WO2015132427A1 - Derivados de piridazin-3(2h)-ona inhibidores selectivos de la isoforma b de la monoaminooxidasa - Google Patents

Derivados de piridazin-3(2h)-ona inhibidores selectivos de la isoforma b de la monoaminooxidasa Download PDF

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Mª del Carmen TERÁN MOLDES
Pedro Besada Pereira
Tamara COSTAS CAAMAÑO
Mª del Carmen COSTAS LAGO
Noemí Vila Molares
Dolores VIÑA CASTELAO
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Universidade De Vigo
Universidade De Santiago De Compostela
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    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia

Definitions

  • TECHNICAL FIELD This invention relates to new compounds derived from C4, C5 or C6 substituted pyridazinone with dithiocarbamate fragments and of general structure I, II and III, respectively, which are selective inhibitors of MAO-B, and their use to prepare drugs intended to treat disorders derived from hyperactivity of MAO-B, in particular degenerative disorders of the central nervous system (CNS), such as Pakinson's disease (PD), Alzheimer's disease (AD) and other dementias.
  • CNS central nervous system
  • PD Pakinson's disease
  • AD Alzheimer's disease
  • MAO Monoamine oxidases
  • MAO-A has a higher affinity for serotonin (5-hydroxytryptamine, 5-HT), adrenaline (A) and norepinephrine (NA) and is selectively inhibited by clorgiline and moclobemide
  • MAO-B preferentially degrades the ⁇ -phenylethylamine and benzylamine. and is selectively inhibited by selegiline and rasagiline.
  • MAOIs that lack selectivity, such as iproniazide.
  • MAOs play an important role in regulating the concentration of biogenic amines in the brain, which are involved in different pathological processes that affect the CNS, which determines the clinical importance of MAOIs.
  • the inhibition of MAO-A in the CNS enhances the levels of norepinephrine and serotonin, two neurotransmitters involved in depressive disorders, while the inhibition of MAO-B increases the levels of dopamine, which in EP are depleted, which explains that the MAOI-A are used as antidepressants and anxiolytics and the MAOI-B for the treatment of PD.
  • AD Alzheimer's disease
  • ⁇ -amyloid plaques ⁇
  • the traditional fannacológico AD treatment involves the administration of acetylcholinesterase inhibitors (Rang and Dale Pharmacology 6 Elsevier ed.
  • MAOI-B a neurological disorder that affects motor activity and is due to a decrease in the levels of dopamine in the striatum, caused by the progressive death of nigrostriated neurons.
  • PD Translational Neurodegeneration 1: 10, 2012; Translational Neurodegeneration 2:19, 2013
  • L-dopa dopamine precursor
  • CMT catechol-ortho-methyltransferase
  • Pyridazine derivatives have a broad spectrum of pharmacological activity (cardiotonic, antihypertensive, platelet antiplatelet, lipid-lowering, analgesic and anti-inflammatory, antinociceptive, antidepressant, anxiolytic, GABA antagonist, hypoglycemic, anti-infective or antineoplastic among others) and many of them 3 (2-structure with analogues) -piridazinone (Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical Division: Amsterdam 1990, 1-49; Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical Division: Amsterdam 1992, 141-183; Med. Chem. Res 22, 2539-2552, 2013).
  • the pyridazine ring is present in compounds that act as selective inhibitors of MAO-B, these are condensed polycyclic systems (J. Med. Chem. 49, 3743-3747, 2006; J. Med Chem. 50, 5364-5371 , 2007; J. Med. Chem. 49, 6264-6272, 2007) (compound 4, figure 2).
  • the compounds of the present invention have no structural relationship with those described so far and behaved as selective inhibitors against MAO-B.
  • These are new 3 (2H) -pyridazinone derivatives substituted at positions 4, 5 or 6 with dithiocarbamate fragments, linked to these positions through an alkyl chain of variable length, which selectively inhibit the activity of MAO-B when its bioactivity is evaluated in vitro.
  • the present invention relates to new compounds derived from pyridazinone substituted in C4, C5 or C6 with dithiocarbamate fragments and of general structure I, II and III, respectively, which are selective in vitro inhibitors of MAO-B, and their possible use to prepare drugs intended to treat disorders derived from the hyperactivity of MAO-B, in particular degenerative disorders of the central nervous system (CNS), such as Pakinson's disease (PD), Alzheimer's disease (AD) and other dementias.
  • CNS central nervous system
  • n is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
  • R is a group selected from: a hydrogen atom, an alkyl group Ci-C 6 carboxyalkyl group Ci-C 6 haloalkyl group , O-CO, C 6 aryl group Ci 2, an aralkyl group C 6 - C 12 , a C 4 -Ci 2 heteroaryl group;
  • R 1 is a group selected from: a hydrogen atom, a Ci-Ce alkyl group, a halogen atom,
  • R 2 is a group selected from: a hydrogen atom, a Ci-Ce alkyl group, a halogen atom,
  • R 3 identical or different are selected from: a hydrogen atom, an alkyl group Ci-C 6 saturated heterocycloalkyl group Ci-C 6, an aryl C 6 Ci 2 group, an aralkyl group C 6 Ci 2 , a C 4 -Ci 2 heteroaryl group,
  • Either R 3 and R 4 form a cycle selected from: a C 5 -C 8 cycloalkyl, a C 5 -C 8 heterocycloalkyl, a substituted C 5 -C 8 heterocycloalkyl, a substituted C-Cs N-aryl heterocycloalkyl , a heterocycloalkyl C 5 -C 8 N- substituted cycloalkyl, heterocycloalkyl C 5 -C 8 N-substituted aralkyl, a heterocycloalkyl C 5 -C 8 N-acyl substituted.
  • R is CH 3 , phenyl (Ph) or benzyl (Bn).
  • R 1 is H, halogen (Cl, Br, I) or an alkyl chain
  • R 2 is hydrogen (H) or methyl (CH 3 ).
  • n is optionally 1, 2 or 3.
  • R 3 and R 4 can be hydrogen, identical or different alkyl groups such as methyl (CH 3 ) or ethyl (CH 2 CH 3 ) or together with the nitrogen atom (N) they can constitute a 5- or 6-membered heterocyclic ring, which is aliphatic or incorporating an oxygen atom (O) or a second N atom.
  • This second N atom can be substituted with a linear alkyl group (CH 3 , CH 2 CH 3 ) or cyclic (cyclopropyl), or with a aryl (Ph), aralkyl (Bn) or aroyl (benzoyl, Bz) group.
  • the compounds of general formula I are represented by the formulas Iai-a 3 3 (table I), Ibi-b 3 3 (table II), Ici-c 3 3 (table III) and Idi-d 3 3 (Table IV) where R 1 is preferably H.
  • Table I the formulas Iai-a 3 3 (table I), Ibi-b 3 3 (table II), Ici-c 3 3 (table III) and Idi-d 3 3 (Table IV) where R 1 is preferably H.
  • n is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
  • R is a group selected from: a hydrogen atom, an alkyl group Ci-C 6 carboxyalkyl group Ci-C 6 haloalkyl group , Ci-C 6, an aryl C 6 -C 12 group, an aralkyl group C 6 -Ci2, a C 4 -C 12 heteroaryl group;
  • R 1 is a group selected from: a hydrogen atom, a Ci-C 6 alkyl group, a halogen atom,
  • R 2 is a group selected from: a hydrogen atom, a Ci-Ce alkyl group, a halogen atom,
  • R 3 , R 4 identical or different are selected from: a hydrogen atom, a Ci-Ce alkyl group, Ci-C 6 saturated heterocycloalkyl group, a C 6 -Ci 2 aryl group, a C6-Ci 2 aralkyl group, a C4-C12 heteroaryl group,
  • Either R 3 and R 4 form a cycle selected from: a C 5 -C 8 cycloalkyl, a C 5 -C 8 heterocycloalkyl, a C 5 -C 8 N-substituted alkylcycloalkyl, a C 5 -C 8 N- heterocycloalkyl substituted aryl, a C 5 -C 8 N-substituted cycloalkyl, a substituted C 5 -C 8 N-aralkyl heterocycloalkyl, a Cs-Cs N-acyl substituted heterocycloalkyl.
  • R is CH 3 , phenyl (Ph) or benzyl (Bn).
  • R 1 is H, halogen (Cl, Br, I) or an alkyl chain
  • R 2 is hydrogen (H).
  • n is optionally 1, 2 or 3.
  • R 3 and R 4 may be hydrogen, identical or different alkyl groups such as methyl (CH 3) or ethyl (CH 2 CH 3 ) or together with the nitrogen atom () may constitute a 5- or 6-membered heterocyclic ring, which is aliphatic or which incorporates an oxygen (O) atom or a second N atom.
  • This second N atom can be substituted with a linear (CH3, CH 2 CH 3 ) or cyclic (cyclopropyl) alkyl group, or with an aryl group ( Ph), aralkyl (Bn) or aroyl (benzoyl, Bz).
  • the compounds of general formula II are represented by formulas IIai-a33 (table V), IIbi-b33 (table VI), IIci-C33 (table VII) wherein R 1 and are preferably H.
  • n is an integer selected from 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
  • R is a group selected from: a hydrogen atom, an alkyl group Ci-C 6 carboxyalkyl group AD 6, a haloalkyl group Ci-C 6, a C 6 aryl group Ci 2, an aralkyl group C 6 Ci 2 , a C 4 -Ci 2 heteroaryl group;
  • R 1 is a group selected from: a hydrogen atom, a Ci-C 6 alkyl group, a halogen atom,
  • R 2 is a group selected from: a hydrogen atom, a C ⁇ -Ce alkyl group, a halogen atom,
  • R 3 identical or different are selected from: a hydrogen atom, an alkyl group Ci-C 6 saturated heterocycloalkyl group Ci-C 6, an aryl C 6 Ci 2 group, an aralkyl group C 6 Ci 2 , a C 4 -G 2 heteroaryl group,
  • Either R 3 and R 4 form a cycle selected from: a C 5 -C 8 cycloalkyl, a Cs-Cs heterocycloalkyl, a C 5 -C 8 substituted N-alkyl heterocycloalkyl, a substituted N-aryl Cs-Cs heterocycloalkyl, a C 5 -C 8 N -cycloalkyl substituted heterocycloalkyl, a substituted C 5 -C 8 N-aralkyl heterocycloalkyl, a C 5 -C 8 -cyclo-substituted heterocycloalkyl.
  • R is CH 3 , phenyl (Ph) or benzyl (Bn).
  • R 1 is H, halogen (Cl, Br, I) or an alkyl chain
  • R 2 is hydrogen (H).
  • n is optionally 1, 2 or 3.
  • R 3 and R 4 can be hydrogen, identical or different alkyl groups such as methyl (C3 ⁇ 4) or ethyl (CH 2 CH 3 ) or together with the nitrogen atom (N) they can constitute a 5- or 6-membered heterocyclic ring, which is aliphatic or incorporating an oxygen (O) atom or a second N atom.
  • This second N atom can be substituted with a linear (CH 3 , CH 2 CH 3 ) or cyclic (cyclopropyl) alkyl group, or with an aryl (Ph), aralkyl (Bn) or aroyl (benzoyl, Bz) group.
