WO2014178641A1 - 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템 - Google Patents

세포 및 용액조건 스크리닝 시스템 Download PDF

Info

Publication number
WO2014178641A1
WO2014178641A1 PCT/KR2014/003833 KR2014003833W WO2014178641A1 WO 2014178641 A1 WO2014178641 A1 WO 2014178641A1 KR 2014003833 W KR2014003833 W KR 2014003833W WO 2014178641 A1 WO2014178641 A1 WO 2014178641A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
cell
concentration gradient
optical module
gradient chip
screening system
Prior art date
Application number
PCT/KR2014/003833
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
김성우
최용해
김은섭
안치우
김덕중
이정환
Original Assignee
나노바이오시스 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 나노바이오시스 주식회사 filed Critical 나노바이오시스 주식회사
Publication of WO2014178641A1 publication Critical patent/WO2014178641A1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M41/00—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation
    • C12M41/30—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration
    • C12M41/36—Means for regulation, monitoring, measurement or control, e.g. flow regulation of concentration of biomass, e.g. colony counters or by turbidity measurements
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M1/00—Apparatus for enzymology or microbiology
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12M—APPARATUS FOR ENZYMOLOGY OR MICROBIOLOGY; APPARATUS FOR CULTURING MICROORGANISMS FOR PRODUCING BIOMASS, FOR GROWING CELLS OR FOR OBTAINING FERMENTATION OR METABOLIC PRODUCTS, i.e. BIOREACTORS OR FERMENTERS
    • C12M3/00—Tissue, human, animal or plant cell, or virus culture apparatus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase

Definitions

  • the present invention relates to a cell and solution condition screening system, and more particularly, to a cell and solution condition screening system capable of controlling a culture environment during cell culture using a concentration gradient chip and measuring time-phase without contamination of cells using a screening device. will be.
  • Cell culture is a process of separating and culturing cells isolated from an organism by treatment with proteolytic enzymes, which is essential for biological research in various fields such as cell biology.
  • single cells obtained by aseptic selection of living tissue, treated with digestive enzymes such as trypsin or pronase, separated into single cells, and cultured in single cells are dispersed by the same enzymatic treatment.
  • Subcultures that are implanted, inoculated and cultured are included.
  • Cell culture began to develop in earnest in the 1950's with the development of cell dispersion by trypsin treatment.
  • the development of cell culture method makes it possible to treat cells that make up a living body as unicellular organisms. Based on this, basic metabolism, proliferation, differentiation, aging, carcinogenesis, and viral infection of cells are analyzed and quantitatively treated. I can do it.
  • the conventional cell culture method may be contaminated cells when taken out to measure the cells in the culture chamber, the process of replacing the culture medium of the well plate is very complicated and requires a high degree of difficulty in cell culture, Accordingly, there is a problem in that professional research personnel are required and reproducibility is also lowered.
  • an apparatus for culturing cells in a well plate and measuring the cultured cells by time zone has been developed.
  • NiKon of Japan has developed an incubation chamber / cell culture screening integration system through a Biostation CT model.
  • the screening system of Nikon may use a well plate, a culture dish, and a culture flask, and has the advantage of enabling screening to measure cell changes by cell culture and time zone, and culture. Since the cells are not taken out of the chamber, contamination can be prevented, and since the sequencing is used, the effort of the research staff is reduced.
  • the screening system of Nikon uses a well plate, which requires a large amount of solution, thus requiring high cost. It is difficult to control the culture environment such as the solution environment (especially the concentration of the culture solution), and the robot is required to transfer the well plate and dispensing system. There was this expensive issue.
  • Olympus of Japan has developed a fully automatic fluorescence microscope screening system for cell analysis through the FSX100 model.
  • the Olympus screening system can use Well Plate, Dish, simple configuration, medium price, and screening has the advantage that can be used, but cell culture is impossible.
  • Korea's NanoEntech has developed a fluorescent cell analyzer through the JULI model.
