WO2019111904A1 - インターフェロンγの産生を促進させるための組成物 - Google Patents

インターフェロンγの産生を促進させるための組成物 Download PDF

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WO2019111904A1
WO2019111904A1 PCT/JP2018/044595 JP2018044595W WO2019111904A1 WO 2019111904 A1 WO2019111904 A1 WO 2019111904A1 JP 2018044595 W JP2018044595 W JP 2018044595W WO 2019111904 A1 WO2019111904 A1 WO 2019111904A1
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interferon
eps
promoting
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ジェラール エベール
ボネカ イヴォ ゴンパーツ
宏 狩野
聖也 牧野
幸夫 浅見
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株式会社明治
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    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Definitions

  • the present invention relates to a composition for promoting the production of interferon ⁇ .
  • Influenza and other pathogenic viruses can be said to be a threat that civilization always faces.
  • the innate immune system is at the forefront to prevent virus invasion and proliferation into the living body at the forefront, and it is known that cytokines such as interferon are involved in this .
  • substances that can control the production of interferon and the like have been searched in various fields.
  • Patent Document 1 describes a dendritic cell activating agent containing an extract of Cordyceps sinensis as an active ingredient, and the production of interferon ⁇ is enhanced by the activation of dendritic cells. The action is also described.
  • JP 2009-256312 A describes polysaccharides produced by Cremoris bacteria, which have an action of inducing the production of interferon ⁇ and interleukin-6.
  • the present inventors paid attention to lactic acid bacteria, and examined in detail again the physiological activity of lactic acid bacteria itself, and the utilization method of the metabolite of lactic acid bacteria. As a result, the present inventors have found that polysaccharides (extracellular polysaccharides (EPS)) produced by predetermined lactic acid bacteria outside the cell have an excellent promoting action on interferon ⁇ production, and completed the present invention.
  • EPS extracellular polysaccharides
  • a composition for promoting the production of interferon ⁇ by immune cells selected from the group consisting of CD4 ⁇ T cells, CD8 ⁇ T cells, ⁇ T cells, Th17 cells, and ILC3 cells, which comprises extracellular polysaccharide (EPS) as an active ingredient object.
  • EPS extracellular polysaccharide
  • a composition for promoting the production of interferon ⁇ by CD4 ⁇ T cells which comprises extracellular polysaccharide (EPS) as an active ingredient.
  • EPS extracellular polysaccharide
  • a composition for promoting the production of interferon ⁇ by ⁇ T cells which comprises extracellular polysaccharide (EPS) as an active ingredient.
  • a composition for promoting the production of interferon ⁇ by Th17 cells which comprises exopolysaccharide (EPS) as an active ingredient.
  • a composition for promoting the production of interferon ⁇ by ILC3 cells which comprises exopolysaccharide (EPS) as an active ingredient.
  • EPS extracellular polysaccharide
  • the exopolysaccharide is an exopolysaccharide (EPS) produced by Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, [1] (eg, [1-] The composition according to any one of 1) to [1-5] or [2].
  • Lactobacillus delbulcii subspecies bulgaricus (Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus) is a strain of Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus (Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus) OLL 1073 R-1 (Accession No.
  • the present invention also includes the following embodiments.
  • [A] In any one of [1] (for example, [1-1] to [1-5]) to [4], wherein the intake amount of the active ingredient EPS is 1 mg / kg / day or more Composition of [B-1] Use of exopolysaccharide (EPS) in the production of a composition for promoting the production of interferon ⁇ by CD4 ⁇ T cells.
  • [B-2] Use of exopolysaccharide (EPS) in the production of a composition for promoting the production of interferon ⁇ by CD8 ⁇ T cells.
  • [B-3] Use of exopolysaccharide (EPS) in the manufacture of a composition for promoting the production of interferon ⁇ by ⁇ T cells.
  • Extracellular polysaccharide (EPS) is Lactobacillus delbrueckii subsp. The composition according to any one of [b-1] to [b-5], which is an exopolysaccharide (EPS) produced by bulgaricus.
  • [C-1] A method for promoting interferon ⁇ production by CD4 ⁇ T cells, which comprises using exopolysaccharide (EPS).
  • [C-2] A method for promoting interferon ⁇ production by CD8 ⁇ T cells, which comprises using exopolysaccharide (EPS).
  • [C-3] A method for promoting interferon ⁇ production by ⁇ T cells, which comprises using exopolysaccharide (EPS).
  • [C-4] A method for promoting interferon ⁇ production by Th17 cells, which comprises using exopolysaccharide (EPS).
  • [C-5] A method for promoting interferon ⁇ production by ILC3 cells, which comprises using exopolysaccharide (EPS).
  • EPS exopolysaccharide
  • EPS exopolysaccharide
  • the present specification includes the disclosure content of Japanese Patent Application No. 2017-232669 on which the priority of the present application is based.
  • the present invention it is possible to provide a composition for promoting the production of interferon ⁇ that exerts an excellent effect. Since the exopolysaccharide which is an active ingredient of the present invention is derived from lactic acid bacteria and the safety thereof is sufficiently supported by long eating experience, to promote the production of interferon ⁇ of the present invention
  • the composition of the present invention can be taken safely and conveniently.
  • “H 2 O” indicates the results from the distilled water-treated group
  • “EPS” indicates the result from the EPS-treated group
  • the vertical axis indicates CD8 ⁇ T cells (IFN) that produced IFN- ⁇ among leukocytes (CD45 + CD19 ⁇ cells) other than B cells.
  • IFN CD8 ⁇ T cells
  • Bars on the graph indicate standard deviations. It is a graph which shows the production promotion effect of IFN- (gamma) by EPS in Th17 cells recognized in the Example.
  • H 2 O indicates the results from the distilled water-treated group
  • EPS indicates the result from the EPS-treated group
  • the vertical axis indicates Th17 cells (IFN) that produced IFN- ⁇ in leukocytes (CD45 + CD19 ⁇ cells) other than B cells.
