WO2015081901A1 - 取代的4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物及应用 - Google Patents

取代的4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物及应用 Download PDF

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WO2015081901A1
WO2015081901A1 PCT/CN2014/093298 CN2014093298W WO2015081901A1 WO 2015081901 A1 WO2015081901 A1 WO 2015081901A1 CN 2014093298 W CN2014093298 W CN 2014093298W WO 2015081901 A1 WO2015081901 A1 WO 2015081901A1
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ring
substituted
phenyl
cyclopropyl
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PCT/CN2014/093298
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Inventor
魏用刚
邱关鹏
王松
Original Assignee
四川海思科制药有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/10—Spiro-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Definitions

  • the present invention relates to a spiro ring derivative of a substituted 4,5-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridin-2-one represented by the formula (I), or a stereoisomer thereof, nitrogen oxide Compounds, hydrates, solvates, metabolites, pharmaceutically acceptable salts or prodrugs, processes for their preparation, and pharmaceutical compositions containing them and use as coagulation factor Xa inhibitors.
  • cardiovascular disease is one of the main causes of death in humans.
  • One of its main aspects is thrombosis, which is caused by a series of complex reactions.
  • Blood coagulation is a protective mechanism of the organism whereby the defect of the vessel wall can be "sealed” quickly and reliably, thus avoiding blood loss or minimizing it. Maintaining normal hemostasis, ie hemorrhage and clotting balance, is regulated by a complex mechanism. Unregulated activation of the coagulation system or lack of inhibition of the activation process can lead to a variety of diseases and complications, such as venous thrombosis, deep vein thrombosis, pulmonary embolism, atherosclerosis, acute coronary syndrome, cerebrovascular disease and the like.
  • exogenous coagulation pathway refers to the process of activating factor X from activation of factor XII to formation of IVa-PF3Ca2+ complex
  • exogenous coagulation pathway refers to The process of activating factor X after activation of factor VII to formation of VIIa-Ca2+-TF complex.
  • Activation from factor X to fibrin formation is a common coagulation pathway for endogenous and exogenous coagulation, where blood factor Xa formed by activation of factor X plays a key role.
  • Factor Xa is a member of the trypsin-like serine protease family, and the serine protease family activates prothrombin to thrombin.
  • Factor Xa plays an important role in the coagulation pathway and is located at the initial site of the amplification effect.
  • One molecule of coagulation factor Xa catalyzes the formation of 1000 molecules of thrombin. Therefore, factor Xa as a target should be a more effective strategy for anticoagulation than acting on other coagulation factors or downstream thrombin.
  • heparin mainly injectable dosage forms, including unfractionated heparin, low molecular weight heparin (LMWH), Fondaparinux, etc., which is clinically prone to cause severe hemorrhage and heparin-induced thrombocytopenia side effects, requiring clinical testing.
  • LMWH low molecular weight heparin
  • Fondaparinux mainly injectable dosage forms, including unfractionated heparin, low molecular weight heparin (LMWH), Fondaparinux, etc., which is clinically prone to cause severe hemorrhage and heparin-induced thrombocytopenia side effects, requiring clinical testing.
  • the new coagulation factor Xa inhibitor has the following advantages: oral, low bleeding risk, high efficiency, no need for individual adjustment and monitoring of patients.
  • Drugs currently on the market or under research include rivaroxaban, apixaban, edoxazaban, betrixaban, omeproxaban, eribaxaban, LY517717, YM150, letaxaban, and the like.
  • new factor Xa inhibitors currently on the market or under research also have some disadvantages, such as the poor solubility of rivaroxaban and apixaban.
  • WO00039131 describes nitrogen-containing heterobicyclic derivatives which can be used as trypsin-like serine protease inhibitors, in particular factor Xa inhibitors, wherein X, Y, Z can be nitrogen and carbon, G selects aromatic or nitrogen-containing heteroaryl Ring, A is a cyclic group, and B is a basic group or a cyclic group.
  • WO00200655 describes heteroaryl-phenylheterobicyclic compounds and derivatives thereof, and uses as coagulation factor Xa inhibitors, wherein A is a 5-6 membered aryl or heteroaryl group, G2 is a phenyl group, a naphthyl group or The 5-10 heteroaryl group and Q are heterobicyclic compounds have a large difference in structure from the compound of the present invention, and the structural formula is as follows:
  • WO03026652A1 WO03047520, WO03048081, WO03048158, WO03099276, WO2006047528 describe P4-PM-M4 lactam derivatives including apixaban, wherein ring P may be absent or a 5-7 membered nitrogen or heterocyclic ring, Ring M is a 3-10 membered carbocyclic or heterocyclic ring and is not considered to be a part of the invention as specifically described in this patent.
  • WO2004083174 describes P4-PM-M4 tetrahydropyrimidine and sulfonyl fluorenyl derivatives and their use as serine protease inhibitors, in particular coagulation factor Xa inhibitors, wherein ring P may be absent or is 5-7-membered nitrogen Ring or heterocycle, ring M is a 3-10 membered carbocyclic or heterocyclic ring and is not considered to be a part of the invention as specifically described in this patent.
  • WO2007137801 describes novel coagulation factor Xa inhibitors of tetrahydropyrrole, tetrahydropyrazolopyridine, tetrahydroimidazopyridine and tetrahydrotriazolopyridine derivatives, which have a large difference in structure from the compounds of the present invention, and the relevant structural formula is as follows :
  • WO2009007028 describes 1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-6[4-(oxopiperidin-1-yl)phenyl]-4,6,5,7-tetrahydro-( 1H)-pyrazolo[3.4,c]pyridine-3-carboxamide derivatives, and their use as inhibitors of factor Xa, wherein R 1 , R 2 are alkyl groups and L is a substituted amide group or ester group,
  • R 1 , R 2 are alkyl groups and L is a substituted amide group or ester group
  • the present invention is based on a tetrahydropyrazolopyridine compound, and has a compound represented by the formula (I) to provide a novel structure, better drug efficacy, safer, less toxic side effects, and bioavailability.
  • the present invention relates to a compound of the formula (I), or a stereoisomer thereof, an oxynitride, a hydrate, a solvate, a metabolite, a pharmaceutically acceptable salt, a eutectic or a prodrug, wherein:
  • R 2 is selected from H, F, Cl, Br, I, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy;
  • Ring M is a cyclopropyl group, which is optionally further substituted with 0 to 3 R 3 ;
  • R 3 is each independently selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, decyl, amino, cyano, trifluoromethyl, -(CR 3a R 3b ) n R 3c , C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy, the amino, alkyl or alkoxy group optionally further from 0 to 4 selected from H, F, Cl, amino, hydroxy, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy Substituted by a substituent of the group;
  • R 3d , R 3e and R 3f are each independently selected from H or C 1-4 alkyl;
  • the ring contains 1 to 4 heteroatoms selected from N, O or S, each of which is optionally independently further substituted by 0 to 4 R 4e ;
  • R 4a , R 4b , R 4c , R 4d and R 4e are each independently selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, nitro, cyano, amino, trifluoromethyl, C 1-4 An alkyl group or a C 1-4 alkoxy group, optionally further 0 to 4 selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, cyano, amino, Substituted by a substituent of a C 1-4 alkyl group or a C 1-4 alkoxy group;
  • R 4a and R 4b , R 4c and R 4d may form a 3 to 6 membered ring together with the atoms to which they are attached, said ring containing 0 to 3 heteroatoms selected from N, O or S, said ring Optionally further substituted with 0 to 4 substituents selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, cyano, amino, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy;
  • ring E is selected from phenyl or a 5 to 6 membered heteroaryl group containing from 1 to 3 heteroatoms selected from N, O or S, said phenyl or heteroaryl Optionally further substituted by 0 to 3 R 5 ;
  • ring D comprising two atoms to which ring E is attached, together form a 5 to 6 membered ring, said 5 to 6 membered ring containing 0 to 2 selected from N, O Or a hetero atom of S, the 5 to 6 membered ring optionally further substituted with 0 to 5 R 6 ;
  • ring E is selected from phenyl or a 5 to 6 membered heteroaryl group containing from 1 to 3 heteroatoms selected from N, O or S, said phenyl or heteroaryl
  • the base is optionally further substituted by 0 to 5 R 5 ;
  • R 5a , R 5b , R 5c and R 5d are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, amino, C 1-4 alkyl, C 1-4 alkoxy or C 3-6 carbon ring;
  • R 5a and R 5b , R 5c and R 5d may form a 3- to 6-membered ring together with the atoms to which they are attached, said ring containing 0 to 3 heteroatoms selected from N, O or S, said ring Optionally further substituted with 0 to 4 substituents selected from the group consisting of F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, cyano, amino, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy;
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl, hydroxy, thiol, cyano, amino, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy;
  • R 6 when two R 6 are attached to the same atom, they may form a 3 to 4 membered ring together with the atoms to which they are attached, said ring containing 0 to 1 hetero atom selected from N, O or S;
  • n is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • n is selected from 0, 1, 2, 3 or 4;
  • p is selected from 0, 1, or 2.
  • Ring M is a cyclopropyl group, which is optionally further substituted with 0, 1, 2 or 3 R 3 ;
  • a preferred embodiment of the invention is a compound selected from the group consisting of the formula (I) wherein the ring M is a cyclopropyl group.
  • ring E is selected from substituted or unsubstituted phenyl, pyridyl, pyrazinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl or thienyl; preferably selected from substituted or unsubstituted phenyl, pyridyl or thiophene Further preferably selected from substituted or unsubstituted phenyl; when substituted, optionally substituted by 1, 2 or 3 R 5 ; ring D includes two atoms to which ring E is attached to form a substituted or unsubstituted
  • ring E includes two atoms to which ring E is attached to form a substituted or unsubstituted
  • ring E is selected from substituted or unsubstituted phenyl, pyridyl, pyrazinyl, pyridazinyl, pyrimidinyl or thienyl; wherein substituted or unsubstituted phenyl, pyridyl or thiophene is preferred. Further preferred are substituted or unsubstituted phenyl groups; when substituted, they are optionally substituted by 1, 2, 3, 4 or 5 R 5 .
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl, hydroxy, Cyano, amino, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy, preferably H, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy;
  • r and t are each independently selected from 0, 1, 2 or 3.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I), wherein the compound is selected from the group consisting of a compound represented by the formula (II), or a stereoisomer thereof, an oxynitride, a hydrate, a solvate, a metabolite a pharmaceutically acceptable salt, eutectic or prodrug, wherein:
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • r is selected from 0, 1, 2 or 3;
  • t is selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5.
  • R 1 is selected from the group consisting of cyano, amino, carboxyl, aldehyde, methyl, ethyl, carbamoyl, hydroxymethyl, methoxymethylene, ethoxymethylene, methylsulfonylmethylene, 1 - hydroxyethyl or one of the following structures substituted or unsubstituted:
  • R 2 is selected from H, F or Cl, preferably H or F;
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • R 4a , R 4b and R 4c are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, nitro, cyano, amino, trifluoromethyl, C 1-4 alkyl or C 1- 4 alkoxy group, the amino, alkyl or alkoxy group optionally further substituted selected from 0,1,2,3 or 4 F, Cl, Br, I, hydroxy, mercapto, cyano, amino, methyl Substituted with a substituent of an ethyl group, an isopropyl group, a methoxy group, an ethoxy group or an isopropoxy group;
  • R 4a and R 4b may form a 3- to 6-membered ring together with the atoms to which they are attached, the ring being selected from substituted or substituted cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, pentylenetetrazole, iso Oxazolyl, imidazolyl, pyridyl or phenyl, preferably cyclopropyl, pentetazolyl or pyridyl, further preferably cyclopropyl, when substituted, optionally 1, 2, 3 or 4 Substituted by a substituent of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, decyl, cyano, amino, methyl, ethyl, isopropyl, methoxy, ethoxy or isopropoxy;
  • R 5a , R 5b , R 5c and R 5d are each independently selected from H, hydroxy, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy, preferably H, hydroxy, methyl, ethyl, isopropyl, Methoxy or ethoxy;
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl, hydroxy, cyano, amino, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy, preferably H, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy Further, H, methyl or ethyl is preferred.
  • R 2 is selected from H, F or Cl, preferably H or F;
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl, hydroxy, cyano, amino, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy, preferably H, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy Further, H, methyl or ethyl is preferred.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I), wherein the compound is selected from the group consisting of a compound of the formula (III), or a stereoisomer, an oxynitride, a hydrate, a solvate or a metabolite thereof. a pharmaceutically acceptable salt, eutectic or prodrug, wherein:
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • R ⁇ is selected from 0, 1, 2, 3, 4 or 5.
  • R 1 is selected from the group consisting of cyano, amino, carboxyl, aldehyde, methyl, ethyl, carbamoyl, hydroxymethyl, methoxymethylene, ethoxymethylene, methylsulfonylmethylene, 1 - hydroxyethyl, or one of the following structures, substituted or unsubstituted:
  • R 2 is selected from H, F or Cl, preferably H or F;
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • R 4a , R 4b and R 4c are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, nitro, cyano, amino, trifluoromethyl, C 1-4 alkyl or C 1- 4 alkoxy group, the amino, alkyl or alkoxy group optionally further substituted selected from 0,1,2,3 or 4 F, Cl, Br, I, hydroxy, mercapto, cyano, amino, methyl Substituted with a substituent of an ethyl group, an isopropyl group, a methoxy group, an ethoxy group or an isopropoxy group;
  • R 4a and R 4b may form a 3- to 6-membered ring together with the atoms to which they are attached, the ring being selected from substituted or substituted cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, pentylenetetrazole, iso Oxazolyl, imidazolyl, pyridyl or phenyl, preferably cyclopropyl, pentetazolyl or pyridyl, further preferably cyclopropyl, when substituted, optionally 1, 2, 3 or 4 Substituted by a substituent of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, decyl, cyano, amino, methyl, ethyl, isopropyl, methoxy, ethoxy or isopropoxy;
  • R 5a , R 5b , R5c and R 5d are each independently selected from H, hydroxy, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy, preferably H, hydroxy, methyl, ethyl, isopropyl, A Oxy or ethoxy.
  • R 2 is selected from H, F or Cl, preferably H or F;
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • the group is preferably an H, F, Cl, a cyano group, a methoxy group, an ethoxy group or an aminomethylene group.
  • 1, 2, 3 or 4 are selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, cyano, amino, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, Substituted by a substituent of a methoxy or ethoxy group;
  • R 5a , R 5b and R 5c are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, amino, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy, preferably H, F, Cl, Br , I, hydroxy, amino, methyl, ethyl or isopropyl.
  • each R 6 is independently selected from the group consisting of H, F, Cl, hydroxy, thiol, cyano, amino, methyl, ethyl, propyl , isopropyl, methoxy, ethoxy or propoxy, preferably H, F, Cl, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy;
  • R 6 when two R 6 are attached to the same atom, they may form a 3 to 4 membered ring together with the atoms to which they are attached, and the 3 to 4 membered ring contains 0 to 1 selected from N, O or S. a hetero atom, preferably forming a cyclopropyl group;
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I), (II) and (III) wherein:
  • R 1a and R 1b are each independently selected from the group consisting of hydrogen, amino, hydroxy, C 1-4 alkyl, -(CH 2 ) n -C 3 carbocycle, -(CH 2 ) n -C 4 carbocycle, -(CH 2 ) n -C 5 carbocyclic ring, -(CH 2 ) n -C 6 carbocyclic ring, -(CH 2 ) n -C 3 heterocyclic ring, -(CH 2 ) n -C 4 heterocyclic ring, -(CH 2 ) n- C 5 heterocyclic or -(CH 2 ) n -C 6 heterocyclic ring, preferably hydrogen, hydroxy, C 1-4 alkyl, -(CH 2 ) n -C 3 carbocyclic or -(CH 2 ) n - a C 4 carbocyclic ring, further preferably hydrogen, hydroxy, methyl, ethyl, isopropyl
  • n is selected from 0, 1, 2 or 3.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I), (II) and (III) wherein:
  • R 1a and R 1b are each independently selected from the group consisting of hydrogen, amino, methyl, ethyl, isopropyl, cyclopropyl, cyclopropylmethylene, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, pyrrolyl, and piperidin. Pyridyl, morpholinyl, thiomorpholinyl or cyclopropylmethylene;
  • n is selected from 0, 1, 2 or 3.
  • R 1 is selected from the group consisting of a cyano group, an amino group, a carboxyl group, an aldehyde group, a methyl group, an ethyl group, a hydroxymethyl group,
  • R 1 is selected from the group consisting of a cyano group, an amino group, a carboxyl group, an aldehyde group, a methyl group, an ethyl group, a hydroxymethyl group,
  • R 1 is selected from the group consisting of a cyano group, an amino group, a carboxyl group, an aldehyde group, a methyl group, an ethyl group, a hydroxymethyl group,
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I), (II) and (III), wherein: R 2 is selected from H, F or Cl, preferably H or F.
  • R 4a , R 4b and R 4c are each independently selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, nitro, cyano, amino, trifluoromethyl, C 1-4 alkyl or C 1- 4 alkoxy group, the amino, alkyl or alkoxy group optionally further substituted selected from 0,1,2,3 or 4 F, Cl, Br, I, hydroxy, mercapto, cyano, amino, methyl Substituted by a substituent of ethyl, isopropyl, methoxy, ethoxy or isopropoxy; R 4a , R 4b and R 4c are preferably H, F, hydroxy, cyano, amino, methyl, B a group, a propyl group, an isopropyl group, a methoxy group, an ethoxy group or an isopropoxy group; and R 4a , R 4b and R 4c are further preferably H, F, a hydroxyl group, an amino group,
  • R 4a and R 4b may form a 3- to 6-membered ring together with the atoms to which they are attached, the ring being selected from substituted or substituted cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, pentylenetetrazole, iso Oxazolyl, imidazolyl, pyridyl or phenyl, preferably cyclopropyl, pentatetrazolyl or pyridyl; further preferred is cyclopropyl.
  • 1, 2, 3 or 4 are selected from the group consisting of H, F, Cl, Br, I, hydroxy, thiol, cyano, amino, methyl, ethyl, isopropyl, methoxy Substituted by a substituent of an ethoxy or isopropoxy group;
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I) wherein:
  • R 1 is selected from the group consisting of cyano, amino, carboxyl, aldehyde, methyl, ethyl, hydroxymethyl, carbamoyl, methoxymethylene, ethoxymethylene, methanesulfonylmethylene, 1 - hydroxyethyl, or one of the following structures, substituted or unsubstituted:
  • R 2 is selected from H, F or Cl
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • ring E is selected from substituted or unsubstituted phenyl, pyridyl or thienyl, when substituted, optionally substituted with from 1 to 3 R 5 ; ring D, including ring E attached thereto The two atoms together form one of the following structures, substituted or unsubstituted: When substituted, optionally substituted with 1 to 3 R 6 ;
  • ring E is selected from substituted or unsubstituted phenyl, pyridyl or thienyl, and when substituted, is optionally substituted with from 1 to 5 R 5 .
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl, hydroxy, cyano, amino, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy;
  • R 6 when two R 6 are attached to the same atom, they may form a cyclopropyl group together with the atoms to which they are attached.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I) wherein:
  • R 2 is selected from H or F
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • ring E is phenyl, which is optionally further substituted with 0, 1, 2, 3, 4 or 5 R 5 ;
  • ring E is phenyl, said phenyl optionally being further substituted with 0, 1, 2 or 3 R 5 ;
  • ring D including two atoms to which ring E is attached, forming a substitution or not replaced When substituted, optionally substituted with 1, 2 or 3 R 6 ;
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl, hydroxy, cyano, amino, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy, preferably H, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy Further preferably H, methyl or ethyl;
  • R 6 when two R 6 are attached to the same atom, they may form a cyclopropyl group together with the atoms to which they are attached.
  • a preferred embodiment of the invention is a compound of the formula (I) wherein:
  • R 1 is selected from the group consisting of cyano, hydroxymethyl, aldehyde, carbamoyl, methylsulfonylmethylene, methylaminomethylene, aminomethylene, 1-hydroxyethyl,
  • R 2 is selected from H or F
  • Ring M is a cyclopropyl group
  • ring E is phenyl, which is optionally further substituted with from 0 to 5 R 5 ;
  • ring E is phenyl, which is optionally further substituted with 0 to 3 R 5 ;
  • ring D including the two atoms to which ring E is attached, form a substituted or unsubstituted When substituted, optionally substituted with 1 to 3 R 6 ;
  • R 5 are each independently selected from H, F, Cl, cyano, methoxy or aminomethylene
  • R 6 are each independently selected from H, F, Cl or methyl
  • R 6 when two R 6 are attached to the same atom, they may form a cyclopropyl group together with the atoms to which they are attached.
