胃、十二指腸、腸、脾臓の抽出物若しくはその分解物、牛又は豚の脳組織の抽出物、牛・豚又は魚類のコラーゲン加水(酸、アルカリ、酵素等)分解物や水溶性コラーゲン又はアシル化コラーゲン等のコラーゲン誘導体、牛又は豚のエラスチン又はエラスチン加水分解物(酸、アルカリ、酵素等)又は水溶性エラスチン誘導体、ケラチン及びその分解物又はそれらの誘導体、シルク蛋白及びその分解物又はそれらの誘導体、豚又は牛血球蛋白分解物(グロビンペプチド)、牛又は豚へモグロビン分解物(ヘミン、ヘマチン、ヘム、プロトヘム、ヘム鉄等)、牛乳、カゼイン及びその分解物又はそれらの誘導体、脱脂粉乳及びその分解物又はそれらの誘導体、ラクトフェリン又はその分解物、鶏卵成分、魚肉分解物、核酸関連物質(リボ核酸、デオキシリボ核酸)等。
 これら植物又は動物系原料由来の素材としては、遺伝子組み替え体や細胞融合体由来の任意の部位、細胞、組織、器官、代謝物等も使用することができる。更に、任意の部位、細胞、組織、器官等を細胞培養することで得られる、例えば未分化細胞群や分化途中の細胞群等も使用することができる。
(14)海洋成分
 深層水等の海水類、例えば、海水塩、海水乾燥物、死海又は大西洋又は太平洋の海より得た無機塩(塩化ナトリウム、塩化マグネシウム、塩化カリウム等)、海泥又は泥(ファンゴ)類、例えば、イタリアファンゴ、ドイツファンゴ、アイフェルファンゴ、フライブルグファンゴ等の各地の海泥又は泥(含有成分:二酸化珪素、二酸化チタン、酸化アルミニウム、酸化鉄、酸化マンガン、酸化ナトリウム、酸化カリウム、酸化マグネシウム、酸化カルシウム、酸化ストロンチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、クロム、鉄、銅、ニッケル、亜鉛、鉛、マンガン、ヒ素、水)、聖徳石等。
(15)微生物培養代謝物
 酵母代謝物、酵母菌抽出エキス、細菌代謝物、細菌抽出エキス、カビ又は放線菌代謝物、カビ又は放線菌抽出エキス、納豆菌代謝物、納豆抽出エキス、米発酵エキス、米糠(赤糠、白糠)発酵エキス、ユーグレナ抽出物又はその分解物又はそれら水溶性誘導体、トレハロース又はその誘導体、生乳又は脱脂粉乳の乳酸発酵物、マメ科植物の乳酸菌発酵物、ココヤシ属植物の乳酸菌発酵物等。
(16)α-ヒドロキシ酸類
 グリコール酸、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、乳酸等。
(17)無機顔料
 無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、カオリン、ベントナイト、マイカ、雲母チタン、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、黄酸化鉄、ベンガラ、黒酸化鉄、グンジョウ、酸化クロム、水酸化クロム、カーボンブラック、カラミン等。
(18)紫外線吸収/遮断剤
 ベンゾフェノン誘導体(2-ヒドロキシ-4-メトキシベンゾフェノン、2-ヒドロキシ-4-メトキシベンゾフェノン-5-スルホン酸、2-ヒドロキシ-4-メトキシベンゾフェノン-5-スルホン酸ナトリウム、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン-スルホン酸ナトリウム、2,4-ジヒドロキシベンゾフェノン、テトラヒドロキシベンゾフェノン等)、パラアミノ安息香酸誘導体(パラアミノ安息香酸、パラアミノ安息香酸エチル、パラアミノ安息香酸グリセリル、パラジメチルアミノ安息香酸アミル、パラジメチルアミノ安息香酸オクチル等)、メトキシ桂皮酸誘導体(パラメトキシ桂皮酸エチル、パラメトキシ桂皮酸イソプロピル、パラメトキシ桂皮酸オクチル、パラメトキシ桂皮酸2-エトキシエチル、パラメトキシ桂皮酸ナトリウム、パラメトキシ桂皮酸カリウム、ジパラメトキシ桂皮酸モノ-2-エチルヘキサン酸グリセリル等)、サリチル酸誘導体(サリチル酸オクチル、サリチル酸フェニル、サリチル酸ホモメンチル、サリチル酸ジプロピレングリコール、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸ミリスチル、サリチル酸メチル等)、アントラニル酸誘導体(アントラニル酸メチル等)、ウロカニン酸誘導体(ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル等)、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンB6誘導体、ウンベリフェロン、エスクリン、桂皮酸ベンジル、シノキサート、オキシベンゾン、ジオキシベンゾン、オクタベンゾン、スリソベンゾン、ベンゾレソルシノール、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン、ネオヘリオパン、エスカロール、酸化亜鉛、タルク、カオリン等。
