WO2018123464A1 - 核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法 - Google Patents

核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法 Download PDF

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WO2018123464A1
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WO
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nucleic acid
strip
main body
chromatography test
test instrument
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PCT/JP2017/043617
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秀彦 西塚
難波　誠
充裕 吉田
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東洋製罐グループホールディングス株式会社
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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C12M1/34—Measuring or testing with condition measuring or sensing means, e.g. colony counters
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G—PHYSICS
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    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals

Definitions

  • the present invention relates to a nucleic acid chromatography technique, and more particularly, a nucleic acid chromatography test instrument, a nucleic acid chromatography test kit, and a nucleic acid chromatography test instrument that detect a target nucleic acid using a genetic test strip on which a probe is immobilized. About how to use.
  • a target nucleic acid is hybridized (complementarily bound) to a probe immobilized on a strip using a strip for genetic testing in which the probe is immobilized.
  • the detection was performed. Specifically, for example, genomic DNA is extracted from a sample to be tested, and a genetic test strip is immersed in a reaction solution containing an amplification product obtained by amplifying a target nucleic acid by a PCR (polymerase chain reaction) method or the like. Then, the target nucleic acid is detected by developing the amplification product on a strip and hybridizing with the probe, and visually confirming the labeling dye that binds to the amplification product hybridized with the probe.
  • the extracted genomic DNA was placed in a PCR tube together with a PCR reaction reagent and PCR was performed, and then a chromatographic developing solution containing a labeling dye was mixed in the PCR tube to color the amplification product. Then, a genetic test strip is immersed in the reaction solution in the PCR tube, the reaction solution is developed on the strip by capillary action, and a colored line indicated by the amplification product hybridized to the probe immobilized on the strip is formed. Confirmation was done.
  • Such a nucleic acid chromatography method can be performed using, for example, the specimen testing tool described in Patent Document 1. That is, if such a specimen testing tool (such as a genetic test strip) is used, it can be applied even when it is inserted into a PCR tube having a generally small inverted cone shape.
  • a specimen testing tool such as a genetic test strip
  • the analyte detection device described in Patent Document 2 can be cited as a technique for suppressing contamination.
  • the amplification product can be spread on a strip in a device configured to be a semi-closed system. Specifically, by inserting a container containing a liquid sample into the cavity of the device, the lower part of the container is pierced so that the sample in the container is released to reach the strip and deployed.
  • the present inventors have intensively studied and, among the above four concerns about contamination, a nucleic acid chromatography test instrument, a nucleic acid chromatography test kit, and a nucleic acid test kit that can eliminate (2) to (4) A chromatographic test instrument was successfully developed and the present invention was completed. Note that (1) can be suppressed by a predetermined method, which will be described later. That is, the present invention relates to a nucleic acid chromatography test instrument, a nucleic acid chromatograph capable of preventing contamination due to volatilization of a reaction solution or contact with a strip during development on a strip and contamination due to disposal of the test instrument. It is intended to provide a method for using a chromatography test kit and a nucleic acid chromatography test instrument.
  • the nucleic acid chromatography test instrument of the present invention is a nucleic acid chromatography test instrument used for detecting a target nucleic acid by a strip for genetic testing, wherein one of the strips can be inserted.
  • An end portion is formed of a cylindrical member and includes a main body portion having a strip fixing portion for fixing the strip, and the main body portion is fitted to an opening portion of a container containing a solution containing nucleic acid. And having a sealing part for forming a sealed space inside the main body part and the container, and in a state where the main body part is fitted to the opening of the container, one end of the strip is The configuration is located in the container.
  • the nucleic acid chromatography test instrument of the present invention is a nucleic acid chromatography test instrument used for detecting a target nucleic acid with a strip for genetic testing, wherein the strip is formed by laminating a film, and a nucleic acid.
  • the kit for nucleic acid chromatography test of the present invention includes the above-described nucleic acid chromatography test instrument, a PCR reaction reagent containing at least a primer mix consisting of one or more primer sets, a chromatographic developing solution, and a label. And a dyeing solution containing a dye for use.
  • the staining solution containing the labeling dye may be mixed in the chromatography developing solution.
  • the method of using the nucleic acid chromatography test instrument of the present invention is a method of using the nucleic acid chromatography test instrument described above, wherein a PCR tube in which a reaction solution containing a target nucleic acid obtained by performing PCR is enclosed is used. And adding a chromatographic developing solution and a staining solution containing a labeling dye to the reaction solution, fitting the body portion of the nucleic acid chromatography test instrument into the tube, and removing the reaction solution from the strip.
  • the target nucleic acid in the reaction solution is bound to a probe having a complementary base sequence immobilized on the strip, and the target dye is detected by detecting the labeling dye bound to the target nucleic acid.
  • This is a method of detecting and discarding the main body, the strip, and the tube in a state where the main body is fitted to the tube.
  • the method of using the nucleic acid chromatography test instrument of the present invention is a method of using the nucleic acid chromatography test instrument described above, wherein a PCR tube in which a reaction solution containing a target nucleic acid obtained by performing PCR is enclosed is used. , The body of the nucleic acid chromatography test instrument is fitted into the tube, the reaction solution is spread on the strip, and the target nucleic acid in the reaction solution is immobilized on the strip. The main body part is removed from the tube, a chromatographic developing solution and a staining liquid containing a labeling dye are injected into the tube, and the main body part is fitted to the tube.
  • the developing solution is spread on the strip, the labeling dye in the developing solution is bound to the target nucleic acid bound to the probe, And detecting a target nucleic acid by detecting a label dye, in a state where the main body is fitted to the tube, there the body portion, the strip, and the tube as a method of disposal.
  • the present invention when performing nucleic acid chromatography, it is possible to prevent contamination due to volatilization of the reaction solution or contact with the strip during development on the strip, and contamination due to disposal of the inspection instrument. .
  • FIG. 1 It is a perspective view which shows the external appearance of the nucleic acid chromatography test
  • FIG. 1 It is a perspective view which shows the external appearance of the nucleic acid chromatography test
  • nucleic acid chromatography test instrument the nucleic acid chromatography test kit, and the method of using the nucleic acid chromatography test instrument of the present invention will be described with reference to the drawings.
  • the nucleic acid chromatography test instrument of the present embodiment includes a main body 10 made of a cylindrical member into which a strip 20 can be inserted and one end of which is open.
  • the main body portion 10 has a strip fixing portion for fixing the genetic test strip 20.
  • the strip fixing portion is composed of a pressing portion 101 that fixes the strip 20 in between.
  • the strip fixing portion 101 is not limited to such a pressing portion 101 as long as the strip 20 can be fixed.
  • the strip 20 can be fixed to the main body 10 by a method such as sandwiching, inserting, adhering, welding, tape fixing, pin fixing, or making a hole in the strip and hanging it.
  • the main-body part 10 has the opening-and-closing mechanism 102 (in FIG. 2, hinge) for enabling insertion of the strip 20 which opens or closes the inside.
  • the strip 20 is fixed by the pressing portion 101 by closing the opening / closing mechanism 102.
  • the first lid portion is arranged vertically with the second lid portion via a hinge, and the inner wall surface of the first lid portion arranged above the opening / closing mechanism 102.
  • a pressing portion 101 is provided on the top.
  • the first lid is rotated 180 ° with the hinge as a fulcrum, and the inner wall surface of the first lid is brought into surface contact with the inner wall surface of the second lid disposed below the opening / closing mechanism 102.
  • the strip 20 is pressed and fixed by the pressing portion 101.
  • a groove G in which the strip 20 is disposed is formed in the main body portion 10, and the strip 20 is disposed in the groove G, and the pressing portion 101 is disposed in a position where the strip 20 is pressed and fixed in the groove G.
  • the opening / closing mechanism 102 is closed, the inner wall surface of the first lid portion and the inner wall surface of the second lid portion are in surface contact.
  • the main body 10 also includes a locking portion 103 that maintains the opening / closing mechanism 102 in a closed state.
  • a locking portion 103-1 a (fitting pin hole) is provided on the inner wall surface of the first lid portion disposed on the upper side of the opening / closing mechanism 102, and the second surface disposed on the lower side of the opening / closing mechanism 102.
  • a locking portion 103-2a (fitting pin) is provided on the inner wall surface of the lid portion. The first lid is rotated 180 ° by the hinge, and the fitting pin 103-2a is inserted into the fitting pin hole 103-1a so that the first lid can be locked to the second lid. It has become. At this time, the inner wall surface of the first lid portion and the inner wall surface of the second lid portion are in close contact, and the opening that can be opened by the opening / closing mechanism 102 can be sealed.
  • a slip stopper 104 is provided on the outer wall surface of the first lid and the outer wall surface of the second lid.
  • a gradient is formed at the opposite ends of the opening / closing mechanism 102 in the first lid and the second lid, and these ends when the opening / closing mechanism 102 is closed.
  • the slope of the part is in surface contact.
  • the opening / closing mechanism 102 is configured to open and close in the vertical direction (the axial direction of the cylindrical member of the main body), but is not limited thereto, and opens and closes in the horizontal direction. Also good. A specific aspect of the configuration for opening and closing the opening / closing mechanism 102 in the lateral direction will be described later as a second embodiment.
  • each opening / closing mechanism 102 can be easily opened and closed simultaneously.
  • the nucleic acid chromatography inspection instrument that is integrally provided continuously in the lateral direction as described above, the nucleic acid chromatography inspection can be performed on 8 samples at the same time using the existing eight-sequence PCR tube. It is possible to improve inspection efficiency.
  • the nucleic acid chromatography test instrument of the present embodiment may be configured not to include the opening / closing mechanism 102, the first lid, and the second lid.
  • the strip 20 is inserted from the lower opening of the main body 10 and can be fixed by other methods as described above, for example, pinching, insertion, adhesion, or the like.
  • the main body portion 10 includes a concave end portion 105 for positioning the strip 20 inside the main body portion 10. That is, a groove G for arranging the strip 20 is provided on the inner wall surface of the second lid portion arranged below the opening / closing mechanism 102, and the upper end portion of the groove G positions the strip 20. This is a concave end portion 105.
  • the lower part of the groove extends to the opening of the cylindrical member of the main body 10.
  • the length of the strip 20 is longer than the length from the concave end portion 105 to the lower end of the main body portion 10. For this reason, one end (the lower end in FIG. 1) of the strip 20 is positioned in the PCR tube 30 in a state where the main body 10 is fitted in the opening of the PCR tube 30.
  • the development start area 201 of the strip 20 is immersed or brought into contact with the PCR reaction solution in the PCR tube 30.