  • a compound of the formula (I), wherein the compound is selected from the group consisting of:
  • the present invention relates to a compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof, wherein the salt is selected from the group consisting of a hydrochloride, a sulfate, a phosphate, an acetate, a maleate, a succinate, a fumarate. , malate, oxalate, tartrate, benzoate, cinnamate, p-toluenesulfonate, besylate, methanesulfonate, trifluoroacetic acid, triflate or their Combinations, preferably maleate, fumarate, trifluoroacetic acid or triflate.
  • the salt is selected from the group consisting of a hydrochloride, a sulfate, a phosphate, an acetate, a maleate, a succinate, a fumarate. , malate, oxalate, tartrate, benzoate, cinnamate, p-toluenesulf
  • the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a therapeutically effective amount of at least one compound of the invention, or a stereoisomer thereof, an oxynitride, a hydrate, a solvate, a metabolite, or a pharmaceutically acceptable Accepted salts or prodrugs, as well as pharmaceutically acceptable carriers or excipients.
  • the present invention relates to a compound of the present invention, or a stereoisomer thereof, an oxynitride, a hydrate, a solvate, a metabolite, a pharmaceutically acceptable salt or a prodrug, in the preparation of a disease associated with a serine protease.
  • a compound of the present invention or a stereoisomer thereof, an oxynitride, a hydrate, a solvate, a metabolite, a pharmaceutically acceptable salt or a prodrug, in the preparation of a disease associated with a serine protease.
  • the disease associated with the serine protease is selected from the group consisting of a thromboembolic disorder.
  • a preferred embodiment of the invention wherein the serine protease is selected from the group consisting of factor Xa.
  • the thromboembolic disease is selected from the group consisting of an arterial cardiovascular thromboembolic disease, an intravenous cardiovascular thromboembolic disease, and a cardiac related thromboembolic disease.
  • the thromboembolic disease is selected from the group consisting of venous thrombosis, deep vein thrombosis, deep venous thrombosis of the lower extremity, thrombophlebitis, cerebral arterial thrombosis, arterial embolism, coronary thrombosis, pulmonary embolism, and cerebral embolism Renal embolism, hepatic vein embolization, portal vein embolization, chronic diffuse intravascular coagulation, extremities and central microvascular arterial embolization, atherosclerosis, acute coronary syndrome, unstable angina, acute coronary syndrome, myocardial infarction, arteries Sclerosis, sudden onset of ischemia, transient ischemia, external obstructive arterial disease, stroke, aseptic thrombotic endocarditis with arterial embolism, cerebrovascular disease.
  • the invention also relates to a method of treating a thromboembolic disorder.
  • the method comprises administering to the patient a therapeutically effective amount of a pharmaceutical agent comprising a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the compounds of the invention may be administered in combination with other therapeutic agents.
  • the invention relates to a pharmaceutical agent comprising a compound of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof, which may be a combination product comprising administering to a host in need of such treatment a therapeutically effective amount of first and second a therapeutic agent.
  • the first therapeutic agent is a compound of the invention or a stereoisomer thereof, an oxynitride, a hydrate, a solvate, a metabolite, a pharmaceutically acceptable salt, a co-crystal or a prodrug
  • the second therapeutic agent is selected Since the first Two clotting factor factor Xa inhibitors, one anticoagulant, one antiplatelet agent, one thrombin inhibitor, one thrombolytic agent, and at least one agent of a fibrin solvate.
  • the second therapeutic agent is selected from the group consisting of warfarin, unfractionated heparin, low molecular weight heparin, synthetic pentasaccharide, hirudin, argatroban, aspirin, ibuprofen, A Oxyproteric acid, sulindac, indomethacin, mefenamic acid, dexamethasone, diclofenac, benzoxazolone, piroxicam, ticlopidine, clopidogrel, tirofiban, erti Phenanthide, abciximab mecarragine, hirudin disulfate (also known as disulfatohirudin), tissue plasminogen activator, modified tissue plasminogen activator, complex plasmin streptokinase, urine At least one agent of a kinase and a streptokinase.
  • warfarin unfractionated heparin
  • low molecular weight heparin synthetic penta
  • a preferred embodiment of the invention wherein the second therapeutic agent is at least one antiplatelet agent.
  • anti-platelet agent is aspirin and/or clopidogrel.
  • a preferred embodiment of the invention wherein the antiplatelet agent is clopidogrel.
  • the present invention relates to the substitution of a plurality of substituents, which may be the same or different.
  • the present invention relates to the inclusion of a plurality of heteroatoms, each of which may be the same or different.
  • the elements carbon, hydrogen, oxygen, sulfur, nitrogen or halogen involved in the groups and compounds of the present invention include their isotopic conditions, and the elements, carbon, hydrogen and oxygen involved in the groups and compounds of the present invention.
  • Sulfur or nitrogen is optionally further replaced by one or more of their corresponding isotopes, wherein the carbon isotopes include 12 C, 13 C, and 14 C, and the hydrogen isotopes include helium (H), helium (D, also known as heavy hydrogen ), ⁇ (T, also known as super heavy hydrogen), oxygen isotopes include 16 O, 17 O and 18 O, sulfur isotopes include 32 S, 33 S, 34 S and 36 S, nitrogen isotopes including 14 N and 15 N
  • the fluorine isotope 19 F, the chlorine isotope includes 35 Cl and 37 Cl, and the bromine isotopes include 79 Br and 81 Br.
  • alkyl refers to a saturated aliphatic hydrocarbon group, including straight chain and branched chain groups of 1 to 20 carbon atoms. Preference is given to alkyl groups having 1 to 10 carbon atoms, non-limiting examples including methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, tert-butyl, n-pentyl, positive a mercapto group, and various branched isomers thereof; more preferred are lower alkyl groups having 1 to 4 carbon atoms, and non-limiting examples include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, and Butyl, isobutyl or tert-butyl.
  • Alkoxy means an -O-alkyl group wherein alkyl is as defined above.
  • the alkoxy group may be substituted or unsubstituted, and non-limiting examples thereof include methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, butoxy, tert-butoxy,
  • the pentyloxy group or the hexyloxy group preferably has a 1 to 12 member alkoxy group.
  • Alkoxyalkyl means an alkyl group attached to an alkoxy group.
  • Alkenyl means an alkyl group as defined in the invention comprising at least one carbon-carbon double bond, said alkenyl group having 2 to 20 carbon atoms, preferably 2 to 12 carbon atoms, further preferably 2 to 8 carbons atom.
  • alkenyl groups include substituted or unsubstituted vinyl, 2-propenyl, 3-butenyl, 2-butenyl, 4-pentenyl, 3-pentenyl, 2-hexenyl , 3-hexenyl, 2-heptenyl, 3-heptenyl, 4-heptenyl, 3-octenyl, 3-decenyl or 4-nonenyl, etc., when substituted, substituted
  • Alkynyl means an alkyl group as defined in the invention comprising at least one carbon-carbon triple bond, said alkynyl group having 2 to 20 carbon atoms, preferably 2 to 12 carbon atoms, further preferably 2 to 8 carbons atom.
  • Carbocycle means a saturated or unsaturated aromatic ring or a non-aromatic ring.
  • the aromatic ring or non-aromatic may be a single ring of 3 to 8 members, a 4 to 12 membered double ring or a 10 to 15 membered three ring system.
  • Linked to a bridged or spiro ring non-limiting examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cyclohexenyl, cycloheptyl, cyclopentene, ring Hexadiene, cycloheptatriene, phenyl, naphthyl, benzocyclopentyl, bicyclo[3.2.1]octyl, bicyclo[5.2.0]decyl, tricyclo[5.3.1.1] Dodecyl, adamantyl or spiro[3.3]heptyl and the like.
  • Heterocycle means a substituted or unsubstituted saturated or unsaturated aromatic or non-aromatic ring, and the aromatic and non-aromatic rings may be a 3 to 8 membered monocyclic ring, a 4 to 12 membered bicyclic ring or a 10 to 15 membered member.
  • a tricyclic system consisting of at least one hetero atom selected from N, O or S, preferably a 3 to 10 membered heterocyclic ring, and optionally substituted N, S in the heterocyclic ring can be oxidized to various oxidation states.
  • the heterocyclic ring can be attached to a hetero atom or a carbon atom.
  • the heterocyclic ring may be attached to a bridged or spiro ring, and non-limiting examples include, ethylene oxide, aziridine, oxetanyl, azetidinyl, 1,3-dioxolane, 1,4-dioxolane, 1,3-dioxane, azepanyl, pyridyl, furyl, thienyl, pyranyl, N-alkylpyrrolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl , pyridazinyl, imidazolyl, piperidinyl, piperidinyl, morpholinyl, thiomorpholinyl, 1,3-dithiane, dihydrofuran, dihydropyran, dithiapentane, tetrahydrofuran, Tetrahydropyrrolyl, tetrahydroimidazole, tetrahydrothiazole, tetrahydropyran,
  • Amino means -NH 2, may be substituted or unsubstituted. When substituted, the substituent is preferably 1 to 3, independently selected from alkyl, alkenyl, alkynyl, alkoxy, Thio, hydroxy, amino, alkylamino, alkyl acylamino, heterocycloalkyl, cycloalkyl, aryl, heteroaryl, cycloalkoxy, heterocycloalkoxy, hydroxyalkyl, carboxylic acid or Carboxylic acid ester.
  • Aryl means a substituted or unsubstituted 6 to 14 membered all carbon monocyclic or fused polycyclic group having a polycyclic group of a conjugated ⁇ -electron system, preferably a 6 to 10 membered aromatic ring, Non-limiting examples include phenyl or naphthyl; the aryl group may be fused to a heteroaryl, heterocyclyl or cycloalkyl group, and the moiety attached to the parent structure is an aryl group, non-limiting examples of which include benzo Furan, benzocyclopentyl or benzothiazole.
  • Heteroaryl means a substituted or unsubstituted 5 to 15 membered aromatic ring and contains 1 to 3 heteroatoms selected from N, O or S heteroatoms, preferably 5 to 10 members, and non-limiting heteroaryl groups. Examples include pyridyl, furyl, thienyl, N-alkylpyrrolyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, pyridazinyl, imidazolyl, benzofuran, benzimidazole, benzopyridine or pyrrolopyridine, and the like.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” means a pharmaceutically acceptable salt of a non-toxic acid or base, including salts of inorganic acids and bases, organic acids and bases.
  • Salts derived from inorganic bases include, but are not limited to, metal salts formed from Al, Ca, Li, My, K, Na, and Zn;
  • salts derived from organic bases include, but are not limited to, salts of primary, secondary, or tertiary amines, including Naturally occurring substituted or unsubstituted amines, cyclic amines and basic ion exchange resins such as ammonia, isopropylamine, trimethylamine, diethylamine, triethylamine, tripropylamine, diethanolamine, ethanolamine, Dimethylethanolamine, 2-dimethylaminoethanol, 2-diethylaminoethanol, dicyclohexylamine, caffeine, procaine, choline, betaine, phenicillin, ethylenediamine, glucosamine, An organic salt
  • Crystal refers to a combination of an active pharmaceutical ingredient (API) and a cocrystal former (CCF) under the action of hydrogen bonds or other non-covalent bonds, of which API and CCF The pure state is solid at room temperature and there is a fixed stoichiometric ratio between the components.
  • Eutectic is a multi-component crystal that contains both a binary eutectic formed between two neutral solids and a multi-component eutectic formed by a neutral solid with a salt or solvate.
  • the "eutectic former” includes, but is not limited to, various pharmaceutically acceptable acid, base, nonionic compounds, non-limiting examples of which include alanine (Ala), valine (Val), leucine (Leu), isoleucine (Ile), proline (Pro), phenylalanine (Phe), tryptophan (Trp), methionine (Met), glycine (Gly), silk ammonia Acid (Ser), threonine (Thr), cysteine (Cys), tyrosine (Tyr), asparagine (Asn), glutamine (Gln), lysine (Lys), refined ammonia Acid (Arg), histidine (His), aspartic acid (Asp), glutamic acid (Glu), pyroglutamic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, nitric acid, hydrobromic acid, hydrochloric acid, formic acid, acetic acid, propionic acid , benzenesulfonic acid,
  • Stepoisomer refers to isomers resulting from the spatial arrangement of atoms in a molecule, including cis and trans isomers, enantiomers and conformational isomers.
  • “Pharmaceutical composition” means one or more of the compounds described herein or a physiologically/pharmaceutically acceptable salt or mixture of prodrugs thereof with other chemical components, such as physiological/pharmaceutically acceptable carriers and excipient.
  • the purpose of the pharmaceutical composition is to facilitate the administration of the compound to the organism.
  • Prodrug means a compound of the invention which can be converted to biological activity under physiological conditions or by solvolysis.
  • Prodrugs of the invention are prepared by modifying functional groups in the compound which can be removed by conventional procedures or in vivo to provide the parent compound.
  • a prodrug includes a compound formed by attaching a hydroxyl group, an amino group or a thiol group to any group in the compound of the present invention.
  • prodrug of the compound of the present invention is administered to a mammalian individual, the prodrug is cleaved to form a free hydroxyl group, respectively. , free amino or free sulfhydryl.
  • Examples of prodrugs include, but are not limited to, compounds formed by the hydroxyl or amino functional groups of the compounds of the invention with formic acid, acetic acid or benzoic acid.
  • aryl substituted with an alkyl group means that an alkyl group may, but need not, be present, and the description includes the case where the aryl group is substituted with an alkyl group and the case where the aryl group is not substituted with an alkyl group.
  • Substituted or unsubstituted refers to a situation in which a group may be substituted or unsubstituted, and if it is not indicated in the present invention that a group may be substituted, it means that the group is unsubstituted.
  • “As a choice” means that the plan after “as a choice” is a side-by-side relationship with the plan before “as a choice”, not Further selection in the previous scenario.
  • substitution refers to the case where one or more hydrogen atoms in a group are substituted by another group, and if the group is substituted by a hydrogen atom, the group formed is the same as the group substituted by a hydrogen atom.
  • the group is substituted, for example, amino, C 1-4 alkyl, C 1-4 alkoxy, C 3-6 carbocyclic, 3 to 6 membered heterocyclic optionally further 0, 1, 2, 3 or Substituted by four substituents selected from H, F, Cl, Br, I, hydroxy, cyano, amino, C 1-4 alkyl or C 1-4 alkoxy, the groups formed include, but are not limited to, Base, chloromethyl, trichloromethyl, hydroxymethyl, -CH 2 OCH 3 , -CH 2 SH, -CH 2 CH 2 CN, -CH 2 NH 2 , -NHOH, -NHCH 3 , -OCH 2 Cl , -OCH 2 OCH 2 CH 3 , -OCH 2
  • the structure of the compound is determined by nuclear magnetic resonance (NMR) or (and) mass spectrometry (MS).
  • NMR shift ( ⁇ ) is given in units of 10 -6 (ppm).
  • the NMR was measured using a (Bruker Avance III 400 and Bruker Avance 300) nuclear magnetic apparatus, and the solvent was deuterated dimethyl sulfoxide (DMSO-d 6 ), deuterated chloroform (CDCl 3 ), deuterated methanol (CD 3 OD). ), the internal standard is tetramethylsilane (TMS).
  • the HPLC was measured using an Agilent 1260 DAD high pressure liquid chromatograph (Zorbax SB-C18 100 x 4.6 mm).
  • Thin layer chromatography silica gel plate uses Yantai Yellow Sea HSGF254 or Qingdao GF254 silica gel plate.
  • the specification of silica gel plate used for thin layer chromatography (TLC) is 0.15mm ⁇ 0.20mm.
  • the specification for thin layer chromatography separation and purification is 0.4mm. ⁇ 0.5mm.
  • the known starting materials of the present invention may be synthesized by or according to methods known in the art, or may be purchased from Titan Technology, Anheji Chemical, Shanghai Demer, Chengdu Kelon Chemical, Suiyuan Chemical Technology, and Belling Technology. And other companies.
  • the nitrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a nitrogen balloon having a volume of about 1 L.
  • the hydrogen atmosphere means that the reaction flask is connected to a hydrogen balloon of about 1 L volume.
  • the hydrogenation reaction is usually evacuated, charged with hydrogen, and operated three times.
  • reaction was carried out under a nitrogen atmosphere.
  • the solution means an aqueous solution.
  • reaction temperature is room temperature.
  • the room temperature is an optimum reaction temperature of 20 ° C to 30 ° C.
  • Step 5 (E)-3-(1-(Methanesulfonyloxymethyl)cyclopropyl)prop-2-enoic acid ethyl ester (1f)
  • Step 6 (E)-3-(1-(Azidomethyl)cyclopropyl)prop-2-enoic acid ethyl ester (1 g)
  • 2,3-Dihydrobenzofuran-5-amine (2a) (2.0 g, 14.80 mmol) was added to hydrochloric acid (14.6 mL, 3N) and cooled To -5 ° C, a solution of sodium nitrite (1.2 g, 17.80 mmol) in water (8 mL) was added dropwise. After the addition was completed, the mixture was reacted at 0 ° C for 30 minutes, and sodium acetate (2.1 g, 25.6 mmol) was slowly added to adjust the reaction solution.
  • the amine (6.5 mL, 46.5 mmol) and potassium iodide (0.51 g, 1.98 mmol) were warmed to reflux overnight, then cooled to 0 ° C, then hydrochloric acid (60 mL, 4 N) was added to the reaction flask, and the reaction was quenched at room temperature for 1 hour.
  • Step 5 6-[4-(1-Cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxygen --spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-3-carboxylic acid ethyl ester (1F)
  • Step 6 6-[4-(1-Cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxygen --spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-3-carboxamide (Compound 1)
  • 3-Difluorotetrahydropyrrole hydrochloride (444 mg, 3.09 mmol) was reacted to 60 ° C for 1 hour, sodium cyanoborohydride (194 mg, 3.09 mmol) was added, and the mixture was stirred at 60 ° C for 18 hours.
  • Second step 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(3.3-difluorotetrahydropyrrol-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)- 7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide (Compound 2)
  • 1-(1-Cyanocyclopropyl)benzene (1A) (2.0 g, 14 mmol) was dissolved in acetic acid (30 mL), and iodine (3.6 g, 14 mmol) and sodium iodate (396 mg, 3.5 Methyl) and concentrated sulfuric acid (0.5 mL) were reacted to 70 ° C for 24 hours.
  • reaction solution was cooled, and ethyl acetate (80 mL) and sodium thiosulfate solution (50 mL) was added, and the mixture was separated, and the organic phase was sequentially subjected to sodium thiosulfate solution (50 mL), water (30 mL ⁇ 2) and saturated brine (50 mL) ⁇ 2) Washing, drying over anhydrous sodium sulfate, EtOAc (EtOAc m.) -(1-Cyanocyclopropyl)benzene (4B), white solid (2.43 g, yield 65%).
  • reaction solution was cooled to 0 ° C, HCl (4N) was added to adjust the pH of the solution to 3 to 4, dichloromethane (150 mL) and water (100 mL) were added, and the organic phase was sequentially washed with water (100 mL ⁇ 2) and saturated brine.
  • 6-[4-(1-Formylcyclopropyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazole[ Ethyl 3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate was dissolved in MeOH (30 mL) and THF (10 mL). 3.3 mmol), the mixture was heated to 60 ° C for 2 hours, sodium cyanoborohydride (276 mg, 4.4 mmol) was added, and the mixture was reacted at 60 ° C for 16 hours.
  • the fifth step 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5- -7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide (Compound 5)
  • reaction solution was cooled to 0 ° C, HCl (4 N) was added to adjust the pH of the solution to 3 to 4, dichloromethane (80 mL) and water (40 mL) were added, and the organic phase was sequentially washed with water (50 mL ⁇ 2) and saturated brine.
  • 6-[4-(1-Carboxycyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluorophenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4 -c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide (6B) (1.1 g, 2.1 mmol) was dissolved in tetrahydrofuran (40 mL), cooled to EtOAc. 6.4 mmol), reacted at room temperature for 16 hours. Methanol (5 mL) was added to the reaction solution.
  • the third step 6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluorophenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazole [3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-3-carboxamide (6D)
  • 6-[4-(1-Hydroxymethylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluorophenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3] , 4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide (6C) (830 mg, 1.65 mmol) was dissolved in dichloromethane (30 mL), and the complexation of pyridine and CrO3 in hydrochloric acid was added. The salt (531 mg, 246 mmol) and silica gel (1 g) were reacted at room temperature for 3 hours.
  • 6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluorophenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3, 4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide (6D) (660 mg, 1.31 mmol) was dissolved in methanol (30 mL) and THF (10 mL). 2.0 mL, 3.93 mmol), the mixture was heated to 55 ° C for 2 hours, sodium cyanoborohydride (329 mg, 5.24 mmol) was added, and reacted at 55 ° C for 16 hours.