  • IFN Th17 cells
  • Bars on the graph indicate standard deviations. It is a graph which shows the production promotion effect of IFN- (gamma) by EPS in ROR (gamma) t positive (gamma) (delta) T cell recognized in the Example.
  • Control shows the results of the distilled water treated group
  • EPS shows the result of the EPS treated group
  • the vertical axis shows the percentage (%) of IFN- ⁇ positive cells among ROR ⁇ t positive ⁇ T cells (RORgt + gdTc) . Bars on the graph indicate standard deviations. It is a graph which shows the production promotion effect of IFN-gamma by EPS in ILC3 cells recognized in the Example. “Control” shows the results of the distilled water treated group, “EPS” shows the result of the EPS treated group, and the vertical axis shows the percentage (%) of IFN- ⁇ positive ILC3 cells. Bars on the graph indicate standard deviations.
  • the present invention relates to a composition for promoting the production of interferon ⁇ , which comprises exopolysaccharide (EPS) as an active ingredient.
  • the exopolysaccharide is a polysaccharide which is produced by certain lactic acid bacteria and the like and produced outside the fungus.
  • Bulgaricus OLL 1073 R-1 accesion No. FERM BP-10741
  • strain has a neutral polysaccharide and a phosphate group added to the neutral polysaccharide. It is known to produce an acidic polysaccharide.
  • the exopolysaccharide used in the present invention also has a strain that produces a neutral polysaccharide.
  • the exopolysaccharide used in the present invention one type of exopolysaccharide may be used alone, or two or more types of exopolysaccharides may be used in combination.
  • an acid polysaccharide and a neutral polysaccharide may be used in combination.
  • Bulgaricus OLL1073 R-1 (Accession No. FERM BP-10741) such as Lactobacillus delbrueckii subsp.
  • the exopolysaccharide produced by bulgaricus can be suitably used to promote the production of interferon ⁇ .
  • the exopolysaccharide of the present invention may be, for example, Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus OLL1073 R-1 (Accession No. FERM BP-10741) such as Lactobacillus delbrueckii subsp. It may be included in a culture such as yoghurt prepared using bulgaricus as a starter.
  • the compositions of the invention comprise an effective amount of such exopolysaccharides.
  • a culture such as yogurt (fermented milk) containing the exopolysaccharide of the present invention is, for example, Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus OLL1073 R-1 (Accession No. FERM BP-10741) such as Lactobacillus delbrueckii subsp. It can be produced using bulgaricus as a sole starter or as a mixed starter with other lactic acid bacteria such as Streptococcus thermophilus.
  • Lactobacillus delbrueckii subsp The bulgaricus OLL1073R-1 strain was incorporated by the National Institute of Technology and Evaluation, National Institute of Technology and Evaluation on February 22, 1999 (the original deposit date) on the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (NITE-IPOD) Center]) ( ⁇ 292-0818, Kazusa Tsuji, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan) has been internationally deposited under the Budapest Treaty under Accession No. FERM BP-10741. The deposited strain was transferred from the domestic deposit (original deposit) to the international deposit under the Budapest Treaty on November 29, 2006. Lactobacillus delbrueckii subsp. The current depositor of bulgaricus OLL 1073R-1 (Accession No. FERM BP-10741) is Meiji Co., Ltd.
  • the exopolysaccharide used in the present invention may be used without purifying the culture of lactic acid bacteria containing exopolysaccharide as it is, for example, using the method described in JP-A-2000-247895, etc.
  • the exopolysaccharide isolated from the culture of the lactic acid bacteria containing exopolysaccharide or further purified as needed may be used.
  • a culture of lactic acid bacteria is crushed into a concentrate of the culture, a paste, a spray-dried product, a lyophilizate, a vacuum-dried product, a drum-dried product, a liquid dispersed in a medium, a diluted product, a dried product
  • You may use as a processed material which passed through the treatment process of the crushed material etc.
  • composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention exerts its function by being ingested by mammals including human.
  • the term "ingestion” as used herein is not limited to the administration route as long as it enters the human body (digestive tract), and for example, known administration methods such as oral administration, tube administration, enteral administration, etc. It can be realized by all.
  • oral intake via the gastrointestinal tract, enteral intake may be mentioned, but oral intake is preferable, and intake by eating and drinking is more preferable.
  • the dose of the composition for promoting the production of the interferon ⁇ of the present invention should be appropriately set in consideration of various factors such as the administration route, age, body weight and symptoms. Can.
  • the dose of the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention is not particularly limited, but the amount of exopolysaccharide as an active ingredient is preferably 1 mg / kg body weight / day or more, more preferably 5 mg / Kg body weight / day or more, particularly preferably 10 mg / kg body weight / day or more. However, when taken over a long period of time, it may be smaller than the above-mentioned preferred amount.
  • the active ingredient used in the present invention is derived from lactic acid bacteria with sufficient food experience, and there is no problem in terms of safety, so the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention
  • the dose may be an amount (for example, 100 mg / kg body weight / day or more) which greatly exceeds the above-mentioned amount as the amount of exopolysaccharide as the active ingredient.
  • the weight per unit package of the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention is not particularly limited, for example, the weight is preferably in the range of 10 g to 500 g, and in the range of 25 g to 250 g.
  • the content is more preferably in the range of 50 g to 200 g, and most preferably in the range of 75 g to 150 g.
  • the above unit packaging may be not only unit packaging per bag, box, container, unit packaging per unit contained in them, or unit packaging per day.
  • a plurality of days for example, an amount obtained by packaging a suitable quantity for intake for one week may be packaged, or a plurality of individual packages may be included.
  • the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention is preferably continuously taken for preferably 3 weeks or more, more preferably 5 weeks or more, still more preferably 8 weeks or more.
  • the intake period is not particularly limited, and can be continued permanently. From the viewpoint of obtaining a sufficiently effective interferon ⁇ production promoting effect, it is preferable to set the intake period to about 8 weeks.