  • the compounds of general formula I are represented by formulas IIIai-a33 (table VIII), IIIbi-b33 (table IX), IIIci-C33 (table X) wherein R 1 and R 2 are preferably H.
  • the invention in another aspect relates to a medicament comprising a molecule of formula (I), (II) or (III), as described above, or a salt thereof in a Pharmaceutically acceptable carrier, with one or more acceptable pharmaceutical excipients.
  • said medicament further comprises one or more additional therapeutic agents.
  • the invention relates to a method for the synthesis of a molecule of formula (I), (II) or (III), as described above, characterized in that it comprises at least one stage, wherein the 6 ( 5) (4) -bromoalkyl-3 (2H) -pyridazinone of formula (IV), (IX) or (XIII), a secondary amine of formula V and carbon disulfide (CS 2 ) react in the presence of base in a solvent at room temperature.
  • R, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and n are as described above for the compounds of formula I.
  • CS 2 and the amines of formula V are commercial compounds, while 6- bromoalkyl-3 (2H) -pyridazinones of formula IV can be obtained from 6- hydroxyalkyl-3 (2H) -pyridazinones of formula VI, wherein R, R 1 , R 2 and n are as described above, by bromination with carbon tetrabromide (CBr 4 ) and triphenylphosphine (PPh 3 ) or with N-bromosuccinimide (BS) and PPh 3 , adapting standard procedures (J Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994).
  • CBr 4 carbon tetrabromide
  • PPh 3 triphenylphosphine
  • BS N-bromosuccinimide
  • the precursors of structure VI can be prepared in two stages (scheme 2) from 5- (tert-butyldiphenylsilyloxyalkyl) -5-hydroxy (methoxy) -5H-furan-2-ones of structure VII, wherein R 1 , R 2 and n are as described above, and similar to that described in the literature (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49,!> ⁇ - ⁇ 2, 2011).
  • a first reaction of furanones VII with methylhydrazine (CH 3 NHNH 2 ), phenylhydrazine (PhNHNH 2 ) or benzylhydrazine (BnNHNH 2 ) in ethanol (EtOH), provides 6- (tert-butyldiphenylsilyloxyalkyl) -3 (2H) -pyrididazinones structure VIII, wherein R, R 1 , R 2 and n are as described above, which are transformed into the 6-hydroxyalkyl-3 (2H) -pyridazinones VI by reaction with tetrabutylammonium fluoride (TBAF) in tetrahydrofuran (THF) .
  • TBAF tetrabutylammonium fluoride
  • Furanones of structure VII can be prepared from the corresponding 2- alkylfurans by oxidation with singlet oxygen, analogously to that described in the literature ⁇ Tetrahedron Lett. 45,5207-5209, 2004; Bioorg Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson Chem., 49, 437-442, 2011).
  • R, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and n are as described above for the compounds of formula II.
  • CS 2 and the amines of formula V are commercial compounds, while 5- bromoalkyl-3 (2H) -pyridazinones of formula IX can be obtained from 5- hydroxyalkyl-3 (2H) -pyridazinones of formula X, wherein R, R 1 , R 2 and n are as described above, by bromination with carbon tetrabromide (CBr 4 ) and triphenylphosphine (PPh 3 ) or with N-bromosuccinimide (NBS) and PPh 3 , adapting standard procedures (J Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994).
  • the precursors of structure X can be prepared in two stages (scheme 4) from 4- (tert-butyldiphenylsilyloxyalkyl) -5-hydroxy-5H-furan-2-ones of structure XI, wherein R 1 , R 2 and n they are as described above, and similar to that described in the literature (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437 ⁇ 142, 2011).
  • a first reaction of furanones XI with methylhydrazine (CH 3 NHNH 2 ), phenylhydrazine (PhNHNH 2 ) or benzylhydrazine (BnNHNH 2 ) in ethanol (EtOH), provides the 5- (ferc-butyldiphenylsilyloxyalkyl) -3 (2H) -pyrididazinones structure XII, wherein R, R 1 , R 2 and n are as described above, which are transformed into the 5-hydroxyalkyl-3 (2H) -pyridazinones X by reaction with tetrabutylammonium fluoride (TBAF) in tetrahydrofuran (THF) .
  • TBAF tetrabutylammonium fluoride
  • Furanones of structure XI can be prepared from the corresponding 3- alkylfiiranos by oxidation with singlet oxygen, analogously to that described in the literature (Tetrahedron Lett. 45, 5207-5209, 2004; Bioorg. Med. Chem. Lett 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437 ⁇ 42, 201 1).
  • R, R 1 , R 2 , R 3 , R 4 and n are as described above for the compounds of formula III.
  • CS 2 and the amines of formula V are commercial compounds, while 4- bromoalkyl-3 (2H) -pyridazinones of formula XIII can be obtained from 4- hydroxyalkyl-3 (2H) -pyridazinones of formula XIV, wherein R, R 1 , R 2 and n are as described above, by bromination with carbon tetrabromide (CBr 4 ) and triphenylphosphine (PPh 3 ) or with N-bromosuccinimide (NBS) and PPh 3 , adapting standard procedures (J Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994).
  • CBr 4 carbon tetrabromide
  • PPh 3 triphenylphosphine
  • N-bromosuccinimide N-bromosuccinimide
  • the precursors of structure XIV can be prepared in two stages (scheme 6) from 3- (tert-butyldiphenylsilyloxyalkyl) -5-hydroxy-5H-furan-2-ones of structure XV, wherein R 1 , R 2 and n they are as described above, and similar to that described in the literature (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442, 2011).
  • a first reaction of furanones XV with methylhydrazine (CH 3 NHNH 2 ), phenylhydrazine (PhNHNH 2 ) or benzylhydrazine (BnNHNH 2 ) in ethanol (EtOH), provides 5- (forc-butyldiphenylsilyloxyalkyl) -3 (2H) -pyrididazinones structure XVI, wherein R, R 1 , R 2 and n are as described above, which are transformed into the 5-hydroxyalkyl-3 (2H) -pyridazinones XIV by reaction with tetrabutylammonium fluoride (TBAF) in tetrahydrofuran (THF) .
  • TBAF tetrabutylammonium fluoride
  • Furanones of structure XV can be prepared from the corresponding 3- alkylfurans by oxidation with singlet oxygen, analogously to that described in the bibliography ⁇ Tetrahedron Lett. 45,5207-5209, 2004; Bioorg Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson Chem., 49, 437 ⁇ 142, 201 1).
  • Compounds of formula Ia-d, Ila-c and IIIa-c selectively inhibit MAO isoform B and can be used to prepare drugs intended to treat disorders derived from hyperactivity of MAO-B, such as degenerative disorders of the nervous system central (CNS), such as Pakinson's disease (PD), Alzheimer's disease (AD) and other dementias.
  • CNS nervous system central
  • PD Pakinson's disease
  • AD Alzheimer's disease
  • Proton nuclear magnetic resonance spectra (* H NMR) are consistent in all cases with the proposed structures.
  • the ! H NMR were recorded on the Bruker 400 DPX and Bruker ARX 400 spectrophotometers, using as deuterated chloroform solvent (CDCI3) or deuterated methanol (CD3OD). Chemical shifts are expressed in units ⁇ , in parts per million (ppm), relative to tetramethylsilane (TMS), coupling constants (J) are indicated in Hertz (Hz), and multiplicity as follows: s, singlet; d, double up; t, triplet; m, multiplet.
  • High resolution mass spectra (EMAR) were performed on a Bruker Microtof Focus spectrometer, using electrospray ionization (ESI) or electronic impact ionization (El).
  • the Amplex® Red reagent (Molecular Probes, Eugene, Oregon, USA) and the MAO isoforms present in the microsomal fraction, prepared from Insect cells (BTI-TN-5B1-4) infected with recombinant baculovirus, containing cDNA inserts of human MAO-A or MAO-B (Sigma-Aldrich Qu ⁇ mica SA, Alcobendas, Spain).
  • H 2 0 2 catalyzed by the 2 isoforms of MAO can be detected by using the Amplex® Red reagent (10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine), a non-fluorescent, highly sensitive substance that reacts with H 2 0 2 in the presence of horseradish peroxidase to produce a fluorescent product, resorrufina.
  • Amplex® Red reagent 10-acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine
  • MAO-A 1.1 ⁇ g
  • specific activity 150 nmoles of p-tyramine oxidized to p-hydroxyphenylacetaldehyde per minute per mg of protein
  • MAO-B 7.5 ⁇ g
  • specific activity 22 nmoles of p-tyramine transformed per minute per mg of protein
  • H 2 0 2 and, consequently, of resorrufina was quantified at 37 ° C in a plate fluorescence reader (FLX800TM, Bio-Tek® Instruments, Inc., Winooski, VT, USA), determining the fluorescence generated (excitation 545 nm, emission 590 nm) for 15 minutes, a period in which the increase in fluorescence was linear from the beginning.
  • the specific fluorescence emission (used to obtain the final results) was calculated after subtracting the background activity, which was determined in vials, in which the solutions with the MAO isoforms were replaced by sodium phosphate buffer solution.
  • results shown in the text and in the tables are expressed as the mean ⁇ standard error of the mean (e.e.m.) of five experiments.
  • the statistically significant difference between two means was determined by one-way analysis of variance (ANOVA), followed by Dunnett's multiple comparison test.
  • IC 50 the IMAO activity of the compounds of formula I, II and III and that of the reference inhibitors was expressed as IC 50 , that is, as the concentration of each compound necessary to produce a decrease in the control value of the activity enzymatic of the 50% MAO isoforms.
  • the OriginTM 5.0 software (Microcal Software, Inc., Northampton, MA, USA) was used to determine the IC 0 of each compound.
  • the IC50 values were calculated from the equations of the lines obtained by linear regression (least squares method) of the points resulting from representing the log of the molar concentration of the compound studied (abscissa axis) versus the percentage inhibition of the control MAO activity achieved with said concentration (ordinate axis). This linear regression was carried out using for each compound the data obtained with between 4 and 6 concentrations capable of inhibiting between 20% and 80% the enzymatic control activity of the isoenzymes of the
  • the drugs and chemical substances used in the experiments were the compounds of formulas I, II and III, moclobemide (kindly supplied by the Hoffman-La Roche laboratories, Basel, Switzerland), selegiline and iproniazid phosphate (acquired in Sigma- Aldrich, Spain), resorrufma sodium salt, clorgiline hydrochloride, p-tyramine hydrochloride, sodium phosphate and horseradish peroxidase (supplied in the Molecular Probes MAO Amplex® Red test kit) .
  • Table XI shows the IC 0 values in micromoles / L ( ⁇ ) of the compounds detailed above (Ich, Id 3 , Id4, Id5, Idn, Iais, Ia 2 s, IIc 2 , IIc 3 , IIc4, lines , lien, IIIc3, Ules, IIIcu).
  • Table XI shows the IC 0 values in micromoles / L ( ⁇ ) of the compounds detailed above (Ich, Id 3 , Id4, Id5, Idn, Iais, Ia 2 s, IIc 2 , IIc 3 , IIc4, lines , lien, IIIc3, Ules, IIIcu).