(19)美白剤
 パラアミノ安息香酸誘導体、サルチル酸誘導体、アントラニル酸誘導体、クマリン誘導体、アミノ酸系化合物、ベンゾトリアゾール誘導体、テトラゾール誘導体、イミダゾリン誘導体、ピリミジン誘導体、ジオキサン誘導体、カンファー誘導体、フラン誘導体、ピロン誘導体、核酸誘導体、アラントイン誘導体、ニコチン酸誘導体、ビタミンC又はその誘導体(ビタミンCリン酸エステルマグネシウム塩、ビタミンCグルコシド等)、ビタミンE又はその誘導体、コウジ酸又はその誘導体、オキシベンゾン、ベンゾフェノン、アルブチン、グアイアズレン、シコニン、バイカリン、バイカレイン、ベルベリン、胎盤エキス、エラグ酸、ルシノール等。
(20)チロシナーゼ活性阻害剤
 ビタミンC又はその誘導体(ビタミンCリン酸エステルマグネシウム塩、ビタミンCグルコシド等)、ハイドロキノン又はその誘導体(ハイドロキノンベンジルエーテル等)、コウジ酸又はその誘導体、ビタミンE又はその誘導体、N-アセチルチロシン又はその誘導体、グルタチオン、過酸化水素、過酸化亜鉛、胎盤エキス、エラグ酸、アルブチン、ルシノール、シルク抽出物、植物エキス(カミツレ、クワ、クチナシ、トウキ、ワレモコウ、クララ、ヨモギ、スイカズラ、キハダ、ドクダミ、マツホド、ハトムギ、オドリコソウ、ホップ、サンザシ、ユーカリ、セイヨウノコギリソウ、アルテア、ケイヒ、マンケイシ、ハマメリス、ヤマグワ、延命草、桔梗、トシシ、続随子、射干、麻黄、センキュウ、ドッカツ、サイコ、ボウフウ、ハマボウフウ、オウゴン、牡丹皮、ゲンノショウコ、葛根、甘草、五倍子、アロエ、ショウマ、紅花、緑茶、紅茶、阿仙薬)等。
(21)メラニン色素還元/分解物質
 フェニル水銀ヘキサクロロフェン、酸化第二水銀、塩化第一水銀、過酸化水素水、過酸化亜鉛、ハイドロキノン又はその誘導体(ハイドロキノンベンジルエーテル)等。
(22)ターンオーバーの促進作用/細胞賦活物質
 ハイドロキノン、乳酸菌エキス、胎盤エキス、霊芝エキス、ビタミンA、ビタミンE、アラントイン、脾臓エキス、胸腺エキス、酵母エキス、発酵乳エキス、植物エキス(アロエ、オウゴン、スギナ、ゲンチアナ、ゴボウ、シコン、ニンジン、ハマメリス、ホップ、ヨクイニン、オドリコソウ、センブリ、トウキ、トウキンセンカ、アマチャ、オトギリソウ、キュウリ、タチジャコウソウ、ローズマリー、パセリ)等。
(23)収斂剤
 コハク酸、アラントイン、塩化亜鉛、硫酸亜鉛、酸化亜鉛、カラミン、パラフェノールスルホン酸亜鉛、硫酸アルミニウムカリウム、レゾルシン、塩化第二鉄、タンニン酸(カテキン化合物を含む)等。
(24)活性酸素消去剤
 SOD、カタラーゼ、グルタチオンパーオキシダーゼ等。
(25)抗酸化剤
 ビタミンC又はその誘導体又はそれらの塩、ステアリン酸エステル、ビタミンE又はその誘導体、ノルジヒドログアセレテン酸、ブチルヒドロキシトルエン(BHT)、ブチルヒドロキシアニソール(BHA)、ヒドロキシチロソール、パラヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、セサモール、セサモリン、ゴシポール、プロポリス等。
(26)過酸化脂質生成抑制剤
 β-カロチン、植物エキス(ゴマ培養細胞、アマチャ、オトギリソウ、ハマメリス、チョウジ、メリッサ、エンメイソウ、シラカバ、サルビア、ローズマリー、南天実、エイジツ、イチョウ、緑茶)等。
(27)抗炎症剤
 イクタモール、インドメタシン、カオリン、サリチル酸、サリチル酸ナトリウム、サリチル酸メチル、アセチルサリチル酸、塩酸ジフェンヒドラミン、d-カンフル、dl-カンフル、ヒドロコルチゾン、グアイアズレン、カマズレン、マレイン酸クロルフェニラミン、グリチルリチン酸又はその塩、グリチルレチン酸又はその塩、甘草エキス、シコンエキス、エイジツエキス、プロポリス等。
