WO2017105186A1 - Una mezcla de probioticos y prebioticos mas nutrimentos en interaccion biologica y su uso para el tratamiento de la disbiosis intestinal en aves de corral, incrementar su respuesta inmunologica y factor de conversion - Google Patents

Una mezcla de probioticos y prebioticos mas nutrimentos en interaccion biologica y su uso para el tratamiento de la disbiosis intestinal en aves de corral, incrementar su respuesta inmunologica y factor de conversion Download PDF

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probiotics
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Elena Cristina PULIDO MATEOS
Jose Antonio Cruz Serrano
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Kuragobiotek Holding´S Sapi De Cv
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    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
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    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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    • A23K10/30—Animal feeding-stuffs from material of plant origin, e.g. roots, seeds or hay; from material of fungal origin, e.g. mushrooms

Definitions

  • the present invention has its technical field in the biotechnological area, since it provides a composition of probiotics, blue Tequiiana weber agave fructans and selected nutrients in active biological interaction capable of establishing metabolic pathways in the micro organism that generate metabolites that together with the mixture They help prevent dysbiosis of the digestive tract microbe, such as that observed in poultry rearing conditions, for human consumption, on farms where antibiotics are not regularly integrated into the food, impacting productivity due to poor performance.
  • the object of the present invention is a symbiotic composition in living and metabolically active biological interaction that ensures that agave fructans Weber tequilana blue are recognized biologically by probiotics to be able to feed on them, thus achieving two conditions, the first is to keep both probiotic strains alive and active and the second is to achieve in the probiotic strains the generation of metabolites under biophysical conditions and biochemical temperature, osmotic pressure, viscosity and pH of a intestine in a poultry for human consumption.
  • the present composition is able to function as a dysbiotic corrector, by balancing the amount of beneficial microorganisms vs.
  • the symbiosis that lead to live and active probiotics currently are preferably ferments that have to be supplied on a regular basis either in food or in water throughout the life of the poultry, being lactic acid bacteria, mostly balanced food Alkaline does not represent the best means of sustainability because the pH is greater than 7, in the case of water the pH is neutral which is not an ideal means for probiotics, added to this, in solid media and pastes or just water you have high and low viscosities respectively, this is the problem of osmotic pressure on bacteria, which causes them to die for plasmolysis or turgidity, it is important to take into account that the probiotic membrane is permeable and an isotonicity must be met in the solution that contains them and from which they are able to feed to keep them alive and metabolically active.
  • Patent application US 7,754,469 B2 microorganisms and method for treating poultry, describes the supply of one or more strains of isolated bacillo, when the birds are fed to provide benefits, such as an increase in conversion factor between food vs. weight gained by the bird, during breeding, increase gram positive bacteria in the bird, inhibition of pathogens such as Salmonella, Clostridium and E. Coli.
  • the mixture is restricted to bacillus strains; LSSAOI, 3A-P4, 15A-P4, 22C-PI, 8S27, and 2084, all lyophilized strains, these are added to a carrier that integrate them into poultry feed, which can be either solid, gel or liquid
  • a carrier that integrate them into poultry feed, which can be either solid, gel or liquid
  • one describes how to feed turkeys up to an age of 6 to 13 weeks, showing as a result only a modification, in the microbiota similar to that achieved with the use of the antibiotic virginiacima,
  • example two shows the results in the conversion factor after feeding male fattening birds, for 40 days where their best performance was 0.25%.
  • Coli and Clostridium In example five, it is a challenge where the Bacillus CSI, integrates the food for 10 consecutive weeks and shows in the end a reduction of the presence of the E.Coli battery in the gastrointestinal tract of the bird, as well as an increase in productivity of the bird by egg production.
  • Example 7 demonstrates the ability of bacillus CSI as an additive, to reduce the incidence of cellulite and replacement of conventional antibiotics as growth promoters in the diet with an equal or improved yield, bacillus CSI was integrated into the regular food of the bird during your upbringing Example eight presents a challenge of pathogenic antagonism of Salmonella against bacillus CSI, showing that the continuous use of the Bacillus CSI product, salmonella may have rates up to 34.8% lower than untreated birds continuously, which allows to birds an opportunity to improve their intestinal microbiota. This in turn can improve the performance and environment of the bird and is an important food safety measure.
  • Example 9 shows the results of having fed directly turkeys from the CSI bacillus, shows that the product bacillus CSI improved food conversion by 2 points and 0.92 pounds. This improvement may be the result of a reduction in APEC and Ciostridium perfringens type "A", at 18 weeks of age.
  • the bacillus CS! Feeding the bird throughout the production phase can improve performance by controlling and maintaining intestinal microbial populations
  • compositions of this patent lack a prebiotic or mixture of methane moiecularly characterized to be the primary source of energy in bacillus, does not have nutrients such as vitamins that ensure the viability of bacillus before ingestion by the bird, does not have an active metabolic activity until it is ingested by the bird and is already activated in the gastrointestinal tract, the above demands for the results presented alternately and sometimes assuming without demonstrating effects derived from supposed decreases of pathogenic bacteria. This generates the need to feed poultry, for prolonged periods and under schemes of integration to food in formats such as pellets or solid base, can not ensure its results with a single take at the beginning of the bird's life.
  • This invention of symbiotic mixing is only to inhibit the growth of pathogenic bacteria and extend the shelf life directed to processed foods.
  • Unlike the present invention which is a functional food for birds with the purpose of preventing them from being colonized since birth and for the rest of their life, by pathogenic bacteria containing a symbiotic mixture of prebiotics and probiotics antagonistic to Salmonella typhimurium and Clostr ⁇ dium perfringens, also increase the weight conversion factor gained by the poultry with respect to the food consumed throughout its life.
  • WO 2013/075185 "Attenuated strains of Escherichia coli for septicemia in birds, vaccines produced using said strains, method for producing vaccines and using them” refers to the method of obtaining three strains of E. coli attenuated by elimination of three genes that cause pathogenicity in birds by adhesion and cell invasion, biofilm formation and virulence in vivo, based on the type VI secretion system of the bacteria, in order to obtain a vaccine for the treatment of poultry that suffer of septicemia caused by E coli. Being an attenuated vaccine, the bird runs the risk of an allergic reaction and could become pathogenic if the attenuation is not stable.
  • this involves a synergistic symbiosis between probiotics that are antagonistic to Salmonella typhimurium and Clostridium perfr ⁇ ngens and and genem additional benefits such as the increase to the conversion factor resulting from better absorption of nutrients by the bird, also contains fructans of agave as prebiotics which generates a tendency to homeostasis in the basal microbial of the bird.
  • WO2015026235A2 "Production of probiotics by in vitro enrichment of beneficial microorganisms from human or animal microbiota” refers to the method for the treatment of a dysbiotic condition by sampling the affected area (in dysbiosis), followed by in vitro culture of said sample under beneficial conditions for the beneficial microorganism, and finally, a reintroduction thereof to the person or animal.
  • the present invention provides a lively and metabolically active symbiotic composition
  • a) the synergistic symbiotic complex comprising: i) a soluble fiber of agave weber tequilana blue variety fructans with molecular linkage beta 2 to beta 1 and beta 2 to beta 6; ii) two probiotic components comprising bacteria or microorganisms of the genus Lactobacillus and pediococcus; b) a vehicle comprising: i) water, glucose syrup, emulsifying gums and a mixture of vitamins.
  • the Lactobacillus are: Lactobacillus rhamnosus NH001 and the pediococcus is: Pediococcus Acidilacticr,
  • the fructans are agave. In another preferred embodiment, they have ⁇ (2,1) and ⁇ (2,6) bonds.
  • the composition has fructans with a degree of polymerization between 3 and 70.
  • the gums used in the composition may be xanthan and arabic.
  • the composition of the present invention carries a mixture of vitamins comprising Vitamin E, Vitamin C, Vitamin B6, Vitamin B9 and Vitamin B12.
  • the probiotics present in the composition are present in an amount of approximately Lactobacillus rhamnosus 1 X 10 7 CFU in a 1 g portion of the total mixture, Pediococcus Acidilactici 1 X 10 7 CFU in a 1 g portion of the mixture total,
  • compositions for the preparation of formulations for oral administration to correct intestinal dysbiosis in poultry for human consumption with proven pathogenic antagonism in two microorganisms Salmonella Typhimurium and Clostridium perfr ⁇ ngens In a further aspect, a method is provided to improve the conversion factor in poultry productivity for human consumption in the kg ratio. Of food consumed by the poultry during its rearing against the kilos of weight gained by the same poultry before its sacrifice for human consumption
  • a method is provided where the benefits described are achieved with only a single application of the product precisely at the time of the birth of the bird and before the first regular feed out of the incubator.
  • FIGURE 1 Laboratory composition preparation process diagram.
  • FIGURE 2.- Design of pathogenic antagonism experiments
  • FIGURE Bioassay in pathogenic antagonism
  • FIGURE 5 Lactic acid bacteria counts
  • FIGURE 6 Enterobacteria count DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
  • the process requires, due to its biological nature, a high health environment, with pest control according to what is mentioned in pre-operational requirement 5, disinsection and deratization control plan of the ISO 22000 standard, applicable to the "HACCP” plan for industry feed and air quality at least class 10,000 according to the standards of the food and pharmaceutical industry USP 797, ISO “designation 7".
  • fogging fungicides which can be commercially conventional ones that eliminate yeasts and fungi, the combination of both is required. This condition must be maintained throughout the entire process described below.
  • probiotic strains which have been stored at temperatures ranging from -10 to +8 ° C in a preferably non-translucent and well sealed package, in order to avoid any contamination.
  • probiotic strains should be:
  • Lactobacillus and Pediococcusr are used.
  • Said prebiotic mixture has a drinking water base for humans, (free of pathogens) which is heated to a temperature that is in a range of 25 to 100 ° C, the hotter the water, the better the solution of the ingredients that we must mix.
