WO2016012632A1 - Sales de tungsteno (vi) para su uso en el tratamiento de la infertilidad, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, así como para mejorar la eficacia de las técnicas de reproducción asistida - Google Patents

Sales de tungsteno (vi) para su uso en el tratamiento de la infertilidad, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, así como para mejorar la eficacia de las técnicas de reproducción asistida Download PDF

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tungsten salt
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Definitions

  • Tungsten salts (VI) for use in the treatment of infertility, to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal, as well as to improve the effectiveness of assisted reproduction techniques DESCRIPTION
  • the present invention relates to tungsten salts (VI) and compositions containing them, for use in the treatment of infertility, to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal, as well as to improve the efficacy of an assisted reproduction technique applied to a mammal.
  • VI tungsten salts
  • Fertility in mammals is a multi-stage process that naturally is not totally efficient. Factors such as age, eating habits or lifestyle, among others, modulate the success of this process. Thus, it is known, for example, that the pregnancy rate in women aged 20 to 24 is approximately 86%, while in women aged 35 to 32, up to 50% decline [Management of the Infertile Woman for h elen A. Thistle; The Fertility Sourcebook by M. Sara Rosenthal, ASAS Summary of FAIR 2012]. Other factors, such as being overweight or underweight, are also responsible for delays in achieving a pregnancy naturally or even for the impossibility of achieving it [Fertile Steril 2013; 100: 631-7].
  • infertility causes of infertility among women include ovulatonic dysfunctions, reproductive tract pathologies, reduction in oocyte quality and follicular depletion inherent in aging.
  • infertility also called idiopathic infertility, of which one of the possible causes is related to deficiencies in the implementation process.
  • Follicular development, ovulation, migration of the immature ovum (oocyte), as well as the subsequent conception and implantation of the zygote in the uterine wall is regulated by hormonal secretions of certain endocrine organs such as the pituitary gland, the hypothalamus and the gland thyroid.
  • hormone secretions of certain endocrine organs such as the pituitary gland, the hypothalamus and the gland thyroid.
  • endocrine organs such as the pituitary gland, the hypothalamus and the gland thyroid.
  • Different treatments for female infertility are known among which are the administration of medications to treat hormonal problems. which involve alterations of ovulation, such as, for example, clomiphene citrate or gonadotropins.
  • vitamin supplements especially vitamin B, vitamin C, vitamin E and folic acid, mineral supplements such as salts or complexes of iron, zinc, or selenium, essential fatty acids ( omega 3), as well as plant extracts such as Chasteberry (Vitex agnus chastus), Damiana, licorice, Red Clover flower, Agnocasto Berry, Black Cohosh, Dong Quai (Angelica sinensis), Yam or Sweet Potato (Dioscorea villosa), False Unicorn Root, green tea, Nettles (Urtica dioica), Wild Oats (Avena sativa), Dandelion (Taraxacum officinale), etc. although for none of these treatments its effectiveness has been clearly demonstrated.
  • mineral supplements such as salts or complexes of iron, zinc, or selenium, essential fatty acids ( omega 3), as well as plant extracts such as Chasteberry (Vitex agnus chastus), Damiana, licor
  • Tungsten is found in trace amounts in animals and plants. For example, in plants, contents up to a maximum of 100 mg / kg have been described [Gbaruko B. C. &
  • tungsten salt VI
  • a tungsten salt or a solvate of said salt is effective in treating infertility in a non-diabetic female mammal, to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal, and to increase the effectiveness of assisted reproduction techniques applied to a mammal.
  • sodium tungstate can partially reverse alterations in reproductive function in diabetic female mice because it produces a normalization of blood glucose levels
  • sodium tungstate can have an effect on the function of the female reproductive system in non-diabetic female mammals, presenting itself as a treatment for infertility and / or favoring fertility and normal reproduction in non-diabetic female mammals.
  • a first aspect of the present invention relates to a tungsten salt (VI) or a solvate thereof, for use in the treatment of infertility in a non-diabetic female mammal, or to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal.
  • VI tungsten salt
  • a second aspect of the present invention relates to a composition
  • a composition comprising a tungsten salt (VI) or a solvate thereof in a concentration greater than 100 mg / kg, as well as at least one pharmaceutically or dietetically acceptable excipient or carrier, for the treatment of infertility in a female mammal not diabetic or to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal.
  • VI tungsten salt
  • a third aspect of the invention relates to the use of a tungsten salt (VI) or a solvate thereof, as defined above, for the preparation of a medicament for the treatment of infertility in a non-diabetic female mammal or for promote fertility in a non-diabetic female mammal.
  • VI tungsten salt
  • a fourth aspect of the invention relates to a method of infertility treatment or to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal, which comprises the administration of a therapeutically effective amount of a tungsten (VI) salt or a solvate thereof, as defined above.
  • the present invention relates to a tungsten salt (VI) or a solvate thereof, for the treatment of infertility in a non-diabetic female mammal or to favor and / or Contribute to normal fertility and reproduction in a non-diabetic female mammal.
  • VI tungsten salt
  • promote fertility and normal reproduction or “contribute to fertility and normal reproduction” refers to a contribution to normal fertility and reproduction, or improve fertility and normal reproduction (reducing the time to achieve pregnancy ), meaning "normal fertility and reproduction” a state of fertility in which it is achieved, following the definitions provided previously:
  • an infertility situation a pregnancy after a period of 12 months of regular and unprotected sex. This includes the need to restore and / or enhance ovulation, improve the quality of the oocyte and the embryo, increase the implantation of the zygote in the uterine wall, regulate an alteration of the hypothalamic-pituitary-ovarian axis, including polycystic ovary syndrome, metabolic syndrome, hyperprolactinemia, endometriosis, hypothyroidism, multiple sclerosis, arthritis rheumatoid, lupus erythematosus, cirrhosis, rheumatoid arthritis, celiac disease, chronic renal failure, idiopathic causes and eating disorders, such as anorexia nervosa and bulimia.
  • polycystic ovary syndrome including polycystic ovary syndrome, metabolic syndrome, hyperprolactinemia, endometriosis, hypothyroidism, multiple
  • assisted reproduction technique in the context of the present invention encompasses any technique of assisted reproduction or artificial fertilization, being understood as the set of biomedical techniques or methods, which facilitate or replace at least one of the natural processes that are They give during playback. They include, but are not limited to, ovulation induction, artificial insemination (including donor sperm insemination) and in vitro fertilization (including donor egg fertilization or donor sperm fertilization).
  • the assisted reproduction technique can be applied due to causes of infertility or reduced fertility, both of the female mammal (such as those defined above) and of the male mammal (e.g., sperm alterations, reflected in a seminogram, such as alterations of sperm motility, alterations of their vitality, as well as alterations in their morphology).
  • causes of infertility or reduced fertility both of the female mammal (such as those defined above) and of the male mammal (e.g., sperm alterations, reflected in a seminogram, such as alterations of sperm motility, alterations of their vitality, as well as alterations in their morphology).
  • the assisted reproduction technique can also be applied to women who, despite not having any fertility problems per se, have to resort to them for various reasons, for example (but not limited to), women without partners who require sperm donation , couples who have to resort to the donation of eggs and / or sperm for genetic or other incompatibilities, or breeding animals that require embryo transfer in search of productivity improvements
  • these assisted reproduction techniques have a rate of reduced success, less than 50%, or even 40%. This is because the use of assisted reproduction techniques has an inherent decrease in the efficiency of the reproductive process.
  • One of the main causes of this low efficiency of reproduction with the use of assisted reproduction techniques is related to difficulties in the process of adhesion and embryonic implantation.
  • the term "improve” in the expression “improve the efficiency of an assisted reproduction technique” refers to increasing the success rate of such assisted reproduction techniques.
  • the success rate is 43%, according to previous statistics, a higher rate, from 44% , would mean an improvement in the effectiveness of such a technique.
  • This improvement is mainly due to a favor of embryonic adhesion and implantation due to the administration of tungsten salts (VI).
  • tungsten salts (VI) will be carried out at least to the female mammal.
  • both the female mammal and the male mammal can be administered tungsten (VI) salts.
  • the mammal within the framework of the present invention can be any mammal, including, but not limited to, humans, mice, rats, rabbits, dogs, cats, guinea pigs, hamsters, cows, horses, pigs, sheep, goats, etc. According to a particular embodiment, the mammal is human.
  • the administration of said salt is carried out in a daily dose between 0.001 mg and 1000 mg of tungsten salt (VI) per kg of body weight of the female mammal.
  • the tungsten salt (VI) comprises a tungsten anion (VI) and a pharmaceutically or veterinarily acceptable cation.
  • “Pharmaceutically or veterinarily acceptable cation” refers to any acceptable non-toxic organic or inorganic cation, which is capable of forming a therapeutically effective tungsten (VI) salt and is suitable for use in pharmaceutical or veterinary therapy.
  • the cation is an alkaline or alkaline earth cation. More preferably, the cation is selected from the group consisting of sodium, potassium, magnesium, calcium and zinc. According to a particular embodiment, the cation is sodium. According to another particular embodiment, the cation is zinc.
  • the tungsten anion (VI) is selected from the ions W0 2 ⁇ , HW0 " , W 2 0 7 2 ⁇ and HW 2 0 7 ⁇ .
  • the anion is W0 2" .
  • the solvate of the tungsten salt (VI) is a hydrate, more preferably the dihydrate.
  • the solvate of the tungsten salt (VI) is the dihydrate and the cation is a sodium cation.
  • the remaining possible combinations are also intended to be included within the scope of the present invention.
  • a further aspect of the invention is a composition
  • a composition comprising a tungsten salt (VI) or a solvate thereof as defined above, in a concentration equal to or greater than 100 mg / kg and at least one pharmaceutically excipient or carrier, veterinarily or dietically acceptable, for the treatment of infertility in a non-diabetic female mammal, to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal, or to increase the efficacy of an assisted reproduction technique applied to a mammal.