  • the nanoentec fluorescence cell analyzer can use Well Plate, Dish, Flask and has the advantages of simple configuration and low price, but there is a problem that cell culture and screening are impossible.
  • the present invention is to solve the above problems, to provide a cell and solution condition screening system that can control the culture environment when the cell culture using the concentration gradient chip and can be measured by time zones without contamination of the cells using the screening device
  • a cell and solution condition screening system that can control the culture environment when the cell culture using the concentration gradient chip and can be measured by time zones without contamination of the cells using the screening device
  • the concentration gradient chip for cell culture is disposed on the top and the concentration in at least one of the transverse direction and the longitudinal direction Stage module for adjusting the position of the gradient chip, and an optical module for measuring the culture conditions of the cells and the concentration gradient chip cultured in the concentration gradient chip.
  • the cell and solution condition screening system further comprises an automatic recognition module for automatically recognizing the positional relationship between the concentration gradient chip disposed on top of the stage module and the optical module, wherein the stage module, According to the positional relationship between the density gradient chip and the optical module recognized by the auto recognition module, the position of the density gradient chip may be adjusted in at least one of a horizontal direction and a vertical direction.
  • an automatic recognition module for automatically recognizing the positional relationship between the concentration gradient chip disposed on top of the stage module and the optical module, wherein the stage module, According to the positional relationship between the density gradient chip and the optical module recognized by the auto recognition module, the position of the density gradient chip may be adjusted in at least one of a horizontal direction and a vertical direction.
  • the optical module may perform an auto-focusing function according to a distance between the density gradient chip and the optical module and a focal length of the optical module.
  • the optical module may measure cells cultured in the concentration gradient chip at regular time intervals.
  • the optical module may perform at least one of an optical microscope function, a fluorescence microscope function, and a phosphorescence microscope function.
  • the cell and solution condition screening system according to the present invention as described above, it is possible to control the culture environment during the cell culture using the concentration gradient chip, it is possible to measure the time zones without contamination of the cells using the screening device.
  • the cell and solution condition screening system according to the present invention as described above, the solution environment and the surface microenvironment can be controlled at the same time, the analysis time is short, can be implemented at low cost, and easy to operate to utilize the non-specialized research personnel It can be effective.
  • FIG. 1 is a view showing a cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 2 is a view showing an example of a concentration gradient chip that can be applied to the cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • 3A to 3B are diagrams illustrating a concentration gradient process of a concentration gradient chip that can be applied to a cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • 4A to 4B are graphs showing concentration gradient results by a concentration gradient chip that can be applied to a cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • the cell and solution condition screening system 100 may include a stage module 110 and an optical module 120.
  • a concentration gradient chip 115 for culturing a cell may be disposed at an upper end thereof, and the position of the concentration gradient chip may be positioned in at least one of a horizontal direction and a vertical direction. I can adjust it.
  • the concentration gradient chip 115 may be made of various materials such as a PDMS chip, a plastic chip, or a glass chip, and may be implemented in the form of a lab on a chip, and inject a plurality of solutions into each injection part. In this case, a plurality of solutions may be mixed with each other over time to produce various concentrations at once.
  • the concentration gradient chip 115 may implement various concentration gradients in a single experiment, and in the case of culturing cells in the concentration gradient chip or performing specific drug experiments on pre-cultured cells, various concentration conditions may be achieved in one experiment.
  • the results e.g., the effect of the composition of the cell culture solution on the cells, the effect of the composition of the specific solution on the pre-cultured cells, etc.
  • the concentration gradient chip 115 can minimize the amount of the expensive solution is used, there is an advantage that can change the type of the solution used in the middle of the experiment.
  • the optical module 120 may measure the culture conditions of the cells grown in the concentration gradient chip 150 and the concentration gradient chip 150.
  • the optical module 120 may measure cells cultured in the concentration gradient chip 150 at regular time intervals (eg, 1 hour, 2 hours, 3 hours, etc.).