  • agave fructans are used which are characterized in that they have fructans with degree of polymerization (DP) between 3 and 70, as well as being branched with ⁇ (2,1) and ⁇ (2,6) bonds. It is important to mention that to be classified the fructooligosaccharide as a true prebiotic it must cover three fundamental conditions.
  • a gelling agent or gum can be added to the fructooligosaccharide, such as hydrocolloids, pectins, agar agar, xanthan etc., (these are preferably non-Newtonian behavior to give a feeling of non-adhesive when ingested) which are added in proportions of the final mixture that are within the range of 0.02 to 6%, which allows a higher viscosity in the mixture and gives it a regulating effect on the osmotic pressure of the bacteria, making a regulating function in the amount of solution water to avoid damage to the membrane by plasmolysis or turgidity.
  • This mixture should be made homogeneous powder to prevent the gelling agent or gum from forming lumps when hydrated.
  • the homogeneous powder mixture will be hydrated (with the aforementioned hot water), in a proportion ranging from 1: 1 to 1: 0.01, that is, for every liter of water add 1.0 kg of prebiotic, or for every liter of water add Only 10 g of prebiotic. It must be mechanically beaten with a speed in the range of 10 to 150 rpm so that the prebiotic base and the gelling agent do not generate caking or lumps and allow its integration with the water base to form a completely homogeneous liquid.
  • the first prebiotic mixture is achieved, it is heated without exceeding 90 ° C, at a pH between 6 and 7, thereby avoiding the hydrolysis of fructans (which would affect their functional properties, since they would be converted into reducing sugars and would be easily absorbed in the small intestine).
  • a monosaccharide is taken to provide the microorganisms with a source of carbon that they can dispose more easily, it is recommended that it be glucose.
  • the carbohydrate should be previously hydrated with hot water, this to decrease its viscosity and ensure ease of dissolution with the prebiotic mixture.
  • the simple hydrated carbohydrate is poured into the prebiotic mixture and by mechanical stirring action between 10 and 100 rpm they are integrated to form a new homogeneous aqueous mixture, the recommended simple carbohydrate ratio is 25:75
  • Prebiotic: Simple carbohydrate which gives it palatability when perceived by the animal (poultry) thus improving its ease and safety of administration. It is important that the concentration of solids is taken care of in the final mixture, so the interaction of three factors should be taken care of:
  • the next element to be added is the source of nitrogen, which when integrated will favor the sustainability of live probiotics, (Lactobacillus and Pediococcus) there are different probiotic strains that require different types of amino acids to favor their viability; Likewise, its survival can be promoted through the addition of a vitamin cocktail that for every 1.0 kg is composed of:
  • the vitamin cocktail should be added up to this point and will present two conditions of care: amount of vitamin cocktail and final pH level.
  • An addition of no more than 5.0 g of vitaminized cocktail is required per liter of total mixture and its integration must be taken care of as it is possible that it may alter the pH.
  • the optimum pH for probiotic sustainability has a range of 4.5 to 5.5, specifically for the strains described here.
  • the amount of vitamin cocktail in the solid state should be added and integrated into the mixture (preferably powder for better solubility) and with the help of some pH measurement method confirm or adjust the pH required by the probiotic strain.
  • a perfectly homogeneous mixture must be ensured by stirring (10-100 rpm). This mixture, which ends up being a "breeding ground”, should ideally have a viscosity of 0.0100 cP with a range of 0.0500 to 0.0050 cP at 20 ° C.
  • Probiotics come, usually in concentrations of lyophilized powder, in commercial probiotics, ranging from 0.5 to 4.0 billion 1x10 11 UCF.
  • a container must be prepared for each strain, perfectly clean (preferably sterile). Water from 15 to 60 ° C is heated, with 37.5 ° C being preferred.
  • the freeze-dried powder and water are poured on each clean container, taking care that the addition is slow, since the probiotic de-lyophilization is not immediate (the lyophilized probiotics take a few seconds to absorb the added water), You should avoid caking as much as possible.
  • the recommended ratio of freeze-dried probiotic powder and hot water ranges in the range of 1: 1, 1: 10, that is, for each gram of lyophilized probiotics add one milliliter of hot water or even for each gram of lyophilized powder add ten milliliters of hot water, this will depend on the desired concentration and the solubility of the lyophilized powder in the water.
  • the correct specific action is to pour the probiotic lyophilized powder into a bowl where the powder is spread as widely as possible and then with a syringe slowly spread the water over the lyophilized probiotics, allowing them to absorb the water provided slowly. Hydration can be deadly for probiotics if it is not done in a controlled manner as described in this technique, since the permeable membrane as already mentioned obeys the physical forces of osmotic pressure, so that water can enter and leave ad libitum of the microorganism membrane if the technique is not observed and thus fall into pressure ranges that produce plasmolysis (negative pressure within the microorganism and implosion) or turgidity (over filling of water to the probiotic) and literally causing its explosion.
  • the cell membrane that covers probiotics is usually highly sensitive to sudden mechanical action as well as osmotic pressure. That is, microorganisms can die if they are violently agitated by doing so mechanically.
  • probiotic solution it is necessary to leave each probiotic solution as integrated as possible, this is achieved at the point where there is no solid powder on, or within the aqueous mixture of lyophilized probiotics, which can be achieved by slowly and gently pouring it from the mouth from one container to another for few repetitions. Then the probiotic mixture is allowed to stand for at least 5 minutes, this rest time should ensure optimum absorption of the water provided, but also not allow time for the probiotics to require energy and have no carbohydrate presence to feed.
  • NOTE 3 If the mixture of probiotics or the lyophilized powder of probiotics is heated in the microwave, be careful of the temperatures reached, because probiotics do not usually survive temperatures above 60 ° C. This is due to the irregularity with which the temperature gradients move inside a microwave oven and the possibility that certain areas, in an uncontrolled way, overheat above 60 ° C, even if the average temperature in the oven is lower at 50 ° C.
  • a container should be conditioned for each strain, non-translucent hermetic seal (preferably plastic, without restricting the metal in food grade or surgical alloys), to protect the bacteria from photo sensitivity (sensitivity that probiotics have to the action of light), which may affect its viability. Recall that the ideal is total darkness, a condition in which they actually live in the host's gastrointestinal tract (poultry).
  • prebiotic mixture water, prebiotic, simple carbohydrates and nitrogen source
  • prebiotic mixture water, prebiotic, simple carbohydrates and nitrogen source
  • the probiotic mixture of a container is poured into the container of the prebiotic mixture from mouth to mouth and vice versa, repeating this operation several times. Then the built-in mixture (prebiotic and probiotic) is slowly poured into a non-translucent container with a tight seal, remember that the probiotic membrane is highly sensitive and sudden movements destroy it by killing the probiotic.
  • the volume of the mixture should be greater than 85% of the capacity of the container or preferably it should be suitable for the extraction of air from the head space, allowing probiotics to go to their optional anaerobic metabolism and avoiding again with this measure, that other aerobic bacteria may grow in the culture broth.
  • this symbiotic-synergistic mixture is integrated, close the containers (if necessary, take the air out of the head space) and take them to a laboratory homo. Leave in incubation from 18 to 30 h at 37.5 +/- 7.5 ° C, this should generate adequate reproductive conditions for probiotics.
  • This is already a synergistic symbiotic biological mixture with active biological interaction capable of establishing metabolic pathways in micro organisms, for the generation of metabolites, which, together with the mixture, help prevent microbiota dysbiosis in the digestive tract of poultry ( as it is generally observed in breeding conditions) to be added the two strains to the water for consumption of the newborn pups.
  • Probiotics at least 1 x 10 7 CFU of each synergistic symbiotic strain per milliliter of water.
  • the functional action of the mixture will be effective under the following restrictions: a. - If the water of the animal in which the symbiotic mixture is added has temperatures greater than 60 ° C, the probiotics die.
  • the antagonistic effect may not occur or failing to be appreciable and even stop Be beneficial to the animal.
  • the process described above is the one used for the composition of the present invention at an industrial level.
  • the following are laboratory-level examples of the preparation of the composition of the present invention, as well as for its evaluation.
  • Glucose syrup 25.00 0-50%
  • Vitamin mixture (vitamin C, E, B6, B9 and B12) 0.385 0-6%
  • Natamycin is used as an anti-fungal preservative, against fungi and yeasts. Lactobacillus and Pediococcus are present in 1X10 7 CFU (each strain) for each 1g serving.
  • Agave fructans are hydrated with 19% purified water and mixed by hand or with a blender;
  • the blades of the blender are sterilized with cotton and alcohol, we wait for this volatilize, and then integrate with them the xanthan gum (dry);
  • the vitamin cocktail and natamycin are incorporated with 1.5% of the water;
  • Negative Control which consisted of using a traditional food for each feeding phase of the broiler (Tables 1 and 2) that met the nutritional requirements (Cuca, era /., 2009), without the addition of Bacitracin Zinc as a growth promoter, nor a mixture of probiotics, prebiotics plus nutrients.
  • Positive Control CP
  • the same food was used as treatment 1; plus the addition of 15% Zinc Bacitracin, as a growth promoter at a rate of 350 g / t. Without the use of the probiotic mixture, prebiotics plus nutrients
  • Acidilactici 1 X 10 7 CFU in one milliliter of the total mixture was calculated, where they were administered the mixture of probiotics, prebiotics plus nutrients.
  • the water used with the mixture of probiotics, prebiotics plus nutrients was purified and subsequently provided with farm water, without any probiotic, prebiotic or nutrient, or additive, during the entire test.
  • rhamnosus 1 X 10 4 CFU and Pediococcus Acidilactici 1 X 10 4 CFU in one milliliter of the tota mixture.