  • VI tungsten salt
  • excipients or vehicles suitable for use in pharmaceutical, veterinary or food technologies, for the preparation of the compositions. These components, excipients or carriers, must be compatible with the other ingredients of the composition. It should also be suitable for use in contact with the tissue or organ of humans and animals without excessive toxicity, irritation, allergic response or other immunogenicity problems or complications at a reasonable benefit / risk ratio. They are substances that, at the concentrations present in a pharmaceutical form, lack pharmacological activity.
  • the excipients or vehicles are used in order to provide the pharmaceutical or veterinary form with characteristics that ensure the stability, bioavailability, acceptability and ease of administration of one or more active ingredients.
  • excipients affect the release of the active substance, they may modify the magnitude and temporal profile of the pharmacological activity of the drug product, through changes in its bioavailability.
  • the excipients also serve to give adequate form or consistency to a preparation. Examples of types of excipients: solubilizers, disintegrants or disintegrants, emulsifiers (emulsifiers), colorants, flavors, binders, antioxidants, lubricants, preservatives, thickeners, etc.
  • the excipient or vehicle is pharmaceutically or veterinarily acceptable
  • the composition is a pharmaceutical composition for the treatment of infertility in a non-diabetic female mammal or to increase the efficacy of an assisted reproduction treatment applied to a mammal.
  • the pharmaceutical composition is in the form of a pill, tablet, tablet, capsule, powder, wafer, powder or effervescent tablets, solution, suspension, syrup or granules.
  • the composition is a food composition to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal.
  • the food composition may be a liquid or beverage composition, a solid composition or a nutritional supplement or supplement (also called a dietary or nutritional supplement).
  • the term "food composition” would encompass any food, solid or liquid, enriched with tungsten salt (VI), as well as any nutritional supplement or supplement containing at least one tungsten salt (VI).
  • the food composition can be a liquid composition, that is, a beverage according to terms more generally used in society.
  • Such liquid composition within the framework of the present invention, includes, but is not limited to, any beverage selected from the group consisting of milk of animal or vegetable origin, as well as any derivative thereof, such as, for example, shakes, yogurt , kefir, etc.
  • the food composition can also be a solid composition.
  • a solid composition may be selected, but not limited to, from the group consisting of milk derivatives of animal or vegetable origin, such as cheese, butter, margarine and tofu; any type of bread, including fresh, packaged or frozen, of mold, integral, spicy, sweet, salty, etc; pasta prepared from any cereal flour, such as wheat or semolina (macaroni, spaghetti, noodles, etc); bakery products, including biscuits, cookies, muffins, donuts, etc.
  • infusions, tea or coffee, in bulk or in sachets, to prepare drinks jellies, candies, including rubber, better known as “jelly beans”; as well as any type of solid seasoning, for example oregano, salt, coriander, parsley, basil, etc., or mixtures thereof.
  • the food composition can also be a nutritional, dietary or nutritional supplement or supplement, any of these terms being used in the context of the present invention.
  • These terms are commonly used for compositions consumed orally, which contain an ingredient intended to supplement the diet, in the case of the present invention the tungsten salt (s) (VI). They will never be a substitute for a conventional food or a single component of a meal or diet. They can be given in different presentations, such as pills, pills, tablets, capsules, soft gelatin capsules, gelatin capsules, wafers, effervescent tablets, liquids (solution, suspension, syrup), granules and powders, all of which are included as particular embodiments in the scope of the present invention. Dietary- or pharmaceutically acceptable excipients are apparent to the expert for obtaining any of the above presentations, and are intended to be included within the scope of the present invention.
  • any of the above compositions comprises in its composition at least one nutritive sweetener, such as sucrose or fructose.
  • a nutritive sweetener such as sucrose or fructose.
  • the intake of these nutritive sweeteners should be controlled and limited in diabetic patients, therefore a food composition that includes such a nutritive sweetener would be contraindicated in diabetic mammals or at least should be taken into account during the control of their diet.
  • the non-diabetic female mammal is selected from the group consisting of female mammals that need to restore and / or enhance ovulation, improve oocyte and embryo quality, increase zygote implantation in the uterine wall, regulate an alteration of the hypothalamic axis - hypophyse o-ovahco, including polycystic ovary syndrome, metabolic syndrome, hyperprolactinemia, endomethosis, hypothyroidism, multiple sclerosis, rheumatoid arthritis, lupus ehthematosus, cirrhosis, rheumatoid arthritis, celiac disease, chronic renal failure, idiopathic causes eating disorders, such as anorexia nervosa and bulimia.
  • the non-diabetic female mammal is selected from the group consisting of female mammals that have insulin resistance (also known as insulin resistance or insulin resistance); Insulin resistance, when presented together with hyperglycemia, can lead to the development of diabetes, however insulin resistance alone does not lead to a diabetic state.
  • insulin resistance also known as insulin resistance or insulin resistance
  • female mammals that have insulin resistance are selected from the group consisting of female mammals that have one or more of the following conditions: Obesity or overweight, Metabolic syndrome, Prediabetes, Polycystic ovary syndrome, Hypertension, Coronary heart disease, Hyperlipidemia or dyslipidemia, Hyperthyroidism, Hyperparathyroidism, Hyperleptinemia or leptin resistance, Sedentary, Eating disorders, Obstructive sleep apnea syndrome, Fetal malnutrition, Prader Willi syndrome, Rabson-Mendenhall syndrome, Liver steatosis, Leprechaunism, Pathologies associated with excess secretion glucocorticoids (eg acromegaly), insulin resistance caused by pharmacological treatments (eg glucocorticoids, thiazide diuretics, beta blockers), Stress or Early Menarche [Egas Béjar, Daniela et.al Insulinorresistencia / Insulin resistance.
  • glucocorticoids eg acro
  • the salt or salts of tungsten (VI) or a solvate thereof are present in a concentration of at least 100 mg / kg.
  • the tungsten (VI) salt or salts are comprised in the composition in concentrations of at least 150 mg / kg, at least 200 mg / kg, at least 250 mg / kg, at least 300 mg / kg , at least 350 mg / kg, at least 400 mg / kg, at least 450 mg / kg, at least 500 mg / kg, at least 550 mg / kg, at least 600 mg / kg, at least 650 mg / kg, at least 700 mg / kg, at least 750 mg / kg, at least 800 mg / kg, at least 850 mg / kg, at least 900 mg / kg or at least 850 mg / kg.
  • the total concentration of tungsten salts (VI) is equal to or less than 1000 mg / kg.
  • the food composition will be suitable for the administration of tungsten salts in a daily dose of between 0.001 mg per kg body weight of the female mammal (hereinafter, mg / kg / day) and the maximum dose tolerated for the corresponding female mammal species.
  • the maximum daily dose will be 1000 mg / kg / day; according to additional particular embodiments, administration would be carried out in doses of at least 0.001 mg / kg / day, of at least 0.01 mg / kg / day, of at least 0.1 mg / kg / day, of at least 0.5 mg / kg / day, at least 1 mg / kg / day, at least 10 mg / kg / day, at least 25 mg / kg / day, at least 50 mg / kg / day, of at least 100 mg / kg / day, at least 200 mg / kg / day, at least 300 mg / kg / day, at least 400 mg / kg / day, at least 500 mg / kg / day, of at least 600 mg / kg / day, at least 700 mg / kg / day, at least 800 mg / kg / day or at least 900 mg / kg / day.
  • a third aspect of the invention relates to the use of a tungsten salt (VI) or a solvate thereof, as defined above, for the preparation of a medicament for the treatment of infertility in a non-diabetic female mammal or for promote fertility in a non-diabetic female mammal.
  • a fourth aspect of the invention relates to a method of infertility treatment or to promote fertility and normal reproduction in a non-diabetic female mammal, which comprises the administration of a therapeutically effective amount of a tungsten (VI) salt or a solvate thereof, as defined above.
  • the tungsten salt (VI) will comprise a tungsten anion (VI) and a dietary or pharmaceutically acceptable cation, which preferably will be an alkaline or alkaline earth cation, even more preferably a sodium, potassium, magnesium and calcium cation. and zinc Particularly, the salt will be tungsten sodium (VI).
  • the tungsten anion (VI) is selected from the ions W0 4 2 ⁇ , HW0 4 " , W 2 0 7 2" and HW2O7 " , preferably W0 4 2" , and in the case of a solvate , it will preferably be the hydrate, more specifically the dihydrate.
  • EXAMPLE 1 DESCRIPTION OF THE ANIMAL MODEL (IRS2 FEMALE MOUSES - / -)
  • the mouse model used to determine the activity of tungsten salts (VI) to promote normal fertility and reproduction is the mouse IRS2 "A , a knock-out of the gene Irs2 [Burks et al., "IRS-2 pathways integrate female reproduction and energy homeostasis", Nature, 2000, vol. 407, pp. 377-382].
  • the deletion of the Irs2 gene translates into a clear sexual dimorphism in relation to fertility and carbohydrate metabolism.
  • IRS2 - / - female mice are between 6 and 8 weeks old.
  • Burks et al. "IRS-2 pathways integrate female reproduction and energy homeostasis", Nature, 2000, vol. 407, pp. 377-382, it is described that, while male IRS2 - / - mice were already strongly glucose intolerant at the age of 6 weeks, female IRS2 - / - maintained baseline glucose levels in the range of 120-160 mg / dl until 4-5 months old (page 378, first column, end of second paragraph). Additionally, the same publication describes that female mice less than 10 weeks old are relatively euglycemic and slightly insulin-resistant.
  • IRS2 has critical and direct functions in the ovary, particularly in follicular development and ovulation, by regulating key components of the cell cycle mechanism, involved in the coordination of proliferation and differentiation. cell, clearly and directly relating the absence of IRS2 expression with infertility [Biology of Reproduction 2007, 76, 1045-1053].