  • IC50 values of the compounds studied (including reference inhibitors) on the enzymatic activity of isoforms of human recombinant MAO and selectivity ratio for MAO-B [IC50 (MAO-A)] / [CI 5 or (MAO -B)]).
  • hMAO-B selectivity index IC50 (hMAO-A) / IC 50 (hMAO-B)

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Abstract

Esta invención se refiere a derivados de piridazin-3(2H)-ona de estructura general (I), (II) y (III), que son inhibidores selectivos de la MAO-B, y a su uso para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la enfermedad de Pakinson (EP), la enfermedad de Alzheimer (EA) y otras demencias. Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4, 5 o 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable (n=l, 2, 3). Esta invención también se dirige a la preparación de dichos compuestos.

Description

Derivados de piridazin-3(2H)-ona inhibidores selectivos de la isoforma
B de la monoaminooxidasa
Sector de la técnica Esta invención se refiere a nuevos compuestos derivados de piridazinona sustituidos en C4, C5 o C6 con fragmentos de ditiocarbamato y de estructura general I, II y III, respectivamente, que son inhibidores selectivos de la MAO-B, y a su uso para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO- B, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la enfermedad de Pakinson (EP), la enfermedad de Alzheimer (EA) y otras demencias.
Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4, 5 o 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable. A continuación se detallan las fórmulas estructurales generales de las 3 series de compuestos, estructuras I, II y III.
.
Figure imgf000002_0001
Estado de la técnica
Las monoaminooxidasas (MAO) son flavoenzimas presentes en la membrana externa de las mitocondrias de las células del SNC y de tejidos periféricos, en donde catalizan la desaminación oxidativa de aminas endógenas o exógenas para originar los aldehidos correspondientes, amoniaco y H202. Se conocen dos isoenzimas de la MAO, denominadas MAO-A y MAO-B, que comparten aproximadamente el 70% de la secuencia de aminoácidos y que se diferencian por su estructura tridimensional, por la selectividad de sustrato, y por la existencia de inhibidores selectivos (Proc. Nati. Acad. Sci. U.S.A 105, 5739-5744, 2008; J. Biol. Chem. 280(16), 15761-15766, 2005). Ambas isoenzimas desempeñan un papel importante en la regulación de la concentración de aminas biógenas en el cerebro; éste hecho junto con la selectividad de sustrato determina la importancia clínica de los inhibidores de MAO (IMAO). Así, la MAO-A tiene mayor afinidad por la serotonina (5-hidroxitriptamina, 5-HT), adrenalina (A) y noradrenalina (NA) y es inhibida selectivamente por la clorgilina y moclobemida, mientras que la MAO-B degrada preferentemente la β-feniletilamina y la bencilamina.y es inhibida selectivamente por la selegilina y rasagilina. También existen algunos IMAO que carecen de selectividad, como la iproniacida.
En la figura 1 se detalla la estructura de los compuestos IMAO citados anteriormente.
Figure imgf000003_0001
Figura 1
Estudios funcionales sobre ambas isoenzimas han puesto de manifiesto que las MAO desempeñan un papel importante en la regulación de la concentración de aminas biógenas en el cerebro, que están involucradas en distintos procesos patológicos que afectan al SNC, lo que determina la importancia clínica de los IMAO (Curr. Med, Chem. 11, 2033-2043, 2004). La inhibición de la MAO-A en el SNC potencia los niveles de noradrenalina y serotonina, dos neurotransmisores implicados en trastornos depresivos, mientras que la inhibición de la MAO-B incrementa los niveles de dopamina, que en la EP se encuentran mermados, lo que explica que los IMAO-A se utilicen como antidepresivos y ansiolíticos y los IMAO-B para el tratamiento de la EP. La EA es una enfermedad neurodegenerativa progresiva que supone el tipo mas habitual de demencia senil. Aunque su etiología es múltiple y compleja está asociada a la acumulación de placas β-amiloides (βΑ) en el cerebro, que puede promover la pérdida de neuronas colinérgicas en la corteza cerebral y en el hipocampo, lo que explica la deficiencia cognitiva y la pérdida de memoria que se manifiesta a corto plazo en los pacientes con la EA (Velázquez Farmacología Básica y Clínica 17 ed. Panamericana: Madrid 2005, 329-335). Por consiguiente, el tratamiento fannacológico tradicional de la EA implica la administración de inhibidores de la acetilcolinesterasa (Rang y Dale Farmacología 6a ed. Elsevier: Barcelona 2008, 515-516 ), enzima que degrada la acetilcolina. Sin embargo, se han realizado estudios que evidencian un incremento de actividad de la MAO-B en el cerebro de pacientes que sufren deteminados trastornos neurodegenerativos como por ejemplo la EP o la EA (Biochem. Pharmacol. 38, 555- 561, 1989) y han surgido nuevas expectativas terapéuticas. El aumento de actividad de la MAO-B cerebral origina un incremento de las especies reactivas de oxígeno (ROS) que contribuyen al estrés oxidativo y a la muerte neuronal. Aunque se requieren mas estudios para clarificar los efectos beneficiosos de los IMAO-B en los procesos neurodegenerativos, como la EA, dichos efectos se relacionan con la reducción de ROS, que son neurotóxicas, y con el incremento de monoaminas en el cerebro de estos pacientes (Neurotoxicology 25, 271-277, 2004; Journal of Neuroscience Research 79, 172-179, 2005)
En la actualidad la principal aplicación terapéutica de los IMAO-B es en el tratamiento de la EP (Translational Neurodegeneration 1 :10, 2012; Translational Neurodegeneration 2:19, 2013), un trastorno neurológico que afecta a la actividad motora y que se debe a una disminución de los niveles de dopamina en el estriado, provocada por la muerte progresiva de neuronas nigroestriadas. Aunque el tratamiento clásico de la EP ha sido la administración de L-dopa (precusor de la dopamina) asociada a un inhibidor de la enzima dopa descarboxilasa periférica, alternativas terapéuticas más recientes implican la administración de inhibidores de la catecol-orto-metiltrasferasa (COMT), como la entecapona, y también de IMAO-B selectivos, como la selegilina y la rasagilina {Translational Neurodegeneration 1 : 10, 2012).
Existen numerosos artículos y patentes que describen compuestos que actúan como inhibidores selectivos de la MAO-B y sus aplicaciones en trastornos neurodegenerativos, como por ejemplo derivados de cumarina (ES 2343347; J. Med. Chem. 54, 7127-7131, 201 1) (compuesto 1, figura 2), γ-cromonas (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 2709-2712, 2010; Bioorg. Med. Chem. Lett. 21, 707-709, 201 1) (compuesto 2, figura 2), pirazolinas y otros derivados de diazaheterociclos (J. Med. Chem. 48, 7113- 7122, 2005; Bioorg. Med Chem. Lett 20, 6479-6482, 2010; J. Med. Chem. 49, 3743- 3747, 2006; J. Med Chem. 50, 5364-5371, 2007) (compuestos 3 y 4, figura 2), tiazolilhidrazinas (J. Med. Chem. 53, 6516-6520, 2010; Arch. Pharm. Chem. Life Sci. 346, 17-22, 2013) (compuesto 5, figura 2), ditiolanotionas (WO2006/089861) (compuesto 6, figura 2), y aminas o amidas derivadas de sistemas heterocíclicos (EP 1524267; WO 2004/007429; EP1524265, J. Med. Chem. 50, 922-931, 2007) (compuestos 7 y 8, figura 2).
Figure imgf000005_0001
Figura 2
En la figura 2 se detalla la estructura de diversos compuestos con actividad IMAO-B. La piridazina es una diazina poco frecuente en productos naturales. Sin embargo, este heteronúcleo forma parte de un reducido grupo de estructuras reconocidas como privilegiadas, debido a su capacidad de generar compuestos activos frente a numerosas dianas, (Med. Chem. Común. 2, 935-941, 2011). Los derivados de piridazina poseen un amplio espectro de actividad farmacológica (cardiotónica, antihipertensiva, antiagregante plaquetaria, hipolipemiante, analgésica y antiinflamatoria, antinociceptiva, antidepresiva, ansiolítica, antagonista del GABA, hipoglucemiante, antiinfecciosa o antineoplásica entre otras) y muchos de ellos son análogos con estructura de 3(2H)-piridazinona (Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical División: Amsterdam 1990, 1-49; Progress in Medicinal Chemistry, Elsevier Science Publishers Biomedical División: Amsterdam 1992, 141- 183; Med. Chem. Res 22, 2539-2552, 2013).
El anillo de piridazina está presente en compuestos que actúan como inhibidores selectivos de la MAO-B, se trata de sistemas policíclicos condensados (J. Med. Chem. 49, 3743-3747, 2006; J. Med Chem. 50, 5364-5371, 2007; J. Med. Chem. 49, 6264- 6272, 2007) (compuesto 4, figura 2). Además, existen artículos y patentes referidos a derivados de piridazina sencillos que actúan sobre otras dianas terapéuticas eficaces en trastornos neurodegenerativos, como por ejemplo agonistas del receptor GABAA (WO 2012/068161; WO 2010/127968) (compuesto 9, figura 3), agonistas del receptor cannabinoide CB2 (WO 2011/097553) (compuesto 10, figura 3), activadores de la proteína transportadora del glutamato (WO 2013/019938) (compuesto 11, figura 3), moduladores la γ-secretasa (Med. Chem. Lett. 1, 184-187, 2010; Bioorg. Med Chem. Lett. 21, 4016-4019, 201 1) (compuesto 12, figura 3), o inhibidores de la oligomerización de la proteína tau (Biochemistry, 48, 7732-7745, 2009) (compuesto 13, figura 3), algunos de los cuales son derivados de 3-(2H)-piridazinona (compuestos 10, 12 y 13).
Sin embargo, no se conocen derivados de 3(2H)-piridazinona que actúen como IMAO- B selectivos.
Figure imgf000007_0001
Figura 3
Los compuestos de la presente invención carecen de relación estructural con los descritos hasta el momento y se comportaron como inhibidores selectivos frente a la MAO-B. Se trata de nuevos derivados de 3(2H)-piridazinona sustituidos en las posiciones 4, 5 o 6 con fragmentos de ditiocarbamato, enlazados a dichas posiciones a través de una cadena alquílica de longitud variable, que inhiben selectivamente la actividad de la MAO-B cuando se evalúa in vitro su bioactividad.
Descripción de la invención
La presente invención se refiere a nuevos compuestos derivados de piridazinona sustituidos en C4, C5 o C6 con fragmentos de ditiocarbamato y de estructura general I, II y III, respectivamente, que son inhibidores selectivos in vitro de la MAO-B, y a su posible uso para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la enfermedad de Pakinson (EP), la enfermedad de Alzheimer (EA) y otras demencias.
Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable y de fórmula general I.
Figure imgf000008_0001
En donde,
n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, un grupo carboxialquilo Ci-C6, un grupo haloalquilo O-CÓ, un grupo arilo C6-Ci2, un grupo aralquilo C6-C12, un grupo heteroarilo C4-Ci2;
R1 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-Ce, un átomo de halógeno,
R2 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-Ce, un átomo de halógeno,
R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, grupo heterocicloalquilo saturado Ci-C6, un grupo arilo C6-Ci2, un grupo aralquilo C6-Ci2, un grupo heteroarilo C4-Ci2,
O bien R3 y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo C5-C8, un heterocicloalquilo C5-C8, un heterocicloalquilo C5-C8 N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N- cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-acilo sustituido.