  • Step 5 6-[4-(1-Cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluorophenyl) -7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-3-carboxamide (Compound 6)
  • Second step 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(tetrahydropyrrol-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluorophenyl)- 7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-3-carboxamide (compound 7)
  • Step 5 1-(4-Methoxyphenyl)-3-trifluoromethyl-6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-spiro[5H-pyrazolo[3 ,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-7-one (8F)
  • reaction mixture was concentrated, and the residue was purified (jjjjjjjjjjj -trifluoromethyl-6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-7 - Ketone (8F), white solid (30 mg, yield 81%).
  • Step 6 1-(4-Methoxyphenyl)-3-trifluoromethyl-6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethyl)aminoethyl) Phenyl]-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1 ⁇ -cyclopropane]-7-one (compound 8)
  • N', N'-tetramethylurea hexafluorophosphate (153 mg, 0.4 mmol), N,N-diisopropylethylamine (129 mg, 1.0 mmol) and aqueous ammonia (1 mL) were reacted at room temperature for 3 hours.
  • the reaction was quenched by adding water (10 mL) at 0 ° C, dichloromethane (50 mL) was added, and the filtrate was filtered. After adding water (50 mL), the organic phase was washed with water (50 mL ⁇ 2) and brine (50 mL ⁇ 1), dried over anhydrous sodium sulfate and evaporated.
  • Test Example 1 Inhibition of in vitro enzymatic activity of coagulation factor Xa by the compound of the present invention
  • the following method can be used to determine the inhibitory effect of the compound of the present invention on human coagulation factor Xa activity in vitro, expressed by the inhibition constant Ki.
  • test compound working solution (30 ⁇ L of the reaction buffer in the control group) and 150 ⁇ L of the coagulation factor Xa working solution were added to the 96-well plate, and the final concentration of the factor Xa was 1 nM, and the mixture was incubated at room temperature for 30 minutes. Then, 120 ⁇ L of a chromogenic substrate working solution was added to a final concentration of 0.2 mM to initiate the reaction. The measurement was continued for 30 minutes at 405 nm using a microplate reader (Perkin Elmer, Envision) and measured every minute.
  • test compound Ki was calculated according to the following formula, and the results are shown in Table 1;
  • Ki IC 50 /(1+[S]/Km)
  • IC 50 - The concentration of test compound resulting in a 50% reduction in substrate hydrolysis rate was calculated by SPSS 16.0 software linear regression.
  • the compounds of the present invention have a significant inhibitory effect on human FXa in a buffer.
  • Test Example 2 Determination of coagulation function in human plasma in vitro
  • the compound of the present invention has obvious anticoagulant effect on human plasma in vitro.

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Abstract

本发明涉及一种通式（I）所示取代的4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物及应用，通式（I）化合物中的各取代基的定义与说明书中的定义相同。

Description

取代的4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物及应用 技术领域
本发明涉及一种通式(I)所示取代的4,5-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-2-酮的螺环衍生物，或其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐或前药、其制备方法以及含有它们的药物组合物以及作为凝血因子Xa抑制剂的用途。
背景技术
目前，心血管疾病是导致人类死亡的主要原因之一，它的一个主要方面是血栓形成，血栓形成是由一系列复杂反应引起凝血而致。血液凝固是生物体的一种保护机制，借此可很快并且可靠地“密封”血管壁的缺损，因此可以避免失血或将其降到最低限度。维持正常止血作用，即出血和凝血平衡，受一个复杂机制的调控。不受调控的活化凝血系统或缺乏活化过程的抑制作用都可能导致多种疾病和并发症，例如静脉血栓、深静脉血栓、肺栓塞、动脉粥样硬化、急性冠状综合征、脑血管疾病等。
在血液凝固中，传统上分为内源性和外源性系统，内源性凝血途径是指从XII因子激活到形成Ⅳa-PF3Ca2+复合物后激活X因子的过程；外源性凝血途径是指从Ⅶ因子被激活到形成Ⅶa-Ca2+-TF复合后激活Ⅹ因子的过程。从X因子被激活至纤维蛋白形成，是内源、外源凝血的共同凝血途径，这里由X因子活化形成的血Xa因子起关键作用。
Xa因子是胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶家族的一员，丝氨酸蛋白酶家族激活凝血酶原为凝血酶。Xa因子在凝血通路中起重要作用，而且位于放大效应的初始位点，一分子凝血因子Xa催化1000分子凝血酶形成。因此，Xa因子作为靶点比作用于其他凝血因子或下游凝血酶应该是抗凝血更有效的策略。
临床上常用的传统抗凝药物包括华法林、肝素、阿司匹林、氯比格雷等。其中涉及凝血因子Xa的药物为肝素，主要为注射剂型，包括普通肝素、低分子量肝素(LMWH)、Fondaparinux等，在临床上容易引起严重出血和肝素诱导的血小板减少副反应，需要临床检测。与传统的凝血药物相比，新型凝血因子Xa抑制剂具有以下优点：口服，低出血风险，高效性，无需个体调整和监控病人。目前已上市或在研的药物包括利伐沙班、阿哌沙班、依度沙班、贝曲沙班、奥米沙班、艾立沙班(eribaxaban)、LY517717、YM150、letaxaban等。但是目前上市或在研的新型凝血因子Xa抑制剂也有一些缺点，比如利伐沙班和阿哌沙班的溶解度很差。
WO00039131描述了可作为胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶抑制剂，特别是凝血因子Xa抑制剂的含氮杂双环衍生物，其中X、Y、Z可以为氮和碳，G选择芳环或含氮杂芳环，A是一个环状基团，B是一个碱性基团或者环状基团。不认为此专利中具体描述是本发明的一部分，其结构式如下：
Figure PCTCN2014093298-appb-000001
WO00200655描述了杂芳基-苯基杂二环化合物及其衍生物，以及作为凝血因子Xa抑制剂的用途，其中A为5-6元芳基或杂芳基、G2为苯基、萘基或5-10杂芳基、Q为杂二环化合物，与本发明的化合物结构差异较大，其结构式如下：
Figure PCTCN2014093298-appb-000002
WO03026652A1、WO03047520，WO03048081，WO03048158，WO03099276，WO2006047528描述了包括阿哌沙班在内的P4-P-M-M4内酰胺衍生物，其中环P可以不存在或者为5-7元的氮环或杂环，环M是一个3-10元的碳环或杂环，不认为此专利中具体描述是本发明的一部分。
WO2004083174描述了P4-P-M-M4四氢嘧啶和磺酰基脒基衍生物及其作为丝氨酸蛋白酶抑制剂，特别是凝血因子Xa抑制剂的应用，其中环P可以不存在或者为5-7元的氮环或杂环，环M是一个3-10元的碳环或杂环，不认为此专利中具体描述是本发明的一部分。
WO2007137801描述了新的四氢吡咯、四氢吡唑并吡啶、四氢咪唑并吡啶以及四氢三唑并吡啶衍生物的凝血因子Xa抑制剂，与本发明的化合物结构差异较大，相关结构式如下：
Figure PCTCN2014093298-appb-000003
WO2009007028描述了1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6[4-(氧代哌啶-1-基)苯基]-4,6,5,7-四氢-(1H)-吡唑并[3.4,c]吡啶-3-甲酰胺衍生物，及其作为凝血因子Xa抑制剂的用途，其中R1、R2为烷基，L为取代酰胺基或酯基，与本发明的化合物结构差异较大，相关结构式如下：
Figure PCTCN2014093298-appb-000004
本发明是在四氢吡唑并吡啶类化合物的基础上，设计具有通式(I)所示的化合物，以提供一种结构新颖、药效更好、更安全、毒副作用小、生物利用度高和溶解性更好的凝血因子Xa抑制剂类化合物，可用于治疗静脉血栓形成、深部静脉血栓形成、下肢深静脉血栓形成、血栓性静脉炎、脑动脉血栓形成、动脉栓塞、冠状动脉血栓形成、肺栓塞、脑栓塞、肾栓塞，肝静脉栓塞、门静脉栓塞、慢性弥漫性血管内凝血、四肢和中枢性微血管动脉栓塞、动脉粥样硬化、急性冠状综合征、不稳定心绞痛、急性冠状动脉综合征、心肌梗塞、动脉硬化症、局部缺血瘁死、暂时性的缺血、外用阻塞性动脉疾病、中风、伴动脉栓塞的无菌性血栓性心内膜炎、脑血管疾病等血栓形成引起的多种疾病和并发症。
发明内容
本发明涉及一种通式(I)所示的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
Figure PCTCN2014093298-appb-000005
R1选自氰基、氨基、-(CH2)n-C(＝O)R1a、C1-6烷基、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、-(CH2)n-C1-6烷氧基、-(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C3-10碳环或-(CH2)n-C3-10杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述烷基、烷氧基、碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R1a和R1b各自独立的选自氢、氨基、羟基、-(CH2)n-C3-10碳环、-(CH2)n-C3-10杂环、C1-4烷氧基或C1-4烷基，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述烷基、碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、(＝O)、氨基、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R2选自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
环M为环丙基，所述环丙基任选进一步被0至3个R3取代；
R3各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、-(CR3aR3b)nR3c、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、氨基、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R3a、R3b和R3c各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝O)OR3d或-C(＝O)NR3eR3f；
R3d、R3e和R3f各自独立的选自H或C1-4烷基；
R4选自H、F、Cl、Br、I、氰基、三氟甲基、-(CR4aR4b)nOR4c、-(CR4aR4b)nNR4cR4d、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)pR4a、-C(R4aR4b)R4c、C3-10碳环或者3至10元杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述碳环或杂环各自独立任选进一步被0至4个R4e取代；
R4a、R4b、R4c、R4d和R4e各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
作为选择，R4a和R4b可以形成(＝O)；
作为选择，R4a和R4b、R4c和R4d可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环含有0至3个选自N、O或S的杂原子，所述环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
Figure PCTCN2014093298-appb-000006
表示环D存在或不存在；
当环D存在时，环E选自苯基或5至6元杂芳基，所述杂芳基含有1至3个选自N、O或S的杂原子，所述苯基或杂芳基任选进一步被0至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成5至6元环，所述5至6元环含有0至2个选自N、O或S的杂原子，所述5至6元环任选进一步被0至5个R6取代；
当环D不存在时，环E选自苯基或5至6元杂芳基，所述杂芳基含有1至3个选自N、O或S的杂原子，所述苯基或杂芳基任选进一步被0至5个R5取代；
R5各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-(CR5aR5b)nNR5cR5d、-(CH2)nC(＝NR5c)N(R5aR5b)、 -(CR5aR5b)n-C(＝O)NR5cR5d、-(CR5aR5b)nNR5dC(＝O)R5c、-(CR5aR5b)nOR5c、-(CH2)nC(＝O)R5a或-(CH2)nS(＝O)pR5a，或者这些基团各自独立任选被取代，当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R5a、R5b、R5c和R5d各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6碳环；
作为选择，R5a和R5b可以形成(＝O)；
作为选择，R5a和R5b、R5c和R5d可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环含有0至3个选自N、O或S的杂原子，所述环任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
作为选择，两个R6可以形成(＝O)；
作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成一个3至4元环，所述环含有0至1个选自N、O或者S的杂原子；
m选自0、1、2、3或者4；
n选自0、1、2、3或者4；
p选自0、1或者2。
本发明优选方案，一种选自通式(I)所示的化合物，其中：
环M为环丙基，所述环丙基任选进一步被0、1、2或3个R3取代；
R3各自独立地选自H、F、Cl、三氟甲基、羟基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3或-C(＝O)NH2，其中优选各自独立地选自H、F、三氟甲基、-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3或-C(＝O)NH2。
本发明优选方案，一种选自通式(I)所的化合物，其中：环M为环丙基。
本发明优选方案，一种选自通式(I)所示的化合物，其中：
当环D存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基或噻吩基；优选选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基；进一步优选选自取代或未取代的苯基；当被取代时，任选被1、2或3个R5取代；环D包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的如下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000007
Figure PCTCN2014093298-appb-000008
其中优选
Figure PCTCN2014093298-appb-000009
进一步优选
Figure PCTCN2014093298-appb-000010
当被取代时，任选被1、2或3个R6取代；
当环D不存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基或噻吩基；其中优选取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基；进一步优选取代或未取代的苯基；当被取代时，任选被1、2、3、4或5个R5取代。
本发明优选方案，
Figure PCTCN2014093298-appb-000011
选自如下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000012
优选
Figure PCTCN2014093298-appb-000013
Figure PCTCN2014093298-appb-000014
R5各自独立的选自H、F、Cl、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、羟基、氨基、氰基、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或氨基亚甲基，优选H、F、Cl、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、氨基、氰基、三氟甲基、甲基、甲氧基或氨基亚甲基；R6各自独立的选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，优选H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；r和t各自独立的选自0、1、2或3。
本发明优选方案，一种通式(I)所示化合物，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
Figure PCTCN2014093298-appb-000015
环M为环丙基；
r选自0、1、2或3；
t选自0、1、2、3、4或5。
本发明优选方案，一种通式(II)所示化合物，其中
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、氨基甲酰基、羟甲基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000016
，当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
R2选自H、F或Cl，优选H或F；
环M为环丙基；
R4选自氰基、三氟甲基、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)2R4a或-C(R4aR4b)R4c；
R4a、R4b和R4c各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
作为选择，R4a和R4b可以形成(＝O)；
作为选择，R4a和R4b可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环选自取代或为取代的环丙基、环丁基、环戊基、戊四唑基、异恶唑基、咪唑基、吡啶基或苯基，优选环丙基、戊四唑基或吡啶基，进一步优选环丙基，当被取代时，任选被1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
R5各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-(CR5aR5b)nNR5cR5d、-(CH2)nC(＝NR5c)N(R5aR5b)或-(CH2)nS(＝O)pR5a，优选H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝NR5c)N(R5aR5b)、
Figure PCTCN2014093298-appb-000017
-(CH2)nNH-C1-4烷基、-(CH2)nNH2、-(CH2)nS(＝O)p-C1-4烷基或-(CH2)nS(＝O)p-NH2，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、 F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代。
R5a、R5b、R5c和R5d各自独立的选自H、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、羟基、甲基、乙基、异丙基，甲氧基或乙氧基；
R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，优选H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，进一步优选H、甲基或乙基。
本发明优选方案，一种通式(II)所示化合物，其中
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
Figure PCTCN2014093298-appb-000018
或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000019
当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、羟基、或甲基取代基所取代；
R2选自H、F或Cl，优选H或F；
环M为环丙基；
R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基亚甲基、1-羟基乙基、氨基甲酰基、-S(＝O)2-CH3、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基，优选氰基、三氟甲基、氨基甲酰基或-S(＝O)2-CH3。
R5各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氨基、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，优选H、F、Cl、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，进一步优选H、F、Cl、氰基、甲氧基、乙氧基或氨基亚甲基；
R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，优选H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，进一步优选H、甲基或乙基。
本发明优选方案，一种通式(I)所示化合物，其中该化合物选自通式(III)所示的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
Figure PCTCN2014093298-appb-000020
环M为环丙基；
r`选自0、1、2、3、4或5。
本发明优选方案，一种通式(III)所示化合物，其中
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、氨基甲酰基、羟甲基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基、或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000021
，当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
R2选自H、F或Cl，优选H或F；
环M为环丙基；
R4选自氰基、三氟甲基、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)2R4a或-C(R4aR4b)R4c；
R4a、R4b和R4c各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
作为选择，R4a和R4b可以形成(＝O)；
作为选择，R4a和R4b可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环选自取代或为取代的环丙基、环丁基、环戊基、戊四唑基、异恶唑基、咪唑基、吡啶基或苯基，优选环丙基、戊四唑基或吡啶基，进一步优选环丙基，当被取代时，任选被1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
R5各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、C1-4 烷基、C1-4烷氧基、-(CR5aR5b)nNR5cR5d、-(CH2)nC(＝NR5c)N(R5aR5b)或-(CH2)nS(＝O)pR5a，优选H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝NR5c)N(R5aR5b)、
Figure PCTCN2014093298-appb-000022
-(CH2)nNH-C1-4烷基、-(CH2)nNH2、-(CH2)nS(＝O)p-C1-4烷基或-(CH2)nS(＝O)p-NH2，所述的烷基或烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代。
R5a、R5b、R5c和R5d各自独立的选自H、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、羟基、甲基、乙基、异丙基，甲氧基或乙氧基。
本发明优选方案，一种通式(III)所示化合物，其中
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、氨基甲酰基、羟甲基、甲氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
Figure PCTCN2014093298-appb-000023
或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000024
当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、羟基、或甲基取代基所取代；
R2选自H、F或Cl，优选H或F；
环M为环丙基；
R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基亚甲基、1-羟基乙基、氨基甲酰基、-S(＝O)2-CH3、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基，优选氰基、三氟甲基、氨基甲酰基或-S(＝O)2-CH3。
R5各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氨基、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，优选H、F、Cl、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，进一步优选H、F、Cl、氰基、甲氧基、乙氧基或氨基亚甲基。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中R5各自独立地选自取代或未取代的H、F、Cl、Br、I、-C(＝NR5c)N(R5aR5b)、-(CH2)nS(＝O)pR5a、羟基、巯基、氰基、氨基、羟基甲基、三氟甲基、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基；
优选取代或未取代的H、F、Cl、Br、I、-C(＝NR5c)N(R5aR2b)、-(CH2)nS(＝O)pR5a、羟 基、巯基、氰基、氨基、三氟甲基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，
进一步优选H、F、Cl、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、氨基、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基；
当被取代时，任选被1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
R5a、R5b和R5c各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，优选H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、甲基、乙基或异丙基。
本发明优选方案，一种通式(I)和(II)所示化合物，其中R6各自独立选自H、F、Cl、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基，优选H、F、Cl、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成一个3至4元环，所述3至4元环含有0至1个选自N、O或者S的杂原子，优选形成环丙基；
作为选择，两个R6可以形成(＝O)。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：
R1选自氰基、氨基、-(CH2)n-C(＝O)R1a、C1-6烷基、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、-(CH2)n-C1-6烷氧基、-(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C3-7碳环或-(CH2)n-C3-7杂环，优选氰基、氨基、-(CH2)n-C(＝O)R1a、C1-4烷基、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、-(CH2)n-C1-4烷氧基、-(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C3碳环、-(CH2)n-C4碳环、-(CH2)n-C5碳环、-(CH2)n-C6碳环、-(CH2)n-C3杂环、-(CH2)n-C4杂环、-(CH2)n-C5杂环或-(CH2)n-C6杂环，进一步优选氰基、氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、-(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C5碳环、-(CH2)n-C6碳环、-(CH2)n-C5杂环或-(CH2)n-C6杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述烷基、烷氧基、碳环、杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
R1a和R1b各自独立的选自氢、氨基、羟基、C1-4烷基、-(CH2)n-C3碳环、-(CH2)n-C4碳环、-(CH2)n-C5碳环、-(CH2)n-C6碳环、-(CH2)n-C3杂环、-(CH2)n-C4杂环、-(CH2)n-C5杂环或-(CH2)n-C6杂环，优选氢、羟基、C1-4烷基、-(CH2)n-C3碳环或-(CH2)n-C4碳环，进一步优选氢、羟基、甲基、乙基、异丙基、环丙基亚甲基或环丁基，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述烷基、碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、(＝O)、氨基、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
n选自0、1、2或3。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、羟甲基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基、-(CH2)n-C(＝O)R1a、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、-(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C3-6碳环或-(CH2)n-C3-6杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
R1a和R1b各自独立的选自氢、氨基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丙基亚甲基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基或环丙基亚甲基；
n选自0、1、2或3。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000025
，当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
Figure PCTCN2014093298-appb-000026
或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000027
当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、羟基、或甲基取代基所取代。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：R2选自H、F或Cl，优选H或F。
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：R4选自氰基、三氟甲基、-(CR4aR4b)nOR4c、-(CR4aR4b)nNR4cR4d、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)2R4a或-C(R4aR4b)R4c，优选氰基、三氟甲基、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)2R4a或-C(R4aR4b)R4c，
R4a、R4b和R4c各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、氰基、氨基、三氟甲基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0、1、2、3或4个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；R4a、R4b和R4c优选H、F、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基；R4a、R4b和R4c进一步优选H、F、羟基、氨基、甲基、乙基、丙基或异丙基；
作为选择，R4a和R4b可以形成(＝O)；
作为选择，R4a和R4b可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环选自取代或为取代的环丙基、环丁基、环戊基、戊四唑基、异恶唑基、咪唑基、吡啶基或苯基，优选环丙基、戊四唑基或吡啶基；进一步优选环丙基。当被取代时，任选被1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基的取代基所取代；
本发明优选方案，一种通式(I)、(II)和(III)所示化合物，其中：R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基亚甲基、1-羟基乙基、氨基甲酰基、-S(＝O)2-CH3、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基，优选氰基、三氟甲基、氨基甲酰基或-S(＝O)2-CH3。
本发明优选方案，一种通式(I)所示化合物，其中：