  • the nucleic acid chromatography test instrument is supplied in a state where the strip 20 is fixedly provided, the end of the strip 20 protruding outside from the lower opening of the main body 10 is protected, although not particularly shown. Therefore, for example, a protective cap having the same shape as the PCR tube 30 can be attached to the sealing portion 106.
  • the strip 20 is positioned by abutting the upper edge of the strip 20 against the concave end portion 105, and the water absorption promoting region 203 of the strip 20 is fixed in the groove G while being pressed by the pressing member 101.
  • the detection region 202 of the strip 20 is in close contact with the groove G, a PCR reaction solution or the like developed from the development start region 201 to the detection region 202 is expressed at the interface between the detection region 202 and the groove G. Due to the phenomenon, there is a possibility that the target nucleic acid cannot be detected because it oozes out to the groove G side and is sucked up.
  • the strip 20 is preferably provided with the detection region 202 fixed to the main body 10 in a non-contact manner.
  • the opening of the tubular member of the main body 10 starts from a portion where the boundary between the water absorption promotion region 203 and the detection region 202 is located (a portion indicated by an arrow in the right side view of FIG. 2).
  • the groove G is gradually deepened so that the region below the detection region 202 of the strip 20 does not come into contact with the main body 10.
  • the main body 10 has a sealing portion 106 that fits into the opening of the PCR tube 30 and forms a sealed space inside the main body 10 and the PCR tube 30.
  • the sealing part 106 is located at the lower end of the main body part 10 and has an opening. Specifically, when the main body 10 is inserted and fitted into the PCR tube 30, the outer periphery of the opening of the sealing portion 106 is formed in the same shape as the inner periphery of the opening of the PCR tube 30. Further, when the main body 10 is put on the PCR tube 30 to be fitted, the inner periphery of the opening of the sealing portion 106 is formed in the same shape as the outer periphery of the opening of the PCR tube 30.
  • a notch can be formed in the region of the sealing portion 106 corresponding to the portion where the lid of the PCR tube 30 is connected.
  • the specific aspect of the fitting by the containers such as the main body portion 10 and the PCR tube 30 is not limited to the above-described surface contact, and for example, it can be configured to be fitted by fitting or screws.
  • the main body unit 10 includes a pushing amount defining unit 107 that defines the relative pushing amount of the main body unit 10 and the PCR tube 30 in a state of being fitted into the opening of the PCR tube 30.
  • the pushing amount defining unit 107 can set the pushing amount of the main body unit 10 with respect to the PCR tube 30 to a constant value. Further, the pushing amount defining portion 107 can ensure that a certain pushing amount is obtained in a state where the main body portion 10 is fitted to the opening of the PCR tube 30.
  • liquid leakage that may occur when the indentation is shallow can be prevented, the distal end of the strip 20 can surely reach the solution to ensure deployment, and the distal end of the strip 20 can reach the bottom of the PCR tube 30 and be crushed. It is possible to obtain an effect such as preventing the above.
  • the indentation amount defining portion 107 is formed symmetrically as projecting portions having a substantially rectangular parallelepiped shape at two locations on the side surface of the sealing portion 106.
  • the present invention is not limited to this. Other configurations may be used as long as can be set to a constant value.
  • the protrusions may be formed as protrusions at three or more locations on the side surface of the sealing portion 106, or may be formed as a single protrusion that surrounds the sealing portion 106.
  • the pushing amount defining portion 107 can be formed as the protruding portion on the inner surface of the opening of the sealing portion 106.
  • the main body 10 preferably includes a flat surface 108 that is parallel to the detection region 202 of the strip 20 in a state where the strip 20 is fixed in the main body 10. If the main body 10 has such a configuration, the inspection result can be more easily seen, and when the detection area of the strip 20 is automatically photographed by photographing means such as a CCD camera, the photographing is more reliably performed. It becomes possible.
  • photographing means such as a CCD camera
  • the main body 10 may be completely transparent or partially transparent, and at least the inspection result shown in the detection region 202 of the strip 20 in the main body 10 can be visually recognized from the outside of the main body 10. It ’s fine. In addition, from the viewpoint of cost and molding, it is preferable that all are transparent. Note that “transparent” includes colorless and transparent as well as colored and transparent, which means that light can be transmitted. Examples of such transparent members include acrylic resins such as polystyrene, polycarbonate, polyethylene terephthalate (PET), and methyl methacrylate (MMA), olefin resins such as polyethylene, high-density polyethylene (HDPE), polypropylene, and cyclic olefins. It can be used suitably.
  • a polyolefin-based resin which is a nonpolar resin having low wettability with respect to the PCR reaction solution and the like in order to prevent the PCR reaction solution and the like from leaching out to the interface where the container body 10 and the strip 20 are in contact with each other.
  • Resins are preferred, and polypropylene is particularly preferred from the standpoint of resin hardness and moldability.
  • the inner surface of the main body 10 is subjected to an anti-fogging treatment.
  • an antifogging treatment can be performed by applying an ultraviolet curable antifogging coating to the inner surface of the main body 10 or applying an antifogging treatment film.
  • the main body 10 or at least the inner surface of the main body 10 can be molded using a resin containing an antifogging agent.
  • the antifogging agent examples include glycerin fatty acid esters such as glycerin monooleate, glycerin laurate, glycerin caprate, diglycerin oleate, diglycerin laurate, and triglycerin oleate, sorbitan fatty acid ester, polyoxyethylene fatty alcohol, polyethylene glycol Examples thereof include polyethylene glycol fatty acid esters such as oleate and polyethylene glycol laurate, and polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters.
  • the addition amount is preferably 0.1 to 5% by mass, more preferably 1.2 to 2.4% by mass.
  • the addition amount of the antifogging agent is less than 0.1% by mass, the improvement effect due to the addition of the antifogging agent tends to be insufficient.
  • the addition amount of the antifogging agent exceeds 5% by mass, no further improvement effect is observed, and the transparency of the container body 10 is reduced, and the mold cleaning frequency due to the increase in the amount of bleeding is increased. This leads to an increase and occurrence of vent clogging, which tends to reduce continuous formability.
  • the transparent nucleating agent include phosphoric acid ester metal salts, pimelic acid metal salts, rosin metal salts, benzylidene sorbitol, quinacridone, cyanine blue, and talc.
  • the addition amount is preferably 0.1 to 10% by mass. If the addition amount of the transparent nucleating agent is less than 0.1% by mass, the improvement effect due to the addition of the transparent nucleating agent tends to be insufficient. On the other hand, when the addition amount of the transparent nucleating agent exceeds 10% by mass, no further improvement effect is observed, and there is a tendency that odor is generated or the physical properties of the surface are adversely affected by bleeding out.
  • the strip 20 is an elongated member on which a probe for capturing an amplification product is fixed, and is formed so that the liquid penetrates the entire member by capillary action and is easily developed.
  • cellulose such as cellulose membrane is preferably used as the strip member.
  • a sheet having a resin sheet (or film) adhered to one surface thereof may be used.
  • the strip 20 is infiltrated (soaked) with a PCR reaction solution or the like, and a development start region 201 which is a part where development starts and one or more probes are arranged in a short direction of the strip at a specific position of the strip.
  • a detection region 202 fixed in a line shape and a water absorption promotion region 203 for facilitating soaking of the liquid into the strip are successively formed in this order.
  • the development start area 201 is a part where a PCR reaction solution or the like is first soaked.
  • the development start area 201 is continuously formed adjacent to the detection area 202, and the liquid that has soaked into the development start area 201 develops into the detection area 202 by capillary action.
  • the development start region 201 may be a very small portion of the strip 20.
  • one or more regions (spots) to which the probes are immobilized are formed (spotted) in a line shape in the short direction of the strip 20.
  • the number of lines on which the probes are immobilized is not particularly limited, and for example, 1 to 15 lines, preferably 8 to 12 lines or the like can be used.
  • a blue labeling dye binds to the amplification product hybridized with the probe immobilized in such a line shape, the blue line can be detected visually on the detection region 202.
  • another color line for example, a red line, is preferably arranged as a positioning marker in the detection region 202.
  • the labeling dye is not particularly limited.
  • a labeling dye using an avidin / biotin system can be preferably used.
  • the water absorption promotion region 203 is continuously formed adjacent to the detection region 202 on the opposite side to the development start region 201.
  • the water absorption promotion region 203 can be configured by, for example, laminating a member such as a water absorption pad or cellulose on the strip 20 and can promote the water absorption of the water spread on the strip 20 by such a water absorption member.
  • the strip 20 can be made easier to handle by forming a region in which the thickness is increased by laminating members on the strip 20 in this manner.
  • the water absorption promoting region 203 has a hygroscopic property.
  • region 203 shall have a hygroscopic property, the humidity in the sealed space formed in the main-body part 10 and the PCR tube 30 can be reduced, dew condensation will arise on the inner surface of the main-body part 10, and observation will be carried out. It becomes possible to suppress that it becomes impossible. From such a viewpoint, it is also preferable to laminate a member such as a desiccant in the water absorption promotion region 203. In the strip 20, the water absorption promotion region 203 can be omitted.
  • the opening / closing mechanism 102 is configured to open and close in the vertical direction. This embodiment is different from the first embodiment in that the opening / closing mechanism 102 is configured to open and close in the horizontal direction.
  • the first lid portion is arranged vertically with the second lid portion via a hinge, and the first lid portion is used as a fulcrum.
  • the first lid is arranged side by side with the second lid via a hinge.
  • the lid portion is configured to be opened and closed by rotating it horizontally with a hinge as a fulcrum.
  • FIG. 6 shows a rear view, a left side view, a front view, and a right side view from the left side of the drawing, a plan view above the rear view, and a bottom view below the front view.
  • a locking portion 103-1b (fitting claw) is provided on the inner wall surface of the first lid portion, and the inner wall surface of the second lid portion. Is provided with a locking portion 103-2b (fitting cutout portion).
  • the first lid can be rotated 180 ° by the hinge so that the fitting claw 103-1b can be fitted into the fitting notch 103-2 so that the first lid can be locked to the second lid. It has become.
  • the opening / closing mechanism 102 is configured to open and close in the horizontal direction, the stroke in the vertical direction is reduced, and workability in a small incubator or a small clean bench can be improved.
  • the nucleic acid chromatography test instrument according to this embodiment is different from the first embodiment in the above points, but the other configuration is common to the first embodiment. Therefore, in FIGS. 5 to 8, the same components as those in the first embodiment are denoted by the same reference numerals, and redundant description is omitted.
  • the nucleic acid chromatography test instrument of this embodiment includes a strip portion 110a in which a strip 20a is laminated and a container (such as a PCR tube 30; hereinafter referred to as a PCR tube 30) containing a solution containing nucleic acid.