  • the optical module 120 may analyze the culture conditions such as the concentration of the solution gradient in the concentration gradient chip 150 through RGB analysis.
  • the optical module 120 may perform at least one of an optical microscope function, a fluorescence microscope function, and a phosphorescence microscope function, and thus a component for performing at least one of the optical microscope function, the fluorescence microscope function, and the phosphorescence microscope function. It may be provided.
  • the optical module 120 uses a general optical microscope function, the cell characteristics, such as cell cycle (Cell Cycle), cell morphology (Cell Morphology), cell size (Cell Size), cell counting (Cell Counting), Cell migration (Migration) and cell population (Colony Counting) and the like can be measured.
  • the optical module 120 may include a light source and a measuring unit to perform a fluorescence microscope function, and may be arranged in the order of the light source, the sample, and the measuring unit.
  • the optical module 120 may further include a filter between the light source and the sample and between the sample and the measurement unit to perform a fluorescence microscope function.
  • the light source is required for light emission of the phosphor, and the filter may be implemented as a multi filter to observe fluorescence of various wavelength bands.
  • the optical module 120 may include a measuring unit to perform a phosphorescent microscope function, and may be arranged in order of a sample and a measuring unit.
  • the optical module 120 may further include a filter between the sample and the measurement unit to perform a phosphorescent microscope function. Since phosphorescence is self-luminous, no light source is required, and the filter may be implemented as a multi-filter to observe phosphorescence in various wavelength bands.
  • the optical module 120 uses a fluorescence / phosphorescence microscope function to measure various characteristics of a cell, ie, cell line generation, transfection efficiency, specific gene expression, and cell viability. Cell Viability, Live / Dead cell assay, and Cytotoxicity of cells in solution can be performed.
  • the optical module 120 uses a fluorescence / phosphorescence microscope function to measure various characteristics of stem cells, i.e. cell type generation (iPS Cell Line Generation), embryonic stem cell shape identification (Embryoid Body Morphology), stem cell marker identification (Stem Cell Marker Analysis), Transfection Efficiency, Specific Gene Expression, Proliferation, Cell Viability, Live / Dead Cell Assay, Cytotoxicity, etc. can do.
  • the positional relationship between the concentration gradient chip 115 and the optical module 120 disposed on the top of the stage module 110 may further include an automatic recognition module (not shown) that automatically recognizes X, Y, Z coordinate values.
  • the auto recognition module may be additionally disposed at the end of the optical module 120 and may be installed in various locations.
  • the stage module 110 may include the concentration gradient chip in at least one of a horizontal direction and a vertical direction according to the positional relationship between the density gradient chip 115 and the optical module 120 recognized by the auto recognition module. 115) position can be adjusted. That is, the stage module 110 is capable of automatically moving the X / Y axis according to the recognition result of the automatic recognition module, accordingly, the cell and solution condition screening system 100 according to an embodiment of the present invention, In the case of time-lapse measurement, it is possible to measure at the correct position automatically.
  • the optical module 120 automatically focuses in the Z-axis direction according to the distance between the density gradient chip 115 and the optical module 120 recognized by the auto recognition module and the focal length of the optical module 120. (Auto-focusing) function can be performed, and the state of the cell can be measured accurately.
  • the cell and solution condition screening system 100 since the stage module 110 and the optical module 120 are combined to observe the concentration gradient chip 115, the cells are present.
  • the concentration gradient chip 115 may measure the same position in the optical module 120 at a time-lapse time. That is, the cell and solution condition screening system 100 according to an embodiment of the present invention, while culturing the cells on the concentration gradient chip 115 automatically in the optical module 120 at certain time intervals without contamination of the cells in the middle of the culture. By observing the cells, or experiment with a solution of various concentrations in the pre-cultured cells can be observed by the optical module 120 at a certain time period without cell contamination.
  • FIG. 2 is a view showing an example of a concentration gradient chip that can be applied to the cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • a BLUE solution and a RED solution may be injected into each channel through an inlet provided at an upper end of a gradient chip.