  • the IRS2 - / - animal model is primarily a beta cell failure model [Am J Physiol Endocrinol Metab 2014, 306, E36-E47)]. It is described that the progressive loss of beta cells due to the increased number of apoptotic beta cells, determines the progression towards diabetes in this animal model (see page E36, second column, second paragraph), only at high ages. The gradual reduction of beta cells is initially compensated by increased activity of the cells that persist, and only at advanced ages, the decrease in cell numbers cannot be compensated by persistent cells, leading to the appearance of hyperglycemia and the subsequent development of diabetes
  • Fertility is a complex mechanism that involves numerous factors. There is no "ideal" animal model, but there are numerous animal models, for example those marketed by Jackson Laboratories (http://jaxmice.jax.org/list/ra861 .html).
  • leptin An important factor that influences fertility is the hormone leptin, which is necessary for both male and female fertility. Ovulation cycles in females they are affected by it, and leptin levels outside the ideal range can have a negative effect on the quality of the ovules. IRS2 - / - mice have elevated circulating leptin levels, which is probably another factor that influences fertility.
  • this animal model encompasses a number of important factors related to infertility and as such is a suitable model to study the efficacy of compounds in female mammal infertility.
  • mice 6 male wild-type mice ( ⁇ 82 TM *) aged between 6 and 8 weeks.
  • Female and male mice were housed separately under normal conditions, ie 12h light / dark cycle and controlled temperature and humidity. The animals were fed at will (also called ad libitum) with a standard feed diet.
  • mice After an acclimatization period, the female IRS2 "" mice were housed in groups of 4-6 mice / cage. During the pre-treatment phase (2 weeks), animals were given drinking water without tungstate salt.
  • Sodium tungstate was administered in drinking water (ad libitum) by a solution of 2 mg / ml of sodium tungstate dihydrate (marketed by Cario Erba) in distilled water after the pre-treatment phase (day 0 of treatment) and until 4 weeks before the animals are slaughtered.
  • the daily dose of sodium tungstate ingested by the mice was approximately 180 mg / kg body weight.
  • vaginal smears were performed on 6 female mice chosen at random on days -8; -5; -2; -one ; 7; 8; 14; 15 and 22, to determine the phase of the estrous cycle in which they were.
  • the vaginal exudate was collected with the same pipette and spread on a slide. Once air dried, it was fixed and stained with the Pap smear.
  • the Pap smear technique involves staining the vaginal smears fixed on the slide as follows:
  • Preparations were analyzed by trained personnel and using simple blind blind coding to eliminate observer bias.
  • the samples were identified in the following phases: right, proestrus, estrus, metaestrus, anestrus or not evaluable.
  • the cyclicity of the four phases in periods of 4 to 6 days, are indicators of a normal estrous cycle, while the absence of this cyclicity and persistence in anestrus, right or proestro phases are indicators of the absence of the estrous cycle.
  • Table 1 summarizes the stages of the estrous cycle of vaginal smears performed on 6 of these female IRS2 "A mice.
  • the phases of the estrous cycle are the following: A: Anestro; D: right handed; P: Proestro; E: Estro; and M: metaestro.
  • the phases of the estrous cycle found in the vaginal smears of the female IRS2 "A mice in Table 1 show that during the pre-treatment period all the mice were in the proestro (P) or right-handed (D) phase, that is, in absence of estrous cycle.
  • Table 2 summarizes the age at the time of treatment, if there was pregnancy and the number of embryos per female.
  • Table 2 show that while the pregnancy rate of female IRS2 "" untreated mice is 9%, the pregnancy rate of female IRS2 "A mice treated with tungstate is increased to 80%. In addition, these results also show that the average number of pups / embryos implanted by a female pregnancy mouse is approximately 5, a number that can be considered comparable to the number of pups of a female mouse. Thus, the results of Tables 1 and 2 demonstrate that a tungsten salt (VI) is an effective treatment for ovulation recovery and / or increased oocyte implantation. Thus, the administration of a tungsten (VI) salt as defined in the present invention is effective for the treatment of infertility in non-diabetic female mammals.
  • mice Female mice were housed in normal conditions, ie 12h light / dark cycle and controlled temperature and humidity. The animals were fed at will (also called ad libitum) with a standard feed diet.
  • the sodium tungstate was administered in the drinking water (ad libitum) by means of a solution of 2 mg / ml of sodium tungstate dihydrate (marketed by Cario Erba) in distilled water after the pre-treatment phase (day 0 treatment) and for 12 days.
  • a tungsten salt (VI) is an effective treatment for ovulation recovery and / or increased oocyte implantation, independently of changes in body weight and Changes in carbohydrate metabolism.
  • the invention or a composition containing such a tungsten salt (VI) has a direct effect on the female reproductive system and is therefore effective in promoting fertility and normal reproduction in non-diabetic female mammals.
  • a human-human embryonic adhesion model was used "in vitro", composed of the HEC1-A endometrial cell line and the JEG-3 human trophoectoderm cell line.
  • the JEG-3 line a cell line that simulates the trophoectoderm cells of a human embryo, are cells that grow in monolayer in the laboratory, using low adhesion plaques, are capable of forming spheroids that simulate the human embryo; This is one of the most used cell lines to perform embryonic adhesion assays in vitro.
  • HEC1-A cells were planted in 24-well plates and cultured with McCoy 5A culture medium, supplemented with 10% fetal bovine serum and 0.1% antibiotics
  • JEG-3 cells were planted on low adhesive plates with 'Eagle's minimal essential medium' (EMEM) culture medium, supplemented with 10% fetal bovine serum and 0.1% antibiotics (fungizone and penicillin). 24 hours before the adhesion test, the formation of JEG-3 trophoblastic spheroids was carried out from this culture. To do this, JEG-3 cells were suspended in an Erlenmeyer while stirring in the medium previously described at a concentration of 6x10 5 cells / 6ml. The resulting spheroids were collected for the adhesion test.
  • EMEM 'Eagle's minimal essential medium'
  • Trophoectoderm spheroids were added on the monolayer of HEC-1A cells, placing 6 to 10 spheroids per well. Spheroid adhesion was measured at
  • a salad dressing enriched with a tungsten salt is prepared.
  • a quantity of 25 mg of Na 2 WO4 (100 mg / kg) is added to 250 g of a commercially available dressing and stirred mechanically for 30 minutes.
  • a ketchup sauce is prepared, enriched with a tungsten salt. To this end, 170 mg of Ca WO 4 are added to 200 g of commercially available ketchup and stirred mechanically for 1 h.
  • Milk enriched with a tungsten salt is prepared. For this, 1 kg of whole cow's milk is available, 150 mg of ZnWO 4 is added and it is mechanically stirred for 20 minutes. Immediately before consumption it is recommended to shake the container.
  • a fruit juice enriched with a tungsten salt is prepared. 500 mg of MgWO 4 is added to 1 kg of commercial juice and stirred mechanically for 10 minutes. Immediately before consumption it is recommended to shake the container.
  • Microcrystalline cellulose PH200 (Diluent / slider) 250.00 mg
  • Effervescent tablets with the following composition are prepared:
  • Gelatin capsules are prepared with the following composition:

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Abstract

Sales de tungsteno (VI) para su uso en el tratamiento de la infertilidad en un mamífero hembra no diabético, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, o para aumentar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero, así como composiciones que las contienen y métodos de tratamiento con las mismas.

Description

Sales de tungsteno (VI) para su uso en el tratamiento de la infertilidad, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, así como para mejorar la eficacia de las técnicas de reproducción asistida DESCRIPCIÓN
La presente invención se refiere a sales de tungsteno (VI) y composiciones que las contienen, para su uso en el tratamiento de la infertilidad, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, así como para mejorar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero.
ESTADO DE LA TÉCNICA
La fertilidad en mamíferos es un proceso multietápico que de forma natural no es totalmente eficiente. Factores como la edad, los hábitos alimenticios o el estilo de vida, entre otros, modulan el éxito de este proceso. Así, se conoce por ejemplo que la tasa de embarazo en mujeres de 20 a 24 años es de aproximadamente el 86%, mientras que en mujeres de 35 a 32 años decae hasta un 50% [Management of the Infertile Woman por h elen A. Cardo; The Fertility Sourcebook por M. Sara Rosenthal, ASAS Summary of FAIR 2012]. Otros factores, como el sobrepeso o el bajo peso, también son responsables de retrasos en la consecución de un embarazo de forma natural o incluso de la imposibilidad de su consecución [Fértil Steril 2013;100:631-7]. Se estima que aproximadamente un 66% de las parejas no conciben de forma natural durante los 3 primeros meses de relaciones sexuales sin protección. Esta cifra disminuye hasta el 15% de las parejas durante el decurso del primer año de relaciones sexuales no protegidas. Infertilidad se define (WHO, ASRM, NICE) como la incapacidad de concebir tras 12 meses de relaciones sexuales regulares no protegidas También se ha acuñado, especialmente en Europa, el término "subfertilidad" para definir a aquellas parejas con alguna forma o grado de fertilidad reducida, que conlleva un retraso en la concepción [Gnoth C et al Definition and prevalence of subfertility and infertility Human reproduction 2005; 20(5) :1144-1147].
Las principales causas de infertilidad entre las mujeres incluyen disfunciones ovulatonas, patologías del tracto reproductivo, reducción en la calidad de los oocitos y la depleción folicular inherente al envejecimiento. Sin embargo, también existe un porcentaje considerable de mujeres con infertilidad inexplicada, también denominada infertilidad idiopática, de la que una de las posibles causas está relacionada con deficiencias en el proceso de implantación.