  • a container such as a PCR tube 30; hereinafter referred to as a PCR tube 30
  • a main body 10 a having a sealing portion 106 a that fits into the opening and forms a sealed space inside the PCR tube 30 is provided.
  • the sealing portion 106a includes a strip support portion 109a for inserting and fixing the strip portion 110a.
  • the strip support part 109a is formed as a slit in the upper part of the sealing part 106a.
  • This slit is a groove having a size that is the same as or slightly smaller than the thickness and width of the strip portion 110a and has a predetermined depth.
  • the thickness of the strip portion 110a is substantially zero, and the slit wall surfaces are in close contact with each other.
  • the lower part of the sealing part 106a serves as a stopper inserted into the PCR tube 30. Therefore, the outer periphery of the lower part of the sealing part 106 a is formed in the same shape as the inner periphery of the opening of the PCR tube 30.
  • the bottom surface of the sealing portion 106a may be a flat surface, and a concave portion or a convex portion may be formed.
  • the sealing portion 106 a includes a pushing amount defining portion 107 a that defines the relative pushing amount of the sealing portion 106 a and the PCR tube 30 in a state where the sealing portion 106 a is fitted into the opening of the PCR tube 30. ing.
  • the pushing amount defining portion 107a By this pushing amount defining portion 107a, the pushing amount with respect to the PCR tube 30 of the main body portion 10a can be set to a constant value.
  • the indentation amount defining portion 107a is formed symmetrically as projecting portions having a substantially rectangular parallelepiped shape at two locations on the side surface of the sealing portion 106a, but is not limited to this, and the indentation amount is constant.
  • the protrusions may be formed as protrusions at three or more positions on the side surface of the sealing portion 106a, or may be formed as a single protrusion surrounding the sealing portion 106a.
  • the structure which covers the PCR part 30 and fits the sealing part 106a can also be set as the structure which covers the PCR part 30 and fits the sealing part 106a.
  • an opening having an inner periphery having the same shape as the outer periphery of the opening of the PCR tube 30 is formed below the sealing portion 106a.
  • a notch can be formed in the region of the sealing portion 106a corresponding to the portion where the lid of the PCR tube 30 is connected.
  • the push-in amount defining portion 107a can be formed as the protruding portion on the inner surface of the opening of the sealing portion 106a. Further, such an indentation amount defining portion 107a can be omitted, and the upper surface of the opening of the sealing portion 106a can be used as the indentation amount defining portion.
  • the material of the sealing portion 106a is not particularly limited, but is preferably made of an elastic resin.
  • any flexible resin having a long side chain component may be used, but rubbers are particularly preferable, and silicon rubber, fluororubber, and the like are more preferable in terms of hygiene.
  • the sealing portion 106a can be formed using these. If the sealing portion 106a is made of such an elastic resin, the strip portion 110a can be inserted into close contact with the strip support portion 109a and can be easily and appropriately supported. This also makes it possible to increase the degree of sealing when the sealing portion 106 a is fitted to the PCR tube 30.
  • the strip 20a can be the same as that in the above-described embodiment. Specifically, it can be configured to include a deployment start portion 201a, a detection region 202a, and a water absorption promotion region 203a, and a configuration in which the water absorption promotion region 203a is omitted.
  • the strip portion 110a can be formed by processing the strip 20a with a laminate film.
  • the position of the strip 20a with respect to the main body 10a and the PCR tube 30 is determined based on the position at which the strip 20a is laminated on the strip 110a, the depth of the groove of the strip support 109a, and the indentation amount defining portion 107a. Can be set to position.
  • the length of the strip 20a is longer than the length from the position of the upper end of the strip 20a to be laminated film processed at the strip portion 110a to the lower end of the sealing portion 106a. For this reason, one end (the lower end in FIG. 5) of the strip 20a is positioned in the PCR tube 30 in a state where the main body 10a is fitted in the opening of the PCR tube 30. As a result, the development start area 201a of the strip 20a is immersed or brought into contact with the PCR reaction solution in the PCR tube 30.
  • polyolefin such as polyethylene, polystyrene, or the like can be suitably used. This is because when the hydrophilicity of the inner surface material of the laminate film in contact with the strip 20 is smaller than the hydrophilicity of a material such as cellulose constituting the strip, the solution can be appropriately developed.
  • the kit for nucleic acid chromatography test of this embodiment comprises the above-described nucleic acid chromatography test instrument, a PCR reaction reagent containing a primer mix consisting of one or more primer sets, a chromatography developing solution, and a labeling dye. It is preferable to contain a dyeing solution.
  • the staining solution containing the labeling dye may be mixed in the chromatography developing solution.
  • a PCR reaction reagent for example, a primer mix, DNA polymerase, nucleic acid synthesis substrate, PCR buffer and the like can be suitably used.
  • As the chromatographic developing solution for example, a solution containing a DNA dissociator, urea or the like can be suitably used.
  • a dye containing a labeling dye colored beads, such as those using an avidin / biotin system
  • a blocking agent a surfactant, a salt concentration adjusting buffer, or the like can be suitably used.
  • nucleic acid chromatography test kit when performing nucleic acid chromatography, contamination caused by volatilization of the reaction solution during contact with the strip or contact with the strip, and contamination due to disposal of the test equipment, are performed. It becomes possible to prevent suitably.
  • the target nucleic acid is captured (spanned) in a certain direction within the strip for genetic testing, so that it is captured by the probe spotted on the strip, and at the spot where the probe is immobilized, As a result of being concentrated, color development up to a level that can be visually observed with the labeling dye bound to the target nucleic acid is obtained, and the target nucleic acid is detected.
  • the target nucleic acid is amplified by PCR or the like.
  • the amplification product that can be obtained in this way consists of the target nucleic acid.
  • the amplification process of the target nucleic acid is not limited to the PCR method, and can also be performed by other methods such as ligase chain reaction, TMA (Transcription Mediated Amplification), NASBA (Nucleic Acid Sequence-Based Amplification).
  • a PCR reaction reagent containing a primer set for amplifying the target nucleic acid in the genomic DNA of the organism to be examined is injected into the PCR tube.
  • a primer mix comprising one or more primer sets can be used, and multiplex PCR for simultaneously amplifying a plurality of target nucleic acids can also be performed.
  • the PCR reaction reagent includes a primer set, a nucleic acid synthesis substrate (for example, dNTPmixture (dCTP, dATP, dTTP, dGTP)), a nucleic acid synthase (for example, EX Taq HotStart DNA polymerase), a buffer, and the like.
  • the PCR tube is injected with such a PCR reaction reagent, genomic DNA extracted from a biological sample, and a solution containing water as the remaining component, and this solution is used as a reaction solution used for PCR.
  • Genomic DNA can be extracted by a general method such as a method using a CTAB method (Cetyl trimethyl ammonium bromide) or a method using a DNA extraction apparatus.
  • a general thermal cycler etc. can be used as a PCR apparatus.
  • the PCR reaction can be performed, for example, under the following reaction conditions, but can be performed with appropriate changes, and the whole may be performed in about 15 to 30 minutes.
  • a chromatographic development solution and a staining solution containing a labeling dye are added to a PCR reaction solution containing the amplification product (target nucleic acid) obtained by PCR, and this PCR reaction solution is added to a strip for genetic testing. Expand. That is, the PCR reaction solution is infiltrated into the development start region in the strip. The PCR reaction solution is developed from the development start region to the detection region. When an amplification product having a base sequence complementary to the probe immobilized on the detection region is contained in the PCR reaction solution, the probe and the amplification product are hybridized.
  • amplification products that hybridize to each probe are obtained by multiplex PCR and included in the PCR reaction solution.
  • the corresponding probe and the amplified product are hybridized.
  • the target nucleic acid can be detected by confirming the colored line on the strip.
  • a PCR reaction solution containing an amplification product (target nucleic acid) obtained by PCR is used as a strip for genetic testing.
  • a chromatographic developing solution mixed with a staining solution containing a labeling dye can be developed on a strip for genetic testing. That is, in the above-described protocol, the solution is developed in one stage, but in this protocol, the solution is developed in two stages.
  • a PCR reaction solution containing an amplification product (target nucleic acid) obtained by PCR is developed on a strip for genetic testing.
  • the amount of the PCR reaction solution is small, it may be developed after adding the chromatography developing solution.
  • the PCR reaction solution is infiltrated into the development start region in the strip.
  • the PCR reaction solution is developed from the development start region to the detection region.
  • amplification products that hybridize to each probe are obtained by multiplex PCR and included in the PCR reaction solution.
  • the corresponding probe and the amplified product are hybridized.
  • the development start region of the genetic test strip is soaked with a chromatographic development solution mixed with a staining solution containing a labeling dye.
  • This chromatographic developing solution is preferably soaked after the PCR reaction solution is sufficiently developed in the detection region.
  • the chromatography developing solution is preferably soaked into the development start region after, for example, about 5 to 10 minutes have elapsed after the PCR reaction solution has been developed into the detection region.
  • a chromatographic development solution containing a labeling dye is later developed on the strip to obtain a probe and Coloring can be performed on the hybridized amplification product. For this reason, a colored line can be obtained stably and detection accuracy can be improved.
  • FIG. 10 is a diagram showing a method for using the nucleic acid chromatography test instrument according to the first embodiment
  • FIG. 11 is a diagram showing a method for using the nucleic acid chromatography test instrument according to the second embodiment.
  • the opening / closing mechanism of the nucleic acid chromatography test instrument is opened, and the strip is inserted into the main body from above. Then, as shown in FIGS. 10 (2), 11 (2), 10 (3), and 11 (3), the opening / closing mechanism is operated with the upper end of the strip aligned with the concave end in the main body. Close and secure the strip within the body. At this time, the lower end of the strip protrudes from the lower opening of the main body.
  • the opened PCR tube is loaded with a chromatography developing solution and a staining solution containing a labeling dye. Added. At this time, the labeling dye binds to the target nucleic acid in the PCR reaction solution. Then, as shown in FIGS. 10 (5), 11 (5), 10 (6), and 11 (6), the sealing portion (main body portion) of the nucleic acid chromatography test instrument is placed at the opening of the PCR tube. Insert and fit and immerse the lower end of the strip in the PCR reaction.
  • the nucleic acid chromatography test instrument serves as a stopper for the PCR tube, and the space formed in the nucleic acid chromatography test instrument and the PCR tube is sealed.
  • the PCR reaction solution is developed on the strip, and the target nucleic acid is hybridized with a probe having a complementary base sequence immobilized on the strip.
  • FIG. 10 (5) and FIG. 11 (5) As shown in FIGS. 10 (6) and 11 (6), the sealing portion of the nucleic acid chromatography test instrument is fitted into the opening of the PCR tube, and the lower end of the strip is immersed in the PCR reaction solution. At this time, the nucleic acid chromatography test instrument serves as a stopper for the PCR tube, and the space formed in the nucleic acid chromatography test instrument and the PCR tube is sealed. As a result, the PCR reaction solution is developed on the strip, and the target nucleic acid is hybridized with a probe having a complementary base sequence immobilized on the strip.