(28)抗菌・殺菌・消毒薬
 アクリノール、イオウ、グルコン酸カルシウム、グルコン酸クロルヘキシジン、スルファミン、マーキュロクロム、ラクトフェリン又はその加水分解物、塩化アルキルジアミノエチルグリシン液、トリクロサン、次亜塩素酸ナトリウム、クロラミンT、サラシ粉、ヨウ素化合物、ヨードホルム、ソルビン酸又はその塩、プロピオン酸又はその塩、サルチル酸、デヒドロ酢酸、パラヒドロキシ安息香酸エステル類、ウンデシレン酸、チアミンラウリル硫酸塩、チアミンラウリル硝酸塩、フェノール、クレゾール、p-クロロフェノール、p-クロロ-m-キシレノール、p-クロロ-m-クレゾール、チモール、フェネチルアルコール、O-フェニルフェノール、イルガサンCH3565、ハロカルバン、ヘキサクロロフェン、クロロヘキシジン、エタノール、メタノール、イソプロピルアルコール、ベンジルアルコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、2-フェノキシエタノール、1,2-ペンタンジオール、ジンクピリジオン、クロロブタノール、イソプロピルメチルフェノール、非イオン界面活性剤(ポリオキシエチレンラウリルエーテル、ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンオクチルフェニルエーテル等)、両性界面活性剤、アニオン界面活性剤(ラウリル硫酸ナトリウム、ラウロイルサルコシンカリウム等)、カチオン界面活性剤(臭化セチルトリメチルアンモニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、塩化メチルロザニリン)、ホルムアルデヒド、ヘキサミン、ブリリアントグリーン、マラカイトグリーン、クリスタルバイオレット、ジャーマル、感光素101号、感光素201号、感光素401号、N-長鎖アシル塩基性アミノ酸誘導体及びその酸附加塩、酸化亜鉛、ヒノキチオール、クジン、プロポリス等。
(29)保湿剤
 グリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、ヒアルロン酸又はその塩、ポリエチレングリコール、コンドロイチン硫酸又はその塩、水溶性キチン又はその誘導体或いはキトサン誘導体、ピロリドンカルボン酸又はその塩、乳酸ナトリウム、ミニササニシキエキス、納豆菌代謝物、納豆抽出エキス、ヘチマ水、シラカバ(白樺)又は赤松の樹液、植物由来セラミド、動物由来セラミド
(30)エラスターゼ活性阻害剤
 フロオロリン酸ジイソプロピル、植物エキス(オウゴン、オトギリソウ、クララ、桑の葉、ケイヒ、ゲンノショウコ、コンフリー、サルビア、セイヨウニワトコ、ボダイジュ、ボタンピ)、海藻エキス等。
(31)頭髪用剤
 二硫化セレン、臭化アルキルイソキノリニウム液、ジンクピリチオン、ビフェナミン、チアントール、カスタリチンキ、ショウキョウチンキ、トウガラシチンキ、塩酸キニーネ、強アンモニア水、臭素酸カリウム、臭素酸ナトリウム、チオグリコール酸等。
(32)抗アンドロゲン剤
 卵胞ホルモン(エストロン、エストラジオール、エチニルエストラジオール等)、イソフラボン、オキセンドロン等。
(33)末梢血管血流促進剤
 ビタミンE又はその誘導体、センブリエキス、ニンニクエキス、人参エキス、アロエエキス、ゲンチアナエキス、トウキエキス、セファランチン、塩化カルプロニウム、ミノキシジル等。
(34)刺激剤
 トウガラシチンキ、ノニル酸バニルアミド、カンタリスチンキ、ショウキョウチンキ、ハッカ油、l-メントール、カンフル、ニコチン酸ベンジル等。
(35)代謝活性剤
 感光素301号、ヒノキチオール、パントテン酸又はその誘導体、アラントイン、胎盤エキス、ビオチン、ペンタデカン酸グリセリド等。
(36)抗脂漏剤
 ピリドキシン又はその誘導体、イオウ、ビタミンB6等。
(37)角質溶解剤
 レゾルシン、サリチル酸、乳酸,尿素等。
(38)酸化剤