El desarrollo folicular, la ovulación, la migración del óvulo inmaduro (oocito), así como la posterior concepción e implantación del cigoto en la pared uterina se encuentra regulado por secreciones hormonales de ciertos órganos endocrinos como por ejemplo la hipófisis, el hipotálamo y la glándula tiroides. Entre las múltiples causas biológicas de la infertilidad en la mujer se pueden destacar también las causas ligadas a desórdenes de los estímulos hormonales que regulan todo este proceso Se conocen diferentes tratamientos para la infertilidad femenina entre los que se encuentran la administración de medicamentos para tratar problemas hormonales que conllevan alteraciones de la ovulación, tal y como por ejemplo el citrato de clomifeno o gonadotropinas. Asimismo se han postulado algunos efectos beneficiosos con numerosos tratamientos en base a la ingesta de suplementos vitamínicos, especialmente vitamina B, vitamina C, vitamina E y ácido fólico, suplementos minerales como sales o complejos de hierro, zinc, o selenio, ácidos grasos esenciales (omega 3), así como extractos de plantas tales como Sauzgatillo (Vitex agnus chastus), Damiana, regaliz, flor de Trébol Rojo, Baya de Agnocasto, Cohosh Negro, Dong Quai (Angélica sinensis), Ñame o Camote Silvestre (Dioscorea villosa), Raíz de Unicornio Falso, té verde, Ortigas (Urtica dioica), Avena salvaje (Avena sativa), Diente de león (Taraxacum officinale), etc. aunque para ninguno de estos tratamientos se ha podido demostrar claramente su eficacia.
El porcentaje de embarazos conseguidos mediante los tratamientos mencionados anteriormente presentan limitaciones. Así, por ejemplo, se ha observado que el tratamiento de mujeres cuya ovulación es irregular o ausente mediante la administración de citrato de clomifeno, un fármaco de la familia de los estilbenos, permite la restauración de la ovulación en un porcentaje elevado, pero la tasa de embarazo continua siendo baja, aproximadamente igual o inferior al 50%.
Los tratamientos de fecundación in vitro son muy efectivos en la etapa de fecundación del oocito. Sin embargo, la tasa de implantación de los embriones en la pared uterina es baja. Esto promueve las transferencias múltiples de embriones por cada ciclo de fecundación in vitro, con la consecuencia de un porcentaje mayor de embarazos múltiples considerados de riesgo. Por último, es conocido que las alteraciones metabólicas como la diabetes o la obesidad conllevan una limitación de la fertilidad. Se conoce que la recuperación parcial o total de la glucemia, la insulinemia y/o el peso corporal de ratones hembra diabéticos u obesos con la función reproductora dañada, comporta una mejora de la fertilidad.
Diferentes tratamientos farmacológicos, como la metformina o sales de tungsteno (VI), o incluso cambios en el estilo de vida, han demostrado mejorar la diabetes o alteraciones en la insulina, como por ejemplo la deficiencia o la resistencia a la insulina, consiguiendo recuperar la función reproductora total o parcialmente, cuando la infertilidad es debida a la diabetes o alteraciones en la insulina.
En el caso concreto del tungstato sódico, se conoce que ratas con diabetes e insulinopenia inducida por la inyección de estreptozotocina, recuperan parcialmente los niveles de insulina circulantes tras un tratamiento prolongado (10 semanas) con tungstato sódico como consecuencia de revertir parcialmente la diabetes. Posteriormente, cuando las ratas hembras parcialmente recuperadas de la diabetes se aparean con machos sanos, se observa que, de forma paralela a la recuperación parcial de la diabetes, han recuperado parcialmente su capacidad reproductora. En particular, se observa que el porcentaje de partos con respecto al número de raspados positivos en los ratones hembras que habían sido parcialmente recuperadas de la diabetes tras un tratamiento con tungstato sódico aumenta hasta el 66%, porcentaje inferior a las hembras que no padecían diabetes donde el porcentaje es del 100%. (cf. J. Ballester y colaboradores, "Tungstate administration improves the sexual and reproductive function in female rats with streptozotocin-induced diabetes", Human
Reproduction, 2007, vol. 22, pp. 2128-2135). No obstante, no se observó ni postuló efecto alguno de las sales de tungsteno (VI) en animales hembra no diabéticos.
El tungsteno se encuentra en cantidades traza en animales y plantas. Por ejemplo, en plantas se han descrito contenidos hasta un máximo de 100 mg/kg [Gbaruko B. C. &
Igwe J. C. Global Tungsten: Occurrence, Chemistry, Envi ron mental and Health Exposure Issues. Journal of Environmental Research 2007;1(1):27-32].
En vista de todo lo anterior, a pesar de la intensa investigación y los avances la comprensión y manejo del proceso reproductivo de los mamíferos y de los humanos en particular, todavía numerosas parejas no se benefician de las diferentes aproximaciones disponibles en la actualidad para incrementar la fertilidad por serles ineficaces. Por lo tanto, todavía hay una necesidad de encontrar nuevas alternativas para la mejora de la eficiencia reproductiva natural y/o el tratamiento de infertilidad femenina que den una mayor eficacia.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
Se ha encontrado ahora que la administración de una sal de tungsteno (VI), o un solvato de dicha sal es efectiva para tratar la infertilidad en un mamífero hembra no diabético, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, y para aumentar la eficacia de las técnicas de reproducción asistida aplicadas a un mamífero. A pesar de que era conocido que el tungstato sódico puede revertir parcialmente las alteraciones en la función reproductora en ratones hembras diabéticas debido a que produce una normalización de los niveles de glucosa en sangre, no se ha descrito ni se ha sugerido que el tungstato sódico pueda tener un efecto sobre la función del sistema reproductor femenino en mamíferos hembra no diabéticas, presentándose como un tratamiento para la infertilidad y/o favoreciendo la fertilidad y la reproducción normal en mamíferos hembra no diabéticos. Se ha demostrado ahora la eficacia de la administración de una sal de tungsteno para tratar la infertilidad o para mejorar o normalizar la fertilidad, a través de un modelo animal, concretamente ratones hembra IRS2-/-, tal y como queda reflejado en los ejemplos de la presente invención. Asimismo se ha demostrado un efecto de las sales de tungsteno sobre la implantación embrionaria, en el mismo modelo animal anteriormente indicado, así como un efecto positivo sobre la adherencia embrionaria en el endometrio, en base a un ensayo in vitro, cuyos resultados también se indican en los ejemplos.
Por lo tanto, un primer aspecto de la presente invención se refiere a una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, para su uso para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético, o para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético.
Un segundo aspecto de la presente invención se refiere a una composición que comprende una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma en una concentración mayor de 100 mg/kg, así como al menos un excipiente o vehículo farmacéuticamente o dietéticamente aceptable, para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético o para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético.
Un tercer aspecto de la invención se refiere al uso de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, tal y como definido anteriormente, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético o para favorecer la fertilidad en un mamífero hembra no diabético.
Un cuarto aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento de infertilidad o para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, según lo definido anteriormente. DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
Tal y como indicado anteriormente, de acuerdo con un primer aspecto la presente invención se refiere a una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, para el tratamiento de la infertilidad en un mamífero hembra no diabético o para favorecer y/o contribuir a la fertilidad y la reproducción normales en un mamífero hembra no diabético.
El término "favorecer la fertilidad y la reproducción normal" o "contribuir a la fertilidad y la reproducción normal" se refiere a una contribución a la fertilidad y reproducción normales, o mejorar la fertilidad y la reproducción normal (reduciendo los tiempos para lograr un embarazo), entendiendo por "fertilidad y reproducción normales" un estado de fertilidad en el cual se logra, siguiendo las definiciones proporcionadas previamente:
* en una situación de subfertilidad: un embarazo en un periodo de 12 meses de relaciones sexuales regulares y no protegidas; y
* en una situación de infertilidad: un embarazo tras un periodo 12 meses de relaciones sexuales regulares y no protegidas. Se incluyen aquí la necesidad de restaurar y/o potenciar la ovulación, mejorar la calidad del oocito y del embrión, aumentar la implantación del cigoto en la pared uterina, regular una alteración del eje hipotalámico- hipofisario-ovárico, incluyendo síndrome de ovario poliquístico, síndrome metabólico, hiperprolactinemia, endometriosis, hipotiroidismo, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso, cirrosis, artritis reumatoide, celiaquía, fallo renal crónico, causas idiopáticas y desórdenes alimentarios, tales como anorexia nerviosa y bulimia.
El término "técnica de reproducción asistida" en el contexto de la presente invención engloba cualquier técnica de reproducción asistida o de fecundación artificial, entendiéndose como el conjunto de técnicas o métodos biomédicos, que facilitan o sustituyen a al menos uno de los procesos naturales que se dan durante la reproducción. Se incluyen, aunque no se limitan a, inducción de la ovulación, inseminación artificial (incluyendo la inseminación con esperma de donante) y la fecundación in vitro (incluyendo la fecundación de un óvulo de donante o la fecundación con esperma de donante). Así, la técnica de reproducción asistida puede ser aplicada debido a causas de infertilidad o de fertilidad reducida, tanto del mamífero hembra (tales como los definidos anteriormente) como del mamífero macho (por ejemplo, alteraciones en los espermatozoides, reflejados en un seminograma, tales como alteraciones de la movilidad de los espermatozoides, alteraciones de la vitalidad de los mismos, así como alteraciones en su morfología). La técnica de reproducción asistida también puede ser aplicada a mujeres que a pesar de no tener per se ningún problema de fertilidad tengan que recurrir a ellas por diversas causas, por ejemplo (pero no limitado a), mujeres sin pareja que requieren la donación de esperma, parejas que han de recurrir a la donación de óvulos y/o esperma por incompatibilidades genéticas o de otro tipo, o animales de cría que requieren transferencia de embriones en busca de mejoras de productividad En general, estas técnicas de reproducción asistida tienen una tasa de éxito reducida, inferior al 50%, o incluso del 40%. Esto es debido a que el uso de técnicas de reproducción asistida tiene una inherente disminución de la eficiencia del proceso reproductivo. Una de las principales causas de esta baja eficiencia de la reproducción con el uso de técnicas de reproducción asistida, se relaciona con dificultades en el proceso de adhesión e implantación embrionario. En el marco de la presente invención, el término "mejorar" en la expresión "mejorar la eficacia de una técnica de reproducción asistida" se refiere a aumentar la tasa de éxito de tales técnicas de reproducción asistida. Así, si por ejemplo en la franja de edad de la pareja de mamíferos sobre la que se aplica la técnica de reproducción asistida, la tasa de éxito fuera del 43%, de acuerdo con estadísticas previas, una tasa superior, a partir del 44%, supondría una mejora de la eficacia de tal técnica. Esta mejora se debe principalmente a un favorecimiento de la adhesión e implantación embrionaria debido a la administración de sales de tungsteno (VI). Aunque la técnica de reproducción asistida se aplique debido a una alteración de la fertilidad del mamífero macho de la pareja, al mejorar la adhesión e implantación embrionaria, la administración de las sales de tungsteno (VI) se realizará al menos al mamífero hembra. Alternativamente, tanto el mamífero hembra como el mamífero macho pueden ser administrados sales de tungsteno (VI).
