WO2014185419A1 - ボーベリア・バッシアナ１２ｂ菌株及び該菌株を用いた微生物農薬 - Google Patents

ボーベリア・バッシアナ１２ｂ菌株及び該菌株を用いた微生物農薬 Download PDF

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重之 務川
陽 高根澤
隆文 池上
慎一 沼田
仁 河又
智美 西宮
宏和 遠山
Original Assignee
クミアイ化学工業株式会社
茨城県
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    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
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    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi

Definitions

  • the present invention relates to a novel entomopathogenic fungus strain, a pest control agent, a plant growth regulator, a plant disease control agent and the like using the strain.
  • Pest (pest) and plant disease control methods include insect nets and rotations, cultivated or physical control using solar heat, chemical control using chemical pesticides, control using insect or disease resistant varieties, natural enemies Biological control using antagonistic microorganisms against insects and pathogens is known.
  • chemical pesticides especially organic synthetic insecticides and fungicides, has developed remarkably until recently, and many chemical agents with high efficacy for various applications have been developed one after another, and various application methods. has also been developed. Chemical control methods using these have contributed greatly to the control of plant insect damage and disease and the labor saving of control work, and are widely spread.
  • insect biocontrol not only natural enemy insects and natural nematodes, but also microbial pesticides using filamentous fungi, bacteria, viruses and the like are known.
  • an insecticidal / acaricidal agent (Patent Document 1) containing a specific strain belonging to the species of insect parasite fungus Beauveria bassiana as an active ingredient has been proposed.
  • this insecticide / acaricide has not been confirmed to have any effect other than pest control.
  • it is not only a highly safe microbial pesticide that has a pest control effect, but it is also greatly reduced by labor saving etc.
  • the development of a new microbial pesticide having various functions (effects) that can contribute has been strongly desired.
  • the present invention exhibits a sufficient control effect against multiple types of pests, and also exhibits a plant growth control effect and a plant disease control effect, etc. And it was made
  • the present inventors diligently studied from various directions, and as a result, newly isolated from nature, the plant is non-pathogenic to the plant and is an entomopathogenic filamentous fungus, Beauveria bassiana 12B strain
  • the plant has a practical effect for controlling a plurality of kinds of pests, and also exhibits a plant growth regulating effect and a plant disease controlling effect, thereby completing the present invention.
  • the embodiment of the present invention is as follows.
  • Beauveria bassiana 12B strain (NITE P-1574) having pest control action, plant growth regulation action and plant disease control action (particularly bacterial plant disease control action).
  • Viable cells of the strain described in (1) at least one of fungus bodies, mycelia, spores, and conidia) and / or cultures of the fungus bodies (cultures containing viable cells and / or treatment thereof)
  • a pest (pest) control agent characterized by containing a product as an active ingredient.
  • a plant growth regulator comprising a viable cell of the strain described in (1) and / or a culture of the cell as an active ingredient.
  • At least one or more (or all of them) selected from plant growth regulation, tomato leaf color enhancement, tomato leaf growth promotion, tomato and / or bell pepper and / or carnation seed germination rate The agent according to (3), which is (5) A plant disease control agent comprising at least one of the living cells of the strain described in (1), the culture of the cells, and the culture supernatant of the cells as an active ingredient. (6) The agent according to (5), wherein the plant disease control is control of tomato stem wilt bacterial disease and / or cucumber powdery mildew.
  • viable cells at least one of mycelia, mycelia, spores, and conidia
  • Growth regulators, plant disease control agents and the like can be provided. Then, by applying these microbial pesticides to plant roots, stems, leaves, seeds, or the soil in which they are cultivated, seed germination and leaf growth are promoted, and a wide range of pest control is achieved. ⁇ It can control plant diseases. Moreover, the drug does not adversely affect the growth of the plant body.
  • an active ingredient such as a pest control agent, a plant growth regulator, a plant disease control agent, etc.
  • an entomopathogenic filamentous fungus Beauveria bassiana 12B Use strains.
  • the strain was isolated from flies that died in Sekimoto, Chikusei City, Ibaraki Prefecture, and has the following mycological properties.
  • any one can be appropriately selected as long as the type and culture conditions of the medium on which the strain can grow.
  • a general medium such as a Sabouraud agar medium (SDY medium) supplemented with 1% yeast extract, a medium containing glucose, peptone, yeast extract, wheat, and the like are appropriately used.
  • SDY medium Sabouraud agar medium
  • inorganic salts and trace organic nutrients can be added, and various additives such as antifoaming agents can be added as necessary.
  • a liquid medium or the like may be used.
  • Culturing of the 12B strain can be performed according to the usual method in general microorganisms, for example, Erlenmeyer flask shaking culture, test tube shaking culture, reciprocating shaking culture, Jar Fermenter culture, tank culture, etc. Such methods as liquid culture and solid culture are possible.
  • aeration conditions of 0.1 to 2 times / min of the culture solution volume are used.
  • the culture conditions can be appropriately changed as long as the microorganism can grow.
  • the culture temperature is 15 to 40 ° C. (preferably 20 to 30 ° C., more preferably 25 to 30 ° C.), and the pH of the medium is 4 to 8 (preferably 6 to 6). 7) is shown as a preferred example, but is not limited thereto.
  • the culture time varies depending on the culture conditions, but 1 to 20 days is preferable.
  • the 12B strain cultured as described above is an active ingredient of a drug (a microbial pesticide) in the state of a culture or a treated product (mixture of the culture and other components) without separating the cells from the culture.
  • a drug a microbial pesticide
  • viable cells containing two or more selected from bacterial cells, mycelia, spores, and conidia by treatment such as membrane separation or centrifugation, or only mycelia, mycelia (Including only spores and conidia) and washing them as necessary, or diluting them with a liquid or the like can also be used.
  • viable cells containing two or more selected from bacterial cells, mycelia, spores, and conidia by treatment such as membrane separation or centrifugation, or only mycelia, mycelia (Including only spores and conidia) and washing them as necessary, or diluting them with a liquid or the like can also be used.
  • it can also be used in the state of a dried product obtained by
  • the microbial pesticide according to the present invention contains the 12B strain as an effective bacterium, but the concentration of the bacterium contained in the drug is not particularly limited as long as the effect is exhibited.
  • concentration of the bacterium contained in the drug is not particularly limited as long as the effect is exhibited.
  • those containing the total number of the above strains per 1 ml of the drug in the range of 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 10 can be exemplified.
  • the contained bacteria concentration is not particularly limited as long as the desired effect can be obtained, but if the bacteria concentration is too low, sufficient results cannot be obtained. Since bacteria may be wasted, for example, a range of 1 ⁇ 10 6 cells / ml to 1 ⁇ 10 9 cells / ml can be shown as a preferable example.
  • a configuration added to a plant body in a concentration range of 1 ⁇ 10 7 cells / ml to 1 ⁇ 10 8 cells / ml is shown as a more preferable example.
  • pests that can be controlled by the 12B strain include Hemiptera pests, for example, Streptomyces (Reptortus clavatus) and other leafhoppers such as Neoptetix cinchetics, Leafhoppers such as Nilaparvata lugens, killer whales such as Psylla sp., Silver leaf whitefly (Bemisia tabaci), whiteflies such as Bemisia tabaci, and peach leaf aphid Scale insects such as (Pseudococcus comstock), Lepidoptera pests such as Chaha Tortoises such as Maki (Homona magnanima), Hosohaki toss such as Eupoecilia ambigella, Minokas such as Bambalina sp.
  • Hemiptera pests for example, Streptomyces (Reptortus clavatus) and other leafhoppers such as Neoptetix cinchetics, Leafhoppers such as Nilapar
  • Sugas such as Plutella xylostella, Psyllium such as Chilo suppressalis, Helathis virescens, Aa moths such as Helicoverpa armigera, Scarabaeidae, etc.
  • Weevil such as Epilachna vigintioctopuncta, weevil, Lisweeper (Lysorhoprus oryzophylus), exotic insects such as Coleoptera, Coleoptera, Coleoptera, Coleoptera C Culex trichaenorhynchus, Diptera, such as German cockroach (Blatella germanica), termite pests, such as Reticulitermes sparatus, Thrips pests, such as crested crested worms ps dorsalis, citrus yellow thrips (Franklinella occidentalis), sandfish thrips (Franklinella intonsa), spider mites, for example, insects, c worms, ape, c
  • gastropods such as slugs (Inciliaria sp.) And legumes such as armadillium sp., But the present invention is not limited to these examples.
  • the present invention is not particularly limited to these, but cereals such as rice (Oryza sativa), wheat (Triticum sp.), Barley (Hordeum vulgare), corn (Zea mays), buckwheat (Fagopyrum esculentum), etc.
  • Potatoes such as sweet potato (Ipomoea batatas), yam (Dioscorea japonica), taro (Colocasia esculenta), soybean (Glycine max), legumes such as green beans, azuki bean, peas, cucumber spruce (Cucumus sp.
  • Zucchini Cucubita pepo