  • the solutions injected through the inlet may be continuously diluted to various concentrations while repeating branching and joining in the concentration gradient channel.
  • the concentration that can be produced using such a concentration gradient chip may be variously changed according to the design of the chip, and three or more kinds of solutions may be injected into the injection unit.
  • 3A to 3B are diagrams illustrating a concentration gradient process of a concentration gradient chip that can be applied to a cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • FIG. 3A is a view illustrating a state before a sample (solution) is injected, that is, before a concentration gradient, and two solutions may be injected into respective channels through an injection unit (inlet) shown on the left side.
  • the flow rate of the solution injected through the injection unit may be 0.0030mL / min.
  • Figure 3b is a view showing a state in which a concentration gradient is made by injecting a sample, it is possible to obtain a solution of various concentrations through the chamber on the right.
  • FIG. 3C is a diagram illustrating a concentration gradient result, in which the concentration of the solution varies from the first channel Ch.1 to the tenth channel Ch.10 in various gradients.
  • 4A to 4B are graphs showing concentration gradient results by a concentration gradient chip that can be applied to a cell and solution condition screening system according to an embodiment of the present invention.
  • 4A and 4B are graphs of a result of analyzing the concentration gradient of the analysis region illustrated in FIG. 3C, and show a result of varying concentrations of the solution from the first channel Ch. 1 to the tenth channel Ch. 10. Is shown.
  • concentration gradient analysis results may be derived through RGB analysis through the optical module 120.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

세포 및 용액조건 스크리닝 시스템이 개시된다. 상기 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템은, 세포 배양을 위한 농도 구배 칩이 상단에 배치되고 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩의 위치를 조정하는 스테이지 모듈, 및 상기 농도 구배 칩에 배양된 세포 및 상기 농도 구배 칩의 배양조건을 측정하는 광학 모듈을 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

세포 및 용액조건 스크리닝 시스템
본 발명은 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 관한 것으로서, 특히 농도 구배 칩을 이용한 세포 배양시 배양환경을 조절할 수 있고 스크리닝 장치를 이용하여 세포의 오염 없이 시간대별 측정이 가능한 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 관한 것이다.
세포 배양(Cell Culture)이란, 단백질 분해효소 등의 처리로 생물체로부터 분리한 세포를 분리하여 배양하는 것으로서, 세포생물학 등 세포를 연구하는 다양한 분야의 생물학 연구 등에 필수적으로 요구되는 작업이다. 이러한 세포 배양에는 생체 조직을 무균적으로 선발해서 트립신이나 프로나아제 등의 소화효소로 처리하여 단세포로 분리하여 배양하는 초대배양 및 계대 중인 세포계나 세포주를 같은 효소처리로 분산시켜 얻어낸 단세포를 증식 배지에 이식, 접종하여 배양하는 계대 배양이 포함된다. 세포 배양은 1950년대에 들어와서 트립신처리에 의한 세포분산법이 개발됨으로써 본격적으로 개발되기 시작하였다. 세포배양법의 개발은 생체를 구성하고 있던 세포를 단세포생물처럼 취급하는 것이 가능하게 되어, 이를 기초로 세포의 기본적 대사, 증식, 분화, 노화, 발암, 바이러스감염 등을 세포 수준에서 분석하고 정량적으로 취급할 수 있게 되었다.
그런데 종래에는 이러한 세포 배양을 위해 주로 웰플레이트(Well Plate, 홈판), 배양접시(Culture Dish) 및 배양플라스크(Culture Flask)를 주로 사용해왔다. 그러나, 이러한 종래의 세포 배양 방법은, 세포 배양을 위해 용액이 양이 많이 필요하여 고비용이 소요되고, 세포 배양 시 용액환경(특히 배양액 농도)과 같은 배양환경을 조절하는 것이 불가능하며, 배양시간이 길고 배양 분석 시간이 오래 걸리는 문제점이 있었다. 또한, 이러한 종래의 세포 배양 방법은 배양 챔버에서 세포를 측정하기 위해 꺼낼 경우 세포가 오염될 수 있고, 웰플레이트의 배양액을 교체할 때의 공정이 매우 복잡하여 세포 배양 시 고난이도의 작업이 요구되며, 이에 따라 전문 연구인력이 필요하고 재현성도 낮아지는 문제점이 있었다.
