WO2017011929A1 - 检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备检测肝脏炎症和纤维化程度产品中的应用 - Google Patents

Abstract

公开了检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备检测肝脏炎症和纤维化程度产品中的应用。血清中angptl2含量与慢性乙型肝炎病毒感染患者肝脏的炎症程度及纤维化程度具有相关性，angptl2含量可作为非侵袭性单一指标判断肝脏炎症程度及纤维化程度。检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质或其与检测肝病患者的其他常见临床指标的物质联合可用于制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度的产品、诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检查的产品、或筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者的产品。

Description

检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备检测肝脏炎症和纤维化程度产品中的应用 技术领域

本发明涉及生物医学领域中检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备检测肝脏炎症和纤维化程度产品中的应用。

背景技术

亚太及美国肝病协会关于慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者治疗决策指南推荐：ALT≥2ULN、HBV DNA≥20000IU/mL(HBeAg阳性者)或者HBV DNA≥2000IU/mL(HBeAg阴性者)的慢性HBV感染者需给予抗病毒治疗。而对于不满足上述界值的灰区患者，则需肝脏穿刺活检病理结果的辅助确定治疗方案。肝穿刺病理显示中重度炎症或明显纤维化者需立即进行抗病毒治疗。但肝脏穿刺活检是侵袭性检查，存在判读和取样误差，且有出血、胆漏等风险，不适用于应用于所有患者。而已有的非侵袭性方法仅适用于肝脏纤维化程度的判断，且研究人群仅关注慢性乙型病毒性肝炎患者，不适用于全部慢性HBV感染患者治疗决策的判断。因此，临床亟需开发非侵袭性方法辅助临床治疗决策的制定。

血管生成素样蛋白2(Angiopoetin-like protein 2，angptl2)是血管生成素样白家族成员之一，能通过增加金属蛋白酶的表达及活性从而调节细胞外基质的沉积及降解。血管生成素样蛋白的功能性受体整合素广泛表达于巨噬细胞、血管内皮细胞、脂肪细表面。

发明公开

本发明所要解决的技术问题是如何检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者肝脏的炎症程度及纤维化程度，并确定患者的治疗决策。

为解决上述技术问题，本发明首先提供了下述1)-8)中任一用途：

1)检测血清血管生成素样蛋白2(angptl2)含量的物质在制备检测人肝脏炎症和/或纤维化产品中的应用；

2)检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、HBV DNA含量和丙氨酸转氨酶(ALT)含量的物质在制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品中的应用；

3)以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品中的应用；

4)下述Y1-Y3中任一应用：

Y1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者产品中的应用；

Y2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在制备筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺 肝病患者产品中的应用；

Y3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和纤维化程度方法中所用的物质在制备筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者产品中的应用；

5)下述Z1-Z3中任一应用：

Z1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品中的应用；

Z2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在制备诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品中的应用；

Z3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在制备诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品中的应用；

6)下述L1-L3中任一应用：

L1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度中的应用；

L2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度中的应用；

L3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化方法中所用的物质在检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度中的应用；

7)下述M1-M3中任一应用：

M1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者中的应用；

M2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者中的应用；

M3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者中的应用；

8)下述N1-N3中任一应用：

N1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测中的应用；

N2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测中的应用；

N3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤 维化程度方法中所用的物质在诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测中的应用。

为解决上述技术问题，本发明还提供了下述P1或P2的产品：

P1、检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品，为所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质；

P2、检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品，为所述检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、HBV DNA含量和ALT含量的物质。

本发明中，所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质可包括检测血清血管生成素样蛋白2含量的试剂和/或仪器，如通过酶联免疫反应检测血清血管生成素样蛋白2含量所需的试剂和仪器。具体来说，检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质可包括血清血管生成素样蛋白2、血清血管生成素样蛋白2抗体和进行酶联免疫吸附实验(ELISA)所需要的其它试剂和仪器，当然，上述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质可只由血清血管生成素样蛋白2和血清血管生成素样蛋白2抗体组成，也可只由血清血管生成素样蛋白2组成，也可只由血清血管生成素样蛋白2抗体组成。所述血清血管生成素样蛋白2、所述血清血管生成素样蛋白2抗体和进行酶联免疫吸附实验(ELISA)所需要的其它试剂均可独立包装。