  • watermelon Citullus lananthus
  • Cucuris melo cucurbitaceae crops, potato (Solanum tuberosum), tomatoes (Solanum lycopersicum), peppers (Capsicum annuum), eggplants (Solanum melongena), solanaceae crops, Brassica var. (Brassica oleracea var. Capitata), radish (Raphanus sativus), cruciferous crops such as Brassica rapa var.
  • leek Allium fistulosum
  • lilies such as onion (Allium cepa), spinach (Spinia oleracea) and other red crustacean crops, strawberry (Fragaria x ananasas) and other vegetables, and apple (Malus)
  • Pears such as Pyrus communis and Japanese pears (Pyrus pyrifolia), prunes such as Prunus avium, peaches (Amygdalus persica), Citrus orange, Citrus orange, Citrus orange, Citrus orange (Citrus limon) and other citrus, grape (Vitis sp.), Oyster (Diospyros) Fruit trees such as kaki, cotton (Gossypium sp.
  • Rapeseed (Brassica napus), sunflower (Helianthus annuus), sugar beet (Beta vulgaris), sugar cane (Saccharum officinarum), tobacco (Nichotiana tabacum) and other special crops, Trees other than fruit trees such as turfgrass, birch (Betula sp.), Dogwood (Benthamidia florida), ginkgo (Ginkgo biloba), rose (Rosa sp.), Chrysanthemum x morifolium tulip (Chrysanthemum turifolium tulip, Eastom To improve seed germination rate of ornamental plants such as grandiflorum and carnation (Dianthus caryophyllus), improve leaf color, increase leaf area, increase leaf weight, etc., that is, promote plant growth (regulate growth) It is also a feature.
  • the present invention is not particularly limited to these, but various plant diseases caused by bacteria, filamentous fungi and the like, for example, Pseudoperonospora bacteria such as Pseudoperonospora cubensis, Venturia (Venturia), for example, Venturia inaequalis, Erysiphe (for example), Wheat powdery mildew (Erysiphe graminis), Pyricularia (Pyricularia), for example, Rice blast Botrytis), for example, cucumber gray mold fungus (Botrytis cinerea), Rhizoctonia Rhizoctonia spp., For example, Rhizoctonia solani, Puccinia spp., For example, Wucci red rot fungus, Septoria (Septoria spp.), Sept.
  • Pseudoperonospora bacteria such as Pseudoperonospora cubensis, Venturia (Venturia), for example
  • Rotinoia spp. cucumber sclerotia bacterium, Pythium spp., For example, Phythium debaryanum Hesse, Sphaerothec, sph. Sphaerotheca cucurbitae), Burkholderia (Bu Kholderia) bacteria, e.g., rice seedling blight (Burkholderia plantarii), Pseudomonas (Pseudomonas) bacteria, for example tomato stems pixel bacterial pathogen (Pseudomonas corrugata) is also characteristic can be used to control the like.
  • the 12B strain can be used as a single active ingredient (effective fungus), but the mutation of the 12B strain alone or together with the 12B strain The body can also be used.
  • the mutant has the bacteriological characteristics of the above-mentioned 12B strain and has a pest control action, a plant growth regulation action and a plant disease control action, a natural mutant, ultraviolet light or a chemical mutant is used. All mutant strains, cell fusion strains, and genetically modified strains can be used.
  • the microbial pesticide according to the present invention can be applied directly to a plant as it is, or can be diluted with water or the like, and is not particularly limited.
  • a method of directly spraying on plants and pests a method of spraying on soil, a method of adding chemicals to water and fertilizer added to plants and soil, and the like.
  • a method of immersing young seedlings, leaves, seeds, etc. with a liquid containing a drug is also suitable.
  • the application time and application amount of the drug according to the present invention may vary depending on the applied plant, target pest or target disease, application method, damage occurrence tendency, degree of damage, environmental conditions, dosage form used, etc. Although it is preferable that it is not generally defined, for example, a method of spraying a liquid agent per plant body in an amount of 1 ml to 1 L, preferably 10 ml to 500 ml can be exemplified. Also, the application time may vary depending on the applied plant, dosage form, etc., but basically there is no problem even if it is applied at any time. Furthermore, since the present invention is a microbial pesticide with little concern about the appearance of resistant pests, it can be used continuously for several days or continuously.
  • the drug according to the present invention may be diluted with an inert liquid or solid carrier and added with a surfactant or other auxiliary agent as necessary.
  • preparations include dosage forms such as powders, granules, emulsions, wettable powders, suspension preparations, and flowables.
  • Examples of preferred carriers include talc, bentonite, clay, kaolin, diatomaceous earth, white carbon, vermiculite, slaked lime, silica sand, ammonium sulfate, urea, porous solid carrier, water, isopropyl alcohol, xylene, cyclohexanone, methylnaphthalene, Examples include liquid carriers such as alkylene and glycol.
  • surfactant and dispersant examples include dinaphthyl methane sulfonate, alcohol sulfate ester salt, alkyl aryl sulfonate, lignin sulfonate, polyoxyethylene glycol ether, polyoxyethylene alkyl aryl ether, and polyoxyethylene sorbitan. Mono alkylate etc. are mentioned.
  • auxiliary agents include carboxymethylcellulose, polyethylene glycol, propylene glycol, gum arabic, and xanthan gum.
  • protective agents include skim milk and pH buffering agents. These usage amounts may be appropriately set according to the amount of the bacterial cells of the 12B strain and / or the culture of the bacterial cells, the application time and the application amount of the drug, and the like.
  • the drug according to the present invention can also contain other insecticidal components, herbicidal components, plant growth regulating components and fertilizer components, and other than the 12B strain.
  • a strain may coexist.
  • control is a concept including not only prevention and repelling of diseases caused by pests (pests) and phytopathogenic fungi, but also removal of pests and death (insecticing and sterilization). Therefore, even if a pest or the like is already infested with the plant, the pest or the like can be removed from the plant by applying the agent of the present invention, and feeding by the pest or induction of a disease caused by the pest or the like can be prevented. it can. Diseases can also be prevented by this preventive / therapeutic effect.
  • This strain was recultured on an SDY agar medium supplemented with 1% peptone, 1% yeast extract and 2% glucose, and stored frozen at -25 ° C.
  • the strain being cryopreserved was re-cultured each time in an SDY medium, and the spores were adjusted in density with sterile surfactant-added water. .
  • the lid was covered for 6 days after the treatment and humidified, and after the 6th day, the lid was removed to prevent lethality due to excessive humidity.
  • the number of living and dead insects was counted 11 days after the treatment, and the death rate was calculated. The test results are shown in Table 1.
  • Thrips insecticidal activity test An exhibition of a kidney leaf disk on agar (crystal violet 0.05%) inoculated with 12 test insects (Hirazuhana thrips or Citrus thrips) diluted to 1 ⁇ 10 7 spores / ml.
  • a spore suspension containing a dressing (for 5000 times addition of Mylineau) was spread using an automatic rotary spreader (2 ml / cm 2 ). After lightly air-drying, it was covered with a humidified state. In order to prevent lethality due to excessive humidity, the lid was removed after 24 hours, and a lid with a mesh was attached. Four days after the treatment, the number of live and dead insects was counted, and the death rate was calculated. The test results are shown in Tables 2 and 3.
  • the 12B strain has an effective insecticidal activity against Lepidoptera pests, particularly Suga and Yaga.
  • Azuki beetle was placed on the spore of a 9 cm plastic petri dish in which the 12B strain was cultured, and directly contacted with the conidia, and then transferred into a cup containing azuki bean. Six days after the treatment, the number of live insects and the number of dead insects were counted, and the death rate was calculated. The test results are shown in Table 6.
  • the 12B strain has an effective insecticidal activity against Coleoptera pests, particularly weevil.
  • the 12B strain has an effective insecticidal activity against aphids.
  • the culture solution of 12B strain cultured in PS liquid medium was centrifuged to collect mycelia. Centrifugal washing operation was repeated three times with 40 ml of sterilized water containing a surfactant, and the mycelia concentration was adjusted to 1.0 ⁇ 10 8 cells / ml with sterilized water containing a surfactant. 800 ⁇ l of this was added to a microtube containing 24 seeds of tomato (variety: Ponterosa) or bell pepper (variety: Kyo Midori) and immersed in the mixture at 25 ° C. for 3.5 hours. The water was lightly wiped on a paper towel, and then seeded in a tray at a rate of 24 grains. The number of seeds germinated 11 days after the treatment was investigated, and the germination rate was calculated. The results are shown in Table 10.
  • Tomato growth promotion effect Transplanting seedlings of tomatoes (variety: House Momotaro) into cultures after culturing 12B strain in soil bran medium for 21 days, or soil blended with soil bran medium to 1/10 each of the seedling culture medium And trained in a climate chamber. Twenty-one days after transplantation, the leaf color (SPAD value) was measured for five small leaves in the three leaf positions from the top, and the leaf area and leaf weight were measured for the three to five leaf positions. The test results are shown in Table 11.
  • the 12B strain has the tomato leaf color improving activity, the leaf area increasing activity, and the leaf weight increasing activity.
  • the present invention exhibits a sufficient control effect against multiple types of pests, and also exhibits a plant growth control effect and a plant disease control effect, etc. And it aims at providing the novel microbial pesticide using the said strain.