이러한 종래의 세포 배양 방법의 문제점을 해결하기 위하여, 웰플레이트에서 세포를 배양하고 배양된 세포를 시간대 별로 측정하는 장치가 개발된 바 있다. 일례로서, 일본의 NiKon사에서는 Biostation CT 모델을 통해 인큐베이션 챔버/세포 배양 스크리닝 일체화 시스템을 개발한 바 있다. 상기 Nikon사의 스크리닝 시스템은 웰플레이트(Well Plate), 배양접시(Culture Dish) 및 배양플라스크(Culture Flask)를 사용할 수 있고, 세포배양 및 시간대 별로 세포의 변화를 측정하는 스크리닝이 가능한 장점이 있으며, 배양 챔버에서 세포를 꺼내지 않기 때문에 오염을 막을 수 있고, Sequencing 되어 있기 때문에 연구 인력의 노력이 감소되는 장점은 있으나, 상기 Nikon사의 스크리닝 시스템은, 주로 웰플레이트를 사용하기 때문에 용액의 양이 많이 필요하여 고비용이 소요되고 용액환경(특히 배양액 농도)과 같은 배양환경을 조절하는 것이 어려우며, 웰플레이트를 이송시키기 위하여 로봇(Robot) 이송, 분주 시스템이 필요하기 때문에 구성이 복잡하고 장비의 크기가 크며 장비의 가격이 고가인 문제점이 있었다.
한편, 이외에도 상술한 바와 같은 종래의 세포 배양 방법의 문제점을 해결하기 위하여 일본의 Olympus사에서는 FSX100 모델을 통해 세포분석용 전자동 형광 현미경 스크리닝 시스템을 개발한 바 있다. 상기 Olympus사의 스크리닝 시스템은 Well Plate, Dish를 사용할 수 있고 구성이 간단하고 가격이 중간 가격이며 스크리닝이 가능한 장점이 있으나 세포배양이 불가능한 단점이 있다. 또한, 대한민국의 나노엔텍 사에서는 JULI 모델을 통해 형광 세포 분석기를 개발한 바 있다. 상기 나노엔텍 사의 형광 세포 분석기는 Well Plate, Dish, Flask를 사용할 수 있고 구성이 간단하며 가격이 저가인 장점이 있으나 세포배양 및 스크리닝이 불가능한 문제점이 있다.
따라서, 상술한 바와 같은 종래의 시도들의 문제점을 해결할 수 있는 세포 배양 및 세포/배양조건 스크리닝 장치가 요구되고 있는 실정이다.
본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 농도 구배 칩을 이용한 세포 배양시 배양환경을 조절할 수 있고 스크리닝 장치를 이용하여 세포의 오염 없이 시간대별 측정이 가능한 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템은, 세포 배양을 위한 농도 구배 칩이 상단에 배치되고 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩의 위치를 조정하는 스테이지 모듈, 및 상기 농도 구배 칩에서 배양된 세포 및 상기 농도 구배 칩의 배양조건을 측정하는 광학 모듈을 포함하는 것을 특징으로 한다.
바람직하게는, 상기 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템은, 상기 스테이지 모듈의 상단에 배치된 농도 구배 칩과 상기 광학 모듈 사이의 위치 관계를 자동으로 인식하는 자동인식 모듈을 더 포함하고, 상기 스테이지 모듈은, 상기 자동인식 모듈에 의해 인식된 상기 농도 구배 칩과 상기 광학 모듈 사이의 위치 관계에 따라, 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩의 위치를 조정할 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 광학 모듈은, 상기 농도 구배 칩과 상기 광학 모듈과의 거리 및 상기 광학 모듈의 초점 거리에 따라 자동 초점(Auto-focusing) 기능을 수행할 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 광학 모듈은, 일정한 시간 간격에 따라 상기 농도 구배 칩에 배양된 세포를 측정할 수 있다.