 過酸化水素水、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過酸化尿素、過炭酸ナトリウム、過酸化トリポリリン酸ナトリウム、臭素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、過酸化ピロリン酸ナトリウム、過酸化オルソリン酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム過酸化水素付加体、硫酸ナトリウム過酸化水素付加体、塩化ナトリウム過酸化水素付加体、β-チロシナーゼ酵素液、マッシュルーム抽出液等。
(39)除毛剤
 硫酸ストロンチウム、硫化ナトリウム、硫化バリウム、硫化カルシウム等の無機系還元剤、チオグリコール酸又はその塩類(チオグリコール酸カルシウム、チオグリコール酸ナトリウム、チオグリコール酸リチウム、チオグリコール酸マグネシウム、チオグリコール酸ストロンチウム)等。
(40)毛髪膨潤剤
 エタノールアミン、尿素、グアニジン等。
(41)染料剤
 5-アミノオルトクレゾール、2-アミノ-4-ニトロフェノール、2-アミノ-5-ニトロフェノール、1-アミノ-4-メチルアミノアントラキノン、3,3′-イミノジフェノール、塩酸2,4-ジアミノフェノキシエタノール、塩酸2,4-ジアミノフェノール、塩酸トルエン-2,5-ジアミン、塩酸ニトロパラフェニレンジアミン、塩酸パラフェニレンジアミン、塩酸N-フェニルパラフェニレンジアミン、塩酸メタフェニレンジアミン、オルトアミノフェノール、酢酸N-フェニルパラフェニレンジアミン、1,4-ジアミノアントラキノン、2,6-ジアミノピリジン、1,5-ジヒドロキシナフタレン、トルエン-2,5-ジアミン、トルエン-3,4-ジアミン、ニトロパラフェニレンジアミン、パラアミノフェノール、パラニトロオルトフェニレンジアミン、パラフェニレンジアミン、パラメチルアミノフェノール、ピクラミン酸、ピクラミン酸ナトリウム、N,N′-ビス(4-アミノフェニル)-2,5-ジアミノ-1,4-キノンジイミン、5-(2-ヒドロキシエチルアミノ)-2-メチルフェノール、N-フェニルパラフェニレンジアミン、メタアミノフェノール、メタフェニレンジアミン、硫酸5-アミノオルトクレゾール、硫酸2-アミノ-5-ニトロフェノール、硫酸オルトアミノフェノール、硫酸オルトクロルパラフェニレンジアミン、硫酸4,4′-ジアミノジフェニルアミン、硫酸2,4-ジアミノフェノール、硫酸トルエン-2,5-ジアミン、硫酸ニトロパラフェニレンジアミン、硫酸パラアミノフェノール、硫酸パラニトロオルトフェニレンジアミン、硫酸パラニトロメタフェニレンジアミン、硫酸パラフェニレンジアミン、硫酸パラメチルアミノフェノール、硫酸メタアミノフェノール、硫酸メタフェニレンジアミン、カテコール、ジフェニルアミン、α-ナフトール、ヒドロキノン、ピロガロール、フロログルシン、没食子酸、レゾルシン、タンニン酸、2-ヒドロキシ-5-ニトロ-2′,4′-ジアミノアゾベンゼン-5′-スルホン酸ナトリウム、ヘマテイン等。
(42)香料
 ジャコウ、シベット、カストリウム、アンバーグリス等の天然動物性香料、アニス精油、アンゲリカ精油、イランイラン精油、イリス精油、ウイキョウ精油、オレンジ精油、カナンガ精油、カラウェー精油、カルダモン精油、グアヤクウッド精油、クミン精油、黒文字精油、ケイ皮精油、シンナモン精油、ゲラニウム精油、コパイババルサム精油、コリアンデル精油、シソ精油、シダーウッド精油、シトロネラ精油、ジャスミン精油、ジンジャーグラス精油、杉精油、スペアミント精油、西洋ハッカ精油、大茴香精油、チュベローズ精油、丁字精油、橙花精油、冬緑精油、トルーバルサム精油、バチュリー精油、バラ精油、パルマローザ精油、桧精油、ヒバ精油、白檀精油、プチグレン精油、ベイ精油、ベチバ精油、ベルガモット精油、ペルーバルサム精油、ボアドローズ精油、芳樟精油、マンダリン精油、ユーカリ精油、ライム精油、ラベンダー精油、リナロエ精油、レモングラス精油、レモン精油、ローズマリー精油、和種ハッカ精油等の植物性香料、その他合成香料等。
(43)色素・着色剤
 赤キャベツ色素、赤米色素、アカネ色素、アナトー色素、イカスミ色素、ウコン色素、エンジュ色素、オキアミ色素、柿色素、カラメル、金、銀、クチナシ色素、コーン色素、タマネギ色素、タマリンド色素、スピルリナ色素、ソバ全草色素、チェリー色素、海苔色素、ハイビスカス色素、ブドウ果汁色素、マリーゴールド色素、紫イモ色素、紫ヤマイモ色素、ラック色素、ルチン等。