本发明中，所述检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、HBV DNA含量和ALT含量的物质可由检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质、检测乙型肝炎e抗原的物质、检测HBV DNA含量的物质和检测ALT含量的物质组成。检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质、检测乙型肝炎e抗原的物质、检测HBV DNA含量的物质和检测ALT含量的物质均可包括试剂和/或试剂盒和/或仪器。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2抗体可为血清血管生成素样蛋白2单克隆抗体和/或血清血管生成素样蛋白2多克隆抗体。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2可为标记物标记的血清血管生成素样蛋白2。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2具体可为人血清血管生成素样蛋白2。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2可为氨基酸序列是序列表中序列1的蛋白质。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2抗体可为用生物素标记的血清血管生成素样蛋白2抗体。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2抗体可识别氨基酸序列是序列表中SEQ ID No.1的蛋白质。

本发明中，所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质可为所述血清血管生成素样蛋白2和/或所述血清血管生成素样蛋白2抗体。

本发明中，所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质可为通过酶联免疫反应检测所述血清血管生成素样蛋白2含量所需的试剂和仪器。

本发明中，所述人具体可为慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染的肝病患者。所述肝病患者可为慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者。

本发明中，所述血清血管生成素样蛋白2含量具体可为人血清或血浆中的血清血管生成素样蛋白2浓度；所述HBV DNA含量具体可为人血清或血浆中的HBV DNA浓度；所述ALT含量具体可为人血清或血浆中的ALT浓度。

本发明中，所述检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品可为用于检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度的各种试剂或试剂盒。所述诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品可为用于诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测的各种试剂或试剂盒。所述筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者产品可为用于筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者的各种试剂或试剂盒。

在实际应用中，可将检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质与检测其他指标的物质联合在一起制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度的产品、诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测的产品或筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者的产品。其他指标可为肝病患者的常见临床指标，如人血清或血浆中HBV DNA含量、丙氨酸转氨酶(ALT)含量、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙肝表面抗原(HBsAg)、血小板(PLT)计数、谷草转氨酶(AST)含量、谷氨酰转肽酶(GGT)含量、白蛋白(Abumin)含量、总胆红素(Tbil)含量、凝血酶原时间(PT)，也可为纤维化模型，如APRI、FIB-4和AAR。

检测其他指标的物质可为利用常规方法检测时用到的试剂和/或仪器。所述产品可为试剂或试剂盒，还可为由试剂或试剂盒与仪器组成的系统。

本发明中，根据血清血管生成素样蛋白2含量确定肝病患者治疗方案的方法如下：检测慢性HBV感染患者血清血管生成素样蛋白2含量，如果慢性HBV感染患者血清血管生成素样蛋白2含量≥7.36ng/ml，该患者需立即进行抗病毒治疗，如果肝病患者血清血管生成素样蛋白2含量≤3.95ng/ml，该患者不需治疗，如果肝病患者血清血管生成素样蛋白2含量大于3.95ng/ml小于7.36ng/ml，该患者需进行肝穿来确定治疗方案。

确定慢性HBV感染患者治疗方案也可先检测肝病患者HBV DNA含量、丙氨酸转氨酶(ALT)含量以及HBeAg状态，如果患者不满足亚太及美国肝病协会关于慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者治疗决策指南中的立即治疗标准和随访标准，根据血清血管生成素样蛋白2含量确定肝病患者治疗方案的方法确定肝病患者治疗方案。亚太及美国肝病学会关于慢性乙型病毒性肝炎指南中的立即治疗标准为HBeAg为阳性、HBV DNA≥20000IU/mL、ALT≥2ULN或HbeAg为阴性、HBV DNA≥2000IU/mL、ALT≥2ULN；亚太及美国肝病协会关于慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者治疗决策指南中的随访标准为HBeAg为阳性、HBV DNA≥2×10⁷IU/mL、 ALT<ULN或HBeAg为阴性、HBV DNA<2000IU/mL、ALT<ULN。

