WO2017017810A1 - 殺芽方法 - Google Patents
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Abstract
Description
工程1:芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させておく工程;
工程2:芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させておく工程;および
工程3:芽胞形成菌を50℃以上に加温する工程。
(但し、工程1及び工程2を開始後に工程3を終了するものとする)。
工程1:芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させておく工程;
工程2:芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させておく工程;および
工程3:芽胞形成菌を50℃以上に加温する工程。
(但し、工程1及び工程2を開始後に工程3を終了するものとする)。
(1)工程1と工程2を同時に行う態様、すなわち、芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩およびカチオン界面活性剤とを同時に接触を開始し、同時に接触を終了する態様。
(2)先に工程1を行い、工程1終了後に工程2を行う態様。例えば、芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させておく工程1を行った後に、ジピコリン酸又はその塩を除去し、その後カチオン界面活性剤を加えて、芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させておくことができる。
(3)先に工程2を行い、工程2終了後に工程1を行う態様。例えば、芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させておく工程2を行った後に、カチオン界面活性剤を除去し、その後、ジピコリン酸又はその塩を加えて、芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させておくことができる。
(4)先に工程1を行い、工程1を終了することなく、工程2を開始する態様。ここでは、先に芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させ、次にジピコリン酸又はその塩を除去することなく、カチオン界面活性剤とを接触させておくことができる。
(5)先に工程2を行い、工程2を終了することなく、工程1を開始する態様。ここでは、先に芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させ、次にカチオン界面活性剤を除去することなく、ジピコリン酸とを接触させておくことができる。
本発明の工程3は、芽胞形成菌を50℃以上に加温する工程である。
態様3-1 工程1及び/または工程2を、工程3より先に開始する
態様3-2 工程1と工程2と工程3を同時に開始する
態様3-3 工程3を工程1及び工程2より先に開始する
態様3-4 工程1または工程2と工程3を同時に開始する
態様3の中、殺芽効果をより向上させる観点から、態様3-1が好ましいがこれに限定されない。
本発明の殺芽助剤組成物は、ジピコリン酸又はその塩およびカチオン界面活性剤を含む組成物である。本発明の殺芽助剤組成物は、発芽を目的として行う、加温前処理に使用する。また、組成物自体を常温(約20℃~約38℃)で用いて殺芽することを目的とする殺芽剤組成物とは区別される。特に、本発明の工程1および工程2の後、あるいは工程1および工程2と同時に、加温することで殺芽効果を発揮し得る組成物を指す。本発明において、殺芽助剤組成物は、工程1および工程2で使用され得る。
下記の工程1、工程2および工程3を行う殺芽方法:
工程1:芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させておく工程;
工程2:芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させておく工程;および
工程3:芽胞形成菌を50℃以上に加温する工程
(但し、工程1及び工程2を開始後に工程3を終了するものとする)。
工程1、工程2、および工程3を同時に行う期間を有する、<項1>記載の殺芽方法。
工程1の終了後に工程2及び工程3を行う、<項1>記載の殺芽方法。
工程2の終了後に工程1及び工程3を行う、<項1>記載の殺芽方法。
カチオン界面活性剤が、第1級アンモニウム塩、第2級アンモニウム塩、第3級アンモニウム塩、または第4級アンモニウム塩のいずれかである、<項1>~<項4>のいずれか記載の殺芽方法。
カチオン界面活性剤が、アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、ベンザルコニウム塩、アルキルピリジニウム塩、アルキルベンゼトニウム塩等の第4級アンモニウム塩、アルキルアミン塩等の第1級アンモニウム塩である、<項1>~<項5>のいずれか記載の殺芽方法。
カチオン界面活性剤が、アルキルトリメチルアンモニウム塩、アルキルトリエチルアンモニウム塩、アルキルジメチルエチルアンモニウム塩、アルキルメチルジエチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩、ジアルキルジエチルアンモニウム塩、ジアルキルエチルメチルアンモニウム塩、ベンザルコニウム塩、アルキルピリジニウム塩、およびアルキルベンゼトニウム塩からなる群より選択される少なくとも1種である、<項1>~<項7>のいずれか記載の殺芽方法。