  • the consumption of water that they could drink in the first two hours of the chick's arrival at the farm at a temperature of approximately 26 to 27 degrees Celsius was calculated, where they were administered the mixture of probiotics, prebiotics plus nutrients.
  • the water used with the probiotic was purified and subsequently they were provided with water from the farm, without any probiotic, prebiotic, nutrient, or additive, during the entire test. 5)
  • the same food was used as treatment 1, only the mixture of probiotics, prebiotics plus nutrients, identified as Formula 3 with a concentration of Lactobacillus was administered in the drinking water
  • rhamnosus 1 X 10 10 CFU and Pediococcus Acidilactici 1 X 10 10 CFU in one milliliter of the total mixture.
  • the consumption of water that they could drink in the first two hours of the chick's arrival at the farm at a temperature of approximately 26 to 27 degrees Celsius was calculated, where they were administered the mixture of probiotics, prebiotics plus nutrients.
  • the water used with the probiotic was purified and subsequently provided with water from the farm, without any probiotic, prebiotic, nutrient or additive, throughout the test.
  • the regular feeding during the raising was elaborated in the form of flour (Sorghum-Soy), in the three phases of the life of the broiler (1 to 21; 22 to 35 and 36 to 42 days of age) and was provided to Free access as well as water.
  • the food was served for all treatments 5 hours after the poultry arrived at the experimental farm and lowered to the floor. Food samples were collected from each phase and treatment, for their respective analyzes if necessary.
  • a commercial type shed 11 m wide x 40 m long was used with a galvanized sheet roof covered with polystyrene, with an automated system of folding side curtains, ignition of automatic breeders for temperature control, with a capacity of 56 floors or pens, of which 35 were used, each with measures of 2 x 2.5 m. with two hopper feeders with a diameter of 45 cm and with a capacity of 12 kg each, as well as an automatic bell trough type plasson.
  • the clinical-zootechnical management was similar for all replicas; In the incubator plant the vaccine against Marek was applied and in the experimental farm, two vaccines against Newcastle disease by eye and oral strain LaSota at 8 and 25 days of age.
  • a photoperiod of natural light was used during the day and at night artificial light (9 to 10pm; 1 to 2am and 5 to 6am), with a population density of 10 birds / m 2 .
  • an Extech RTH10 digital thermometer was placed, inside the house at the height of the birds, which recorded the ambient temperature (° C), relative humidity (%) and dew point (° C) , during each hour for the study time
  • the response criteria at 7, 14, 21, 28, 35 and 42 days were: a. Body weight in group form.
  • n 25 chickens per group
  • probiotics lactobaciilus rhamnosus NH001 and pediococcus acidilactici with agave fructans weber tequilana blue molecular bond beta 2 to beta 1 and beta 2 to beta 6 and nutrients, will be made in the first intake of water in a single and single intake, while the pathogens will be inoculated at four weeks, both in the groups with prior supply of probiotics and those who will only receive the pathogen.
  • lactic bacteria and enterobacteria were counted and from week four Salmonella and Clostridium counts were also performed in order to determine the presence of native strains. Additionally, throughout the bioassay, the behavior of the lactobacillus rhamnosus NH001 and pediococcus acidilactici probiotic was evaluated directly in the drinking fountains, in addition to the quality controls to the water and food provided to the poultry, to avoid any interference with the study.
  • probiotic strains were determined; lactobacillus rhamnosus NH001 and pediococcus acidilactici, as the combination to integrate in the tests in vivo.
  • an inoculum of pathogenic infection administered to the 8 test groups consisting of:
  • the intestinal biota of the poultry which is described in Figure 4, was taken into account in terms of the prevalence that per strain is present in the different sections of the gastrointestinal tract of the poultry.
  • Figure five shows the lactobacillus counts, in the eight study groups it is clearly demonstrated in the Pro-Sal-Ci group where the mixture was inoculated; lactobacillus rhamnosus NH001 and pediococcus acidilactici with blue Tequiiana weber blue agave fructans beta 2 to beta 1 and beta 2 to beta 6 and nutrients, along with an inoculum of infection in the third week of life of a combination of Salmonella Typhimurium and Clostridium perfr ⁇ ngens, has a promoter effect of a biota with a greater presence of bacteria of the genus lactobacillus, acting as a dysbiotic corrector due to the infection caused by pathogens, generating a favorable deference at week eight, compared to the only infection groups only Salmonella Typhimurium, only Clostridium perfr ⁇ ngens and both pathogens together of more than one logarithm.
  • figure six shows in the same way as these are presented to a lesser

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Abstract

La presente invención se refiere a una composición que comprende una mezcla de probióticos, Fructanos de agave weber tequilana azul y nutrimentos con acción simbiótica e interacción bioíógica viva y metabólicamente activa que con una sola y única toma al momento de la primer ingesta al nacimiento, en la incubadora, del ave de corral, tiene consecuencias intestinales que involucran el mantenimiento y/o restauración de la salud intestinal y corrigen la disbiosis común del tracto digestivo en las aves generando efectos antagónicos contra los patógenos Salmonella Typhimurium y Clostrídium perfringens solos o combinados a lo largo de su vida, además incrementa el factor de conversión entre el alimento consumido por el ave durante toda su crianza y hasta su sacrificio para consumo humano y su peso que produce.

Description

UNA MEZCLA DE PROBIOTICOS Y PREBIOTICOS MAS NUTRIMENTOS EN INTERACCION BIOLOGICA Y SU USO PARA EL TRATAMIENTO DE LA DISBIOSIS INTESTINAL EN AVES DE CORRAL, INCREMENTAR SU
RESPUESTA INMUNOLOGICA Y FACTOR DE CONVERSIÓN
CAMPO TÉCNICO
La presente invención tiene su campo técnico en ei área biotecnológica, ya que proporciona una composición de probióticos, Fructanos de agave weber tequiiana azul y nutrimentos selectos en interacción biológica activa capaces de establecer rutas metabólicas en ei micro organismo que generen metabolitos que junto con la mezcla ayudan a prevenir la disbiosis de la microbióta del tracto digestivo, como la observada en condiciones de crianza de aves de corral, para consumo humano, en granjas donde no se les integra de manera regular antibióticos en él alimento, impactando la productividad por un bajo rendimiento en el factor de conversión alimento vs. kilos de carne producidos y contaminaciones en el ave que impiden su venta como carne limpia por presencia suficiente de micro organismos patógenos como para poner en riesgo la salud del comensal.
Generándose un aditivo alimenticio de componentes bioactivos que actúan en simbiosis e interacción biológica viva y metabólicamente activa, con dos probióticos, iactobacillus rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici con fructanos de agave weber tequiiana azul de enlace molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6, glucosa como carbohidrato, una pre mezcla vitamínica, goma xantana y que por sus novedosas características lo hacen superior a los encontrados en el estado de la técnica.
OBJETO DE LA INVENCIÓN
El objeto de la presente invención es una composición simbiótica en interacción biológica viva y metabólicamente activa que asegura que los fructanos de agave weber tequilana azul sean reconocidos biológicamente por los probióticos para poderse alimentar de ellos, logrando así dos condiciones, la primera es mantener vivas y activas a las dos cepas probióticas y la segunda es lograr en las cepas probióticas la generación de metabolitos bajo las condiciones biofísicas y bioquímicas de temperatura, presión osmótica, viscosidad y pH de un intestino en una ave de corral para consumo humano. Con ello, se tendrá una simbiosis que logre sinergia ante la presencia de dos nutrimentos carbohidratos como fuente de energía junto con los fructanos de agave y el complemento vitamínico como estabilizador de ia viabilidad de los probióticos en el aditivo alimenticio. La presente composición es capaz de funcionar como corrector disbiótico, al equilibrar la cantidad de microorganismos benéficos vs. no benéficos en el intestino, con una sola y única dosis de 1 mi de solución al momento de la primera ingesta de agua del ave de corral una vez nace en la incubadora, generando una condición inmunológica para el resto de su vida que permite resistir a infecciones patógenas de Salmonada Typhimurium y Clostridium perfríngens combinadas, sin necesidad de proveer antibiótico en el alimento regular y conservando un factor de conversión superior al regular de una ave criada con alimento compuesto por nutrimentos balanceados y antibiótico. ANTECEDENTES
Actualmente existe una gran variedad de tecnologías relacionadas con aditivos alimenticios para incrementar el factor de conversión e inmunidad en aves de corral para el consumo humano. Entre las tecnologías que existen, predominan las mezclas sólidas con presencia de una cepa probiótica y un prebiótíco en un sustrato el cual puede ser de hecho el alimento mismo, estas tecnologías cuentan con el probiótico liofilizado, mantienen a la bacteria benéfica viva mas no metabólicamente activa, esto resta efectividad a la colonización y efecto benéfico pues debemos recordar que los probióticos se encuentran en todo el tracto digestivo desde el buche hasta el recto y cloaca del ave, así cepas liofilizadas inician su reactivación cuando entran en contacto con la humedad de los fluidos del tracto digestivo, por lo que muchas veces el tiempo que tarda en llegar del pico al yeyuno e íleon no le son suficientes para activarse plenamente y poder anclarse en la mucosa intestinal, perdiéndose su función metabólíca en la digestión de ios alimentos e inmunológíca protegiendo contra colonizaciones de micro organismos patógenos.
Las simbiosis que llevan a los probióticos vivos y activos actualmente son preferentemente fermentos que tienen que ser suministrados de forma regular ya sea en él alimento o bien en él agua durante toda la vida del ave de corral, siendo bacterias ácido lácticas, el alimento balanceado mayormente alcalino no representa el mejor medio de sustentabilidad pues el pH es mayor a 7, en el caso del agua el pH es neutro lo cual tampoco es un medio ideal para los probióticos, aunado a esto, en medios sólidos y pastas o simplemente agua se tienen altas y bajas viscosidades respectivamente, con esto se encuentra el problema de presión osmótica sobre las bacterias, lo que hace que mueran a efectos de plasmólisis o bien turgencia, es importante tomar en cuenta que la membrana de los probióticos es permeable y debe cumplirse una isotonicidad en la solución que las contenga y de la cual se logren alimentar para mantenerlas vivas y metabólicamente activas.
