WO2015071595A1 - Filtre biocompatible et procédé de fabrication d'un filtre biocompatible - Google Patents

Filtre biocompatible et procédé de fabrication d'un filtre biocompatible Download PDF

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Yong Chen
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    • B01L2300/0681—Filter

Definitions

  • a transparent plane mask having a network of optical patterns is available
  • the crosslinkable biocompatible composition is crosslinked by ultraviolet radiation illumination.
  • the optical patterns are arranged in the array in a hexagonal arrangement.
  • the optical patterns have a surface density of the order of 1 ⁇ 10 5 pattern / cm 2 .
  • FIG. 6 illustrates a primary mold obtained during a third step of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention.
  • FIG. 8 illustrates a secondary mold obtained during a fifth step of a method of manufacturing a filter according to one embodiment of the invention.
  • crosslinking is meant in particular a polymerization of the composition.
  • the biocompatible component covalently photocrosslinkable is, for example, polyethylene glycol diacrylate (PEG-DA).
  • PEG-DA polyethylene glycol diacrylate
  • PEG-DA is a polyethylene glycol modified with at least one acrylate group so as to make it crosslinkable or polymerizable.
  • the stiffening support 15 has a generally circular or polygonal ring shape.
  • the stiffening support 15 circumferentially surrounds the filtration membrane 8 in the extension plane P.
  • the stiffening support 15 may for example have an external transverse space, also measured according to the extension plane P, substantially between ten and twenty millimeters.
  • the external transverse bulk defines the maximum bulk of the stiffening support 15 in the extension plane P.
  • the suction enclosure 45 is thus in particular provided with suction means 52 able to create a depression of the gas in said enclosure.

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Abstract

Filtre (4) biocompatible, notamment pour isoler et cultiver des cellules contenues dans un échantillon liquide, comprenant une membrane de filtration (8) s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant une face d'entrée de liquide, une face de sortie de liquide et une pluralité de pores de filtration traversants. La membrane de filtration (8) est formée en une composition biocompatible réticulée. Le filtre (4) comporte un support de rigidification (15) sur lequel est montée la membrane de filtration (8).

Description

Filtre biocompatible et procédé de fabrication d'un filtre biocompatible
L'invention concerne le domaine des filtres biocompatible pour isoler des cellules contenues dans un échantillon liquide et des procédés pour fabriquer de tels filtres biocompatibles.
Plus précisément, l'invention concerne le domaine des filtres biocompatibles, notamment pour isoler et cultiver des cellules contenues dans un échantillon liquide, comprenant une membrane de filtration s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant une face d'entrée de liquide et une face de sortie de liquide, et une pluralité de pores de filtration traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide à la face de sortie de liquide au moyen d'une surface intérieure de pore, les pores de filtration comportant chacun une ouverture d'entrée à l'endroit de la face d'entrée de liquide et une ouverture de sortie à l'endroit de la face de sortie de liquide, le filtre comprenant en outre un support de rigidification sur lequel est montée la membrane de filtration. L'invention est tout spécialement destinée à isoler et cultiver des cellules rares contenues dans un échantillon de liquide biologique, tel que du sang, du liquide céphalo-rachidien ou un autre épanchement ou liquide biologique.
Elle s'applique ainsi particulièrement à l'isolement de cellules rares dans un échantillon sanguin, par exemple des cellules tumorales ou des cellules foetales en général et trophoblastiques en particulier présentes dans un échantillon sanguin prélevé sur un individu. L'échantillon sanguin peut auparavant avoir été dilué dans un tampon liquide approprié comme cela est connu de l'état de l'art.
Du fait de leur rareté particulière de telles cellules rares sont présentes en quantités extrêmement faibles dans les échantillons sanguins étudiés, typiquement seulement quelques cellules par échantillon voir une cellule unique, et ce malgré les volumes importants des échantillons sanguins en question, compris entre un et cinquante millilitres.
Il est donc souhaitable de pouvoir cultiver les cellules isolées sur le filtre, en particulier dans des milieux adaptés et en présence de facteurs de croissance adéquats, de sorte à pouvoir étudier lesdites cellules et/ou amplifier la quantité de matériau cellulaire récupéré. Il est également souhaitable de minimiser le plus possible les bruits de mesure lors de l'analyse ultérieure du résidu de filtration accumulé sur le filtre.
Par « étudier lesdites cellules », on entend en particulier la réalisation d'examen de laboratoires de routine ainsi que l'observation des cellules sous microscope, par exemple suite à l'application de techniques de biologie moléculaire, de cytogénétique ou de FISH (acronyme de « Fluorescence In Situ Hybridization »), pour le diagnostic d'anomalies génétiques dans des cellules tumorales ou trophoblastiques.
Le document FR 2 883 488 dévoile un filtre poreux permettant l'isolation de cellules rares qui comporte une membrane en polycarbonate microporeuse montée dans un support rigide en PVC. Ce filtre ne permet cependant pas la culture des cellules isolées de sorte à pouvoir les étudier.
Selon un premier aspect, l'invention a pour objet un filtre biocompatible, notamment pour isoler et cultiver des cellules contenues dans un échantillon liquide, comprenant une membrane de filtration s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant une face d'entrée de liquide et une face de sortie de liquide, et une pluralité de pores de filtration traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide à la face de sortie de liquide au moyen d'une surface intérieure de pore, les pores de filtration comportant chacun une ouverture d'entrée à l'endroit de la face d'entrée de liquide et une ouverture de sortie à l'endroit de la face de sortie de liquide, la membrane de filtration étant formée en une composition biocompatible réticulée, et le filtre comportant un support de rigidification sur lequel est montée la membrane de filtration.
Selon une réalisation, le support de rigidification est formé en une composition biocompatible réticulée.
Selon une réalisation, la membrane de filtration et le support de rigidification sont une unique pièce formée en une composition biocompatible réticulée, de sorte à constituer un ensemble rigide autoporteur.
Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente.
Selon une réalisation, le composant biocompatible photoréticulé de manière covalente est un polyéthylène glycol.
Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement.
Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide et un collagène réticulé.
Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.
Selon une réalisation, le support de rigidification entoure circonférentiellement la membrane de filtration dans le plan d'extension.