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Abstract

課題　複数種の害虫に対して充分な防除効果を発揮し、且つ、植物生長調節効果や植物病害防除効果などもあわせて発揮する、生物農薬として有効且つ安全に使用可能な新菌株、及び、当該菌株を用いた新規な微生物農薬を提供する。　解決手段　ボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株（ＮＩＴＥ　Ｐ－１５７４）の生菌体、菌体の培養物、菌体の培養上清等を有効成分とすることで、複数種の害虫に対して有効な害虫防除剤、植物生長調節剤、植物病害防除剤などを提供できる。　

Description

ボーベリア・バッシアナ１２Ｂ菌株及び該菌株を用いた微生物農薬
　本発明は、新規な昆虫病原糸状菌菌株、及び、該菌株を用いた害虫防除剤、植物生長調節剤、植物病害防除剤等に関する。
　害虫（有害生物）及び植物病害の防除方法としては、防虫ネットや輪作、太陽熱を利用した耕種的あるいは物理的防除、化学農薬を用いる化学的防除、虫害又は病害抵抗性品種の利用による防除、天敵昆虫や病原菌に対する拮抗微生物等を用いた生物的防除などが知られている。これらのうち、化学農薬、特に有機合成殺虫剤及び殺菌剤の開発研究は近年に至るまで目覚しく発達し、様々な用途の効力の高い多数の化学薬剤が次々と開発され、更には様々な施用法も開発されている。これらを用いた化学的防除法は、植物の虫害及び病害防除並びに防除作業の省力化等に大きく貢献し、広く普及している。
　しかしながら、近年いわゆる薬剤抵抗性害虫や薬剤耐性植物病原菌の出現により、化学的防除法による防除効果が低下するという現象が一部作物や病害虫などで認められ、問題となってきている。特に、コナジラミやアザミウマなどの微小害虫においては、現在利用可能な全ての作用性化学農薬に抵抗性が報告されている種類も少なくない。また、作物の指定産地化が進むにつれて連作を余儀なくされる結果、化学農薬では難防除とされる土壌伝染性病害の発生も各地で深刻な問題となっている。さらに、化学農薬を大量に何度も繰り返して用いる方法は、自然界に存在しない化学物質を環境中に放出するため、動植物に直接毒性を示す薬剤はもちろんのこと、そうでない化学薬剤であっても環境への悪影響を引き起こす可能性が懸念されている。
　以上のように、化学農薬による害虫等の防除は、薬剤抵抗性害虫や耐性菌の出現によって防除効果が低下する可能性が高く、その場合、新たな殺虫剤や殺菌剤の開発が必要となってしまう。また、化学農薬では難防除とされる害虫や病害の防除に対しては、代替手段あるいは他の方法を併用する手段を講じなくてはならない。そして、これらに加えて、環境に対しての安全性確立も必要とされる。
　このような背景のもと、近年、化学農薬の使用に偏った防除方法を見直し、化学農薬からより環境への安全性が高いとされる微生物等を利用した生物防除法が提案され、その一部は実用化されている。
　害虫の生物防除に関しては、天敵昆虫や天敵線虫の利用だけでなく、糸状菌や細菌、ウイルス等を利用した微生物農薬も知られている。例えば、昆虫寄生性糸状菌であるボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）種に属する特定菌株を有効成分とする殺虫・殺ダニ剤（特許文献１）などが提案されている。しかし、この殺虫・殺ダニ剤では害虫防除以外の効果は確認されておらず、当業界においては、単に害虫防除効果を奏する安全性の高い微生物農薬というだけでなく、作業の省力化等により大きく貢献できるような様々な機能（効果）を併せ持つ新たな微生物農薬の開発が強く望まれていた。
特開２００５－３０４４２１号公報
　本発明は、複数種の害虫に対して充分な防除効果を発揮し、且つ、植物生長調節効果や植物病害防除効果などもあわせて発揮する、微生物農薬として有効且つ安全に使用可能な新菌株、及び、当該菌株を用いた新規な微生物農薬を提供する目的でなされたものである。
　上記目的達成のため、本発明者らは各方面から鋭意検討した結果、自然界から新規に分離した、植物に対して非病原性で且つ昆虫病原糸状菌であるボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株が、複数種の害虫防除に実用的な効果を示すことを見いだし、また、植物生長調節効果及び植物病害防除効果も発揮することを見いだし、本発明を完成した。
　すなわち、本発明の実施形態は次のとおりである。
（１）害虫防除作用、植物生長調節作用及び植物病害防除作用（特に細菌性植物病害防除作用）を有する、ボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株（ＮＩＴＥ　Ｐ－１５７４）。
（２）（１）に記載の菌株の生菌体（菌体、菌糸、胞子、分生子の少なくとも１以上）及び／又は菌体の培養物（生菌体を含む培養物及び／又はその処理物）を有効成分として含有することを特徴とする害虫（有害生物）防除剤。
（３）（１）に記載の菌株の生菌体及び／又は菌体の培養物を有効成分として含有することを特徴とする植物生長調節剤。
（４）植物生長調節が、トマト及び／又はチンゲンサイの葉色向上、トマトの葉の生長促進、トマト及び／又はピーマン及び／又はカーネーションの種子発芽率向上から選ばれる少なくとも１以上（あるいは、これらの全て）である（３）に記載の剤。
（５）（１）に記載の菌株の生菌体、菌体の培養物、菌体の培養上清の少なくとも１以上を有効成分として含有することを特徴とする植物病害防除剤。
（６）植物病害防除が、トマト茎えそ細菌病及び／又はキュウリうどんこ病の防除である（５）に記載の剤。
　本発明によれば、植物に対して非病原性で且つ昆虫病原糸状菌であるボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株の生菌体（菌体、菌糸、胞子、分生子の少なくとも１以上）、菌体の培養物（生菌体を含む培養物及び／又はその処理物）、菌体の培養上清等を有効成分とすることで、複数種の害虫に対して有効な害虫防除剤、植物生長調節剤、植物病害防除剤などを提供することができる。そして、これらの微生物農薬を植物の根、茎、葉、種子、あるいはその栽培土壌中などに施用することで、種子の発芽や葉の生長などが促進され、且つ、極めて広範囲に各種の害虫防除・植物病害防除をすることができる。しかも、当該薬剤は植物体の生長に悪影響を及ぼすことは一切ない。
　本発明では、害虫防除剤、植物生長調節剤、植物病害防除剤等の有効成分（有効菌）として、植物に対して非病原性である、昆虫病原糸状菌のボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株を使用する。当該菌株は、茨城県筑西市関本で死亡していたハエ類から単離されたものであり、以下に示すような菌学的性質を有する。
（ａ）形態学的性質
　（１）栄養菌糸：隔壁を持つ。
　（２）分生子柄：先端が膨大した小嚢にはならない。
　（３）分生子形成細胞：ジグザグ状に伸長し、分生子形成細胞の先端の小歯状突起に分生子が形成され、分生子形成細胞はブドウの房状に集合し、鎖状に並んで形成されることはない。
　（４）分生子：亜球形、２．０～３．１μｍ、分生子形成細胞からシンポジオ型に形成される。
（ｂ）培養的性質（２５℃で平板培養した場合）
　培養初期：菌糸が薄く広く放射状に伸長した透明なコロニーを形成する。
　培養約４～７日後：コロニー中央部に隆起した菌糸塊が形成され白色を呈する。
　培養７日以降：隆起部での分生子形成によりコロニーが分生子の色である淡黄色を呈する。
　なお、この菌株は、独立行政法人製品評価技術基盤機構・特許微生物寄託センター（〒２９２－０８１８　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足２－５－８）に、２０１３年（平成２５年）３月１５日付けでＮＩＴＥ　Ｐ－１５７４として寄託されている。
　１２Ｂ菌株の培養方法は、本菌株が増殖し得る培地の種類、培養条件であれば適宜任意のものを選択できる。例えば、１％酵母抽出物添加サブロー寒天培地（ＳＤＹ培地）などの一般的な培地の他、グルコース、ペプトン、イーストエキス、ムギ類を含む培地などが適宜使用される。その他、無機塩や微量有機栄養素（ビタミン、アミノ酸、核酸関連物質等）を添加したり、必要に応じて消泡剤等の種々の添加剤を添加したりすることもできる。また、固体培地以外に液体培地等を用いても良い。
　１２Ｂ菌株の培養は、一般微生物における通常の方法に準じて行うことができ、例えば、三角フラスコ振盪培養、試験管式振盪培養、往復式振盪培養、ジャーファーメンター（Ｊａｒ　Ｆｅｒｍｅｎｔｅｒ）培養、タンク培養等の液体培養、固体培養等の方法が可能である。なお、ジャーファーメンターを用いる場合には、ジャーファーメンター内に無菌空気を導入する必要があり、培養液容量の０．１～２倍／分の通気条件を用いる。培養条件は、微生物が生育可能な範囲で適宜変更でき、例えば、培養温度１５～４０℃（好ましくは２０～３０℃、より好ましくは２５～３０℃）、培地のｐＨ４～８（好ましくは６～７）が好適例として示されるが、これに限定されるものではない。培養時間は、培養条件によって異なるが、１～２０日間が好適である。