  • the sealing part of the nucleic acid chromatography test instrument is removed from the opening of the PCR tube, and as shown in FIGS. 10 (4) and 11 (4), the chromatography developing solution and the labeling dye are placed in the PCR tube. (Or a chromatographic developing solution in which a staining solution containing a labeling dye is mixed) is added.
  • a separate PCR tube other than the PCR tube containing the PCR reaction solution described above may be used.
  • the sealing portion of the nucleic acid chromatography test instrument is fitted into the opening of the PCR tube.
  • the lower end of the strip is immersed in a chromatography developing solution (including a staining solution).
  • the chromatographic developing solution is developed on the strip, and the labeling dye is bound to the target nucleic acid.
  • the target nucleic acid is detected by detecting the labeling dye bound to the target nucleic acid. That is, when the target nucleic acid to which the labeling dye is bound is hybridized with the probe, a colored line appears at the position where the probe is immobilized.
  • the target nucleic acid is detected by checking the colored line on the strip by visual observation or photographing. In order to prevent condensation from occurring in the nucleic acid chromatography test instrument and making it difficult to observe the line, it is preferable to perform the test in an incubator. Then, after the nucleic acid chromatography test is performed, the nucleic acid chromatography test instrument is discarded in a state of being fitted into the PCR tube.
  • the nucleic acid chromatography test instrument is fitted into the PCR tube, and the strip and the PCR reaction solution are placed in the nucleic acid chromatography test instrument and the PCR tube.
  • the target nucleic acid can be detected in a sealed state, and the test instrument can be discarded as it is. For this reason, when performing nucleic acid chromatography, contamination due to volatilization of the reaction solution and contact with the strip during development on the strip can be prevented, and further contamination due to disposal of the inspection instrument can be prevented appropriately. It is possible.
  • the main body 10 of the nucleic acid chromatography test instrument shown in FIG. 1 is formed using polypropylene having different contents of the antifogging agent and the clear nucleating agent, and strips are formed according to the procedures shown in FIGS. 10 (1) to (3).
  • Samples 1 to 4 were prepared in which was inserted and fixed. For sample 1, polypropylene containing no antifogging agent or clear nucleating agent was used. Sample 2 was polypropylene prepared to contain an antifogging agent at 1.2% by mass. For sample 3, polypropylene prepared to contain 1.2% by mass of the antifogging agent and 0.4% by mass of the transparent nucleating agent was used.
  • Sample 4 used was polypropylene prepared so as to contain an antifogging agent at 2.4% by mass and a transparent nucleating agent at 0.4% by mass.
  • the following polypropylene, antifogging agent, and transparent nucleating agent were used.
  • Polypropylene “K4535 (Random PP, MFR35)” manufactured by FORMOSA CHEMICALS & FIBER CORPORATION
  • Anti-fogging agent “KAF-0730P (glycerin fatty acid ester)” manufactured by Kemfar Corp.
  • Transparent nucleating agent “PP Transparent Crystal Nuclei” manufactured by JimShin Trading Co., Ltd.
  • FIG. 12 is a photograph showing the results of this example, in which sample 1, sample 2, sample 3, and sample 4 are arranged in this order from the left.
  • the present invention has been described with reference to the preferred embodiment, it is needless to say that the present invention is not limited to the above-described embodiment, and various modifications can be made within the scope of the present invention.
  • the shape of the nucleic acid chromatography test instrument is not limited to that shown in FIGS. 1 to 9, and can be appropriately changed to other shapes as long as it has the same function.
  • the contents of the documents described in this specification and the specification of the Japanese application that is the basis of Paris priority of the present application are all incorporated herein.
  • the present invention is suitably used for performing nucleic acid chromatography in order to prevent contamination due to volatilization of reaction solution or contact with the strip during development on the strip, and contamination due to disposal of the inspection instrument. It is possible.

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Abstract

遺伝子検査用のストリップ２０により標的核酸を検出するために用いられる核酸クロマトグラフィー検査器具であって、ストリップを挿入可能で一方の端部が開口した筒状部材からなり、かつ、ストリップを固定するためのストリップ固定部を有する本体部１０を備え、本体部が、核酸を含む溶液の収容された容器３０の開口部に嵌合して、本体部と容器の内部に密閉空間を形成させる封止部１０６を有し、本体部を容器の開口部に嵌合させた状態で、ストリップの一方の端部が、容器内に位置する核酸クロマトグラフィー検査器具により核酸クロマト法を行うことによって、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することを可能とする。

Description

核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法
　本発明は、核酸クロマトグラフィー技術に関し、特に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて標的核酸を検出する核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法に関する。
　従来、核酸クロマト法を行うにあたっては、一般的に、プローブが固定化された遺伝子検査用のストリップを用いて、標的核酸をストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズ（相補的に結合）させることによって、検出が行われていた。
　具体的には、例えば、検査対象の試料からゲノムＤＮＡを抽出し、ＰＣＲ（polymerase chain reaction）法などにより標的核酸を増幅して得られた増幅産物を含む反応液に遺伝子検査用ストリップを浸漬して、増幅産物をストリップに展開させてプローブとハイブリダイズさせ、プローブとハイブリダイズした増幅産物に結合する標識用色素を目視で確認することによって、標的核酸の検出が行われていた。
　このとき、抽出したゲノムＤＮＡをＰＣＲ反応試薬と共にＰＣＲチューブに入れてＰＣＲを行った後、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をＰＣＲチューブに混合して、増幅産物の着色が行われていた。そして、このＰＣＲチューブ内の反応液に遺伝子検査ストリップを浸漬して、反応液を毛細管現象によってストリップに展開させ、ストリップに固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物により示される着色されたラインを確認することが行われていた。
　このような核酸クロマト法は、例えば、特許文献１に記載の検体検査用具を用いて行うことができる。すなわち、このような検体検査用具（遺伝子検査ストリップなど）を用いれば、一般に小型で逆円錐形状であるＰＣＲチューブに挿入する場合でも適用することが可能とされている。
特開２０１０－１４５０７号公報 特表２０１５－５１２２５０号公報
　しかしながら、このような検体検査用具をＰＣＲチューブに挿入して、核酸クロマト法を行う場合、増幅産物のストリップへの展開が、開放形で行われることから、コンタミネーションの虞があるという問題があった。