Selon une réalisation, la face d'entrée de liquide et la face de sortie de liquide de la membrane de filtration présentent chacune une forme générale surfacique plate, sont sensiblement parallèles entre elles et sont séparées par une épaisseur de la membrane, mesurée selon une direction axiale perpendiculaire à la face d'entrée de liquide et la face de sortie de liquide et le support de rigidification présente un encombrement axial, mesuré selon la direction axiale, supérieur à l'épaisseur de la membrane.
Selon une réalisation, l'encombrement axial du support est sensiblement compris entre dix micromètres et cent micromètres et de préférence de l'ordre de cinquante micromètres.
Selon une réalisation, l'épaisseur de la membrane est sensiblement comprise entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre vingt et trente micromètres.
Selon une réalisation, le support de rigidification présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversal intérieur sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversal extérieur sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.
Selon une réalisation, la face d'entrée de liquide et la face de sortie de liquide de la membrane de filtration présentent chacune une forme générale de disque ou de polygone ayant un encombrement transversal sensiblement compris entre cinq et dix millimètres. Selon une réalisation, le support de rigidification comporte un revêtement adhésif inactif, en particulier une colle activable par pression ou une colle recouverte d'une membrane de protection détachable, de façon à permettre un encollage ultérieur du support de rigidification sur un support d'observation. Selon une réalisation, une dimension maximale de l'ouverture de sortie de chaque pore de filtration est supérieure à une dimension maximale de l'ouverture d'entrée dudit pore.
Selon un deuxième premier aspect, l'invention a pour objet un dispositif de filtration, notamment pour isoler des cellules contenues dans un échantillon liquide, comportant un filtre tel que décrit ci-avant, dans lequel le filtre est monté, par son support de rigidification, dans le dispositif de filtration, entre un moyen de fourniture de liquide du dispositif de filtration, apte à fournir du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face d'entrée de liquide de la membrane de filtration, d'une part, et un moyen d'absorption de liquide du dispositif de filtration, apte à absorber du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face de sortie de liquide de la membrane de filtration, d'autre part.
Selon un deuxième premier aspect, l'invention a pour objet un procédé de fabrication d'un filtre autoporteur biocompatible dans lequel :
• on dispose d'un masque plan transparent comportant un réseau de motifs optiques,
• on dispose une résine photosensible fluide sur le masque,
· on forme un moule primaire comportant des motifs en creux par une illumination inclinée/rotative de la résine photosensible sur le masque,
• on dispose sur le moule primaire un polymère à haute perméabilité au gaz fluide,
• on forme un moule secondaire comportant des motifs en saillie par une réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz sur le moule primaire,
· on dispose le moule secondaire dans une enceinte d'aspiration en regard d'un contre moule,
• on applique une dépression de gaz à l'enceinte d'aspiration et on injecte dans l'enceinte d'aspiration, entre le moule secondaire et le contre moule, une composition biocompatible réticulable, de sorte à disposer la composition biocompatible réticulable en contact intime avec les motifs en saillie du moule secondaire,
• on forme une membrane de filtration d'un filtre biocompatible par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire et le contre moule, et
• on forme un support de rigidification du filtre biocompatible sur lequel est montée la membrane de filtration.
Selon une réalisation, on forme la membrane de filtration et le support de rigidification du filtre biocompatible en une unique pièce constituant un ensemble rigide autoporteur, par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire et le contre moule.
Selon une réalisation, on forme le contre moule par réticulation d'un polymère à haute perméabilité au gaz fluide.
Selon une réalisation, le polymère à haute perméabilité au gaz fluide est un siloxane.
Selon une réalisation, le siloxane est le polydiméthylsiloxane.
Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible photoréticulable de manière covalente. Selon une réalisation, le composant biocompatible photoréticulable de manière covalente est un polyéthylène glycol.
Selon une réalisation, on réticule la composition biocompatible réticulable par une illumination par rayonnements ultraviolets.
Selon une réalisation, la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible réticulable ioniquement.
Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide ou un collagène réticulé.
Selon une réalisation, le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.
Selon une réalisation, chaque motif optique présente une forme générale circulaire ou ovale.
Selon une réalisation, les motifs optiques sont disposés dans le réseau en un arrangement hexagonal.
Selon une réalisation, les motifs optiques présentent une densité surfacique de l'ordre de 1 x 105 motif/cm2.
Selon un mode de réalisation, les motifs optiques sont des motifs transparents séparés par des zones opaques, et dans lequel la résine photosensible est une résine photosensible positive.
Selon un autre mode de réalisation, les motifs optiques sont des motifs opaques séparés par des zones transparentes, et dans lequel la résine photosensible est une résine photosensible négative.
Selon une réalisation, le contre moule comporte un plateau central entouré d'une dépression, le plateau central présentant une face d'extension sensiblement plane, la dépression présentant une profondeur axiale, mesurée selon une direction axiale perpendiculaire à la face d'extension, sensiblement comprise entre dix micromètres et cent micromètres et de préférence de l'ordre de cinquante micromètres.
Selon une réalisation, la dépression présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversale intérieure sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversale extérieure sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.
On décrit maintenant brièvement les figures des dessins.
La figure 1 A est un schéma correspondant à une coupe transversale d'un dispositif de filtration selon l'invention. La figure 1 B est un schéma de détail illustrant un détail d'une variante du dispositif de filtration de la figure 1 A. La figure 2A est une illustration en élévation d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 2B est une vue de dessus du filtre de la figure 2A.
La figure 2C est une vue de coupe transversale selon l'axe ll-ll du filtre de la figure 2B.
La figure 3A est une vue de dessus d'un masque utilisé dans une première étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 3B est une vue de coupe transversale selon l'axe l ll-ll l du masque de la figure 3A. La figure 4 illustre une deuxième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 5 illustre une troisième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 6 illustre un moule primaire obtenu lors d'une troisième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 7 illustre une quatrième et une cinquième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 8 illustre un moule secondaire obtenu au cours d'une cinquième étape d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
La figure 9 illustre un contre moule d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention, et
La figure 10 illustre des sixième, septième et huitième étapes d'un procédé de fabrication d'un filtre selon un mode de réalisation de l'invention.