Todo esto aunado al hecho de que una vez inoculados los probióticos aun con la presencia del prebiótico, tanto en bases seca como en fermentos, deben de ser consumidos por el ave de corral por largos períodos durante las 809 semanas de crianza antes del sacrificio a fin de poder advertir un efecto beneficio, tanto en el factor de conversión como en la condición inmunológíca del ave.
La solicitud de patente US 7,754,469 B2, microorganismos y método para tratar aves de corral, describe el suministro de una o más cepa de bacillo aislado, cuando se alimenta a las aves para proveer beneficios, como incremento en factor de conversión entre alimento vs. peso ganado por el ave, durante su crianza, incrementar bacterias gram positivas en el ave, inhibición de patógenos como Salmonella, Clostridium y E. Coli. la mezcla ésta restringida a las cepas de bacillus; LSSAOI, 3A-P4, 15A-P4, 22C-PI, 8S27, y 2084, todas cepas liofilizadas, estas son adicionadas a un acarreador que las integran a el alimento del ave de corral, que bien puede ser en forma sólida, gel o liquida. En el ejemplo uno se describe como se alimenta a pavos hasta una edad de 6 a 13 semanas, mostrando como resultado solamente una modificación, en la microbiota similar a la que se logra con el uso del antibiótico virginiacima, En el ejemplo dos muestra los resultados en el factor de conversión después de alimentar a aves de engorda machos, por 40 días donde su mejor desempeño fue de 0.25%. En el ejemplo tres, también con aves de engorda machos se alimentaron durante 48 días al grupo control con 7 .5x104 CFU/g, de la cepa 2084, aquí se peletizo el bacillo junto con el alimento, los resultados muestran una mejora en el factor de conversión y asumen sin demostrar una mejora en la salud del ave producto de una menor tasa de mortandad. En el ejemplo cuatro se presentan resultados sobre pavos a los que se les integro en la comida el bacillusDPM, que a su vez se compone de 3 bacillus subtilis, seleccionados por su efecto antagónico a la Clostrídium, sin especificar cepa específica y la bacteria E.Coli, ambos micro organismos patógenos, como conclusión de muestra una ganancia y retomo de inversión entre el costo del baillus y la ganancia de peso del ave de corral, no se concluye o demuestra beneficio en cuanto a disminución de patógenos E. Coli y Clostridium. En el ejemplo cinco, es un reto donde el Bacillus CSI, se integra ai alimento por 10 semanas consecutivas y muestra al final una reducción de la presencia de la batería E.Coli en el tracto gastrointestinal de ave, así como un aumento en la productividad del ave por producción de huevo. El ejemplo 7 demuestra la capacidad del bacillus CSI como aditivo, para reducir la incidencia de celulitis y reemplazo de los antibióticos convencionales como promotores de crecimiento en la alimentación con un rendimiento igual o mejorado, el bacillus CSI fue integrado en el alimento regular del ave durante su crianza. En el ejemplo ocho se presenta un reto de antagonismo patógeno de la Salmonella contra el bacillus CSI, mostrando que el uso continuo del producto Bacillus CSI, la salmonella puede tener tasas hasta 34.8% menores que las aves no tratadas de forma continua, lo que permite a las aves una oportunidad para mejorar su microbiota intestinal. Esto a su vez puede mejorar el rendimiento y entorno del ave y es una importante medida de seguridad alimentaria. En el ejemplo 9 se presentan los resultados de haber alimentado directamente a pavos del bacillus CSI, muestra que el producto bacillus CSI mejoró la conversión alimenticia por 2 puntos y 0,92 libras . Esta mejora puede ser producto de una reducción en APEC y Ciostridium perfringens tipo"A", a las 18 semanas de edad. El bacillus CS! alimenta a la ave durante toda la fase de producción puede mejorar el rendimiento mediante el control y ei mantenimiento de las poblaciones microbianas intestinales
Las composiciones de esta patente carecen de un prebíótico o mezcla de f metanos moiecularmente caracterizados para poder ser la fuente primaria de energía en los bacillus, no tiene nutrimentos como vitaminas que aseguren la viabilidad de los bacillus antes de su ingesta por el ave, no tiene un actividad metabólica activa hasta que se ingiere por el ave y se activa ya en el tracto gastrointestinal, lo anterior demanda para los resultados presentados de manera alterna y algunas veces asumiendo sin demostrar efectos derivados de supuestas disminuciones de bacterias patógenas. Lo anterior genera la necesidad de tener que alimentar a las aves de corral, por períodos prolongados y bajo esquemas de integración al alimento en formatos como pellets o en base sólida, no puede asegurar sus resultados con una sola toma a inicio de vida del ave. No se tiene un medio en el cual el coeficiente de agua sea suficiente para poder mantener la simbiosis prebiótico - probiótico viva y metabólicamente activa, de tal forma que la colonización del tracto gastrointestinal se genere de forma efectiva desde el inicio al fin en todo el tracto gastrointestinal del ave. La patente US 20,070,054,008 "Método para el tratamiento en instalación de elaboración de alimentos para el fácil control de contaminación microbiana en productos alimenticios" cuya aplicación básicamente es inhibir y controlar ei crecimiento de bacterias patógenas en alimentos con la finalidad de aumentar la vida de anaquel, la cual se amplía para el procesamiento de distintos alimentos y se focaliza a cárnicos describe cómo inocular con bacterias euhygienic principalmente del género lactobacillus las cuales son capaces de colonizar el cadáver de un animal y por lo tanto inhibir competitivamente y/o excluir el crecimiento de bacterias patógenas y de descomposición indeseadas. La mezcla simbiótica de bacterias es inoculada en un medio de cultivo ideal para su crecimiento y proliferación hasta llegar a la fase logarítmica con un pH final entre 4.1 y 4.6. Esta invención de mezcla simbiótica es solo para inhibir el crecimiento de bacterias patógenas y alargar la vida de anaquel dirigida a alimentos procesados. A diferencia de la presente invención que es un alimento funcional para aves con la finalidad de evitar que sean colonizadas desde que su nacimiento y por todo el resto de su vida, por bacterias patógenas conteniendo una mezcla simbiótica de prebíóticos y probióticos antagónicos a Salmonella typhimurium y Clostrídium perfringens, así mismo incrementar el factor de conversión de peso ganado por el ave de corral respecto al alimento que consumió durante toda su vida.
La patente US 3,490,481 Tratamiento de coma hepático con isomaltitol" describe cómo el isomaltitol es usado para el tratamiento de extreñimiento crónico y lesión hepática principalmente, para el tratamiento y la profilaxis de la hepatopatía, dispepsia, disbiosis y trastornos en la alimentación de lactantes, y sus consiguientes fenómenos. La administración de isomalitol puede ser oral o rectal y la dosis es entre 20 - 200 g por día. El isomaltitol es un prebiótico el cual se absorbe una cantidad insignificante por el intestino delgado, pasando una mayor cantidad por el intestino grueso, el cual es metaboiizado por bacterias no patógenas, fomentando su crecimiento y reactivando la actividad del intestino. Sin embargo, al ser solamente un prebiótico no se asegura el crecimiento de bacterias antagónicas a Salmonella typhimurium y Clostrídium perfringens. Además su uso es enfocado para lactantes en todo caso mamíferos, no aves.
La patente US 8,906,668 B2 "Composiciones bacterianas sinérgicas y métodos de producción y uso de las mismas" hace mención a la utilización de combinaciones sinérgicas de bacterias de microbiota humana (Ecobiotic™), con la finalidad de tratar, prevenir, retrasar o reducir los síntomas de enfermedades, trastornos y afecciones asociadas con una disbiosis. Esta mezcla simbiótica es antagónica a diversas bacterias patógenas, por otra parte, protege cualquier manera de administración y presentación. Sin embargo, es exclusiva a mamíferos descartando la aplicación a aves, además de no contener prebíóticos en su formulación, lo que no hace un simbiótico, para garantizar el crecimiento selectivo de bacterias benéficas
La patente WO 2013/075185 "Cepas atenuadas de Escherichia coli para septicemia en aves, vacunas producidas utilizando dichas cepas, método para producción de vacunas y uso de las mismas" hace referencia al método de obtención de tres cepas de E. coli atenuadas mediante la eliminación de tres genes causantes de patogenicidad en aves por adhesión e invasión celular, formación de biopelículas y virulencia in vivo, basados en el sistema de secreción tipo VI de la bacteria, con el fin de obtener una vacuna para tratamiento de aves de corral que sufren de septicemia causada por E coli. Al ser una vacuna atenuada, el ave corre el riesgo de presentar una reacción alérgica y podría volverse patogénica si la atenuación no es estable. A diferencia del producto de esta invención, éste involucra una simbiosis sinérgica entre probióticos que son antagónicos a Salmonella typhimurium y Clostridium perfríngens y y genem beneficios adicionales como el incremento al factor de conversión producto de una mejor absorción de nutrimentos por parte del ave, además contiene fructanos de agave como prebíóticos lo que genera tendencia a la homeostasis en la microbióta basal del ave. La patente WO2015026235A2 "Producción de probióticos por enriquecimiento in vitro de microorganismos benéficos provenientes de microbióta humana o animal" hace referencia al método para el tratamiento de una condición disbiótica mediante el muestreo de la zona afectada (en disbiosis), seguido de un cultivo in vitro de dicha muestra bajo condiciones benéficas para el microorganismo benéfico, y por último, una reintroducción del mismo a la persona o animal. Si bien esta patente menciona la posibilidad de realizarse en pollos de engorda, está mayormente dirigido a problemas de disbiosis humana, ya que es un proceso más tardado y específico, en contraste con el producto de ésta invención, el cual está listo para administrarse y no se necesita tomar una muestra para enriquecer al microorganismo externamente ya que este se encuentra vivo y metabólicamente activo, una de las mayores ventajas de la biotecnología propuesta es el hecho de que solo sea una sola toma exactamente al momento del nacimiento a la primera Ingesta, pues hace ias veces de un calostro, exclusivo de mamíferos, en el ave lo que le confiere condiciones de desarrollo en su microbiota favorables para el resto de su vida.