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基、或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000028
，当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
R2选自H、F或Cl；
环M为环丙基；
R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氨基甲酰基、-S(＝O)2CH3、1-羟基 乙基、羟基甲基、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基；
当环D存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的如下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000029
当被取代时，任选被1至3个R6取代；
当环D不存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至5个R5取代。
R5各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氨基、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基；
R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
本发明优选方案，一种通式(I)所示化合物，其中：
R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
Figure PCTCN2014093298-appb-000030
或取代或未取代的以下结构之一：
Figure PCTCN2014093298-appb-000031
当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、羟基、或甲基取代基所取代；
R2选自H或F；
环M为环丙基；
R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氨基甲酰基、-S(＝O)2CH3、1-羟基乙基、羟基甲基、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基，优选氰基、三氟甲基、氨基甲酰基或-S(＝O)2CH3；
当环D不存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0、1、2、3、4或5个R5取代；
当环D存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0、1、2或3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的
Figure PCTCN2014093298-appb-000032
当被取代时，任选被1、2或3个R6取代；
R5各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氨基、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，优选H、F、Cl、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，进一步优选H、F、Cl、氰基、甲氧基、乙氧基或氨基亚甲基；
R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，优选H、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基，进一步优选H、甲基或乙基；
作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
本发明优选方案，一种通式(I)所示化合物，其中：
R1选自氰基、羟甲基、醛基、氨基甲酰基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
Figure PCTCN2014093298-appb-000033
Figure PCTCN2014093298-appb-000034
R2选自H或F；
环M为环丙基；
R4选自氰基、三氟甲基、氨基甲酰基或-S(＝O)2CH3；
当环D不存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0至5个R5取代；
当环D存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的
Figure PCTCN2014093298-appb-000035
当被取代时，任选被1至3个R6取代；
R5各自独立地选自H、F、Cl、氰基、甲氧基或氨基亚甲基；
R6各自独立地选自H、F、Cl或甲基；
作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
本发明优选方案，一种通式(I)所示化合物，其中化合物选自：
Figure PCTCN2014093298-appb-000036
Figure PCTCN2014093298-appb-000037
本发明涉及的本发明化合物或其药学上可以接受的盐，其中所述的盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、三氟乙酸、三氟甲磺酸盐或它们的组合，优选马来酸盐、富马酸盐、三氟乙酸或三氟甲磺酸盐。
本发明涉及的一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效剂量的至少一种本发明化合物，或其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐或前药，以及药学上可接受的载体或者赋形剂。
进一步，本发明涉及的本发明化合物，或其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐或前药，在制备治疗与丝氨酸蛋白酶有关的疾病中的药物中的用途。
本发明的优选方案，其中与丝氨酸蛋白酶有关的疾病选自血栓栓塞疾病。
本发明的优选方案，其中所述丝氨酸蛋白酶选自凝血因子Xa。
本发明的优选方案，其中血栓栓塞疾病选自动脉心血管血栓栓塞疾病、静脉心血管血栓栓塞疾病以及心脏相关血栓栓塞疾病。
本发明的优选方案，其中血栓栓塞疾病选自静脉血栓形成，深部静脉血栓形成，下肢深静脉血栓形成、血栓性静脉炎、脑动脉血栓形成，动脉栓塞，冠状动脉血栓形成，肺栓塞、脑栓塞、肾栓塞，肝静脉栓塞、门静脉栓塞、慢性弥漫性血管内凝血、四肢和中枢性微血管动脉栓塞、动脉粥样硬化、急性冠状综合征、不稳定心绞痛，急性冠状动脉综合征、心肌梗塞、动脉硬化症、局部缺血瘁死、暂时性的缺血、外用阻塞性动脉疾病、中风、伴动脉栓塞的无菌性血栓性心内膜炎、脑血管疾病。
本发明还涉及治疗血栓栓塞疾病的方法。该方法包括给予患者治疗上有效剂量的包含本发明所述的化合物或其药学上可以接受的盐的药物试剂。本发明的所述的化合物可以联合其他的治疗剂联合给药。
本发明涉及含有本发明所述的化合物或其药学上可以接受的盐的药物试剂，所述药物试剂可以是联合产品，包括对一个需要这样治疗的宿主施用治疗上有效量的第一和第二种治疗剂。其中第一种治疗剂为本发明的化合物或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，第二种治疗剂选自第 二种凝血因子Xa因子抑制剂，一种抗凝剂、一种抗血小板剂、一种凝血酶抑制剂、一种溶血栓剂以及一种纤维蛋白溶剂剂中的至少一种试剂。
本发明的优选方案，其中所述第二种治疗剂是选自华法林、未分级肝素、低分子量肝索、合成的五糖、水蛭素、阿加曲班、阿司匹林、布洛芬、甲氧奈丙酸、舒林酸、吲哚美辛、甲芬那酸、屈噁昔康、双氯芬酸、苯磺唑酮、吡罗昔康、噻氯匹定、氯吡格雷、替罗非班、埃替菲巴肽、阿昔单抗美加拉群、二硫酸水蛭素(又名：disulfatohirudin)、组织纤溶酶原激活剂、修饰的组织型纤溶酶原激活剂、复合纤溶酶链激酶、尿激酶和链激酶中的至少一种试剂。
本发明的优选方案，其中所述第二种治疗剂是至少一种抗血小板剂。
本发明的优选方案，其中所述抗血小板剂是阿司匹林和/或氯吡格雷。
本发明的优选方案，其中所述抗血小板剂是氯吡格雷。
除非有相反的陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
本发明涉及到被多个取代基取代时，各取代基可以相同或不相同。
本发明涉及到含有多个杂原子时，各杂原子可以相同或不相同。
本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫、氮或卤素均包括它们的同位素情况，及本发明所述基团和化合物中所涉及的元素碳、氢、氧、硫或氮任选进一步被一个或多个它们对应的同位素所替代，其中碳的同位素包括12C、13C和14C，氢的同位素包括氕(H)、氘(D，又叫重氢)、氚(T，又叫超重氢)，氧的同位素包括16O、17O和18O，硫的同位素包括32S、33S、34S和36S，氮的同位素包括14N和15N，氟的同位素19F，氯的同位素包括35Cl和37Cl，溴的同位素包括79Br和81Br。
术语“烷基”是指饱和的脂肪族烃基团，包括1至20个碳原子的直链和支链基团。优选含有1至10个碳原子的烷基，非限制性实施例包括，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、正壬基，及其各种支链异构体等；更优选的是含有1至4个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基等。烷基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷巯基。
“烷氧基”是指-O-烷基，其中烷基如本文上面所定义。烷氧基可以是取代的或未取代的，其非限制性实施例包括，甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、叔丁氧基、 戊氧基或己氧基，优选具有1至12元烷氧基。当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“烷氧基烷基”指与烷氧基相连的烷基。烷氧基烷基可以是取代的或未取代的，其非限制性实施例包括，甲氧基甲基、甲氧基乙基、乙氧基甲基、乙氧基乙基、丙氧基甲基、丙氧基乙基、异丙氧基甲基、丁氧基丙基、叔丁氧基乙基、戊氧基乙基、己氧基乙基、环丙基氧基甲基、环丙基氧基乙基、环丙基氧基丙基或环己氧基甲基；当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“烯基”是指本发明定义的烷基中，包含至少一个碳-碳双键，所述烯基含有2至20个碳原子，优选2至12个碳原子，进一步优选2至8个碳原子。烯基的非限定实施例包括取代或未取代的乙烯基、2-丙烯基、3-丁烯基、2-丁烯基、4-戊烯基、3-戊烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-庚烯基、3-庚烯基、4-庚烯基、3-辛烯基、3-壬烯基或4-癸烯基等，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“炔基”是指本发明定义的烷基中，包含至少一个碳-碳三键，所述炔基含有2至20个碳原子，优选2至12个碳原子，进一步优选2至8个碳原子。炔基的非限定实施例包括取代或未取代的乙炔基、1-丙炔基、2-丙炔基、1-丁炔基、2-丁炔基、3-丁炔基、4-戊炔基、3-戊炔基、2-己炔基、3-己炔基、3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基、4-庚炔基、3-辛炔基、3-壬炔基或4-癸炔基等，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“碳环”是指饱和或者不饱和的芳香环或者非芳香环，芳香环或者非芳香可以是3至8元的单环，4至12元双环或者10至15元三环系统，碳环可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环己烯基、环庚基、环戊烯、环 己二烯、环庚三烯、苯基、萘基、苯并环戊基、二环[3.2.1]辛烷基、二环[5.2.0]壬烷基、三环[5.3.1.1]十二烷基、金刚烷基或螺[3.3]庚烷基等。碳环可以被取代，当被取代时，取代基优选为1至5个，独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷巯基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“杂环”是指取代的或未取代的饱和或者不饱和的芳香环或非芳香环，芳香环和非芳香环可以是3至8元的单环，4至12元双环或者10至15元三环系统，且由至少一个选自N、O或S的杂原子组成，优选3至10元杂环，杂环的环中选择性取代的N、S可被氧化成各种氧化态。杂环可以连接在杂原子或者碳原子上。杂环可以连接有桥环或者螺环，非限制性实施例包括，环氧乙烷、氮杂环丙基、氧杂环丁基、氮杂环丁基、1,3-二氧戊环、1,4-二氧戊环、1,3-二氧六环、氮杂环庚基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡喃基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、哌啶基、哌叮基、吗啉基、硫代吗啉基、1,3-二噻烷、二氢呋喃、二氢吡喃、二噻戊环、四氢呋喃、四氢吡咯基、四氢咪唑、四氢噻唑、四氢吡喃、苯并咪唑、苯并吡啶、吡咯并吡啶、苯并二氢呋喃、氮杂二环[3.2.1]辛烷基、氮杂二环[5.2.0]壬烷基、氧杂三环[5.3.1.1]十二烷基、氮杂金刚烷基、氧杂螺[3.3]庚烷基等；当被取代时，取代基优选为1至5个，取代基独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、杂环烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“氨基”是指-NH2，可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为1至3个，独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、羟基、氨基、烷基氨基、烷基酰基氨基、杂环烷基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、羟基烷基、羧酸或羧酸酯。
“芳基”是指取代的或未取代的6至14元全碳单环或稠和多环基团，具有共轭的π电子体系的多环基团，优选6至10元芳香环，其非限定性实例包括苯基或萘基；所述芳基可以稠和与杂芳基、杂环基或环烷基，且与母体结构连接的部分为芳基，其非限定性实例包括苯并呋喃、苯并环戊烷基或苯并噻唑等。当被取代时，取代基优选为1至5个，取代基独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
“杂芳基”是指取代或未取代的5至15元芳香环，且含有1至3个选自N、O或S杂原子，优选5至10元芳香环，杂芳基的非限制性实施例包括吡啶基、呋喃基、噻吩基、N-烷基吡咯基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、苯并呋喃、苯并咪唑、苯并吡啶或吡咯并吡啶等。当被取代时，取代基优选为1至5个，取代基独立地选自F、Cl、Br、I、＝O、烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、巯基、羟基、硝基、氰基、氨基、烷基酰基氨基、环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷基巯基、羟基烷基、羧酸、羧酸酯或杂环烷基巯基。
本发明的“＝O”为本领域通常习惯用法，是指以双键相连的氧原子，譬如羰基中与碳原子相连的双键氧原子。
“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的无毒酸或碱的盐，包括无机酸和碱、有机酸和碱的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于Al、Ca、Li、My、K、Na和Zn形成的金属盐；衍生自有机碱的盐包括但不限于伯胺、仲胺或叔胺的盐，包括天然存在的取代或未取代的胺、环胺和碱性离子交换树脂，例如氨、异丙基胺、三甲基胺、二乙胺、三乙胺、三丙基胺、二乙醇胺、乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、咖啡碱、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、苯明青霉素、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶基、N-乙基哌啶基或聚胺树脂形成的有机盐；衍生自无机酸和有机酸的盐包括但不限于硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸、盐酸、甲酸、乙酸、丙酸、苯磺酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸、褐藻酸、氨茴酸、樟脑酸、柠檬酸、乙烯磺酸、蚁酸、富马酸、糠酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、粘液酸、双羟萘酸、泛酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、对甲苯磺酸、丙二酸、2-羟基丙酸、草酸、羟乙酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、枸橼酸、赖氨酸、精氨酸、门冬氨酸、肉桂酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或三氟甲磺酸等形成的有机盐。
“共晶”是指活性药物成分(active pharmaceutical ingredient，API)和共晶形成物(cocrystal former，CCF)在氢键或其他非共价键的作用下结合而成的晶体，其中API和CCF的纯态在室温下均为固体，并且各组分间存在固定的化学计量比。共晶是一种多组分晶体，既包含两种中性固体之间形成的二元共晶，也包含中性固体与盐或溶剂化物形成的多元共晶。所述“共晶形成物”包括但不限于各种药学上可接受的酸、碱、非离子化合物，其非限定性实例包括丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、脯氨酸(Pro)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)、蛋氨酸(Met)、甘氨酸(Gly)、丝氨 酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、酪氨酸(Tyr)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)、赖氨酸(Lys)、精氨酸(Arg)、组氨酸(His)、天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、焦谷氨酸、硫酸、磷酸、硝酸、氢溴酸、盐酸、甲酸、乙酸、丙酸、苯磺酸、苯甲酸、苯乙酸、水杨酸、褐藻酸、氨茴酸、樟脑酸、柠檬酸、乙烯磺酸、蚁酸、富马酸、糠酸、葡萄糖酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、乙醇酸、羟乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、粘液酸、双羟萘酸、泛酸、硬脂酸、琥珀酸、磺胺酸、酒石酸、对甲苯磺酸、丙二酸、2-羟基丙酸、草酸、羟乙酸、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、枸橼酸、赖氨酸、精氨酸、门冬氨酸、肉桂酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、乙磺酸或三氟甲磺酸、氨、异丙基胺、三甲基胺、二乙胺、三乙胺、三丙基胺、二乙醇胺、乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲基氨基乙醇、2-二乙基氨基乙醇、二环己基胺、咖啡碱、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、苯明青霉素、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、三乙醇胺、氨丁三醇、嘌呤、哌嗪、哌啶基、N-乙基哌啶基。
“立体异构体”是指由分子中原子在空间上排列方式不同所产生的异构体，包括顺反异构体、对映异构体和构象异构体。
“药物组合物”表示一种或多种文本所述化合物或其生理学/药学上可接受的盐或前体药物与其它化学组分的混合物，其它组分例如生理学/药学上可接受的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
“前药”是指可以在生理条件下或者通过溶剂解转化为具有生物活性的本发明化合物。本发明的前药通过修饰在该化合物中的功能基团来制备，该修饰可以按常规的操作或者在体内被除去，而得到母体化合物。前药包括本发明化合物中的一个羟基、氨基或者巯基连接到任何基团上所形成的化合物，当本发明化合物的前药被施予哺乳动物个体时，前药被割裂而分别形成游离的羟基、游离的氨基或者游离的疏基。前药的例子包括但不限于，本发明化合物中的羟基或氨基功能基团与甲酸、乙酸或苯甲酸所形成的化合物。
"任选"、"任选的"或"任选地"意味着随后所描述地事件或环境可以但不必发生，包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“芳基任选被烷基取代”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括芳基被烷基取代的情形和芳基不被烷基取代的情形。
“取代或未取代的”是指基团可以被取代或不被取代的情形，若在本发明中没有指出基团可以被取代，则表示该基团为未取代的情形。
“作为选择”是指“作为选择”之后的方案与“作为选择”之前的方案为并列关系，而不是 在前方案中的进一步选择情形。
“取代”是指基团中一个或多个氢原子被其它基团取代的情形，如果所述的基团被氢原子取代，形成的基团与被氢原子取代的基团相同。基团被取代的情形，例如氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、C3-6碳环、3至6元杂环任选进一步被0、1、2、3或4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代，形成的基团包括但不限于甲基、氯甲基、三氯甲基、羟基甲基、-CH2OCH3、-CH2SH、-CH2CH2CN、-CH2NH2、-NHOH、-NHCH3、-OCH2Cl、-OCH2OCH2CH3、-OCH2CH2NH2、-OCH2CH2SH、-OCH2CH2OH、1-羟基环丙基、2-羟基环丙基、2-氨基环丙基、4-甲基呋喃基、2-羟基苯基、4-氨基苯基、苯基。
具体实施方式
以下结合附图及实施例详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围包括但是不限于此。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或(和)质谱(MS)来确定的。NMR位移(δ)以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用(Bruker Avance III 400和Bruker Avance 300)核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用(Agilent 6120B(ESI)和Agilent 6120B(APCI))。
HPLC的测定使用安捷伦1260DAD高压液相色谱仪(Zorbax SB-C18 100×4.6mm)。
薄层层析硅胶板使用烟台黄海HSGF254或青岛GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.20mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
柱层析一般使用烟台黄海硅胶200～300目硅胶为载体。
本发明的己知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买于泰坦科技、安耐吉化学、上海德默、成都科龙化工、韶远化学科技、百灵威科技等公司。
氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氮气气球。
氢气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氢气气球。
氢化反应通常抽真空，充入氢气，反复操作3次。
实施例中无特殊说明，反应在氮气氛下进行。
实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
实施例中无特殊说明，反应的温度为室温。
室温为最适宜的反应温度，为20℃～30℃。
Et，乙基；
Me，甲基；
Bn，苄基；
Bz，苯甲酰基；
中间体1
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体1)
ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5,6-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000038
第一步：(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲醇(1b)
(1-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)cyclopropyl)methanol
Figure PCTCN2014093298-appb-000039
冰浴下，向1,1-环丙烷二甲醇(10.0g,97.90mmol)的二氯甲烷溶液(200mL)中，加入咪唑(10.0g,146.90mmol)，滴加叔丁基二甲基氯硅烷(14.7g,97.90mmol)的二氯甲烷溶液(80mL)，滴加完毕后，升温至室温反应7小时。冰浴下，向反应液中加入水(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯(70mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝40:1～10:1)得到标题化合物(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲醇(1b)，无色油状物(8.5g,产率40％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ3.61(s,2H),3.56(s,2H),2.68(s,1H),0.90(s,9H),0.53-0.49(m,2H),0.46-0.44(m,2H),0.06(s,6H)。
第二步：(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲醛(1c)
1-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)cyclopropanecarbaldehyde
Figure PCTCN2014093298-appb-000040
冰浴下，向(1-(((叔丁基二甲基＝硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲醇(1b)(8.5g,39.30mmol)的二氯甲烷溶液(250mL)中，加入戴斯马丁氧化剂(20.1g,47.40mmol)，加完后室温搅拌反应5小时。冰浴下，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液(70mL)，过滤，滤液分液后，有机相用水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝40:1)得到标题化合物(1-(((叔丁基二甲基甲烷基)氧基)甲基)环丙基)甲醛(1c)，浅黄色油状物(8.3g,产率99％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.95(s,1H),3.86(s,2H),1.07-1.00(m,4H),0.82(s,9H),0.02(s,6H)。
MS m/z(ESI)：215.1[M+1]。
第三步：(E)-3-(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)丙烯酸乙酯(1d)
(E)-ethyl 3-(1-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)cyclopropyl)acrylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000041
冰浴下，向氢化钠(320mg,13.40mmol)的四氢呋喃溶液(20mL)中，滴加磷酰基乙酸三乙酯(2.76g,12.40mmol)，滴加完毕后，升温到室温反应20分钟，滴加(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)甲醛(1c)(2.2g,10.3mmol)的四氢呋喃(10mL)溶液，滴加完毕后，室温反应2小时。向反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝30:1)得到标题化合物(E)-3-(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)丙烯酸乙酯(1d)，无色油状物(1.5g,产率52％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.68(d,1H),5.84(d,1H),4.21(q,2H),3.68(s,2H),1.30(t,3H),0.97-0.94(m,2H),0.88(s,9H),0.79-0.77(m,2H),0.04(s,6H)。
第四步：(E)-3-(1-(羟甲基)环丙基)丙烯酸酯(1e)
(E)-ethyl 3-(1-(hydroxymethyl)cyclopropyl)acrylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000042
冰浴下，向(E)-3-(1-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)环丙基)丙烯酸乙酯(1d)(27.0g,94.90mmol)的四氢呋喃(300mL)溶液中，滴加盐酸(330mL，949mmol)，滴加完毕后，反应1小时。反应液用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝8:1)得到标题化合物(E)-3-(1-(羟甲基)环丙基)丙烯酸酯(1e)，无色液体(10.0g,产率63％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ6.64(d,1H),5.98(d,1H),4.20(q,2H),3.65(s,2H),1.82(s,1H),1.29(t,3H),0.97-0.86(m,4H)。
MS m/z(ESI)：171.1[M+1]。
第五步：(E)-3-(1-(甲磺酰氧基甲基)环丙基)丙-2-烯酸乙酯(1f)
ethyl(E)-3-[1-(methylsulfonyloxymethyl)cyclopropyl]prop-2-enoate
Figure PCTCN2014093298-appb-000043
向反应瓶中加入(E)-3-(1-(羟甲基)环丙基)丙烯酸酯(1e)(17g,100mmol),加入二氯甲烷(100mL)，三乙胺(21mL，279mmol)，0℃下加入4-二甲氨基吡啶(1.244g,10mmol),滴加甲磺酰氯(9.3mL,120mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液，滴加完毕，室温反应2小时，0℃加入饱和碳酸氢钠(50mL)溶液淬灭反应，萃取分液，水相继续用二氯甲烷(100mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸镁干燥，浓缩得到标题化合物粗品(E)-3-(1-(甲磺酰氧基甲基)环丙基)丙-2-烯酸乙酯(1f)，直接用于投下一步反应。
第六步：(E)-3-(1-(叠氮基甲基)环丙基)丙-2-烯酸乙酯(1g)
ethyl(E)-3-[1-(azidomethyl)cyclopropyl]prop-2-enoate
Figure PCTCN2014093298-appb-000044
向反应瓶中加入上一步反应所得到的粗品(E)-3-(1-(甲磺酰氧基甲基)环丙基)丙-2-烯酸乙酯(1f)(24.80g,100mmol),加入二甲基甲酰胺(100mL)，叠氮化钠(13.10g，200mmol)，室温反应过夜。0℃加入水(50mL)淬灭反应，乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠溶液(50mL×2)洗涤，合并有机相，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝10:1)得到标题化合物 (E)-3-(1-(叠氮基甲基)环丙基)丙-2-烯酸乙酯(1g)，黄色油状物(18.0g,产率92.3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝6.58-6.54(d,1H),5.92-5.88(d,1H),4.21-4.16(m,2H),3.36(s,2H),1.30-1.27(m,3H),1.00-0.94(m,4H)。
第七步：7-氮杂螺[2.5]辛-6-酮(1h)
7-azaspiro[2.5]octan-6-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000045
向反应瓶中加入(E)-3-(1-(叠氮基甲基)环丙基)丙-2-烯酸乙酯(1g)(23.25g,186mmol),加入乙酸乙酯(420mL)，碳酸氢钠(31.25g，372mmol)，钯碳(2.3g，10％w/w),室温反应过夜。反应液过滤，浓缩,残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯)得到标题化合物7-氮杂螺[2.5]辛-6-酮(1h)，白色固体(9.8g,产率42％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝6.10(br,1H),3.10(s,2H),2.48-2.45(m,2H),1.66-1.62(m,2H),0.52(s,4H)。
第八步：5,5-二氯-7-氮杂螺[2.5]辛-6-酮(1i)
5,5-dichloro-7-azaspiro[2.5]octan-6-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000046
0℃下，向7-氮杂螺[2.5]辛-6-酮(1h)(7.0g,56.0mmol)的氯仿溶液(260mL)中，加入五氯化磷(93.72g,450mmol)，升温至回流反应3小时。将反应液冷却至0℃，加入冰水淬灭反应至无气泡产生，分液，水相用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸镁干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物5,5-二氯-7-氮杂螺[2.5]辛-6-酮(1i)，白色固体(6.9g，产率64％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝8.00(br,1H),3.20(s,2H),2.67(s,2H),0.78-0.75(m,2H),0.61-0.58(m,2H)。
第九步：7-吗啉-5-氮杂螺[2.5]辛-7-烯-6-酮(1j)
7-morpholino-5-azaspiro[2.5]oct-7-en-6-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000047
向反应瓶中加入5,5-二氯-7-氮杂螺[2.5]辛-6-酮(1i)(11.6g,60.1mmol)和吗啉(100 mL)，升温至140℃反应2.5小时。将反应液减压浓缩，残余物加入水(50mL)，乙酸乙酯(200mL×6)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚/乙酸乙酯(v/v)＝1:1)得到标题化合物7-吗啉-5-氮杂螺[2.5]辛-7-烯-6-酮(1j)，淡黄色固体(7.33g，产率58.6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ＝6.52(br,1H),3.82-3.80(m,5H),3.17(s,2H),2.86-2.83(m,4H),0.80-0.69(m,4H)。
第十步：2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)腙基)乙酸乙酯(1l)
ethyl 2-chloro-2-[(4-methoxyphenyl)hydrazono]acetate
Figure PCTCN2014093298-appb-000048
将4-甲氧基苯胺(1k)(24.6g,0.2mol)溶于盐酸(50mL,0.2mol,12N)的水(100mL)溶液中，冷却至0℃，缓慢滴加亚硝酸钠(16.6g,0.24mol)的水(80mL)溶液，滴加完毕后，0℃反应30分钟，再加入乙酸钠(328g，0.40mol)调节反应液PH＝5～6，保持0℃，滴加2-氯乙酰乙酸乙酯(32.9g，0.2mol)的甲醇(80mL)溶液，滴加完毕后，保持0℃反应1小时。向反应液中加入乙酸乙酯(200mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(200mL×1)，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1：50～1：10)得到标题化合物2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)腙基)乙酸乙酯(1l)，黄色固体(19.5g，产率19％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.30(s,1H),7.17(d,2H),6.89(d,2H),4.38(q,2H),3.80(s,3H),1.40(t,3H)。
MS m/z(ESI)：256.9[M+1]。
第十一步：1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体1)
ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5,6-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000049
将7-吗啉-5-氮杂螺[2.5]辛-7-烯-6-酮(1j)(4.96g,23.8mmol)溶于乙酸乙酯(150mL)中，加入2-氯-2-(2-(4-甲氧基苯基)腙基)乙酸乙酯(1l)(6.717g,26.2mmol)、三乙胺(10mL,71.4mmol)和碘化钾(0.395g,2.38mmol)，升温至回流反应过夜，将反应液冷却至室温，0℃下加入盐酸(60mL,4N)，常温反应1小时。反应液乙酸乙酯(200mL×7)萃取，合并有机相，有机相用无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝40:1～3:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体1),黄色固体(5.8g，产率71％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.46-7.44(d,2H),6.95-6.93(d,2H),5.61(br,1H),4.42-4.36(m,2H),3.84(s,3H),3.37-3.36(m,2H),1.82-1.79(m,2H),1.39-1.38(m,3H),0.90-0.88(m,2H)。
中间体2
1-(2,3-二氢苯并呋喃-2-基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体2)
ethyl 1-(4-(2,3-dihydrobenzofuran-2-yl))-7-oxo-spiro[5,6-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000050
第一步：2-氯-2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)腙基)乙酸乙酯(2b)
ethyl 2-chloro-2-(2-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)hydrazono)acetate
Figure PCTCN2014093298-appb-000051
将2,3-二氢苯并呋喃-5-胺(2a)(2.0g,14.80mmol)加入到盐酸(14.6mL,3N)中，冷却 至-5℃,滴加亚硝酸钠(1.2g,17.80mmol)水(8mL)溶液，滴加完毕后，在0℃反应30分钟，缓慢加入乙酸钠(2.1g,25.6mmol)，调节反应液至pH＝5～6，在0～5℃下，滴加2-氯乙酰乙酸乙酯(2.4g,14.80mmol)的甲醇(5mL)溶液，升至室温反应2小时，向反应液中加入乙酸乙酯(20mL)，分液，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，分液，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，残留物用硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1:99～1:9)得到化合物2-氯-2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)腙基)乙酸乙酯(2B)，黄色固体(200mg，产率5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.27(s,1H),7.18(s,1H),6.91(d,1H),6.73(d,1H),4.65-4.54(m,2H),4.38(q,2H),3.22(t,2H),1.40(t,3H)。
第二步：1-(2,3-二氢苯并呋喃-2-基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体2)
ethyl 1-(4-(2,3-dihydrobenzofuran-2-yl))-7-oxo-spiro[5,6-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000052
称取7-吗啉-5-氮杂螺[2.5]辛-7-烯-6-酮(1j)(4.11g,19.8mmol)置于250mL圆底烧瓶中,向反应瓶中加入乙酸乙酯(100mL)，室温下，向反应瓶中依次加入2-氯-2-(2-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)腙基)乙酸乙酯(2b)(6.38g,23.8mmol)、三乙胺(8.3mL,59.4mmol)和碘化钾(0.33g,1.98mmol)，升温至回流反应过夜，冷却至0℃，加入盐酸(60mL,4N)，室温反应1小时后终止反应。将反应液分液，水相用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤(150mL)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝5:1～0:1)得到标题化合物1-(2,3-二氢苯并呋喃-2-基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体2)，黄色固体(1.9g，产率27％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.53-7.51(m,1H),7.26-7.20(m,1H),6.81-6.79(d,1H),5.68-5.54(br,1H),4.65-4.61(m,2H),4.41-4.36(m,2H),3.37-3.35(m,2H),3.27-3.23(m,2H),1.82-1.79(m,2H),1.40-1.37(m,3H),0.90-0.88(m,2H)。
中间体3
1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙 酯(中间体3)
ethyl 1-(2-fluoro-4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5,6-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000053
第一步：2-氟-4-甲氧基苯胺(3b)
2-fluoro-4-methoxy-aniline
Figure PCTCN2014093298-appb-000054
将2-氟-4-甲氧基硝基苯(3a)(0.5g,2.9mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)中，加入钯碳(50mg)，室温搅拌反应1小时。将反应液过滤，滤液浓缩得到标题化合物2-氟-4-甲氧基苯胺(3b)，褐色固体(0.3g,产率73％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ6.75(m,1H),6.65(dd,1H),6.56(m,1H),3.74(s,3H),3.41(br,2H)。
MS m/z(ESI)：142.1[M+1]。
第二步：2-氯-2-[2-(2-氟-4-甲氧基苯基)腙基]乙酸乙酯(3c)
ethyl 2-chloro-2-[2-(2-fluoro-4-methoxy-phenyl)hydrazono]acetate
Figure PCTCN2014093298-appb-000055
将2-氟-4-甲氧基苯胺(3b)(2.0g,14.20mmol)溶于盐酸(3.4mL,12N)的水(5.8mL)溶液中，冷却至-5℃～0℃，滴加亚硝酸钠(1.2g,17.00mmol)水(3mL)溶液，滴 加完毕后，在0℃反应30分钟，得到重氮盐水溶液，在0℃下，将重氮盐水溶液缓慢滴加到2-氯乙酰乙酸乙酯(1.9mL,14.2mmol)的乙酸乙酯(10mL)溶液和乙酸钠(2.6g,32.6mmol)水(5.8mL)溶液的混合液中，滴加完毕后，升至室温反应1小时。将反应液分液，有机相用饱和食盐水(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，加入十倍石油醚稀释，直接用硅胶柱色谱法纯化(乙酸乙酯/石油醚(v/v)＝1～10)得到标题化合物2-氯-2-[2-(2-氟-4-甲氧基苯基)腙基]乙酸乙酯(3c)，黄色固体(140mg，产率3.5％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.33(s,1H),7.51(t,1H),6.74-6.67(m,2H),4.41(q,2H),3.78(s,3H),1.40(t,3H)。
第三步：1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体3)
ethyl 1-(2-fluoro-4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5,6-dihydropyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000056
称取7-吗啉-5-氮杂螺[2.5]辛-7-烯-6-酮(1j)(3.22g,15.5mmol)置于250mL圆底烧瓶中,向反应瓶中加入乙酸乙酯(100mL)。室温下，向反应瓶中依次加入2-氯-2-[2-(2-氟-4-甲氧基苯基)腙基]乙酸乙酯(3c)(5.19g,18.6mmol)，三乙胺(6.5mL,46.5mmol)和碘化钾(0.51g,1.98mmol),升温至回流反应过夜，冷却至0℃,向反应瓶中加入盐酸(60mL,4N)，室温反应1小时后终止反应。将反应液分液，水相用乙酸乙酯(150mL×3)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(150mL)洗涤,无水硫酸钠干燥,浓缩,残留物用硅胶柱色谱分离提纯(石油醚:乙酸乙酯(v/v)＝5:1～0:1)得到标题化合物1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体3)，黄色固体(1.26g，产率17％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3):δ＝7.42-7.38(m,1H),6.76-6.99(m,2H),5.78-5.64(br,1H),4.43-4.34(m,2H),3.83(s,3H),3.37-3.35(m,2H),1.81-1.78(m,2H),1.41-1.37(m,3H),0.90-0.88(m,2H)。
实施例1
6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物1)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethy)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000057
第一步：1-(4-碘苯基)环丙烷甲酸(1B)
1-(4-iodophenyl)cyclopropanecarboxylic acid
Figure PCTCN2014093298-appb-000058
将1-苯基环丙烷甲酸(16.5g,101mmol)溶于乙酸(70mL)，在氮气氛围下，加入碘(27.94g,101mmol)、碘酸钠(4.98g,25.25mmol)和浓硫酸(1mL)，升至70℃反应42小时。将反应液冷却，加入水(150mL)和乙酸乙酯(150mL)，分液，水相用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相，有机相依次用硫代硫酸钠溶液(100mL×3)、水(100mL×2)、饱和食盐水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用乙酸乙酯/石油醚重结晶得到标题化合物1-(4-碘苯基)环丙烷甲酸(1B)，白色固体(19.0g,产率62％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.78(s,1H),7.65-7.60(m,2H),7.11-7.05(m,2H),1.66(dd,2H),1.22(dd,2H)。
LCMS m/z＝286.7[M-1]。
第二步：6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1C)
Ethyl 6-[4-(1-carboxyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000059
将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体1)(1.3g,3.8mmol)溶于二甲基亚砜(40mL)中，加入1-(4-碘苯基)环丙烷甲酸(1B)(2.2g,7.6mmol)、碳酸钾(1.6g,11.4mmol)和1,10-菲罗啉(144mg,0.8mmol)，在氮气氛围下，加入碘化亚铜(153mg,0.8mmol)，升至130℃反应20小时。冷却反应液至0℃，加入盐酸(3N)调节溶液pH至3-4，加入二氯甲烷(100mL)和水(100mL)，分液，有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝2:3～3:2)得到标题化合物6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1C)，黄色固体(1.14g，产率60％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.39(d,2H),7.35-7.30(d,2H),7.23(d,2H),6.92-6.87(d,2H),4.40(q,2H),3.83(s,2H),3.80(s,3H),1.86(dd,2H),1.64(dd,2H),1.40(t,3H),1.20(dd,2H),0.93(dd,2H)。
LCMS m/z＝502.3[M+1]。
第三步:6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1D)
Ethyl 6-[4-(1-hydroxymethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000060
将6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1C)(1.14g,2.3mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，在氮气氛围下，冷却反应液至-10℃，加入硼烷-四氢呋喃(6.8mL，6.8mmol)，室温反应5小时。向反应液中加入甲醇(5mL)，搅拌15分钟，淬灭反应，加入饱和食盐水(30mL)，萃取，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL×3)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝3:7～3:2)得 到标题化合物6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1D)，黄色固体(0.63g,56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.41(d,2H),7.35(d,2H),7.24(d,2H),6.92-6.88(m,2H),4.40(q,2H),3.82(s,2H),3.80(s,3H),3.63(s,2H),1.86(dd,2H),1.41(t,3H),0.93(dd,2H),0.83(m,4H)。
LCMS m/z＝488.3[M+1]。
第四步：6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)
Ethyl 6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000061
将6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1D)(1.25g,2.6mmol)加入二氯甲烷(30mL)中，加入硅胶(1.5g)和二环己基碳二亚胺(840mg,3.9mmol)，室温搅拌反应17小时。将反应液浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:4～1:1)得到标题化合物6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)，白色固体(1.0g，产率80％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.19(d,1H),7.49-7.41(m,2H),7.32-7.29(m,4H),6.93-6.88(m,2H),4.41(q,2H),3.85(s,2H),3.80(s,3H),1.87(dd,2H),1.56(dd,2H),1.41(t,3H),1.35(dd,2H),0.94(dd,2H)。
LCMS m/z＝486.3[M+1]。
第五步：6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1F)
Ethyl 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethy)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000062
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)(500mg,1.03mmol)溶于甲醇(20mL)和四氢呋喃(5mL)中，加入二甲胺四氢呋喃溶液(2M/L,0.8mL,1.54mmol)，升至50℃反应1小时，加入氰基硼氢化钠(194mg,3.09mmol)，50℃搅拌反应3小时，60℃搅拌反应16小时。冷却反应液至室温，加入硅胶，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝7：3～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:9)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1F)，白色固体(450mg,产率85％)。
LCMS m/z＝515.3[M+1]。
第六步：6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物1)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethy)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000063
将6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1F)(450mg,0.87mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入甲酰胺(394mg,8.74mmol)和甲醇钠(188mg,3.48mmol)，升至95℃反应2小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝7：3～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:9)得到粗产品，粗产品用二氯甲烷/石油醚重结晶得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物1)，白色固体(90mg，产率21％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,2H),7.33(d,2H),7.22(d,2H),6.97-6.88(m,3H),5.37(s,1H),3.82(s,2H),3.82(s,3H),2.62(s,2H),2.27(s,6H),1.97(dd,2H),0.93-0.86(m,4H),0.80(m,2H)。
LCMS m/z＝486.4[M+1]。
实施例2
6-[4-(1-环丙基-2-(3.3-二氟四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物2)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(3.3-difluoropyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-ox o-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000064
第一步：6-[4-(1-环丙基-2-(3.3-二氟四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(2B)
Ethyl
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(3.3-difluoropyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spir o[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000065
将6-[4-(1-甲醛基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)(500mg,1.03mmol)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(20mL)中，加入三乙胺(521mg,5.15mmol)和3,3-二氟四氢吡咯盐酸盐(444mg,3.09mmol)，升至60℃反应1小时，加入氰基硼氢化钠(194mg,3.09mmol)，升至60℃反应18小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(50mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(30mL×2)、饱和碳酸氢钠(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:4)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(3.3-二氟四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(2B)，白色固体(350mg，产率59％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.40(m,2H),7.29(d,2H),7.20(d,2H),6.93-6.88(m,2H),4.40(q,2H),3.83(s,2H),3.80(s,3H),2.89(t,2H),2.68(s,2H),2.59(s,2H),2.25-2.07(m,2H),1.86(dd,2H),1.40(t,3H),0.94(dd,2H),0.82(m,2H),0.70(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-92.34。
LCMS m/z＝577.3[M+1]。
第二步：6-[4-(1-环丙基-2-(3.3-二氟四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物2)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(3.3-difluoropyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000066
将6-[4-(1-环丙基-2-(3.3-二氟四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(2B)(350mg,0.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入甲酰胺(273mg,6.1mmol)和甲醇钠(130mg,2.4mmol)，升至95℃反应2小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:4～3:7)得到粗产品，粗产品用二氯甲烷/石油醚重结晶得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(3.3-二氟四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物2)，白色固体(160mg，产率49％)。
11H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.40(d,2H),7.29(d,2H),7.19(d,2H),6.95-6.90(m,3H),5.40(s,1H),3.83(s,2H),3.81(s,3H),2.89(t,2H),2.68(t,2H),2.59(s,2H),2.22-2.08(m,2H),1.97(dd,2H),0.92(dd,2H),0.82(m,2H),0.70(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-92.31。
LCMS m/z＝548.4[M+1]。
实施例3
6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物3)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H- pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000067
第一步：6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(3B)
Ethyl
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-p yrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000068
将6-[4-(1-甲醛基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)(500mg,1.03mmol)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(10mL)中，加入四氢吡咯(220mg,3.09mmol)，升至60℃反应1.5小时，加入氰基硼氢化钠(194mg,3.09mmol)，升至60℃反应18小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(50mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，二氯甲烷：甲醇(v/v)＝1:19)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(3B)，白色固体(320mg，产率59％)。
LCMS m/z＝540.8[M+1]。
第二步：6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物3)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H- pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000069
将6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(3B)(320mg,0.59mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(266mg,5.91mmol)和甲醇钠(127mg,2.36mmol)，升至95℃反应3小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶柱色谱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1：1，乙酸乙酯：二氯甲烷(v/v)＝1:1，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:19)得到粗产品，粗产品用二氯甲烷/石油醚重结晶得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物3)，白色固体(120mg，产率40％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.40(d,2H),7.33(d,2H),7.19(d,2H),6.95-6.92(m,3H),5.35(s,1H),3.82(s,2H),3.82(s,3H),2.67(m,2H),2.49(m,4H),1.97(dd,2H),1.70(m,4H),0.91(dd,2H),0.81(m,4H)。
LCMS m/z＝511.9[M+1]。
实施例4
6-[4-(1-氰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物4)
6-[4-(1-cyanocyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000070
第一步：1-碘-4-(1-氰基环丙基)苯(4B)
1-iodo-4-(1-cyanocyclopropyl)benzene
Figure PCTCN2014093298-appb-000071
将1-(1-氰基环丙基)苯(1A)(2.0g,14mmol)溶于乙酸(30mL)，在氮气氛围下，加入碘(3.6g,14mmol)、碘酸钠(396mg,3.5mmol)和浓硫酸(0.5mL)，升至70℃反应24小时。将反应液冷却，加入乙酸乙酯(80mL)和硫代硫酸钠溶液(50mL)，分液，有机相依次用硫代硫酸钠溶液(50mL)、水(30mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:0～9:1)得到标题化合物1-碘-4-(1-氰基环丙基)苯(4B)，白色固体(2.43g,产率65％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.67(d,2H),7.03(d,2H),1.74(dd,2H),1.38(dd,2H)。
第二步：6-[4-(1-氰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(4C)
Ethyl
6-[4-(1-cyanocyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridi ne-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000072
将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体1)(600mg,1.76mmol)溶于二甲基亚砜(30mL)中，加入1-碘-4-(1-氰基环丙基)苯(4B)(946mg,3.51mmol)、碳酸钾(730mg,5.28mmol)和1,10-菲罗啉(63mg,0.35mmol)，在氮气氛围下，加入碘化亚铜(67mg,0.35mmol)，升至130℃反应16小时。冷却反应液至室温，加入二氯甲烷(100mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:4～3:7)得到标题化合物6-[4-(1-氰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(4C)，黄色固体(480mg，产率56％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45-7.40(m,2H),7.32-7.27(m,4H),6.93-6.88(m,2H),4.41(q,2H),3.82(s,2H),3.80(s,3H),1.88(dd,2H),1.70(dd,2H),1.41(t,3H),1.35(dd, 2H),0.94(dd,2H)。
LCMS m/z＝482.8[M+1]。
第三步：6-[4-(1-氰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物4)
6-[4-(1-cyanocyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000073
在闷罐中加入6-[4-(1-氰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(4C)(480mg,1.0mmol)、甲醇(15mL)和25％的氨水(1.4g，10.0mmol)，升温至100℃反应36小时。冷却反应液至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(30mL)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:4～2:3)得到标题化合物6-[4-(1-氰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物4)，白色固体(120mg，产率26％)
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,2H),7.30(m,4H),6.93(m,3H),5.42(s,1H),3.82(s,5H),1.99(dd,2H),1.70(dd,2H),1.35(dd,2H),0.92(dd,2H)。
LCMS m/z＝453.9[M+1]。
实施例5
6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物5)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000074
Figure PCTCN2014093298-appb-000075
第一步：6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5B)
Ethyl 6-[4-(1-carboxycyclopropyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000076
向DMSO(100mL)中加入1-(2,3-二氢苯并呋喃-2-基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体2)(1.9g，5.4mmol)，再加入1-(4-碘苯基)环丙烷甲酸(1B)(3.1g,10.8mmol)、碳酸钾(2.3g,16.2mmol)和1,10-菲罗啉(198mg,1.1mmol)，在氮气保护下，加入碘化亚铜(206mg,1.1mmol),升温至130℃反应20小时。将反应液冷却至0℃，加入HCl(4N)调节溶液pH至3～4，加入二氯甲烷(150mL)和水(100mL)，分液，有机相依次用水(100mL×2)和饱和食盐水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝3:7～1:1)得到标题化合物6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5B)，黄色固体(1.7g，产率65％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.37-7.30(m,3H),7.26-7.19(m,3H),6.75(d,1H),4.58(t,2H),4.43(q,2H),3.82(s,2H),3.21(t,2H),1.86(dd,2H),1.64(dd,2H),1.43-1.38(m,3H),1.20(dd,2H),0.93(dd,2H)。
LCMS m/z＝513.8[M+1]。
第二步：6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5C)
Ethyl 6-[4-(1-hydroxymethylcyclopropyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000077
将6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5B)(1.7g,3.3mmol)溶于四氢呋喃(80mL)中，冷却至-10℃，加入四氢呋喃硼烷(10mL,9.9mmol)，室温反应16小时。向反应液中加入甲醇(10mL)，搅拌15分钟，加入乙酸乙酯(30mL)和水(10mL)，分液，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝3:7～3:2)得到标题化合物6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5C)，黄色固体(1.25g，产率78％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.39-7.31(m,3H),7.26-7.20(m,3H),6.75(d,1H),4.58(t,2H),4.40(q,2H),3.81(s,2H),3.64(d,2H),3.21(t,2H),1.86(dd,2H),1.43-1.38(m,3H),0.92(dd,2H),0.83(m,4H)。
LCMS m/z＝499.8[M+1]。
第三步：6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5D)
Ethyl 6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000078
将6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5C)(1.25g，2.5mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入吡啶和CrO3在盐酸溶液中的络合盐(809mg，308mmol)和硅胶(2g)，室温反应5小时。将反应液浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～1:1)得到标题化合物6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡 唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5D)，白色固体(1.1g，产率88％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.20(s,1H),7.38-7.27(m,5H),7.22(dd,1H),6.76(d,1H),4.59(t,2H),4.40(q,2H),3.84(s,2H),3.21(t,2H),1.87(dd,2H),1.56(dd,2H),1.41(t,3H),1.35(dd,2H),0.97-0.91(dd,2H)。