　コンタミネーションの虞としては、具体的には次の４つの場合が考えられ、手指、他の検体、実験器具、作業服、環境などのコンタミネーションが発生すると実験結果に悪影響を与える可能性がある。
（１）ＰＣＲチューブの開封時に、反応液が飛散する場合
（２）ストリップへの展開時に、反応液の揮発によって飛散する場合
（３）ストリップへの展開時に、手指や他のストリップへの接触が生じる場合
（４）検査終了後に、検査器具の廃棄によって飛散する場合
　これらの中でも特に（４）の検査器具の廃棄によるコンタミネーションは、大きな悪影響を及ぼすと考えられることから、近年最も問題となっている。
　ここで、コンタミネーションを抑制するための技術として、特許文献２に記載の分析物検出デバイスを挙げることができる。このデバイスによれば、準密閉系となるように構成されたデバイス内において、増幅産物をストリップに展開させることが可能とされている。
　具体的には、液体サンプルが入った容器をデバイスの空洞に挿入することで、容器の下部が穿孔されて容器内のサンプルが放出されてストリップに到達し、展開されるようになっている。
　しかしながら、このような容器の下部を穿孔する方法では、穿孔がうまくいかない場合には、容器内のサンプルをストリップに適切に展開できないという問題があった。
　また、完全な密閉系ではないため、検査器具の廃棄によるコンタミネーションが生じる可能性があるという問題もあった。
　そこで、本発明者らは、鋭意研究して、上記の４つのコンタミネーションの虞のうち、（２）～（４）を解消可能な核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具を開発することに成功し、本発明を完成させた。なお、（１）は、所定の方法で抑止できるが、これについては後述する。
　すなわち、本発明は、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することが可能な核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の提供を目的とする。
　上記課題を解決するために、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具は、遺伝子検査用のストリップにより標的核酸を検出するために用いられる核酸クロマトグラフィー検査器具であって、前記ストリップを挿入可能で一方の端部が開口した筒状部材からなり、かつ、前記ストリップを固定するためのストリップ固定部を有する本体部を備え、前記本体部が、核酸を含む溶液の収容された容器の開口部に嵌合して前記本体部と前記容器の内部に密閉空間を形成させる封止部を有し、前記本体部を前記容器の開口部に嵌合させた状態で、前記ストリップの一方の端部が、前記容器内に位置する構成としてある。
　また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具は、遺伝子検査用のストリップにより標的核酸を検出するために用いられる核酸クロマトグラフィー検査器具であって、前記ストリップがラミネートフィルム加工されてなるストリップ部と、核酸を含む溶液の収容された容器の開口部に嵌合して前記容器の内部に密閉空間を形成させる封止部とを有する本体部を備え、前記本体部を前記容器の開口部に嵌合させた状態で、前記ストリップの一方の端部が、前記容器内に位置する構成としてある。
　また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査用キットは、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具と、少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液と、を含む構成としてある。標識用色素を含む染色液は、クロマトグラフィー展開液に混合されていてもよい。
　また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを前記反応液に添加し、前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記本体部を前記チューブに嵌合させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、標的核酸に結合した前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、前記本体部が前記チューブに嵌合した状態で、前記本体部、前記ストリップ、及び前記チューブを廃棄する方法としてある。
　また、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法は、上記の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記本体部を前記チューブに嵌合させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、前記本体部を前記チューブから取り外し、前記チューブにクロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液とを注入し、前記本体部を前記チューブに嵌合させ、前記展開液を前記ストリップに展開させて、前記展開液中の標識用色素をプローブに結合した標的核酸に結合させて、前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、前記本体部が前記チューブに嵌合した状態で、前記本体部、前記ストリップ、及び前記チューブを廃棄する方法としてある。
　本発明によれば、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止することが可能となる。
本発明の第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の外観を示す斜視図である。 本発明の第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の開閉機構を開放した状態の正面図及び右側面図、並びにストリップを示す図である。 本発明の第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の開閉機構を閉鎖した状態の正面図及び右側面図である。 本発明の第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具をチューブに嵌合させた状態を示す正面図及び右側面図である。 本発明の第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の外観を示す斜視図である。 本発明の第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の開閉機構を開放した状態の正面図、右側面図、左側面図、背面図、平面図及び底面図を示す図である。 本発明の第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の開閉機構を閉鎖した状態の正面図及び右側面図である。 本発明の第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具をチューブに嵌合させた状態を示す正面図及び右側面図である。 本発明の第三実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の左側面図、正面図及びチューブに嵌合させた状態を示す正面図である。 本発明の第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法を示す図である。 本発明の第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法を示す図である。 実施例の評価結果を示す写真である。
　以下、本発明の核酸クロマトグラフィー検査器具、核酸クロマトグラフィー検査用キット、及び核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法の好ましい実施形態について、図面を参照して説明する。
［核酸クロマトグラフィー検査器具／第一実施形態］
　まず、図１～図４を参照して、本発明の第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具について説明する。
　本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、図１に示すように、ストリップ２０を挿入可能でかつ一方の端部が開口した筒状部材からなる本体部１０を備えている。
　本体部１０は、遺伝子検査用のストリップ２０を固定するためのストリップ固定部を有しており、図２において、ストリップ固定部は、ストリップ２０を挟んで固定する押さえ部１０１からなっている。
　なお、ストリップ固定部１０１は、このような押さえ部１０１に限定されず、ストリップ２０を固定可能であれば良い。例えば、挟み込み、差し込み、接着、溶着、テープ止め、ピン止め、ストリップに穴を開けて吊す等の方法により、ストリップ２０を本体部１０に固定することができる。
　また、本体部１０は、その内部を開放又は閉鎖する、ストリップ２０を挿入可能にするための開閉機構１０２（図２においては、ヒンジ）を有することが好ましい。開閉機構１０２を閉じた状態にすることで、ストリップ２０が押さえ部１０１によって固定されるようになっている。
　具体的には、図２に示すように、第一の蓋部がヒンジを介して第二の蓋部と縦並びに配置され、開閉機構１０２の上側に配置された第一の蓋部の内側壁面上に押さえ部１０１が備えられている。第一の蓋部をヒンジを支点にして１８０°回動させて第一の蓋部の内側壁面を、開閉機構１０２の下側に配置された第二の蓋部の内側壁面に面接触させて、押さえ部１０１によりストリップ２０を押さえて固定する。本体部１０にはストリップ２０が配置される溝Ｇが形成されており、この溝Ｇにストリップ２０が配置されると共に、押さえ部１０１はこの溝Ｇ内でストリップ２０を押さえて固定する位置に配置されている。このため、開閉機構１０２を閉じた状態において、第一の蓋部の内側壁面と第二の蓋部の内側壁面とは面接触するようになっている。
　また、本体部１０は、開閉機構１０２を閉じた状態で維持する係止部１０３を備えている。図２において、開閉機構１０２の上側に配置された第一の蓋部の内側壁面に係止部１０３－１ａ（嵌合ピン穴）が備えられ、開閉機構１０２の下側に配置された第二の蓋部の内側壁面に係止部１０３－２ａ（嵌合ピン）が備えられている。第一の蓋部をヒンジにより１８０°回動させて、嵌合ピン穴１０３－１ａに嵌合ピン１０３－２ａを挿入し、第一の蓋部を第二の蓋部に係止できるようになっている。このとき、第一の蓋部の内側壁面と第二の蓋部の内側壁面とは密着し、開閉機構１０２によって開放可能な開口を密閉できる。
　第一の蓋部の外側壁面と第二の蓋部の外側壁面には、滑り止め１０４が備えられている。これによって、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具を、核酸を含む溶液の収容された容器（例えばＰＣＲチューブ。以下、ＰＣＲチューブと称する場合がある。）に嵌合させる操作や、その確実な押込みなどを行い易くなっている。
　また、図２、図３に示すように、第一の蓋部と第二の蓋部における開閉機構１０２の反対側の端部には勾配が形成され、開閉機構１０２を閉じた状態においてこれら端部の勾配が面接触している。これにより、開閉機構１０２を開閉し易くすることができ、また開閉機構１０２によって開放可能な開口の密閉性を向上させることが可能になっている。
　開閉機構１０２は、図２、図３においては、縦方向（本体部の筒状部材の軸方向）に開閉する構成としてあるが、これに限定されず、横方向などに開閉するものであっても良い。
　なお、開閉機構１０２を横方向に開閉する構成の具体的な態様については、第二実施形態として後述する。
　開閉機構１０２を縦方向に開閉する構成とすれば、例えば、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具八個を側面方向に連続して一体に備えたものを製造できるため好ましい。この場合、各開閉機構１０２を容易かつ同時に開閉可能なものとすることができる。また、このように八個を側面方向に連続して一体に備えられた核酸クロマトグラフィー検査器具を用いれば、既存の八連式ＰＣＲチューブを用いて、同時に８サンプルについて核酸クロマトグラフィー検査を行うことができ、検査効率を向上させることが可能である。
　なお、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具において、開閉機構１０２と第一の蓋部及び第二の蓋部とを備えない構成にすることもできる。この場合、ストリップ２０は、本体部１０の下部開口部から差し込まれ、上述したその他の方法、例えば、挟み込み、差し込み、接着等により固定することができる。
　さらに、本体部１０は、ストリップ２０を位置決めするための凹端部１０５を本体部１０の内部に備えている。すなわち、開閉機構１０２の下側に配置された第二の蓋部の内側壁面には、ストリップ２０を配置するための溝Ｇが備えられており、この溝Ｇの上端部が、ストリップ２０を位置決めするための凹端部１０５となっている。なお、この溝の下方は、本体部１０の筒状部材の開口に延びている。
　ストリップ２０の長さは、凹端部１０５から本体部１０の下端までの長さよりも長い。このため、本体部１０をＰＣＲチューブ３０の開口部に嵌合させた状態で、ストリップ２０の一方の端部（図１においては下端）が、ＰＣＲチューブ３０内に位置するようになっている。
　これによって、ストリップ２０の展開開始領域２０１が、ＰＣＲチューブ３０内におけるＰＣＲ反応液に浸漬又は接触する。