  • the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention can be used as a food and drink.
  • the present invention also provides a composition according to the present invention or a food or beverage containing an exopolysaccharide.
  • the food and drink according to the present invention is one or more selected from the group consisting of CD4 ⁇ T cells, CD8 ⁇ T cells, ⁇ T cells, Th17 cells, and ILC3 cells (two, three, four or all five) It may be for promoting the production of interferon ⁇ by immune cells.
  • the food and drink are useful in that they have an interferon ⁇ production promoting effect, and can be used, for example, as a food and drink having an antiviral action.
  • the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention can also be a health food or a food for the sick.
  • the Japanese Health Function Food System was established not only for ordinary foods but also for food in the form of tablets, capsules, etc., based on internal and external trends and consistency with the conventional food system for specific health use. It is. The same system defines two types of food for specific health use (individual permission type) and nutritional function food (standard standard type).
  • the composition of the present invention can also be used as a functional food such as a health food to which a health claim (Health claim) based on the food standards of Codex (FAO / WHO Joint Food Standards Committee) is applied.
  • composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention By administering the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention to animals such as humans as a special purpose food such as a food for specified health use or as a nutraceutical food, or as another functional food, for example This makes it possible to prevent various pathogen infections.
  • composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention it is preferable to display a description of its use, efficacy, function, kind of active ingredient, kind of functional ingredient, intake method and the like.
  • “Indication” as used herein refers to pharmaceuticals, quasi-drugs, health food, food for specified health, nutritional food, general food, health supplement, health food, supplement, enteral nutrition agent, oral cosmetics, and feed It should be a suitable indication in each. Also, the term “indication” as used herein includes all indications for informing the consumer of the above description.
  • This display may be any display that recalls or infers the above-mentioned display contents, and may include all display regardless of the purpose of display, the contents of display, the object / medium to be displayed, and the like. For example, displaying the above description on a product packaging / container, displaying or distributing the above description on an advertisement / price list or transaction document relating to the product, or electromagnetically (for example, the Internet) Provided by the method).
  • the type of food or drink is not particularly limited.
  • Food and drink include, for example, milk, processed milk, soft drink, fermented milk, yogurt, cheese, other dairy products, bread, biscuits, crackers, pizza crust, prepared milk powder, liquid food, sick food, infant milk powder, etc. It may be food, food such as milk powder for pregnant and lactating women, nutritional food and the like.
  • the extracellular polysaccharide which is an active ingredient of the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention is used as it is, or mixed with other food and drink or food ingredients. For example, manufacturing methods in common food compositions can be used.
  • the shape of the food or drink is not particularly limited, and any shape of a commonly used food or drink may be used.
  • it may be in any form such as solid (including powder and granular), paste, liquid, suspension and the like, and is not limited thereto.
  • the food or drink is more preferably a milk drink, fermented milk, a soft drink, a jelly drink, a tablet, or a powdered food, and yogurt is particularly preferable.
  • the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention can be used as a pharmaceutical.
  • the invention also provides a composition according to the invention or a medicament comprising an exopolysaccharide.
  • the medicament according to the present invention is one or two or more (two, three, four or all five) of immunity selected from the group consisting of CD4 ⁇ T cells, CD8 ⁇ T cells, ⁇ T cells, Th17 cells, and ILC3 cells. It may be for promoting the production of interferon ⁇ by cells.
  • the dose of the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention in the pharmaceutical preparation is not particularly limited, but preferably 1 mg / kg, for example, as the amount of exopolysaccharide as an active ingredient.
  • Body weight / day or more more preferably 5 mg / kg body weight / day or more, particularly preferably 10 mg / kg body weight / day or more. Moreover, when it ingests for the purpose of prevention over a long period of time, it may be smaller than the above amount.
  • the dosage form of the above-mentioned medicine is preferably a dosage form which can be orally administered in order to allow the composition for promoting the production of interferon ⁇ of the present invention or extracellular polysaccharide to reach the intestine.
  • Examples of preferable dosage forms of the medicament according to the present invention include, for example, tablets, coated tablets, capsules, granules, powders, solutions, syrups, troches and the like.
  • compositions can be added to an extracellular polysaccharide which is a main drug according to a conventional method, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a coloring agent, a flavoring agent, a solubilizing agent, a suspending agent, It can be formulated by mixing together auxiliaries which can usually be used in the pharmaceutical formulation art such as coating agents.
  • composition of the present invention and exopolysaccharide can promote the production of interferon ⁇ by immune cells.
  • immune cells may be one or more (two, three, four or all five) types of immunity selected from the group consisting of CD4 ⁇ T cells, CD8 ⁇ T cells, ⁇ T cells, Th17 cells, and ILC3 cells. It can be a cell.
  • the composition and exopolysaccharide (EPS) of the present invention are two or more (2 or 3) selected from the group consisting of CD4 ⁇ T cells, CD8 ⁇ T cells, ⁇ T cells, Th17 cells, and ILC3 cells. 4 or all 5) immune cells can promote the production of interferon ⁇ .
  • the promotion of interferon ⁇ production in these cells is particularly advantageous in terms of infection protection, anti-tumor and the like.
  • the invention also provides the use of exopolysaccharide (EPS) in the manufacture of a composition for promoting the production of interferon gamma.
  • the present invention also provides a method for promoting interferon ⁇ production, which comprises using exopolysaccharide (EPS).
  • EPS exopolysaccharide
  • Such methods for promoting interferon-gamma production include, for example, treating immune cells producing interferon-gamma with exopolysaccharide (EPS) (eg, contacting with EPS in vitro, ex vivo, or in vivo) And a method of promoting interferon ⁇ production by immune cells.
  • One or two or more types (two, three, four or all five types) of immune cells producing interferon gamma are selected from the group consisting of CD4 ⁇ T cells, CD8 ⁇ T cells, ⁇ T cells, Th17 cells, and ILC3 cells.
