WO2018166404A1 - 雷公藤红素用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病以及肝纤维化的用途 - Google Patents

雷公藤红素用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病以及肝纤维化的用途 Download PDF

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李飞
赵琦
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中国科学院昆明植物研究所
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    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics

Definitions

  • FIG. 4A is a blank group mouse liver tissue.
  • Fig. 4B is a histopathological section of the liver of the TAA model group;
  • Fig. 4C is a histopathological section of the liver of the treatment group;
  • Fig. 4D is a histopathological section of the liver of the EX527 group;
  • Fig. 4A is a blank group mouse liver tissue.
  • Fig. 4B is a histopathological section of the liver of the TAA model group;
  • Fig. 4C is a histopathological section of the liver of the treatment group;
  • Fig. 4D is a histopathological section of the liver of the EX527 group;
  • Figure 4E is a column of plasma biochemical indicators Figure, including aspartate aminotransferase (AST), alanine aminotransferase (ALT), alkaline phosphatase (ALP) levels;
  • Figure 4F is a histogram of the relative content of various bile acid components in mouse plasma Including omega cholesteric acid ( ⁇ -MCA), deoxycholic acid (DCA), tauro- ⁇ cholesteric acid / taurene alpha cholesteric acid (T ⁇ MCA/T ⁇ MCA), taurocholic acid (TCA), bovine porcine deoxygenation Cholic acid/tauroursodeoxycholic acid (THDCA/TUDCA), taurochenodeoxycholic acid (TCDCA), taurodeoxycholic acid (TDCA).
  • omega cholesteric acid ⁇ -MCA
  • DCA deoxycholic acid
  • T ⁇ MCA/T ⁇ MCA taurocholic acid
  • TCDCA taurochenodeoxycholic acid
  • Tripterine red amorphous crystalline powder, purchased from Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd., batch number L-003-150420.
  • Benzyl ⁇ -naphthyl isothiocyanate (ANIT, Cat. No. N4525-10G, Lot No. 101734146), DMSO (Cat. No. V900090-500ml, Lot No. 101669350), Tween 80 (Cat. No. P1754-500ml, Lot No. 101761909), Formic Acid (Cat. No. 94318- 250ml-F, lot number 101721592), chlorpropamide (Cat. No. C1290-25G, lot number 1002213299), cholic acid (CA, Cat. No. C1129-25G), deoxycholic acid (DCA, Cat. No.
  • TCA taurocholic acid
  • GCA glycocholic acid
  • G2878-500MG glycocholic acid
  • TDCA taurode deoxycholic acid
  • T7515-100MG taurolithic acid
  • Corn oil (Cat. No. C116025-500G, lot No. 11524089) was purchased from Aladdin.
  • Chromatographic grade acetonitrile (Cat. No. 1.00030.4008) was purchased from Merck.
  • Omega-murine acid ( ⁇ -MCA, Cat. No. sc-396738) and tauro- ⁇ -muroleic acid (T ⁇ MCA, Cat. No. SC-361829) were purchased from Santa Cruz.
  • Taurosyl deoxycholic acid (TUDCA, Cat. No. HY-19696A) was purchased from MCE.
  • Water bath thermostat SHA-C purchased from Changzhou Zhongcheng Instrument Manufacturing Co., Ltd.;
  • Refrigerated centrifuge purchased from Eppendorf.
  • Biological sample homogenizer precellys 24 purchased from Bertin Technologies; upright microscope, purchased from Nikon Corporation.
  • Tissue microtome purchased from Leica.
  • Tripterine is dissolved in a solvent to obtain a tripterine solution at a concentration of 2 mg/mL, wherein the solvent is prepared from 1% DMSO, 2% Tween 80, and 97% water (v:v:v).
  • the dose was 10 mg/kg ⁇ d.
  • the ANIT was dissolved in corn oil to obtain a corn oil solution of ANIT at a concentration of 15 mg/mL, and administered intragastrically at a dose of 75 mg/kg.
  • the treatment group was administered intragastric administration of tripterine solution at a dose of 10 mg/kg.d for five consecutive days.
  • the blank group and the model group were intragastrically administered with the same dose of solvent in which the solvent was prepared from 1% DMSO, 2% Tween 80 and 97% water (v:v:v), and the solvent was continuously supplied for five days.
  • mice were sacrificed by CO 2 anesthesia, and mouse liver and plasma samples were taken.
  • the eyeballs of the mice were taken for blood collection.
  • the plasma samples were placed on ice for 1-2 h, centrifuged at 4000 g for 5 min at 4 ° C, and the supernatant was taken to measure the plasma biochemical indicators ALT, AST, and ALP levels.
  • liver samples 100 mg liver samples were taken and mixed with 1 ml of 50% (v/v) acetonitrile (containing internal standard chlorpropamide 5 ⁇ M). After shaking at room temperature for 20 min, it was centrifuged at 18000 g for 20 min at 4 °C. Thereafter, 200 ⁇ L of the supernatant was added with 200 ⁇ L of pure acetonitrile, vortexed for 1 min, centrifuged at 18000 g for 20 min at 4 ° C, and the supernatant was taken for injection.
  • 50% (v/v) acetonitrile containing internal standard chlorpropamide 5 ⁇ M
  • H&E hematoxylin and eosin
  • liver tissues of each group of mice are shown in Fig. 1A, Fig. 1B and Fig. 1C.
  • the results showed that the liver tissue of the blank group had no damage.
  • the liver tissue of the model group produced severe inflammatory infiltration and peripheral perivascular hemorrhage.
  • the liver tissue of the mice in the treatment group had no obvious damage.
  • the results showed that tripterine significantly inhibited the severe inflammatory infiltration and peripheral perivascular hemorrhage induced by ANIT.
  • mice in the blank group, the model group and the treatment group had uniform body weight, and there was no significant difference.
  • the liver weight (1.22g) was significantly higher in the model group than in the blank group (1.00g), and the liver weight/body weight ratio (5.78%) in the model group was significantly higher than that in the blank group (4.56%), indicating the ANIT model.
  • the group had severe liver damage.
  • Liver weight (1.01g) was significantly lower in the treatment group than in the model group (1.22g), and there was no significant difference between the mice and the blank group.
  • the liver weight/body weight (4.66%) of the treated group was significantly lower than that of the model group (4.66%). 5.78%), there was no significant difference between the blank group and the blank group, indicating that tripterine significantly inhibited ANIT-induced liver weight and liver weight/body weight ratio in mice.
  • tripterine has a preventive and/or protective effect on ANIT-induced cholestatic liver injury, inhibiting severe inflammatory infiltration and peripheral perivascular hemorrhage induced by ANIT, and inhibiting ANIT-induced AST in mouse plasma.
  • Increased levels of ALT, ALP, and ALP inhibited ANIT-induced increases in bile acid levels in plasma and liver.
  • mice C57BL/6 mice, SPF grade, body weight 20 ⁇ 23g, male; certificate number: SCXK (Xiang) 2013-0004, purchased from Hunan Slack Jingda Experimental Animal Co., Ltd.
  • AST Aspartate aminotransferase
  • ALT alanine aminotransferase
  • ALP alkaline phosphatase
  • TAA Thioacetamide
  • DMSO Cat. No. V900090-500ml, Lot No. 101669350
  • Tween 80 Cat. No. P1754-500ml, Lot No. 101761909
  • Formic Acid Cat. No. 94318-250ml-F, Lot No. 101721592
  • chlorpropamide Cat. No. C1290-25G, batch number 1002213299
  • cholic acid CA, Cat. No. C1129-25G
  • DCA deoxycholic acid
  • DCA Deoxycholic acid
  • TCA taurocholic acid
  • T4009- 1G glycocholic acid (GCA, article number G2878-500MG), taurode deoxycholic acid (THDCA, article number T0682-250MG), taurochenodeoxycholic acid (TCDCA, article number T6260-25MG), taurodeoxycholate Acid (TDCA, Cat. No. T0875-1G) and taurolithic acid (TLCA, Cat. No. T7515-100MG) were purchased from Sigma.
  • NaCl injection (batch number B16080E1) was purchased from Zhejiang Guojing Pharmaceutical Co., Ltd.
  • Omega-murine acid ( ⁇ -MCA, Cat. No. sc-396738) and tauro- ⁇ -muroleic acid (T ⁇ MCA, Cat. No. SC-361829) were purchased from Santa Cruz.
  • Taurosyl deoxycholic acid (TUDCA, Cat. No. HY-19696A) was purchased from MCE.
  • Beta-murine acid ( ⁇ -MCA, Cat. No. C008852) and tauro- ⁇ -muroleic acid (T ⁇ MCA, Cat. No. C1893-000) were purchased from Steraloids.
  • Refrigerated centrifuge purchased from Eppendorf.
  • the biological sample homogenizer precellys 24 was purchased from Bertin Technologies.
  • Tissue microtome purchased from Leica.