Y preferentemente
R es CH3, fenilo (Ph) o bencilo (Bn).
R1 es H, halógeno (Cl, Br, I) o una cadena alquílica
R2 es hidrógeno (H) o metilo (CH3).
n es opcionalmente 1 , 2 o 3.
R3 y R4 pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como metilo (CH3) o etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeno (N) pueden constituir un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, que es alifático o que incorpora un átomo de oxígeno (O) o un segundo átomo de N. Este segundo átomo de N puede estar sustituido con un grupo alquilo lineal (CH3, CH2CH3) o cíclico (ciclopropilo), o con un grupo arilo (Ph), aralquilo (Bn) o aroilo (benzoilo, Bz). En un aspecto particular los compuestos de fórmula general I están representados por las fórmulas Iai-a33 (tabla I), Ibi-b33 (tabla II), Ici-c33 (tabla III) y Idi-d33 (tabla IV) en donde R1 es preferentemente H. Tabla I
N— N s
H3C
la
Figure imgf000009_0001
Tabla II
Figure imgf000010_0001
Ib
Figure imgf000010_0002
Figure imgf000011_0001
Tabla IV
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000012_0002
Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 5 a través de una cadena alquílica de longitud variable y de fórmula general II.
Figure imgf000013_0001
En donde,
n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, un grupo carboxialquilo Ci-C6, un grupo haloalquilo Ci-C6, un grupo arilo C6-C12, un grupo aralquilo C6-Ci2, un grupo heteroarilo C4-C12;
R1 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, un átomo de halógeno,
R2 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-Ce, un átomo de halógeno,
R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-Ce, grupo heterocicloalquilo saturado Ci-C6, un grupo arilo C6-Ci2, un grupo aralquilo C6-Ci2, un grupo heteroarilo C4-C12,
O bien R3 y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo C5-C8, un heterocicloalquilo C5-C8, un heterocicloalquilo C5-C8 N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N- cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-acilo sustituido.
Y preferentemente
R es CH3, fenilo (Ph) o bencilo (Bn).
R1 es H, halógeno (Cl, Br, I) o una cadena alquílica
R2 es hidrógeno (H).
n es opcionalmente 1 , 2 o 3.
R3 y R4 pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como metilo (CH3) o etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeno ( ) pueden constituir un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, que es alifático o que incorpora un átomo de oxígeno (O) o un segundo átomo de N. Este segundo átomo de N puede estar sustituido con un grupo alquilo lineal (CH3, CH2CH3) o cíclico (ciclopropilo), o con un grupo arilo (Ph), aralquilo (Bn) o aroilo (benzoilo, Bz). En un aspecto particular los compuestos de fórmula general II están representados las fórmulas IIai-a33 (tabla V), IIbi-b33 (tabla VI), IIci-C33 (tabla VII) en donde R1 y son preferentemente H.
Tabla V
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000014_0002
Tabla VI
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
Tabla VII
Figure imgf000016_0001
Figure imgf000016_0002
Se trata de derivados de piridazin-3(2H)-ona que presentan fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4 a través de una cadena alquílica de longitud variable y de fórmula general III.
Figure imgf000017_0001
En donde,
n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, un grupo carboxialquilo d-C6, un grupo haloalquilo Ci-C6, un grupo arilo C6-Ci2, un grupo aralquilo C6-Ci2, un grupo heteroarilo C4-Ci2;
R1 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, un átomo de halógeno,
R2 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo C\-Ce, un átomo de halógeno,
R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, grupo heterocicloalquilo saturado Ci-C6, un grupo arilo C6-Ci2, un grupo aralquilo C6-Ci2, un grupo heteroarilo C4-G2,
O bien R3 y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo C5-C8, un heterocicloalquilo Cs-Cs, un heterocicloalquilo C5-C8 N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo Cs-Cs N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N- cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 -acilo sustituido.
Y preferentemente
R es CH3, fenilo (Ph) o bencilo (Bn).
R1 es H, halógeno (Cl, Br, I) o una cadena alquílica
R2 es hidrógeno (H).
n es opcionalmente 1 , 2 o 3.
R3 y R4 pueden ser hidrógeno, grupos alquilo idénticos o distintos como metilo (C¾) o etilo (CH2CH3) o junto con el átomo de nitrógeno (N) pueden constituir un anillo heterocíclico de 5 o 6 miembros, que es alifático o que incorpora un átomo de oxígeno (O) o un segundo átomo de N. Este segundo átomo de N puede estar sustituido con un grupo alquilo lineal (CH3, CH2CH3) o cíclico (ciclopropilo), o con un grupo arilo (Ph), aralquilo (Bn) o aroilo (benzoilo, Bz).
En un aspecto particular los compuestos de fórmula general I están representados por las fórmulas IIIai-a33 (tabla VIII), IIIbi-b33 (tabla IX), IIIci-C33 (tabla X) en donde R1 y R2 son preferentemente H.
Tabla VIII
Figure imgf000018_0001
Tabla IX
Figure imgf000019_0001
Tabla X
Figure imgf000020_0001
Figure imgf000020_0002
En otro aspecto la invención se refiere a un medicamento que comprende una molécula de fórmula (I), (II) o (III), como se ha descrito anteriormente, o una sal de ésta en un soporte farmacéuticamente aceptable, con uno o más excipientes farmacéuticos aceptables.
En una realización particular, dicho medicamento comprende además uno o más agentes terapéuticos adicionales.
Síntesis
Los compuestos Ia-d, Ila-c y IIIa-c se podrían obtener mediante cualquier proceso químico conocido aplicable a compuestos similares.
En otro aspecto la invención se refiere a un método para la síntesis de una molécula de fórmula (I), (II) o (III), como se han descrito anteriormente, caracterizado por que comprende al menos una etapa, en donde la 6(5)(4)-bromoalquil-3(2H)-piridazinona de fórmula (IV), (IX) o (XIII), una amina secundaria de fórmula V y disulfuro de carbono (CS2) reaccionan en presencia de base en un disolvente a temperatura ambiente.
Los compuestos Ia-d de fórmula general I se obtuvieron mediante una reacción multi componente entre las 6-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula IV, una amina secundaria de fórmula V y disulfuro de carbono (CS2) en presencia de fosfato potásico anhidro ( 3PO4) como ejemplo de base, en dimetilformamida (DMF) como ejemplo de disolvente y a temperatura ambiente (ta.), tal y como se muestra en el esquema 1.
Esque
Figure imgf000021_0001
En donde R, R1, R2, R3, R4 y n son como se han descrito anteriormente para los compuestos de fórmula I.
El CS2 y las aminas de fórmula V son compuestos comerciales, mientras que las 6- bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula IV se pueden obtener a partir de las 6- hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula VI, en donde R, R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, por bromación con tetrabromuro de carbono (CBr4) y trifenilfosfina (PPh3) o con N-bromosuccinimida ( BS) y PPh3, adecuando procedimientos estándar (J. Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994). Los precursores de estructura VI se pueden preparar en dos etapas (esquema 2) a partir de las 5-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hidroxi(metoxi)-5H-furan-2-onas de estructura VII, en donde R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, y de manera similar a la descrita en la bibliografía (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, !>Ί-ΑΑ2, 2011). Una primera reacción de las furanonas VII con metilhidrazina (CH3NHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 6-(terc-butildifenilsililoxialquil)-3(2H)-piridazinonas de estructura VIII, en donde R, R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, que se transforman en las 6-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas VI por reacción con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF).
Esquema 2
Figure imgf000022_0001
Las furanonas de estructura VII se pueden preparar a partir de los correspondientes 2- alquilfuranos por oxidación con oxígeno singlete, de manera análoga a la descrita en la bibliografía {Tetrahedron Lett. 45,5207-5209, 2004; Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442, 2011).
Los compuestos Ila-c de fórmula general II se obtuvieron mediante una reacción multicomponente entre las 5-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula IX, una amina secundaria de fórmula V y disulfuro de carbono (CS2) en presencia de fosfato potásico anhidro (K3P04), en dimetilformamida (DMF) y a temperatura ambiente (ta.), tal y como se muestra en el esquema 3.
Esquema 3
Figure imgf000022_0002
En donde R, R1, R2, R3, R4 y n son como se han descrito anteriormente para los compuestos de fórmula II. El CS2 y las aminas de fórmula V son compuestos comerciales, mientras que las 5- bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula IX se pueden obtener a partir de las 5- hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula X, en donde R, R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, por bromación con tetrabromuro de carbono (CBr4) y trifenilfosfína (PPh3) o con N-bromosuccinimida (NBS) y PPh3, adecuando procedimientos estándar (J. Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994).
Los precursores de estructura X se pueden preparar en dos etapas (esquema 4) a partir de las 4-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hidroxi-5H-furan-2-onas de estructura XI, en donde R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, y de manera similar a la descrita en la bibliografía (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437^142, 2011). Una primera reacción de las furanonas XI con metilhidrazina (CH3NHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 5-(ferc-butildifenilsililoxialquil)-3(2H)-piridazinonas de estructura XII, en donde R, R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, que se transforman en las 5-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas X por reacción con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF).
Esquema 4
Figure imgf000023_0001
Las furanonas de estructura XI se pueden preparar a partir de los correspondientes 3- alquilfiiranos por oxidación con oxígeno singlete, de manera análoga a la descrita en la bibliografía (Tetrahedron Lett. 45, 5207-5209, 2004; Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437^42, 201 1).
Los compuestos IIIa-c de fórmula general III se obtuvieron mediante una reacción multi componente entre las 4-bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula XIII, una amina secundaria de fórmula V y disulfuro de carbono (CS2) en presencia de fosfato potásico anhidro (K3P04), en dimetilformamida (DMF) y a temperatura ambiente (ta.), tal y como se muestra en el esquema 5.
Figure imgf000024_0001
En donde R, R1, R2, R3, R4 y n son como se han descrito anteriormente para los compuestos de fórmula III.
El CS2 y las aminas de fórmula V son compuestos comerciales, mientras que las 4- bromoalquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula XIII se pueden obtener a partir de las 4- hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas de fórmula XIV, en donde R, R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, por bromación con tetrabromuro de carbono (CBr4) y trifenilfosfína (PPh3) o con N-bromosuccinimida (NBS) y PPh3, adecuando procedimientos estándar (J. Heterocyclic Chem. 36, 985-990, 1999; Tetrahedron 50, 13575-13682, 1994).
Los precursores de estructura XIV se pueden preparar en dos etapas (esquema 6) a partir de las 3-(terc-butildifenilsililoxialquil)-5-hidroxi-5H-furan-2-onas de estructura XV, en donde R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, y de manera similar a la descrita en la bibliografía (Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437-442, 2011). Una primera reacción de las furanonas XV con metilhidrazina (CH3NHNH2), fenilhidrazina (PhNHNH2) o bencilhidrazina (BnNHNH2) en etanol (EtOH), proporciona las 5-(fórc-butildifenilsililoxialquil)-3(2H)-piridazinonas de estructura XVI, en donde R, R1, R2 y n son como se han descrito anteriormente, que se transforman en las 5-hidroxialquil-3(2H)-piridazinonas XIV por reacción con fluoruro de tetrabutilamonio (TBAF) en tetrahidrofurano (THF).