LCMS m/z＝497.8[M+1]。
第四步：6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5E)
Ethyl 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000079
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5D)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(10mL)中，加入二甲胺四氢呋喃溶液(2M,1.7mL，3.3mmol)，升温至60℃反应2小时，加入氰基硼氢化钠(276mg,4.4mmol)，60℃反应16小时。向反应液中加入硅胶，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:9)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5E)，黄色固体(476mg，产率82％)。
LCMS m/z＝526.9[M+1]。
第五步：6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物5)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000080
将6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代- 螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5E)(476mg,0.9mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入甲酰胺(407mg,9mmol)和甲醇钠(194mg,3.6mmol)，升至95℃反应2小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:20～1:9)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物5)，白色固体(60mg，产率13％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.32(m,3H),7.21(m,3H),6.90(s,1H),6.78(d,1H),5.33(s,1H),4.60(t,2H),3.82(s,2H),3.23(t,2H),2.50(s,2H),2.22(s,6H),1.96(dd,2H),0.90(dd,2H),0.84(m,2H),0.73(m,2H)。
LCMS m/z＝497.9[M+1]。
实施例6
6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物6)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000081
第一步：6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6B)
6-[4-(1-carboxycyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000082
将1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5,6-二氢吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(中间体3)(1.3g，3.6mmol)溶于DMSO(30mL)中，加入1-(4-碘苯基)环丙烷甲酸(1B)(2.1g,7.2mmol)、碳酸钾(1.5g,10.8mmol)和1,10-菲罗啉(126mg,0.7mmol)，在氮气保护下，加入碘化亚铜(137mg,0.7mmol),升温至130℃反应18小时。将反应液冷却至0℃，加入HCl(4N)调节溶液pH至3～4，加入二氯甲烷(80mL)和水(40mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝3:7～3:2)得到标题化合物6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6B)，黄色固体(1.1g，产率61％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42-7.37(m,1H),7.32(d,2H),7.23(d,2H),6.72(dd,1H),6.67(dd,1H),4.43(q,2H),3.87–3.80(m,2H),3.79(s,3H),1.84(m,2H),1.64(dd,2H),1.43-1.38(m,3H),1.19(m,2H),0.93(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-119.60。
LCMS m/z＝519.8[M+1]。
第二步：6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6C)
6-[4-(1-hydroxymethylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000083
将6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6B)(1.1g,2.1mmol)溶于四氢呋喃(40mL)中，冷却至-0℃，加入四氢呋喃硼烷(6.4mL,6.4mmol)，室温反应16小时。向反应液中加入甲醇(5mL)， 搅拌20分钟，加入乙酸乙酯(10mL)和水(50mL)，分液，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:4～1:1)得到标题化合物6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6C)，黄色固体(830mg，产率83％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(m,1H),7.35(d,2H),7.23(d,2H),6.73(dd,1H),6.68(dd,1H),4.43(q,2H),3.82(m,2H),3.79(s,3H),3.63(d,2H),1.86(m,2H),1.42(t,3H),0.93(m,2H),0.83(m,4H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-119.59。
LCMS m/z＝505.9[M+1]。
第三步：6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6D)
6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000084
将6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6C)(830mg，1.65mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入吡啶和CrO3在盐酸溶液中的络合盐(531mg，246mmol)和硅胶(1g)，室温反应3小时。将反应液浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～1:1)得到标题化合物6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6D)，黄色固体(660mg，产率80％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.20(d,1H),7.41(t,1H),7.31-7.29(m,4H),6.73(dd,1H),6.68(dd,1H),4.41(q,2H),3.85(m,2H),3.79(s,3H),1.87(m,2H),1.55(dd,2H),1.44-1.38(m,3H),1.35(m,2H),0.94(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-119.60。
LCMS m/z＝503.9[M+1]。
第四步：6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(6E)
Ethyl 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)- 7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000085
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(6D)(660mg,1.31mmol)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(10mL)中，加入二甲胺四氢呋喃溶液(2M,2.0mL，3.93mmol)，升温至55℃反应2小时，加入氰基硼氢化钠(329mg,5.24mmol)，55℃反应16小时。向反应液中加入硅胶，浓缩，分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:9)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(6E)，黄色固体(600mg，产率86％)。
LCMS m/z＝532.8[M+1]。
第五步：6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物6)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000086
将6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(6E)(600mg,1.13mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入甲酰胺(507mg,11.27mmol)和甲醇钠(244mg,4.52mmol)，升至95℃反应2小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:20～1:9)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基氨基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物6)，白色固体(50mg，产率9％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43-7.28(m,3H),7.20(d,2H),6.88(s,1H),6.72(m,2H), 5.46(s,1H),3.80(s,5H),2.49(s,2H),2.20(s,6H),1.95(m,2H),0.90(m,2H),0.83(m,2H),0.71(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-119.72。
LCMS m/z＝503.9[M+H]。
实施例7
6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物7)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000087
第一步：6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(7B)
Ethyl 6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000088
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(5D)(500mg,1.0mmol)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(10mL)中，加入四氢吡咯(214mg，3.0mmol)，升温至55℃反应2小时，加入氰基硼氢化钠(251mg,4.0mmol)，55℃反应16小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝ 2:3～3:2，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:20)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(7B)，黄色固体(378mg，产率68％)。
LCMS m/z＝552.8[M+1]。
第二步：6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物7)
6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-1-(4-methoxy-2-fluoro)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1'-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000089
将6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(7B)(378mg,0.68mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30mL)中，加入甲酰胺(308mg,6.84mmol)和甲醇钠(147mg,2.72mmol)，升至95℃反应2小时。将反应液冷却至室温，加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(50mL×3)和饱和食盐水(50mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:20～1:9)得到标题化合物6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-1-(4-甲氧基-2-氟苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酰胺(化合物7)，白色固体(20mg，产率6％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(m,3H),7.21(m,3H),6.90(s,1H),6.79(d,1H),5.35(s,1H),4.60(t,2H),3.82(s,2H),3.23(t,2H),2.65(s,2H),2.48(m,4H),1.96(m,2H),1.69(m,4H),0.91(m,2H),0.79(m,4H)。
LCMS m/z＝523.8[M+1]。
实施例8
1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基)氨基乙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物8)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000090
第一步：1,1,1-三氟-2-溴-2-(2-(4-甲氧基苯基)腙基)乙烷(8B)
1,1,1-trifluoro-2-bromo-2-(2-(4-methoxyphenyl)hydrazono)ethane
Figure PCTCN2014093298-appb-000091
将4-甲氧基苯肼盐酸盐(30.0g,172mmol)溶于乙醇(250mL)中，加入1-甲氧基2,2,2-三氟丙醇(21mL,223mmol)，升温至85℃反应18小时，将反应液冷却至室温，浓缩除去乙醇，向残留物中加入N,N-二甲基甲酰胺(150mL)，冷去至0℃，加入N-溴代琥珀酰亚胺(31.0g,172mmol)，5分钟加完，升至室温反应4小时。向反应液中加入水(400mL)和乙酸乙酯(400mL)，分液，水相用乙酸乙酯(150mL×2)萃取，合并有机相，有机相依次用水(300mL×3)、饱和食盐水(300mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝0:1～1:19)得到标题化合物1,1,1-三氟-2-溴-2-(2-(4-甲氧基苯基)腙基)乙烷(1B)，黑色液体(19.0g,产率37％)。
第二步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8C)
1-(4-methoxyphenyl)-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000092
将7-吗啉-5-氮杂螺[2.5]辛-7-烯-6-酮(1j)(7.3g，35.0mmol)溶于乙酸乙酯(100mL)中，加入1,1,1-三氟-2-溴-2-(2-(4-甲氧基苯基)腙基)乙烷(1B)(10.4g,35.0mmol)、三乙胺(10.6g,105.0mmol)和碘化钾(581mg，3.5mmol)，升温至90℃反应24小时，冷却反应液，加入盐酸(4N,44mL)，60℃反应4小时。向反应液中加入水(100mL)和乙酸乙酯(100mL)，分液，水相用乙酸乙酯(30mL×2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～2:3)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8C)，黄色固体(380mg,产率3％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48-7.42(d,2H),6.98-6.93(d,2H),5.79(s,1H),3.85(s,3H),3.37(s,2H),1.32(dd,2H),0.97(dd,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.64。
LCMS m/z＝337.9[M+1]。
第三步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8D)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-carboxycyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000093
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8C)(390mg，1.16mmol)溶于DMSO(30mL)中，加入1-(4-碘苯基)环丙烷甲酸(1B)(668mg,2.32mmol)、碳酸钾(481mg,3.48mmol)和1,10-菲罗啉(42mg,0.23mmol)，在氮气保护下，加入碘化亚铜(44mg,0.23mmol),升温至130℃反应18小时。将反应液冷却加入二氯甲烷(80mL)和水(30mL)，加入盐酸(4N)调节溶液pH至3～4，分液，有机相依次用水(40mL×2)和饱和食盐水(40mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～1:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8D)，黄色固体(440mg，产率76％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,2H),7.34(d,2H),7.23(d,2H),6.91(d,2H),3.85(s,2H),3.80(s,3H),1.65(dd,2H),1.38(m,2H),1.20(dd,2H),1.01(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.70。
LCMS m/z＝497.8[M+1]。
第四步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8E)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-hydroxymethylcyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000094
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8D)(440mg,0.88mmol)溶于四氢呋喃(30mL)中，氮气保护下，冷却至-0℃，加入四氢呋喃硼烷(2.7mL,2.65mmol)，室温反应16小时。向反应液中加入甲醇(5mL)，搅拌20分钟，加入乙酸乙酯(10mL)和水(30mL)，分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～1:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8E)，白色固体(370mg，产率87％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,2H),7.37(d,2H),7.23(dm,2H),6.92(d,2H),3.84(s,2H),3.81(s,3H),3.64(s,2H),1.38(dd,2H),1.01(dd,2H),0.84(m,4H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.70。
LCMS m/z＝483.8[M+1]。
第五步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8F)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000095
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡 啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8E)(370mg，0.77mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入吡啶和CrO3在盐酸溶液中的络合盐(330mg，1.53mmol)和硅胶(1g)，室温反应4小时。将反应液浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～2:3)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8F)，白色固体(30mg，产率81％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.17(s,1H),7.44(d,2H),7.32–7.27(m,4H),6.94-6.89(m,2H),3.87(s,2H),3.81(s,3H),1.56(dd,2H),1.39(dd,2H),1.36(dd,2H),1.03(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.69。
LCMS m/z＝481.8[M+1]。
第六步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基)氨基乙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物8)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-cyclopropyl-2-(N,N-dimethylamino)ethyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000096
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8F)(150mg,0.31mmol)溶于甲醇(20mL)和四氢呋喃(5mL)中，加入二甲胺四氢呋喃溶液(2N,0.3mL，0.62mmol)，升温至55℃反应1小时，加入氰基硼氢化钠(58mg,0.93mmol)，55℃反应18小时。向反应液中加入硅胶，浓缩，用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:9)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-环丙基-2-(N,N-二甲基)氨基乙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物8)，黄色固体(100mg，产率63％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,2H),7.35(d,2H),7.28(d,2H),6.91(d,2H),3.91(s,2H),3.81(s,3H),2.92(s,2H),2.50(s,6H),1.35(dd,2H),1.11(dd,2H),1.02(dd,2H),0.88(dd,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.92。
LCMS m/z＝510.9[M+1]。
实施例9
1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物9)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000097
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物9)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-cyclopropyl-2-(pyrrolidin-1-yl)ethyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000098
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8F)(150mg,0.31mmol)溶于甲醇(20mL)和四氢呋喃(5mL)中，加入四氢吡咯(44mg，0.62mmol)，升温至60℃反应3小时，加入氰基硼氢化钠(58mg,0.93mmol)，66℃反应18小时。将反应液浓缩，向残留物中加入二氯甲烷(60mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(30mL×3)、饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:1～1:0，甲醇：二氯甲烷(v/v)＝1:9)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-环丙基-2-(四氢吡咯-1-基)乙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物9)，黄色固体(80mg，产率48％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46-7.41(m,2H),7.33(d,2H),7.17(d,2H),6.94-6.89(m,2H),3.84(s,2H),3.80(s,3H),2.62(s,2H),2.46(m,4H),1.68(m,4H),1.37(t,2H),1.01(t, 2H),0.80-0.75(m,4H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.92。
LCMS m/z＝536.9[M+1]。
实施例10
1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-氨基甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物10)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-carbamoylcyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000099
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-氨基甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物10)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-carbamoylcyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000100
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8D)(100mg，0.2mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N’,N’-四甲基脲六氟磷酸酯(153mg，0.4mmol)、N,N-二异丙基乙基胺(129mg，1.0mmol)和氨水(1mL)，室温反应3小时。向反应液中加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，分液，有机相依次用水(20mL)、10％氢氧化钠溶液(40mL×2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙 酯：石油醚(v/v)＝3:7～1:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-氨基甲酰基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物10)，黄色固体(50mg，产率50％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,4H),7.30(d,2H),6.93(d,2H),5.46(s,1H),5.33(s,1H),3.86(s,2H),3.81(s,3H),1.42(m,2H),1.03(m,4H),0.89-0.84(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.92。
LCMS m/z＝496.8[M+1]。
实施例11
1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物11)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-hydroxymethylcyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000101
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物11)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(1-hydroxymethylcyclopropyl)phenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000102
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(1-羧基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(8D)(360mg,0.72mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，氮气保护下， 加入四氢呋喃硼烷(2.2mL,2.17mmol)，室温反应18小时。向反应液中加入甲醇(5mL)，搅拌20分钟，加入乙酸乙酯(30mL)和水(20mL)，分液，水相用乙酸乙酯(20mL)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～2:3)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物11)，白色固体(270mg，产率78％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,2H),7.36(d,2H),7.23(d,2H),6.91(d,2H),3.84(s,2H),3.81(s,3H),3.63(s,2H),1.38(m,2H),1.01(m,2H),0.83(m,4H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.91。
LCMS m/z＝483.8[M+1]。
实施例12
1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-甲磺酰基-1-环丙基)乙基苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物12)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(2-methylsulfonyl-1-cyclopropyl)ethylphenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000103
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-溴-1-环丙基)乙基苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(12B)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(2-bromo-1-cyclopropyl)ethylphenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000104
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-羟甲基环丙基)苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物11)(200mg,0.41mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，冷却至0℃，加入四溴化碳(206mg,0.62mmol)和三苯基膦(163mg,0.62mmol)，维持0℃下搅拌30分钟，升至室温反应20小时。向反应液中加入水(20mL)，分液，有机相依次用水(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:9～1:5)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-溴-1-环丙基)乙基苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(12B)，白色固体(170mg，产率76％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,2H),7.36(d,2H),7.23(d,2H),6.92(d,2H),3.86(s,2H),3.81(s,3H),3.57(s,2H),1.39(dd,2H),1.10(dd,2H),1.02(m,4H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.92。
第二步：1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-甲磺酰基-1-环丙基)乙基苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物12)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-(2-methylsulfonyl-1-cyclopropyl)ethylphenyl]-3-(trifluoromethyl)spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-7-one
Figure PCTCN2014093298-appb-000105
将1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-溴-1-环丙基)乙基苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(12B)(170mg,0.31mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入甲磺酸钠(48mg，0.47mmol)，升温至130℃反应2小时。将反应液冷却，加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(50×3mL)和饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(乙酸乙酯：石油醚(v/v)＝1:5～2:3)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-3-三氟甲基-6-[4-(2-甲磺酰基-1-环丙基)乙基苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-7-酮(化合物12)，白色固体(80mg，产率47％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(d,2H),7.42(d,2H),7.27(d,2H),6.92(d,2H),3.84(s,2H),3.81(s,3H),3.29(s,2H),2.48(s,3H),1.39(m,2H),1.11(m,2H),1.06(m,2H),1.01(m,2H)。
19F NMR(376MHz,CDCl3)δ-59.93。
LCMS m/z＝545.8[M+1]。
实施例13
1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物13)
1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000106
第一步：6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(13B)
Ethyl 6-[4-[1-(bromomethyl)cyclopropyl]phenyl]-1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000107