Ci-après un exposé détaillé de plusieurs modes de réalisation de l'invention assorti d'exemples et de référence aux dessins. On notera que les dessins ne sont pas à l'échelle et en particulier que les proportions et les dimensions des pores de filtration du filtre ainsi que les épaisseurs des éléments du filtre et des masques, moules et contre moules du procédé de fabrication ont été considérablement agrandies pour permettre une représentation schématique des éléments du dispositif selon l'invention.
Les figures 1 A et 1 B illustrent un dispositif de filtration 1 , notamment destiné à isoler des cellules 2 contenues dans un échantillon liquide 3. L'échantillon liquide 3 peut avoir un volume nettement supérieur à une centaine de microlitres, par exemple de quelques millilitres, par exemple entre un et cinquante millilitres.
Ce dispositif 1 comporte un filtre 4, un moyen de fourniture de liquide 5 et un moyen d'absorption de liquide 6. Le filtre 4 est monté dans le dispositif de filtration 1 entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6. La figure 1 A illustre un mode de réalisation dans lequel le filtre 4 est directement monté entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6. La figure 1 B illustre une variante de réalisation dans laquelle le filtre 4 est monté respectivement entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6 par l'intermédiaire de deux joints intermédiaires respectifs 7 permettant d'assurer l'étanchéité du montage. Notamment, à l'état assemblé du dispositif 1 , le filtre 4 est maintenu flottant entre les deux joints intermédiaires 7 à l'équilibre, ce qui assure un lissage des contraintes exercées sur la partie mécanique du filtre 4.
On se réfère à présent également aux figures 2A, 2B et 2C qui illustrent plus précisément un filtre 4 selon l'invention, destiné en particulier à isoler et cultiver des cellules 2 rares contenues dans un échantillon de liquide 3.
Un tel filtre 4 comprend une membrane de filtration 8 s'étendant sensiblement selon un plan d'extension P et comportant une face d'entrée de liquide 9 et une face de sortie de liquide 10. Comme illustré sur la figure 2C, la membrane de filtration 8 comporte en outre une pluralité de pores de filtration 1 1 traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide 9 à la face de sortie de liquide 10 au moyen d'une surface intérieure de pore 12. Les pores de filtration 1 1 comportent chacun une ouverture d'entrée 13 à l'endroit de la face d'entrée de liquide 9 et une ouverture de sortie 14 à l'endroit de la face de sortie de liquide 10.
Du liquide de l'échantillon de liquide peut ainsi circuler à travers la membrane de filtration 8, et en particulier à travers les pores de filtration 1 1 de la membrane de filtration 8.
L'ouverture d'entrée 13 de chaque pore traversant est adaptée pour retenir les cellules 2 rares recherchées dans l'échantillon liquide 3. Ainsi, une dimension maximale de l'ouverture d'entrée 13 de chaque pore traversant peut avantageusement être choisie de façon à être inférieure à une dimension minimale moyenne des cellules 2 rares recherchées et, autant que possible, supérieure aux dimensions des constituants de l'échantillon de liquide qu'il n'est pas souhaitable d'isoler (par exemple des micro-organismes, cellules ou éléments du plasma sanguin non recherchés).
En outre, une dimension maximale de l'ouverture de sortie 14 de chaque pore de filtration 1 1 traversant peut être supérieure à la dimension maximale de l'ouverture d'entrée 13 dudit pore traversant. La surface intérieure 12 de chaque pore de filtration 1 1 traversant peut ainsi présenter une forme générale de tronc, en particulier une forme générale tronconique.
Dans l'ensemble de la description, on entend par « dimension maximale » d'un élément considéré, la plus grande distance séparant deux points de l'élément. Ainsi, si l'élément considéré est un disque, une « dimension maximale » est par exemple un diamètre de ce disque. Si l'élément est un cube, une « dimension maximale » est par exemple une diagonale de ce cube.
De cette façon, dès lors que les constituants de l'échantillon de liquide 3 qu'il n'est pas souhaitable d'isoler ont franchi l'ouverture d'entrée 13 du pore, la section de ce dernier va en s'agrandissant en direction de l'ouverture de sortie 14 réduisant ainsi fortement la probabilité de voir lesdits constituants se bloquer et s'accumuler dans le pore.
Plus précisément, la circonférence de l'ouverture d'entrée 13 de chaque pore de filtration traversant 1 1 est par exemple apte à s'inscrire entre un premier et un second cercle concentriques ayant respectivement un diamètre de trois micromètres et de dix micromètres. Dans un mode de réalisation avantageux, lesdits premier et second cercles concentriques peuvent avoir respectivement un diamètre de quatre micromètres et de neuf micromètres.
La circonférence de l'ouverture de sortie 14 de chaque pore de filtration traversant 1 1 peut-être, quant à elle, apte à s'inscrire entre un premier et un second cercle concentriques ayant respectivement un diamètre de huit micromètres et de vingt-cinq micromètres et ayant avantageusement respectivement un diamètre de treize micromètres et de vingt micromètres.
L'ouverture d'entrée 13 de chaque pore traversant 1 1 présente une forme générale circulaire ou ovale, de façon à être adaptée aux cellules à isoler et à pouvoir être réalisée de façon simple et peu coûteuse. L'ouverture de sortie 14 de chaque pore traversant 1 1 peut également présenter une forme générale circulaire, ovale ou une forme générale de polygone convexe, en particulier un hexagone pour les raisons détaillées ci-après. On comprend ainsi que le moyen de fourniture de liquide 5 est ainsi apte à fournir du liquide de l'échantillon de liquide 3 à l'endroit de la face d'entrée de liquide 9 de la membrane de filtration 8 tandis que le moyen d'absorption de liquide 6 est apte à absorber du liquide d'un échantillon de liquide 3 à l'endroit de la face de sortie de liquide 10 de la membrane de filtration 8.
Le moyen de fourniture de liquide 5 peut par exemple être un tube d'arrivée de liquide ou un réservoir de stockage de l'échantillon liquide. Le moyen d'absorption de liquide 6 peut être une pompe absorbant le liquide par dépression ou mise sous vide ou un dispositif d'absorption par capillarité absorbant le liquide par capillarité. Le filtre 4 comporte encore un support de rigidification 15 sur lequel est montée la membrane de filtration 8.