Esquema 6
Figure imgf000024_0002
Las furanonas de estructura XV se pueden preparar a partir de los correspondientes 3- alquilfuranos por oxidación con oxígeno singlete, de manera análoga a la descrita en la bibliografía {Tetrahedron Lett. 45,5207-5209, 2004; Bioorg. Med. Chem. Lett. 20, 6624-6627, 2010; Magn. Reson. Chem., 49, 437^142, 201 1).
Los compuestos de fórmula Ia-d, Ila-c y IIIa-c inhiben selectivamente la isoforma B de la MAO y pueden ser utilizados para preparar medicamentos destinados a tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, como trastornos degenerativos del sistema nervioso central (SNC), como la enfermedad de Pakinson (EP), la enfermedad de Alzheimer (EA) y otras demencias.
Algunos compuestos representativos de fórmula Ia-d, Ila-c y IIIa-c a los que se refiere la presente invención son los siguientes,
a) N,N-dietilditiocarbamato de l ,4-dimetil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo
(Id2).
b) Pirrolidin-l-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo (Ida).
c) Piperidin-l-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo
(Id4).
d) Morfolin-4-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-ilmetilo (Ids).
e) 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin- 3-ilmetilo (Idu).
f) Piperidin-l-ilcarboditioato de 2-(l-metil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-3-il)etilo (Iais).
g) Pirrolidin-l-ilcarboditioato de 3-(l-metil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-3-il)propilo (Ia25).
h) Ν,Ν-dietilditiocarbamato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-4-ilmetilo (IIc2).
i) Pirrolidin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-4-ilmetilo (lies).
j) Piperidin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-4-ilmetilo
(IIC4).
k) Morfolin-4-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-4-ilmetilo (lies).
1) 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-4- ilmetilo (lien). m) Pirrolidin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-5-ilmetilo (Ules).
n) Morfolin-4-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-5-ilmetilo (IIIcs).
o) 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin-5- ilmetilo (IIIcn).
Ejemplos
Los ejemplos que se aportan a continuación deberán ser considerados para una mejor comprensión de la presente invención sin que supongan una limitación de la misma.
Procedimientos generales
Los espectros de resonancia magnética nuclear de protón (*H RMN) son acordes en todos los casos con las estructuras propuestas. Los !H RMN se registraron en los espectrofotómetros Bruker 400 DPX y Bruker ARX 400, utilizando como disolvente cloroformo deuterado (CDCI3) o metanol deuterado (CD3OD). Los desplazamientos químicos se expresan en unidades δ, en partes por millón (ppm), relativas al tetrametilsilano (TMS), las constantes de acoplamiento (J) se indican en Hertzios (Hz), y la multiplicidad como sigue: s, singlete; d, doblete; t, triplete; m, multiplete. Los espectros de masas de alta resolución (EMAR) se realizaron en un espectrómetro Bruker Microtof Focus, utilizando ionización mediante electrospray (ESI) o ionización por impacto electrónico (El).
Las reacciones que tienen lugar en atmósfera inerte se llevaron a cabo en atmósfera de argón (Ar). Todos los reactivos comerciales se cogieron directamente de los frascos proporcionados por el proveedor y se utilizaron sin purificar. Los disolventes orgánicos se secaron mediante procedimientos estándar (Vogel 's Textbook of Practica! Organic Chemistry 5th ed. Longman Scientific and Technical: London 1989; Perrin, D. D., Armarego, W. L. F. Purification of Laboratory Chemicals, 6th ed. Butterworth-Heineman Ltd.: Oxford 2008) y se destilaron inmediatamente antes de su uso. Se siguió la evolución de las reacciones mediante cromatografía en capa fina, utilizando para ello placas de gel de sílice (Merck 60F254), que se visualizaron mediante luz UV y se revelaron mediante una disolución que contenía 3 g de permanganato potásico (KMn04), 20 g de carbonato potásico (K2CO3), 5 mL de una disolución de hidróxido sódico 5% (NaOH 5%) y 300 mL de agua (H20). Los productos se purificaron mediante cromatografía en columna a presión sobre gel de sílice Merck (230-400 mesh).
Ejemplo 1
Preparación de N,N-dietilditiocarbamato de 1 ,4-dimetil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-
3-ilmetilo (Ich).
A una disolución de 5-(tórc-butildifenilsililoximetil)-5-hidroxi-4-metil-5H-ruran-2- ona Vlld (212 mg, 0,554 mmol) en EtOH absoluto (4 mL) se le adicionó a temperatura ambiente (t.a.) una disolución de CH3NHNH2 (0,06 mL, 1,108 mmol) en EtOH absoluto (1 mL). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a reflujo durante 18 horas. Finalizada la reacción, y una vez fría la disolución resultante, se eliminó el disolvente a vacío y el residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente hexano/acetato de etilo (3:1), obteniéndose la 6-(terc-butildifenilsililoximetil)-2,5-dimetil-3(2H)-piridazinona VHIdi (313 mg, 52%). EMAR (ESI): m/z calculado para C23H29N202Si [M+H]+,
393,19983; encontrado 393,19928.
Ή RMN (CDC13) δ: 7,68 (m, 4H,), 7,67 (m, 6H,), 6,70 (d, 1H, J=l,l Hz), 4,64 (s, 2H), 3,62 (s, 3H,), 2,34 (d, 3H, j=l .l Hz), 1,01 (s,9H). A una disolución del compuesto VHIdi (74 mg, 0,188 mmol) en THF (4 mL) se le adicionó, a t.a. y bajo atmósfera de argón (Ar), una disolución 1M de TBAF en THF (0,2 mL, 0,188 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación, a t.a. y bajo atmósfera de Ar, durante 15 minutos. Finalizada la reacción, se le añadieron unas gotas de una disolución saturada de NaHC03, se mantuvo la agitación durante 15 minutos más y a continuación se secó con Na2S04 anhidro. La suspensión resultante se filtró y el filtrado se concentró a sequedad a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente acetato de etilo/metanol (9,5:0,5), obteniéndose la 6-hidroximetil-2,5-dimetil-3(2H)- piridazinona VIdi (26 mg, 86%). EMAR (El): m/z calculado para C7H10N2O2 [M]+, 154,0742, encontrado 154,0735.
Ή RMN (CDC13) δ: 6,70 (d, 1H, J=l,l Hz), 4,58 (s, 2H), 3,73 (s, 3H), 2,21 (d, 3H, J=l,l Hz).
A una disolución del compuesto VIdi (48 mg, 0,311 mmol) en CH2C12 (8 mL) se le adicionó sucesivamente CBr4 (207 mg, 0,623 mmol) y PPh3 (163 mg 0,623 mmol). La mezcla de reacción se mantuvo en agitación a reflujo bajo atmósfera de Ar durante 6 horas. Finalizada la reacción, y una vez fría la disolución resultante, se trató con una disolución saturada de NaHC03 (2 mL), se extrajo con CH2CI2 (3x5 mL) y el extracto orgánico se secó con Na2S04 anhidro. La suspensión resultante se filtró y el filtrado se concentró a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice, utilizando como eluyente acetato de etilo/metanol (8,5:1,5), obteniéndose la 6-bromometil-2,5-dimetil-3(2H)- piridazinona IVdi (65 mg, 96%). EMA (ESI): m/z calculado para C7H10BrN2O, 216,99710 [M+H]+, encontrado 216,99627.
Ή RMN (CDCb) S: 6,73 (m, 1H), 4,37 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 2,32 (d, 3H, J = 1,1
Hz).
A una disolución de dietilamina (8 μΕ, 0,077 mmol) en DMF (1 mL) se le adicionó CS2 (9 μί, 0,141 mmol) y K3P04 (16 mg, 0,077 mmol). La mezcla así obtenida se agitó a t.a. y bajo atmósfera de Ar durante 30 minutos. A continuación se le adicionó una disolución del compuesto IVdi (11 mg, 0,051 mmol) en DMF (1 mL) y se mantuvo la agitación en las mismas condiciones durante 22 horas. A continuación, la mezcla de reacción se trató con H20 (0,5 mL) y se concentró a sequedad a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 y 1 :3) obteniéndose el compuesto Id2 (14 mg, 97%). EMAR (ESI): m/z [M+H]+ calculado para Ci2H2oN3OS2, 286,10423, encontrado 286,10546.
lH RMN (CDCI3) δ: 6,69 (s, 1H), 4,52 (s, 2H), 4,03 (c, 2H, J = 7,0 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,65 (c, 2H, J= 7,0 Hz), 2,26 (s, 3H), 1,28 (m, 6H). Ejemplo 2
Preparación de pirrolidin-l-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-3-ilmetilo (Id3).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de pirrolidina (8 μΕ, 0,096 mmol), CS2 (11 μί, 0,175 mmol) y K3PO4 (20 mg, 0,096 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVdi (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 y hexano/acetato de etilo 1 :3) obteniéndose el compuesto I 3 (13 mg, 100%). EMAR (ESI): m/z calculado para C12Hi8N3OS2, 284,08858 [M+H]+, encontrado 284,08856. Ή RMN (CDCls) δ: 6,69 (m, 1H), 4,55 (s, 2H), 3,94 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 3,72 (s, 3H), 3,65 (t, 2H, J= 6,9 Hz), 2,26 (d, 3H, J= 1,1 Hz), 2,08 (m, 2H), 1,99 (m, 2H).
Ejemplo 3
Preparación de piperidin-l-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-3-ilmetilo (Id4).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Ich, se trató una disolución de pipendina (8 μί, 0,081 mmol), CS2 (9 μί, 0,147 mmol) y K3P04 (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVdi (15 mg, 0,069 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1, 1 :1, 1 :3 y 1 :4) obteniéndose el compuesto Id4 (19 mg, 95%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci3H20N3OS2, 298, 10423 [M+H]+, encontrado 298, 10379.
Ή RMN (CDCh) δ: 6,69 (m, 1H), 4,53 (s, 2H), 4,28 (m, 2H), 3,88 (m, 2H), 3,72 (s, 3H), 2,26 (d, 3H, J= 1.0 Hz), 1,70 (m, 6H).
Ejemplo 4
Preparación de morfolin-4-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-3-ilmetilo (Ids).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de morfolina (8 μΕ, 0,091 mmol), CS2 (10 μί, 0,165 mmol) y K3P04 (19 mg, 0,091 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVdi (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 , 1 :2, y 1 :4) obteniéndose el compuesto Ids (13 mg, 94%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci2Hi8N302S2, 300,08349 [M+H]+, encontrado 300,08357.
Ή RMN (CDCI3) S: 6,70 (m, 1H), 4,54 (s, 2H), 4,33 (m, 2H), 3,96 (m, 2H), 3,77 (m, 4H), 3,72 (s, 3H), 2,27 (d, 3H, J= 1,0 Hz).