  • Tripterine is dissolved in a solvent to obtain a solution of tripterine in a concentration of 2 mg/mL, wherein the solvent is prepared from 1% DMSO, 2% Tween, and 97% water (v:v:v).
  • the dose was 10 mg/kg ⁇ d.
  • the TAA was dissolved in 0.9% NaCl to prepare a NaCl solution of TAA at a concentration of 60 mg/kg, and administered intraperitoneally at a dose of 300 mg/kg.
  • the model group is ** P ⁇ 0.01 compared to the blank group.
  • mice The changes of plasma AST, ALT, and ALP in each group of mice are shown in Table 4.
  • the results showed that the plasma levels of AST, ALT, and ALP in the TAA model group were significantly higher than those in the blank group (P ⁇ 0.05), indicating that the TAA model group had severe liver damage.
  • the AST, ALT, and ALP levels in the treatment group were lower than those in the model group (P ⁇ 0.01), indicating that tripterine significantly inhibited TAA-induced plasma AST, ALT, and ALP water elevation.
  • tripterine has a preventive and/or protective effect on TAA-induced cholestatic liver injury, inhibits severe inflammatory infiltration induced by TAA and peripheral perivascular hemorrhage, and inhibits TAA-induced AST in mouse plasma. Increased levels of ALT, ALP, and ALP inhibited TAA-induced increases in bile acid levels in plasma and liver.
  • mice C57BL/6 mice, SPF grade, body weight 20 ⁇ 23g, male; certificate number: SCXK (Xiang) 2013-0004, purchased from Hunan Slack Jingda Experimental Animal Co., Ltd.
  • Tripterine red amorphous crystalline powder, purchased from Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd., batch number L-003-150420.
  • EX527 (Selisistat, available from MedChem Express, Cat. No. HY-15453).
  • Chromatographic grade acetonitrile (Cat. No. 1.00030.4008) was purchased from Merck.
  • Taurine- ⁇ -murine acid (T ⁇ MCA, Cat. No. SC-361829) was purchased from Santa Cruz.
  • Taurosyl deoxycholic acid (TUDCA, Cat. No. HY-19696A) was purchased from MCE.
  • Taurine- ⁇ -murine acid (T ⁇ MCA, Cat. No. C1893-000) was purchased from Steraloids.
  • Water bath thermostat SHA-C purchased from Changzhou Zhongcheng Instrument Manufacturing Co., Ltd.
  • Refrigerated centrifuge purchased from Eppendorf.
  • Tissue microtome purchased from Leica.
  • Tripterine is dissolved in a solvent to obtain a solution of tripterine in a concentration of 2 mg/mL, wherein the solvent is prepared from 1% DMSO, 2% Tween 80, and 97% water (v:v:v).
  • the dose was 10 mg/kg ⁇ d.
  • the ANIT was dissolved in corn oil to obtain a corn oil solution of ANIT at a concentration of 15 mg/mL, and administered intragastrically at a dose of 75 mg/kg.
  • EX527 was dissolved in corn oil to obtain a corn oil solution of EX527 at a concentration of 2 mg/mL, and administered intraperitoneally at a dose of 10 mg/kg ⁇ d.
  • the EX527 group was simultaneously administered with tripterine solution and EX527 corn oil solution for five consecutive days.
  • the treatment group was given tripterine solution and an equal dose of corn oil for five consecutive days.
  • the blank group and the model group were given an equal dose of solvent (1% DMSO, 2% Tween 80 and 97% water (v:v:v)) and corn oil, and the solvent was continuously supplied for five days.
  • Water bath thermostat SHA-C purchased from Changzhou Zhongcheng Instrument Manufacturing Co., Ltd.
  • Refrigerated centrifuge purchased from Eppendorf.
  • Tissue microtome purchased from Leica.
  • Tripterine is dissolved in a solvent to obtain a solution of tripterine in a concentration of 2 mg/mL, wherein the solvent is prepared from 1% DMSO, 2% Tween, and 97% water (v:v:v).
  • the dose was 10 mg/kg ⁇ d.
  • the TAA was dissolved in 0.9% NaCl to prepare a NaCl solution of TAA at a concentration of 60 mg/mL, and administered intraperitoneally at a dose of 300 mg/kg.
  • EX527 was dissolved in corn oil to prepare a corn oil solution of EX527 at a concentration of 2 mg/mL, and administered intraperitoneally at a dose of 10 mg/kg ⁇ d.
  • the EX527 group was simultaneously administered with tripterine solution and EX527 corn oil solution for four consecutive days.
  • the treatment group was given tripterine solution and an equal dose of corn oil for four consecutive days.
  • the blank group and the model group were given an equal dose of solvent (1% DMSO, 2% Tween 80 and 97% water (v:v:v)) and corn oil, and the solvent was continuously supplied for four days.
  • mice in the model group, the treatment group and the EX527 group were intraperitoneally injected with TAA 300 mg/kg to induce cholestatic liver injury.
  • Mice were sacrificed by CO 2 anesthesia 24 hours after TAA administration, and plasma samples and liver samples were collected. The eyeballs of the mice were taken for blood collection.
  • the plasma samples were placed on ice for 1-2 h, centrifuged at 4000 g for 5 min at 4 °C, and the supernatant plasma samples were taken to determine the plasma biochemical indicators ALT, AST, and ALP levels.
  • Example 2 Using the same protocol as in Example 1, the experimental animals were FXR knockout mice (C57BL/6J background) and the FXR knockout mice were presented by Frank J. Gonzalez, a researcher at the National Institutes of Health Cancer Institute.
  • Fig. 5A The changes of plasma AST, ALT, and ALP in each group of FXR knockout mice are shown in Fig. 5A.
  • the results showed that the plasma levels of AST, ALT, and ALP in the model group were significantly higher than those in the blank group (P ⁇ 0.01), indicating that the model group mice Produces severe liver damage.
  • the levels of ALT and ALP in the treatment group did not decrease significantly compared with the model group, indicating that the protective effect of tripterine on the liver was weakened under FXR knockout conditions.
  • Example 7 Therapeutic effect of tripterine on TAA-induced liver fibrosis in mice
  • mice C57BL/6 mice, SPF grade, body weight 20-23 g, male; certificate number: SCXK (Xiang) 2013-0004, purchased from Hunan Slack Jingda Experimental Animal Co., Ltd.
  • Tripterine red amorphous crystalline powder, purchased from Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd., batch number L-003-150420.
  • Tripterine is dissolved in a solvent to obtain a solution of tripterine in a concentration of 2 mg/mL, wherein the solvent is prepared from 1% DMSO, 2% Tween 80, and 97% water (v:v:v).
  • the dose was 10 mg/kg/time, three times a week, and the first week was not given.
  • TAA was dissolved in 0.9% NaCl to prepare a NaCl solution of TAA at a concentration of 20 mg/kg, and administered intraperitoneally.
  • the dose was 100 mg/kg/time in the first week and 160 mg/kg/time in the second to sixth weeks. Three times a week.
  • the model group and the treatment group were given TAA three times a week and administered every other day.
  • the TAA dose was 100 mg/kg each time during the first week. From the second week onwards, the TAA doses in the model group and the treatment group were changed to 160 mg/kg each time.
  • the blank group was given an equal dose of NaCl solution.
  • the treatment group was treated with tripterine at the second week, and then administered with tripterine 10 mg/kg 1 hour after TAA administration.
  • the blank group and the model group were given an equal dose of solvent (1% DMSO, 2% Tween 80, and 97% water (v:v:v)).
  • liver tissue of the collected mice was fixed overnight in formalin, and sections were stained with hematoxylin and eosin (H&E).
  • liver tissue of each group of mice are shown in Figures 7A, 7B and 7C.
  • the results showed that the liver tissue of the blank group had no damage.
  • the liver tissue of the model group produced severe hepatocyte necrosis and the whole liver morphology changed.
  • the liver tissue damage of the mice in the treatment group was reduced, and the liver morphology was also significantly changed.
  • Recovery showed that tripterine significantly reduced TAA-induced severe hepatocyte necrosis and liver fibrosis, and significantly restored the overall liver morphology.