Le filtre 4 peut en particulier être monté par son support de rigidification 15, dans le dispositif de filtration 1 , entre le moyen de fourniture de liquide 5 et le moyen d'absorption de liquide 6 comme illustré sur les figures 1 A et 1 B. La membrane de filtration 8 est formée en une composition biocompatible réticulée.
Dans le mode de réalisation de l'invention illustré sur les figures 3A, 3B et 3C, la membrane de filtration 8 et le support de rigidification 15 sont une unique pièce formée en une composition biocompatible réticulée, de sorte à constituer un ensemble rigide autoporteur.
Par « biocompatible », on entend que la composition biocompatible est apte à être en contact avec des cellules biologiques sans dégrader lesdites cellules, en particulier de sorte à fournir un support d'adhésion, de multiplication et de croissance cellulaire. La composition biocompatible peut en outre présenter une auto-fluorescence faible ou négligeable de sorte à permettre l'observation des cellules 2 sous microscope en minimisant le bruit de mesure. Un composant biocompatible présentant une auto-fluorescence faible est par exemple le polyéthylène glycol (PEG) tel que détaillé ci-après. Dans la suite de la description, on utilise les expressions « réticulé » et « réticulable », étant entendu que « composition réticulable » ou « composant réticulable » désigne la composition ou le composant avant ou après réticulation, et « composition réticulée » ou « composant réticulé » désigne la composition ou le composant après réticulation. Il est également entendu qu'une composition réticulée, respectivement un composant réticulé, est une composition réticulable, respectivement composant réticulable.
Par réticulation, on entend notamment une polymérisation de la composition.
Dans un premier mode de réalisation, la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible réticulé de manière covalente. On entend notamment par « réticulé de manière covalente », une liaison covalente par réticulation par voie radicalaire.
De façon générale, un oxyde de polyalkylène ayant au moins un groupe fonctionnel capable de subir une polymérisation par voie radicalaire convient comme composant biocompatible réticulé de manière covalente. Un exemple d'oxyde de polyalkylène est un polyéthylène glycol modifié avec au moins un groupe acrylate pour le rendre polymérisable ou réticulable. Un acrylate de polyéthylène glycol, comme le diacrylate de polyéthylène glycol, est apte à subir une polymérisation par voie radicalaire. Divers groupes fonctionnels comme des groupes acrylate, des groupe vinyle, des groupes méthacrylate, et similaires peuvent également être utilisés pour modifier le polyéthylène glycol de sorte à le rendre réticulable.
Diverses façons de modifier le polyéthylène glycol pour le rendre polymérisable ou réticulable peuvent être mises en oeuvre. Une manière possible consiste à le traiter avec un halogénure d'acryloyle tel qu'un chlorure d'acryloyle. Une réaction d'estérification entre le polyéthylène glycol et un acide acrylique peut être conduite dans un solvant organique comme le toluène pour rendre le polyéthylène glycol polymérisable. Un acide méthacrylique, un méthacrylate d'alkyle ou un halogénure d'acryloyle peut réagir de façon similaire avec le PEG de sorte à obtenir un dérivé réticulable de PEG comme décrit par exemple dans Fukui, S. and Tanaka, A., 1976; FEBS. Letters 66:179. De façon alternative, un alkoxide de PEG peut réagir avec un gaz d'acétylène de sorte à produire un éther vinylique de PEG pour obtenir un dérivé réticulable de PEG comme décrit dans Mathias, L.J., Canterberry, J.B., and South, M., 1982; J. Polym. Sci., Polym. Lett. Ed. 23:473. Le PEG peut réagir avec de l'anhydride méthacrylique pour donner du diméthacrylate de PEG. Une réaction entre le PEG et un chlorure d'allyle dans un solvant à sec, catalysée par une petite quantité de chlorure stannique peut également résulter en un PEG réticulable. De façon générale, d'autres techniques connues du domaine pourront être utilisées pour obtenir un dérivé de polyéthylène glycol réticulable.
Des polyéthylènes glycol ou PEG avec une grande variété de poids moléculaires peuvent être modifiés pour être utilisés dans la présente invention. Par exemple des polyéthylènes glycol réticulables ou des dérivés de polyéthylène glycol réticulable ayant un poids moléculaire allant de 200 à 100,000 peuvent être utilisés.
Des polyéthylènes glycol réticulables ou des dérivés de polyéthylène glycol réticulable ayant un poids moléculaire compris dans une gamme intermédiaire allant de 1 ,000 à 38,000 peuvent avantageusement être utilisés et modifiés avec un groupement acrylate comme décrit ci-avant, par exemple par réaction avec un chlorure d'acryloyle.
En particulier, la composition biocompatible réticulée peut comprendre un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente. Ainsi un polyéthylène glycol peut être modifié de sorte à le rendre photoréticulable de manière covalente, en particulier par polymérisation par voie radicalaire, par illumination avec une radiation électromagnétique comme une lumière visible, ultraviolette ou laser.
Le composant biocompatible photoréticulable de manière covalente est par exemple le diacrylate de polyéthylène glycol (PEG-DA). Le diacrylate de polyéthylène glycol (PEG-DA) est un polyéthylène glycol modifié avec au moins un groupe acrylate de sorte à le rendre réticulable ou polymérisable.
Pour photoréticuler le diacrylate de polyéthylène glycol, un initiateur radicalaire peut être ajouté, par exemple une combinaison d'un photoinitiateur tel qu'une éosine éthylique, un cocatalyseur comme le triéthanolamine et, optionnellement d'un comonomère comme une 1 -vinyl 2-pyrrolidinone. D'autres photoinitiateurs, cocatalyseurs et comonomères pourront être utilisés pour photoréticuler le diacrylate de polyéthylène glycol. Ainsi par exemple si le PEG-DA est photoréticulé par une illumination par des rayonnements ultravioletsO (UV), des photoinitiateurs possibles comprennent entre autre une 2,2-diméthoxy-2-phényl acétophénone, un éther éthylique de benzoïne, une 2,2-diméthyl phénoxy-acétophénone, des benzophénones. D'autres cocatalyseurs possibles comprennent par exemple la triéthanolamine, la diéthanolamine de méthyl, la triéthylamine et l'arginine. Il est à noter que la quantité et le type de comonomère utilisé pourra varier. Dans un second mode de réalisation de l'invention, la composition biocompatible réticulée comporte au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement. Le second mode de réalisation peut être combiné avec le premier mode de réalisation auquel cas la composition biocompatible réticulée pourra comporter au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement et au moins un composant biocompatible réticulé de manière covalente, en particulier au moins un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente.