前記工程1および工程2において、芽胞形成菌、ジピコリン酸又はその塩、およびカチオン界面活性剤を液中で接触させておく、<項1>~<項8>のいずれか記載の殺芽方法。
液中のジピコリン酸又はその塩の含有量が0.05mM以上200mM以下である<項9>記載の殺芽方法。
液中のカチオン界面活性剤の含有量が0.1mM以上1000mM以下である、<項9>記載の殺芽方法。
芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とが接触する時のジピコリン酸又はその塩の濃度が0.05mM以上、より好ましくは0.5mM以上、より好ましくは3mM以上、より好ましくは4mM以上、より好ましくは6mM以上、より好ましくは8mM以上であり、そして、好ましくは200mM以下、より好ましくは100mM以下、より好ましくは50mM以下、より好ましくは20mM以下、<項1>~<項11>のいずれか記載の殺芽方法。
芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とが接触する時のカチオン界面活性剤の濃度が、0.1mM以上、より好ましくは0.5mM以上、より好ましくは3mM以上、より好ましくは4mM以上、より好ましくは6mM以上、より好ましくは8mM以上であり、そして、好ましくは1000mM以下、より好ましくは500mM以下、より好ましくは300mM以下、より好ましくは100mM以下である、<項1>~<項12>のいずれか記載の殺芽方法。
芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とが接触する時のカチオン界面活性剤の濃度が、0.01質量%以上、より好ましくは0.05質量%以上、そして、好ましくは10質量%以下、より好ましくは5質量%以下、さらに好ましくは1質量%以下である、<項1>~<項13>のいずれか記載の殺芽方法。
工程1および工程2を、それぞれ独立してまたは同時に15℃以上50℃未満で行う、<項1>~<項14>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3とは独立して行われる工程1および工程2を、それぞれ独立してまたは同時に、15℃以上、より好ましくは20℃以上であり、そして、好ましくは50℃未満、より好ましくは49℃以下、より好ましくは45℃以下、より好ましくは40℃以下、より好ましくは30℃以下で行う、<項1>~<項15>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3とは独立に行われる工程1の時間、すなわち、芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩との接触時間が、好ましくは、1秒以上、より好ましくは5秒以上、より好ましくは30秒以上、より好ましくは1分以上、より好ましくは3分以上、より好ましくは5分以上、より好ましくは8分以上、より好ましくは10分以上、より好ましくは15分以上、より好ましくは20分以上、より好ましくは25分以上であり、そして、好ましくは60分以下、より好ましくは50分以下、より好ましくは40分以下、より好ましくは35分以下である、<項1>~<項16>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3とは独立に行われる場合の工程2の時間、すなわち、芽胞形成菌とカチオン界面活性剤との接触時間が、好ましくは1秒以上、より好ましくは5秒以上、より好ましくは30秒以上、より好ましくは1分以上、より好ましくは3分以上、より好ましくは5分以上、より好ましくは8分以上、より好ましくは10分以上、より好ましくは15分以上、より好ましくは20分以上、より好ましくは25分以上であり、そして、好ましくは60分以下、より好ましくは50分以下、より好ましくは40分以下、より好ましくは35分以下である、<項1>~<項17>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3と同時に行う期間を有する場合の工程1における芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触する接触時間の合計が、好ましくは5分以上、より好ましくは10分以上、より好ましくは15分以上、より好ましくは20分以上、より好ましくは25分以上であり、そして、好ましくは90分以下、より好ましくは80分以下、より好ましくは70分以下、より好ましくは65分以下、より好ましくは60分以下、より好ましくは50分以下、より好ましくは40分以下、より好ましくは35分以下である、<項1>~<項18>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3と同時に行う期間を有する場合の工程2における芽胞形成菌とカチオン界面活性剤の接触時間の合計が、好ましくは5分以上、より好ましくは10分以上、より好ましくは15分以上、より好ましくは20分以上、より好ましくは25分以上であり、そして、好ましくは90分以下、より好ましくは80分以下、より好ましくは70分以下、より好ましくは65分以下、より好ましくは60分以下、より好ましくは50分以下、より好ましくは40分以下、より好ましくは35分以下である、<項1>~<項19>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3において芽胞形成菌を50℃以上に加温する時間が、3分以上90分以下である、<項1>~<項20>いずれか記載の殺芽方法。