所述肝穿为将肝脏穿刺取肝脏组织做病理学检查。

所述肝脏炎症程度和所述肝脏纤维化程度均按照Ishak标准进行分级。所述肝脏炎症程度可为轻度和/或中重度；所述轻度炎症的肝脏活动指数(hepatic activity index，HAI)为0-4(即0≤HAI≤4)，肝脏轻度炎症的肝病患者的血清血管生成素样蛋白2含量≤3.95ng/ml，所述中重度炎症的肝脏活动指数大于等于5(即HAI≥5)，肝脏中重度炎症的肝病患者的血清血管生成素样蛋白2含量≥7.36ng/ml。所述肝脏纤维化程度可为明显纤维化和/或非明显纤维化；所述明显纤维化为Fibrosis大于等于3(即F≥3)，肝脏明显纤维化的肝病患者的血清血管生成素样蛋白2含量≥7.36ng/ml，所述非明显纤维化为Fibrosis为0-2(即0≤F≤2)，肝脏非明显纤维化的肝病患者的血清血管生成素样蛋白2含量≤3.95ng/ml。

附图说明

图1为血清中angptl2含量与肝脏炎症程度及纤维化程度的关系。其中，A为angptl2含量与肝脏炎症程度的关系；B为angptl2含量与肝脏纤维化程度的关系。

图2为单一指标angptl2诊断需肝穿确定治疗决策组患者的中重度炎症或明显纤维化的ROC曲线。其中，1表示界值3.95ng/ml，2表示界值7.36ng/ml。

图3为173例为不符合亚太及美国肝病学会关于慢性乙型病毒性肝炎指南立即治疗标准和随访标准的灰区患者的治疗决策流程图。

实施发明的最佳方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

下述实施例中所涉及的名词解释：

受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)反映了灵敏度与特异度间的平衡，ROC曲线下面积是重要的试验准确度指标，ROC曲线下面积越大，试验的诊断价值越大。

灵敏度(真阳性率)：实际有病而按试验标准被正确判断为有病的百分率，灵敏度越大越好，理想灵敏度为100％。

特异度(真阴性率)：实际无病而按试验标准被正确判断为无病的百分率，特异度越大越好，理想特异度为100％。

下述实施例中的统计分析均采用SPSS17.0软件进行。计量资料用均数±标准差表示，采用Kruskal-Wallis and Mann-Whitney U-tests进行分析；分类资料采用Chi-squared test进行分析。变量与病理分级之间的相关性采用Spearman’s rank test进行分析。二元logistic回归用于确定独立影响因素。 变量对炎症纤维化的诊断性能用ROC分析进行评价，表示为曲线下面积(area under the curve，AUC)，敏感性，特异性，阳性预测率(试验诊断为阳性者，确为患者的概率)，阴性预测率(试验诊断为阴性者，确为非患者的概率)，准确率。Leave-one-out交叉验证法对变量的诊断稳健性进行验证。

实施例1、angptl2可以用来确定慢性HBV感染患者的治疗决策

1.研究对象：(1)病例来源：309例慢性HBV(hepatitis B virus，乙型肝炎病毒)感染患者。(2)纳入标准：年龄18-65岁；HBsAg阳性史半年及以上(血清中HBsAg的定量检测采用用美国罗氏公司试剂盒(Roche

HBsAg II assay))。(3)排除标准：合并慢性丙型病毒性肝炎、艾滋病感染者，合并遗传性肝病、药物肝、非酒精性脂肪肝等基本的患者；原发性肝癌、肝硬化患者及孕妇。所有研究对象入组前均签署知情同意书。

2、angptl2可以用来确定慢性HBV感染患者的治疗决策

肝穿刺组织病理学检查：将309例慢性HBV感染患者在彩色多普勒引导下按照标准的肝脏病理穿刺标准进行。肝组织穿刺标本的长度2.0cm以上，包含至少11个完整的汇管区。肝穿刺标本经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片后，进行常规HE染色、特殊染色(包括网状纤维、Masson三色染色)和免疫组化染色(HBsAg、HBcAg及CK7)。病理标本统一进行中心化盲法判读。肝脏炎症程度和肝脏纤维化程度均按照Ishak标准进行分级。肝脏炎症程度为轻度和中重度；轻度炎症的肝脏活动指数(hepatic activity index，HAI)为0-4(即0≤HAI≤4)，中重度炎症的肝脏活动指数大于等于5(即HAI≥5)。肝脏纤维化程度为明显纤维化和非明显纤维化；明显纤维化为Fibrosis大于等于3(即F≥3)，非明显纤维化为Fibrosis为0-2(即0≤F≤2)。