  • the method of promoting interferon gamma production as described above may be a method of promoting interferon gamma production in a subject, comprising administering a composition of the present invention or exopolysaccharide (EPS) to the subject.
  • the subject may be a mammal, including a human.
  • the extracellular polysaccharide (EPS), the dose and the like are as described above.
  • the exopolysaccharide is Lactobacillus delbrueckii subsp.
  • a yoghurt prepared with bulgaricus OLL 1073 R-1 (Accession No .: FERM BP-10741) as a starter is used as a raw material (source), as described in J. Org. Dairy Sci.
  • the purified product was used according to the method described in 99, 915-923.
  • “Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus OLL1073R-1” is a Accession No. FERM BP-10741 (Deposition Date: February 22, 1999) which was submitted to the International Patent Organism Depositary (NITE-IPOD). Has been deposited.
  • C57 / BL / 6j mice (7 weeks old) were divided into groups, and then distilled water or EPS (500 ⁇ g / mouse) was orally administered for 7 days.
  • lymphocytes were collected from the intestinal mucosa lamina intestinal of each mouse, and cell populations (populations) and cytokine production patterns were analyzed.
  • Preparation of cells was performed by excising Peyer's patches from the small intestine, cutting into small pieces and incubating for 30 minutes with a 30 mM EDTA solution. The cells were washed after incubation and incubated under 0.7 mg / mL collagenase D.
  • lymphocytes were separated using 40/80% (w / v) Percoll (manufactured by GE Healthcare, registered trademark). The separated lymphocytes were restimulated for 4 hours by culturing in the presence of 50 ng / mL PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate; phorbol 12-myristate 13-acetate) and 500 ng / mL ionomycin.
  • PMA phorbol 12-myristate 13-acetate
  • phorbol 12-myristate 13-acetate phorbol 12-myristate 13-acetate
  • 500 ng / mL ionomycin 500 ng / mL ionomycin.
  • Brefeldin A Brefeldin A was added in the second half of the culture.
  • cell surface molecules and intracellular molecules for identification of each cell, and intracellular IFN- ⁇ and ROR ⁇ t are stained, and IFN- ⁇ positive in each cell population with BD Fortessa cytometer (BD Biosciences) The percentage of cells was measured.
  • Each cell population was identified from the CD45 + CD19 ⁇ cells (corresponding to leukocytes other than B cells) by the following cell surface molecules and intracellular molecules.
  • CD4 ⁇ T cells CD4 + TCR ⁇ +
  • CD8 ⁇ T cells CD8 ⁇ + TCR ⁇ +
  • ILC3 (group 3 innate lymphoid cells) cells CD3-CD19-CD11b-CD11c-IL7R ⁇ + ROR ⁇ t +
  • ⁇ T cells TCR ⁇ +
  • Th17 cells TCR ⁇ + ROR ⁇ t +.
  • FIG. 1 shows the effect of EPS on IFN- ⁇ production promotion in CD4 ⁇ T cells.
  • the proportion of IFN- ⁇ positive cells was significantly increased in the EPS administration group (risk rate (p value) by t test is 0.0445). This indicates that EPS promotes the production of IFN- ⁇ by CD4 ⁇ T cells.
  • FIG. 2 shows the effect of EPS on IFN- ⁇ production promotion in CD8 ⁇ T cells.
  • the proportion of IFN- ⁇ positive cells was significantly increased in the EPS administration group (risk rate (p value) by t test: 0.0168). This indicates that EPS promotes the production of IFN- ⁇ by CD8 ⁇ T cells.
  • FIG. 3 shows the effect of EPS on IFN- ⁇ production promotion in Th17 cells.
  • the percentage of IFN- ⁇ positive cells was significantly increased in the EPS administration group as compared to the results in the distilled water administration group (risk rate (p value) by t test: 0.0263). This indicates that EPS promotes the production of IFN- ⁇ by Th17 cells.
  • FIG. 4 shows the effect of EPS on IFN- ⁇ production promotion in ROR ⁇ t-positive ⁇ T cells.
  • the proportion of IFN- ⁇ positive cells was significantly increased in the EPS administration group (risk rate (p value) by t test is 0.0302). This indicates that EPS promotes the production of IFN- ⁇ by ⁇ T cells.
  • FIG. 5 shows the effect of EPS on IFN- ⁇ production promotion in ILC3 cells.
  • the proportion of IFN- ⁇ positive cells was significantly increased in the EPS administration group (risk rate (p value: 0.0141 by t test)). This indicates that EPS promotes the production of IFN- ⁇ by ILC3 cells.