工程3の温度が好ましくは50℃以上、より好ましくは55℃以上、より好ましくは60℃以上、より好ましくは65℃以上、より好ましくは70℃以上、より好ましくは75℃以上であり、そして、好ましくは250℃以下、より好ましくは200℃以下、より好ましくは150℃以下、より好ましくは120℃以下、より好ましくは100℃以下、より好ましくは90℃以下、より好ましくは85℃以下である、<項1>~<項21>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3の加温する時間が、好ましくは3分以上、より好ましくは5分以上、より好ましくは8分以上、より好ましくは10分以上、より好ましくは20分以上、より好ましくは25分以上であり、そして、好ましくは90分以下、より好ましくは70分以下、より好ましくは50分以下、より好ましくは40分以下、より好ましくは35分以下である、<項1>~<項22>のいずれか記載の殺芽方法。
前記工程3開始前に、前記工程1および工程2をそれぞれ独立してまたは同時に15℃以上50℃未満で行う期間を有する、<項1>~<項23>のいずれか記載の殺芽方法。
工程3開始前に、前記工程1および工程2をそれぞれ独立してまたは同時に1秒以上60分以下行う、<項1>~<項24>のいずれか記載の殺芽方法。
前記工程1および工程2を合計でそれぞれ独立してまたは同時に30分以上90分以下行う、<項1>~<項25>のいずれか記載の殺芽方法。
ジピコリン酸又はその塩およびカチオン界面活性剤を含有する、殺芽助剤組成物。
ジピコリン酸又はその塩を好ましくは0.05mM以上、より好ましくは0.5mM以上、より好ましくは3mM以上、そして、好ましくは200mM以下、より好ましくは100mM以下、より好ましくは30mM以下含有する液体組成物である、<項27>記載の殺芽助剤組成物。
カチオン界面活性剤を好ましくは0.1mM以上、より好ましくは0.5mM以上、より好ましくは3mM以上、そして、好ましくは1000mM以下、より好ましくは500mM以下、より好ましくは300mM以下含有する液体組成物である、<項27>または<項28>記載の殺芽助剤組成物。
ジピコリン酸又はその塩、カチオン界面活性剤、および水あるいは他の溶媒を含み、過酢酸、スルホペルオキシカルボン酸およびジカルボン酸ジエステルの含有量が、好ましくは1000ppm以下、より好ましくは100ppm以下、より好ましくは10ppm以下、より好ましくは1ppm以下、より好ましくは実質的に0ppmである、<項27>~<項29>のいずれか記載の殺芽助剤組成物。
芽胞形成菌:Bacillus subtilis 168株を供試菌株として用いた。芽胞形成菌の含有量が108 CFU/mLである水分散液を作製して実験に用いた。この水分散液中の芽胞形成菌は、顕微鏡観察により、95%以上が芽胞を形成していることを確認した後に実験に用いた。
ジピコリン酸(以下、DPAともいう)は試薬(和光純薬工業株式会社製、製造コード165-05342)を、溶媒は50mMにイオン交換水で調整したTris-HClbuffer(和光純薬工業株式会社製、製造コード318-90225)を、pH調整剤は水酸化ナトリウムを用いた。ジピコリン酸水溶液の調製は24℃にて行った。卓上型pHメーター型式9611(HORIBA製)にてジピコリン酸水溶液のpHを測定しながら、pH調整剤をジピコリン酸水溶液に滴下して、ジピコリン酸水溶液のpHを調整した。実施例において、特に断らない限り、pHは、24℃におけるpHである。特に断りがない限り、pH7(24℃)に調整し、実験を行った。
以下の界面活性剤を用いた。
ラウリルトリメチルアンモニウムクロライド(コータミン24P、花王(株)製)
アルキルベンジルジメチルアンモニウムクロライド(サニゾ―ルC花王(株)製)
ラウリル硫酸ナトリウム(エマール0、花王(株)製)
ポリオキシエチレン(3)ラウリルエーテル硫酸ナトリウム(エマール20C、花王(株)製)
ポリオキシエチレン(2)ラウリルエ一テル硫酸ナトリウム(エマールE-27C、花王(株)製)
ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム(ネオベックスG-15、花王(株)製)
ポリオキシエチレンラウリルエーテル(エマルゲン108、花王(株)製)
ポリオキシエチレン(23)ラウリルエーテル(エマルゲン123P、花王(株)製)
ポリオキシエチレンラウリルエーテル(エマルゲン130K、花王(株)製)
モノラウリン酸ポリエチレングリコール(エマノーン1112、花王(株)製)
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油(60E.O.) (エマノーンCH-60、花王(株)製)
ラウリルグルコシド(マイドール12、花王(株)製)
ドデシルトリメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C12トリメチルアンモニウムクロライド)
テトラデシルトリメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C14トリメチルアンモニウムクロライド)
ヘキサデシルトリメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C16トリメチルアンモニウムクロライド)
オクタデシルトリメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C18トリメチルアンモニウムクロライド)
ジオクタジメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C8ジメチルアンモニウムクロライド)
ジデシルジメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C10ジメチルアンモニウムクロライド)
ジドデシルジメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C12ジメチルアンモニウムクロライド)
ジテトラデシルジメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C14ジメチルアンモニウムクロライド)
ジヘキサデシルジメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C16ジメチルアンモニウムクロライド)
ジオクタデシルジメチルアンモニウムクロライド(東京化成製、以下C18ジメチルアンモニウムクロライド)
殺芽試験
表1に記載された10mMジピコリン酸水溶液(以下、DPA溶液ともいう)、0.10質量%ラウリルトリメチルアンモニウムクロライドと芽胞形成菌とを用いて、次の手順により殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表1に示す。(尚、表中、「%」とは「質量%」である。以下同じ。)
(2)工程1および工程2:上記(1)の試験液(pH7.0)を24℃で30分間静置した。
(3)工程3:上記(2)の後、試験液をそのまま80℃で30分間加温処理した。
加温工程には、Major Science社のアルミブロック恒温槽MD-01N-110を用いた。
(4)(3)で熱処理した試験液をLP水溶液(LP希釈液(ダイゴ、日本製薬(株)製))で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(5)(4)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
実施例1-1の手順(1)において、終濃度10 mM DPAおよび終濃度0.1質量%カチオン界面活性剤を含む水溶液の代わりに、表1に示した水溶液を用いた。それ以外は実施例1-1と同様に行った。
DPA水溶液に、表2に示す各界面活性剤水溶液を混合した水溶液を用いた。水溶液中のDPAの終濃度は10mM、各界面活性剤の終濃度は0.1質量%であった。実施例1-1と同様の条件にて、殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表2に示す。
DPA水溶液に、表3に示す各界面活性剤水溶液を混合した水溶液を用いた。水溶液中のDPAと各界面活性剤の終濃度は10mMであった。実施例1-1と同様の条件にて殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表3に示す。
DPA水溶液に、表4に示す各界面活性剤水溶液を混合した水溶液を用いた。水溶液中のDPAの終濃度は10mM、各界面活性剤の終濃度は表4に示す濃度であった。実施例1-1と同様の条件にて殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表4に示す。
DPA水溶液に、C18トリメチルアンモニウムクロライド水溶液を混合した水溶液を用いた。水溶液中のDPAの終濃度は10mM、C18トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は20mMであった。手順(3)における加温温度を表5に示す温度とした。実施例1-1と同様の条件にて殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表5に示す。
DPA水溶液に、C18トリメチルアンモニウムクロライド水溶液を混合した水溶液を用いた。水溶液中のDPAの終濃度は10mM、C18トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は1mMであった。手順(1)および(2)における試験液のpH(24℃)を表6に示す値とした。実施例1-1と同様の条件にて殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表6に示す。実施例6-2はフタル酸と水酸化ナトリウムの緩衝系を、実施例6-3はホウ酸と水酸化ナトリウムの緩衝系を、実施例6-4は塩化カリウムと水酸化ナトリウムの緩衝系を用いた。
―手順―
(1)工程1:芽胞液100 μLを、DPA水溶液900 μLと混合し、試験液(pH7.0)とした。DPAの終濃度は10mMであった。
(2)試験液を30分間24℃で静置した。
(3)下記方法で芽胞からDPA溶液を除去した。工程1の試験液を遠心分離器(株式会社クボタ製テーブルトップマイクロ冷却遠心機3500、以下同じ)で15krpm5分間の条件で遠心分離操作を行い、上清を取り除いた。
(4)工程2:上清を取り除いて、ただちに、C16トリメチルアンモニウムクロライド水溶液を終濃度10mMとなるように1mL加え、24℃で30分間静置した。
(5)工程3:上記(4)の後、試験液を80℃で30分間加温処理した。
(6)(5)の試験液を滅菌水で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(7)(6)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
―手順―
(1)工程2:芽胞液100 μLを、C16トリメチルアンモニウムクロライド水溶液900 μLと混合し、試験液(pH7.0)とした。C16トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は10mMであった。
(2)試験液を30分間24℃で静置した。
(3)下記方法で、芽胞からC16トリメチルアンモニウムクロライド溶液を除去した。(2)の試験液を遠心分離器で15krpm5分間の条件で遠心分離操作を行い、上清を取り除いた。
(4)工程1:上清を取り除いて、ただちに、DPA水溶液を終濃度10mMとなるように1mL加え、24℃で30分間静置した。
(5)上記(4)の後、試験液を80℃で30分間加温処理した。
(6)(5)の試験液を滅菌水で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(7)(6)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