　以上のようにして培養した１２Ｂ菌株は、その培養物から菌体等を分離することなく培養物またはその処理物（培養物と他成分との混合物）の状態で薬剤（微生物農薬）の有効成分として利用することができる。また、上記培養物から、通常の方法、例えば膜分離又は遠心分離等の処理によって生菌体（菌体、菌糸、胞子、分生子から選ばれる２以上を含有するものや、菌体のみ、菌糸のみ、胞子のみ、分生子のみも含まれる）を分離し、必要に応じて洗浄したものや、これを液体などで希釈した希釈物も利用することもできる。更には、上記培養物又は分離した生菌体を凍結乾燥、スプレードライ等の方法によって乾燥した乾燥物の状態でも利用することもできる。
　本発明に係る微生物農薬は、１２Ｂ菌株を有効菌として含有するものであるが、薬剤に含まれる菌濃度は、その効果を発揮する限り特に制限されない。例えば、薬剤１ｍｌあたり上記菌株の菌総数を１×１０５～１×１０１０個の範囲で含有するものを例示することができる。含まれる菌濃度は所望の効果が得られる範囲であればよく、特に限定されるものではないが、あまり菌濃度が少ないと十分な結果が得られず、逆にあまり菌濃度を多くしても菌が無駄になることがあるので、例えば、１×１０６個／ｍｌ～１×１０９個／ｍｌの範囲を好適例として示すことができる。なお、１×１０７個／ｍｌ～１×１０８個／ｍｌの濃度範囲で植物体に添加される構成がより好適な例として示される。
　１２Ｂ菌株が防除することができる害虫としては、具体的には、半翅目害虫、例えばホソヘリカメムシ（Ｒｉｐｔｏｒｔｕｓ　ｃｌａｖａｔｕｓ）等のカメムシ類（Ｈｅｔｅｒｏｐｔｅｒａ）、ツマグロヨコバイ（Ｎｅｐｈｏｔｅｔｔｉｘ　ｃｉｎｃｔｉｃｅｐｓ）等のヨコバイ類、トビイロウンカ（Ｎｉｌａｐａｒｖａｔａ　ｌｕｇｅｎｓ）等のウンカ類、Ｐｓｙｌｌａ　ｓｐ.等のキジラミ類、シルバーリーフコナジラミ（Ｂｅｍｉｓｉａ　ｔａｂａｃｉ）、タバココナジラミ（Ｂｅｍｉｓｉａ　ｔａｂａｃｉ）等のコナジラミ類、モモアカアブラムシ（Ｍｙｚｕｓ　ｐｒｅｄｉｃａｔｅ）等のアブラムシ類、クワコナカイガラムシ（Ｐｓｅｕｄｏｃｏｃｃｕｓ　ｃｏｍｓｔｏｃｋｉ）等のカイガラムシ類、チョウ目害虫、例えばチャハマキ（Ｈｏｍｏｎａ　ｍａｇｎａｎｉｍａ）等のハマキガ類、ブドウホソハマキ（Ｅｕｐｏｅｃｉｌｌｉａ　ａｍｂｉｇｕｅｌｌａ）等のホソハマキガ類、Ｂａｍｂａｌｉｎａ　ｓｐ.等のミノガ類、コクガ（Ｎｅｍａｐｏｇｏｎ　ｇｒａｎｅｌｌｕｓ）等のホソガ類、ミカンハモグリガ（Ｐｈｙｌｌｏｃｎｉｓｔｉｓ　ｃｉｔｒｅｌｌａ）等のコハモグリガ類、コナガ（Ｐｌｕｔｅｌｌａ　ｘｙｌｏｓｔｅｌｌａ）等のスガ類、二カメイガ（Ｃｈｉｌｏ　ｓｕｐｐｒｅｓｓａｌｉｓ）等のメイガ類、タバコバッドワーム（Ｈｅｌｉｏｔｈｉｓ　ｖｉｒｅｓｃｅｎｓ）、オオタバコガ（Ｈｅｌｉｃｏｖｅｒｐａ　ａｒｍｉｇｅｒａ）等のヤガ類、甲虫目害虫、例えばドウガネブイブイ（Ａｎｏｍａｌａ　ｃｕｐｒｅａ）等のコガネムシ類、ニジュウヤホシテントウ（Ｅｐｉｌａｃｈｎａ　ｖｉｇｉｎｔｉｏｃｔｏｐｕｎｃｔａｔａ）等のテントウムシ類、イネミズゾウムシ（Ｌｉｓｓｏｒｈｏｐｔｒｕｓ　ｏｒｙｚｏｐｈｉｌｕｓ）、アズキゾウムシ（Ｃａｌｌｏｓｏｂｒｕｃｈｕｓ　ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）等のゾウムシ類、双翅目害虫、例えばアカイエカ（Ｃｕｌｅｘ　ｐｉｐｉｅｎｓ）、シナハマダラカ（Ａｎｏｐｈｅｌｅｓ　ｓｌｙｎｅｓｓ）、コダタアカイエカ（Ｃｕｌｅｘ　ｔｒｉｔａｅｎｉｏｒｈｙｎｃｈｕｓ）、直翅目害虫、例えばチャバネゴキブリ（Ｂｌａｔｅｌｌａ　ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、シロアリ目害虫、例えばヤマトシロアリ（Ｒｅｔｉｃｕｌｉｔｅｒｍｅｓ　ｓｐｅｒａｔｕｓ）、アザミウマ目害虫、例えばチャノキイロアザミウマ（Ｓｃｉｒｔｏｔｈｒｉｐｓ　ｄｏｒｓａｌｉｓ）、ミカンキイロイロアザミウマ（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ　ｏｃｃｉｄｅｎｔａｌｉｓ）、ヒラズハナアザミウマ（Ｆｒａｎｋｌｉｎｉｅｌｌａ　ｉｎｔｏｎｓａ）、ハダニ類、例えばナミハダニ（Ｔｅｔｒａｎｙｃｈｕｓ　ｕｒｔｉｃａｅ）、また、その他有害動物、不快動物、衛生害虫、寄生虫、例えばスクミリンゴガイ（Ｐｏｍａｃｅａ　ｃａｎａｌｉｃｕｌａｔａ）、ナメクジ（Ｉｎｃｉｌａｒｉａ　ｓｐ.）等の腹足綱類（Ｇａｓｔｒｏｐｏｄａ）、ダンゴムシ（Ａｒｍａｄｉｌｌｉｄｉｕｍ　ｓｐ.）等の脚目類などを挙げることができるが、本発明はこれらの例により限定されるものではない。
　そして本発明は、特にこれらに限定されるものではないが、イネ（Ｏｒｙｚａ　ｓａｔｉｖａ）、コムギ（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ　ｓｐ．）、オオムギ（Ｈｏｒｄｅｕｍ　ｖｕｌｇａｒｅ）、トウモロコシ（Ｚｅａ　ｍａｙｓ）、ソバ（Ｆａｇｏｐｙｒｕｍ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ）等の穀類、サツマイモ（Ｉｐｏｍｏｅａ　ｂａｔａｔａｓ）、ヤマイモ（Ｄｉｏｓｃｏｒｅａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）、サトイモ（Ｃｏｌｏｃａｓｉａ　ｅｓｃｕｌｅｎｔａ）等のイモ類、ダイズ（Ｇｌｙｃｉｎｅ　ｍａｘ）、インゲン、アズキ、エンドウ等のマメ科作物、キュウリ（Ｃｕｃｕｍｉｓ　ｓａｔｉｖｕｓ）カボチャ（Ｃｕｃｕｒｂｉｔａ　ｓｐ．）、ズッキーニ（Ｃｕｃｕｂｉｔａ　ｐｅｐｏ）、スイカ（Ｃｉｔｒｕｌｌｕｓ　ｌａｎａｔｕｓ）、メロン（Ｃｕｃｕｍｉｓ　ｍｅｌｏ）等のウリ科作物、ジャガイモ（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、トマト（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｌｙｃｏｐｅｒｓｉｃｕｍ）、ピーマン（Ｃａｐｓｉｃｕｍ　ａｎｎｕｕｍ）、ナス（Ｓｏｌａｎｕｍ　ｍｅｌｏｎｇｅｎａ）等のナス科作物、ハクサイ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａ　ｖａｒ．ｐｅｋｉｎｅｎｓｉｓ）、キャベツ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｏｌｅｒａｃｅａ　ｖａｒ．　ｃａｐｉｔａｔａ）、ダイコン（Ｒａｐｈａｎｕｓ　ｓａｔｉｖｕｓ）、チンゲンサイ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｒａｐａ　ｖａｒ．ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）等のアブラナ科作物、レタス（Ｌａｃｔｕｃａ　ｓａｔｉｖａ）等のキク科作物、ニンジン（Ｄａｕｃｕｓ　ｃａｒｏｔａ）、セロリ（Ａｐｉｕｍ　ｇｒａｖｅｏｌｅｎｓ）等のセリ科作物、ネギ（Ａｌｌｉｕｍ　ｆｉｓｔｕｌｏｓｕｍ）、タマネギ（Ａｌｌｉｕｍ　ｃｅｐａ）等のユリ科作物、ホウレンソウ（Ｓｐｉｎａｃｉａ　ｏｌｅｒａｃｅａ）等のアカザ科作物、イチゴ（Ｆｒａｇａｒｉａ　ｘ　ａｎａｎａｓｓａ）等の野菜、リンゴ（Ｍａｌｕｓ　ｐｕｍｉｌａ）、セイヨウナシ（Ｐｙｒｕｓ　ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、ニホンナシ（Ｐｙｒｕｓ　ｐｙｒｉｆｏｌｉａ）等の仁果類、オウトウ（Ｐｒｕｎｕｓ　ａｖｉｕｍ）、モモ（Ａｍｙｇｄａｌｕｓ　ｐｅｒｓｉｃａ）等の核果類、ウンシュウミカン（Ｃｉｔｒｕｓ　ｕｎｓｈｉｕ）、オレンジ（Ｃｉｔｒｕｓ　ｓｉｎｅｎｓｉｓ）、レモン（Ｃｉｔｒｕｓ　ｌｉｍｏｎ）等のカンキツ類、ブドウ（Ｖｉｔｉｓ　ｓｐ．）、カキ（Ｄｉｏｓｐｙｒｏｓ　ｋａｋｉ）等の果樹、ワタ（Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ　ｓｐ．）、ナタネ（Ｂｒａｓｓｉｃａ　ｎａｐｕｓ）、ヒマワリ（Ｈｅｌｉａｎｔｈｕｓ　ａｎｎｕｕｓ）、テンサイ（Ｂｅｔａ　ｖｕｌｇａｒｉｓ）、サトウキビ（Ｓａｃｃｈａｒｕｍ　ｏｆｆｉｃｉｎａｒｕｍ）、タバコ（Ｎｉｃｈｏｔｉａｎａ　ｔａｂａｃｕｍ）等の特用作物、ノシバ（Ｚｏｙｓｉａ　ｊａｐｏｎｉｃａ）、ギョウギシバ（Ｃｙｎｏｄｏｎ　ｄａｃｔｙｌｏｎ）等の芝草類、カバノキ（Ｂｅｔｕｌａ　ｓｐ．）、ハナミズキ（Ｂｅｎｔｈａｍｉｄｉａ　ｆｌｏｒｉｄａ）、イチョウ（Ｇｉｎｋｇｏ　ｂｉｌｏｂａ）等の果樹以外の樹木、バラ（Ｒｏｓａ　ｓｐ．）、キク（Ｃｈｒｙｓａｎｔｈｅｍｕｍ　ｘ　ｍｏｒｉｆｏｌｉｕｍ）、チューリップ（Ｔｕｌｉｐａ　ｇｅｓｎｅｒｉａｎａ）、トルコギキョウ（Ｅｕｓｔｏｍａ　ｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ）、カーネーション（Ｄｉａｎｔｈｕｓ　ｃａｒｙｏｐｈｙｌｌｕｓ）等の観賞用植物などの種子発芽率向上、葉色の向上、葉面積の増加、葉生重の増加等、つまり植物体の生長促進（生長調節）をすることができるのも特徴である。