또한 바람직하게는, 상기 광학 모듈은, 광학 현미경 기능, 형광 현미경 기능 및 인광 현미경 기능 중 적어도 하나를 수행할 수 있다.
상기와 같은 본 발명에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템은, 농도 구배 칩을 이용한 세포 배양시 배양환경을 조절할 수 있고 스크리닝 장치를 이용하여 세포의 오염없이 시간대별 측정이 가능한 효과가 있다.
또한, 상기와 같은 본 발명에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템은, 용액환경 및 표면미세환경을 동시에 조절할 수 있고, 분석시간이 짧게 소요되며 저비용으로 구현 가능하고, 조작이 용이하여 비전문 연구인력을 활용할 수 있는 효과가 있다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템을 나타내는 도면이다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 적용될 수 있는 농도 구배 칩의 일례를 나타내는 도면이다.
도 3a 내지 3b는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 적용될 수 있는 농도 구배 칩의 농도 구배 과정을 나타내는 도면이다.
도 4a 내지 4b는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 적용될 수 있는 농도 구배 칩에 의한 농도 구배 결과를 나타내는 그래프이다.
본 발명과 본 발명의 동작상의 이점 및 본 발명의 실시에 의하여 달성되는 목적을 충분히 이해하기 위해서는 본 발명의 바람직한 실시 예를 예시하는 첨부 도면 및 도면에 기재된 내용을 참조하여야 한다.
이하 첨부한 도면을 참조하여 본 발명의 바람직한 실시 예를 설명함으로써, 본 발명을 상세히 설명한다. 각 도면에 제시된 동일한 참조부호는 동일한 부재를 나타낸다.
도 1은 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템을 나타내는 도면이다. 도 1을 참조하면, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템(100)은, 스테이지 모듈(110) 및 광학 모듈(120)을 포함할 수 있다.
스테이지 모듈(110)은, 도 1에 도시된 바와 같이 세포 배양을 위한 농도 구배 칩(115)이 상단에 배치될 수 있고, 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩의 위치를 조정할 수 있다.
농도 구배 칩(115)은 PDMS 칩, 플라스틱 칩 또는 Glass 칩 등 다양한 재질로 이루어질 수 있고, 랩온어칩(Lab on a chip)의 형태로 구현될 수 있으며, 복수 개의 용액을 각각의 주입부에 주입할 경우 시간이 지남에 따라 복수 개의 용액이 서로 혼합(Mixing)되어 다양한 농도를 한번에 만들어 낼 수 있다. 이와 같은 농도 구배 칩(115)은, 한 번의 실험으로 다양한 농도 구배를 구현시킬 수 있고, 농도 구배 칩에서 세포를 배양하거나 기 배양된 세포에 특정 약물 실험을 수행하는 경우 한번의 실험으로 다양한 조건들의 결과(예: 세포를 배양하는 용액의 조성이 세포에 미치는 영향, 특정 용액의 조성이 기 배양된 세포에 미치는 영향 등)를 확인할 수 있는 장점이 있다. 또한, 상기 농도 구배 칩(115)는 고가의 용액이 사용되는 양을 최소화 시킬 수 있고, 사용되는 용액의 종류를 실험 중간에 변화 시킬 수 있는 장점이 있다.
광학 모듈(120)은, 상기 농도 구배 칩(150)에서 배양된 세포 및 상기 농도 구배 칩(150)의 배양 조건을 측정할 수 있다. 광학 모듈(120)은 일정한 시간 간격(예: 1시간, 2시간, 3시간 등)에 따라 농도 구배 칩(150)에 배양된 세포를 측정할 수 있다. 또한, 광학 모듈(120)은 RGB 분석 등을 통하여 농도 구배 칩(150)에 구배된 용액의 농도와 같은 배양 조건을 분석할 수 있다.