―手順―
(1)工程1および工程2:芽胞液100 μLを、DPAとC16トリメチルアンモニウムクロライドの水溶液900 μLとを混合し、試験液(pH7.0)とした。DPAとC16トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は10mMであった。
(2)(1)の後、ただちに、試験液を80℃で30分間加温処理した。
(3)(2)の試験液を滅菌水で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(4)(3)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
―手順―
(1)芽胞液100 μLをDPA溶液900 μLと混合し、試験液(pH7.0)とした。DPAの終濃度は10mMであった。
(2)(1)の後、ただちに、試験液を80℃で30分間加温処理した。
(3)下記方法で、芽胞からDPA溶液を除去した。
(2)の試験液を遠心分離器で15krpm5分間の条件で遠心分離操作を行い、上清を取り除いた。
(4)上清を取り除いて、ただちに、C16トリメチルアンモニウムクロライド水溶液を終濃度10mMとなるように1mL加え、24℃で30分間静置した。
(5)(4)の試験液を滅菌水で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(6)(5)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
―手順―
(1)工程3:芽胞液100 μLを、80℃で30分間加温処理した。
(2)工程2:(1)の後、室温まで冷却後、ただちに、C16トリメチルアンモニウムクロライド水溶液900 μLと混合し、30分静置し、試験液(pH7.0)とした。C16トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は10mMであった。
(3)(2)の試験液を滅菌水で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(4)(3)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
実施例3-1と同様に殺芽試験を行った。
DPA水溶液ではなく、同濃度のイソフタル酸水溶液を用いた。それ以外は実施例8-1と同様に行った。
(1)工程1および工程2:芽胞液100 μLを、DPA水溶液800μLと、C16トリメチルアンモニウムクロライドの水溶液100μLと、各々混合し、試験液(pH7.0)とした。DPAとC16トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は10mMであった。
(2)工程3:上記(1)の後、すぐに試験液をそのまま80℃で30分間加温処理した。加温工程には、Major Science社のアルミブロック恒温槽MD-01N-110を用いた。
(3)上記(2)で熱処理した試験液をLP水溶液(LP希釈液(ダイゴ、日本製薬(株)製))で段階希釈し、それぞれの希釈液をLB寒天培地(BD社製)に100μL塗抹し、37℃、16時間培養した。
(4)(3)の培養後、生えてきたコロニー数にて、生存菌数X(CFU/mL)を求めた。
実施例9-1と同様に操作を行ったが、工程3の加温はせず、室温で30分静置した。
実施例9-1の(1)工程1および工程2のDPA及びカチオン界面活性剤水溶液に代えて、芽胞液を精製水と接触させた。工程3の加温は実施例9-1と同様に実施した。
DPA水溶液に、C16トリメチルアンモニウムクロライド水溶液を混合した水溶液を用いた。DPAの終濃度は表10に示す濃度であり、C16トリメチルアンモニウムクロライドの終濃度は10mMであった。実施例1-1と同様の条件にて殺芽試験を行い、殺芽効果を評価した。評価結果を表10に示す。
Claims (12)
- 下記の工程1、工程2、および工程3を含む殺芽方法:
工程1:芽胞形成菌とジピコリン酸又はその塩とを接触させておく工程;
工程2:芽胞形成菌とカチオン界面活性剤とを接触させておく工程;および
工程3:芽胞形成菌を50℃以上に加温する工程
(但し、工程1及び工程2を開始後に工程3を終了するものとする)。 - 前記工程1、工程2、および工程3を同時に行う期間を有する、請求項1記載の殺芽方法。
- 前記カチオン界面活性剤が、第4級アンモニウム塩である、請求項1または2記載の殺芽方法。
- 前記第4級アンモニウム塩が、アルキルトリメチルアンモニウム塩、ジアルキルジメチルアンモニウム塩及びベンザルコニウム塩からなる群より選択される少なくとも1種である、請求項3記載の殺芽方法。
- 前記工程1および工程2において、芽胞形成菌、ジピコリン酸又はその塩、およびカチオン界面活性剤を液中で接触させておく、請求項1~5のいずれか1項記載の殺芽方法。
- 液中のジピコリン酸又はその塩の含有量が0.05mM以上200mM以下である、請求項6記載の殺芽方法。
- 液中のカチオン界面活性剤の含有量が0.1mM以上1000mM以下である、請求項6または7記載の殺芽方法。
- 前記工程3において芽胞形成菌を50℃以上に加温する時間が、3分以上90分以下である、請求項1~8のいずれか1項記載の殺芽方法。
- ジピコリン酸又はその塩およびカチオン界面活性剤を含有する、殺芽助剤組成物。
- ジピコリン酸又はその塩を0.05mM以上200mM以下含有する液体組成物である、請求項10記載の殺芽助剤組成物。
- カチオン界面活性剤を0.1mM以上1000mM以下含有する液体組成物である、請求項10または11記載の殺芽助剤組成物。
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