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Abstract

雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及它们在制备预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的药物中的应用。

Description

雷公藤红素用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病以及肝纤维化的用途
本申请是以CN申请号为201710151750.2，申请日为2017年3月15日的申请为基础，并主张其优先权，该CN申请的公开内容在此作为整体引入本申请中。
技术领域
本公开属于胆汁淤积药物及肝纤维化药物技术领域，具体地说，涉及一种用雷公藤红素或其药学上可接受的盐用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的药物的用途，还涉及一种预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的方法，还涉及用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的雷公藤红素或其药学上可接受的盐。
背景技术
胆汁淤积发生的最根本原因是肝细胞内积聚大量毒性胆汁酸，是一种肝内的紊乱现象。如果不及时治疗，胆汁淤积可导致肝纤维化、肝硬化、肝功能衰竭、甚至死亡。胆汁淤积分为肝外胆汁淤积及肝内胆汁淤积两种。肝外胆汁淤积由胆管肿瘤、囊肿、胆管结石等疾病引起。肝内胆汁淤积由败血症、药物、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆道炎、病毒性肝炎、酒精肝、及妊娠等引起。此外，还存在许多遗传引起的进行性家族性肝内胆汁淤积(PFIC)。到目前为止，熊去氧胆酸(UDCA)和奥贝胆酸(OCA)是美国食品药品监督管理局(FDA)认证的仅有的两种治疗胆汁淤积性肝病的药物。UDCA可有效治疗I期及II期原发性胆汁性肝硬化(PBC)，但UDCA对原发性硬化性胆道炎(PSC)的治疗效果不佳，且许多病人对UDCA长期单一疗法存在耐受性，因此其使用仍存在争议。OCA是2016年FDA批准的治疗胆汁淤积性肝病的药物，该药的副作用还未完全被人们了解，目前临床观察，OCA最常见的副作用包括皮肤瘙痒和疲劳。目前，临床上大量患者因胆汁淤积性肝病急需药物治疗，但已上市的保肝药或治疗肝病的药物极少或疗效不可靠，数以万计的胆汁淤积性肝病患者不能得到有效的药物治疗；肝脏移植可以显著提高病人的存活率，但是这种移植手术的安全性在很大程度上取决于患者残余肝脏的再生能力，只适合患有晚期肝病或急性肝衰竭的病人，因此研发治疗胆汁淤积性肝病的药物迫在眉睫。
肝纤维化是指细胞受到损伤后，胞外基质与结缔组织异常增生的现象。肝纤维化 是多种慢性肝病发展成为肝硬化的必经病理环节，发病率高，约为100/10万人。临床上肝纤维化是一种可逆性的病变，而肝硬化及肝癌是不可逆的高死亡率病变。因此，控制肝纤维化的发生、发展，可有效减少肝硬化及肝癌的发生。
中药雷公藤为卫矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)的根，又名黄藤、黄腊藤、菜虫药、红药、及水莽草，主产于福建、安徽、浙江、河南等地，常用于治疗关节炎、麻风病、湿疹、肺结核等疾病。雷公藤红素(又名南蛇藤素)作为中药雷公藤中重要的三萜类活性成分，广泛存在于卫矛科植物雷公藤、南蛇藤、及独子藤等中。雷公藤红素在抗炎、免疫抑制、抗肿瘤、抗神经退行性疾病以及减肥等研究中展示出良好的生物活性，具有广阔的开发前景。但是将雷公藤红素用于治疗胆汁淤积性肝病及肝纤维化的应用，至今未见报道。
发明内容
发明人意外地发现雷公藤红素能够用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病及肝纤维化，并且效果显著。
本公开涉及雷公藤红素或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病的药物中的用途。
本公开涉及雷公藤红素或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗肝纤维化的药物中的用途。
本公开还涉及药物组合物在制备用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的药物中的用途，其中所述药物组合物中含有雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料或赋形剂。
本公开还涉及一种预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的雷公藤红素或其药学上可接受的盐，或者
所述方法包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的药物组合物，其中所述药物组合物中含有雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料或赋形剂。
本公开还涉及雷公藤红素或其药学上可接受的盐，其用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化。
本公开还涉及药物组合物，其用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化，其中所述药物组合物中含有雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅 料或赋形剂。
在某些实施方案中，本公开所述的胆汁淤积性肝病为化学性胆汁淤积性肝病、药物性胆汁淤积性肝病或原发性胆汁淤积性肝病。
在某些实施方案中，本公开所述的胆汁淤积性肝病是由于体内雌激素过高引起的胆汁淤积性肝病。
在某些实施方案中，本公开所述的肝纤维化为化学物质导致的肝纤维化、药物导致的肝纤维化、乙型肝炎引起的肝纤维化或丙型肝炎引起的肝纤维化。
在某些实施方案中，本公开所述的药物组合物中还可任选地还包含一种或多种额外的药物活性化合物。
在某些实施方案中，本公开所述的雷公藤红素或其药学上可接受的盐可以单独作为活性成分用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化，也可以与额外的药物活性化合物联合用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化。
在某些实施方案中，本公开所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐降低患者血浆中各种胆汁酸成分(例如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA)，或
减少由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，或
抑制或减轻由胆汁淤积引起的炎症。
本公开所述额外的药物活性化合物示例性地包括熊去氧胆酸(UDCA)、奥贝胆酸(OCA)以及S-腺苷甲硫氨酸等。
在某些实施方案中，本公开所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐或所述药物组合物可通过例如口服或非肠道等途径给药。本公开所述的雷公藤红素或其药学上可接受的盐或所述药物组合物可按本领域常规方法制备成各种剂型，包括但不限于片剂、胶囊、溶液、悬浮液、颗粒剂或注射剂等，经例如口服或非肠道等途径给药。
另外需要指出，本公开所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐的使用剂量和使用方法取决于诸多因素，包括患者的年龄、体重、性别、自然健康状况、营养状况、化合物的活性强度、服用时间、代谢速率、病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。优选的使用剂量介于0.01-1000mg/kg体重/天。
在某些实施方案中，本公开所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病时，优选的给药方式为口服。在某些实施例中，以相当于每天每公斤体重约0.005mg与约500mg之间，更优选每天每公斤体重约0.05mg与约100 mg之间，最优选每天每公斤体重约0.1mg与约10mg之间的经口剂量，使用对象为胆汁淤积性肝病患者。
在某些实施方案中，本公开所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐用于预防和/或治疗肝纤维化时，优选的给药方式为口服。在某些实施例中，以相当于每天每公斤体重约0.005mg与约500mg之间，更优选每天每公斤体重约0.05mg与约100mg之间，最优选每天每公斤体重约0.1mg与约10mg之间的经口剂量，使用对象为肝纤维化患者。
本公开所述雷公藤红素提取于卫矛科雷公藤属雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.f.)，结构式为：
Figure PCTCN2018078551-appb-000001
本公开所述雷公藤红素既可以其本身也可以其药学上可接受的盐的形式使用。雷公藤红素的药学上可接受的盐包括雷公藤红素与可药用的无机酸或有机酸、或者与可药用的无机碱或有机碱形成的盐。示例性的药学上可接受的盐的实例包括雷公藤红素与盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸、高氯酸、富马酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、甲酸、乳酸、马来酸、酒石酸、柠檬酸、扑酸、丙二酸、羟基马来酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水杨酸、富马酸、甲苯磺酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、苯磺酸、羟基萘甲酸、氢碘酸、苹果酸、鞣酸等形成的盐，或者包括雷公藤红素与钠、锂、钾、镁、铝、钙、锌、N，N′-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、N-甲基葡糖胺和普鲁卡因等形成的盐。
本公开中，所述“药学上可接受的盐”是指保留目标化合物的所需生物活性并表现出最小的不希望的毒理学效应的盐。这些药学上可接受的盐可在该化合物的最终分离和纯化过程中原位制备或者通过单独地将其游离酸或游离碱形式的纯化的化合物分别与合适的碱或酸反应进行制备。