Ejemplo 5 Preparación de 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de l,4-dimetil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-3-ilmetilo (Idii).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de 1 -benzoilpiperazina (13 mg, 0,068 mmol), CS2 (8 μί, 0,132 mmol) y K3P04 (14 mg, 0,068 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVdi (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 1 :1, 1 :2 y 1 :4) obteniéndose el compuesto Idu (18 mg, 97%). EMAR (ESI): m/z calculado para C19H23N402S2, 403,12569 [M+H]+, encontrado 403,12569.
Ή RMN (CDC13) δ: 7,43 (m, 5H), 6,71 (s, 1H), 4,53 (s, 2H), 4,18 (m, 4H), 3,84 (m,
2H), 3,72 (s, 3H), 3,65 (m, 2H), 2,26 (s, 3H).
E emplo 6
Preparación de piperidin-l-ilcarboditioato de 2-(l-metil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-S-il) etilo (Iais).
De acuerdo con el procedimiento descrito para IVdi, se trató una disolución de 6-(2- hidroxietil)-2-metil-3(2H)-piridazinona Vían (6 mg, 0,039 mmol) en CH2C12 (6 mL) con CBr4 (26 mg, 0,078 mmol) y PPh3 (20 mg 0,078 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando como eluyente cloruro de metileno/metanol (88:2) obteniéndose la 6-(2-bromoetil)-2-metil-3(2H)- piridazinona IVaii (7 mg, 83%).
lH RMN (CDCI3) S: 7,14 (d, 1H, J = 9,4 Hz), 6,90 (d, 1H, J= 9,4 Hz), 3,76 (s, 3H), 3.64 (t, 2H, J= 7,0 Hz), 3,14 (t, 2H, J= 7,0 Hz).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de piperidina (8 ί, 0,081 mmol), CS2 (9 ί, 0,147 mmol) y
K3P04 (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto IVan (10 mg, 0,046 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1 , 1 : 1 y 1 :3) obteniéndose el compuesto lais (8,5 mg, 89%). EMAR (ESI): m/z calculado para C13H20N3OS2, 298,10423 [M+H]+, encontrado 298,10432.
Ή RMN (CDCI3) δ 7,25 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 9,5 Hz), 4,29 (m, 2H), 3,86 (m, 2H), 3,75 (s, 3H), 3.59 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 3,00 (t, 2H, J = 7,4 Hz), 1.70 (m, 6H). E emplo 7
Preparación de pirro lidin-l-ilcarboditioato de 2-(l-metil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-3-il)propilo (Ia2s).
De acuerdo con el procedimiento descrito para IVdi, se trató una disolución de 6-(2- hidroxipropil)-2-metil-3(2H)-piridazinona Vlam (6 mg, 0,036 mmol) en CH2CI2 (6 mL) con CBr4 (30 mg, 0,096 mmol) y PPh3 (30 mg 0,1 14 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice utilizando como eluyente cloruro de metileno/metanol (88:2) obteniéndose la 6-(2- bromopropil)-2-metil-3(2H)-piridazinona IVam (7 mg, 84%). EMAR (El): m/z calculado para
Figure imgf000031_0001
230,0055 [M]+; encontrado 230,0057.
lH RMN (CDC13) δ: 7,11 (d, 1H, J= 9,6 Hz), 6,89 (d, 1H, J = 9,6 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,47 (t, 2H, J= 6,4 Hz), 2,76 (t, 2H, J= 7,4 Hz), 2,22 (m, 2H).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de pirrolidina (8 μί, 0,096 mmol), CS2 (9 μί, 0,147 mmol) y K3P04 (17 mg, 0,081 mmol) en DMF (1 mL) con una disolución del compuesto
IVain (9 mg, 0,039 mmol) en DMF (1 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 1 :1 , 1 :2) obteniéndose el compuesto Ia2s (11 mg, 95%). EMAR (ESI): m/z calculado para C13H20N3OS2, 298,10478 [M+H]+; encontrado 298,10432.
Ή RMN (CDC13) δ: 7,13 (d, 1H, J= 9,5 Hz), 6,89 (d, 1H, J= 9,5 Hz), 3,93 (t, 2H, J
=6,9 Hz), 3,75 (s, 3H), 3,64 (t, 2H, J = 6,8 Hz), 3,36 (t, 2H, J= 7,3 Hz), 2,71 (t, 2H, J= 7,6 Hz), 2,07 (m, 4H), 1,98 (m, 2H).
Ejemplo 8
Preparación de N,N-dietilditiocarbamato de l-bencil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin-4- ilmetilo (IIc2).
A una disolución de 3-(fórc-butildifenilsililoximetil)furano (3,00 g, 8,92 mmol) en MeOH seco (40 mL) se le añadió diisopropiletilamina (7 mL, 40,20 mmol) y rosa de bengala (15 mg) y se purgó a t.a. con O2 durante 1 h. La mezcla de reacción se enfrió a -78 °C y se irradió con una lámpara de 200 W bajo atmósfera de 02 durante 5 h. A continuación se dejó que alcanzara la t.a. y se eliminó el disolvente a vacío. El residuo obtenido se disolvió en CH2C12 (40 mL) y se le añadió una disolución 0,12 M de ácido oxálico (350 mL) agitándose durante 30 min. La mezcla resultante se extrajo con CH2C12 (3x100 mL) y las fases orgánicas combinadas se secaron, se filtraron y se concentraron a vacío. El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente acetato de etilo/hexano 1 :2), aislándose una mezcla en proporción 4:1 de la 4-(terc-butildifenilsililoximetil)-5- hidroxi-5H-íuran-2-ona XIi y de la 3-(íerc-butildifenilsililoximetil)-5-hidroxi-5H- furan-2-ona XVi (3,29 g, 100%). EMAR (ESI): m/z calculado para C2iH2504Si,
369,15166 [M+l]; encontrado 369,15162.
A una disolución de la mezcla de los compuestos XIi y XVi (531 mg, 1,44 mmol, proporción 4:1) en etanol absoluto (15 mL) se le adicionó dihidrocloruro de bencilhidrazina (BnNHNH2.2HCl, 562 mg, 2,88 mmol) y Et3N (0,6 mL, 4,30 mmol). La mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 7 h. A continuación se eliminó el disolvente a vacío, y el residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 9:1), aislándose la 2- bencil-4-(terc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XVIci (43 mg, 32%) y a continuación la 2-bencil-5-(terc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XIIci (277 mg, 53%).
2-Bencil-4-(fórc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XVIci EMAR (ESI): m/z calculado para C28H31N2O2SÍ, 455,21493 [M+l]; encontrado 455,21371.
Ή-RMN (CDCI3, δ): 7,85 (d, 1H, J=4,0 Hz), 7,63 (m, 4H), 7,51 (m, 1H), 7,36 (m, 1 1H), 5,29 (s, 2H), 4,73 (d, 2H, J=l,5 Hz), 1,12 (s, 9H).
2-Bencil-5-(terc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XIIci EMAR (ESI): m/z calculado para C28H3iN202Si, 455,21493 [M+l]; encontrado 455,21473.
!H-RMN (CDCI3, Ó): 7,64 (m, 5H, H6), 7,37 (m, 11H), 6.96 (m, 1 H), 5,32 (s, 2H), 4,55 (d, 2H, J=1,5 Hz), 1,09 (s, 9H).
De acuerdo con el procedimiento descrito para Vid, se trató una disolución de la 2- bendl-5-(íerc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XIIci (247 mg, 0,54 mmol) en THF (5 mL) con una disolución 1M de TBAF en THF (0,8 mL, 0,81 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente acetato de etilo/metanol 98:2), obteniéndose la 2-bencil-5- hidroximctilpiridazin-3(2H)-ona Xci (102 mg, 87%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci2Hi3N202, 217,09715 [M+l]; encontrado 217,09782.
De acuerdo con el procedimiento descrito para IVdi, se trató una disolución de 2- bencil-5-hidroximetilpiridazin-3(2H)-ona Xci (83 mg, 0,39 mmol) en CH2C12 (5 mL) con CBr4 (256 mg, 0,77 mmol) y PPh3 (202 mg, 0,77 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente diclorometano/metanol 99,5:0,5) obteniéndose la 2-bencil-5-bromoraetilpiridazin- 3(2H)-ona IXci (62 mg, 58%). EMAR (ESI): m/z calculado para C12H12BrN20, 279,01275 [M+l]; encontrado 279,01210.
'H-RMN (CDCh, δ): 7,77 (d, 1H, J=l,9 Hz), 7.40 (m, 2H), 7,29 (m, 3H), 6,85 (d, 1H, J=l,9 Hz), 5.30 (s, 2H), 4,17 (s, 2H).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de dietilamina (3,9 x , 0,037 mmol), CS2 (4,1 μί, 0,068 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto IXci (9,5 mg, 0,034 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 4:1,
3: 1, 2: 1) obteniéndose el compuesto IIc2 (10,2 mg, 86%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci7H22N3OS2, 348,12043 [M+H]+; encontrado 348,11976
¾ RMN (CDC13) δ: 7,84 (m, 1H), 7,43 (m, 2H), 7,32 (m, 3H), 6,91 (m, 1H), 5,30 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,03 (c, 2H, J = 6,5 Hz), 3,76 (c, 2H, J = 6,5 Hz), 1,30 (m, 6H).
Ejemplo 9
Preparación de pirrolidin-l-ilcarboditioato de 1 -bencil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin- 4-ilmetilo (lloz).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Ich, se trató una disolución de pirrolidina (3,2 μί, 0,038 mmol), CS2 (4,1 μί, 0,068 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto IXci (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3: 1, 2: 1) obteniéndose el compuesto Ilc3 (11,7 mg, 97%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci7H20N3OS2, 346,10478 [M+H]+; encontrado 346,19423.
]H RMN (CDCI3) S: 7,83 (d, 1H, J = 2,1 Hz), 7,40 (m, 2H), 7,29 (m, 3H), 6,89 (m, 1H), 5,28 (s, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,91 (t, 2H, J = 6,9 HZ), 3,65 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,09 (q, 2H, J= 6,9 Hz), 2,00 (q, 2H, J= 6,9 Hz).
Ejemplo 10
Preparación de piperidin-1 -ilcarboditioato de 1 -bencil-6-oxo-l ,6-dihidropiridazin- 4-ilmetilo (IIc4). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de piperidina (3,1 μΐ , 0,031 mmol), CS2 (3,5 μί, 0,057 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto IXci (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 4:1,
3:1, 2: 1) obteniéndose el compuesto Ilc4 (9,4 mg, 90%). EMAR (ESI): m/z calculado para C18H22N3OS2, 360,12043 [M+H]+; encontrado 360,11968.
lH RMN (CDC13) δ: 7,82 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 7,41 (m, 2H), 7,29 (m, 3H), 6,88 (m, 1H), 5,28 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,26 (m, 2H), 3,87 (m, 2H), 1,71 (m, 6H).
Ejemplo 11
Preparación de morfolin-4-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin- 4-ilmetilo (lies).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Ick, se trató una disolución de morfolina (3,4 μί, 0,039 mmol), CS2 (4,4 μί, 0,072 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto
IXci (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 4: 1, 3:1, 2:1) obteniéndose el compuesto lies (12 mg, 92%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci7H20N3O2S2, 362,09969 [M+H]+; encontrado 362,09914.