309例慢性HBV感染患者中有11例患者的肝穿刺活组织检查(肝活检)不合格(肝穿组织小于2.0CM，或少于11个汇管区)，其余298例患者肝活检合格。

血液学及生化检查均以病人在肝穿刺4周内的结果为准。

血清中HBV DNA的定量检测采用美国罗氏公司COBAS AmpliPrep/COBAS TaqMan进行分析(检测范围：2.0×101–1.7×108IU/ml)。血清中乙型肝炎e抗原及乙型肝炎e抗体测定采用美国Roche

assays进行定性分析。血清中丙氨酸转氨酶(ALT)及血清中谷草转氨酶(AST)的定量均采用全自动生化分析仪进行检测。

根据亚太及美国肝病学会关于慢性乙型病毒性肝炎指南制定临床治疗决策标准(见表1)，将分别符合立即治疗标准、随访标准和肝穿标准的患者分为立即治疗组、随访组和需肝穿确定治疗决策组。

在这298例活检标本合格的患者中，101例符合立即治疗标准(HBeAg(+)、HBVDNA≥20000、ALT≥2ULN或HBeAg(-)、HBV DNA≥2000、ALT≥2ULN)，属于 立即治疗组，该组的患者应立即进行抗病毒治疗；24例符合随访标准(HBeAg(+)、HBVDNA≥2×107、ALT<ULN或HBeAg(-)、HBV DNA<2000、ALT<ULN)，属于随访组，该组的患者不需治疗；其余173例为不符合亚太及美国肝病学会关于慢性乙型病毒性肝炎指南立即治疗标准和随访标准的灰区患者，属于需肝穿确定治疗决策组，按照亚太及美国肝病学会关于慢性乙型病毒性肝炎指南需采用肝脏穿刺制定治疗决策。需肝穿确定治疗决策组患者血清中HBV DNA、HBsAg、ALT和AST的含量较随访组高较立即治疗组低。需肝穿确定治疗决策组的173例患者中0≤F≤2占115例(66.5％)，F≥3占58例(33.5％),0≤HAI≤4占115例(66.5％),HAI≥5占58例(33.5％)。

表1、根据亚太及美国肝病学会关于慢性乙型病毒性肝炎指南制定的治疗决策标准

测定298例活检标本合格的患者血液中血清血管生成素样蛋白2(血清血管生成素样蛋白2的氨基酸序列如序列表中序列1所示)的含量：采用ELISA试剂盒——Human ANGPTL2Assay kit(Immuno-Biological Laboratories Co.,Ltd,Japan)(Human ANGPTL2Assay kit中含有识别血清血管生成素样蛋白2的抗体和作为标准品的血清血管生成素样蛋白2)进行分析。为了避免血液反复冻融，血液标本在采集后即被分装好，并存储于-80℃冰箱。所有检测2周内完成。为了保障检测值的可信度，复孔间变异系数大于10％及标准曲R方小于0.99的均需重新测量。测量范围0.05ng/ml至3.5ng/ml，样本均做10倍稀释。

各组患者的临床特征见表2。

表2、患者的临床特征

分析血清中angptl2含量与肝脏炎症及纤维化的关系，结果如图1所示。血清中angptl2含量随肝脏炎症及纤维化水平的增高而增高(P＝0.000)，并且血清中angptl2含量与肝脏炎症分级的相关性较好，p＝0.000,spearman rho＝0.350，在155例0≤HAI≤4的患者中，angptl2含量4.55±2.01ng/ml，在143例HAI≥5的患者中，angptl2含量为5.68±2.37ng/ml；血清中angptl2含量与肝脏纤维化分级的相关性较好，P＝0.000,spearman rho＝0.352，在200例0≤F≤2的患者中，angptl2含量为4.52±1.75ng/ml，在98例F≥3的患者中，angptl2含量为6.27±2.69ng/ml。仅用血清中angptl2含量作为单一指标诊断肝脏明显纤维化(即F≥3)的受试者工作曲线下面积(AUC)为0.707，而用既往的纤维化模型APRI、FIB-4和AAR诊断肝脏明显纤维化的AUC分别为0.672、0.661和0.553(表3)，表明用血清中angptl2含量作为单一指标诊断肝脏明显纤维化要优于纤维化模型APRI、FIB-4和AAR。