　なお、ストリップ２０が固定して備えられた状態で核酸クロマトグラフィー検査器具を供給する場合には、特に図示しないが、本体部１０の下部開口から外部に突出しているストリップ２０の端部を保護するために、例えば、ＰＣＲチューブ３０と同様の形状の保護キャップを封止部１０６に装着することができる。
　ストリップ２０は、その上端縁を凹端部１０５に突き当てることによって位置決めがなされ、ストリップ２０の吸水促進領域２０３が押さえ部材１０１に押えられた状態で溝Ｇ内に固定される。このとき、ストリップ２０の検出領域２０２が溝Ｇに密着していると、展開開始領域２０１から検出領域２０２に展開してきたＰＣＲ反応液などが、検出領域２０２と溝Ｇとの界面に発現する毛細管現象によって、溝Ｇ側に浸み出して吸い上げられてしまい、標的核酸が検出できなくなってしまう虞がある。
　したがって、ストリップ２０は、本体部１０に対して検出領域２０２が非接触で固定して備えられているのが好ましい。このため、本実施形態では、吸水促進領域２０３と検出領域２０２との境界が位置する部位（図２の右側面図に矢印で示す部位）を起点として、本体部１０の筒状部材の開口に向かって溝Ｇが徐々に深くなるようにして、ストリップ２０の検出領域２０２から下方の領域が本体部１０に接触しないようにしている。
　本体部１０は、ＰＣＲチューブ３０の開口部に嵌合して、本体部１０とＰＣＲチューブ３０の内部に密閉空間を形成させる封止部１０６を有している。封止部１０６は、本体部１０の下端に位置し、開口を備えている。
　具体的には、本体部１０をＰＣＲチューブ３０に挿入して嵌合させる場合、封止部１０６の開口の外周は、ＰＣＲチューブ３０の開口部の内周と同一の形状に形成される。また、本体部１０をＰＣＲチューブ３０に被せて嵌合させる場合、封止部１０６の開口の内周は、ＰＣＲチューブ３０の開口部の外周と同一の形状に形成される。なお、ＰＣＲチューブ３０の蓋を接続する部分に対応する封止部１０６の領域には、切り欠きを形成することができる。
　なお、本体部１０とＰＣＲチューブ３０などの容器による嵌合の具体的な態様は、上記のような面接触に限定されず、例えば、嵌め込み又はネジにより嵌合する構成にすることもできる。
　また、本体部１０は、ＰＣＲチューブ３０の開口部に嵌合させた状態における、本体部１０とＰＣＲチューブ３０の相対的押込量を規定する押込量規定部１０７を備えている。押込量規定部１０７によって、本体部１０のＰＣＲチューブ３０に対する押込量を一定の値に設定することができる。
　また、押込量規定部１０７によって、本体部１０をＰＣＲチューブ３０の開口部に嵌合させた状態において、一定の押込量を確実に得られるようにすることができる。また、押込が浅い場合に生じ得る液漏れを防止できると共に、ストリップ２０の先端を確実に溶液に到達させて展開を確実とし、さらにストリップ２０の先端がＰＣＲチューブ３０の底に到達してつぶれることを防止できるなどの効果を得ることが可能になっている。
　押込量規定部１０７は、図２～４において、封止部１０６の側面の二箇所に、略直方体形状の突出部として対称に形成されているが、これに限定されるものではなく、押込量を一定の値に設定できればその他の構成としても良い。例えば、封止部１０６の側面の三箇所以上に突出部として形成しても良く、また、封止部１０６の周りを囲む一個の突出部として形成しても良い。
　また、本体部１０をＰＣＲチューブ３０に被せて嵌合させる場合、押込量規定部１０７は、封止部１０６の開口部の内面に上記突出部として形成することができる。
　さらに、本体部１０は、ストリップ２０を本体部１０内に固定した状態において、ストリップ２０の検出領域２０２に対して平行な平面部１０８を備えることが好ましい。本体部１０をこのような構成にすれば、検査結果をより視認し易く、またＣＣＤカメラなどの撮影手段によってストリップ２０の検出領域を自動的に撮影する場合には、その撮影をより確実に行うことが可能となる。
　また、平面部１０８において、ストリップ２０の検出領域２０２のラインの形成位置に対応する位置に、検査対象の微生物名などの説明を記載又は貼付等することにより表示させることも好ましい。このようにすれば、核酸クロマトグラフィー検査を一層容易に実施可能にすることができる。
　本体部１０は、全部透明であっても、一部が透明であっても良く、少なくとも本体部１０の外部から本体部１０内のストリップ２０の検出領域２０２に示される検査結果を視認可能であれば良い。なお、コストや成形の観点からは、全部透明であることが好ましい。なお、「透明」には、無色透明の他、有色透明も含まれ、光を透過可能であることを意味する。
　このような透明部材としては、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネート、ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）、メチルメタクリレート（ＭＭＡ）などのアクリル樹脂、ポリエチレン、高密度ポリエチレン（ＨＤＰＥ）、ポリプロピレン、環状オレフィンなどのオレフィン系樹脂等を好適に用いることができる。
　これらのなかでも、容器本体１０とストリップ２０とが接触する界面にＰＣＲ反応液などが浸み出してしまうのを抑制する上で、ＰＣＲ反応液などに対する濡れ性が低い無極性樹脂であるポリオレフィン系樹脂が好ましく、樹脂の硬さや成形性からポリプロピレンが特に好ましい。
　また、本体部１０の内面が曇り、検査結果が視認しづらくなることを防ぐために、本体部１０の内面を、防曇処理を施したものとすることも好ましい。このような防曇処理は、本体部１０の内面への紫外線硬化型防曇塗料の塗布や防曇処理フィルムの貼付等により行うことができる。また、本体部１０又は本体部１０の少なくとも内面を、防曇剤を含有する樹脂を用いて成形することもできる。
　防曇剤としては、例えば、グリセリンモノオレート，グリセリンラウレート，グリセリンカプレート，ジグリセリンオレート，ジグリセリンラウレート，トリグリセリンオレート等のグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコール、ポリエチレングリコールオレート，ポリエチレングリコールラウレート等のポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどが挙げられる。
　防曇剤を添加するにあたり、その添加量は０．１～５質量％であるのが好ましく、より好ましくは１．２～２．４質量％である。防曇剤の添加量が０．１質量％に満たないと、防曇剤を添加したことによる改善効果が十分に得られない傾向がある。一方、防曇剤の添加量が５質量％を超えると、それ以上の改善効果が認められず、また、容器本体１０の透明性の低下や、ブリード量が多くなることによる金型清掃頻度の増加、ベント詰まりの発生につながり、連続成形性が低下する傾向がある。
　容器本体１０の透明性を高めるには、透明核剤を添加するのも有効である。透明核剤としては、リン酸エステル金属塩、ピメリン酸金属塩、ロジン金属塩、ベンジリデンソルビトール、キナクリドン、シアニンブルー、タルクなどが挙げられる。
　透明核剤を添加するにあたり、その添加量は０．１～１０質量％であるのが好ましい。透明核剤の添加量が０．１質量％に満たないと、透明核剤を添加したことによる改善効果が十分に得られない傾向がある。一方、透明核剤の添加量が１０質量％を超えると、それ以上の改善効果が認められず、臭気を発したり、ブリードアウトして表面物性に悪影響を与えたりしてしまう傾向がある。
　ストリップ２０は、増幅産物を捕捉するためのプローブが固定化された細長の部材であり、液体が毛細管現象によって部材全体に浸透し、展開しやすいように形成される。このため、ストリップの部材としてはセルロースメンブランなどのセルロース等が好適に用いられる。また、ストリップに強度を持たせて取り扱いを容易にするために、その一方の面に樹脂シート（又はフィルム）を接着したものを用いても良い。
　ストリップ２０には、ＰＣＲ反応液などを浸透させ（染み込ませ）、展開させ始める部分である展開開始領域２０１と、一又は二以上のプローブが、ストリップの特定の位置において、ストリップの短手方向にライン状に固定化された検出領域２０２と、液体をストリップに染み込み易くさせるための吸水促進領域２０３とが、この順に連続して形成されている。
　展開開始領域２０１は、ＰＣＲ反応液などを最初に染み込ませる部分である。展開開始領域２０１は、検出領域２０２に隣接して連続して形成されており、展開開始領域２０１に染み込んだ液体は、毛細管現象によって検出領域２０２へ展開する。
　なお、核酸を含む溶液の収容された容器が浅底のものである場合などには、展開開始領域２０１がストリップ２０におけるごく僅かな部分である場合もあり得る。
　検出領域２０２には、プローブが固定化された一又は二以上の領域（スポット）がストリップ２０の短手方向にライン状に形成（スポッティング）されている。このプローブが固定化されたラインの数は、特に限定されず、例えば１～１５個、好適には８～１２個等のラインが形成されたものなどを用いることができる。
　このようなライン状に固定化されたプローブにハイブリダイズした増幅産物に対して、例えば青色の標識用色素が結合すると、検出領域２０２上において、青色のラインを目視によって検出できる。また、検出領域２０２には、プローブが固定化されたラインの位置を明確に確認できるようにするために、その他の色のライン、例えば赤色のラインが、位置決めマーカーとして好適に配置される。標識用色素は、特に限定されないが、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものを好適に用いることができる。
　吸水促進領域２０３は、展開開始領域２０１と反対側の検出領域２０２に隣接して連続して形成される。吸水促進領域２０３は、例えばストリップ２０上に吸水パッドやセルロース等の部材を積層して構成でき、このような吸水部材によってストリップ２０に展開した水分の吸水を促進させることができる。また、このようにストリップ２０に部材を積層して厚みを増加させた領域を形成することによって、ストリップ２０をより取り扱い易くすることもできる。
　さらに、吸水促進領域２０３を吸湿性を有するものとすることも好ましい。このように吸水促進領域２０３を吸湿性を有するものとすれば、本体部１０とＰＣＲチューブ３０内に形成された密閉空間内の湿度を低減でき、本体部１０の内面に結露が生じて観察ができなくなることを抑制することが可能となる。このような観点から、吸水促進領域２０３に乾燥剤等の部材を積層することも好ましい。
　なお、ストリップ２０において、吸水促進領域２０３を省略することもできる。
［核酸クロマトグラフィー検査器具／第二実施形態］
　次に、図５～図８を参照して、本発明の第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具について説明する。
　上述した第一実施形態では、開閉機構１０２を縦方向に開閉する構成とした。本実施形態では、開閉機構１０２を横方向に開閉する構成とした点が第一実施形態と異なっている。
　具体的には、第一実施形態では、図２に示すように、第一の蓋部がヒンジを介して第二の蓋部と縦並びに配置されて、第一の蓋部をヒンジを支点に縦方向に回動させて開閉するのに対して、本実施形態では、図６に示すように、第一の蓋部がヒンジを介して第二の蓋部と横並びに配置されて、第一の蓋部をヒンジを支点に横方向に回動させて開閉するように構成されている。
　なお、図６には、図面の左側から背面図、左側面図、正面図、右側面図を示し、背面図の上に平面図、正面図の下に底面図を示している。
　そして、開閉機構１０２を閉じた状態で維持する係止部１０３として、第一の蓋部の内側壁面に係止部１０３－１ｂ（嵌合爪）が備えられ、第二の蓋部の内側壁面に係止部１０３－２ｂ（嵌合切り欠き部）が備えられている。第一の蓋部をヒンジにより１８０°回動させて、嵌合爪１０３－１ｂを嵌合切り欠き部１０３－２に嵌入し、第一の蓋部を第二の蓋部に係止できるようになっている。
　このようにして、開閉機構１０２を横方向に開閉する構成とすれば、縦方向におけるストロークが小さくなり、小型インキュベータや小型クリーンベンチ内での作業性を向上させることが可能となる。
　本実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具は、上記の点で第一実施形態と異なっているが、他の構成は第一実施形態と共通する。このため、図５～図８において、第一実施形態と共通する構成には同一の符号を付して、重複する説明は省略する。
［核酸クロマトグラフィー検査器具／第三実施形態］
　次に、本発明の第三実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具について、図９を参照して説明する。
　本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具は、ストリップ２０ａがラミネートフィルム加工されてなるストリップ部１１０ａと、核酸を含む溶液の収容された容器（ＰＣＲチューブ３０など。以下、ＰＣＲチューブ３０と称する。）の開口部に嵌合して、ＰＣＲチューブ３０の内部に密閉空間を形成させる封止部１０６ａとを有する本体部１０ａを備えている。
　封止部１０６ａは、ストリップ部１１０ａを挿入して固定するストリップ支持部１０９ａを備えている。ストリップ支持部１０９ａは、封止部１０６ａの上部にスリットとして形成されている。このスリットは、ストリップ部１１０ａの厚み及び横幅と同一又はそれより若干小さいサイズを備え、かつ所定の深さを有する溝である。後述するように、本体部１０ａが弾性を有する樹脂からなる場合、ストリップ部１１０ａの厚みはほぼゼロであり、スリット壁面同士は密着している。このスリットにストリップ部１１０ａの下部を挿入することで、ストリップ部１１０ａをスリットに密着させ、直立させて支持することができる。
　封止部１０６ａの下部は、ＰＣＲチューブ３０に挿入される栓の役割を果たす。したがって、封止部１０６ａの下部の外周は、ＰＣＲチューブ３０の開口部の内周と同一の形状に形成される。封止部１０６ａの底面は、平面であってよく、凹部又は凸部が形成されていてもよい。