本公开所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐预防和/或治疗胆汁淤积的作用机制为：雷公藤红素通过调节沉默信息调节因子2同源基因(SIRT1)表达及法尼醇X受体(FXR)表达发挥作用。SIRT1是一种高度保守的NAD +依赖的蛋白去乙酰化酶。 在基因沉默、细胞寿命、及代谢调节上具有重要的作用。SIRT1可直接或间接通过其乙酰化作用调节许多重要的核受体，如FXR、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)。FXR与胆酸动态平衡密切相关，是最重要的胆酸调节基因，可以调节多种胆酸合成基因，如CYP7A1及CYP8B1等，也可以调节多种胆酸转运基因以及解毒基因。因此在本研究中，认为雷公藤红素可以通过SIRT1-FXR轴发挥保护肝脏免受损伤的作用。雷公藤红素通过抑制胆酸的合成基因如CYP7A1、CYP8B1减少体内胆汁酸的形成，从源头抑制胆酸进一步合成。还可通过CYP3A4、SULT2A1、UGT2B4、UGT2B7等基因促进胆酸脱毒，降低有害胆酸含量。此外，雷公藤红素能够抑制胆酸吸收转运体(如Ntcp、Oatp1、Oatp4)的表达，降低进入肝脏的胆酸；增加胆酸流出转运体(如Ostβ、Mrp4、Bsep、Mrp2)的表达，促进胆酸排泄，从而达到治疗胆汁淤积性肝病的作用。
本公开通过ANIT及TAA诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤模型，研究并证实了雷公藤红素可用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝损伤，能显著降低血浆中各种胆汁酸成分，从而显著降低由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，显著抑制由胆汁淤积引起的炎症，对胆汁淤积有显著的疗效。此外，我们通过采用长期给予TAA造成小鼠肝纤维化，研究发现雷公藤红素可以治疗肝纤维化，有望研发成为新型的抗肝纤维化药物。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本公开的进一步理解，构成本申请的一部分，本公开的示意性实施例及其说明用于解释本公开，并不构成对本公开的不当限定。在附图中：
图1A至图1E说明灌胃给药雷公藤红素对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤的预防和/或保护作用，其中：图1A是空白组小鼠肝脏组织切片图；图1B是ANIT模型组小鼠肝脏组织病理切片图；图1C是治疗组小鼠肝脏组织病理切片图；图1D是小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、及牛磺猪脱氧胆酸/牛磺熊脱氧胆酸(THDCA/TUDCA)；图1E是小鼠肝脏中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括ω鼠胆酸(ω-MCA)、β鼠胆酸(β-MCA)、胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺石胆酸(TLCA)。在图1A至图1E中，n＝6只小鼠/组，通 过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， *P＜0.05； **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， #P＜0.05； ##P＜0.01； ###P＜0.001。
[根据细则91更正 08.04.2018]　
图2A至图2E说明灌胃给药雷公藤红素对TAA诱导的胆汁淤积性肝损伤的预防和/或保护作用，其中：图2A是空白组小鼠肝脏组织切片图；图2B是TAA模型组小鼠肝脏组织病理切片图；图2C是治疗组小鼠肝脏组织病理切片图；图2D是小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括ω鼠胆酸(ω-MCA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、牛磺猪脱氧胆酸/牛磺熊脱氧胆酸(THDCA/TUDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)；图2E是小鼠肝脏中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括ω鼠胆酸(ω-MCA)、β鼠胆酸(β-MCA)、胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、甘氨胆酸(GCA)、牛磺石胆酸(TLCA)。在图2A至图2E中，n＝6只小鼠/组，通过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， *P＜0.05； **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， #P＜0.05； ##P＜0.01； ###P＜0.001。
图3A至图3F说明在SIRT1抑制的条件下，灌胃给药的雷公藤红素对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤的预防和/或保护作用减弱，其中：图3A是空白组小鼠肝脏组织切片图；图3B是ANIT模型组小鼠肝脏组织病理切片图；图3C是治疗组小鼠肝脏组织病理切片图；图3D是EX527组小鼠肝脏组织病理切片图；图3E是血浆生化指标柱状图，包括天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平；图3F是小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、及牛磺猪脱氧胆酸/牛磺熊脱氧胆酸(THDCA/TUDCA)。在图3A至图3F中，n＝6只小鼠/组，通过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， *P＜0.05； **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， #P＜0.05； ##P＜0.01； ###P＜0.001；EX527组与治疗组相比， &P＜0.05。
图4A至图4F说明在SIRT1抑制的条件下，灌胃给药雷公藤红素对TAA诱导的胆汁淤积性肝损伤的预防和/或保护作用减弱，其中：图4A是空白组小鼠肝脏组织切片图；图4B是TAA模型组小鼠肝脏组织病理切片图；图4C是治疗组小鼠肝脏组织病理切片图；图4D是EX527组小鼠肝脏组织病理切片图；图4E是血浆生化指标柱状图，包括天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶 (ALP)水平；图4F是小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括ω鼠胆酸(ω-MCA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、牛磺猪脱氧胆酸/牛磺熊脱氧胆酸(THDCA/TUDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)。在图4A至图4F中，n＝6只小鼠/组，通过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， *P＜0.05； **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， #P＜0.05； ##P＜0.01； ###P＜0.001；EX527组与治疗组相比， &P＜0.05； &&P＜0.01； &&&P＜0.001。
图5A和图5B说明在FXR敲除条件下，灌胃给药雷公藤红素对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤的预防和/或保护作用减弱，其中图5A是血浆生化指标柱状图，包括天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平；图5B是小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括胆酸(CA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、及牛磺猪脱氧胆酸/牛磺熊脱氧胆酸(THDCA/TUDCA)。在图5A和图5B中，n＝6只小鼠/组，通过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， *P＜0.05； **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， N.S.p＞0.05； #P＜0.05。
图6A至图6E说明在FXR敲除条件下，灌胃给药雷公藤红素对TAA诱导的胆汁淤积性肝损伤的预防和/或保护作用减弱，其中：图6A是空白组小鼠肝脏组织切片图；图6B是TAA模型组小鼠肝脏组织病理切片图；图6C是治疗组小鼠肝脏组织病理切片图；图6D是血浆生化指标柱状图，包括天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)水平；图6E是小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化柱状图，包括ω鼠胆酸(ω-MCA)、脱氧胆酸(DCA)、牛磺β鼠胆酸/牛磺α鼠胆酸(TβMCA/TαMCA)、牛磺胆酸(TCA)、牛磺猪脱氧胆酸/牛磺熊脱氧胆酸(THDCA/TUDCA)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA)、牛磺脱氧胆酸(TDCA)。在图6A至图6E中，n＝6只小鼠/组，通过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， *P＜0.05； **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， N.S.p＞0.05； #P＜0.05； ##P＜0.01； ###P＜0.001。
图7A至图7D说明灌胃给药雷公藤红素对小鼠长期服用TAA诱导的肝纤维化的预防和/或保护作用，其中：图7A是空白组小鼠肝脏组织切片图；图7B是TAA肝纤维化组小鼠肝脏组织病理切片图；图7C是治疗组小鼠肝脏组织病理切片图；图7D是血浆生化指标柱状图，包括天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、 碱性磷酸酶(ALP)水平。在图7A至图7D中，n＝10只小鼠/组，通过斯图登氏t检验(Student′s t-test)：模型组与空白组相比， **P＜0.01； ***P＜0.001；治疗组与模型组相比， #P＜0.05； ##P＜0.01。