　さらに本発明は、特にこれらに限定されるものではないが、細菌、糸状菌などによる各種植物病害、例えば、シュウドペロノスポラ（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ）属菌、例えばキュウリべと病菌（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｎｏｓｐｏｒａ　ｃｕｂｅｎｓｉｓ）、ベンチュリア（Ｖｅｎｔｕｒｉａ）属菌、例えばリンゴ黒星病菌（Ｖｅｎｔｕｒｉａ　ｉｎａｅｑｕａｌｉｓ）、エリシフェ（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ）属菌、例えばコムギうどんこ病菌（Ｅｒｙｓｉｐｈｅ　ｇｒａｍｉｎｉｓ）、ピリキュラリア（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ）属菌、例えばイネいもち病菌（Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ　ｏｒｙｚａｅ）、ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）属菌、例えばキュウリ灰色かび病菌（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ　ｃｉｎｅｒｅａ）、リゾクトニア（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ）属菌、例えばイネ紋枯病菌（Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ　ｓｏｌａｎｉ）、パクシニア（Ｐｕｃｃｉｎｉａ）属菌、例えばコムギ赤さび病菌（Ｐｕｃｃｉｎｉａ　ｒｅｃｏｎｄｉｔａ）、セプトリア（Ｓｅｐｔｏｒｉａ）属菌、例えばコムギふ枯病菌（Ｓｅｐｔｏｒｉａ　ｎｏｄｏｒｕｍ）、スクレロティニア（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ）属菌、例えばキュウリ菌核病菌（Ｓｃｌｅｒｏｔｉｎｉａ　ｓｃｌｅｒｏｔｉｏｒｕｍ）、ピシウム（Ｐｙｔｈｉｕｍ）属菌、例えばキュウリ苗立枯病菌（Ｐｙｔｈｉｕｍ　ｄｅｂａｒｙａｎｕｍ　Ｈｅｓｓｅ）、スフェロテカ（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ）属菌、例えばキュウリうどんこ病菌（Ｓｐｈａｅｒｏｔｈｅｃａ　ｃｕｃｕｒｂｉｔａｅ）、バークホルデリア（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ）属細菌、例えばイネ苗立枯病菌（Ｂｕｒｋｈｏｌｄｅｒｉａ　ｐｌａｎｔａｒｉｉ）、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）属細菌、例えばトマト茎えそ細菌病菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｃｏｒｒｕｇａｔａ）などを防除することができるのも特徴である。
　本発明に係る害虫防除剤、植物生長調節剤、植物病害防除剤等においては、１２Ｂ菌株を単独の有効成分（有効菌）とすることもできるが、単体であるいは１２Ｂ菌株とともに、１２Ｂ菌株の変異体を使用することもできる。変異体は、上記１２Ｂ菌株の菌学的特性を有し、且つ、害虫防除作用、植物生長調節作用及び植物病害防除作用を有するものであれば、自然突然変異株、紫外線や化学変異剤を用いての突然変異株、細胞融合株、遺伝子組換え株などいずれも利用可能である。
　本発明に係る微生物農薬は、そのまま直接植物体に施用するか、あるいは水などで希釈して施用することができ、特に限定はされない。例えば、直接植物体や害虫に散布する方法、土壌に散布する方法、植物や土壌に添加する水や肥料に薬剤を添加する方法などがあげられる。また、幼苗、葉、種子等を薬剤を含む液体で浸漬処理する方法も好適である。
　本発明に係る薬剤の施用時期及び施用量は、適用植物、対象害虫又は対象病害、施用方法、被害発生傾向、被害の程度、環境条件、使用する剤型などによって異なる場合があるため、適宜調整されることが好ましく一概には規定できないが、例えば、植物体あたり液剤を１ｍｌ～１Ｌ、好ましくは１０ｍｌ～５００ｍｌ噴霧処理する方法などを例示することができる。また、施用時期は、これも適用植物や剤型等により異なる場合があるが、基本的にはどの時期に施用しても問題はない。さらには、本発明は抵抗性害虫出現の懸念がほとんどない微生物農薬であるため、数日間の連続使用や連作での連用も可能である。
　さらに、本発明に係る薬剤は、１２Ｂ菌株を有効成分として用いるほか、不活性な液体又は固体の担体で希釈し、必要に応じて界面活性剤、その他の補助剤を加えた薬剤としても良い。具体的な製剤例としては、例えば粉剤、粒剤、乳剤、水和剤、懸濁製剤、フロアブル剤等の剤型が挙げられる。また、好ましい担体の例としては、タルク、ベントナイト、クレー、カオリン、珪藻土、ホワイトカーボン、バーミキュライト、消石灰、珪砂、硫安、尿素、多孔質な固体担体、水、イソプロピルアルコール、キシレン、シクロヘキサノン、メチルナフタレン、アルキレン、グリコールなどの液体担体が挙げられる。界面活性剤及び分散剤としては、例えばジナフチルメタンスルホン酸塩、アルコール硫酸エステル塩、アルキルアリールスルホン酸塩、リグニンスルホン酸塩、ポリオキシエチレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノアルキレート等が挙げられる。補助剤としては、例えばカルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アラビアガム、キサンタンガム等が、保護剤としては、例えばスキムミルク、ｐＨ緩衝剤等が挙げられる。これらの使用量は、１２Ｂ菌株の菌体及び／又は菌体の培養物の量、薬剤の適用時期や適用量などに応じて適宜設定すれば良い。
　そしてさらに、本発明に係る薬剤は、１２Ｂ菌株を有効成分として用いるほか、あわせて他の殺虫成分、除草成分、植物生長調節成分や肥料成分を含むことができ、また、１２Ｂ菌株以外の他の菌株を併存させても良い。
　このようにして、広い害虫・病害防除スペクトラム及び、植物生長促進効果を有する新菌株であるボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株の菌体（生菌体）及び／又は該菌体培養物を有効成分とすることで、複数種の害虫防除に実用的な効果を示し、且つ、植物生長調節効果や植物病害防除効果も発揮する、安全性の高い新規微生物農薬を提供することができる。そして、当該微生物農薬を施用することで、他の併用手段を用いなくとも広く害虫や病害の防除、及び、植物の生育促進を図ることができる。
　なお、本発明において「防除」とは、害虫（有害生物）や植物病原菌による病気等の予防、忌避のみならず、害虫等の除去、死滅（殺虫、殺菌）をも含む概念である。したがって、害虫等が既に寄生した植物であっても、本発明の薬剤を適用することにより植物から害虫等を除去することができ、害虫による摂食や害虫等による病気の誘発を防止することができる。また、病害についても、この予防・治療効果により防ぐことができる。
　以下、本発明の実施例について述べるが、本発明はこれらの実施例のみに限定されるものではなく、本発明の技術的思想内においてこれらの様々な変形が可能である。
（ボーベリア・バッシアナ１２Ｂ菌株の培養）
　茨城県筑西市関本において体表面が粉状に白くなって死亡していたハエの成虫からこの白い部分を採取し、これをローズベンガル０．０６％を添加したペプトン１％、ブドウ糖４％加用サブロー寒天培地に接種して２４℃で培養後、胞子を界面活性剤添加滅菌水で階段希釈してサブロー培地で単胞子分離をした。分離した菌株の中から、タバココナジラミに対して高い感染性を有するボーベリア・バッシアナ１２Ｂ菌株を見出した。この菌株を、ペプトン１％、酵母エキス１％、ブドウ糖２％加用ＳＤＹ寒天培地で２０日間再培養し、－２５℃に凍結保存した。１２Ｂ菌株を以下の実施例に用いる際には、特に記載のない限り、凍結保存中の菌株をＳＤＹ培地でその都度再培養し、胞子を界面活性剤添加滅菌水で密度調整したものを用いた。
（コナジラミ類殺虫活性試験）
　キュウリまたはキャベツ幼苗にタバココナジラミ成虫を放飼し、１日間産卵させた。成虫を除去したのち、７または８日間静置した（２５℃１６Ｌ８Ｄ）。１齢幼虫以外を除去した後、１齢幼虫が寄生した幼苗を１２Ｂ菌株胞子が１×１０７個／ｍｌとなるように希釈調整した展着剤（マイリノー（登録商標）５，０００倍加用）を含む胞子懸濁液に浸漬した。軽く風乾した後、プラスチックカップに入れ、蓋をした。処理後６日間は蓋をして加湿状態とし、６日目以降は過湿による致死を防ぐため蓋をはずした。処理１１日後に生存虫数および死虫数をカウントし、死虫率を算出した。試験結果を表１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