Existen varias tecnologías para el tratamiento de la dísbiosis intestinal en aves ninguna en una simbiosis sinérgica entre probfóticos vivos y metabólicamente activos en interacción biológica con fructanos de agave weber variedad azul con caracterización molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6 y un mezcla de nutrimentos que aseguren ta viabilidad de las cepas probióticas desde antes de que sean ingerida por él ave en una sola y única toma al momento de su nacimiento y como primer alimento, generando un efecto de calostro, propio de un mamífero, en la ave de corral, generando una tendencia homeostasis en la microbiota del ave que por el resto de su vida le provea de inmunidad contra los patógenos Salmonella Typhimurium y Clostridium perfringens solas o combinadas y generando un beneficio en el factor de conversión para rendimiento de la producción de aves de corral para consumo humano.
La solicitud de patente PCT/MX2008/000159 de la cual se deriva nuestra invención, es la más cercana, sin embargo, el desarrollo ha continuado y existe novedad y actividad inventiva en la presente invención tanto en la selección de las cepas lactobacullis rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici, su sinergia con el fructano de agave y su aplicación específica para aves de corral para consumo humano en su antagonismo de los patógenos Typhimurium y Clostridium perfringens e incremento en el factor de conversión. BREVE DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
En su aspecto más amplio, la presente invención proporciona una composición simbiótica viva y metabólicamente activa que comprende: a) ei complejo simbiótico sinérgico que comprende: i) una fibra soluble de fructanos de agave weber tequilana variedad azul con enlace molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6 ; ii) dos componentes probióticos que comprenden a las bacterias o microorganismos del género Lactobacillus y pediococcus; b) un vehículo que comprende: i) agua, jarabe de glucosa, gomas emulsificantes y una mezcla de vitaminas.
En un primer aspecto de la invención, se prefiere que los Lactobacillus sean: Lactobacillus rhamnosus NH001 y el pediococcus sea: Pediococcus Acidilacticr, En una modalidad preferida de la invención los fructanos son de agave. En otra modalidad preferida presentan enlaces β (2,1) y β (2,6).
En otra modalidad la composición tiene fructanos con un grado de polimerización entre 3 y 70.
En otra modalidad las gomas utilizadas en la composición pueden ser xantana y arábiga. En otra modalidad la composición de la presente invención lleva una mezcla de vitaminas que comprenden Vitamina E, Vitamina C, Vitamina B6, Vitamina B9 y Vitamina B12.
En un aspecto adicional los probióticos presentes en la composición están presentes en una cantidad de aproximadamente Lactobacillus rhamnosus 1 X 107 UFC en una porción de 1 g de la mezcla total, Pediococcus Acidilactici 1 X 107 UFC en una porción de 1g de la mezcla total,
En otro aspecto adicional se proporciona uso de composiciones para la preparación de formulaciones para administración oral para corregir disbiosis intestinal en aves de corral para consumo humano con antagonismo patógeno probado en dos microorganismos Salmonella Typhimurium y Clostridium perfríngens En otro aspecto adicional se proporciona un método para mejorar el factor de conversión en la productividad de las aves de corral para consumo humano en la relación kg. De alimento consumido por el ave de corral durante su crianza contra los kilos de peso ganados por la misma ave de corral antes de su sacrificio para consumo humano
En otro aspecto adicional se proporciona un método donde los beneficios descritos son alcanzados con solo una aplicación única del producto precisamente al momento del nacimiento del ave y antes del primer alimento regular fuera de la incubadora.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS
FIGURA 1.- Diagrama de proceso de preparación de composición laboratorio.
FIGURA 2.- Diseño de experimentos antagonismo patógeno
FIGURA 3.- Bioensayo en antagonismo patógeno
FIGURA 4.- Biota intestinal de ave de corral.
FIGURA 5.- Recuentos de bacterias ácido lácticas
FIGURA 6.- Recuento de enterobacterías DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Los detalles característicos de mezcla de probióticos y prebtóticos con acción simbiótica sinérgica se muestran claramente en la siguiente descripción. El proceso de obtención de la mezcla toma como base el proceso descrito en la solicitud con expediente PCT/MX2008/000159.
El proceso requiere por su naturaleza biológica de un ambiente de alta sanidad, con control de plagas de acuerdo a lo que cita el pre requisito operativo 5, plan de control de desinsectación y desratización del estándar ISO 22000, aplicable al plan "HACCP" para industria alimentaría y calidad de aire al menos clase 10,000 de acuerdo a los estándares de la industria de alimentos y farmacéutica USP 797, ISO "designation 7". Ambiente con aire a presión positiva y acción recomendada de una nebulización continua de formaldehido en agua al 37% a fin de lograr un ambiente limpio que evite una contaminación no deseada de bacterias patógenas. Así mismo se completa el aseguramiento de la inocuidad del ambiente, nebulizando fungicidas los cuales pueden ser los comercialmente convencionales que eliminen levaduras y hongos, la combinación de ambos es requerida. Esta condición debe mantenerse durante absolutamente todo el proceso a continuación descrito.
Se parte de la presencia de cepas probióticas liofilizadas las cuales han sido almacenadas a temperaturas que van de -10 a +8 °C en un empaque preferentemente no traslucido y bien sellado, a fin de evitar contaminación alguna. Dichas cepas probióticas debe ser:
Particularmente en la presente invención se utilizan Lactobacillus y Pediococcusr. L rhamnosus y P. Acidiiactici. Ambas en una concentración de 1 X 107 UFC, cada una
Primero debe prepararse la mezcla prebiótica:
Dicha mezcla prebiótica tiene una base de agua de grado potable para humanos, (libre de agentes patógenos) la cual se calienta a una temperatura que está en un rango de 25 a 100 °C, entre más caliente el agua, mejor serán la solución de los ingredientes que deberemos mezclar.
Se hará primeramente una mezcla con el prebiótico (fructooligosacárido). En esta invención se utilizan fructanos de agave que se caracterizan porque tienen fructanos con Grado de polimerización (DP) entre 3 y 70, así como ser ramificados con enlaces β (2,1) y β (2,6). Es importante mencionar que para ser clasificado el fructooligosacárido como un verdadero prebiótico debe cubrir tres condiciones fundamentales.
1. - Selectividad, esto se refiere al hecho de que sólo provea a las bacterias probióticas y no a las indeseables o patógenas.
2. - Que las cadenas β sean suficientemente cortas para que por vibración y presión osmótica el probiótico se logre alimentar de ellas. 3.- No absorción a nivel de vellosidad intestinal por el anfitrión (Ave de corral). De manera opcional al fructooligosacárido se le puede agregar algún gelificante o goma, como hidrocoloides, pectinas, agar agar, xantano etc., (éstos de preferencia que sean de comportamiento no newtoniano para dar una sensación de no adhesividad al ingerirlo) las cuales se adicionan en proporciones de la mezcla final que están dentro del rango de 0.02 a 6%, lo que permite una mayor viscosidad en la mezcla y le confiere un efecto de regulación sobre la presión osmótica de la bacteria, haciendo una función de regulación en la cantidad de agua de la solución a fin de evitar daño en la membrana por plasmólisis o turgencia. Esta mezcla deberá hacerse homogénea en polvo para evitar que el gelificante o la goma formen grumos al hidratarse.
La mezcla homogénea en polvo se hidratará (con el agua caliente antes mencionada), en una proporción que va de 1 :1 a 1 :0.01 , es decir por cada litro de agua adicionar 1.0 kg de prebiótico, o por cada litro de agua adicionar solo 10 g de prebiótico. Se debe batir de forma mecánica con una velocidad en un rango de 10 a 150 rpm a fin de que la base prebiótica y el gelificante no genere apelmazamientos o grumos y permita su integración con la base de agua hasta formar un líquido totalmente homogéneo.
Una vez lograda la primera mezcla prebiótica, se calienta sin superar los 90 °C, a un pH entre 6 y 7, evitando con ello la hidrólisis de los fructanos (lo cual afectaría sus propiedades funcionales, ya que serían convertidos en azúcares reductores y serían fácilmente absorbidos en el intestino delgado).
Luego se toma un monosacárido para proporcionarle a los microorganismos una fuente de carbono que puedan disponer con mayor facilidad, se recomienda que sea glucosa. El carbohidrato deberá ser previamente hidratado con el agua caliente, esto para disminuir su viscosidad y asegurar la facilidad de disolución con la mezcla prebiótica. Se vierte el carbohidrato simple hidratado en la mezcla prebiótica y por acción mecánica de agitación entre 10 y 100 rpm se van integrando hasta formar una nueva mezcla acuosa homogénea, la proporción de carbohidratos simple recomendada es de 25:75, Prebiótico : Carbohidrato simple, lo que le confiere palatabilidad al ser percibido por el animal (ave de corral) mejorando así su facilidad y segundad de administración. Es importante que en la mezcla final se cuide la concentración de sólidos, por lo que deberá cuidarse la interacción de tres factores:
1 Temperatura, directamente proporcional a una solubilidad de los ingredientes entre más alta mayor solubilidad.
2. - Acción mecánica de agitación, directamente proporcional a una mayor velocidad de agitación en revoluciones por minuto o batidas por minuto (agitación lineal o circular) mayor será la solubilidad.