将6-[4-[1-(羟甲基)环丙基]苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(5C)(1.3g,2.6mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入四溴化碳(1.3g,3.9mmol)，再加入三苯基膦(1.0g,3.9mmol),室温下反应24小时。向反应液中加入硅胶拌样浓缩，用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:1)得到标题化合物6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(13B)，白色固体(562mg,产率40％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.33(m,3H),7.22(dd,3H),6.76(d,1H),4.59(t,2H),4.40(q,2H),3.82(s,2H),3.66(s,1H),3.57(s,1H),3.21(t,2H),1.85(m,3H),1.40(t,3H),1.03–0.96(m,3H),0.96–0.91(m,2H)。
第二步：1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(13C)
Ethyl 1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000108
将6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(13B)(562mg,1.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入甲烷亚磺酸钠(153mg,1.5mmol)，130℃反应2小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，分液，有机相用水洗涤(30mL×2)，用饱和食盐水洗涤(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:2)得到标题化合物1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(13C)，白色固体(250mg,产率45％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(d,2H),7.29(dd,3H),7.21(dd,1H),6.76(d,1H),4.59(t,2H),4.40(q,2H),3.81(s,2H),3.29(s,2H),3.21(t,2H),2.46(s,3H),1.87(q,2H),1.40(t,3H),1.11(t,2H),1.05(t,2H),0.93(td,2H)。
LCMS m/z＝562.3[M+1]。
第三步：1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物13)
1-(2,3-dihydrobenzofuran-5-yl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000109
将1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(13C)(250mg,0.45mmol)溶于20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入甲酰胺(200mg,4.45mmol)，甲醇钠(97mg,1.8mmol)，95℃反应5小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL),分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，用二氯甲烷和石油醚混合溶剂结晶得标题化合物1-(2,3-二氢苯并呋喃-5-基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物13)，白色固体(150mg,产率63％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.66(s,1H),7.46–7.31(m,4H),7.24(d,3H),6.79(d,1H),4.59(t,2H),3.82(s,2H),3.55(s,2H),3.21(t,2H),2.63(s,3H),1.69(s,2H),1.07(s,2H),0.93(s,4H)。
LCMS m/z＝533.3[M+1]。
实施例14
1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物14)
1-(2-fluoro-4-methoxy-phenyl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000110
第一步：6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并 [3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(14B)
Ethyl 6-[4-[1-(bromomethyl)cyclopropyl]phenyl]-1-(2-fluoro-4-methoxy-phenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000111
将6-[4-[1-(羟甲基)环丙基]苯基]-1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(6C)(758mg,1.5mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入四溴化碳(1.5g,4.5mmol)，再加入三苯基膦(1.2g,4.5mmol),室温下反应24小时。加入硅胶拌样浓缩，用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:1)得到标题化合物6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(14B)，白色固体(500mg,产率59％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44–7.33(m,3H),7.24(d,2H),6.70(ddd,2H),4.41(q,2H),3.83(s,2H),3.79(s,3H),3.57(s,2H),1.86(s,2H),1.41(t,3H),1.09(t,2H),1.00(t,2H),0.93(t,2H)。
LCMS m/z＝568.3[M+1]。
第二步：1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(14C)
Ethyl 1-(2-fluoro-4-methoxy-phenyl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000112
将6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(14B)(500mg,0.88mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入甲烷亚磺酸钠(135mg,1.3mmol)，130℃反应2小时。将反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:2)得到标题化合物1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基) 环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(14C)，白色固体(150mg,产率30％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45–7.35(m,3H),7.28(s,2H),6.71(ddd,2H),4.41(q,2H),3.80(s,5H),3.28(s,2H),2.46(s,3H),1.87(s,2H),1.41(t,3H),1.10(t,2H),1.05(t,2H),0.94(d,2H)。
LCMS m/z＝568.3[M+1]。
第三步：1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物14)
1-(2-fluoro-4-methoxy-phenyl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000113
将1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(14C)(150mg,0.26mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(119mg,2.64mmol)，甲醇钠(56mg,1.04mmol)，95℃反应5小时。将反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和用饱和食盐水(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:2～2:3)得到标题化合物1-(2-氟-4-甲氧基-苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物14)，白色固体(80mg,产率57％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.47–7.33(m,3H),7.27(m,2H),6.88(s,1H),6.80–6.68(m,2H),5.37(s,1H),3.81(s,5H),3.28(s,2H),2.46(s,3H),1.98(s,2H),1.14–1.02(m,4H),0.92(s,2H)。
LCMS m/z＝539.3[M+1]。
实施例15
1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物15)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(methylaminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000114
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(15B)
Ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(methylaminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000115
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-甲酰基环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(1E)(500mg,1.03mmol)溶于甲醇(30mL)和四氢呋喃(10mL)中，加入甲胺的甲醇溶液(2N,1mL,2.06mmol)，再加入无水氯化锌(562mg,4.12mmol)，55℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(194mg,3.09mmol)，55℃反应4小时。加入硅胶拌样浓缩，用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(15B)，白色固体(516mg,产率100％)。
LCMS m/z＝501.3[M+1]。
第二步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物15)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(methylaminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000116
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(15B)(516mg,1.03mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(464mg,10.3mmol)，甲醇钠(223mg,4.12mmol)，95℃反应16小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:2～2:3；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝49:1～9:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物15)，白色固体(100mg,产率21％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(s,1H),7.51–7.45(m,2H),7.37(s,1H),7.32–7.26(m,2H),7.24–7.19(m,2H),7.03–6.95(m,2H),3.82(s,2H),3.80(s,3H),2.65(s,2H),2.24(s,3H),1.69(dd,2H),0.94(dd,2H),0.80–0.74(m,2H),0.74–0.67(m,2H)。
LCMS m/z＝472.4[M+1]。
实施例16
1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物16)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000117
Figure PCTCN2014093298-appb-000118
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16B)
Ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(bromomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000119
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(羟甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(1D)(1.5g,3.1mmol)溶于二氯甲烷(30mL)中，加入四溴化碳(3.1g,9.3mmol)，再加入三苯基膦(2.4g,9.3mmol)，室温下反应18小时。加入硅胶拌样浓缩，用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16B)，白色固体(1.5g,产率88％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45–7.40(m,2H),7.37–7.32(m,2H),7.26–7.22(m,2H),6.93–6.88(m,2H),4.40(q,2H),3.83(s,2H),3.80(s,3H),3.57(s,2H),1.86(q,2H),1.41(t,3H),1.10(t,2H),1.00(t,2H),0.94(dd,2H)。
LCMS m/z＝550.2[M+1]。
第二步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16C)
Ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000120
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶 -4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16B)(600mg,1.09mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入甲烷亚磺酸钠(167mg,1.64mmol)，130℃反应2小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL),分液，有机相用水洗涤(30mL×2)，用饱和食盐水洗涤(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:2)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16C)，黄色固体(330mg,产率55％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.42(t,4H),7.27(d,2H),6.93–6.88(m,2H),4.40(q,2H),3.81(s,2H),3.80(s,3H),3.28(s,2H),2.46(s,3H),1.87(q,2H),1.40(t,3H),1.10(t,2H),1.05(t,2H),0.93(dd,2H)。
LCMS m/z＝550.3[M+1]。
第三步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物16)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(methylsulfonylmethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000121
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16C)(330mg,0.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(270mg,6.0mmol)，甲醇钠(130mg,2.4mmol)，95℃反应16小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(40mL×2)和饱和食盐水(40mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:2～2:3)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(甲磺酰基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物16)，白色固体(200mg,产率64％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(s,1H),7.48(d,2H),7.40(d,3H),7.25(d,2H),6.99(d,2H),3.83(s,2H),3.80(s,3H),3.55(s,2H),2.63(s,3H),1.69(s,2H),1.07(s,2H),0.94(s,4H)。
LCMS m/z＝521.3[M+1]。
实施例17
1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物17)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(aminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000122
第一步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(叠氮甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(17B)
Ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(azidomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000123
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(溴甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(16B)(200mg,0.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入叠氮化钠(95mg,1.45mmol)，60℃反应18小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(叠氮甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(17B)，黄色液体(185mg， 产率100％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46–7.40(m,2H),7.36–7.31(m,2H),7.27–7.23(m,2H),6.93–6.88(m,2H),4.40(q,2H),3.83(s,2H),3.80(s,3H),3.37(s,2H),1.86(q,2H),1.40(t,3H),0.94(dd,2H),0.90(d,4H)。
LCMS m/z＝513.3[M+1]。
第二步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(17C)
Ethyl 1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(aminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000124
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(叠氮甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(17B)(836mg,1.63mmol)溶于甲醇(20mL)中，0℃加入氯化钴(43mg,0.33mmol)，室温反应30分钟，0℃加入硼氢化钠(124mg,3.26mmol)，室温反应1小时，0℃加入水(10mL)淬灭反应，加入二氯甲烷(50mL)，硅藻土抽滤，滤液加入水(50mL)，分液，有机相依次用水(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1～9:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(17C)，黄色固体(330mg,产率55％)。
LCMS m/z＝487.4[M+1]。
第三步：1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物17)
1-(4-methoxyphenyl)-6-[4-[1-(aminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000125
将1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(17C)(500mg,1.03mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(4635mg,10.3mmol)，甲醇钠(223mg,4.12mmol)，95℃反应3小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(50mL)，分液，有机相依次用水(40mL×2)和饱和食盐水(40mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(二氯甲烷：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝49:1～9:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-6-[4-[1-(氨基甲基)环丙基]苯基]-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物17)，白色固体(230mg,产率64％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(s,1H),7.51–7.46(m,2H),7.38(s,1H),7.32–7.26(m,2H),7.26–7.20(m,2H),7.02–6.96(m,2H),3.83(s,2H),3.80(s,3H),2.72(s,2H),1.97(s,2H),1.69(dd,2H),0.94(dd,2H),0.79(q,2H),0.67(q,2H)。
LCMS m/z＝458.3[M+1]。
实施例18
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-[1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基]苯基]螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲腈(化合物18)
1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-6-[4-[1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)cyclopropyl]phenyl]spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carbonitrile
Figure PCTCN2014093298-appb-000126
将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-[1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基]苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物3)(150mg,0.3mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，氮气保护下加入吡啶(2.9g,36.54mmol)，冷却至-20℃，滴加三氟乙酸酐(308mg,1.47mmol)，逐渐升至室温反应2小时。反应液加入水(30mL)和二氯甲烷(20mL)，分液， 有机相依次用盐酸(2N)，5％氢氧化钠溶液(50ml)和饱和食盐水(50ml)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1～9:1)得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-[1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基]苯基]螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲腈(化合物18)，白色固体(60mg,产率42％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.44(m,2H),7.33(m,2H),7.17(m,2H),6.93(m,2H),3.88(s,2H),3.81(s,3H),2.62(s,2H),2.46(s,4H),1.67(s,4H),1.56(s,2H),1.11(s,2H),0.78(d,4H)。
LCMS m/z＝494.4[M+1]。
实施例19
6-[4-[1-(二甲氨基甲基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲腈(化合物19)
6-[4-[1-(dimethylaminomethyl)cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carbonitrile
Figure PCTCN2014093298-appb-000127
将6-[4-[1-(二甲氨基甲基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物1)(100mg,0.2mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，氮气保护下加入吡啶(2.0g,25.2mmol)，冷却至-20℃，滴加三氟乙酸酐(216mg,1.0mmol)，逐渐升至室温反应3小时。反应液加入水(30mL)和二氯甲烷(20mL)，分液，有机相依次用盐酸(2N，50mL×2)、5％氢氧化钠溶液(50mL×2)和饱和食盐水(50mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1～9:1)得到标题化合物6-[4-[1-(二甲氨基甲基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲腈(化 合物19)，黄色固体(50mg,产率53％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45(d,2H),7.32(m,2H),7.18(m,2H),6.92(d,2H),3.88(s,2H),3.81(s,3H),2.47(s,2H),2.20(s,6H),1.56(m,2H),1.10(m,2H),0.83(m,2H),0.71(m,2H)。
LCMS m/z＝468.4[M+1]。
实施例20
1-[4-[3-氨基甲酰-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-6-基]苯基]环丙甲酸(化合物20)
1-[4-[3-carbamoyl-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-6-yl]phenyl]cyclopropanecarboxylic acid
Figure PCTCN2014093298-appb-000128
将1-[4-[3-乙氧羰基-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-6-基]苯基]环丙甲酸(1C)(200mg,0.4mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(180mg,4.0mmol)，甲醇钠(86mg,1.6mmol)，95℃反应18小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(30mL)，用4N盐酸调节pH至2-3，分液，有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝49:1)得到标题化合物1-[4-[3-氨基甲酰-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-6-基]苯基]环丙甲酸(化合物20)，白色固体(80mg,产率42％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.28(s,1H),7.70(s,1H),7.49(d,2H),7.38(s,1H),7.31(d,2H),7.24(d,2H),6.99(d,2H),3.84(s,2H),3.80(s,3H),1.69(d,2H),1.44(d,2H),1.10(d,2H),0.95(s,2H)。
LCMS m/z＝473.3[M+1]。
实施例21
6-[4-[1-(羟甲基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物21)
6-[4-[1-(hydroxymethyl)cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000129
将6-[4-[1-(羟甲基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(1D)(230mg,0.47mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(212mg,4.720mmol)，甲醇钠(102mg,1.88mmol)，95℃反应18小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用二氯甲烷/甲醇/石油醚结晶得到标题化合物6-[4-[1-(羟甲基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物21)，白色固体(90mg,产率42％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(s,1H),7.48(d,2H),7.38(s,1H),7.29(d,2H),7.22(d,2H),6.99(d,2H),4.64(s,1H),3.82(s,2H),3.80(s,3H),3.51(d,2H),1.69(s,2H),0.94(s,2H),0.82(s,2H),0.69(s,2H)。
LCMS m/z＝459.3[M+1]。
实施例22
6-[4-[1-甲醛环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物22)
6-[4-(1-formylcyclopropyl)phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000130
将6-[4-[1-甲醛环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(1E)(200mg,0.41mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(185mg,4.1mmol)，甲醇钠(89mg,1.64mmol)，95℃反应5小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(50mL)和水(30mL)，分液，有机相依次用水(30mL×2)和饱和食盐水(30mL×1)洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝7:3～1:1；乙酸乙酯：二氯甲烷(v/v)＝1:19)得到标题化合物6-[4-[1-甲醛环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物22)，白色固体(90mg,产率48％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.20(s,1H),7.46–7.41(m,2H),7.29(s,4H),6.96–6.90(m,3H),5.39(s,1H),3.85(s,2H),3.82(s,3H),1.99(q,2H),1.56(q,2H),1.35(q,2H),0.93(q,2H)。
LCMS m/z＝457.3[M+1]。
实施例23
1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-[1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基]苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(化合物23)
1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-6-[4-[1-(pyrrolidin-1-ylmethyl)cyclopropyl]phenyl]spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide 2,2,2-trifluoroacetic acid
Figure PCTCN2014093298-appb-000131
Figure PCTCN2014093298-appb-000132
将1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-[1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基]苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物7)(100mg,0.2mmol)溶于乙酸乙酯(10mL)和二氯甲烷(3mL)中，加入三氟乙酸(22mg，0.2mmol)，室温反应24小时。反应液浓缩得到标题化合物1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-6-[4-[1-(吡咯烷-1-基甲基)环丙基]苯基]-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺2,2,2-三氟乙酸盐(化合物23)，白色固体(110mg,产率88％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.26(s,1H),7.71(s,1H),7.47(dd,4H),7.39(s,1H),7.32(d,2H),6.99(d,2H),3.84(s,2H),3.80(s,3H),3.49(d,2H),3.36(dd,2H),2.87(m,2H),1.96–1.85(m,2H),1.78(dd,2H),1.74–1.68(m,2H),1.04(t,2H),0.94(m,4H)。
19F NMR(376MHz,DMSO)δ-74.63。
LCMS m/z＝512.4[M+1]。
实施例24
6-[4-[1-[[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物24)
6-[4-[1-[[(3R)-3-hydroxypyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000133
第一步：6-[4-[1-[[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧 代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(24B)
Ethyl 6-[4-[1-[[(3R)-3-hydroxypyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000134
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)(300mg,0.62mmol)溶于20mL甲醇和10mL四氢呋喃中，加入(R)-3-吡咯烷醇(108mg,1.24mmol)，再加入无水氯化锌(338mg,2.48mmol)，55℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(117mg,1.86mmol)，55℃反应16小时。浓缩，反应液加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1～9:1)得到标题化合物6-[4-[1-[[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(24B)，白色固体(250mg,产率72％)。
LCMS m/z＝557.4[M+1]。