　この結果、１２Ｂ菌株がコナジラミ類に対して有効な殺虫活性を有することが明らかとなった。
（アザミウマ類殺虫活性試験）
　供試虫（ヒラズハナアザミウマあるいはミカンキイロアザミウマ）１２頭を接種した寒天（クリスタルバイオレット０．０５％）上のインゲンリーフディスクに、１２Ｂ菌株胞子が１×１０７個／ｍｌとなるように希釈調整した展着剤（マイリノー５，０００倍加用）を含む胞子懸濁液を自動回転散布機を用いて散布した（２ｍｌ／ｃｍ２）。軽く風乾させた後、蓋をして加湿状態とした。過湿による致死を防ぐため、２４時間後に蓋をはずし、メッシュ付の蓋をした。処理４日後に生存虫数および死虫数をカウントし、死虫率を算出した。試験結果を表２、３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
　この結果、１２Ｂ菌株がアザミウマ目害虫に対して有効な殺虫活性を有することが明らかとなった。
（スガ類及びヤガ類殺虫活性試験）
　１２Ｂ菌株胞子が１×１０７個／ｍｌとなるように希釈調整した展着剤（マイリノー５，０００倍加用）を含む胞子懸濁液にキャベツ葉を浸漬し、風乾させた後、６０ｍｌのプラスチックカップに入れ、供試虫（コナガあるいはオオタバコガ）５頭を放飼し蓋をした。処理７日後に生存虫数および死虫数をカウントし、死虫率を算出した。試験結果を表４、５に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000005
　この結果、１２Ｂ菌株がチョウ目害虫、特にスガ類及びヤガ類に対して有効な殺虫活性を有することが明らかとなった。
（ゾウムシ類殺虫活性試験）
　１２Ｂ菌株を培養した９ｃｍプラスチックシャーレの胞子上にアズキゾウムシを乗せて分生子と直接接触させ、その後、アズキを入れたカップ内にそれぞれ移した。処理６日後に生存虫数および死虫数をカウントし、死虫率を算出した。試験結果を表６に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000006
　この結果、１２Ｂ菌株がコウチュウ目害虫、特にゾウムシ類に対して有効な殺虫活性を有することが明らかとなった。
（アブラムシ類殺虫活性試験）
　キュウリ幼苗にワタアブラムシ成虫を接種し、２４時間産仔させた。成虫を除去したのち、１２Ｂ菌株胞子が１×１０７個／ｍｌとなるように希釈調整した展着剤（マイリノー５，０００倍加用）を含む胞子懸濁液に浸漬した。軽く風乾した後、プラスチックカップに入れ、蓋をした。処理４日後に生存虫数および死虫数をカウントし、死虫率を算出した。試験結果を表７に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000007
　この結果、１２Ｂ菌株がアブラムシ類に対して有効な殺虫活性を有することが明らかとなった。
（トマト茎えそ細菌病原因菌に対する抗菌作用）
　１％ショ糖加用蛹煎汁（ＰＳ）液体培地で振とう培養した１２Ｂ菌株培養液、またはＰＳ液体培地を、遠心分離して上清を回収し凍結乾燥後、それぞれ原液の１０倍濃度となるよう滅菌水に再溶解した。これらの１０倍濃縮液、ストレプトマイシン５０ｐｐｍ溶液、及び滅菌水を直径８ｍｍのろ紙に充分量染みこませて、トマト茎えそ細菌病原因菌の懸濁液を塗抹したＰＴＹＧ寒天培地上に静置し、培養５日後の阻止円の直径を計測した。試験結果を表８に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000008
　この結果、１２Ｂ菌株がトマト茎えそ細菌病原因菌に対して有効な殺菌活性を有することが明らかとなった。
（キュウリうどんこ病防除効果）
　ＹＧ液体培地で振とう培養した菌糸濃度１．０×１０８個／ｍｌの１２Ｂ菌株培養液を子葉の展開したキュウリ幼苗に１株に対し１０ｍｌ散布した。風乾した後、うどんこ病の感染したキュウリ葉面の胞子を吹きかけた。処理後１０日後にうどんこ病の発病度を評価し、防除価を算出した。発病指数の基準、発病度及び防除価の算出式と試験結果を表９に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000009
　この結果、１２Ｂ菌株がキュウリうどんこ病に対して有効な防除活性を有することが明らかとなった。
（トマト及びピーマン種子の発芽促進効果）
　ＰＳ液体培地で培養した１２Ｂ菌株培養液を遠心分離し、菌糸を回収した。界面活性剤を含む滅菌水４０ｍｌで３回遠心洗浄操作を繰り返し、界面活性剤を含む滅菌水で菌糸濃度を１．０×１０８個／ｍｌに調製した。これをトマト（品種：ポンテローザ）またはピーマン（品種：京みどり）の種子が２４粒入ったマイクロチューブに８００μｌ加え、２５℃で３．５時間浸漬処理した。水気をペーパータオル上で軽く拭き取った後、トレイに２４粒ずつに播種した。処理１１日後に発芽した種子の数を調査し、発芽率を算出した。結果を表１０に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000010
　この結果、１２Ｂ菌株がトマト及びピーマン種子の発芽促進活性を有することが明らかとなった。
（カーネーションの種子発芽促進効果）
　ＰＳ液体培地で培養した１２Ｂ菌株培養液を遠心分離し、菌糸を回収した。界面活性剤を含む滅菌水４０ｍｌで３回遠心洗浄操作を繰り返し、界面活性剤を含む滅菌水で菌糸濃度を１．０×１０８個／ｍｌに調製した。これをカーネーション（品種：シャボー）種子が１５粒入ったマイクロチューブに８００μｌ加え、２５℃で一昼夜浸漬処理した。水気をペーパータオル上で軽く拭き取った後、培土を４５ｇ敷き詰めた２００ｍｌ容量のプラスチックカップに１０粒ずつに播種して、さらに５ｇの培土で覆土し２５℃のチャンバー内で育苗した。処理１１日後に発芽した種子の数を調査し、発芽率を算出した。結果を表１１に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000011
　この結果、１２Ｂ菌株がカーネーション種子の発芽促進活性を有することが明らかとなった。
（トマトの生育促進効果）
　土壌フスマ培地で２１日間１２Ｂ菌株を培養後の培養物、または土壌フスマ培地を、それぞれ育苗用培土に１０分の１容となるように混和した培土にトマト（品種：ハウス桃太郎）の幼苗を移植して人工気象室内で育成した。移植２１日後に、各処理区５株を、上から３葉位の５小葉について葉色（ＳＰＡＤ値）を測定するとともに、同３～５葉位について葉面積および葉生重を測定した。試験結果を表１１に示す。
　この結果、１２Ｂ菌株がトマト葉色の向上活性、及び、葉面積の増加と葉生重の増加活性を有することが明らかとなった。
（チンゲンサイの生育促進効果）
　ＰＳ液体培地で培養した１２Ｂ菌株培養液を遠心分離し、菌糸を回収した。界面活性剤を含む滅菌水４０ｍｌで３回遠心洗浄操作を繰り返し、界面活性剤を含む滅菌水で菌糸濃度を１．０×１０８個／ｍｌに調製した。これをチンゲンサイ（品種：長葉）種子が入ったマイクロチューブに８００μｌ加え、２５℃で一昼夜浸漬処理した。水気をペーパータオル上で軽く拭き取った後、培土を４５ｇ敷き詰めた２００ｍｌ容量のプラスチックカップに播種し、さらに５ｇの培土で覆土し２５℃のチャンバー内で育苗した。処理２０日後にチンゲンサイの本葉１枚のＳＰＡＤ値を３回測定し、その平均値を算出した。結果を表１３に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000013
　この結果、１２Ｂ菌株がチンゲンサイの葉色向上活性を有することが明らかとなった。
　以上述べたように、ボーベリア・バッシアナ１２Ｂ菌株を有効成分（有効菌）とする薬剤（微生物農薬）を根、茎、葉、種子などの植物体上、あるいはその栽培土壌中に存在させることによって、極めて広範囲に各種害虫を防除し、植物病害の発生も抑制し、且つ、植物生長促進も図ることができる。
　本発明を要約すれば次のとおりである。
　本発明は、複数種の害虫に対して充分な防除効果を発揮し、且つ、植物生長調節効果や植物病害防除効果などもあわせて発揮する、微生物農薬として有効且つ安全に使用可能な新菌株、及び、当該菌株を用いた新規な微生物農薬を提供することを目的とする。
　そして、ボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株（ＮＩＴＥ　Ｐ－１５７４）の菌体、菌体の培養物、菌体の培養上清等を有効成分とすることで、複数種の害虫に対して有効な害虫防除剤、植物生長調節剤、植物病害防除剤などを提供できる。
　本発明において寄託されている微生物の受託番号を下記に示す。
（１）ボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株（ＮＩＴＥ　Ｐ－１５７４）。