3. - Adición de prebiótico y carbohidratos simples inversamente proporcional a la solubilidad, es decir a mayor cantidad de estos dos elementos en la base agua, menor será la solubilidad. Las mezclas de esta técnica pueden generar coeficientes de agua en un rango de 10 a 99%, yendo de una mezcla pastosa semisólída a una sumamente líquida.
Es importante también que se logre con el balanceo de los elementos y las condiciones del proceso antes descritas, una mezcla semisólída o bien líquida, pero perfectamente homogénea.
El siguiente elemento a adicionar es la fuente de nitrógeno, la cual al integrarse favorecerá la sustentabilidad de los probióticos vivos, (Lactobacillus y Pediococcus) hay diferentes cepas probióticas que requieren diferentes tipos de aminoácidos para favorecer su viabilidad; asimismo se puede promover su supervivencia a través de la adición de un coctel vitaminado que por cada 1.0 kg esté compuesto por:
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El coctel vitaminado deberá agregarse hasta este punto y presentará dos condiciones de cuidado: cantidad de coctel vitaminado y nivel de pH final. Se requiere una adición de no más de 5.0 g de coctel vitaminado por cada litro de mezcla total y su integración debe cuidarse pues es posible que pueda alterar el pH. El pH óptimo para sustentabilidad probiótica tiene un rango de 4.5 a 5.5, en especifico para las cepas aquí descritas. Debe adicionarse la cantidad de coctel de vitaminas en estado sólido deseado e integrarse a la mezcla (de preferencia en polvo para mejor solubilidad) y con ayuda de algún método de medición de pH confirmar o ajusfar el pH que la cepa probiótica le requiera. Finalmente se deberá asegurar una mezcla perfectamente homogénea mediante agitación (10-100 rpm). Esta mezcla que bien termina siendo un "caldo de cultivo", idealmente debe tener una viscosidad de 0.0100 cP con un rango de 0.0500 a 0.0050 cP a 20°C.
Esta mezcla, hecha bajo las condiciones de sanidad que se describen previamente en esta técnica, es poco susceptible a la contaminación de bacterias patógenas, sin embargo es opcional en los casos donde no se cuente con estas condiciones de sanidad satisfactorias el poder pasteurízar este "caldo de cultivo", previo a la inoculación probiótica. A continuación se muestra una tabla con los procesos sugeridos, más no restrictivos para este paso opcional, en función de la inocuidad del ambiente donde se trabaje. La pasteurización evita interferencia biológica con microorganismos no deseados (ya que competirían por el alimento) en el medio libre, favoreciendo de esta manera que los probióticos no tengan problema para alimentarse, coadyuvando así a su viabilidad, vida de anaquel y capacidad de reproducción y fermentación.
Tabla de Pasteurización para bacterias patógenas.
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Segundo paso, se deberá elaborar la solución probiótica: Los probióticos vienen, normalmente en concentraciones de polvo liofilizado, en probióticos comerciales, que oscila entre los 0.5 a los 4.0 billones 1x1011 UCF. Se debe preparar un recipiente para cada cepa, perfectamente limpio (de preferencia estéril). Se calienta agua de 15 a 60 °C siendo preferente los 37.5 °C. De forma dosificada y alternada se vierte sobre cada recipiente limpio, el polvo liofilizado y agua, cuidando que la adición sea lenta, pues la des liofilización del probiótico no es inmediata (los probióticos liof ilizados tardan unos segundos en absorber el agua adicionada), se debe evitar tanto como sea posible los apelmazamientos. La relación aquí recomendada de polvo liofilizado probiótico y agua caliente oscila en el rango de 1 :1 , 1 :10, es decir por cada gramo de probióticos liof ilizados adicionar un mililitro de agua caliente o hasta por cada gramo de polvo liofilizado agregar diez mililitros de agua caliente, esto dependerá de la concentración que se desee y de la solubilidad del polvo liofilizado en el agua.
La acción correcta en especifico es verter el polvo liofilizado probiótico en un tazón donde se esparce lo más ampliamente posible dicho polvo y luego con una jeringa diseminar el agua lentamente sobre ios probióticos liofilizados, permitiendo que absorban el agua proporcionada de forma lenta. La hidratación puede ser mortal para los probióticos si no se hace de forma controlada como se describe en esta técnica, pues la membrana permeable como ya se mencionó obedece a las fuerzas físicas de presión osmótica, con lo que el agua puede entrar y salir ad libitum de la membrana del microorganismo si no se observa la técnica y con ello caer en rangos de presión que produzcan plasmólisis (presión negativa dentro del microorganismo e implosión) o bien turgencia (sobre llenado de agua al probiótico) y literalmente ocasionar su explosión.
NOTA 1. La membrana celular que cubre a los probióticos normalmente es altamente sensible a la acción mecánica brusca así como a la presión osmótica. Es decir pueden morir los microorganismos si se agitan violentamente al hacerlo de forma mecánica.
NOTA 2. A más de 60 °C los probióticos por lo general mueren.
Es necesario, dejar cada solución probiótica lo más integrada posible, esto se logra en el punto en que no hay polvo sólido sobre, o dentro de la mezcla acuosa de probióticos liofilizados, lo que puede lograrse al verterla de forma lenta y suave de la boca de un recipiente a otro por pocas repeticiones. Luego se deja reposar la mezcla probiótica por al menos 5 minutos, este tiempo de reposo debe asegurar una absorción óptima del agua proporcionada, pero tampoco dejar tiempo a que los probióticos requieran de energía y no tengan presencia de carbohidratos para alimentarse. NOTA 3: Si se calienta la mezcla de probióticos o el polvo liof ilizado de probióticos en el microondas, tenga cuidado con las temperaturas que se alcanzan, debido a que los probióticos suelen no sobrevivir a temperaturas por encima de los 60°C. Esto es por la irregularidad con que los gradientes de temperatura se desplazan dentro de un homo de microondas y la posibilidad de que ciertas zonas, de forma no controlada, se sobrecalienten arriba de los 60°C, aunque la temperatura promedio en el homo sea inferior a 50°C.
Por último se incorporan las 2 mezclas (pre y probiótica) cuidando generar mezcla por separado para cada cepa:
16 Se debe acondicionar un recipiente para cada cepa, no traslúcido de cierre hermético (plástico preferentemente, sin que sea restrictivo el metal en aleaciones grado alimenticio o quirúrgico), para proteger a las bacterias de la foto sensibilidad (sensibilidad que tienen los probióticos a la acción de ia luz), la cual puede llegar a afectar su viabilidad. Recordemos que el ideal es oscuridad total, condición en la que de hecho viven en el tracto gastrointestinal del anfitrión (ave de corral).
Caliente la mezcla prebiótica (agua, prebiótico, carbohidratos simples y fuente de nitrógeno), hasta alcanzar una temperatura de 37.5°C. Manteniendo la temperatura de la mezcla probiótica en una franja que va de 27 a 42°C, preferentemente con desviaciones estándares de no más de 4°C.
Para evitar los inconvenientes del incorporado por acción mecánica brusca y presión osmótica, se vierte la mezcla probiótica de un recipiente en el recipiente de la mezcla prebiótica de boca a boca y viceversa, repitiendo esta operación varias veces. Luego se vierte lentamente la mezcla incorporada (prebiótica y probiótica) en un recipiente no traslucido de cierre hermético, recuerde que la membrana de los probióticos es altamente sensible y movimientos bruscos la destruyen matando ai probiótico.
Si requiere una integración mayor por detección de grumo, vierta nuevamente la mezcla incorporada de un recipiente a otro por solo unas pocas veces más de forma lenta, y a una distancia (de preferencia boca a boca de recipiente, sin agitar) no muy alta de un recipiente a otro a fin de evitar una caída de mezcla liquida violenta.
El volumen de mezcla deberá ser mayor al 85% de la capacidad del recipiente o de preferencia éste deberá ser adecuado para la extracción del aire del espacio de cabeza, permitiendo que los probióticos acudan a su metabolismo anaeróbico facultativo y evitando nuevamente con esta medida, que otras bacterias aeróbicas puedan crecer en el caldo de cultivo.
Una vez integrada esta mezcla simbiótica-sinérgica, cierre los envases (si es el caso saque el aire del espacio de cabeza) y llévelos a un homo de laboratorio. Deje en incubación de 18 a 30 h a 37.5 +/- 7.5 °C, esto debe generar condiciones de reproducción adecuadas para los probióticos. Ésta ya es un mezcla biológica simbiótica sinérgica con interacción biológica activa capaz de establecer rutas metabólicas en los micro organismos, para generación de metabolitos, que aunados a la mezcla, ayuden a prevenir la disbiosis de la microbiota en el tracto digestivo de aves de corral (como se observa generalmente en condiciones de crianza) ai ser adicionadas las dos cepas ai agua para consumo de las crías recién nacidas.
La acción funcional de la mezcla (antagonismo hacia las cepas Salmonella Typhimurium y Clostrídium perfringens combinadas), se recomienda en las siguientes concentraciones mínimas:
• Probióticos al menos 1 x 107 UFC de cada cepa simbiótica sinérgica por mililitro de agua.
• Prebióticos al menos 2% por porción.