具体实施方式
下面结合本公开的具体实施例来进一步说明本公开的实质性内容，应理解，以下实施例仅用于说明本公开，但并不以此来限定本公开的保护范围。下面实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的进行。所用药品或试剂未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
虽然以下实施例中所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本公开仍然在此作尽可能详细描述。本领域技术人员清楚，如果未特别说明，下面实施例中所用的材料和操作方法是本领域公知的。
实施例1：雷公藤红素对ANIT诱导的小鼠胆汁淤积性肝损伤的保护或/或预防作用
1.1试验动物
C57BL/6小鼠，SPF级，体重20～23g，雄性；合格证号为：SCXK(湘)2013-0004，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
1.2药品与试剂
雷公藤红素，红色无定型结晶粉末，购自成都瑞芬思生物科技有限公司，批号L-003-150420。
天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(货号C010-3，批号20161031)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(货号C009-3，批号20161031)及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(货号A059-3，批号20161031)，均为南京建成生物工程研究所生产。
α-萘异硫氰酸苯酯(ANIT，货号N4525-10G，批号101734146)、DMSO(货号V900090-500ml，批号101669350)、吐温80(货号P1754-500ml，批号101761909)、甲酸(货号94318-250ml-F，批号101721592)、氯磺丙脲(货号C1290-25G，批号1002213299)、胆酸(CA，货号C1129-25G)、脱氧胆酸(DCA，货号D2510-10G)、牛磺胆酸(TCA，货号T4009-1G)、甘氨胆酸(GCA，货号G2878-500MG)、牛磺猪脱氧胆酸(THDCA，货号T0682-250MG)以及牛磺石胆酸(TLCA，货号T7515-100MG)购自Sigma公司。
玉米油(货号C116025-500G，批号11524089)购自阿拉丁公司。
色谱级乙腈(货号1.00030.4008)购自默克公司。
ω-鼠胆酸(ω-MCA，货号sc-396738)和牛磺-β-鼠胆酸(TβMCA，货号SC-361829)购自Santa cruz公司。
牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA，货号HY-19696A)购自MCE公司。
β-鼠胆酸(β-MCA，货号C008852)和牛磺-α-鼠胆酸(TαMCA，货号C1893-000)购自Steraloids公司。
1.3主要仪器
精密电子天平，购自Sartorius公司。
全自动酶标仪，购自BioTek Instruments公司。
水浴恒温振荡器SHA-C，购自常州中诚仪器制造有限公司；
冷冻离心机，购自Eppendorf公司。
超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱，包含1290进样器、1290泵、柱温箱、XDB-C18色谱柱(2.1×100mm，1.8μM)、及6530四极杆飞行时间质谱，购自Agilent公司。
生物样品匀质器precellys 24，购自Bertin Technologies；正置显微镜，购自Nikon公司。
组织切片机，购自徕卡公司。
1.4实验方法
1.4.1实验分组
实验共需18只雄性C57BL/6小鼠，分为三组：空白组(n＝6)；模型组(n＝6)；治疗组(n＝6)。
1.4.2药物溶液配制及给药剂量
雷公藤红素采用溶剂溶解，得到浓度为2mg/mL的雷公藤红素溶液，其中溶剂由1％DMSO、2％吐温80及97％水(v∶v∶v)配制而成，灌胃给药，给药剂量10mg/kg·d。ANIT采用玉米油溶解，得到浓度为15mg/mL的ANIT的玉米油溶液，灌胃给药，给药剂量75mg/kg。
1.4.3实验流程
治疗组采用灌胃给药雷公藤红素溶液，给药剂量为10mg/kg.d，连续给药五天。与此同时，空白组及模型组灌胃给予相同剂量的溶剂，其中溶剂由1％DMSO、2％吐 温80及97％水(v∶v∶v)配制而成，连续给溶剂五天。
在给药第三天进行ANIT造模，在给药4h后，模型组及治疗组小鼠分别灌胃给药ANIT的玉米油溶液，诱导胆汁淤积性肝损伤，给药剂量为75mg/kg，单次给药，空白组喂以等剂量玉米油。造模后，治疗组继续给药雷公藤红素溶液，空白组和模型组继续给予相同剂量的溶剂。
造模48h后，CO 2麻醉处死小鼠，取小鼠肝脏及血浆样品。摘小鼠眼球取血，血浆样品于冰上放置1-2h后，在4℃下4000g离心5min，取上清液，测定血浆生化指标ALT、AST、及ALP水平。
同时，制备液质血浆样品：取10μL血浆样品，与190μL67％(v/v)的乙腈(含内标氯磺丙脲5μM)混合，在4℃下18000g离心20min，取上清液进样。
制备液质肝脏样品：取100mg肝脏样品，与1ml 50％(v/v)的乙腈(含内标氯磺丙脲5μM)研磨混匀。室温震荡20min后，在4℃下18000g离心20min。此后取200μL上清液加200μL纯乙腈，充分涡流1min，在4℃下18000g离心20min，取上清液进样。
液相条件如下：进样体积5μL；柱温45℃；流动相流速0.3mL/min；洗脱梯度：在16min的运行时间内，乙腈浓度由2％变至98％，流动相(水/乙腈溶液)均含0.01％的甲酸。洗脱程序如下：0-12min，乙腈浓度由2％均匀变至98％；12-14min，乙腈浓度维持在98％；14-14.1min，乙腈浓度由98％平衡至2％；14.1-16min，乙腈浓度维持在2％。质谱条件如下：干燥气温度350℃，喷雾器压力35psi，毛细管电压3.5kV。
采集的小鼠部分肝组织在福尔马林中固定过夜，切片用苏木素和伊红(H&E)染色。
1.5实验结果
各组小鼠肝脏组织的H&E染色结果参见图lA、图1B和图1C。结果显示，空白组小鼠的肝组织无损伤，模型组小鼠的肝组织产生严重的炎症浸润及门静脉周出血，治疗组小鼠的肝组织无明显损伤。结果表明，雷公藤红素可显著抑制ANIT诱导产生的严重炎症浸润及门静脉周出血。
各组小鼠的体重及肝重变化情况参见表1。结果显示，空白组、模型组及治疗组3组小鼠体重均匀，无显著差异。但模型组小鼠处死时肝重(1.22g)显著高于空白组(1.00g)，且模型组小鼠肝重/体重比(5.78％)显著高于空白组(4.56％)，表明ANIT模型组肝损伤严重。治疗组小鼠处死时肝重(1.01g)显著低于模型组(1.22g)， 与空白组间无显著性差异；且治疗组小鼠肝重/体重(4.66％)显著低于模型组(5.78％)，与空白组间无显著性差异，表明雷公藤红素可显著抑制ANIT诱导的小鼠肝重及肝重/体重比增加。
表1 各组小鼠的体重及肝重变化
Figure PCTCN2018078551-appb-000002
注：模型组与空白组相比， **P＜0.01；治疗组与模型组相比， ##P＜0.01。
各组小鼠的血浆AST、ALT、及ALP变化情况参见表2。结果显示，模型组血浆中AST、ALT、及ALP水平均显著高于空白组(P＜0.01)，表明模型组肝组织损伤严重。治疗组AST、ALT、及ALP水平均较模型组显著降低(P＜0.01)，与空白组相比均无显著性差异，表明雷公藤红素可显著抑制ANIT诱导的小鼠血浆AST、ALT、及ALP水平升高。
表2 各组小鼠的血浆AST、ALT、及ALP变化
Figure PCTCN2018078551-appb-000003
注：模型组与空白组相比， **P＜0.01；治疗组与模型组相比， ##P＜0.01。
各组小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图1D，结果显示，治疗组的小鼠血浆中多种胆酸水平，如CA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA，显著低于ANIT模型组。
各组小鼠肝脏中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图1E，结果显示，治疗组的小鼠肝脏中多种胆酸水平，如ω-MCA、β-MCA、CA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、GCA、TLCA，显著低于ANIT模型组。以上结果表明雷公藤红素可显著抑制ANIT诱导的小鼠血浆及肝脏中胆酸成分含量的升高。
以上实验结果表面，雷公藤红素对ANIT诱导的胆汁淤积性肝损伤具有预防和/或保护作用，能够抑制由ANIT诱导产生的严重炎症浸润及门静脉周出血，抑制ANIT诱导的小鼠血浆中AST、ALT、及ALP水平升高，抑制ANIT诱导的血浆及肝脏中的胆酸水平升高。
实施例2：雷公藤红素对TAA诱导的小鼠胆汁淤积性肝病的预防和/或保护作用
2.1实验动物
C57BL/6小鼠，SPF级，体重20～23g，雄性；合格证号均为：SCXK(湘)2013-0004，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
2.2药品与试剂
雷公藤红素，红色无定型结晶粉末，成都瑞芬思生物科技有限公司，批号L-003-150420。
天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(货号C010-3，批号20161031)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(货号C009-3，批号20161031)及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(货号A059-3，批号20161031)，均为南京建成生物工程研究所生产。
硫代乙酰胺(TAA，货号C1290-25G，批号1002213299)、DMSO(货号V900090-500ml，批号101669350)、吐温80(货号P1754-500ml，批号101761909)、甲酸(货号94318-250ml-F，批号101721592)、氯磺丙脲(货号C1290-25G，批号1002213299)、胆酸(CA，货号C1129-25G)、脱氧胆酸(DCA，货号D2510-10G)、牛磺胆酸(TCA，货号T4009-1G)、甘氨胆酸(GCA，货号G2878-500MG)、牛磺猪脱氧胆酸(THDCA，货号T0682-250MG)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA，货号T6260-25MG)、牛磺脱氧胆酸(TDCA，货号T0875-1G)及牛磺石胆酸(TLCA，货号T7515-100MG)购自Sigma公司。