Ή RMN (CDC13) δ: 7,80 (d, 1H, J = 2 Hz), 7,41 (m, 2H), 7,30 (m, 3H), 6,89 (m,
1H), 5,28 (s, 2H), 4,45 (s, 2H), 4,30 (m, 2H), 3,93 (m, 2H), 3,77 (m, 4H).
Ejemplo 12
Preparación de 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-4-ilmetilo (lien).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Ich, se trató una disolución de benzoilpiperazina (7 mg, 0,038 mmol), CS2 (4,1 μί, 0,068 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto IXci (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 2:1, 1 :1) obteniéndose el compuesto lien (12 mg, 74%). EMAR (ESI): m/z calculado para C24H25N402S2, 465,14189 [M+H]+; encontrado 465,14134.
¾ RMN (CDCh) δ: 7,89 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 7,43 (m, 7H), 7,30 (m, 3H), 6,89 (m, 1H), 5,28 (s, 2H), 4,44 (s, 2H), 4,39-3,54 (m, 8H). Ejemplo 13
Preparación de pirrolidin-1 -ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin- 5-ilmetilo (IIIC3).
De acuerdo con el procedimiento descrito para VIdi, se trató una disolución de la 2- bencil-4-(terc-butildifenilsililoximetil)piridazin-3(2H)-ona XVIci (70 mg, 0,15 mmol) en THF (5 mL) con una disolución 1M de TBAF en THF (0,2 mL, 0,23 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente acetato de etilo/metanol 98:2), obteniéndose la 2-bencil-4- hidroximetilpiridazin-3(2H)-ona XIVw (25 mg, 75%). EMAR (ESI): m/z calculado para Ci2Hi3N202, 217,09715 [M+l]; encontrado 217,09651.
De acuerdo con el procedimiento descrito para IVdi, se trató una disolución de 2- bencil-4-hidroximetilpiridazin-3(2H)-ona XIVci (29 mg, 0,13 mmol) en CH2C12 (5 mL) con CBr4 (90 mg, 0,27 mmol) y PPh3 (70 mg, 0,27 mmol). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 6:1) obteniéndose la 2-bencil-4-bromometilpiridazin-3(2H)- ona XIIIci (31 mg, 84%).
lR RMN (CDC ) δ: 7,77 (d, 1H, J = 4 Hz), 7,46-7,41 (m, 2H), 7,36-7,27 (m, 4H), 5,35 (s, 2H), 4,39 (s, 2H).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de pirrolidina (3,9 μί, 0,046 mmol), CS2 (4,4 μί, 0,072 mmol) y K3P04 (8 mg, 0,037 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto XIIIci (10 mg, 0,035 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente diclorometano, diclorometano/metanol 98:2) obteniéndose el compuesto IIIc3 (6,6 mg, 55%).
EMAR (ESI): m/z calculado para Ci7H20N3OS2, 346,10478 [M+H]+; encontrado
346,10451.
'H RMN (CDC13) δ: 7,70 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 7,51 (d, 1H, J = 4,1 Hz) 7,41-4,43 (m, 2H), 7,33-7,26 (m, 3H), 5,32 (s, 2H), 4,54 (s, 2H), 3,90 (t, 2H, J = 6,7 HZ), 3,63 (t, 2H, J= 6,7 Hz), 2,05 (q, 2H, J= 6,7 Hz), 1,95 (q, 2H, J= 6,7 Hz).
Ejemplo 14
Preparación de morfolin-4-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6-dihidropiridazin- 5-ilmetilo (Ules). De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de morfolina (7 μΐ^, 0,080 mmol), CS2 (10 μί, 0,160 mmol) y K3P04 (17 mg, 0,079 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto XIIIci (11 mg, 0,040 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente hexano/acetato de etilo 3:1) obteniéndose el compuesto Ules (14 mg, 97%).
EMAR (ESI): m/z calculado para Ci7H20N3O2S2, 362,09969 [M+H]+; encontrado 362,09914.
Ή RMN (CDC13) δ: 7,71 (d, 1H, J = 4,1 Hz), 7,47 (d, 1H, J =4,1 Hz), 7,42 (d, 2H, J = 6,8 Hz), 7,34-7,26 (m, 3H), 5,31 (s, 2H), 4,55 (s, 2H), 4,38-4,23 (m, 2H), 4,11-
3,98 (m, 2H), 3,81-3,73 (m, 4H).
Ejemplo 15
Preparación de 4-benzoilpiperazin-l-ilcarboditioato de l-bencil-6-oxo-l,6- dihidropiridazin-4-ilmetilo (Illcn).
De acuerdo con el procedimiento descrito para la obtención del compuesto Id2, se trató una disolución de benzoilpiperazina (11,4 mg, 0,060 mmol), CS2 (7 μ -,, 0,112 mmol) y K3P04 (13 mg, 0,060 mmol) en DMF (2 mL) con una disolución del compuesto XIIIci (9 mg, 0,030 mmol) en DMF (2 mL). El residuo obtenido se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (eluyente diclorometano, diclorometano/metanol 99:1) obteniéndose el compuesto IIIcu (14 mg, 100%). EMAR (ESI): m/z calculado para C24H25N402S2, 465,14189 [M+H]+; encontrado 465,14071.
Ή RMN (CDCI3) ó: 7,73 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 7,48 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 7,42 (m, 7H), 7,31 (m, 3H), 5,33 (s, 2H), 4,56 (s, 2H), 4,18 (m, 4H), 3,83 (m, 2H), 3,62 (m, 2H).
Inhibición de las MAO
Determinación de la actividad de las isoformas de la MAO
Se determinaron los efectos de los compuestos de fórmulas I, II y III sobre la actividad de la monoaminooxidasa midiendo la producción de peróxido de hidrógeno (H202), y por consiguiente la producción de resorrufina a partir de p- tiramina, un sustrato común a las dos isoenzimas (MAO-A y MAO-B). Para ello se utilizó el reactivo Amplex® Red (Molecular Probes, Eugene, Oregon, EE.UU.) y las isoformas de la MAO presentes en la fracción microsomal, preparada a partir de células de insectos (BTI-TN-5B1-4) infectadas con baculovirus recombinantes, que contienen insertos de ADNc de MAO-A o MAO-B humana (Sigma-Aldrich Química S.A., Alcobendas, España).
La producción de H202 catalizada por las 2 isoformas de la MAO se puede detectar al utilizar el reactivo Amplex® Red (10-acetil-3,7-dihidroxifenoxazina), una sustancia no fluorescente, altamente sensible, que reacciona con el H202 en presencia de la peroxidasa del rábano picante para producir un producto fluorescente, la resorrufina.
En nuestros experimentos, la actividad de la MAO fue evaluada con el método mencionado anteriormente, adaptando el procedimiento general previamente descrito (Biochem. Biophys. Res. Comm. 344, 688-695, 2006).
En primer lugar, se incubaron 0,1 mi de tampón fosfato sódico (0,05 M, pH 7,4), conteniendo distintas concentraciones de los nuevos compuestos en estudio (o los inhibidores de referencia) y la cantidad de MAO-A o MAOB recombinante humana requerida para obtener en nuestras condiciones experimentales la misma velocidad de reacción en presencia de ambas isoenzimas; es decir, para oxidar en ausencia de fármacos (grupo control) 165 pmoles de />-tiramina por minuto (MAO-A: 1,1 μg; actividad específica: 150 nmoles de p-tiramina oxidados a p- hidroxifenilacetaldehido por minuto por mg de proteína; MAO-B: 7,5 μg; actividad específica: 22 nmoles de p-tiramina transformados por minuto por mg de proteína).
Dicha incubación se realizó durante 15 minutos a 37°C en placas de 96 pocilios de fondo negro y plano (MicrotestTM píate, BD, Franklin Lakes, NJ, EE.UU.), ya colocadas en la cámara oscura del lector de fluorescencia (ver el modelo más abajo). Después del período de incubación, la reacción se inició añadiendo (concentraciones finales) 200 μΜ de reactivo Amplex® Red, 1 unidad (U)/ml de peroxidasa de rábano picante y 1 mM de /?-tiramina como sustrato, tanto para los estudios realizados con la MAO-A como para los realizados con la MAO-B.
La producción de H202 y, por consiguiente, de resorrufina fue cuantificada a 37°C en un lector de fluorescencia de placa (FLX800TM, Bio-Tek® Instruments, Inc., Winooski, VT, EE.UU.), determinando la fluorescencia generada (excitación 545 nm, emisión 590 nm) durante 15 minutos, un período en el cual el incremento de la fluorescencia fue lineal desde el principio.
Simultáneamente se realizaron experimentos control sustituyendo los fármacos (compuestos de fórmulas I, II y III o los inhibidores de referencia) por las diluciones apropiadas de los vehículos. Además, se determinó la posible capacidad de los fármacos para modificar la fluorescencia generada en la mezcla de reacción por una inhibición no enzimática (por ejemplo, por reacción directa con el reactivo Amplex® Red), y para ello los fármacos se añadieron a soluciones que contenían solamente el reactivo Amplex® Red en tampón fosfato sódico.
Se calculó la emisión de fluorescencia específica (utilizada para obtener los resultados finales) después de sustraer la actividad de fondo, que se determinó en viales, en los que las soluciones con las isoformas de la MAO se sustituyeron por solución de tampón fosfato sódico.
Presentación de los datos y análisis estadístico
Salvo indicación contraria, los resultados mostrados en el texto y en las tablas están expresados como la media ± error estándar de la media (e.e.m.) de cinco experimentos. La diferencia estadísticamente significativa entre dos medias (P < 0,05 o P < 0,01) fue determinada por análisis de varianza de una vía (ANOVA), seguida del test de comparación múltiple de Dunnett.
Para estudiar los posibles efectos de los compuestos de fórmulas I, II y III, y de los inhibidores de referencia, sobre la actividad enzimática de las isoformas de la MAO, se evaluó la variación de fluorescencia por unidad de tiempo (cuantificada como unidades arbitrarias de fluorescencia/minuto) e indirectamente la producción de H202; y por consiguiente, los pmoles/min de resorrufina producidos en la reacción entre el H202 y el reactivo Amplex® Red. Para ello, se utilizaron varias concentraciones de resorrufina con la finalidad de hacer una curva estándar, siendo X = pmoles de resorrufina e Y = unidades arbitrarias de fluorescencia. Los pmoles de resorrufina producidos son equivalentes a los pmoles de p-tiramina oxidados, puesto que la estequiometría de la reacción es 1 :1.
En estos experimentos, la actividad IMAO de los compuestos de fórmula I, II y III y la de los inhibidores de referencia se expresó como CI50, es decir, como la concentración de cada compuesto necesaria para producir una disminución del valor control de la actividad enzimática de las isoformas de la MAO de un 50%. Para determinar la CI 0 de cada compuesto se utilizó el programa informático OriginTM 5.0 (Microcal Software, Inc., Northampton, MA, EE.UU.). Los valores de CI50 se calcularon a partir de las ecuaciones de las rectas obtenidas por regresión lineal (método de los mínimos cuadrados) de los puntos resultantes de representar el log de la concentración molar del compuesto estudiado (eje de abscisas) frente al porcentaje de inhibición de la actividad MAO control conseguido con dicha concentración (eje de ordenadas). Esta regresión lineal se realizó utilizando para cada compuesto los datos obtenidos con entre 4 y 6 concentraciones capaces de inhibir entre el 20% y el 80% la actividad enzimática control de las isoenzimas de la
MAO. Además, se calculó el cociente [CI50 (MAO-A)]/[CI50 (MAO-B)] como indicador de la selectividad en la inhibición mostrada sobre ambas isoformas.