第二步：6-[4-[1-[[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物24)
6-[4-[1-[[(3R)-3-hydroxypyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000135
将6-[4-[1-[[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(24B)(250mg,0.45mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(202mg,4.5mmol)，甲醇钠(87mg,1.6mmol)，95℃反应4小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1，二氯甲烷：甲醇(v/v)＝ 19:1～9:1)得到标题化合物6-[4-[1-[[(3R)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物24)，白色固体(140mg,产率59％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.45–7.40(m,2H),7.35(d,2H),7.21(d,2H),6.96–6.88(m,3H),5.33(s,1H),4.24(s,1H),3.82(s,5H),2.88(s,4H),2.44(s,1H),2.23(m,4H),1.98(q,2H),0.92(dd,2H),0.87(m,4H)。
LCMS m/z＝528.3[M+1]。
实施例25
6-[4-[1-[[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物25)
6-[4-[1-[[(3S)-3-hydroxypyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000136
第一步：6-[4-[1-[[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(25B)
Ethyl 6-[4-[1-[[(3S)-3-hydroxypyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000137
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)(300mg,0.62mmol)溶于甲醇(20mL)和四氢呋喃(10 mL)中，加入(R)-3-吡咯烷醇(108mg,1.24mmol)，再加入无水氯化锌(338mg,2.48mmol)，55℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(117mg,1.86mmol)，55℃反应16小时。浓缩，反应液加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1～9:1)得到标题化合物6-[4-[1-[[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(25B)，白色固体(230mg,产率67％)。
LCMS m/z＝557.4[M+1]。
第二步:6-[4-[1-[[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物25)
6-[4-[1-[[(3S)-3-hydroxypyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000138
将6-[4-[1-[[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(25B)(230mg,0.41mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(185mg,4.1mmol)，甲醇钠(89mg,1.8mmol)，95℃反应4小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～0:1；二氯甲烷：甲醇(v/v)＝19:1～9:1)得到标题化合物6-[4-[1-[[(3S)-3-羟基吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物25)，白色固体(100mg,产率46％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.46–7.40(m,2H),7.35(d,2H),7.22(d,2H),6.96–6.88(m,3H),5.34(s,1H),4.24(s,1H),3.82(s,5H),3.12–2.65(m,4H),2.47(s,1H),2.39–2.02(m,4H),1.98(q,2H),0.92(dd,2H),0.91–0.81(m,4H)。
LCMS m/z＝528.4[M+1]。
实施例26
6-[4-[1-(1-羟基乙基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物26)
6-[4-[1-(1-hydroxyethyl)cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000139
将6-[4-[1-甲醛环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(1E)(46mg,0.1mmol)溶于四氢呋喃(15mL)中，氮气保护下-78℃加入甲基溴化镁(2mol/L,0.25mL，0.5mmol)，逐渐升至室温反应4小时。反应液加入二氯甲烷(20mL)和水(20mL)，分液，有机相用水洗涤(20mL×1)，用饱和食盐水洗涤(20mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝4:1～3:2)得到标题化合物6-[4-[1-(1-羟基乙基)环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物26)，白色固体(20mg,产率20％)。
1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(d,2H),7.35(d,2H),7.23(d,2H),6.93(d,3H),5.34(s,1H),3.83(s,2H),3.82(s,3H),3.36(q,1H),1.98(dd,2H),1.10(d,3H),0.92(dd,2H),0.88–0.82(m,2H),0.78–0.72(m,2H)。
LCMS m/z＝473.4[M+1]。
实施例27
6-[4-[1-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物27)
6-[4-[1-[[(3R)-3-fluoropyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000140
第一步：6-[4-[1-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(27B)
Ethyl 6-[4-[1-[[(3R)-3-fluoropyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxylate
Figure PCTCN2014093298-appb-000141
将6-[4-(1-甲酰基环丙基)苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙烷]-3-甲酸乙酯(1E)(300mg,0.62mmol)溶于甲醇(20mL)和四氢呋喃(10mL)中，加入(R)-3-氟吡咯烷盐酸盐(156mg,1.24mmol)，再加入无水氯化锌(338mg,2.48mmol)，三乙胺(188mg,1.86mmol)，55℃反应1小时。再加入氰基硼氢化钠(117mg,1.86mmol)，55℃反应3小时。浓缩，反应液加入二氯甲烷(80mL)和水(50mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×2)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝1:1～3:7)得到标题化合物6-[4-[1-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(27B)，白色固体(230mg,产率60％)。
LCMS m/z＝559.3[M+1]。
第二步：6-[4-[1-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物27)
6-[4-[1-[[(3R)-3-fluoropyrrolidin-1-yl]methyl]cyclopropyl]phenyl]-1-(4-methoxyphenyl)-7-oxo-spiro[5H-pyrazolo[3,4-c]pyridine-4,1`-cyclopropane]-3-carboxamide
Figure PCTCN2014093298-appb-000142
将6-[4-[1-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酸乙酯(27B)(230mg,0.41mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中，加入甲酰胺(185mg,4.1mmol)，甲醇钠(88mg,1.64mmol)，95℃反应5小时。反应液冷却，加入二氯甲烷(60mL)和水(60mL)，分液，有机相用水洗涤(50mL×2)，用饱和食盐水洗涤(50mL×1)，无水硫酸钠干燥，浓缩，残留物用硅胶色谱柱分离提纯(石油醚：乙酸乙酯(v/v)＝3:2～1:4)得到标题化合物6-[4-[1-[[(3R)-3-氟吡咯烷-1-基]甲基]环丙基]苯基]-1-(4-甲氧基苯基)-7-氧代-螺[5H-吡唑并[3,4-c]吡啶-4,1`-环丙基]-3-甲酰胺(化合物27)，白色固体(100mg,产率46％)。
1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.69(s,1H),7.50–7.45(m,2H),7.37(s,1H),7.30(t,2H),7.20(d,2H),7.01–6.95(m,2H),5.23–5.01(m,1H),3.81(d,5H),2.84–2.52(m,5H),2.33(dd,1H),2.16–1.93(m,1H),1.86–1.71(m,1H),1.69(dd,2H),0.94(dd,2H),0.78(d,2H),0.73(m,2H)。
19F NMR(376MHz,DMSO)δ-166.42。
LCMS m/z＝530.3[M+1]。
测试例：
测试例1、本发明化合物对凝血因子Xa体外酶活性抑制作用
以下方法可用来测定本发明化合物体外对人源凝血因子Xa活性的抑制作用，用抑制常数Ki表示。
在含有0.05M Tris，0.15M NaCl，0.1％PEG-8000的反应缓冲液(pH＝7.5)中制备人源凝血因子Xa(Enzo life science)工作液和显色底物(sekisui，货号：222)工作液。测试化合物加二甲亚砜(DMSO)配制成10mM的储备液，再用含1％DMSO的反应缓冲液稀释成0.1-1000nM的工作液。在96孔板中加入30μL测试化合物工作液(对照组加入30μL反应缓冲液)和150μL凝血因子Xa工作液，凝血因子Xa终浓度为1nM，室温孵育30分钟。然后加入显色底物工作液120μL，终浓度为0.2mM，启动反应。用酶标仪(Perkin Elmer,Envision)在405nm处连续测定30分钟，每分钟测定一次。
按以下公式计算测试化合物Ki，结果如表1所示；
Ki＝IC50/(1+[S]/Km)
式中：
IC50—通过SPSS16.0软件线性回归计算导致底物水解速率降低50％的测试化合物浓度。
[S]—底物浓度
Km—米氏常数，0.35mM
表1：体外凝血因子Xa酶活性测定实验结果
实施例编号 Ki(nM)
1 0.10
2 0.66
3 1.72
4 0.85
5 0.042
6 0.067
7 0.069
8 0.049
9 0.099
10 3.20
11 0.83
12 0.11
13 0.25
14 0.26
15 0.30
16 0.27
17 0.43
18 0.24
19 0.26
20 0.57
21 0.2
22 0.15
24 0.11
25 0.11
27 0.072
结论：本发明化合物在缓冲液中对人源FXa具有明显的抑制作用。
测试例2、体外对人血浆凝血功能作用测定
20名25-35周岁健康志愿者(一周内未服用过药物)，手肘静脉穿刺采血20mL于3.8％枸橼酸钠抗凝管中，抗凝剂与血的比例为1：9，2500转/分钟4℃离心(Beckman，Allegrax-30R)10分钟，取上层富含血小板血浆15000转/分钟4℃离心10分钟，收集上层贫血小板血浆用于凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(aPTT)检测。试剂配制和测试参照试剂盒(均购于Instrumentation laboratory公司，批号分别为N0821168和N0820966)说明书。将不同浓度的本发明化合物及阿哌沙班与贫血小板血浆混合(体积比例为1：9)，化合物终浓度为0-20μM，全自动凝血仪(Instrumentation laboratory,ACL ELITE)测试PT、aPTT。Origin拟合二项式计算凝血时间延长一倍所需化合物浓度EC2×，结果如表2所示。
表2：本发明化合物对人血浆的抗凝血作用(以PT EC2×和aPTT EC2×表示)
实施例编号 PT EC2×(μM) aPTT EC2×(μM)
1 0.4 0.9
5 0.4 0.8
6 0.4 0.9
7 0.4 1.0
8 3.1 3.9
9 2.8 4.1
13 2.1 5.2
14 3.7 5.0
15 0.7 1.7
16 2.4 5.1
17 0.9 1.7
18 1.3 5.6
19 1.0 2.1
21 3.4 6.3
22 2.0 4
24 0.4 1.8
25 0.6 1.6
结论：本发明化合物体外对人血浆有明显的抗凝血作用。
测试例3、药代动力学评价
雄性SD大鼠(购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：SCXK(SH)2007000546318)180-220g，禁食给水过夜，3只大鼠口服灌胃5mg/kg，3只大鼠静脉注射0.5mg/kg。口服给药组，在给药前和在给药后15、30和45分钟以及1、2、4、8、12和24小时采血；静脉给药组，在给药前和在给药后5、15和30分钟以及1、2、4、8、12和24小时采血。血液样品3500转/分钟4℃离心10分钟，收集血浆，于-40℃保存。取各时间点大鼠血浆20μL，加入含内标的乙腈溶液200μL混合后，涡旋混合5分钟，3700转/分钟离心15分钟，取上清液80μL与80μL水混合，取混和液10μL进行LC-MS/MS(安捷伦科技有限公司，API4000)分析。主要药代动力学参数用WinNonlin 6.3软件非房室模型分析，结果如表3所示。
表3：药代动力学参数结果
Figure PCTCN2014093298-appb-000143

Claims (32)

  1. 一种通式(I)所示的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100001
    R1选自氰基、氨基、-(CH2)n-C(＝O)R1a、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、C1-6烷基、-(CH2)n-C1-6烷氧基、-(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C3-10碳环或-(CH2)n-C3-10杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述烷基、烷氧基、碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    R1a和R1b各自独立的选自氢、氨基、羟基、-(CH2)n-C3-10碳环、-(CH2)n-C3-10杂环、C1-4烷氧基或C1-4烷基，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述烷基、碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、(＝O)、氨基、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    R2选自H、F、Cl、Br、I、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
    环M为环丙基，所述环丙基任选进一步被0至3个R3取代；
    R3各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、-(CR3aR3b)nR3c、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、氨基、羟基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    R3a、R3b和R3c各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-C(＝O)OR3d或-C(＝O)NR3eR3f；
    R3d、R3e和R3f各自独立的选自H或C1-4烷基；
    R4选自H、F、Cl、Br、I、氰基、三氟甲基、-(CR4aR4b)nOR4c、-(CR4aR4b)nNR4cR4d、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)pR4a、-C(R4aR4b)R4c、C3-10碳环或者3至10元杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述碳环或杂环各自独立任选进一步被0至4个R4e取代；
    R4a、R4b、R4c、R4d和R4e各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、硝基、 氰基、氨基、三氟甲基、C1-4烷基或C1-4烷氧基，所述氨基、烷基或烷氧基任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    作为选择，R4a和R4b可以形成(＝O)；
    作为选择，R4a和R4b、R4c和R4d可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环含有0至3个选自N、O或S的杂原子，所述环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    Figure PCTCN2014093298-appb-100002
    表示环D存在或不存在；
    当环D存在时，环E选自苯基或5至6元杂芳基，所述杂芳基含有1至3个选自N、O或S的杂原子，所述苯基或杂芳基任选进一步被0至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成5至6元环，所述5至6元环含有0至2个选自N、O或S的杂原子，所述5至6元环任选进一步被0至5个R6取代；
    当环D不存在时，环E选自苯基或5至6元杂芳基，所述杂芳基含有1至3个选自N、O或S的杂原子，所述苯基或杂芳基任选进一步被0至5个R5取代；
    R5各自独立地选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氨基、氰基、三氟甲基、C1-4烷基、C1-4烷氧基、-(CR5aR5b)nNR5cR5d、-(CH2)nC(＝NR5c)N(R5aR5b)、-(CR5aR5b)n-C(＝O)NR5cR5d、-(CR5aR5b)nNR5dC(＝O)R5c、-(CR5aR5b)nOR5c、-(CH2)nC(＝O)R5a或-(CH2)nS(＝O)pR5a，或者这些基团各自独立任选被取代，当被取代时，任选被1至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    R5a、R5b、R5c和R5d各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、C1-4烷基、C1-4烷氧基或C3-6碳环；
    作为选择，R5a和R5b可以形成(＝O)；
    作为选择，R5a和R5b、R5c和R5d可与它们相连的原子一起形成3至6元环，所述环含有0至3个选自N、O或S的杂原子，所述环任选进一步被0至4个选自F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基的取代基所取代；
    R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、巯基、氰基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基；
    作为选择，两个R6可以形成(＝O)；
    作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成一个3 至4元环，所述环含有0至1个选自N、O或者S的杂原子；
    m选自0、1、2、3或者4；
    n选自0、1、2、3或者4；
    p选自0、1或者2。
  2. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    环M为环丙基，所述环丙基任选进一步被0至3个R3取代；
    R3各自独立地选自H、F、Cl、三氟甲基、羟基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、-C(＝O)OCH3、-C(＝O)OCH2CH3或-C(＝O)NH2。
  3. 根据权利要求2所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：环M为环丙基。
  4. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    当环D存在时，环E选自取代或未取代的苯基，吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至3个R5取代；环D包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的如下结构之一：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100003
    当被取代时，任选被1至3个R6取代；
    当环D不存在时，环E选自取代或未取代的苯基，吡啶基、吡嗪基、哒嗪基、嘧啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至5个R5取代。
  5. 根据权利要求4所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    当环D存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的如下结构之一：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100004
    当被取代时，任选被1至3个R6取代；
    当环D不存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至5个R5取代。
  6. 根据权利要求5所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    当环D存在时，环E选自取代或未取代的苯基，当被取代时，任选被1至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的
    Figure PCTCN2014093298-appb-100005
    当被取代时，任选被1至3个R6取代；
    当环D不存在时，环E选自取代或未取代的苯基，当被取代时，任选被1至5个R5取代。
  7. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中该化合物选自通式(II)所示的化合物，其中：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100006
    环M为环丙基；
    r选自0、1、2或3；
    t选自0、1、2、3、4或5。
  8. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中该化合物选自通式(III)所示的化合物，其中：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100007
    环M为环丙基；
    r`选自0、1、2、3、4或5。
  9. 根据权利要求1、7或8任意一项所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中R5各自独立地选自取代或未取代的H、F、Cl、Br、I、-C(＝NR5c)N(R5aR5b)、-(CH2)nS(＝O)pR5a、羟基、巯基、氰基、氨基、羟基甲基、三氟甲基、甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基，当被取代时，任选被1至4个选自H、F、Cl、Br、I、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
    R5a、R5b和R5c各自独立的选自H、F、Cl、Br、I、羟基、氨基、C1-4烷基或C1-4烷氧基。
  10. 根据权利要求9所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中R5各自独立地选自H、F、Cl、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、氨基、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基。
  11. 根据权利要求1或7所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中R6各自独立选自H、F、Cl、羟基、巯基、氰基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或丙氧基；
    作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成一个3至4元环，所述3至4元环含有0至1个选自N、O或者S的杂原子；
    作为选择，两个R6可以形成(＝O)。
  12. 根据权利要求11所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中R6各自独立的选自H、F、Cl、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
    作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
  13. 根据权利要求1、7或8所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、羟甲基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、1-羟基乙基、-(CH2)n-C(＝O)R1a、-(CH2)n-S(＝O)pR1a、 -(CH2)n-NR1aR1b、-(CH2)n-C3-6碳环或-(CH2)n-C3-6杂环，所述杂环含有1至4个选自N、O或S的杂原子，所述碳环和杂环任选进一步被0至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
    R1a和R1b各自独立的选自氢、氨基、甲基、乙基、异丙基、环丙基、环丙基亚甲基、环丁基、环戊基、环己基、吡咯基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基或环丙基亚甲基；
    n选自0、1、2或3。
  14. 根据权利要求13所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基、或取代或未取代的以下结构之一：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100008
    当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代。
  15. 根据权利要求1、7或8所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    R2选自H、F或Cl。
  16. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中R4选自氰基、三氟甲基、-C(＝O)NR4aR4b、-(CH2)nS(＝O)2R4a或-C(R4aR4b)R4c；
    R4a、R4b和R4c各自独立地选自H、F、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、丙基、异丙基、甲氧基、乙氧基或异丙氧基；
    作为选择，R4a和R4b可以形成(＝O)；
    作为选择，R4a和R4b可与它们相连的原子一起形成环丙基。
  17. 根据权利要求16所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、羟基亚甲基、1-羟基乙基、氨基甲酰基、-S(＝O)2-CH3、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基。
  18. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、乙基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、乙氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、1-羟基乙基、或取代或未取代的以下结构之一：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100009
    当被取代时，任选进一步被1至4个选自H、F、Cl、(＝O)、氨基、羟基、羧基、醛基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基或乙氧基的取代基所取代；
    R2选自H、F或Cl；
    环M为环丙基；
    R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氨基甲酰基、-S(＝O)2CH3、1-羟基乙基、羟基甲基、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基；
    当环D存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的如下结构之一：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100010
    当被取代时，任选被1至3个R6取代；
    当环D不存在时，环E选自取代或未取代的苯基、吡啶基或噻吩基，当被取代时，任选被1至5个R5取代。
    R5各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氨基、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基；
    R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
    作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
  19. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    R1选自氰基、氨基、羧基、醛基、甲基、羟甲基、氨基甲酰基、甲氧基亚甲基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
    Figure PCTCN2014093298-appb-100011
    或取代或未取代的以下结构之一：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100012
    当被取代时，任选进一步被1至 4个选自H、F、Cl、(＝O)、羟基或甲基取代基所取代；
    R2选自H或F；
    环M为环丙基；
    R4选自氰基、一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氨基甲酰基、-S(＝O)2CH3、1-羟基乙基、羟基甲基、1-羟基环丙基或2-羟基异丙基；
    当环D不存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0至5个R5取代；
    当环D存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的
    Figure PCTCN2014093298-appb-100013
    当被取代时，任选被1至3个R6取代；
    R5各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氨基、氰基、-C(＝NH)NH2、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2CH3、三氟甲基、甲基、乙基、异丙基、正丁基、异丁基、甲氧基、乙氧基、异丙氧基、环丙基氧基或氨基亚甲基；
    R6各自独立地选自H、F、Cl、羟基、氰基、氨基、甲基、乙基、甲氧基或乙氧基；
    作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
  20. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中：
    R1选自氰基、羟甲基、醛基、氨基甲酰基、甲磺酰基亚甲基、甲基氨基亚甲基、氨基亚甲基、1-羟基乙基、
    Figure PCTCN2014093298-appb-100014
    R2选自H或F；
    环M为环丙基；
    R4选自氰基、三氟甲基、氨基甲酰基或-S(＝O)2CH3；
    当环D不存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0至5个R5取代；
    当环D存在时，环E为苯基，所述苯基任选进一步被0至3个R5取代；环D，包括环E与之相连的两个原子一起形成取代或未取代的
    Figure PCTCN2014093298-appb-100015
    当被取代时，任选被1至3个R6取代；
    R5各自独立地选自H、F、Cl、氰基、甲氧基或氨基亚甲基；
    R6各自独立地选自H、F、Cl或甲基；
    作为选择，当两个R6连接在同一个原子上时，可与它们相连的原子一起形成环丙基。
  21. 根据权利要求1所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，其中化合物选自：
    Figure PCTCN2014093298-appb-100016
    Figure PCTCN2014093298-appb-100017
  22. 根据权利要求1～21中任一项所述的化合物、其立体异构体或其药学上可以接受的盐，其中所述的盐选自盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、乙酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、苹果酸盐、草酸盐、酒石酸盐、苯甲酸盐、肉桂酸盐、对甲苯磺酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、三氟乙酸、三氟甲磺酸盐或它们的组合。
  23. 一种药物组合物，所述药物组合物含有治疗有效剂量的根据权利要求1～22中任意一项所述的化合物或其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，以及药学上可接受的载体或者赋形剂。
  24. 权利要求1～22中任意一项所述的化合物或其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药在制备治疗与丝氨酸蛋白酶有关的疾病中的药物中的用途。
  25. 根据权利要求24中所述的用途，其中所述的与丝氨酸蛋白酶有关的疾病选自血栓栓塞疾病。
  26. 根据权利要求24-25所述的用途，其中所述丝氨酸蛋白酶选自凝血因子Xa。
  27. 根据权利要求26所述的用途，其中血栓栓塞疾病选自动脉心血管血栓栓塞疾病、静脉心血管血栓栓塞疾病以及心脏相关血栓栓塞疾病。
  28. 根据权利要求27所述的用途，其中所述的血栓栓塞疾病选自静脉血栓形成、深部静脉血栓形成、血栓性静脉炎、脑动脉血栓形成、动脉栓塞、冠状动脉血栓形成、肺栓塞、肾栓塞，脑栓塞，动脉粥样硬化、急性冠状综合征、不稳定心绞痛、急性冠状动脉综合征、心肌梗塞、动脉硬化症、局部缺血瘁死、暂时性的缺血、外用阻塞性动脉疾病、中风或者脑血管疾病。
  29. 含有权利要求1～22中任意一项所述的化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药的药物试剂，其中所 述药物试剂包括：治疗上有效剂量的第一种治疗剂和第二种治疗剂，其中所述第一治疗剂是权利要求1～22中任意一项所述化合物，或者其立体异构体、氮氧化合物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可以接受的盐、共晶或前药，所述第二治疗剂是选自第二种Xa因子抑制剂、抗凝剂、抗血小板剂、凝血酶抑制剂、溶血栓剂以及纤维蛋白溶解剂中的至少一种试剂。
  30. 根据权利要求29所述的药物试剂，其中所述第二种治疗剂是选自华法林、未分级肝素、低分子量肝索、合成的五糖、水蛭素、阿加曲班、阿司匹林、布洛芬、甲氧奈丙酸、舒林酸、吲哚美辛、甲芬那酸、屈噁昔康、双氯芬酸、苯磺唑酮、吡罗昔康、噻氯匹定、氯吡格雷、替罗非班、埃替菲巴肽、阿昔单抗美加拉群、二硫酸水蛭素、组织纤溶酶原激活剂、修饰的组织型纤溶酶原激活剂、复合纤溶酶链激酶、尿激酶和链激酶中的至少一种试剂。
  31. 权利要求30所述的药物试剂，其中所述第二种治疗剂是至少一种抗血小板剂。
  32. 权利要求31所述的药物试剂，其中所述抗血小板剂是阿司匹林和/或氯吡格雷。
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