Le composant biocompatible réticulé ioniquement peut être choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide et un collagène réticulé. Ainsi en particulier le composant biocompatible réticulé ioniquement peut être choisi parmi de l'alginate et du saccharose. Par alginate, on entend ici en particulier des sels d'acide alginique.
Plus généralement, des composants biocompatibles réticulés ioniquement convenables peuvent par exemple être choisit parmi des polysaccharides comme l'alginate, des polysaccharides naturels comme le chitosan, la gomme gellane, la gomme xanthane, l'acide hyaluronique, l'héparine, la pectine et le carraghénane, les oligosaccharides comme le saccharose ou des collagènes réticulables.
On entend ici par collagènes tout peptide de nature collagénique, dont notamment la gélatine. Un exemple de collagène réticulable est par exemple décrit dans la demande de brevet européen publiée sous le numéro EP0575273.
Comme illustré sur les figures 2A, 2B et 2C, le support de rigidification 15 présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal. Le support de rigidification 15 entoure circonférentiellement la membrane de filtration 8 dans le plan d'extension P. Le support de rigidification 15 peut par exemple présenter un encombrement transversal extérieur, également mesuré selon le plan d'extension P, sensiblement compris entre dix et vingt millimètres. L'encombrement transversal extérieur définit l'encombrement maximal du support de rigidification 15 dans le plan d'extension P.
Le support de rigidification 15 peut en outre présenter un encombrement transversal intérieur, mesuré selon le plan d'extension P, sensiblement compris entre cinq et dix millimètres. L'encombrement transversal intérieur définit la dimension de la surface intérieure entourée circonférentiellement par le support de rigidification 15. L'encombrement transversal intérieur du support de rigidification 15 est ainsi sensiblement similaire à l'encombrement transversal de la membrane de filtration 8. La face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10 de la membrane de filtration 8 peuvent présenter chacune une forme générale de disque ou de polygone ayant un encombrement transversal, mesuré selon le plan d'extension P, sensiblement compris entre cinq et dix millimètres.
La face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10 de la membrane de filtration 8 présentent chacune une forme générale surfacique plate. La face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10 sont sensiblement parallèles entre elles et sont séparées par une épaisseur de la membrane, mesurée selon une direction axiale D perpendiculaire à la face d'entrée de liquide 9 et la face de sortie de liquide 10.
L'épaisseur de la membrane est par exemple sensiblement comprise entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre trente et cinquante micromètres. Une telle épaisseur de la membrane peut en particulier permettre un élargissement appréciable de l'ouverture de sortie 14 des pores par rapport à l'ouverture d'entrée 13 des pores.
Le support de rigidification 15 présente un encombrement axial, mesuré selon la direction axiale D perpendiculaire au plan d'extension P, sensiblement compris entre dix micromètres et cent micromètres et de préférence de l'ordre de cinquante micromètres.
L'encombrement axial du support est ainsi supérieur à l'épaisseur de la membrane. L'encombrement axial du support de rigidification 15 peut en particulier être supérieur à dix fois l'épaisseur de la membrane.
De cette façon, le support de rigidification 15 est apte à maintenir la membrane tendue en évitant que celle-ci se replie sur elle-même, et permet de la sorte de constituer un ensemble rigide autoporteur.
Dans une variante de réalisation de l'invention, le support de rigidification 15 peut être renforcé par ajout d'une pièce de renfort externe non représentée sur les figures de sorte à augmenter encore la rigidité du filtre. Une telle pièce de renfort externe peut par exemple être un anneau métallique ou polymère monté sur un côté axial ou des deux côtés axiales du support de rigidification 15.
Dans une variante de réalisation, le support de rigidification 15 peut comporter un revêtement adhésif 16 inactif, en particulier une colle activable par pression ou une colle recouverte d'une membrane de protection détachable, de façon à permettre un encollage ultérieur du support de rigidification 15 sur un support d'observation non illustré sur les figures. Un tel support d'observation peut par exemple être introduit dans un microscope optique et permettre une observation et un examen des cellules 2 isolées sur le filtre 4. On va maintenant décrire un procédé de fabrication d'un filtre 4 selon un mode de réalisation de l'invention en référence aux figures 3A, 3B et 4 à 10.
En références aux figures 3A et 3B, dans une première étape du procédé, on dispose d'un masque 17 plan transparent comportant un réseau 18 de motifs optiques 19. Ce réseau est par exemple disposé sur une surface supérieure du masque.
Le masque 17 peut par exemple être une lame de verre 20 sur laquelle le réseau 18 de motifs est dessiné par lithographie d'une couche mince de chrome 21 . Dans un mode de réalisation de l'invention, chaque motif optique 19 peut présenter une forme générale circulaire ou polygonée.
Dans un mode de réalisation de l'invention, chaque motif optique 19 peut présenter des formes, dimensions et caractéristiques similaires à celles décrites ci-dessus pour les ouvertures d'entrée 13 de chaque pore traversant 1 1 . Dans un autre mode de réalisation, chaque motif optique 19 peut présenter des formes, dimensions et caractéristiques similaires à celles décrites ci-dessus pour les ouvertures de sortie 14 de chaque pore de filtration traversant 1 1 .
Une dimension maximale de chaque motif optique 19 peut être comprise entre deux micromètres et dix micromètres, de préférence comprise entre trois micromètres et sept micromètres. Dans le mode de réalisation des figures 3A et 3B, les motifs optiques 19 sont disposés dans le réseau 1 8 en un arrangement de réseau triangulaire.
De cette façon il est possible d'avoir une dimension maximale de l'ouverture de sortie 14 de chaque pore traversant la plus grande possible.
Dans un mode de réalisation de l'invention plus particulièrement adapté à retenir des cellules 2 rares telles que des cellules 2 tumorales ou des trophoblastes contenues dans un échantillon liquide 3, les motifs optiques 19 peuvent présenter une densité surfacique de l'ordre de 1 x 105 motif/cm2.