表3、Angptl2及其它模型诊断肝脏明显纤维化的比较

ALT分层分析显示：ALT正常(ALT＜ULN)时，肝脏中重度炎症(HAI≥5)及明显纤维化(F≥3)患者血清中angptl2的含量分别较轻度炎症(0≤HAI≤4)及非明显纤维化(0≤F≤2)患者高(P＝0.025，P＝0.024)。ULN≤ALT≤2ULN及ALT≥2ULN时，患者血清中angptl2的含量也分别随肝脏炎症及纤维化严重程度而升高(见表4)。

表4、在ALT不同分层时，angptl2与肝脏炎症纤维化的关系

在需肝穿确定治疗决策组的173例患者中，单因素分析显示肝脏中重度炎症(HAI≥5)及明显纤维化(F≥3)患者血清中angptl2含量、AST含量、GGT含量和PT分别明显高于轻度炎症(0≤HAI≤4)及非明显纤维化(0≤F≤2)患者血清中angptl2、AST、GGT和PT，而其HBsAg、Albumin含量明显较低(表5)，表明血清中angptl2含量、AST含量、GGT含量、PT、HBsAg、Albumin含量与肝脏炎症和纤维化程度具有相关性。对血清中angptl2含量、AST含量、GGT含量、PT、HBsAg、Albumin含量以及临床普遍认为有影响的因素(年龄大于40岁、性别、体重指数大于24))进行多因素分析发现，高水平angptl2能独立预测肝脏中重度炎症(HAI≥5)或肝脏明显纤维化(F≥3)，P＝0.015，OR＝0.788(95％CI：0.650,0.955)。

表5、需肝穿确定治疗决策组中，angptl2与肝脏炎症纤维化的单因素及多因素分析

针对需肝穿确定治疗决策组的173例患者，单一指标angptl2诊断中重度炎症或明显纤维化的AUC为0.691(图2)。进一步leave-one-out(留一)交叉验证法提示，单一指标能正确判断出64.0％的患者。当以该指标的浓度7.36ng/ml为界值诊断中重度炎症及明显纤维化时，特异性(真阴性率)及阳性预测率(试验诊断为阳性者，确为患者的概率)分别为91.76％、72％；以3.95ng/ml为界值排除中重度炎症及明显纤维化诊断时，特异性(真阴性率)及阴性预测率(试验诊断为阴性者，确为非患者的概率)分别为78.41％、70.8％。可以将血清中angptl2含量≥7.36ng/ml作为中重度炎症或明显纤维化界值，将血清中angptl2含量≤3.95ng/ml作为排除中重度炎症或明显纤维化界值，需肝穿确定治疗决策组的173例患者中有86例患者(49.7％)的患者不需要做肝穿刺即可确定治疗方案(图3)，其中血清中angptl2含量≥7.36ng/ml的21例患者应立即进行抗病毒治疗；血清中angptl2含量≤3.95ng/ml的65例患者不需治疗；血清中血清血管生成素样蛋白2含量大于3.95ng/ml小于7.36ng/ml的87患者需进行进一步的肝穿刺来确定治疗方案。本发明通过检查血清angptl2的含量来制定慢性HBV感染者的治疗决策，可避免49.7％的患者进行临床肝穿刺。

工业应用

实验证明，血清中angptl2含量与肝脏炎症程度及纤维化程度均相关：血清中angptl2含量随肝脏炎症程度及纤维化程度的增高而增高(P＝0.000)，并且血清中angptl2含量与肝脏炎症分级的相关性较好，p＝0.000,spearman rho＝0.352；血清中angptl2含量与肝脏纤维化分级的相关性较好，P＝0.000,spearman rho＝0.389。ALT正常(ALT＜ULN)时，肝脏中重度炎症(HAI≥5)及明显纤维化(F≥3)患者血清中angptl2的含量分别较轻度炎症(0≤HAI≤4) 及非明显纤维化(0≤F≤2)患者高(P＝0.025，P＝0.024)。ULN≤ALT≤2ULN及ALT≥2ULN时，患者血清中angptl2的含量也分别随肝脏炎症及纤维化严重程度而升高。