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Abstract

本発明は、菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、各種の免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物を提供する。

Description

インターフェロンγの産生を促進させるための組成物
　本発明は、インターフェロンγの産生を促進させるための組成物に関する。
　インフルエンザ等の病原性ウイルスは、人類が常に直面している脅威であるといえる。ウイルスの脅威への対処については、生体内へのウイルスの侵入や増殖を最前線で防ぐ自然免疫系が重要であり、これには、インターフェロン等のサイトカインが関与していることが知られている。このような事情から、これまでに、インターフェロン等の産生を制御できる物質が、様々な分野で探索されている。
　例えば、特開２００６－１２４３８２号公報（特許文献１）には、冬虫夏草の抽出物を有効成分とする樹状細胞活性化剤が記載されており、樹状細胞の活性化によるインターフェロンγの産生増強作用も記載されている。特開２００９－２５６３１２号公報（特許文献２）には、インターフェロンγやインターロイキン－６の産生を誘導する作用を有する、クレモリス菌が産生する多糖類が記載されている。
特開２００６－１２４３８２号公報 特開２００９－２５６３１２号公報
　上記のように、インターフェロンの産生を制御できる様々な物質が探索されている。しかし、必ずしも十分な産生制御効果を得ることができなかったり、特定のインターフェロンしか評価や検討されていないこともあった。また、探索して得られた物質から、インターフェロンが産生されるメカニズムについても、あまり明らかになっていなかった。
　そこで、本発明では、安全かつ簡便に摂取することができ、一方で十分なインターフェロンの産生を促進できる組成物を提供することを課題とする。
　上記課題を解決するために、本発明者らは、乳酸菌に着目し、乳酸菌そのものの生理活性や、乳酸菌の代謝物の活用方法について、改めて詳細に検討した。その結果として、所定の乳酸菌が菌体外に産生する多糖類（菌体外多糖（ＥＰＳ））に、優れたインターフェロンγ産生の促進作用があることを見出し、本発明を完成させた。
　すなわち、本発明は、以下の態様に関する。
［１］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
　この組成物の例として以下が挙げられる。
［１－１］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、ＣＤ４αβＴ細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
［１－２］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、ＣＤ８αβＴ細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
［１－３］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、γδＴ細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
［１－４］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、Ｔｈ１７細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
［１－５］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、ＩＬＣ３細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
［２］菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、ならびにＩＬＣ３細胞から選ばれる２種以上の免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
［３］菌体外多糖（ＥＰＳ）が、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）が産生する菌体外多糖（ＥＰＳ）である、［１］（例えば［１－１］～［１－５］のいずれか１つ）または［２］に記載の組成物。
［４］ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）がラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）である、［３］に記載の組成物。
［５］［１］～［４］のいずれかに記載の組成物を含み、かつ、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための飲食品。
［６］［１］～［４］のいずれかに記載の組成物を含み、かつ、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための医薬品。
　また、本発明には、以下の態様も包含される。
［ａ］有効成分であるＥＰＳの摂取量が、１ｍｇ／ｋｇ／日以上である、［１］（例えば［１－１］～［１－５］）～［４］のいずれか１つに記載の組成物。
［ｂ－１］ＣＤ４αβＴ細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の製造における、菌体外多糖（ＥＰＳ）の使用。
［ｂ－２］ＣＤ８αβＴ細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の製造における、菌体外多糖（ＥＰＳ）の使用。
［ｂ－３］γδＴ細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の製造における、菌体外多糖（ＥＰＳ）の使用。
［ｂ－４］Ｔｈ１７細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の製造における、菌体外多糖（ＥＰＳ）の使用。
［ｂ－５］ＩＬＣ３細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の製造における、菌体外多糖（ＥＰＳ）の使用。
［ｂ－６］菌体外多糖（ＥＰＳ）が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓが産生する菌体外多糖（ＥＰＳ）である、［ｂ－１］～［ｂ－５］のいずれか１つに記載の組成物。
［ｂ－７］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓがＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）である、［ｂ－６］に記載の組成物。
　さらに、本発明には、以下の態様も包含される。
［ｃ－１］菌体外多糖（ＥＰＳ）を用いることを特徴とする、ＣＤ４αβＴ細胞によるインターフェロンγ産生の促進方法。
［ｃ－２］菌体外多糖（ＥＰＳ）を用いることを特徴とする、ＣＤ８αβＴ細胞によるインターフェロンγ産生の促進方法。
［ｃ－３］菌体外多糖（ＥＰＳ）を用いることを特徴とする、γδＴ細胞によるインターフェロンγ産生の促進方法。
［ｃ－４］菌体外多糖（ＥＰＳ）を用いることを特徴とする、Ｔｈ１７細胞によるインターフェロンγ産生の促進方法。
［ｃ－５］菌体外多糖（ＥＰＳ）を用いることを特徴とする、ＩＬＣ３細胞によるインターフェロンγ産生の促進方法。
［ｃ－６］菌体外多糖（ＥＰＳ）が、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓが産生する菌体外多糖（ＥＰＳ）である、［ｃ－１］～［ｃ－５］のいずれか１つに記載の方法。
［ｃ－７］Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓがＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）である、［ｃ－６］に記載の方法。
　本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０１７－２３２６６９号の開示内容を包含する。