El mamífero en el marco de la presente invención puede ser cualquier mamífero, incluyendo, pero no limitado a, humanos, ratones, ratas, conejos, perros, gatos, cobayas, hámsteres, vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras, etc. De acuerdo con una realización particular, el mamífero es humano.
Según otra realización particular, la administración de dicha sal se realiza en una dosis diaria de entre 0,001 mg y 1000 mg de sal de tungsteno (VI) por cada kg de peso corporal del mamífero hembra.
En otra realización particular, la sal de tungsteno (VI) comprende un anión de tungsteno (VI) y un catión farmacéuticamente o veterinariamente aceptable. "Catión farmacéuticamente o veterinariamente aceptable" se refiere a cualquier catión no tóxico orgánico o inorgánico aceptable, que sea capaz de formar una sal terapéuticamente efectiva de tungsteno (VI) y sea apropiado para su uso en terapia farmacéutica o veterinaria. Preferiblemente, el catión es un catión alcalino o alcalinotérreo. Más preferiblemente, el catión se selecciona entre el grupo que consiste en sodio, potasio, magnesio, calcio y zinc. Según una realización particular, el catión es sodio. Según otra realización particular, el catión es zinc.
Preferiblemente, en la sal de tungsteno (VI) el anión de tungsteno (VI) se selecciona de los iones W0 2~, HW0 ", W207 2~ y HW207 ~. Preferiblemente, el anión es W0 2".
Según una realización particular adicional, el solvato de la sal de tungsteno (VI) es un hidrato, más preferiblemente el dihidrato.
Todas las características enumeradas de manera individual para diferentes elementos de la invención pueden ser combinadas entre sí, quedando todas las combinaciones posibles incluidas en el alcance de la presente invención. Así por ejemplo, según una realización preferida, el solvato de la sal de tungsteno (VI) es el dihidrato y el catión es un catión sódico. Al igual, el resto de combinaciones posibles también se pretende estén incluidas en el alcance de la presente invención.
Un aspecto adicional de la invención es una composición que comprende una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma según se ha definido antenormente, en una concentración igual o mayor de 100 mg/kg y al menos un excipiente o vehículo farmacéuticamente, veterinariamente o dietéticamente aceptable, para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, o para aumentar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero.
El término "excipiente o vehículo farmacéuticamente, veterinariamente o dietéticamente aceptable" se refiere a los excipientes o vehículos apropiados para su uso en las tecnologías farmacéuticas, veterinarias o alimentarias, para la preparación de las composiciones. Estos componentes, excipientes o portadores, deben ser compatibles con los otros ingredientes de la composición. También debe ser adecuado para su uso en contacto con el tejido u órgano de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otros problemas de inmunogenicidad o complicaciones a una razonable relación beneficio/riesgo. Son sustancias que, a las concentraciones presentes en una forma farmacéutica, carecen de actividad farmacológica. Los excipientes o vehículos se emplean con el fin de dotar la forma farmacéutica o veterinaria de características que aseguren la estabilidad, biodisponibilidad, aceptabilidad y facilidad de administración de uno o más principios activos. En la medida en que los excipientes afectan la liberación del principio activo, podrán modificar la magnitud y el perfil temporal de la actividad farmacológica del producto medicamentoso, mediante cambios en su biodisponibilidad. Los excipientes sirven, además, para dar forma o consistencia adecuada a una preparación. Ejemplos de tipos de excipientes: solubilizantes, desintegrantes o disgregantes, emulsificantes (emulsionantes), colorantes, saborizantes, aglutinantes, antioxidantes, lubrificantes, preservantes, espesantes, etc.
Según una realización preferida, el excipiente o vehículo es farmacéuticamente o veterinariamente aceptable, y la composición es una composición farmacéutica para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético o para aumentar la eficacia de un tratamiento de reproducción asistida aplicada a un mamífero. Preferiblemente, la composición farmacéutica se presenta en forma de pildora, tableta, pastilla, cápsula, polvo, oblea, polvo o comprimidos efervescentes, disolución, suspensión, jarabe o gránulos. Según otra realización preferida, la composición es una composición alimentaria para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético.
La composición alimentaria puede ser una composición líquida o bebida, una composición sólida o un suplemento o complemento nutricional (también denominado dietético o alimenticio). En el marco de la presente invención, el término "composición alimentaria" englobaría cualquier alimento, sólido o líquido, enriquecido con sal de tungsteno (VI), así como cualquier suplemento o complemento nutricional que contenga al menos una sal de tungsteno (VI). La composición alimentaria puede ser una composición líquida, es decir, una bebida según términos más generalmente utilizados en la sociedad. Tal composición líquida, en el marco de la presente invención, incluye, pero no está limitada a, cualquier bebida seleccionada del grupo que consiste en leche de origen animal o vegetal, así como cualquier derivado de la misma, tales como por ejemplo batidos, yogur, kéfir, etc. ; zumos de frutas y/o hortalizas; agua sin gas o con gas, o agua o bebidas aromatizadas o edulcoradas (mediante edulcorantes nutritivos (sacarosa, fructosa... ) o artificiales); condimentos, tales como por ejemplo cualquier salsa, aliño, kétchup, aceite, vinagre o preparados de vinagre; bebidas alcohólicas de cualquier tipo; té, café; así como todo tipo de bebidas refrescantes o refrescos, o bebidas energizantes.
La composición alimentaria también puede ser una composición sólida. Por ejemplo, tal composición sólida puede seleccionarse, pero no está limitado a, del grupo que consiste en derivados de leche de origen animal o vegetal, tales como pueden ser queso, mantequilla, margarina y tofu; cualquier tipo de pan, incluyendo fresco, envasado o congelado, de molde, integrales, especiado, dulce, salado, etc; pasta preparada a partir de cualquier harina de cereal, tal como trigo o sémola (macarrones, espaguetis, tallarines, etc); productos de bollería, incluyendo bizcochos, galletas, magdalenas, rosquillas, etc. ; infusiones, té o café, a granel o en bolsitas, para preparar bebidas; gelatinas, caramelos, incluyendo los de goma, más conocidos como "gominolas"; así como cualquier tipo de condimento sólido, por ejemplo orégano, sal, cilantro, perejil, albahaca, etc, o mezclas de los mismos.
Por último, la composición alimentaria también puede ser suplemento o complemento nutricional, dietético o alimenticio, empleándose en el marco de la presente invención cualquiera de estos términos de manera equivalente. Estos términos se usan habitualmente para composiciones consumidas por vía oral, las cuales contienen un ingrediente destinado a complementar la alimentación, en el caso de la presente invención la(s) sal(es) de tungsteno (VI). Nunca serán un sustituto de un alimento convencional ni un componente único de una comida o de la dieta alimenticia. Pueden darse en diferentes presentaciones, tales como pastillas, pildoras, tabletas, cápsulas, cápsulas suaves de gelatina, cápsulas de gelatina, obleas, comprimidos efervescentes, líquidos (disolución, suspensión, jarabe), gránulos y polvos, todas ellas se incluyen como realizaciones particulares en el ámbito de la presente invención. Excipientes dietética- o farmacéuticamente aceptables son evidentes al experto para la obtención de cualquier de las presentaciones anteriores, y se pretenden incluidas en el alcance de la presente invención.
De acuerdo con una realización particular, cualquiera de las composiciones anteriores (composición farmacéutica, composición sólida, composición líquida o suplemento/complemento nutricional) comprende en su composición al menos un edulcorante nutritivo, tal como la sacarosa o la fructosa. La ingesta de estos edulcorantes nutritivos debe ser controlada y limitada en pacientes diabéticos, por lo tanto una composición alimentaria que incluya tal edulcorante nutritivo estaría contraindicada en mamíferos diabéticos o al menos debería tenerse en cuenta durante el control de su dieta.