Claims (6)

  1. 　害虫防除作用、植物生長調節作用及び植物病害防除作用を有する、ボーベリア・バッシアナ（Ｂｅａｕｖｅｒｉａ　ｂａｓｓｉａｎａ）１２Ｂ菌株（ＮＩＴＥ　Ｐ－１５７４）。
  2. 　請求項１に記載の菌株の生菌体及び／又は菌体の培養物を有効成分として含有することを特徴とする害虫防除剤。
  3. 　請求項１に記載の菌株の生菌体及び／又は菌体の培養物を有効成分として含有することを特徴とする植物生長調節剤。
  4. 　植物生長調節が、トマト及び／又はチンゲンサイの葉色向上、トマトの葉の生長促進、トマト及び／又はピーマン及び／又はカーネーションの種子発芽率向上から選ばれる少なくとも１以上である請求項３に記載の剤。
  5. 　請求項１に記載の菌株の生菌体、菌体の培養物、菌体の培養上清の少なくとも１以上を有効成分として含有することを特徴とする植物病害防除剤。
  6.   植物病害防除が、トマト茎えそ細菌病及び／又はキュウリうどんこ病の防除である請求項５に記載の剤。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022076577A1 (en) * 2020-10-06 2022-04-14 Sigurdson John Thomas Biological pesticide fungus effective against multiple different species of insect
US20230129692A1 (en) * 2020-10-06 2023-04-27 John Thomas Sigurdson Biological pesticide fungus effective against multiple different species of insect