　また、封止部１０６ａは、封止部１０６ａをＰＣＲチューブ３０の開口部に嵌合させた状態における、封止部１０６ａとＰＣＲチューブ３０の相対的押込量を規定する押込量規定部１０７ａを備えている。この押込量規定部１０７ａによって、本体部１０ａのＰＣＲチューブ３０に対する押込量を一定の値に設定することができる。
　押込量規定部１０７ａは、図５において、封止部１０６ａの側面の二箇所に、略直方体形状の突出部として対称に形成されているが、これに限定されるものではなく、押込量を一定の値に設定できればその他の構成としても良い。例えば、封止部１０６ａの側面の三箇所以上に突出部として形成しても良く、また、封止部１０６ａの周りを囲む一個の突出部として形成しても良い。
　また、封止部１０６ａをＰＣＲチューブ３０に被せて嵌合させる構成とすることもできる。この場合、封止部１０６ａの下部にはＰＣＲチューブ３０の開口部の外周と同一の形状の内周を有する開口が形成される。なお、ＰＣＲチューブ３０の蓋を接続する部分に対応する封止部１０６ａの領域には、切り欠きを形成することができる。
　封止部１０６ａをＰＣＲチューブ３０に被せて嵌合させる場合、押込量規定部１０７ａは、封止部１０６ａの開口部の内面に上記突出部として形成することができる。また、このような押込量規定部１０７ａを省略して、封止部１０６ａの開口部の上面を押込量規定部として用いることもできる。
　封止部１０６ａは、その材料は特に限定されないが、弾性を有する樹脂からなるものとすることが好ましい。例えば、側鎖成分の長い柔軟性のある樹脂ならば何でもよいが、特にゴム類は好適であり、衛生性などの面からシリコンゴムやフッ素ゴム等がより好ましい。これらを用いて封止部１０６ａを形成することができる。
　また、封止部１０６ａをこのように弾性を有する樹脂からなるものとすれば、ストリップ部１１０ａをストリップ支持部１０９ａに挿入して密着させ、容易に適切に支持可能なものとすることができる。また、これによって、封止部１０６ａをＰＣＲチューブ３０に嵌合させた場合の密封度を高めることも可能となる。
　本実施形態において、ストリップ２０ａは、上述した実施形態におけるものと同一のものを使用することができる。具体的には、展開開始部２０１ａ、検出領域２０２ａ、及び吸水促進領域２０３ａを備えたものとすることができ、また吸水促進領域２０３ａを省略した構成とすることもできる。
　ストリップ部１１０ａは、ストリップ２０ａをラミネートフィルム加工することによって、形成することができる。
　本体部１０ａとＰＣＲチューブ３０に対するストリップ２０ａの位置は、ストリップ部１１０ａにおけるストリップ２０ａをラミネートフィルム加工する位置と、ストリップ支持部１０９ａの溝の深さと、押込量規定部１０７ａとにもとづいて、特定の位置に設定することができる。
　ストリップ２０ａの長さは、ストリップ部１１０ａにおいてラミネートフィルム加工されるストリップ２０ａの上端の位置から封止部１０６ａの下端までの長さよりも長い。このため、本体部１０ａをＰＣＲチューブ３０の開口部に嵌合させた状態で、ストリップ２０ａの一方の端部（図５においては下端）が、ＰＣＲチューブ３０内に位置するようになっている。
　これによって、ストリップ２０ａの展開開始領域２０１ａが、ＰＣＲチューブ３０内におけるＰＣＲ反応液に浸漬又は接触する。
　ラミネートフィルムの材料としては、ポリエチレンなどのポリオレフィンやポリスチレン等を好適に用いることができる。ストリップ２０が接するラミネートフィルムの内面材料の親水性が、ストリップを構成するセルロースなどの材料の親水性よりも小さい場合に、溶液の展開を適切に行わせることができるためである。
［核酸クロマトグラフィー検査用キット］
　本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査用キットは、上述した核酸クロマトグラフィー検査器具と、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを含むものとすることが好ましい。標識用色素を含む染色液は、クロマトグラフィー展開液に混合されていてもよい。
　ＰＣＲ用反応試薬としては、例えば、プライマーミックスの他、ＤＮＡポリメラーゼ、核酸合成基質、ＰＣＲバッファー等を含むものを好適に用いることができる。クロマトグラフィー展開液としては、例えば、ＤＮＡ解離剤、尿素等を含むものを好適に用いることができる。染色液としては、標識用色素（着色ビーズ、例えばアビジン・ビオチンシステムによるものなど）、ブロッキング剤、界面活性剤、塩濃度調整バッファー等を含むものを好適に用いることができる。
　このような核酸クロマトグラフィー検査用キットによれば、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを好適に防止することが可能となる。
［核酸クロマト法のプロトコル］
　次に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具に適用可能な核酸クロマト法のプロトコル（第一のプロトコル）について説明するが、本発明は、当該プロトコルでの使用に限定されるものではない。
　核酸クロマト法は、標的核酸が、遺伝子検査用のストリップ内を一定方向に移動（展開）することにより、ストリップにスポッティングされているプローブに補足されるとともに、プローブが固定化されたスポットにおいて標的核酸が濃縮されることで、その標的核酸に結合した標識用色素により目視できるレベルまでの発色を得て、標的核酸を検出するものである。
　まず、標的核酸の増幅処理をＰＣＲ法などによって行う。これによって得られ得る増幅産物は、標的核酸からなる。なお、標的核酸の増幅処理は、ＰＣＲ法に限定されるものではなく、リガーゼ連鎖反応、ＴＭＡ（Transcription Mediated Amplification）、ＮＡＳＢＡ（Nucleic Acid Sequence-Based Amplification）等のその他の方法により行うこともできる。
　具体的には、検査対象生物のゲノムＤＮＡにおける標的核酸を増幅させるためのプライマーセットを含むＰＣＲ反応試薬をＰＣＲチューブへ注入する。プライマーセットとしては、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを用いることができ、複数の標的核酸を同時に増幅するマルチプレックスＰＣＲを行うこともできる。
　また、ＰＣＲ反応試薬には、プライマーセットの他、核酸合成基質（例えば、ｄＮＴＰｍｉｘｔｕｒｅ（dCTP、dATP、dTTP、dGTP））、核酸合成酵素（例えば、ＥＸ　Ｔａｑ　ＨｏｔＳｔａｒｔ　ＤＮＡ　ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ）、緩衝液等が含まれる。
　そして、ＰＣＲチューブには、このようなＰＣＲ反応試薬と、生体試料から抽出されたゲノムＤＮＡ、及び残りの成分として水を含む溶液が注入され、この溶液がＰＣＲに使用する反応液として用いられる。
　ゲノムＤＮＡの抽出は、ＣＴＡＢ法（Cetyl　trimethyl　ammonium　bromide）による方法やＤＮＡ抽出装置を用いる方法など、一般的な手法により行うことができる。
　また、ＰＣＲ装置としては、一般的なサーマルサイクラーなどを用いることができる。ＰＣＲ反応は、例えば以下のような反応条件で行うことができるが、適宜変更して実施可能であり、全体を１５～３０分程度で行っても良い。
（ａ）９５℃　２分、（ｂ）９５℃（ＤＮＡ変性工程）　１０秒、（ｃ）６０℃（アニーリング工程）　２０秒、（ｄ）７２℃（ＤＮＡ合成工程）　９０秒（（ｂ）～（ｄ）を４０サイクル）、（ｅ）７２℃　２分
　次に、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）を含むＰＣＲ反応液に、クロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液とを添加して、このＰＣＲ反応液を遺伝子検査用のストリップに展開させる。
　すなわち、ストリップにおける展開開始領域に対して、ＰＣＲ反応液を染み込ませる。ＰＣＲ反応液は、展開開始領域から検出領域へ展開する。そして、検出領域に固定化されたプローブと相補的な塩基配列を有する増幅産物がＰＣＲ反応液に含まれている場合、そのプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
　また、複数種類のプローブがストリップ上に個別にライン状に固定化され、各プローブにそれぞれハイブリダイズする増幅産物がマルチプレックスＰＣＲにより得られてＰＣＲ反応液に含まれている場合も同様に、それぞれ対応するプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
　また、増幅産物には標識用色素が結合されているため、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。
　このように、ストリップ上の着色されたラインを確認することによって、標的核酸を検出することができる。
　本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具に適用可能な核酸クロマト法の他のプロトコル（第二のプロトコル）として、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）を含むＰＣＲ反応液を遺伝子検査用のストリップに展開した後、標識用色素を含む染色液を混合したクロマトグラフィー展開液を遺伝子検査用のストリップに展開させることもできる。すなわち、上述したプロトコルでは、溶液の展開は一段階で行われるが、このプロトコルでは、溶液の展開は二段階で行われる。
　具体的には、ＰＣＲによって得られた増幅産物（標的核酸）を含むＰＣＲ反応液を、遺伝子検査用のストリップに展開させる。このとき、ＰＣＲ反応液の量が少ない場合には、クロマトグラフィー展開液を追加した後に、展開させてもよい。
　これにより、ストリップにおける展開開始領域に対して、ＰＣＲ反応液を染み込ませる。ＰＣＲ反応液は、展開開始領域から検出領域へ展開する。そして、検出領域に固定化されたプローブと相補的な塩基配列を有する増幅産物がＰＣＲ反応液に含まれている場合、そのプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
　また、複数種類のプローブがストリップ上に個別にライン状に固定化され、各プローブにそれぞれハイブリダイズする増幅産物がマルチプレックスＰＣＲにより得られてＰＣＲ反応液に含まれている場合も同様に、それぞれ対応するプローブと増幅産物がハイブリダイズする。
　次に、遺伝子検査ストリップの展開開始領域に対して、標識用色素を含む染色液を混合したクロマトグラフィー展開液を染み込ませる。このクロマトグラフィー展開液は、ＰＣＲ反応液が検出領域に十分に展開した後に染みこませることが望ましい。このクロマトグラフィー展開液を展開開始領域へ染み込ませるのは、ＰＣＲ反応液が検出領域へ展開した後、例えば５～１０分程度経過した後に、行うことが好ましい。
　このような核酸クロマト法の他のプロトコルによれば、増幅産物を含むＰＣＲ反応液を先にストリップに展開した後に、標識用色素を含むクロマトグラフィー展開液をストリップに後から展開して、プローブとハイブリダイズした増幅産物に対して着色を行うことができる。このため、着色されたラインを安定的に得ることができ、検出精度を向上させることが可能となる。
［核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法］
　次に、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法について、図１０及び図１１を参照して説明する。
　なお、図１０は、第一実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法を示す図であり、図１１は、第二実施形態に係る核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法を示す図である。
　まず、図１０（１）及び図１１（１）に示すように、核酸クロマトグラフィー検査器具の開閉機構を開放して、ストリップを上方から本体部内に挿入する。
　そして、図１０（２）及び図１１（２）、図１０（３）及び図１１（３）に示すように、ストリップの上端部を本体部内の凹端部に合せた状態で、開閉機構を閉じ、ストリップを本体部内で固定する。このとき、ストリップの下端は、本体部の下部開口から外部に突出している。
　また、上述したようにＰＣＲを行い、ＰＣＲ反応液が収容されたＰＣＲチューブの蓋を開放するのに先立って、遠心機などにＰＣＲチューブをセットして、蓋の裏側やＰＣＲチューブの上方内壁についた溶液を振り落として底部に沈降させる。これによって、ＰＣＲチューブの開封時に、反応液が飛散してコンタミネーションが生じることを抑制することが可能である。
　次に、上述した第一のプロトコルで行う場合、図１０（４）及び図１１（４）に示すように、開封したＰＣＲチューブに、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを添加する。このとき、ＰＣＲ反応液内において、標識用色素は、標的核酸に結合する。
　そして、図１０（５）及び図１１（５）、図１０（６）及び図１１（６）に示すように、核酸クロマトグラフィー検査器具の封止部（本体部）をＰＣＲチューブの開口部に挿入して嵌合させ、ストリップの下端をＰＣＲ反応液に浸漬する。このとき、核酸クロマトグラフィー検査器具はＰＣＲチューブの栓の役割を果たし、核酸クロマトグラフィー検査器具及びＰＣＲチューブ内に形成された空間が密封される。