　本発明によれば、優れた効果を発揮するインターフェロンγの産生を促進させるための組成物を提供できる。本発明の有効成分である菌体外多糖は、乳酸菌に由来するものであり、その安全性は長い食経験により十分に裏付けられたものであるから、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は、安全かつ簡便に摂取できるものである。
実施例で認められた、ＣＤ４αβＴ細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示すグラフである。「Ｈ２Ｏ」は蒸留水処理群、「ＥＰＳ」はＥＰＳ処理群の結果を示し、縦軸は、Ｂ細胞以外の白血球（ＣＤ４５＋ＣＤ１９－細胞）の中でＩＦＮ－γを産生したＣＤ４αβＴ細胞（ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ４αβＴ細胞）の割合（％）を示している。グラフ上のバーは標準偏差を示している。 実施例で認められた、ＣＤ８αβＴ細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示すグラフである。「Ｈ２Ｏ」は蒸留水処理群、「ＥＰＳ」はＥＰＳ処理群の結果を示し、縦軸は、Ｂ細胞以外の白血球（ＣＤ４５＋ＣＤ１９－細胞）の中でＩＦＮ－γを産生したＣＤ８αβＴ細胞（ＩＦＮ－γ陽性ＣＤ８αβＴ細胞）の割合（％）を示している。グラフ上のバーは標準偏差を示している。 実施例で認められた、Ｔｈ１７細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示すグラフである。「Ｈ２Ｏ」は蒸留水処理群、「ＥＰＳ」はＥＰＳ処理群の結果を示し、縦軸は、Ｂ細胞以外の白血球（ＣＤ４５＋ＣＤ１９－細胞）の中でＩＦＮ－γを産生したＴｈ１７細胞（ＩＦＮ－γ陽性Ｔｈ１７細胞）の割合（％）を示している。グラフ上のバーは標準偏差を示している。 実施例で認められた、ＲＯＲγｔ陽性のγδＴ細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示すグラフである。「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は蒸留水処理群、「ＥＰＳ」はＥＰＳ処理群の結果を示し、縦軸は、ＲＯＲγｔ陽性のγδＴ細胞（ＲＯＲｇｔ＋ｇｄＴｃ）のうち、ＩＦＮ－γ陽性細胞の割合（％）を示している。グラフ上のバーは標準偏差を示している。 実施例で認められた、ＩＬＣ３細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示すグラフである。「Ｃｏｎｔｒｏｌ」は蒸留水処理群、「ＥＰＳ」はＥＰＳ処理群の結果を示し、縦軸はＩＦＮ－γ陽性ＩＬＣ３細胞の割合（％）を示している。グラフ上のバーは標準偏差を示している。
　本発明は、菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、インターフェロンγの産生を促進させるための組成物に関する。菌体外多糖とは、ある種の乳酸菌等が産生し、その菌体外へ産生する多糖類である。例えば、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）株は、中性多糖体と、中性多糖体にリン酸基が付加した酸性多糖体を産生することが知られている。また、その他に、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシーズ・クレモリス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｌａｃｔｉｓ　ｓｕｂｓｐ．　ｃｒｅｍｏｒｉｓ）等も中性多糖体を産生する株があることが知られている。本発明に用いられる菌体外多糖としては、１種の菌体外多糖を単独で用いてもよいし、２種以上の菌体外多糖を組み合わせて用いてもよい。菌体外多糖として、例えば酸性多糖体と中性多糖体を組み合わせて用いてもよい。本発明の一実施形態では、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）株等のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓが産生する菌体外多糖を、インターフェロンγの産生を促進させるために好適に使用することができる。本発明の菌体外多糖は、上記の乳酸菌等、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）株等のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓをスターターとして用いて調製したヨーグルトなどの培養物に含まれるものであってよい。本発明の組成物は有効量のそのような菌体外多糖を含む。本発明の菌体外多糖を含むヨーグルト（発酵乳）などの培養物は、例えばＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）株等のＬａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓを単独スターターとして用いて、または、それをストレプトコッカス・サーモフィルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）などの他の乳酸菌との混合スターターとして用いて、製造することができる。
　Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１株は、１９９９年２月２２日付け（原寄託日）で独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許生物寄託センター（ＮＩＴＥ－ＩＰＯＤ［旧：独立行政法人　産業技術総合研究所　特許生物寄託センター］）（〒292-0818　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８　１２０号室）に、受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１の下でブタペスト条約に基づき国際寄託されている。なお本寄託株は２００６年１１月２９日に、国内寄託（原寄託）からブダペスト条約に基づく国際寄託に移管された。Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１株（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）の現在の寄託者は株式会社明治である。
　本発明に用いられる菌体外多糖は、菌体外多糖を含む乳酸菌の培養物をそのまま精製せずに用いてもよいし、例えば特開２０００－２４７８９５号に記載された方法等を用いて、菌体外多糖を含む乳酸菌の培養物から単離または必要に応じてさらに精製された菌体外多糖を用いてもよい。また、例えば乳酸菌の培養物を、当該培養物の濃縮物、ペースト化物、噴霧乾燥物、凍結乾燥物、真空乾燥物、ドラム乾燥物、媒体に分散させた液状物、希釈物、乾燥物を破砕した破砕物などの処理工程を経た処理物として用いてもよい。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は、ヒトをはじめとする哺乳動物に摂取されることによって、その機能を発揮する。なお、ここにいう「摂取」とは、ヒトの体内（消化管内）に入るものであれば投与経路に限定はなく、例えば、経口投与、経管投与、経腸投与など、公知の投与方法の全てによって実現され得る。このとき、典型的には、消化管を経由する経口摂取、経腸摂取が挙げられるが、経口摂取が好ましく、飲食による摂取がより好ましい。