色谱级乙腈(货号1.00030.4008)购自默克公司。
NaCl注射液(批号B16080E1)购自浙江国镜药业有限公司。
ω-鼠胆酸(ω-MCA，货号sc-396738)和牛磺-β-鼠胆酸(TβMCA，货号SC-361829)购自Santa cruz公司。
牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA，货号HY-19696A)购自MCE公司。
β-鼠胆酸(β-MCA，货号C008852)和牛磺-α-鼠胆酸(TαMCA，货号C1893-000)购自Steraloids公司。
2.3主要仪器
精密电子天平，购自Sartorius公司。
全自动酶标仪，购自BioTek Instruments公司。
水浴恒温振荡器SHA-C，常州中诚仪器制造有限公司。
冷冻离心机，购自Eppendorf公司。
超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱，包含1290进样器、1290泵、柱温箱、XDB-C18色谱柱(2.1×l00mm，1.8μM)、及6530四极杆飞行时间质谱，购自Agilent公司。
生物样品匀质器precellys 24，购自Bertin Technologies公司。
正置显微镜，购自Nikon公司。
组织切片机，购自徕卡公司。
2.4实验方法
2.4.1实验分组
实验共需18只雄性C57BL/6小鼠，分为三组：空白组(n＝6)；模型组(n＝6)；治疗组(n＝6)。
2.4.2药物溶液配制及给药剂量
雷公藤红素采用溶剂溶解，得到浓度为2mg/mL的雷公藤红素溶液，其中溶剂由1％DMSO、2％吐温、及97％水(v∶v∶v)配制而成，灌胃给药，给药剂量10mg/kg·d。TAA采用0.9％NaCl溶解，制成浓度为60mg/kg的TAA的NaCl溶液，腹腔注射给药，给药剂量300mg/kg。
2.4.3实验流程
治疗组采用灌胃给药雷公藤红素溶液，给药剂量为10mg/kg·d，连续给药4天。与此同时，空白组及模型组灌胃给予相同剂量的溶剂，其中溶剂由1％DMSO、2％吐温80及97％水(v∶v∶v)配制而成，连续给溶剂4天。
TAA造模在第4天，在给药1h后治疗组和模型组小鼠分别腹腔注射TAA的NaCl溶液300mg/kg，诱导胆汁淤积性肝损伤。TAA处理24h后CO 2麻醉处死小鼠，收集血浆样品及肝脏样品。摘小鼠眼球取血，血浆样品于冰上放置1-2h后，在4℃下4000g离心5min，取上清血浆样品，测定血浆生化指标ALT、AST、及ALP水平。
同时，制备液质血浆样品：取10μL血浆样品，与190μL 67％的乙腈(含内标氯磺丙脲5μM)混合，在4℃下18000g离心20min，取上清液进样。
制备液质肝脏样品：取100mg肝脏样品，与1ml 50％的乙腈(含内标氯磺丙脲 5μM)研磨混匀。室温震荡20min后，在4℃下18000g离心20min。此后取200μL上清液加200μl纯乙腈，充分涡流1min，在4℃下18000g离心20min，取上清液进样。液相条件如下：进样体积5μL；柱温45℃；流动相流速0.3ml/min；洗脱梯度：在16min的运行时间内，乙腈浓度由2％变至98％，流动相(水/乙腈溶液)均含0.01％的甲酸。洗脱程序如下：0-12min，乙腈浓度由2％均匀变至98％；12-14min，乙腈浓度维持在98％；14-14.1min，乙腈浓度由98％平衡至2％；14.1-16min，乙腈浓度维持在2％。质谱条件如下：干燥气温度350℃，喷雾器压力35psi，毛细管电压3.5kV。
采集的小鼠部分肝组织在福尔马林中固定过夜，切片用苏木素和伊红(H&E)染色。
2.5实验结果
各组小鼠肝脏组织的H&E染色结果参见图2A、图2B、图2C。结果显示，空白组小鼠的肝组织无损伤，模型组小鼠的肝组织产生严重的肝细胞坏死，治疗组小鼠的肝组织中肝细胞坏死面积显著降低。结果表明，雷公藤红素可显著抑制由TAA诱导产生的严重肝细胞坏死。
各组小鼠的体重及肝重变化情况参见表3。结果显示，空白组、模型组及治疗组3组小鼠体重均匀，无显著差异。但模型组小鼠处死时肝重(1.54g)显著高于空白组(1.18g)，且模型组小鼠肝重/体重比(6.37％)显著高于空白组(4.92％)，表明TAA模型组小鼠的肝损伤严重。治疗组小鼠处死时肝重(1.55g)与造模组间无显著性差异；且治疗组小鼠肝重/体重比(6.48％)与造模组间无显著性差异，表明雷公藤红素对TAA模型的预防和/或保护作用对小鼠肝重影响不大。
表3 各组小鼠体重及肝重变化
Figure PCTCN2018078551-appb-000004
注：模型组与空白组相比， **P＜0.01。
各组小鼠血浆AST、ALT、及ALP变化情况参见表4。结果显示，TAA模型组血浆AST、ALT、及ALP水平均显著高于空白组(P＜0.05)，表明TAA模型组小 鼠产生严重的肝损伤。治疗组AST、ALT、及ALP水平均较模型组降低(P＜0.01)，表明雷公藤红素可显著抑制TAA诱导的血浆中AST、ALT、及ALP水升高。
表4 各组小鼠血浆AST、ALT、及ALP变化
Figure PCTCN2018078551-appb-000005
模型组与空白组相比， *P＜0.05， **P＜0.01；治疗组与模型组相比， ##P＜0.01。
各组小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图2D。结果显示，治疗组小鼠血浆中多种胆酸水平，如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA，显著低于TAA模型组。
各组小鼠肝脏中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图2E。结果显示，治疗组小鼠肝脏中多种胆酸水平，如ω-MCA、β-MCA、CA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、GCA、TLCA，显著低于TAA模型组。以上结果表明雷公藤红素可显著抑制TAA诱导的小鼠血浆及肝脏中胆酸成分含量升高。
以上实验结果表面，雷公藤红素对TAA诱导的胆汁淤积性肝损伤具有预防和/或保护作用，能够抑制由TAA诱导产生的严重炎症浸润及门静脉周出血，抑制TAA诱导的小鼠血浆中AST、ALT、及ALP水平升高，抑制TAA诱导的血浆及肝脏中的胆酸水平升高。
实施例3：在ANIT模型中，沉默信息调节因子2同源基因(SIRT1)对雷公藤红素活性的影响
3.1实验动物
C57BL/6小鼠，SPF级，体重20～23g，雄性；合格证号为：SCXK(湘)2013-0004，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
3.2药品与试剂
雷公藤红素，红色无定型结晶粉末，购自成都瑞芬思生物科技有限公司，批号L-003-150420。
EX527(Selisistat，购自MedChem Express公司，货号HY-15453)。
天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(货号C010-3，批号20161031)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(货号C009-3，批号20161031)及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(货号A059-3，批号20161031)，均为南京建成生物工程研究所生产。
α-萘异硫氰酸苯酯(ANIT，货号N4525-10G，批号101734146)、DMSO(货号V900090-500ml，批号101669350)、吐温80(货号P1754-500ml，批号101761909)、甲酸(货号94318-250ml-F，批号101721592)、氯磺丙脲(货号C1290-25G，批号1002213299)、胆酸(CA，货号C1129-25G)、脱氧胆酸(DCA，货号D2510-10G)、牛磺胆酸(TCA，货号T4009-1G)及牛磺猪脱氧胆酸(THDCA，货号T0682-250MG)购自Sigma公司。
玉米油(货号C116025-500G，批号11524089)购自阿拉丁公司。
色谱级乙腈(货号1.00030.4008)购自默克公司。
牛磺-β-鼠胆酸(TβMCA，货号SC-361829)购自Santa cruz公司。
牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA，货号HY-19696A)购自MCE公司。
牛磺-α-鼠胆酸(TαMCA，货号C1893-000)购自Steraloids公司。
3.3主要仪器
精密电子天平，购自Sartorius公司。
全自动酶标仪，购自BioTek Instruments公司。
水浴恒温振荡器SHA-C，购自常州中诚仪器制造有限公司。
冷冻离心机，购自Eppendorf公司。
超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱，包含1290进样器、1290泵、柱温箱、XDB-C18色谱柱(2.1×100mm，1.8μM)、及6530四极杆飞行时间质谱，购自Agilent公司。
正置显微镜，购自Nikon公司。
组织切片机，购自徕卡公司。
3.4实验方法
3.4.1实验分组
实验共需24只雄性C57BL/6小鼠，分为四组：空白组(n＝6)；模型组(n＝6)；治疗组(n＝6)；EX527组(n＝6)。
3.4.2药物溶液配制及给药剂量
雷公藤红素采用溶剂溶解，得到浓度为2mg/mL的雷公藤红素溶液，其中溶剂由 1％DMSO、2％吐温80、及97％水(v∶v∶v)配制而成，灌胃给药，给药剂量10mg/kg·d。ANIT采用玉米油溶解，得到浓度为15mg/mL的ANIT的玉米油溶液，灌胃给药，给药剂量75mg/kg。EX527采用玉米油溶解，得到浓度为2mg/mL的EX527的玉米油溶液，腹腔注射给药，给药剂量10mg/kg·d。
3.4.3实验流程
EX527组同时给予雷公藤红素溶液及EX527玉米油溶液，连续给药五天。治疗组给予雷公藤红素溶液及等剂量的玉米油，连续给药五天。与此同时，空白组及模型组给予等剂量溶剂(1％DMSO、2％吐温80及97％水(v∶v∶v))及玉米油，连续给溶剂五天。