　これにより、ＰＣＲ反応液がストリップに展開して、標的核酸がストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズする。
　また、上述した第二のプロトコルで行う場合、開封したＰＣＲチューブに、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを添加せずに、図１０（５）及び図１１（５）、図１０（６）及び図１１（６）に示すように、核酸クロマトグラフィー検査器具の封止部をＰＣＲチューブの開口部に嵌合させ、ストリップの下端をＰＣＲ反応液に浸漬する。このとき、核酸クロマトグラフィー検査器具はＰＣＲチューブの栓の役割を果たし、核酸クロマトグラフィー検査器具及びＰＣＲチューブ内に形成された空間が密封される。
　これにより、ＰＣＲ反応液がストリップに展開して、標的核酸がストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブとハイブリダイズする。
　次に、核酸クロマトグラフィー検査器具の封止部をＰＣＲチューブの開口部から抜き取り、図１０（４）及び図１１（４）に示すように、ＰＣＲチューブに、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液（又は、標識用色素を含む染色液を混合したクロマトグラフィー展開液）を添加する。なお、このＰＣＲチューブは、上記したＰＣＲ反応液を含むＰＣＲチューブ以外の別個のＰＣＲチューブを用いても良い。
　そして、再度、図１０（５）及び図１１（５）、図１０（６）及び図１１（６）に示すように、核酸クロマトグラフィー検査器具の封止部をＰＣＲチューブの開口部に嵌合させ、ストリップの下端をクロマトグラフィー展開液（染色液を含む）に浸漬する。
　これにより、クロマトグラフィー展開液がストリップに展開して、標識用色素が標的核酸に結合する。
　次に、標的核酸に結合した標識用色素を検出することにより、標的核酸を検出する。
　すなわち、標識用色素が結合した標的核酸が、プローブとハイブリダイズすることによって、プローブが固定化された位置に着色されたラインが現れる。このストリップ上の着色されたラインを目視又は撮影して確認することにより、標的核酸が検出される。
　なお、核酸クロマトグラフィー検査器具内に結露が生じてラインの観察がし難くなることを防止するために、インキュベータ内で検査を実施することが好ましい。
　そして、核酸クロマトグラフィー検査の実施後、核酸クロマトグラフィー検査器具がＰＣＲチューブに嵌合した状態で、これらを廃棄する。
　このように、本実施形態の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法によれば、核酸クロマトグラフィー検査器具がＰＣＲチューブに嵌合して、ストリップとＰＣＲ反応液が核酸クロマトグラフィー検査器具及びＰＣＲチューブ内に密閉された状態で標的核酸を検出でき、当該検査器具をそのまま廃棄することができる。
　このため、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーションを防止でき、さらに検査器具の廃棄によるコンタミネーションを適切に防止することが可能となっている。
［核酸クロマトグラフィー検査器具の作製］
　防曇剤、透明核剤の含有量が異なるポリプロピレンを用いて、図１に示す核酸クロマトグラフィー検査器具の本体部１０を形成し、図１０（１）～（３）に示す手順にしたがって、ストリップを挿入、固定したサンプル１～４を用意した。
　サンプル１には、防曇剤、透明核剤を含有しないポリプロピレンを用いた。
　サンプル２には、防曇剤を１．２質量％で含有するように調製されたポリプロピレンを用いた。
　サンプル３には、防曇剤を１．２質量％で含有し、透明核剤を０．４質量％で含有するように調製されたポリプロピレンを用いた。
　サンプル４には、防曇剤を２．４質量％で含有し、透明核剤を０．４質量％で含有するように調製されたポリプロピレンを用いた。
　なお、本実施例では、次のポリプロピレン、防曇剤、透明核剤を用いた。
・ポリプロピレン：FORMOSA CHEMICALS & FIBRE CORPORATION製「Ｋ４５３５（ランダムＰＰ、ＭＦＲ３５）」
・防曇剤：Kemfar Corp.製「ＫＡＦ－０７３０Ｐ（グリセリン脂肪酸エステル）」
・透明核剤：JimShin Trading Co., Ltd製「ＰＰ透明晶核劑」
［核酸クロマトグラフィー検査］
　調製したＰＣＲ反応液をＰＣＲチューブに規定量封入し、サーマルサイクラーにＰＣＲ反応液入りＰＣＲチューブをセットして、通常行われる条件でＰＣＲ反応を行わせた。
　反応終了後、上記サンプル１～４のそれぞれについて用意したＰＣＲチューブを、５０℃に設定したブロックヒーターに装着し、図１０（４）～（６）に示す手順にしたがって、ＰＣＲチューブの蓋を手で開封し、クロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液を注入し、サンプル１～４をそれぞれＰＣＲチューブに嵌合させ、ストリップの下端をＰＣＲ反応液に浸漬した。そのままの状態で、展開液を加えたＰＣＲ反応液を約３０分程度かけてストリップ内に展開させた後に、検出領域上の検出ラインの視認状況を観察した。
　なお、図１２は、本実施例の結果を示す写真であり、左からサンプル１、サンプル２、サンプル３、サンプル４の順に並べてある。
［評価］
　サンプル１とサンプル２とを比較すると、サンプル２の方が、防曇剤の効果により結露が少ないため、検出ラインをより良好に視認できた。
　サンプル２とサンプル３とを比較すると、サンプル３の方が、透明核剤の効果により透明性が向上したため、検出ラインをより良好に視認できた。
　サンプル３とサンプル４とを比較すると、これらの視認性に大きな変化は認められず、透明核剤の効果により防曇剤の量が増えても視認性が悪化しないことが確認できた。
　以上、本発明について、好ましい実施形態を示して説明したが、本発明は、上記実施形態に限定されるものではなく、本発明の範囲で種々の変更実施が可能であることは言うまでもない。
　例えば、核酸クロマトグラフィー検査器具の形状は、図１～図９に示されたものに限定されず、同じ機能を備えている限り、その他の形状にするなど適宜変更することが可能である。
　この明細書に記載の文献及び本願のパリ優先の基礎となる日本出願明細書の内容を全てここに援用する。
　本発明は、核酸クロマト法を行うにあたって、ストリップへの展開時における反応液の揮発やストリップへの接触が生じることによるコンタミネーション及び検査器具の廃棄によるコンタミネーションを防止するために、好適に利用することが可能である。
　１０、１０ａ　本体部
　１０１　押さえ部（ストリップ固定部）
　１０２　開閉機構
　１０３　係止部
　１０４　滑り止め
　１０５　凹端部
　１０６、１０６ａ　封止部
　１０７、１０７ａ　押込量規定部
　１０８　平面部
　１０９ａ　ストリップ支持部
　１１０ａ　ストリップ部
　２０，２０ａ　ストリップ
　２０１，２０１ａ　展開開始領域
　２０２，２０２ａ　検出領域
　２０３，２０３ａ　吸水促進領域
　３０　ＰＣＲチューブ

Claims (15)

  1. 　遺伝子検査用のストリップにより標的核酸を検出するために用いられる核酸クロマトグラフィー検査器具であって、
    　前記ストリップを挿入可能で一方の端部が開口した筒状部材からなり、かつ、前記ストリップを固定するためのストリップ固定部を有する本体部を備え、
    　前記本体部が、核酸を含む溶液の収容された容器の開口部に嵌合して前記本体部と前記容器の内部に密閉空間を形成させる封止部を有し、
    　前記本体部を前記容器の開口部に嵌合させた状態で、前記ストリップの一方の端部が、前記容器内に位置する
    　ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具。
  2. 　前記ストリップ固定部が、前記ストリップを挟んで固定する押さえ部からなることを特徴とする請求項１記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  3. 　前記本体部が、前記本体部内を開放又は閉鎖する、前記ストリップを挿入可能にするための開閉機構を有し、前記開閉機構を閉じた状態で、前記押さえ部により前記ストリップが固定されることを特徴とする請求項２記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  4. 　前記本体部が、前記開閉機構を閉じた状態で維持する係止部を備えたことを特徴とする請求項３記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  5. 　前記本体部が、前記ストリップを位置決めするための凹端部を前記本体部内に備え、前記ストリップの長さが、前記凹端部から前記本体部下端までの長さよりも長いことを特徴とする請求項１～４のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  6. 　前記本体部が、前記容器の開口部に嵌合させた状態における、前記本体部と前記容器の相対的押込量を規定する押込量規定部を備えたことを特徴とする請求項１～５のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  7. 　前記本体部が、前記ストリップの検出領域に対して平行な平面部を備えたことを特徴とする請求項１～６のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  8. 　前記本体部又は前記本体部の少なくとも内面を、防曇剤を含有する樹脂を用いて形成した請求項１～７のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  9. 　前記ストリップが固定して備えられたことを特徴とする請求項１～８のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  10. 　前記ストリップが、前記本体部に対して前記ストリップの検出領域が非接触で固定して備えられたことを特徴とする請求項９に記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  11. 　遺伝子検査用のストリップにより標的核酸を検出するために用いられる核酸クロマトグラフィー検査器具であって、
    　前記ストリップがラミネートフィルム加工されてなるストリップ部と、核酸を含む溶液の収容された容器の開口部に嵌合して前記容器の内部に密閉空間を形成させる封止部とを有する本体部を備え、
    　前記本体部を前記容器の開口部に嵌合させた状態で、前記ストリップの一方の端部が、前記容器内に位置する
    　ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具。
  12. 　前記封止部が、弾性を有する樹脂からなることを特徴とする請求項１１記載の核酸クロマトグラフィー検査器具。
  13. 　請求項１～１２のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具と、
    　少なくとも、一又は二以上のプライマーセットからなるプライマーミックスを含むＰＣＲ用反応試薬と、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液と、を含む
    　ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査用キット。
  14. 　請求項１～１２のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、
    　ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、クロマトグラフィー展開液と、標識用色素を含む染色液とを前記反応液に添加し、
    　前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記本体部を前記チューブに嵌合させ、
    　前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、標的核酸に結合した前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、
    　前記本体部が前記チューブに嵌合した状態で、前記本体部、前記ストリップ、及び前記チューブを廃棄する
    　ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
  15. 　請求項１～１２のいずれかに記載の核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法であって、
    　ＰＣＲを行って得られた標的核酸を含む反応液が封入されたＰＣＲ用のチューブを開封し、
    　前記核酸クロマトグラフィー検査器具の前記本体部を前記チューブに嵌合させ、前記反応液を前記ストリップに展開させて、前記反応液中の標的核酸を前記ストリップに固定化されている相補的な塩基配列を有するプローブと結合させ、
    　前記本体部を前記チューブから取り外し、
    　前記チューブにクロマトグラフィー展開液と標識用色素を含む染色液とを注入し、
    　前記本体部を前記チューブに嵌合させ、
    　前記展開液を前記ストリップに展開させて、前記展開液中の標識用色素をプローブに結合した標的核酸に結合させて、前記標識用色素を検出することにより標的核酸を検出し、
    　前記本体部が前記チューブに嵌合した状態で、前記本体部、前記ストリップ、及び前記チューブを廃棄する
    　ことを特徴とする核酸クロマトグラフィー検査器具の使用方法。
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