　菌体外多糖を有効成分とする本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の投与量は、投与経路、年齢、体重、症状などの種々の要因を考慮して、適宜設定することができる。本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の投与量は、特に限定されないが、有効成分である菌体外多糖の量として、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇ体重／日以上、特に好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ体重／日以上である。しかし、長期間にわたって摂取する場合には、上記の好ましい量より少量であってもよい。また、本発明で用いられる有効成分は、十分な食経験がある乳酸菌に由来するものであり、安全性の面で問題がないので、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の投与量は、有効成分である菌体外多糖の量として、上記の量を大きく超える量（例えば、１００ｍｇ／ｋｇ体重／日以上）でもよい。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の単位包装あたりの重量は特に限定されないが、例えば、その重量は１０ｇ以上５００ｇ以下の範囲内であることが好ましく、２５ｇ以上２５０ｇ以下の範囲内であることがより好ましく、５０ｇ以上２００ｇ以下の範囲内であることがさらに好ましく、７５ｇ以上１５０ｇ以下の範囲内であることが最も好ましい。また、上記の単位包装とは、袋、箱、容器当たりの単位包装のみならず、それらに含まれる一回あたりの単位包装であってもよいし、一日当たりの単位包装であってもよい。なお、複数の日数、例えば１週間分の摂取に適切な数量をまとめて包装したもの、または複数の個包装を含むもの等とすることもできる。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は、好ましくは３週間以上、より好ましくは５週間以上、さらに好ましくは８週間以上で継続して摂取することが好ましい。なお、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は安全に摂取できるため、摂取期間は特に限定されず、永久的に継続することができる。十分に有効なインターフェロンγ産生促進効果が得られる観点から、摂取期間は８週間を目安とすることが好ましい。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は、飲食品として使用することができる。本発明は、本発明に係る組成物または菌体外多糖を含む飲食品も提供する。本発明に係る飲食品は、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる１種又は２種以上（２種、３種、４種又は５種全て）の免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進するためのものであってよい。その飲食品は、インターフェロンγ産生促進効果を有する点で有用であり、例えば、抗ウイルス作用を有する飲食品として使用することができる。さらに、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は、保健機能食品や病者用食品とすることもできる。日本の保健機能食品制度は、内外の動向、従来からの特定保健用食品制度との整合性を踏まえて、通常の食品のみならず錠剤、カプセル等の形状をした食品を対象として設けられたものである。そして、同制度では、特定保健用食品（個別許可型）と栄養機能食品（規格基準型）の２種類の類型が規定されている。本発明の組成物は、コーデックス（ＦＡＯ／ＷＨＯ合同食品規格委員会）の食品規格に基づく健康強調表示（Ｈｅａｌｔｈ　ｃｌａｉｍ）が適用される健康食品などの機能性食品として、使用することもできる。本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物を、特定保健用食品等の特別用途食品や栄養機能食品として、または他の機能性食品として、ヒト等の動物に投与することにより、例えば、各種の病原体感染に対する予防が可能となる。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物に、その用途、効能、機能、有効成分の種類、機能性成分の種類、摂取方法などの説明を表示することが好ましい。ここにいう「表示」は、医薬品、医薬部外品、保健機能食品、特定保健用食品、栄養機能食品、一般食品、健康補助食品、健康食品、サプリメント、経腸栄養剤、口腔化粧品、および飼料それぞれにおいて適した表示とすべきである。また、ここにいう「表示」には、需要者に対して上記説明を知らしめるための全ての表示が含まれる。この表示は、上述の表示内容を想起・類推させ得るような表示であればよく、表示の目的、表示の内容、表示する対象物・媒体などの如何に拘わらない全てのあらゆる表示を含み得る。例えば、製品の包装・容器に上記説明を表示すること、製品に関する広告・価格表もしくは取引書類に上記説明を表示して展示もしくは頒布すること、またはこれらを内容とする情報を電磁気的（インターネットなど）方法により提供することが挙げられる。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物を飲食品とする場合、飲食品の種類は特に限定されない。飲食品は、例えば、牛乳、加工乳、清涼飲料、発酵乳、ヨーグルト、チーズ、その他の乳製品、パン、ビスケット、クラッカー、ピッツァクラスト、調製粉乳、流動食、病者用食品、乳幼児用粉乳等食品、妊産婦・授乳婦用粉乳等食品、栄養食品等であってよい。このような飲食品の製造にあたっては、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の有効成分である菌体外多糖をそのまま使用したり、他の飲食品ないし食品成分と混合したりするなど、通常の食品組成物における製法を利用することができる。また、飲食品の形状についても特に限定されず、通常用いられる飲食品の形状であればかまわない。例えば、固体状（粉末、顆粒状を含む）、ペースト状、液状、懸濁状などのいずれの形状でもよく、またこれらに限定されない。このとき、飲食品は、乳飲料、発酵乳、清涼飲料、ゼリー飲料、タブレット、粉末食品であることがより好ましく、ヨーグルトは特に好ましい。
　本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物は、医薬品として使用することができる。本発明は、本発明に係る組成物または菌体外多糖を含む医薬品も提供する。本発明に係る医薬品は、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる１種又は２種以上（２種、３種、４種又は５種全て）の免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進するためのものであってよい。この場合、当該医薬品における、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物の投与量は、特に限定されないが、例えば、有効成分である菌体外多糖の量として、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重／日以上、より好ましくは５ｍｇ／ｋｇ体重／日以上、特に好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ体重／日以上である。また、長期間に亘って予防目的で摂取する場合には、上記量よりも少量であってもよい。
　上記医薬品の剤型は、本発明のインターフェロンγの産生を促進させるための組成物または菌体外多糖を腸内に到達させるため、経口投与が可能な剤型が好ましい。本発明による医薬品の好ましい剤型の例としては、例えば錠剤、被覆錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、シロップ剤、トローチ剤等を挙げることができる。これらの各種製剤（医薬品）は、常法に従って主薬である菌体外多糖に、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、溶解補助剤、懸濁剤、コーティング剤などの、医薬の製剤技術分野において通常使用しうる補助剤を混ぜ合わせることによって製剤化することができる。
　本発明の組成物および菌体外多糖（ＥＰＳ）は、免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進することができる。そのような免疫細胞は、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる１種又は２種以上（２種、３種、４種又は５種全て）の免疫細胞であり得る。一実施形態では、本発明の組成物および菌体外多糖（ＥＰＳ）は、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる２種以上（２種、３種、４種又は５種全て）の免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進することができる。これらの細胞におけるインターフェロンγの産生促進は、特に、感染防御、抗腫瘍などの点で有利である。