En référence à la figure 4, dans une deuxième étape du procédé, on dispose une résine photosensible 22 sur le masque 17. En particulier, on dispose la résine photosensible sur la face supérieure du masque.
Dans un premier mode de réalisation d'un procédé de fabrication de filtre 4 selon l'invention, les motifs optiques 19 sont des motifs transparents 23 séparés par des zones opaques 24. Dans ce mode de réalisation, la résine photosensible est une résine photosensible positive, par exemple une résine telle que la résine Ι'ΑΖ® 40XT.
Dans un second mode de réalisation d'un procédé de fabrication de filtre 4 selon l'invention, les motifs optiques 19 sont des motifs opaques 25 séparés par des zones transparentes 26. Dans ce mode de réalisation, la résine photosensible est une résine photosensible négative, par exemple une résine telle que la résine SU-3050.
Dans une troisième étape du procédé illustrée figure 5, on forme un moule primaire 27 comportant des motifs en creux 28 par une illumination inclinée/rotative de la résine photosensible sur le masque 17. La figure 6 représente plus particulièrement un exemple d'un moule primaire 27 formé sur le masque 17 par photolithographie de la résine photosensible et présentant une première face 29 en contact avec le masque 17 ainsi qu'une seconde face 30, libre, en regard de la première face 29. Les motifs en creux 28 s'étendent selon un axe sensiblement perpendiculaire à la première face 29 et au masque 17, entre une extrémité de première face 31 et une extrémité de seconde face 32.
L'illumination est par exemple une illumination par rayonnement 33 ultraviolet, visible ou laser.
L'illumination inclinée/rotative de la résine photosensible peut en particulier être une illumination par une face arrière 34 du masque 17 transparent opposée à la face sur laquelle est disposée la résine photosensible, communément appelée illumination par la face arrière 34.
Par illumination rotative, on entend que le masque 17 avec la résine photosensible sur le masque 17 pivotent autour d'un axe sensiblement perpendiculaire à la première face 29 et au masque 17 pendant l'illumination. Par illumination inclinée, on entend que l'illumination de la résine photosensible est réalisée avec un certain angle d'illumination 35 par rapport à l'axe sensiblement perpendiculaire à la première face 29 et au masque 17. Ledit angle d'illumination 35 est par exemple un angle d'illumination 35 compris entre dix et quatre-vingt-cinq degrés. De cette façon, les surfaces intérieures des motifs en creux 36 du moule primaire 27 peuvent présenter avec la première face 29 un angle non perpendiculaire, en particulier un angle défini par l'angle d'illumination 35. Les motifs en creux 28 du moule primaire 27 peuvent présenter des formes et dimensions similaires aux formes et dimensions des pores de la membrane filtrante d'un filtre 4 selon l'invention. Ainsi les motifs en creux 28 du moule primaire 27 peuvent présenter une dimension transversale maximale à leur extrémité de seconde face 32 supérieure à une dimension transversale maximale à leur extrémité de première face 31 . La surface intérieure des motifs en creux 28 peut ainsi présenter une forme générale de tronc, en particulier une forme générale tronconique.
Dans une quatrième étape du procédé illustrée figure 7, on dispose sur le moule primaire 27 un polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37. Le polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 est en particulier disposé en contact intime avec les surfaces intérieures des motifs en creux 36 du moule primaire 27.
Dans un mode de réalisation, le polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 est un siloxane, en particulier le polydiméthylsiloxane (PDMS). Dans une cinquième étape du procédé, on forme un moule secondaire 38 comportant des motifs en saillie 39 par une réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 sur le moule primaire 27.
Les motifs en saillie 39 sont en particulier obtenus par réticulation du polymère disposé dans les motifs en creux 28 du moule primaire 27. Les motifs en saillie 39 du moule secondaire 38 peuvent ainsi présenter des formes et dimensions similaires et inversées par rapport aux formes et dimensions des pores de la membrane filtrante d'un filtre 4 selon l'invention.
Ainsi en particulier chaque motif en saillie peut s'étendre selon un axe sensiblement perpendiculaire à une face de moulage 40 du moule secondaire 38, entre une extrémité de face de moulage 41 et une extrémité libre 42. Chaque motif en saillie peut présenter une dimension transversale maximale à son extrémité de face de moulage 41 supérieure à une dimension transversale maximale à son extrémité libre 42. Une surface extérieure des motifs en saillie 43 peut ainsi présenter une forme générale de tronc, en particulier une forme générale tronconique.
Pour réaliser la réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz, on peut par exemple mélanger le polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 avec un agent de réticulation 44 sur le moule primaire 27 puis chauffer ledit mélanger sur le moule primaire 27.
Dans une sixième étape du procédé illustrée figure 10, on dispose le moule secondaire 38 dans une enceinte d'aspiration 45 en regard d'un contre moule 46.
Dans un mode de réalisation du procédé selon l'invention, le contre moule 46 peut être formé par réticulation d'un polymère à haute perméabilité au gaz fluide 37 de façon similaire à celle qui vient d'être décrite pour le moule secondaire 38. Dans un autre mode de réalisation, le contre moule 46 peut être fabriqué par action mécanique, par exemple par retrait de matière d'une pièce de polymère, par des procédés d'usinage, ou par dépôt de matière, par exemple par impression tridimensionnelle de polymère.
La figure 9 illustre un mode de réalisation d'un contre moule 46 dans lequel le contre moule 46 comporte un plateau central 47 entouré d'une dépression 48. La dépression 48 constitue alors en particulier une forme inversée du support de rigidification 15 d'un filtre 4 selon l'invention. Ainsi en particulier, le plateau central 47 peut présenter une face d'extension 49 sensiblement plane et la dépression 48 présenter une profondeur axiale, mesurée selon une direction axiale D perpendiculaire à la face d'extension 49, sensiblement comprise entre dix micromètres et cent micromètres et de préférence de l'ordre de cinquante micromètres.
La dépression 48 peut présenter une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversal intérieur sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversal extérieur sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.