Ahora bien la acción funcional de la mezcla, será efectiva bajo las restricciones siguientes: a. - Si el agua del animal en la que sea adicionada la mezcla simbiótica tuviera temperaturas mayores a 60°C los probióticos se mueren.
b. - Si la aplicación al agua genera una solución con una concentración de probióticos menor a 1 x 104 o mayor a 1 x 1010 UFC por mililitro de agua, el efecto antagónico podría no darse o en su defecto no ser apreciable e incluso dejar de ser benéfico para el animal.
c- Dado que los probióticos están vivos y activos, es necesario el
almacenamiento de cada mezcla simbiótica en cadena fría, antes de ser agregada al agua de las aves (entre 5 y 14 grados centígrados), si los porcentajes de agua son elevados (más de 50%), pues las bacterias iniciarán ciclos de segregación de ácidos, enzimas y reproducción a medida que más se acerquen a 37 °C, lo que podría alterar el antagonismo hacia las cepas blanco. MODALIDAD PREFERIDA DE LA INVENCIÓN
El proceso anteriormente descrito es el utilizado para la composición de la presente Invención a nivei industrial. A continuación se presentan ejemplos a nivel laboratorio de la preparación de la composición de la presente invención, así como para su evaluación.
EJEMPL01.- MEJOR MÉTODO DE PREPARACIÓN DE LA COMPOSICIÓN.
Ingredientes Porcentaje Rango
Agua 70 30-80%
Jarabe de glucosa 25.00 0-50%
Fructanos de agave 4.5 1-30%
Goma Xantana 0.035 0-6%
Mezcla vitamínica (vitamina C, E, B6, B9 y B12) 0.385 0-6%
Natamicina 0.005 0-1%
. acidilactici 0.0375 0.0001 %-0.01% ó L. rhamnosus 0.0375 0.0001 %-0.01%
Figure imgf000021_0001
La natamicina se utiliza como conservador anti f úngico, contra hongos y levaduras. Los Lactobacillus y Pediococcus están presentes en 1X107 UFC (cada cepa) por cada porción de 1g.
NOTA 1. Se debe generar una mezcla por separado para cada cepa utilizada.
Proceso de preparación a nivel laboratorio, Figura 1:
1. Los fructanos de agave se hidratan con el 19% de agua purificada y se mezcla a mano o con batidora;
2. La mezcla se calienta en el homo de microondas durante 30 segundos (o hasta que comience a ebullir); 3. El jarabe de glucosa se mezcla con 9% del agua y se calienta en el horno de microondas durante 20 segundos (o hasta que comience a ebullir);
4. La jarra de los fructanos se enjuaga con 9% del agua procurando tomar todo lo el material restante;
5. Se esterilizan las aspas de la batidora con algodón y alcohol, esperamos a que este volatilice, para después, integrar con las mismas la goma xantana (en seco);
6. Se incorpora el coctel de vitaminas y la natamicina con 1.5% del agua;
7. Esperar a que ia mezcla de fructanos, glucosa y goma se encuentre a menos de 46°C para poder añadir la mezcla de vitaminas y natamicina;
8. Asegurar que se encuentre la mezcla máximo a 40°C para inocular con el probiótico reactivado con 1.5% del agua y/o los obtenidos a través de fermentación; y
9. Agregar el agua restante (31.5%), mezclando bien hasta obtener una solución homogénea.
EJEMPLO 2 - EFECTO DE LA INGESTA EN UNA SOLA Y EXCLUSIVA TOMA DE TRES DIFERENTES CONCENTRACIONES DE UNA MISMA MEZCLA DE PROBIOTICOS AL DÍA DE EDAD, EN SU USO COMO PROMOTOR DE
CRECIMIENTO SOBRE VARIABLES DE FACTOR DE CONVERSIÓN EN AVES DE CORRAL PARA CONSUMO HUMANO. La composición descrita en el ejemplo anterior fue probada con el objetivo de evaluar el efecto de tres diferentes concentraciones de una mezcla de probióticos aplicados al día de edad,
combinados, como promotor de crecimiento, sobre el peso corporal, consumo de alimento, conversión alimenticia y mortalidad general del ave de corral de engorda durante 42 días de edad.
El trabajo se desarrolló en una granja avícola experimental de Integración y
Desarrollo Agropecuario, ubicada en las inmediaciones de la ciudad de Morelia, Michoacán, México (en el Municipio de Tarimbaro), a una altura de 1940 metros sobre el nivel del mar. Se utilizaron 1750 pollitos provenientes de la misma clave de reproductoras de la estirpe Ross 308 mixtos, los cuales se mantuvieron en producción hasta los 42 días de edad. Se distribuyeron completamente al azar en 5 tratamientos con 7 repeticiones de 50 aves cada una. Los tratamientos consistieron en combinaciones de promotor de crecimiento en el alimento convencional integrado de forma regular en el alimento y La mezcla simbiótica probióticos y prebióticos más nutrimentos en una sola y única toma en el agua de bebida en la primer ingesta después del nacimiento del ave.
Los tratamientos a evaluar se dividieron en 7 grupos que se describen en detalle; 1) Control Negativo (CN) el cual consistió en usar un alimento tradicional para cada fase alimenticia del pollo de engorda (Cuadros 1 y 2) que reunía los requerimientos nutricionaies (Cuca, era/., 2009), sin la adición de Bacitracina Zinc como promotor de crecimiento, ni mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos. 2) Control Positivo (CP), se utilizó el mismo alimento que el tratamiento 1 ; más la adición de Bacitracina Zinc al 15%, como promotor de crecimiento a razón de 350 g/t. sin el uso de la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos
3) Se utilizó el mismo alimento que el tratamiento 1 , únicamente se administró en el agua de bebida el probiótico identificado como Fórmula 1 , con una concentración de Lactobacillus rhamnosus 1 X 107 UFC y Pediococcus
Acidilactici 1 X 107 UFC en un mili litro de la mezcla total. Se calculó el consumo de agua que podrían beber en las primeras dos horas de llegada del pollito a la granja a una temperatura aproximadamente de 26 a 27 grados centígrados, en donde se les administro la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos. El agua utilizada con la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos fue purificada y posteriormente se les proporciono agua de la granja, sin ningún probiótico, prebiótico o nutrimento, ni aditivo, durante toda la prueba.
4) Se utilizó el mismo alimento que el tratamiento 1 , únicamente se administró en el agua de bebida la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos, identificado como Fórmula 2 con una concentración de Lactobacillus
rhamnosus 1 X 104 UFC y Pediococcus Acidilactici 1 X 104 UFC en un mili litro de la mezcla tota. Se calculó el consumo de agua que podrían beber en las primeras dos horas de llegada del pollito a la granja a una temperatura aproximadamente de 26 a 27 grados centígrados, en donde se les administro la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos. El agua utilizada con el probiótico fue purificada y posteriormente se les proporciono agua de la granja, sin ningún probiótico, prebiótico, nutrimento, ni aditivo, durante toda la prueba. 5) Se utilizó el mismo alimento que el tratamiento 1 , únicamente se administró en el agua de bebida la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos, identificado como Fórmula 3 con una concentración de Lactobacillus
rhamnosus 1 X 1010 UFC y Pediococcus Acidilactici 1 X 1010 UFC en un mili litro de la mezcla tota. Se calculó el consumo de agua que podrían beber en las primeras dos horas de llegada del pollito a la granja a una temperatura aproximadamente de 26 a 27 grados centígrados, en donde se les administro la mezcla de probióticos, prebióticos más nutrimentos. El agua utilizada con el probiótico fue purificada y posteriormente se les proporciono agua de la granja, sin ningún probiótico, prebiótico, nutrimento ni aditivo, durante toda la prueba.
El alimento regular durante la crianza, fue elaborado en forma de harina (Sorgo- Soya), en las tres fases de la vida del pollo de engorda (1 a 21 ; 22 a 35 y 36 a 42 días de edad) y fue proporcionado a libre acceso al igual que el agua. El alimento fue servido para todos los tratamientos 5 horas después de haber llegado el ave de corral a la granja experimental y bajado a piso. Se recolectaron muestras de alimento de cada fase y tratamiento, para sus respectivos análisis en caso necesario.
Se utilizó una caseta tipo comercial de 11 m de ancho x 40 m de largo con techo de lámina galvanizada recubierta con poliestireno, con sistema automatizado de cortinas laterales abatibles, encendido de criadoras automáticas para control de temperatura, con una capacidad de 56 pisos o corrales, de los cuales se utilizaron 35, cada uno de ellos con medidas de 2 x 2.5 m. con dos comederos tolva con diámetro de 45 cm y con una capacidad de 12 kg cada uno, así como un bebedero automático de campana tipo plasson. El manejo clínico-zootécnico fue similar para todas las réplicas; en la planta incubadora se aplicó la vacuna contra Marek y en la granja experimental, dos vacunas contra la enfermedad de Newcastle por vía ocular y oral cepa LaSota a los 8 y 25 días de edad.
Se utilizó un fotoperíodo de luz natural durante el día y por la noche luz artificial (9 a 10pm; 1 a 2am y 5 a 6am), con una densidad de población de 10 aves / m2. Al inicio de la prueba se colocó un termómetro digital Extech RTH10, por dentro de la caseta a la altura de las aves, el cual registro la temperatura (°C) ambiental, humedad relativa (%) y el punto de roció (°C), durante cada hora por el tiempo de estudio
Los criterios de respuesta a los 7, 14, 21 , 28, 35 y 42 días fueron: a. Peso corporal en forma grupal.
b. Consumo de alimento voluntario.
c. Conversión alimenticia corregida por mortalidad
d. Porcentaje de Mortalidad general.
A la llegada de las aves de corral a la granja experimental fueron pesadas 500 hembras y 500 machos en forma grupal para conocer el peso corporal mixto al inicio de la prueba. En cada uno de las repeticiones fueron colocadas 25 machos y 25 hembras, de tal manera que todos los lotes estuvieran
homogéneos en la distribución de sexos.
Las medías resultantes de los parámetros productivos y mortalidad se analizaron bajo un diseño con mediciones repetidas, empleando las semanas de edad como variable del tiempo y cuando existieron diferencias significativas (p<0.05), entre los tratamientos, se realizó la comparación de medias por la prueba de Fisher LSD (StatSoft. Statistica 6.0, 2003).