　本発明は、インターフェロンγの産生を促進させるための組成物の製造における、菌体外多糖（ＥＰＳ）の使用も、提供する。本発明はまた、菌体外多糖（ＥＰＳ）を用いることを特徴とする、インターフェロンγ産生の促進方法を提供する。そのようなインターフェロンγ産生の促進方法は、例えば、インターフェロンγを産生する免疫細胞を、菌体外多糖（ＥＰＳ）によって処理する（例えばｉｎ　ｖｉｔｒｏ、ｅｘ　ｖｉｖｏ、またはｉｎ　ｖｉｖｏでＥＰＳと接触させる）ことを含む、免疫細胞によるインターフェロンγ産生の促進方法であり得る。インターフェロンγを産生する免疫細胞は、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる１種又は２種以上（２種、３種、４種又は５種全て）の免疫細胞であり得る。あるいは、上記のインターフェロンγ産生の促進方法は、本発明の組成物または菌体外多糖（ＥＰＳ）を被験体に投与することを含む、被験体におけるインターフェロンγの産生を促進する方法であり得る。被験体は、ヒトをはじめとする哺乳動物であってよい。菌体外多糖（ＥＰＳ）、投与量などについては上述のとおりである。
　以下、実施例に基づいて、本発明をより具体的に説明する。なお、この実施例は、本発明を限定するものではない。
　以下の実施例において、菌体外多糖（ＥＰＳ）は、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号：ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）をスターターとして調製したヨーグルトを原料（供給源）とし、Ｊ．　Ｄａｉｒｙ　Ｓｃｉ．　９９、９１５－９２３に記載されている方法で精製したものを用いた。ここで、「Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１」は、独立行政法人　製品評価技術基盤機構　特許生物寄託センター（ＮＩＴＥ－ＩＰＯＤ）に受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１（寄託日：１９９９年２月２２日）で寄託されている。
　Ｃ５７／ＢＬ／６ｊマウス（７週齢）を群分け後、蒸留水またはＥＰＳ（５００μｇ／マウス）を７日間経口投与した。経口投与期間後、各マウスの小腸粘膜固有層からリンパ球を回収し、細胞集団（ポピュレーション）やサイトカイン産生パターンを解析した。細胞の調製は小腸からパイエル板を切除後、小片にカットし、３０ｍＭ　ＥＤＴＡ溶液で３０分間インキュベートすることにより行った。細胞をインキュベート後洗浄し、０．７ｍｇ／ｍＬコラゲナーゼＤ下でインキュベートした。得られた調製物を１００μｍフィルターでろ過後、４０／８０％（ｗ／ｖ）　Ｐｅｒｃｏｌｌ　（ＧＥ　Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社製、登録商標）を用いてリンパ球を分離した。分離されたリンパ球は、５０ｎｇ／ｍＬ　ＰＭＡ（ｐｈｏｒｂｏｌ　１２－ｍｙｒｉｓｔａｔｅ　１３－ａｃｅｔａｔｅ；ホルボール１２－ミリスタート１３－アセタート）と５００ｎｇ／ｍＬ　イオノマイシン（ｉｏｎｏｍｙｃｉｎ）存在下で４時間培養し、再刺激した。なお、培養の後半２時間は、ブレフェルジンＡ（Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ　Ａ）を添加した。再刺激後、各細胞を識別するための細胞表面分子および細胞内分子、ならびに細胞内ＩＦＮ－γ、ＲＯＲγｔを染色し、ＢＤ　Ｆｏｒｔｅｓｓａ　ｃｙｔｏｍｅｔｅｒ（ＢＤ　Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）にて各細胞集団でのＩＦＮ－γ陽性細胞の割合を測定した。なお、各細胞集団はＣＤ４５＋ＣＤ１９－細胞（Ｂ細胞以外の白血球に相当）の中から以下の細胞表面分子、細胞内分子で識別した。ＣＤ４αβＴ細胞：ＣＤ４＋ＴＣＲβ＋、ＣＤ８αβＴ細胞：ＣＤ８β＋ＴＣＲβ＋、ＩＬＣ３（ｇｒｏｕｐ　３　ｉｎｎａｔｅ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｃｅｌｌｓ）細胞：ＣＤ３－ＣＤ１９－ＣＤ１１ｂ－ＣＤ１１ｃ－ＩＬ７Ｒα＋ＲＯＲγｔ＋、γδＴ細胞：ＴＣＲδ＋、Ｔｈ１７細胞：ＴＣＲβ＋ＲＯＲγｔ＋。
　図１に、ＣＤ４αβＴ細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示した。蒸留水投与群の結果と比べ、ＥＰＳ投与群ではＩＦＮ－γ陽性細胞の割合が有意に増加した（ｔ検定による危険率（ｐ値）が０．０４４５）。このことから、ＥＰＳが、ＣＤ４αβＴ細胞によるＩＦＮ－γの産生を促進させることが示された。
　図２に、ＣＤ８αβＴ細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示した。蒸留水投与群の結果と比べ、ＥＰＳ投与群ではＩＦＮ－γ陽性細胞の割合が有意に増加した（ｔ検定による危険率（ｐ値）が０．０１６８）。このことから、ＥＰＳが、ＣＤ８αβＴ細胞によるＩＦＮ－γの産生を促進させることが示された。
　図３に、Ｔｈ１７細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示した。蒸留水投与群の結果と比べ、ＥＰＳ投与群ではＩＦＮ－γ陽性細胞の割合が有意に増加した（ｔ検定による危険率（ｐ値）が０．０２６３）。このことから、ＥＰＳが、Ｔｈ１７細胞によるＩＦＮ－γの産生を促進させることが示された。
　図４に、ＲＯＲγｔ陽性のγδＴ細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示した。蒸留水投与群の結果と比べ、ＥＰＳ投与群ではＩＦＮ－γ陽性細胞の割合が有意に増加した（ｔ検定による危険率（ｐ値）が０．０３０２）。このことから、ＥＰＳが、γδＴ細胞によるＩＦＮ－γの産生を促進させることが示された。
　図５に、ＩＬＣ３細胞における、ＥＰＳによるＩＦＮ－γの産生促進効果を示した。蒸留水投与群の結果と比べ、ＥＰＳ投与群ではＩＦＮ－γ陽性細胞の割合が有意に増加した（ｔ検定による危険率（ｐ値）が０．０１４１）。このことから、ＥＰＳが、ＩＬＣ３細胞によるＩＦＮ－γの産生を促進させることが示された。
　本明細書で引用した全ての刊行物、特許および特許出願はそのまま引用により本明細書に組み入れられるものとする。

Claims (6)

  1. 　菌体外多糖（ＥＰＳ）を有効成分とする、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための組成物。
  2. 　ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる２種以上の免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための、請求項１に記載の組成物。
  3. 　菌体外多糖（ＥＰＳ）が、ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　ｓｕｂｓｐ．　ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）が産生する菌体外多糖（ＥＰＳ）である、請求項１または２に記載の組成物。
  4. 　ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクスがラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリクス　ＯＬＬ１０７３Ｒ－１（受託番号ＦＥＲＭ　ＢＰ－１０７４１）である、請求項３に記載の組成物。
  5. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物を含み、かつ、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための飲食品。
  6. 　請求項１～４のいずれか１項に記載の組成物を含み、かつ、ＣＤ４αβＴ細胞、ＣＤ８αβＴ細胞、γδＴ細胞、Ｔｈ１７細胞、およびＩＬＣ３細胞からなる群から選ばれる免疫細胞によるインターフェロンγの産生を促進させるための医薬品。
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