De acuerdo con una realización particular, el mamífero hembra no diabético se selecciona del grupo que consiste en mamíferos hembra que necesitan restaurar y/o potenciar la ovulación, mejorar la calidad del oocito y del embrión, aumentar la implantación del cigoto en la pared uterina, regular una alteración del eje hipotalámico- hipofisa o-ováhco, incluyendo síndrome de ovario poliquístico, síndrome metabólico, hiperprolactinemia, endomethosis, hipotiroidismo, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus ehtematoso, cirrosis, artritis reumatoide, celiaquía, fallo renal crónico, causas idiopáticas y desórdenes alimentarios, tales como anorexia nerviosa y bulimia. De acuerdo con otra realización particular, el mamífero hembra no diabético se selecciona del grupo que consiste en mamíferos hembra que presentan insulinresistencia (también conocida como resistencia a la insulina o resistencia insulínica); la insulinresistencia, cuando se presenta junto con una hiperglicemia, puede conducir al desarrollo de diabetes, no obstante la insulinresistencia sola no conduce a un estado diabético. Preferiblemente, los mamíferos hembra que presentan insulinresistencia se seleccionan del grupo que consiste en hembras mamíferos que presentan una o más de las siguientes condiciones: Obesidad o sobrepeso, Síndrome metabólico, Prediabetes, Síndrome del ovario poliquístico, Hipertensión, Enfermedad coronaria, Hiperlipidemias o dislipemia, Hipertiroidismo, Hiperparatiroidismo, Hiperleptinemia o resistencia a la leptina, Sedentarismo, Desórdenes alimentarios, Síndrome de la apnea obstructiva del sueño, Malnutrición fetal, Síndrome de Prader Willi, Síndrome de Rabson-Mendenhall, Esteatosis hepática, Leprechaunism, Patologías asociadas al exceso de secreción de glucocorticoides (p.ej acromegalia), insulinresistencia causada por tratamientos farmacológico (p.ej glucocorticoides, diuréticos tiazídicos , betabloqueantes), Estrés o Menarquía Precoz [Egas Béjar, Daniela et.al Insulinorresistencia / Insulin resistance. Medicina (Guayaquil);10(2):159- 166, abr. 2005; Graves homas K. WHY ISN'T THIS INSULIN WORKING? Western Veterinary Conference 2013 (SA 113); Ximena Gaete V. Adelanto de la pubertad en Chile y el mundo. Rev Chil Pediatr 77 (5); 456-465, 2006; Leszek Szablewski Glucose Homeostasis and Insulin Resistance (eISBN: 978-1 -60805-) Bentham e-books]. Muchas de estas indicaciones se ha descrito que no están relacionadas con la infertilidad, incluyendo la prediabetes [Acta Diab. Latina 4, 507, 1967]. En las composiciones de la invención, la sal o sales de tungsteno (VI) o un solvato de las mismas están presentes en una concentración de al menos 100 mg/kg. De acuerdo con realizaciones particulares, la sal o sales de tungsteno (VI) están comprendidas en la composición en concentraciones de al menos 150 mg/kg, al menos 200 mg/kg, al menos 250 mg/kg, al menos 300 mg/kg, al menos 350 mg/kg, al menos 400 mg/kg, al menos 450 mg/kg, al menos 500 mg/kg, al menos 550 mg/kg, al menos 600 mg/kg, al menos 650 mg/kg, al menos 700 mg/kg, al menos 750 mg/kg, al menos 800 mg/kg, al menos 850 mg/kg, al menos 900 mg/kg o al menos 850 mg/kg.
De acuerdo con otra realización particular, la concentración total de sales de tungsteno (VI) es igual o inferior a 1000 mg/kg. De acuerdo con otra realización particular, la composición alimentaria será adecuada para la administración de sales de tungsteno en una dosis diaria de entre 0,001 mg por cada kg de peso corporal del mamífero hembra (en adelante, mg/kg/día) y la dosis máxima tolerada para la especie de mamífero hembra correspondiente.
De acuerdo con una realización particular más, la dosis máxima diaria será de 1000 mg/kg/día; de acuerdo con realizaciones particulares adicionales, la administración se realizaría en dosis de al menos 0,001 mg/kg/día, de al menos 0,01 mg/kg/día, de al menos 0, 1 mg/kg/día, de al menos 0,5 mg/kg/día, de al menos 1 mg/kg/día, de al menos 10 mg/kg/día, de al menos 25 mg/kg/día, de al menos 50 mg/kg/día, de al menos 100 mg/kg/día, de al menos 200 mg/kg/día, de al menos 300 mg/kg/día , de al menos 400 mg/kg/día , de al menos 500 mg/kg/día, de al menos 600 mg/kg/día, de al menos 700 mg/kg/día, de al menos 800 mg/kg/día o de al menos 900 mg/kg/día.
Un tercer aspecto de la invención se refiere al uso de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, tal y como definido anteriormente, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético o para favorecer la fertilidad en un mamífero hembra no diabético. Un cuarto aspecto de la invención se refiere a un método de tratamiento de infertilidad o para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, el cual comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, según lo definido anteriormente.
Todas las definiciones y significados preferidos proporcionados anteriormente en relación al primer aspecto de la invención son aplicables al resto de aspectos de la invención. Así, por ejemplo, la sal de tungsteno (VI) comprenderá un anión de tungsteno (VI) y un catión dietéticamente o farmacéuticamente aceptable, el cual preferiblemente será un catión alcalino o alcalinotérreo, aún más preferiblemente un catión sodio, potasio, magnesio y calcio y zinc. Particularmente, la sal será la sódica de tungsteno (VI). Una vez más, el anión de tungsteno (VI) se selecciona de los iones W04 2~, HW04 ", W207 2" y HW2O7", preferiblemente W04 2", y en caso de presentarse en forma de solvato, el mismo preferiblemente será el hidrato, más concretamente el dihidrato. El resto de realizaciones particulares proporcionadas anteriormente para el primer aspecto se refieren también al resto de aspectos.
A continuación se incluyen una serie de ejemplos ilustrativos, no limitativos de la presente invención.
EJEMPLOS
EJEMPLO 1 . DESCRIPCIÓN DEL MODELO ANIMAL (RATONES HEMBRA IRS2 -/-) El modelo de ratón empleado para determinar la actividad de sales de tungsteno (VI) para favorecer la fertilidad y la reproducción normales, es el ratón IRS2"A, un knock-out del gen Irs2 [Burks y colaboradores, "IRS-2 pathways intégrate female reproduction and energy homeostasis", Nature, 2000, vol. 407, pp. 377-382]. La deleción del gen Irs2 se traduce en un claro dimorfismo sexual en relación a la fertilidad y al metabolismo de los carbohidratos.
Los machos de este modelo presentan resistencia a la insulina y una severa hiperglicemia iniciada desde edades tempranas. Por contra, en edades tempranas, las hembras se mantienen relativamente euglicémicas y desarrollan una ligera insulin- resistencia, que se mantiene hasta edades avanzadas (4-5 meses). Las hembras IRS2" _ en edades tempranas, alrededor de 10 semanas de edad, muestran un bajo desarrollo folicular y una anovulación persistente, acompañada de la ausencia del ciclo estral en la mayoría de los ratones. La tasa de embarazos de los ratones hembra IRS2" _ es del 9% frente a una tasa del 100% en ratones hembra IRS 1 (IRS-2+ + wild type). Dado que en estas edades las hembras se mantienen euglicémicas y que únicamente desarrollan una ligera insulin-resistencia, la profunda alteración en la fertilidad, no es una consecuencia directa de las anomalías en el metabolismo de la glucosa.
Los ratones IRS2-/- hembra usados tienen edades de entre 6 y 8 semanas. En la publicación Burks y colaboradores, "IRS-2 pathways intégrate female reproduction and energy homeostasis", Nature, 2000, vol. 407, pp. 377-382, se describe que, mientras ratones machos IRS2-/- ya eran fuertemente intolerantes a glucosa a la edad de 6 semanas, hembras IRS2-/- mantenían niveles de glucosa básales en el rango de 120- 160 mg/dl hasta los 4-5 meses de edad (página 378, primera columna, final del segundo párrafo). Adicionalmente, en la misma publicación se describe que ratones hembra de menos de 10 semanas son relativamente euglicémicas y ligeramente insulin-resistentes. Por lo tanto, la profunda afectación de la fertilidad en este modelo animal no es una directa consecuencia de del metabolismo anormal de la glucosa en los ratones hembra IRS-2-/-. Niveles en sangre básales de glucosa de 120-160 mg/dl son considerados niveles normales ["Ciencia y Tecnología en protección y experimentación animal", Ed McGraw-Hill/interamericana de España (2001 ). ISBN:84- 486-0310-9 (pág. 27): los niveles normales en ratones se indican están entre 63 y 176 mg/dl).
Otros estudios más recientes realizados con ratones IRS2-/-, han estudiado las mencionadas diferencias existentes entre machos y hembras; por ejemplo, Biochemical Pharmacology 2011, 81, 279-288, describe que los niveles circulantes de insulin no eran significativamente diferentes entre ratones wild type y ratones hembra IRS2-/-, y, en respuesta a varias concentraciones de glucosa, la respuesta de hembras IRS2-/- en cuanto a secreción de insulina fue idéntica a la de los animales control, ratones wild type (página 281 , segunda column, primer párrafo; y página 284, segunda columna, primer párrafo del apartado titulado "Discussion"), mientras que en machos IRS2-/- se incrementó la secreción de insulina en comparación con los controles wild type.
Otros estudios realizados con este modelo animal han mostrado que IRS2 tiene funciones críticas y directas en el ovario, particularmente en desarrollo folicular y en la ovulación, mediante la regulación de componentes clave del mecanismo del ciclo celular, involucradas en la coordinación de la proliferación y diferenciación celular, relacionando clara-y directamente la ausencia de expresión de IRS2 con infertilidad [Biology of Reproduction 2007, 76, 1045-1053].
El modelo animal IRS2-/- es principalmente un modelo de fallo de la célula beta [Am J Physiol Endocrinol Metab 2014, 306, E36-E47)]. Se describe que la pérdida progresiva de células beta debido al número incrementado de células beta apoptóticas, determinan la progresión hacia diabetes en este modelo animal (ver página E36, segunda columna, segundo párrafo), solamente a edades elevadas. La reducción paulatina de las células beta se ve inicialmente compensada por una mayor actividad de las células que persisten, y solamente en edades avanzadas, el descenso en el número de células no puede ser compensado por las células persistentes, dando lugar a la aparición de la hiperglicemia y el desarrollo posterior de la diabetes
La fertilidad es un mecanismo complejo que implica numerosos factores. No existe un modelo animal "ideal", sino existen numerosos modelos animales, por ejemplo los comercializados por Jackson Laboratories (http://jaxmice.jax.org/list/ra861 .html).