Fármacos y compuestos químicos
Los fármacos y sustancias químicas utilizadas en los experimentos fueron los compuestos de fórmulas I, II y III, la moclobemida (gentilmente suministrada por los laboratorios Hoffman-La Roche, Basilea, Suiza), la selegilina y el fosfato de iproniacida (adquiridos en Sigma-Aldrich, España), la sal sódica de resorrufma, el hidrocloruro de clorgilina, el hidrocloruro de p-tiramina, el fostato sódico y la peroxidasa de rábano picante (suministrados en el kit para el ensayo de la MAO Amplex® Red de Molecular Probes).
Las diluciones apropiadas de los compuestos mencionados anteriormente se prepararon en agua Milli-Q® (Millipore Ibérica S.A., Madrid, España) todos los días antes de su uso, a partir de las siguientes soluciones stock concentradas mantenidas a -20°C: los compuestos de fórmulas I, II y III (0,1 M) en dimetilsulfóxido (DMSO, Sigma-Aldrich); la selegilina, la moclobemida, la iproniacida, la resorrufma, la clorgilina, la p-tiramina y la peroxidasa de rábano picante (0,1 M) en agua Milli-Q®.
Debido a la fotosensibilidad de algunas sustancias utilizadas (por ejemplo, el reactivo Amplex® Red), todos los experimentos fueron realizados en la oscuridad.
En ninguno de los ensayos, ni el agua Milli-Q® ni el vehículo utilizado (DMSO) tuvieron un efecto farmacológico significativo.
Resultados
Los compuestos usados para la presente invención de fórmula general I, II y III son inhibidores selectivos de la MAO-B. En la tabla XI se muestran los valores de CI 0 en micromoles/L (μΜ) de los compuestos detallados anteriormente (Ich, Id3, Id4, Id5, Idn, Iais, Ia2s, IIc2, IIc3, IIc4, líes, lien, IIIc3, Ules, IIIcu). Tabla XI.
Valores de CI50 de los compuestos estudiados (incluyendo inhibidores de referencia) sobre la actividad enzimática de las isoformas de la MAO recombinante humana y relación de selectividad para la MAO-B ([CI50 (MAO-A)]/[CI5o (MAO-B)]).
Figure imgf000040_0001
Cada valor de CI50 es la media ± la desviación estándar media de 5 experimentos (n=5). a P < 0,01 con respecto al valor correspondiente de CI50 obtenido frente a la MAO-B, determinado por el test ANOVA/Dunnett.
b Valor calculado considerando como CI50 frente a la MAO-A o a la MAO-B la concentración mas alta estudiada (100 μΜ o 1 mM).
*Inactivo a 1 mM (mayor concentración estudiada)
**Inactivo a 100 μΜ (la mayor concentración ensayada). A concentraciones superiores el compuesto precipita.
*** A 100 μΜ inhibe la actividad enzimática en un 45-50%. A concentraciones superiores el compuesto precipita.
IS: índice de selectividad hMAO-B = CI50 (hMAO-A)/CI50 (hMAO-B)
La mayoría de los compuestos de fórmula general I, II y III detallados en la tabla resultan inactivos frente a MAO-A e inhiben la MAO-B con valores de CI5o en el rango micromolar. Los valores CI50 de los compuestos de fórmula general I, II y III frente a MAO-B resultan comparables a los presentados por algunos de los inhibidores de referencia utilizados en el estudio como por ejemplo la iproniacida (inhibidor dual MAO- A/MAO-B) pero con índices de selectividad MAO-B superiores.
Los resultados obtenidos indican que la actividad y selectividad MAO-B de los compuestos de fórmula general I, II y III está mas influenciada por el tipo de amina presente en el fragmento ditiocarbamato que por la posición y magnitud cadena alquílica y que por la naturaleza del sustituyente en el N de anillo piridazinónico. Por consiguiente, la incorporación al anillo de piridazinona de fragmentos de ditiocarbamato enlazados a la posición 4, 5 o 6 a través de una cadena alquílica de longitud variable, que da lugar a los compuestos de fórmula general I, II y III proporciona inhibidores selectivos de MAO-B cuya estructura resulta muy novedosa para este tipo de actividad, ya que no se conocen derivados de piridazinona que actúen como inhibidores selectivos de la isoforma B de la MAO.

Claims

REIVINDICACIONES
1. Moléculas de fórmula (I) (II) y (III):
Figure imgf000042_0001
En donde:
n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8;
R es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C6, un grupo carboxialquilo O-CÓ, un grupo haloalquilo Ci-C6, un grupo arilo C6-C12, un grupo aralquilo C6-C12, un grupo heteroarilo C4-C12;
R1 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-C , un átomo de halógeno,
R2 es un grupo seleccionado de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-Ce, un átomo de halógeno,
R3, R4 idénticos o diferentes se seleccionan de: un átomo de hidrógeno, un grupo alquilo Ci-Ce, grupo heterocicloalquilo saturado O-CÓ, un grupo arilo C6-C12, un grupo aralquilo C -Cn, un grupo heteroarilo C4-C12,
O bien R3 y R4 forman un ciclo seleccionado de: un cicloalquilo C5-C8, un heterocicloalquilo C5-Cg, un heterocicloalquilo C5-C8 N-alquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-arilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N- cicloalquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8 N-aralquilo sustituido, un heterocicloalquilo C5-C8N-acilo sustituido; y sus sales farmacéuticamente aceptables.
2. Una molécula según la reivindicación 1, donde n es un número entero seleccionado de 1, 2, 3.
3. Una molécula según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, donde R es un grupo seleccionado de: metilo, fenilo o bencilo.
4. Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde R1 es un átomo de hidrógeno.
5. Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde R2 es un átomo de hidrógeno o un grupo metilo.
6. Una molécula según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, donde R3 y R4 forman un grupo
Figure imgf000043_0001
7. Una molécula según la reivindicación 1, la cual se incluye en la siguiente lista:
Figure imgf000044_0001
Figure imgf000044_0002
Figure imgf000045_0001
8. Un medicamento que comprende una molécula de fórmula (I), (II) o (III) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 o una sal de ésta en un soporte farmacéuticamente aceptable, con uno o más excipientes farmacéuticos aceptables.
9. Un medicamento que comprende una molécula de fórmula (I), (II) o (III) según la reivindicación 8 que incluya uno o más agentes terapéuticos adicionales.
10. Uso de una molécula de fórmula (I), (II) o (III) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, para la preparación de un medicamento para prevenir y/o tratar trastornos derivados de la hiperactividad de la MAO-B, en particular trastornos degenerativos del sistema nervioso central.
11. Uso según la reivindicación 10, para el prevención y/o tratamiento de trastornos degenerativos preferentemente Parkinson, Alzheimer, demencia senil o ataxia.
12. Un método para la síntesis de una molécula de fórmula (I), (II) o (III) según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 caracterizado por que comprende al menos una etapa como se describe en el esquema 1, en donde la 6(5)(4)-bromoalquil- 3(2H)-piridazinona de fórmula (IV), (IX) o (XIII), una amina secundaria de fórmula V y disulfuro de carbono (CS2) reaccionan en presencia de base en un disolvente a
Figure imgf000046_0001
Esquema 1
13. Un método según la reivindicación 12, en donde el disolvente dimetilformamida (DMF) y la base K3PO4.
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1982000402A1 (en) * 1980-08-07 1982-02-18 Shamrock Corp Diamond Herbicidal and plant growth regulant diphenylpyridazinones
EP1061077A1 (en) * 1998-03-02 2000-12-20 Kowa Co., Ltd. Novel pyridazine derivatives and drugs containing the same as the active ingredient
EP1130015A1 (en) * 1998-08-14 2001-09-05 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Pyridazinone derivatives

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2161403A1 (de) * 1970-12-17 1972-07-06 Hidaka, Hiroyoshi, Nagoya, Aichi (Japan) Pyridincarbamatderivate und Verfahren zur Herstellung derselben
AR206674A1 (es) * 1971-04-16 1976-08-13 Banyu Pharma Co Ltd Procedimiento para preparar nuevos derivados del acido s-(n-sustituido-ditocarbamil)-metil picolinico
CN1136197C (zh) * 1996-05-30 2004-01-28 霍夫曼-拉罗奇有限公司 新的哒嗪酮衍生物
AUPQ441499A0 (en) * 1999-12-02 2000-01-06 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Novel compound
GB0610680D0 (en) * 2006-05-31 2006-07-12 Istituto Di Ricerche D Biolog Therapeutic compounds
ES2343347B2 (es) * 2009-01-27 2011-12-07 Universidade De Santiago De Compostela Uso de derivados de 3-fenilcumarinas 6-sustituidas y preparacion de nuevos derivados.
US8354411B2 (en) * 2009-02-05 2013-01-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited 1-phenyl-3-pyrazolylpyridazin-4(1H)-one compound
RU2012138162A (ru) * 2010-02-08 2014-03-20 Аллерган, Инк. Производные пиридазина для использования в качестве агонистов каннабинода-2
ES2469990B1 (es) * 2012-12-19 2015-01-26 Universidade De Vigo Compuestos de estructura híbrida piridazinona ditiocarbamato con actividad antineoplásica

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1982000402A1 (en) * 1980-08-07 1982-02-18 Shamrock Corp Diamond Herbicidal and plant growth regulant diphenylpyridazinones
EP1061077A1 (en) * 1998-03-02 2000-12-20 Kowa Co., Ltd. Novel pyridazine derivatives and drugs containing the same as the active ingredient
EP1130015A1 (en) * 1998-08-14 2001-09-05 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Pyridazinone derivatives

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
BLIGT-LINDEN, E. ET AL.: "Novel Pyridazinone Inhibitors for Vascular Adhesion Protein-1 (VAP-1): Old target - New Inhibition Mode''.", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY 2013, vol. 56, no. 24, 4 December 2013 (2013-12-04), pages 9837 - 9848, XP055123487 *
CAROTTI, A. ET AL.: "Synthesis and Monoamine Oxidase Inhibitory Activity of New Pyridazine-, Pyrimidine- and 1,2,4-Triazine-Containing Tricyclic Derivatives''.", JOURNAL OF MEDICINAL CHEMISTRY 2007, vol. 50, no. Issue 22, 2 October 2007 (2007-10-02), pages 5364 - 5371, XP055222349 *
UCAR, G. ET AL.: "1-N-Substituted thiocarbamoyl-3-phenyl-5- thienyl-2-pyrazolines: A novel cholinesterase and selective monoamine oxidase B inhibitors for the treatment of Parkinson's and Alzheimer's diseases''.", NEUROSCIENCE LETTERS, vol. 382, 2005, pages 327 - 331, XP027653954 *

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