Le moule secondaire 38 et le contre moule 46 peuvent être placés en regard l'un de l'autre et en contact intime sur une portion au moins de leur faces en regard. La face d'extension 49 du contre moule 46 et la face de moulage 40 du moule secondaire 38 définissent entre elles un espace intérieur creux de moulage 50. Plus particulièrement, l'extrémité libre 42 des motifs en saillie 39 du moule secondaire 38 peut venir en contact intime avec la face d'extension 49 du contre moule 46. Un écartement entre la face d'extension 49 du contre moule 46 et la face de moulage 40 du moule secondaire 38 est par exemple sensiblement compris entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre trente et cinquante micromètres. Dans une septième étape du procédé illustrée figure 10, on applique une dépression du gaz contenu dans l'enceinte d'aspiration 45 et on injecte dans l'enceinte d'aspiration 45, entre le moule secondaire 38 et le contre moule 46, une composition biocompatible réticulable à l'aide de moyens d'injection 51.
L'enceinte d'aspiration 45 est ainsi en particulier munie de moyens d'aspiration 52 aptes à créer une dépression du gaz dans ladite enceinte.
Le moule secondaire 38, et le cas échéant le contre moule 46, étant constitué(s) en polymère à haute perméabilité au gaz, la dépression appliquée à l'enceinte d'aspiration 45 est en particulier apte à disposer la composition biocompatible réticulable en contact intime avec les motifs en saillie 39 du moule secondaire 38.
Plus généralement, la composition biocompatible réticulable peut ainsi être disposée en contact intime avec la face d'extension 49 du contre moule 46 et la face de moulage 40 du moule secondaire 38 et peut remplir l'espace intérieur creux de moulage 50. La composition biocompatible réticulable est telle que décrite ci-avant et n'est pas décrite à nouveau ici.
Enfin, dans une huitième étape du procédé, on forme une membrane de filtration 8 et un support de rigidification 15 d'un filtre 4 autoporteur biocompatible en une unique pièce rigide autoporteuse par une réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire 38 et le contre moule 46.
La réticulation de la composition biocompatible réticulable peut être mise en oeuvre des différentes façons détaillées ci-avant.
Ainsi en particulier, dans un mode de réalisation dans lequel la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible photoréticulable de manière covalente, par exemple un polyéthylène glycol, on peut réticuler la composition biocompatible réticulable par une illumination par rayonnements ultraviolets 53.
Dans une étape ultérieure du procédé, on peut procéder à une oxydation par plasma de la membrane de filtration (8) et/ou du support de rigidification (15). L'oxydation par plasma peut être réalisée sur la face d'entrée de liquide (9) et/ou la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) et/ou la surface intérieure de pore (12) des pores de filtration (1 1 ). Une telle oxydation par plasma permet en particulier de conférer un caractère hydrophile aux faces et surfaces traitées.
Dans une autre étape ultérieure, on peut greffer une couche de poly-D-Lysine ou poly-L-Lysine sur la membrane de filtration (8) et/ou le support de rigidification (15). On peut de la sorte obtenir par exemple une couche de copolymère greffé de poly-L-Lysine et de polyéthylène glycol (PLL-g-PEG). La greffe de poly-D-Lysine ou poly-L- Lysine peut être réalisée sur la face d'entrée de liquide (9) et/ou la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) et/ou la surface intérieure de pore (12) des pores de filtration (1 1 ). Une telle greffe permet en particulier d'augmenter l'attachement de cellules aux faces et surfaces traitées. Une telle greffe peut en outre permettre d'améliorer l'adsorption de sérum ou de protéines de matrice extracellulaire sur un substrat de culture.
Dans la description qui est faite ci-avant d'un mode de réalisation d'un procédé de fabrication selon l'invention, les étapes du procédé sont numérotées en « première étape », « deuxième étape », « troisième étape », etc. Cette numérotation vise à clarifier la lecture du procédé mais ne doivent pas être comprises comme ayant un caractère limitatif concernant le nombre et la position précise des étapes dans un procédé de fabrication selon l'invention. Ainsi on comprend que des étapes intercalaires pourront être rajoutées au procédé décrit ci-avant, des étapes pourront également être échangées ou conduite simultanément dans des variantes du procédé.

Claims

Revendications
1 . Filtre (4) biocompatible, notamment pour isoler et cultiver des cellules (2) contenues dans un échantillon liquide (3), comprenant une membrane de filtration (8) s'étendant sensiblement selon un plan d'extension et comportant
o une face d'entrée de liquide (9) et une face de sortie de liquide (10), et
o une pluralité de pores de filtration (1 1 ) traversants reliant chacun la face d'entrée de liquide (9) à la face de sortie de liquide (10) au moyen d'une surface intérieure de pore (12), les pores de filtration (1 1 ) comportant chacun une ouverture d'entrée (13) à l'endroit de la face d'entrée de liquide (9) et une ouverture de sortie (14) à l'endroit de la face de sortie de liquide (10), caractérisé en ce que
• la membrane de filtration (8) est formée en une composition biocompatible réticulée, et
• le filtre (4) comporte un support de rigidification (15) sur lequel est montée la membrane de filtration (8).
2. Filtre (4) selon la revendication 1 , dans lequel le support de rigidification (15) est formé en une composition biocompatible réticulée.
3. Filtre (4) selon la revendication 2, dans lequel la membrane de filtration (8) et le support de rigidification (15) sont une unique pièce formée en une composition biocompatible réticulée, de sorte à constituer un ensemble rigide autoporteur.
4. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, dans lequel la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible photoréticulé de manière covalente.
5. Filtre (4) selon la revendication 4, dans lequel le composant biocompatible photoréticulé de manière covalente est un polyéthylène glycol.
6. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, dans lequel la composition biocompatible réticulée comprend au moins un composant biocompatible réticulé ioniquement.
7. Filtre (4) selon la revendication 6, dans lequel le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide et un collagène réticulé.
8. Filtre (4) selon la revendication 7, dans lequel le composant biocompatible réticulé ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.
9. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans lequel le support de rigidification (15) entoure circonférentiellement la membrane de filtration (8) dans le plan d'extension.
10. Filtre (4) selon la revendication l'une quelconque des revendications 1 à 9, dans lequel
• la face d'entrée de liquide (9) et la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) présentent chacune une forme générale surfacique plate, sont sensiblement parallèles entre elles et sont séparées par une épaisseur de la membrane, mesurée selon une direction axiale perpendiculaire à la face d'entrée de liquide (9) et la face de sortie de liquide (10) et
· le support de rigidification (15) présente un encombrement axial, mesuré selon la direction axiale, supérieur à l'épaisseur de la membrane.