Figure imgf000026_0001
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
RESULTADOS SOBRE VARIABLES DE EVALUACIÓN
Cuadro 4. Evolución del peso corporal (kg) del pollo de engorda a través del tiempo con el uso de mezcla prebiótico, probiótico y nutrimentos.
Figure imgf000028_0002
NS = No existen diferencias significativas (P>0.05) entre los tratamientos de las semanas de estudio
Existe diferencias significativas (JKO.01) entre ios tratamientos de las semanas de estudio
EEM= Error estándar de la media
Cuadro 5. Evolución del consumo de alimento acumulado (kg) del pollo de engorda
a través del tiempo con el uso de mezcla prebiótico, probiótico y nutrimentos.
Figure imgf000028_0003
Figure imgf000029_0001
Cuadro 6. Evolución de la conversión de alimento acumulada (kg/kg) del pollo de engorda a través del tiempo con el uso de mezcla prebiótico, probiótico y nutrimentos.
Figure imgf000029_0002
Cuadro 7. Evolución de la mortalidad general acumulada (%) del pollo de engorda a través del tiempo con el uso de mezcla prebiótico, probiótico y nutrimentos.
Figure imgf000029_0003
Figure imgf000030_0001
NS = No existen diferencias significativas (P>0.05) entre los tratamientos de las semanas de estadio
EEM= Error estándar de la media
Resultados
De acuerdo a los resultados obtenidos durante las 6 semanas del estudio se concluye que el tratamiento de alimento regular formula 1 sin factor de
crecimiento Bacitracina Zinc al 15% y Lactobacillus rhamnosus 1 X 107 UFC y Pediococcus Acidilactici 1 X 107 UFC con fructano de agave weber tequilana azul y nutrimentos, administrado en una sola y única toma al ave de corral a su nacimiento es el de mejor desempeño en todos los parámetros seleccionados, evolución del peso corporal, evolución del consumo de alimento y en
consecuencia en el factor de conversión Kg de alimento consumido en relación a los Kg. de peso ganado por el ave de corral.
Se presentó un menor indicie de mortandad en el tratamiento de la fórmula 1 con respecto a todos los demás tratamientos siendo el tratamiento 2 con factor de crecimiento Bacitracina Zinc al 15% el más cercano en desempeño.
EJEMPLO 3- EFECTO DE LA INGESTA EN UNA SOLA Y EXCLUSIVA TOMA DE UNA MEZCLA DE PROBIOTICOS AL DÍA DE EDAD, EN SU USO COMO INHIBIDOR POR COMPETENCIA DE MICROORGANISMOS PATOGENOS SALMONELLA TYPHIMURIUM Y CLOSTRIDIUM PERFRINGENS SOLAS Y COMBINADAS EN INFECCIONES EN AVES DE CORRAL EN LA TERCER SEMANA DE CRIANZA
El reto microbiano in vitro se demostró la actividad antimicrobiana tanto de metabólitos de las cepas probióticas, así como el reto entre los microorganismos patógenos y probioticos directamente por la técnica de Kirby-bauer modificada, se probaron sobrenadantes libres de células probióticas con diferentes niveles de inóculos de los patógenos Clostridium perfríngens y Salmonella Typhimurium. Los sobrenadantes libres de células probióticas se obtendrán de cultivos con diferentes combinaciones y las células bacterianas se eliminarán por
centrifugación y filtración (0.22μτη).
Método de azul tripano; se realizó el reto con las cepas directamente inoculadas en medio líquido, el efecto inhibitorio se demostró mediante un colorante el cual penetra en células muertas o dañadas. Para el reto in vivo el ensayo se realizó con la mezcla de probióticos que hayan mostrado mayor efecto inhibitorio en la evaluación in vitro, lactobaciilus rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici con fructanos de agave weber tequilana azul de enlace molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6 y nutrimento. Se probó en ocho grupos de estudio los cuales se enlistan a continuación:
Grupo Características
G1 Control
G2 C. perfríngens (Cp)
G3 S. Typhimurium (ST)
G4 Probióticos
G5 Cp + ST
G6 Cp + probióticos
G7 ST + probióticos
G8 Cp + ST+ probióticos
Figure imgf000031_0001
n = 25 pollos por grupo
La administración de probióticos, lactobaciilus rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici con fructanos de agave weber tequilana azul de enlace molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6 y nutrimentos, se realizará en la primera ingesta de agua en una sola y única toma, mientras que los patógenos se inocularan a las cuatro semanas, tanto en los grupos con previo suministro de probióticos como a aquellos a los que sólo recibirán al patógeno.
En todos los grupos se realizó el recuento de probióticos y patógenos mediante cultivo utilizando los medios selectivos específicos para cada tipo de
microorganismo, de acuerdo con al esquema de la tabla siguiente:
Figure imgf000032_0001
En el caso del grupo control, se hicieron recuento de bacterias lácticas y enterobacterias y a partir de la semana cuatro también se realizaron conteo de Salmonella y Clostridium con el objetivo de determinar la presencia de cepas nativas. Adicionalmente, durante todo el bioensayo se evaluó el comportamiento del probiótico lactobacillus rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici, directamente en los bebederos, además de los controles de calidad al agua y alimento proporcionado a las aves de corral, para evitar cualquier interferencia con el estudio.
Las aves de corral serán conservados en casetas con separaciones para cada grupo de estudio.
Resultados
En cuanto a la inhibición por competencia cepa a cepa in vitro de Salmonella Typhimuiium y Clostrídium perfringens por bacterias ácido lácticas, los resultados se muestran en el cuadro 8:
CUADRO 8. Inhibición por competencia cepa-cepa in vitro de Salmonella
Typhimuiium y Clostrídium perfringens por bacterias ácido lácticas
Figure imgf000034_0001
De los resultados obtenidos se determinó a las cepas de probióticos; lactobacillus rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici, como la combinación para integrar en las pruebas in vivo.
En la prueba in vivo, se utilizó un inoculo de infección patógena administrado a los 8 grupos de prueba que constaba de:
Figure imgf000035_0001
Se tomó en consideración la biota intestinal del ave de corral, que se describe en la figura 4, en cuanto a la prevalencia que por cepa ésta presente en las diferentes secciones del tracto gastrointestinal del ave de corral.
El la figura cinco se muestran los recuentos de lactobacillus, en los ocho grupos de estudio claramente se demuestra en el grupo Pro-Sal-Ci donde se inoculo la mezcla; lactobacillus rhamnosus NH001 y pediococcus acidilactici con fructanos de agave weber tequiiana azul de enlace molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6 y nutrimentos, junto con un inoculo de infección en la tercer semana de vida de una combinación de Salmonella Typhimurium y Clostridium perfríngens, tiene un efecto promotor de una biota con mayor presencia de bacterias del genero lactobacillus, haciendo una función de corrector disbiotico a razón de la infección causada por los patógenos, generando a la semana ocho una deferencia favorable, comparado con los grupos de solo infección solo Salmonella Typhimurium, solo Clostridium perfríngens y ambos patógenos juntos de más de un logaritmo. En cuento a las enterobacterias, la figura seis muestra de igual forma como estas se presentan en menor medida en el grupo Sal/CI/Pro, comparados con el grupo de infección de ambos patógenos.

Claims

REIVINDICACIONES Habiendo descrito suficientemente mi invención, considero como una novedad y por lo tanto reclamo como de mi exclusiva propiedad lo contenido en las siguientes cláusulas:
1. Una composición simbiótica que comprende:
a. el complejo simbiótico sinérgico que comprende:
i. una fibra soluble de fructanos de agave weber tequilana azul de enlace molecular beta 2 a beta 1 y beta 2 a beta 6 con Grado de polimerización (DP) entre 3 y 70;
ii. dos componentes probióticos que comprenden los microorganismos del género Lactobacillus ;
b. un vehículo que comprende:
i. agua, jarabe de glucosa, natamicina, gomas y mezcla de vitaminas.
2. La composición de la reivindicación 1 caracterizada porque los Lactobacillus son: Lactobacillus rhamnosus NH001 y Ped/ococcu acidilactici;
3. La composición de conformidad con la reivindicación 1 y 2 caracterizada porque los fructanos son de agave.
4. La composición de conformidad con las reivindicaciones 1-3 caracterizada porque los fructanos de agave presentan enlaces β (2,1) y β (2,6).
5. La composición de conformidad con las reivindicaciones 1-4 caracterizada porque los fructanos tiene un grado de polimerización entre 3 y 70.
6. La composición de conformidad con las reivindicaciones 1 - 5 caracterizada porque el edulcorante es Glucosa.
7. La composición de conformidad con las reiviicaciones 1 - 6 caracterizada porque las gomas pueden ser xantana.
8. La composición de conformidad con las reivindicaciones 1 - 7 caracterizada porque la mezcla de vitaminas comprende Vitamina E, Vitamina C, Vitamina B6, Vitamina B9 y Vitamina B12.
9. La composición de conformidad con las reivindicaciones 1 - 8 caracterizada porque los probióticos están presentes en una cantidad de aproximadamente Lactobacillus rhamnosus NH001 1X107 UFC en una porción de 30g, Pediococcu acidilactici 1X107 UFC en una porción de 30g.
10. Uso de composiciones de conformidad con una o más de las reivindicaciones precedentes como tales o para la preparación de formulaciones para administración oral para corregir disbiosis intestina! en aves de corral para consumo humano e incrementar ei factor de conversión en la productividad de su crianza con una sola y única toma exactamente al momento de la primer ingesta después del nacimiento del ave en la incubadora.
11. Un método para mejorar ia capacidad de sobrevivencia de bacterias Lactobacillus y Pediococcu que comprende mezclar los probióticos con los Fructanos de agave weber tequiiana azul donde se mejora la sobrevivencia y su administración en una sola y única toma en aves de corral para consumo humano.
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