Un factor importante que influye en la fertilidad es la hormona leptina, la cual es necesaria tanto para la fertilidad en machos como en hembras. Los ciclos de ovulación en hembras están afectadas por la misma, y niveles de leptina fuera del intervalo ideal puede tener un efecto negativo sobre la calidad de los óvulos. Los ratones IRS2-/- tienen niveles de leptina circulantes elevados, lo cual probablemente es otro factor que influye la fertilidad.
Por lo tanto, este modelo animal abarca una serie de factores importantes relacionadas con infertilidad y como tal es un modelo adecuado para estudiar la eficacia de compuestos en infertilidad de mamíferos hembra.
EJEMPLO 2. ESTUDIO DE OVULACIÓN, IMPLANTACIÓN Y EMBARAZO
A. Animales
10 ratones hembra IRS2"/_ de edades comprendidas entre 6 y 8 semanas.
6 ratones macho "wild-type" (^82™*) de edades comprendidas entre 6 y 8 semanas. Los ratones hembras y machos se estabularon por separado en condiciones normales, es decir ciclo luz/oscuridad 12h y temperatura y humedad controladas. Los animales se alimentaron a voluntad (también denominado ad libitum) con dieta de pienso estándar.
B. Método
Fase de pre-tratamiento
Tras un periodo de aclimatación, los ratones hembra IRS2" " se estabularon en grupos de 4-6 ratones/jaula. Durante la fase de pre-tratamiento (2 semanas), a los animales se les administro el agua de bebida sin sal de tungstato.
Fase de tratamiento
El tungstato sódico fue administrado en el agua de bebida (ad libitum) mediante una solución de 2 mg/ml de tungstato sódico dihidrato (comercializado por Cario Erba) en agua destilada tras la fase de pre-tratamiento (día 0 de tratamiento) y hasta 4 semanas antes del sacrificio de los animales. La dosis diaria de tungstato sódico ingerida por los ratones fue aproximadamente de 180 mg/kg de peso corporal.
Cruce
Tras las tres primeras semanas de tratamiento, los ratones hembra IRS2"A se estabularon en jaulas por parejas junto a un ratón macho IRS2wt de forma continua. Los ratones se observaron diariamente en busca de signos de embarazo o parto.
Tras 4 semanas se intercambiaron los machos entre las jaulas y se mantuvieron durante 4 semanas más. La administración de tungstato se mantuvo durante las 8 semanas en las que machos y hembras se estabularon conjuntamente. Tras estas 8 semanas se retiró el tratamiento y se mantuvo la estabulación conjunta de machos y hembras durante 4 semanas adicionales.
Sacrificio
Transcurrido este periodo, las hembras fueron sacrificadas y biopsiadas en busca de indicios de embarazo. C. Resultados
Resultados del Estudio de ovulación
Durante el periodo de pre-tratamiento y durante las 3 primeras semanas de tratamiento se realizaron frotis vaginales a 6 ratones hembras elegidos al azar en los días -8; -5; -2; -1 ; 7; 8; 14; 15 y 22, para determinar la fase del ciclo estral en que se encontraban.
Se introdujo en la vagina de los ratones entre 1 y 2 mi de solución salina con una pipeta pasteur. Con la misma pipeta se recogió el exudado vaginal y se extendió en un portaobjetos. Una vez secado al aire, se fijó y se tiñó con la técnica de Papanicolau. La técnica de Papanicolau comprende realizar la tinción de los frotis vaginales fijados en el portaobjetos de la siguiente manera:
- 10 inmersiones en alcohol 50 % v/v;
- Sumergir en solución de hematoxilina de Harris durante 3 minutos;
- Enjuagar con agua corriente;
- 10 inmersiones en Alcohol Acido (1 % Ac. Clorhídrico);
- Enjuagar con agua corriente;
- 10 inmersiones en Alcohol 95 % v/v;
- Sumergir en solución OG-6 durante 30 segundos;
- 10 inmersiones en alcohol 96 % v/v;
- Sumergir en solución de eosina durante 1 minuto;
- 10 inmersiones en alcohol 96 % v/v;
- 10 inmersiones en alcohol 86 % v/v; y
- 10 inmersiones en xilol
Las preparaciones se analizaron por personal entrenado y utilizando una codificación y a ciego simple para eliminar el sesgo del observador. Las muestras se identificaron en las siguientes fases: diestro, proestro, estro, metaestro, anestro o no evaluable. La ciclicidad de las cuatro fases en periodos de 4 a 6 días, son indicadores de un ciclo estral normal, mientras que la ausencia de esta ciclicidad y la persistencia en fases anestro, diestro o proestro son indicadores de la ausencia del ciclo estral.
De los 10 ratones hembra sometidos a estudio, en la Tabla 1 se resumen las fases del ciclo estral de los frotis vaginales realizadas a 6 de estos ratones hembras IRS2"A . Tabla 1
Figure imgf000018_0001
Las fases del ciclo estral son las siguientes: A: Anestro; D: diestro; P: Proestro; E: Estro; y M: metaestro. Las fases del ciclo estral encontrados en los frotis vaginales de los ratones hembras IRS2"A de la Tabla 1 muestran que durante el periodo de pre-tratamiento todos los ratones se encontraban en fase proestro (P) o diestro (D), es decir en ausencia de ciclo estral.
Mientras que tras el inicio de la administración de tungstato, se observa que los ratones hembras IRS2"A se encuentran en fases tardías del ciclo estral, estro (E) y metaestro(M), lo que es indicador de la recuperación del ciclo estral normal. Estos resultados indican que la administración de una sal de tungsteno (VI) permite la recuperación rápida (al séptimo día de tratamiento) del ciclo estral en ratones hembra infértiles IRS2"A no diabéticas en el 100% de ratones analizados. Resultados del Estudio de implantación y embarazo
Transcurrido el periodo de cruce del método del apartado B, las hembras fueron sacrificadas y se llevaron a cabo biopsias en busca de indicios de embarazo.
En la tabla 2 se resume la edad en el momento del tratamiento, si hubo embarazo y el número de embriones por hembra.
Tabla 2
Figure imgf000019_0001
Los resultados de la Tabla 2 muestran que mientras que la tasa de embarazo de los ratones hembra IRS2" " sin tratar es del 9%, la tasa de embarazo de los ratones hembra IRS2"A tratados con tungstato se incrementa hasta el 80%. Además, estos resultados también muestran que la media de crías/embriones implantados por ratón hembra embarazo es de aproximadamente 5, número que se puede considerar comparable al número de crías de un ratón hembra. Así, los resultados de las Tablas 1 y 2 demuestran que una sal de tungsteno (VI) es un tratamiento eficaz para la recuperación de la ovulación y/o el aumento de la implantación del oocito. Así, la administración de una sal de tungsteno (VI) tal y como se define en la presente invención es eficaz para el tratamiento de la infertilidad en mamíferos hembras no diabéticos.
EJEMPLO 3. ESTUDIO DE GLUCEMIA Y PESO CORPORAL
A. Animales
6 ratones hembra IRS2"A de edades comprendidas entre 6 y 8 semanas.
Los ratones hembras se estabularon en condiciones normales, es decir ciclo luz/oscuridad 12h y temperatura y humedad controladas. Los animales se alimentaron a voluntad (también denominado ad libitum) con dieta de pienso estándar.
B. Método
Fase de tratamiento
Tras un periodo de aclimatación, el tungstato sódico fue administrado en el agua de bebida (ad libitum) mediante una solución de 2 mg/ml de tungstato sódico dihidrato (comercializado por Cario Erba) en agua destilada tras la fase de pre-tratamiento (día 0 de tratamiento) y durante 12 días.
C. Resultados
En los días 0, 2, 5, 7, 9 y 12 del período de tratamiento se monitorizó el peso corporal, y tras las 6 horas de ayuno de cada uno de los días mencionados anteriormente se determinó la glucosa en sangre, mediante la extracción de sangre de la vena caudal y con un sensor de glucosa (AccuTrend glucose sensor Roche. Mannheim, Germany). En la tabla 3 se resumen los niveles de glucemia expresados en mg/dl, y en la tabla 4 se resume el peso corporal de los ratones en estudio expresada en gramos. Tabla 3
Figure imgf000021_0001
Tabla 4
Figure imgf000021_0002
Los resultados de la Tabla 3 y 4 muestran que durante la administración de tungstato sódico no se observan variaciones en el peso corporal ni en la glucemia en los primeros 12 días de tratamiento, el mismo período durante el cual a partir del 7 día de tratamiento ya se consigue la restablecer de la ovulación en los ratones hembras ensayados (cf. Tabla 1 ).
Así, los resultados de las Tablas 1 a 4 demuestran que una sal de tungsteno (VI) es un tratamiento eficaz para la recuperación de la ovulación y/o el aumento de la implantación del oocito, de manera independiente de cambios en el peso corporal y cambios en el metabolismo de los carbohidratos. Así, se demuestra que la administración de una sal de tungsteno (VI) tal y como se define en la presente invención o una composición que contiene tal sal de tungsteno (VI) tiene un efecto directo sobre el sistema reproductor femenino y por lo tanto es eficaz para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en mamíferos hembra no diabéticos. EJEMPLO 4. ESTUDIO DE LA ADHERENCIA EMBRIONARIA EN EL ENDOMETRIO
A. Modelo
Para determinar el efecto del tungstato sódico sobre la receptividad endometrial, se utilizó un modelo de adhesión embrionaria humano-humano "in vitro", compuesto de la línea celular endometrial HEC1 -A y la línea celular de trofoectodermo humano JEG-3.