在给药第三天进行ANIT造模，在给药4h后，模型组、治疗组、EX527组小鼠分别腹腔注射ANIT的玉米油溶液75mg/kg造模，单次给药，诱导胆汁淤积性肝损伤，空白组喂以等剂量玉米油。在给药第三天造模后，治疗组继续给药雷公藤红素，EX527组继续给药雷公藤红素和EX527，空白组和模型组继续给予相同剂量的溶剂。ANIT给药48h后，CO 2麻醉处死小鼠，取小鼠肝脏及血浆样品。摘小鼠眼球取血，血浆样品于冰上放置1-2h后，在4℃下4000g离心5min，取上清血浆样品，测定血浆生化指标ALT、AST、及ALP水平。
同时，制备液质血浆样品：取10μL血浆样品，与190μL 67％的乙腈(含内标氯磺丙脲5μM)混合，在4℃下18000g离心20min，取上清液进样。液相条件如下：进样体积5μL；柱温45℃；流动相流速0.3mL/min；洗脱梯度：在16min的运行时间内，乙腈浓度由2％变至98％，流动相(水/乙腈溶液)均含0.01％的甲酸。洗脱程序如下：0-12min，乙腈浓度由2％均匀变至98％；12-14min，乙腈浓度维持在98％；14-14.1min，乙腈浓度由98％平衡至2％；14.1-16min，乙腈浓度维持在2％。质谱条件如下：干燥气温度350℃，喷雾器压力35psi，毛细管电压3.5kV。
采集的小鼠部分肝组织在福尔马林中固定过夜，切片用苏木素和伊红(H&E)染色。
3.5实验结果
小鼠肝脏H&E染色结果参见图3A、图3B、图3C和图3D。结果显示，空白组小鼠的肝组织无损伤，模型组小鼠的肝组织产生严重的炎症浸润及门静脉周出血，治疗组小鼠的肝组织无明显损伤，EX527组小鼠的肝组织又产生严重的炎症浸润及门静脉周出血。结果表明，雷公藤红素可显著抑制ANIT诱导的严重炎症浸润及门静脉周 出血。参见图3D，EX527组小鼠的的肝组织切片出现炎症浸润，这说明小鼠给药SIRT1抑制剂EX527后，雷公藤红素的保护作用降低。
各组小鼠血浆AST、ALT、及ALP变化情况参见图3E。结果显示，模型组血浆AST、ALT、及ALP水平均显著高于空白组(P＜0.001)，表明模型组小鼠产生严重的肝损伤。治疗组AST、ALT、及ALP水平均较模型组降低(P＜0.05)，表明雷公藤红素可显著抑制由ANIT诱导的小鼠血浆中AST、ALT、及ALP水平升高。EX527组小鼠血浆AST、ALT水平显著高于治疗组(P＜0.05)，这表明小鼠投与SIRT1抑制剂EX527后，雷公藤红素保护作用降低。
各组小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图3F。结果显示，治疗组小鼠血浆中多种胆酸水平，如CA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA，显著低于模型组，这表明雷公藤红素可显著抑制由ANIT诱导的小鼠血浆中多种胆酸水平升高。EX527组小鼠血浆中CA、TβMCA/TαMCA、THDCA/TUDCA水平显著高于治疗组(P＜0.05)，这表明小鼠给药SIRT1抑制剂EX527后，雷公藤红素对肝脏的保护作用降低。
实施例4：在TAA模型中，SIRT1对雷公藤红素活性的影响
4.1实验动物
C57BL/6小鼠，SPF级，体重20～23g，雄性；合格证号均为：SCXK(湘)2013-0004，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
4.2药品与试剂
雷公藤红素，红色无定型结晶粉末，成都瑞芬思生物科技有限公司，批号L-003-150420。
EX527(Selisistat，购自MedChem Express公司，货号HY-15453)。
天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(货号C010-3，批号20161031)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(货号C009-3，批号20161031)及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(货号A059-3，批号20161031)，均为南京建成生物工程研究所生产。
硫代乙酰胺(TAA，货号C1290-25G，批号1002213299)、DMSO(货号V900090-500ml，批号101669350)、吐温80(货号P1754-500ml，批号101761909)、甲酸(货号94318-250ml-F，批号101721592)、氯磺丙脲(货号C1290-25G，批号1002213299)、脱氧胆酸(DCA，货号D2510-10G)、牛磺胆酸(TCA，货号T4009-1G)、 牛磺猪脱氧胆酸(THDCA，货号T0682-250MG)、牛磺鹅脱氧胆酸(TCDCA，货号T6260-25MG)及牛磺脱氧胆酸(TDCA，货号T0875-1G)购自Sigma公司。
色谱级乙腈(货号1.00030.4008)购自默克公司。
NaCl注射液(批号B16080E1)购自浙江国镜药业有限公司。
ω-鼠胆酸(ω-MCA，货号sc-396738)和牛磺-β-鼠胆酸(TβMCA，货号SC-361829)购自Santa cruz公司。
牛磺熊脱氧胆酸(TUDCA，货号HY-19696A)购自MCE公司。
牛磺-α-鼠胆酸(TαMCA，货号C1893-000)购自Steraloids公司。
4.3主要仪器
精密电子天平，购自Sartorius公司。
全自动酶标仪，购自BioTek Instruments公司。
水浴恒温振荡器SHA-C，购自常州中诚仪器制造有限公司。
冷冻离心机，购自Eppendorf公司。
超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱，包含1290进样器、1290泵、柱温箱、XDB-C18色谱柱(2.1×100mm，1.8μM)、及6530四极杆飞行时间质谱，购自Agilent公司。
正置显微镜，购自Nikon公司。
组织切片机，购自徕卡公司。
4.4实验方法
4.4.1实验分组
实验共需24只雄性C57BL/6小鼠，分为四组：空白组(n＝6)；模型组(n＝6)；治疗组(n＝6)；EX527组(n＝6)。
4.4.2药物溶液配制及给药剂量
雷公藤红素采用溶剂溶解，得到浓度为2mg/mL的雷公藤红素溶液，其中溶剂由1％DMSO、2％吐温、及97％水(v∶v∶v)配制而成，灌胃给药，给药剂量10mg/kg·d。TAA采用0.9％NaCl溶解，制成浓度为60mg/mL的TAA的NaCl溶液，腹腔注射给药，给药剂量300mg/kg。EX527采用玉米油溶解，制成浓度为2mg/mL的EX527的玉米油溶液，腹腔注射给药，给药剂量10mg/kg·d。
4.4.3实验流程
EX527组同时给予雷公藤红素溶液及EX527玉米油溶液，连续给药四天。治疗组 给予雷公藤红素溶液及等剂量的玉米油，连续给药四天。与此同时，空白组及模型组给予等剂量溶剂(1％DMSO、2％吐温80及97％水(v∶v∶v))及玉米油，连续给溶剂四天。
第四天进行TAA造模，给药1h后，模型组、治疗组和EX527组小鼠分别腹腔注射TAA 300mg/kg造模，诱导胆汁淤积性肝损伤。TAA给药24h后CO 2麻醉处死小鼠，收集血浆样品及肝脏样品。摘小鼠眼球取血，血浆样品于冰上放置1-2h后，在4℃下4000g离心5min，取上清血浆样品，测定血浆生化指标ALT、AST、及ALP水平。
同时，制备液质血浆样品：取10μL血浆样品，与190μL 67％的乙腈(含内标氯磺丙脲5μM)混合，在4℃下18000g离心20min，取上清进样。液相条件如下：进样体积5μL；柱温45℃；流动相流速0.3mL/min；洗脱梯度：在16min的运行时间内，乙腈浓度由2％变至98％，流动相(水/乙腈溶液)均含0.01％的甲酸。洗脱程序如下：0-12min，乙腈浓度由2％均匀变至98％；12-14min，乙腈浓度维持在98％；14-14.1min，乙腈浓度由98％平衡至2％；14.1-16min，乙腈浓度维持在2％。质谱条件如下：干燥气温度350℃，喷雾器压力35psi，毛细管电压3.5kV。
采集小鼠的部分肝组织在福尔马林中固定过夜，切片用苏木素和伊红(H&E)染色。
4.5实验结果
各组小鼠肝脏组织的H&E染色结果参见图4A、图4B、图4C和图4D，结果显示，空白组小鼠的肝组织无损伤，模型组小鼠的肝组织产生严重的肝细胞坏死，治疗组小鼠的肝组织中肝细胞坏死面积显著降低，EX527组小鼠的肝组织又产生严重的肝细胞坏死。这表明雷公藤红素可显著抑制由TAA诱导产生的严重肝细胞坏死。参见图4D，EX527组小鼠组织切片显现出严重肝细胞坏死，表明小鼠给药SIRT1抑制剂EX527后，雷公藤红素的保护作用降低。
各组小鼠血浆AST、ALT、及ALP变化情况参见图4E。结果显示，模型组血浆AST、ALT水平显著高于空白组(P＜0.01)，表明模型组小鼠产生严重的肝损伤。治疗组AST、ALT水平较模型组降低(P＜0.05)，表明雷公藤红素可显著抑制由TAA诱导的血浆中AST、ALT水平升高。EX527组小鼠血浆AST、ALT水平显著高于治疗组(P＜0.001)，表明小鼠给药SIRT1抑制剂EX527后，雷公藤红素保护作用降低。
各组小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图4F。结果显示，治疗组小鼠血浆中多种胆酸水平，如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA，显著低于TAA模型组(P＜0.05)，表明雷公藤红素可显著抑制由TAA诱导的小鼠血浆中多种胆酸水平升高。EX527组小鼠血浆中DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、TDCA水平显著高于治疗组(P＜0.05)，说明小鼠投与SIRT1抑制剂EX527后，雷公藤红素对肝脏保护作用降低。
实施例5：在ANIT模型中，法尼醇X受体(FXR)对雷公藤红素活性的影响
使用实施例1中相同方案，实验动物为FXR敲除小鼠(C57BL/6J背景)，FXR敲除小鼠由美国国立卫生研究院癌症研究所Frank J.Gonzalez研究员馈赠。
各组FXR敲除小鼠血浆AST、ALT、及ALP变化情况参见图5A，结果显示，模型组血浆AST、ALT、及ALP水平均显著高于空白组(P＜0.01)，表明模型组小鼠产生严重的肝损伤。治疗组ALT及ALP水平与模型组相比并未显著下降，表明在FXR敲除条件下，雷公藤红素对肝脏的保护作用减弱。
各组FXR敲除小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图5B，结果显示，治疗组中FXR敲除小鼠血浆中多种胆酸水平，如CA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA，与ANIT模型组相比没有显著下降，表明在FXR敲除条件下，雷公藤红素对肝脏的保护作用减弱。
实施例6：在TAA模型中，FXR对雷公藤红素活性的影响
使用实施例2中相同方案，实验动物为FXR敲除小鼠(C57BL/6J背景)，FXR敲除小鼠由美国国立卫生研究院癌症研究所Frank J.Gonzalez研究员馈赠。