상기 광학 모듈(120)은, 광학 현미경 기능, 형광 현미경 기능 및 인광 현미경 기능 중 적어도 하나를 수행할 수 있고, 이에 따라 광학 현미경 기능, 형광 현미경 기능 및 인광 현미경 기능 중 적어도 하나를 수행하기 위한 구성요소를 구비할 수 있다.
일례로서, 광학 모듈(120)은 일반적인 광학 현미경 기능을 이용하여 세포의 다양한 특성, 즉 세포 주기(Cell Cycle), 세포 모양(Cell Morphology), 세포 크기(Cell Size), 세포 수(Cell Counting), 세포 이동(Migration) 및 세포 군집(콜로니 수, Colony Counting) 등을 측정할 수 있다.
또한, 광학 모듈(120)은 형광 현미경 기능을 수행하기 위하여 광원 및 측정부를 구비할 수 있고, 광원, 샘플, 측정부의 순으로 배치될 수 있다. 또한 상기 광학 모듈(120)은 형광 현미경 기능을 수행하기 위하여 광원과 샘플 사이 및 샘플과 측정부 사이에 필터를 더 구비할 수도 있다. 광원은 형광체의 발광을 위하여 필요하고, 상기 필터는 멀티 필터로 구현되어 다양한 파장대의 형광을 관측할 수도 있다.
또한, 광학 모듈(120)은 인광 현미경 기능을 수행하기 위하여 측정부를 구비할 수 있고, 샘플, 측정부의 순으로 배치될 수 있다. 또한 상기 광학 모듈(120)은 인광 현미경 기능을 수행하기 위하여 샘플과 측정부 사이에 필터를 더 구비할 수도 있다. 인광은 자발광하기 때문에 광원이 필요 없고, 상기 필터는 멀티 필터로 구현되어 다양한 파장대의 인광을 관측할 수도 있다.
광학 모듈(120)은 형광/인광 현미경 기능을 이용하여 세포의 다양한 특성 측정, 즉 세포 종류 확인(Cell Line Generation), 감염 효율 확인(Transfection Efficiency), 특정 유전자 발현 확인(Proliferation), 세포 생존율 확인(Cell Viability, Live/Dead cell assay), 및 용액의 세포에 대한　유해성 확인 (Cytotoxicity)을 수행할 수 있다. 또한, 광학 모듈(120)은 형광/인광 현미경 기능을 이용하여, 줄기 세포의 다양한 특성 측정, 즉 세포 종류 확인(iPS Cell Line Generation), 배아줄기세포 모양 확인(Embryoid Body Morphology), 줄기 세포 마커 확인(Stem Cell Marker Analysis), 감염 효율 확인(Transfection Efficiency), 특정 유전자 발현 확인(Proliferation), 세포 생존율 확인(Cell Viability, Live/Dead cell assay), 용액의 세포에 대한 유해성 확인(Cytotoxicity) 등을 수행할 수 있다.
한편, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템(100)은, 스테이지 모듈(110)의 상단에 배치된 농도 구배 칩(115)과 광학 모듈(120) 사이의 위치 관계(예: X, Y, Z 좌표값)를 자동으로 인식하는 자동인식 모듈(미도시)을 더 포함할 수 있다. 상기 자동인식 모듈은, 광학 모듈(120)의 끝단에 추가로 배치될 수 있으며, 이외에도 다양한 위치에 설치될 수 있다.
상기 스테이지 모듈(110)은, 자동인식 모듈에 의해 인식된 농도 구배 칩(115)과 광학 모듈(120) 사이의 위치 관계에 따라, 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩(115)의 위치를 조정할 수 있다. 즉, 상기 스테이지 모듈(110)은 자동인식 모듈의 인식 결과에 따라 자동으로 X/Y축 이동이 가능하고, 이에 따라, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템(100)은, 일정 시간대별 측정(Time-Lapse 측정) 시 자동으로 정확한 위치에서의 측정이 가능한 효과가 있다.