El uso del modelos in vitro, y en concreto el modelo en base a las citadas líneas celulares (HEC-1A y JEG-3), se considera un modelo estándar para el estudio de la receptividad endometrial y especialmente la adhesión del trofoblasto al endometrio (Fertility and Sterility 201 1 ; 96,522-529; Methods in Enzymology 2006;420:3-18 o FASEB J.201 ;26:3715-3727).
La línea JEG-3, línea celular que simula las células del trofoectodermo de un embrión humano, son células que se crecen en monocapa en el laboratorio, usando placas de baja adherencia, son capaces de formar esferoides que simulan al embrión humano; esta es una de las líneas celulares más usadas para realizar ensayos de adhesión embrionaria in vitro.
B. Método
Las líneas celulares se adquirieron comercialmente (American Type Culture Collection (ATCC); Rockville, MD, USA) para realizar los experimentos de adherencia embrionaria en el endometrio. Se descongelaron y expandieron durante 4 pases para disponer de suficientes células para realizar todos los ensayos.
Las células HEC1 -A se plantaron en placas de 24 pocilios y cultivaron con medio de cultivo McCoy 5A, suplementado con 10% suero fetal bovino y 0,1 % de antibióticos
(fungizona y penicilina), hasta llegar a una confluencia del 90%. Tras alcanzar la confluencia se añadió al medio de cultivo tungstato sódico, a una concentración final de 10 μ , así como Withaferrin A (como control, compuesto que evita la adhesión embrionaria) o medio de cultivo (datos de adhesión basal), sin ningún componente adicional, durante 24 horas. Las células JEG-3 se plantaron en placas de baja adhesividad con medio de cultivo 'Eagle's minimal essential médium' (EMEM), suplementado con 10% suero fetal bovino y 0, 1 % de antibióticos (fungizona y penicilina). 24 horas antes del ensayo de adhesión se realizó la formación de los esferoides trofoblásticos JEG-3 a partir de este cultivo. Para ello, se suspendieron en un Erlenmeyer en agitación células JEG-3 en el medio previamente descrito a una concentración de 6x105 células/6ml. Los esferoides resultantes se recogieron para el ensayo de adhesión.
Para el ensayo de adhesión, tras 24h de cultivo de las células HEC-1A con con medio de cultivo añadiendo tungstato sódico, Withaferrin A o sin adicionar ningún tratamiento, se cambió el medio de cultivo por medio de cultivo fresco sin tratamientos en estudio.
Se añadieron los esferoides de trofoectodermo sobre la monocapa de células HEC-1A, colocando de 6 a 10 esferoides por pocilio. La adhesión de los esferoides se midió a los
60 minutos, contabilizando como esferoide no adherido aquel que se encontraba flotando en el medio de cultivo y esferoide adherido el que no se encontraba flotando.
El examen se realizó con un microscopio invertido (Nikon Diaphot 300; Nikon Corp.,
Tokyo, Japan). El ensayo se realizó por triplicado.
C. Resultados
Los resultados obtenidos están recogidos en la tabla 5. Se observó un mayor porcentaje de adhesión embrionaria en las condiciones en las que las líneas HEC-1A fueron tratadas con el tungstato sódico frente a aquellas en las que no lo estuvo. No se observa ninguna adhesión en las células tratadas con el control negativo (C-) Withaferrin A.
Tabla 5
Figure imgf000023_0001
COMPOSICIONES PARTICULARES DE LA INVENCIÓN
A continuación se preparan composiciones alimentarias según la invención, a modo ilustrativo. En ningún caso deben ser interpretadas como limitantes del alcance de la invención.
EJEMPLO 5
Se prepara un aliño de ensalada enriquecido con una sal de tungsteno. Se añade a 250 gr de un aliño disponible comercialmente una cantidad de 25 mg de Na2WO4 (100 mg/kg) y se agita mecánicamente durante 30 minutos.
EJEMPLO 6
Se prepara una salsa tipo kétchup, enriquecida con una sal de tungsteno. Para ello se añaden 170 mg de Ca WO4 a 200 gr de kétchup comercialmente disponible y se agita mecánicamente durante 1 h.
EJEMPLO 7
Se prepara leche enriquecida con una sal de tungsteno. Para ello se dispone 1 kg de leche de vaca entera, se añaden 150 mg de ZnWO4 y se agita mecánicamente durante 20 minutos. Inmediatamente antes de su consumo se recomienda agitar el envase.
EJEMPLO 8
Se prepara un zumo de fruta enriquecida con una sal de tungsteno. Se añaden 500 mg de MgWO4 a 1 kg de zumo comercial y se agita mecánicamente durante 10 minutos. Inmediatamente antes de su consumo se recomienda agitar el envase.
EJEMPLO 9
Se preparan comprimidos recubiertos con la siguiente composición:
Celulosa microcristalina PH200 (Diluyente/deslizante) 250,00 mg
Sílice coloidal anhidra (Deslizante/adsorbente) 3,00 mg
Estearato de magnesio (Lubrificante) 5,00 mg
Talco (Lubrificante) 7,00 mg
Opadry® blanco (Opadry® y-1 -7000 White)(*) (Película de recubrimiento) 8,00 mg Tungstato sódico dihidratado 200,00 mg
(*) Mezcla de hidroxipropilmetilcelulosa, polietilenglicol 6000 y dióxido de titanio (E- 171 ) EJEMPLO 10
Se preparan comprimidos efervescentes con la siguiente composición:
Sorbitol, aspartamo, sucralosa y xilitol (edulcorantes) 0,025mg por cada 10 mg Carbonato cálcico 0,350mg por cada 10 mg
Ácido cítrico (acidulante) 0,650mg por cada 10 mg
Carbonato ácido de sodio (corrector de la acidez) 0,350mg por cada 10 mg Aroma de naranja 0,25mg por cada 10 mg
Sal de tungsteno
Ejemplo 1 1
Se preparan cápsulas de gelatina con la siguiente composición:
Nifedipina 6 mg
Goma de xantano 5 mg
Sabor de naranja 0,3 mg
Acido cítrico 0,4 mg
Gelucire 44/14 90 mg
Celulosa microcristalina PH10 (Diluyente) 92,00 mg/cápsula
Tungstato sódico dihidratado 100,00 mg/cápsula

Claims

REIVINDICACIONES
1 . Una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma, para su uso para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, o para mejorar la eficacia de una técnica de reproducción asistida en un mamífero.
2. Una sal de tungsteno (VI) según la reivindicación 1 , donde el mamífero es humano.
3. Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 y 2, donde la administración de dicha sal se realiza en una dosis diaria de entre 0,001 mg y 1000 mg de sal de tungsteno (VI) por cada kg de peso corporal del mamífero hembra.
4. Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicha sal comprende un anión de tungsteno (VI) y un catión farmacéuticamente, veterinariamente o dietéticamente aceptable.
5. Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el catión es un catión alcalino o alcalinotérreo.
6. Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, caracterizada porque el catión se selecciona entre el grupo que consiste en sodio, potasio, magnesio, calcio y zinc.
7. Una sal de tungsteno (VI) según la reivindicación 6, caracterizada porque es el catión es sodio.
8. Una sal de tungsteno (VI) según la reivindicación 6, donde el catión es zinc.
9. Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, caracterizada porque el anión de tungsteno (VI) se selecciona de los iones W04 2~, HW0 ", W207 2" y HW207 ".
10. Una sal de tungsteno (VI) según la reivindicación 9, caracterizada porque el anión es W0 2".
1 1 . Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 10, donde el solvato es el dihidrato.
12. Una sal de tungsteno (VI) según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, donde el mamífero femenino no diabético se selecciona del grupo de mamíferos que necesitan restaurar y/o potenciar la ovulación, mejorar la calidad del oocito o del embrión, aumentar la implantación del cigoto en la pared uterina, regular una alteración del eje hipotalámico-hipofisario, incluyendo síndrome de ovario poliquístico, síndrome metabólico, hiperprolactinemia, endometriosis, hipotiroidismo, esclerosis múltiple, artritis reumatoide, lupus eritematoso, cirrosis, artritis reumatoide, celiaquía, fallo renal crónico, causas idiopáticas y desórdenes alimentarios, tales como anorexia nerviosa y bulimia.
13. Una composición que comprende una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en una concentración igual o mayor de 100 mg/kg y al menos un excipiente o vehículo farmacéuticamente, veterinariamente o dietéticamente aceptable, para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético, o para mejorar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero.
14. Una composición según la reivindicación 13, caracterizada porque el excipiente o vehículo es farmacéuticamente o veterinariamente aceptable, y la composición es una composición farmacéutica para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético.
15. Una composición según la reivindicación 13, caracterizada porque el excipiente o vehículo es farmacéuticamente o veterinariamente aceptable, y la composición es una composición farmacéutica para aumentar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero.
16. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 14 o 15, caracterizada porque se presenta en forma de pildora, tableta, pastilla, cápsula, polvo, oblea, polvo o comprimidos efervescentes, disolución, suspensión, jarabe o gránulos.
17. Composición según la reivindicación 13, caracterizada porque es una composición alimentaria para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético.
18. Composición según la reivindicación 17, caracterizada porque la composición es una composición líquida o una bebida.
19. Composición según la reivindicación 17, caracterizada porque la composición es una composición sólida.
20. Composición según la reivindicación 17, caracterizado porque la composición alimentaria es un suplemento o complemento nutricional.
21 . Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 13 a 20, caracterizada porque comprende sacarosa.
22. Uso de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de infertilidad en un mamífero hembra no diabético, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético o para aumentar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero.
23. Método de tratamiento de infertilidad, para favorecer la fertilidad y la reproducción normal en un mamífero hembra no diabético o para aumentar la eficacia de una técnica de reproducción asistida aplicada a un mamífero, que comprende la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de una sal de tungsteno (VI) o un solvato de la misma según se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12.
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