实验证明，用血清中angptl2含量作为单一指标诊断肝脏明显纤维化要优于纤维化模型APRI、FIB-4和AAR：针对慢性乙型肝炎病毒感染患者，仅用血清中angptl2含量作为单一指标诊断肝脏明显纤维化的受试者工作曲线下面积(AUC)为0.707，而用纤维化模型APRI、FIB-4和AAR诊断肝脏明显纤维化的AUC分别为0.672、0.661和0.553。angptl2能独立预测肝脏中重度炎症(HAI≥5)或肝脏纤维化(F≥3)，P＝0.015，OR＝0.788(95％CI：0.650,0.955)。

实验证明，针对不满足亚太及美国肝病协会关于慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者治疗决策指南中的立即治疗标准和随访标准的慢性乙型肝炎病毒感染患者，单一指标angptl2诊断中重度炎症或明显纤维化的AUC为0.691，“交叉验证留一法”验证angptl2诊断中重度炎症或明显纤维化的稳健性，证实单一指标能正确判断出64.0％的患者。当以angptl2含量是7.36ng/ml为界值诊断中重度炎症及明显纤维化时，特异性(真阴性率，即实际未患病而被诊断为非患者的概率)及阳性预测率(试验诊断为阳性者，确为患者的概率)分别为91.76％、72％；以angptl2含量是3.95ng/ml为界值排除中重度炎症及明显纤维化诊断时，特异性(真阴性率，即实际未患病而被诊断为非患者的概率)及阴性预测率(试验诊断为阴性者，确为阴性的概率)分别为78.41％、70.8％。

本发明通过检查血清angptl2的含量来制定慢性HBV感染者的治疗决策，可避免49.7％的患者进行临床肝穿刺。

实验证明，angptl2含量可作为非侵袭性单一指标判断肝脏炎症程度及纤维化程度，可以用angptl2含量来判断慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者肝脏的炎症程度及纤维化程度，也可以用angptl2含量与其他肝病患者的常见临床指标来判断慢性乙型肝炎病毒感染患者肝脏的炎症程度及纤维化程度；可以将检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度的产品、诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测的产品或筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者的产品，也可以将检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质与检测其他肝病患者的常见临床指标的物质联合在一起制备制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度的产品、诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测的产品或筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者的产品，并进一步确定患者的治疗决策。

Claims (11)

1. 检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品中的应用。
2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质为血清血管生成素样蛋白2和/或血清血管生成素样蛋白2抗体。
3. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质为通过酶联免疫反应检测血清血管生成素样蛋白2含量所需的试剂和仪器。
4. 检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品中的应用。
5. 以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在制备检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品中的应用。
6. 下述Y1-Y3中任一应用：

   Y1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者产品中的应用；

   Y2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在制备筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者产品中的应用；

   Y3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在制备筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者产品中的应用。
7. 下述Z1-Z3中任一应用：

   Z1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在制备诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品中的应用；

   Z2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在制备诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品中的应用；

   Z3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在制备诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测产品中的应用。
8. 下述L1-L3中任一应用：

   L1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度中的应用；

   L2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度中的应用；

   L3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化方法中所用的物质在检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度中的应用。
9. 下述M1-M3中任一应用：

   M1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者中的应用；

   M2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者中的应用；

   M3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在筛查或辅助筛查是否需进行肝穿刺肝病患者中的应用。
10. 下述N1-N3中任一应用：

    N1、检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质在诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测中的应用；

    N2、检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质在诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测中的应用；

    N3、以血清血管生成素样蛋白2作为标志物的检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度方法中所用的物质在诊断或辅助诊断肝病患者是否需进行肝穿刺检测中的应用。
11. 下述P1或P2：

    P1、检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品，为权利要求1-3中任一所述检测血清血管生成素样蛋白2含量的物质；

    P2、检测人肝脏炎症程度和/或纤维化程度产品，为权利要求4所述检测血清血管生成素样蛋白2含量、乙型肝炎e抗原、乙型肝炎病毒DNA含量和丙氨酸转氨酶含量的物质。

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