(44)甘味料
 砂糖、甘茶、果糖、アラビノース、ガラクトース、キシロース、ステビア、マンノース、麦芽糖、蜂蜜、ブドウ糖、ミラクリン、モネリン、甘草抽出物等。
(45)栄養強化剤
 貝殻焼成カルシウム、シアノコバラミン、酵母、小麦胚芽、卵黄粉末、ヘミセルロース、ヘム鉄等。
(46)乳製品
 牛乳、チーズ、生クリーム、バター、マーガリン、粉乳、ホエー、練乳等。
(47)その他
 ホルモン類、金属イオン封鎖剤、pH調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質及びその分解物、動・植物性多糖類及びその分解物、動・植物性糖蛋白質及びその分解物、血流促進剤、抗炎症剤・消炎剤・抗アレルギー剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、酵素、精製水(電子水、小クラスター化等を含む)、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、調味料等が上げられ、これらと併用することによって、本発明効果又は他の美容的効果の相加的又は相乗的向上が期待できる。
[各種健康食品又は健康飲料,化粧料組成物の製造]
 本発明により得られたプロテオグリカンを用い各種健康食品又は健康飲料,化粧料組成物を製造した。以下にその処方例を示す。尚、エタノールはEtOH、1,3-ブチレングリコールは1,3-BGと略記する。
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 本発明による、魚類、軟体動物、鳥類もしくは哺乳類の軟骨組織、筋肉組織又は皮膚組織より抽出されるプロテオグリカンは、より効率的かつ高純度で、軟骨前駆細胞増殖促進、軟骨分化促進、軟骨石灰化抑制といった優れた効果を有する。従来のプロテオグリカンと同等以上の高品質のプロテオグリカンの製造法を提供する。本発明で得られたプロテオグリカンは、健康食品や健康飲料、医薬品組成物や化粧料組成物の原料として利用が可能である。

 

Claims (6)

  1.  プロテオグリカンを含有する生物学的試料から、酢酸溶液を用いてプロテオグリカンを抽出する方法で、当該生物学的試料の表面全体を酢酸溶液が流動的に接触する条件で抽出を行い、且つ抽出中の酢酸溶液の温度が、20~40℃であることを特徴とするプロテオグリカンの製造方法。
  2.  プロテオグリカンを含有する生物学的試料の表面全体を酢酸溶液が流動的に接触する条件で抽出を行う際の酢酸溶液の流速が、0.04~10.0cm/secである、請求項1記載のプロテオグリカンの製造方法。
  3.  抽出工程の後にプロテオグリカンを分離精製する工程を含む、請求項1又は2の何れかに記載のプロテオグリカンの製造方法。
  4.  プロテオグリカンを含有する生物学的試料が、魚類,軟体動物,鳥類,又は哺乳類の軟骨組織、筋肉組織、若しくは皮膚組織である請求項1~3の何れかに記載のプロテオグリカンの製造方法。
  5.  プロテオグリカンを含む健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法であって、
    (a)プロテオグリカンを含む生物学的試料を、0.01~20重量%の酢酸溶液と流動条件下に接触させてプロテオグリカンを酢酸溶液中に抽出する工程、ここで、この酢酸溶液は生物学的試料の表面全体を流動し、且つ抽出中の酢酸溶液の温度が20~40℃であり、
    (b)抽出後の酢酸溶液からプロテオグリカンを分離精製する工程、及び
    (c)前記分離精製されたプロテオグリカンを、前記健康食品、健康飲料、又は化粧料組成物の基材に添加する工程を含むことを特徴とする、健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法。
  6.  前記精製されたプロテオグリカンが、軟骨前駆細胞の増殖促進、軟骨分化促進及び/又は軟骨石灰化抑制における改善された作用を有する請求項5に記載の健康食品、健康飲料、医薬品組成物又は化粧料組成物の製造方法。
     

     
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