各组FXR敲除小鼠的肝脏组织H&E染色结果参见图6A、图6B和图6C。结果显示，空白组小鼠的肝组织无损伤，模型组小鼠的肝组织产生严重的肝细胞坏死，治疗组小鼠的肝组织仍产生严重的肝细胞坏死，表明在FXR敲除小鼠条件下，雷公藤红素不能显著抑制由TAA诱导产生的严重肝细胞坏死。
各组FXR敲除小鼠血浆AST、ALT、及ALP变化情况参见图6D。结果显示，模型组血浆AST、ALT、及ALP水平均显著高于空白组(P＜0.001)，表明模型组小鼠产生严重的肝损伤。治疗组AST水平与模型组相比并未显著下降，表明在FXR敲除条件下，雷公藤红素对肝脏的保护作用减弱。
各组FXR敲除小鼠血浆中多种胆酸成分相对含量变化情况参见图6E。结果显示，治疗组中FXR敲除小鼠血浆中多种胆酸水平，如ω-MCA、DCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA，与ANIT模型组相比没有显著下降，表明在FXR敲除条件下，雷公藤红素对肝脏的保护作用减弱。
实施例7：雷公藤红素对TAA诱导的小鼠肝纤维化的治疗作用
7.1实验动物：C57BL/6小鼠，SPF级，体重20～23g，雄性；合格证号为：SCXK(湘)2013-0004，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司。
7.2药品与试剂
雷公藤红素，红色无定型结晶粉末，购自成都瑞芬思生物科技有限公司，批号L-003-150420。
天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(货号C010-3，批号20161031)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒(货号C009-3，批号20161031)、及碱性磷酸酶(ALP)试剂盒(货号A059-3，批号20161031)，均为南京建成生物工程研究所生产。
硫代乙酰胺(TAA，货号C1290-25G，批号1002213299)、DMSO(货号V900090-500ml，批号101669350)及吐温80(货号P1754-500ml，批号101761909)购自Sigma公司。
NaCl注射液(批号B16080E1)购自浙江国镜药业有限公司。
7.3主要仪器：精密电子天平，Sartorius公司；全自动酶标仪，BioTek Instruments公司；水浴恒温振荡器SHA-C，常州中诚仪器制造有限公司；冷冻离心机，Eppendorf公司。正置显微镜，Nikon公司。组织切片机，徕卡公司。
7.4实验方法：
7.4.1实验分组
实验共需30只雄性C57BL/6小鼠，分为三组：空白组(n＝10)；TAA肝纤维化组(n＝10)；治疗组(n＝10)。
7.4.2药物溶液配制及给药剂量
雷公藤红素采用溶剂溶解，得到浓度为2mg/mL的雷公藤红素溶液，其中溶剂由1％DMSO、2％吐温80、及97％水(v∶v∶v)配制而成，灌胃给药，给药剂量10mg/kg/次，每周给药三次，第一周不给与治疗。TAA采用0.9％NaCl溶解，制成浓度为20mg/kg的TAA的NaCl溶液，腹腔注射给药，给药剂量为第一周100mg/kg/次，第二至六周 160mg/kg/次，每周给药三次。
7.4.3实验流程
模型组及治疗组每周给TAA三次，隔天给药。第一周每次给TAA剂量为100mg/kg。从第二周开始，模型组及治疗组TAA给药剂量变为每次160mg/kg。空白组给予等剂量NaCl溶液。
治疗组从第二周开始加入雷公藤红素进行治疗，在给TAA 1h后再给药雷公藤红素10mg/kg。空白组及模型组给予等剂量溶剂(1％DMSO、2％吐温80、及97％水(v∶v∶v))。
六周后，CO 2麻醉处死小鼠，收集小鼠血浆样品及肝脏样品。摘小鼠眼球取血，血浆样品于冰上放置1-2h后，在4℃下4000g离心5min，取上清血浆样品，测定血浆生化指标ALT、AST、及ALP水平。
采集小鼠的部分肝组织在福尔马林中固定过夜，切片用苏木素和伊红(H&E)染色。
7.5实验结果
各组小鼠的肝脏组织H&E染色结果参见图7A、图7B和图7C。结果显示，空白组小鼠的肝组织无损伤，模型组小鼠的肝组织产生严重的肝细胞坏死，且肝整体形态也发生变化，治疗组小鼠的肝组织损伤降低，肝脏形态也得到显著恢复，表明雷公藤红素能显著降低TAA诱导的严重肝细胞坏死及肝纤维化，并且使得肝整体形态也得到显著恢复。
各组小鼠血浆中AST、ALT、及ALP变化情况参见图7D。结果显示，模型组血浆AST、ALT水平均显著高于空白组(P＜0.01)，表明模型组小鼠产生严重的肝纤维化。治疗组AST、ALT水平与模型组相比显著下降(P＜0.05)，表明雷公藤红素可治疗TAA诱导的肝纤维化。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本公开的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本公开进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本公开的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本公开技术方案的精神，其均应涵盖在本公开请求保护的技术方案范围当中。

Claims (18)

  1. 雷公藤红素或其药学上可接受的盐在制备用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的药物中的用途。
  2. 药物组合物在制备用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的药物中的用途，其中所述药物组合物中含有雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料或赋形剂。
  3. 如权利要求1或2所述的用途，其中所述的胆汁淤积性肝病为化学性胆汁淤积性肝病、药物性胆汁淤积性肝病或原发性胆汁淤积性肝病。
  4. 如权利要求1或2所述的用途，其中所述的胆汁淤积性肝病是由于体内雌激素过高引起的胆汁淤积性肝病。
  5. 如权利要求1或2所述的用途，其中所述的肝纤维化为化学物质导致的肝纤维化、药物导致的肝纤维化、乙型肝炎引起的肝纤维化或丙型肝炎引起的肝纤维化。
  6. 权利要求1或2所述的用途，其中所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐降低患者血浆中各种胆汁酸成分(例如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA)，或
    减少由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，或
    抑制或减轻由胆汁淤积引起的炎症。
  7. 一种预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化的方法，所述方法包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的雷公藤红素或其药学上可接受的盐，或者
    所述方法包括给予需要这种治疗的患者治疗有效量的药物组合物，其中所述药物组合物中含有雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料或赋形剂。
  8. 如权利要求7所述的治疗方法，其中所述的胆汁淤积性肝病为化学性胆汁淤积性肝病、药物性胆汁淤积性肝病、原发性胆汁淤积性肝病或由于体内雌激素过高引起的胆汁淤积性肝病。
  9. 如权利要求7所述的治疗方法，其中所述的肝纤维化为化学物质导致的肝纤维化、药物导致的肝纤维化、乙型肝炎引起的肝纤维化或丙型肝炎引起的肝纤维化。
  10. 如权利要求7所述的治疗方法，其中所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐降低患者血浆中各种胆汁酸成分(例如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、 THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA)，或
    减少由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，或
    抑制或减轻由胆汁淤积引起的炎症。
  11. 雷公藤红素或其药学上可接受的盐，其用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化。
  12. 如权利要求11所述的雷公藤红素或其药学上可接受的盐，其中所述的胆汁淤积性肝病为化学性胆汁淤积性肝病、药物性胆汁淤积性肝病、原发性胆汁淤积性肝病或由于体内雌激素过高引起的胆汁淤积性肝病。
  13. 如权利要求11所述的雷公藤红素或其药学上可接受的盐，其中所述的肝纤维化为化学物质导致的肝纤维化、药物导致的肝纤维化、乙型肝炎引起的肝纤维化或丙型肝炎引起的肝纤维化。
  14. 如权利要求11所述的雷公藤红素或其药学上可接受的盐，其中所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐降低患者血浆中各种胆汁酸成分(例如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA)，或
    减少由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，或
    抑制或减轻由胆汁淤积引起的炎症。
  15. 药物组合物，其用于预防和/或治疗胆汁淤积性肝病或肝纤维化，其中所述药物组合物中含有雷公藤红素或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的辅料或赋形剂。
  16. 如权利要求15所述的药物组合物，其中所述的胆汁淤积性肝病为化学性胆汁淤积性肝病、药物性胆汁淤积性肝病、原发性胆汁淤积性肝病或由于体内雌激素过高引起的胆汁淤积性肝病。
  17. 如权利要求15所述的药物组合物，其中所述的肝纤维化为化学物质导致的肝纤维化、药物导致的肝纤维化、乙型肝炎引起的肝纤维化或丙型肝炎引起的肝纤维化。
  18. 如权利要求15所述的药物组合物，其中所述雷公藤红素或其药学上可接受的盐降低患者血浆中各种胆汁酸成分(例如ω-MCA、DCA、TβMCA/TαMCA、TCA、THDCA/TUDCA、TCDCA、TDCA)，或
    减少由胆汁淤积引起的肝损伤、肝脏坏死，或
    抑制或减轻由胆汁淤积引起的炎症。
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