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102105252B1 (ko) * 2018-11-08 2020-04-27 전북대학교산학협력단 닭진드기 방제효과를 갖는 보베리아 바시아나 jef-410 균주, 이를 이용한 닭진드기 방제용 조성물 및 닭 진드기 방제방법
JP7214866B2 (ja) * 2018-11-16 2023-01-30 キュン プク ナショナル ユニバーシティ インダストリ－アカデミック コーポレーション ファンデーション 優れた殺虫効果および胞子生成能を有する新規ビューベリアバシアナｋｎｕ－１０１菌株およびその用途
KR102342702B1 (ko) * 2020-05-21 2021-12-22 충북대학교 산학협력단 모기 성충에 대한 살충 활성을 갖는 뷰베리아 바시아나 jn5r1w1 균주 및 이의 용도

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009057317A (ja) * 2007-08-31 2009-03-19 Kyoyu Agri Kk 有害生物防除剤

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009057317A (ja) * 2007-08-31 2009-03-19 Kyoyu Agri Kk 有害生物防除剤

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
AKELLO J. ET AL.: "Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin as an endophyte in tissue culture banana (Musa spp.).", J. INVERTEBR. PATHOL., vol. 96, no. 1, 2007, pages 34 - 42, XP022201402, DOI: doi:10.1016/j.jip.2007.02.004 *
HIROKAZU TOYAMA ET AL.: "Investigation of High Humidity Requirement for Infection of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) by Two Entomopathogenic Fungi, Beauveria bassiana and Lecanicillium muscarium", JAPANESE JOURNAL OF APPLIED ENTOMOLOGY AND ZOOLOGY, vol. 57, no. 1, February 2013 (2013-02-01), pages 27 - 34 *
MOTOKI TAKAGI ET AL.: "Shisetsu Saibai ni Okeru Bisho Gaichurui no Biseibutsu Bojo Gijutsu no Kaihatsu 3. Kakushu Shisetsu ni Okeru Bojo Gijutsu no Kaihatsu", IBARAKI-KEN NOGYO SOGO CENTER SEIBUTSU KOGAKU KENKYUSHO SHIKEN SEISEKISHO, vol. 2004, 2005, pages 159 - 160 *
QUESADA-MORAGA E. ET AL.: "Systemic protection of Papaver somniferum L. against Iraella luteipes (Hymenoptera: Cynipidae) by an endophytic strain of Beauveria bassiana (Ascomycota: Hypocreales).", ENVIRON. ENTOMOL., vol. 38, no. 3, 2009, pages 723 - 730 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022076577A1 (en) * 2020-10-06 2022-04-14 Sigurdson John Thomas Biological pesticide fungus effective against multiple different species of insect
US20230129692A1 (en) * 2020-10-06 2023-04-27 John Thomas Sigurdson Biological pesticide fungus effective against multiple different species of insect

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