1 1. Filtre (4) selon la revendication 10, dans lequel l'encombrement axial du support est sensiblement compris entre dix micromètres et cent micromètres et de préférence de l'ordre de cinquante micromètres.
12. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 10 et 1 1 , dans lequel l'épaisseur de la membrane est sensiblement comprise entre vingt et soixante-cinq micromètres et de préférence entre vingt et trente micromètres.
13. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans lequel le support de rigidification (15) présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversal intérieur sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversal extérieur sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.
14. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans lequel la face d'entrée de liquide (9) et la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8) présentent chacune une forme générale de disque ou de polygone ayant un encombrement transversal sensiblement compris entre cinq et dix millimètres
15. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans lequel le support de rigidification (15) comporte un revêtement adhésif (16) inactif, en particulier une colle activable par pression ou une colle recouverte d'une membrane de protection détachable, de façon à permettre un encollage ultérieur du support de rigidification (15) sur un support d'observation.
16. Filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 15, dans lequel une dimension maximale de l'ouverture de sortie (14) de chaque pore de filtration est supérieure à une dimension maximale de l'ouverture d'entrée (13) dudit pore.
17. Dispositif de filtration (1 ), notamment pour isoler des cellules (2) contenues dans un échantillon liquide (3), comportant un filtre (4) selon l'une quelconque des revendications 1 à 16, dans lequel le filtre (4) est monté, par son support de rigidification (15), dans le dispositif de filtration (1 ), entre un moyen de fourniture de liquide (5) du dispositif de filtration (1 ), apte à fournir du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face d'entrée de liquide (9) de la membrane de filtration (8), d'une part, et un moyen d'absorption de liquide (6) du dispositif de filtration (1 ), apte à absorber du liquide d'un échantillon de liquide à l'endroit de la face de sortie de liquide (10) de la membrane de filtration (8), d'autre part.
18. Procédé de fabrication d'un filtre (4) autoporteur biocompatible dans lequel :
• on dispose d'un masque (17) plan transparent comportant un réseau (18) de motifs optiques (19),
• on dispose une résine photosensible fluide (22) sur le masque (17),
• on forme un moule primaire (27) comportant des motifs en creux (28) par une illumination inclinée/rotative de la résine photosensible sur le masque (17),
· on dispose sur le moule primaire (27) un polymère à haute perméabilité au gaz fluide (37),
• on forme un moule secondaire (38) comportant des motifs en saillie (39) par une réticulation du polymère à haute perméabilité au gaz sur le moule primaire (27),
• on dispose le moule secondaire (38) dans une enceinte d'aspiration (45) en regard d'un contre moule (46),
• on applique une dépression de gaz à l'enceinte d'aspiration (45) et on injecte dans l'enceinte d'aspiration (45), entre le moule secondaire (38) et le contre moule (46), une composition biocompatible réticulable, de sorte à disposer la composition biocompatible réticulable en contact intime avec les motifs en saillie (39) du moule secondaire (38),
• on forme une membrane de filtration (8) d'un filtre (4) biocompatible par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire (38) et le contre moule (46), et
· on forme un support de rigidification (15) du filtre (4) biocompatible sur lequel est montée la membrane de filtration (8).
19. Procédé selon la revendication 18, on forme la membrane de filtration (8) et le support de rigidification (15) du filtre (4) biocompatible en une unique pièce constituant un ensemble rigide autoporteur, par réticulation de la composition biocompatible réticulable entre le moule secondaire (38) et le contre moule (46).
20. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 et 19, dans lequel on forme le contre moule (46) par réticulation d'un polymère à haute perméabilité au gaz fluide (37).
21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel le polymère à haute perméabilité au gaz fluide (37) est un siloxane.
22. Procédé selon la revendication 21 , dans lequel le siloxane est le polydiméthylsiloxane.
23. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 22, dans lequel la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible photoréticulable de manière covalente.
24. Procédé selon la revendication 23, dans lequel le composant biocompatible photoréticulable de manière covalente est un polyéthylène glycol.
25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 23 et 24, dans lequel on réticule la composition biocompatible réticulable par une illumination par rayonnements ultraviolets (53).
26. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 25, dans lequel la composition biocompatible réticulable comprend au moins un composant biocompatible réticulable ioniquement.
27. Procédé selon la revendication 26, dans lequel le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi un oligosaccharide, un polysaccharide ou un collagène réticulé.
28. Procédé selon la revendication 27, dans lequel le composant biocompatible réticulable ioniquement est choisi parmi de l'alginate et du saccharose.
29. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 28, dans lequel chaque motif optique (19) présente une forme générale circulaire ou ovale.
30. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 29, dans lequel les motifs optiques (19) sont disposés dans le réseau (18) en un arrangement hexagonal.
31 . Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 30, dans lequel les motifs optiques (19) présentent une densité surfacique de l'ordre de 1 x 105 motif/cm2.
32. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 31 , dans lequel les motifs optiques (19) sont des motifs transparents (23) séparés par des zones opaques (24), et dans lequel la résine photosensible (22) est une résine photosensible positive.
33. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 31 , dans lequel les motifs optiques (19) sont des motifs opaques (25) séparés par des zones transparentes (26), et dans lequel la résine photosensible (22) est une résine photosensible négative.
34. Procédé selon l'une quelconque des revendications 18 à 33, dans lequel le contre moule (46) comporte un plateau central (47) entouré d'une dépression (48), le plateau central (47) présentant une face d'extension (49) sensiblement plane, la dépression (48) présentant une profondeur axiale, mesurée selon une direction axiale (D) perpendiculaire à la face d'extension (49), sensiblement comprise entre dix micromètres et cent micromètres et de préférence de l'ordre de cinquante micromètres.
35. Procédé de fabrication d'un filtre (4) selon la revendication 34, dans lequel la dépression (48) présente une forme générale en anneau circulaire ou polygonal ayant un encombrement transversale intérieure sensiblement compris entre cinq et dix millimètres et un encombrement transversale extérieure sensiblement compris entre dix et vingt millimètres.
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