또한, 상기 광학 모듈(120)은, 자동인식 모듈에 의해 인식된 농도 구배 칩(115)과 광학 모듈(120)과의 거리 및 상기 광학 모듈(120)의 초점 거리에 따라 Z축 방향으로 자동 초점(Auto-focusing) 기능을 수행할 수 있어, 세포의 상태 등을 정확히 측정할 수 있다.
한편, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템(100)은, 스테이지 모듈(110) 및 광학 모듈(120)이 결합되어 농도 구배 칩(115)을 관측하기 때문에, 세포가 존재하는 농도 구배 칩(115)을 광학 모듈(120)에서 일정한 시간대 별로(Time-Lapse) 동일한 위치를 측정할 수 있다. 즉, 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템(100)은, 농도 구배 칩(115) 상에서 세포를 배양하면서도 배양 중간에 세포의 오염 없이 일정 시간대 별로 자동으로 광학 모듈(120)에 의해 세포를 관찰하거나, 기배양된 세포에 다양한 농도의 용액을 실험하면서 세포 오염 없이 일정 시간대 별로 광학 모듈(120)에 의해 세포를 관찰할 수 있다.
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 적용될 수 있는 농도 구배 칩의 일례를 나타내는 도면이다.
도 2를 참조하면, 농도 구배 칩(Gradient Chip)의 상단에 구비되는 주입부(Inlet)를 통해 BLUE 용액과 RED 용액을 각각의 채널로 주입시킬 수 있다. 주입부(Inlet)를 통해 주입된 용액들은 농도 구배 채널에서 분기와 합류를 반복하면서 다양한 농도로 연속적으로 희석될 수 있다. 이와 같은 농도 구배 칩을 이용하여 만들어낼 수 있는 농도는 칩의 설계에 따라 다양하게 변경될 수 있고, 주입부에는 3종 이상의 용액을 주입할 수도 있다.
도 3a 내지 도 3b는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 적용될 수 있는 농도 구배 칩의 농도 구배 과정을 나타내는 도면이다.
먼저 도 3a는, 시료(용액)를 주입하기 전, 즉 농도 구배 전인 상태를 나타내는 도면으로서, 좌측에 도시된 주입부(입구)를 통해 2개의 용액을 각각의 채널로 주입시킬 수 있다. 일례로서, 주입부를 통해 주입되는 용액의 유율(Flow rate)는 0.0030mL/min 일 수 있다.
다음으로 도 3b는, 시료를 주입하여 농도 구배가 이루어진 상태를 나타내는 도면으로서, 우측의 챔버를 통해 다양한 농도의 용액을 얻을 수 있게 된다.
마지막으로 도 3c는, 농도 구배 결과를 나타내는 도면으로서, 제1 채널(Ch.1) 부터 제10 채널(Ch.10)까지 용액의 농도가 다양하게 구배된 결과를 얻을 수 있다.
도 4a 내지 도 4b는 본 발명의 일 실시예에 따른 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템에 적용될 수 있는 농도 구배 칩에 의한 농도 구배 결과를 나타내는 그래프이다. 도 4a 및 도 4b는 도 3c에 도시된 분석 영역의 농도 구배를 분석한 결과 그래프로서, 제1 채널(Ch. 1) 부터 제10 채널(Ch. 10)까지 용액의 농도가 다양하게 구배되는 결과가 도시되어 있다. 이와 같은 농도 구배 분석 결과는 광학 모듈(120)을 통한 RGB 분석 등을 통해 도출될 수 있다.
본 발명은 도면에 도시된 실시예를 참고로 설명되었으나 이는 예시적인 것에 불과하며, 본 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 다른 실시 예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명의 진정한 기술적 보호 범위는 첨부된 특허청구범위의 기술적 사상에 의해서 정해져야 할 것이다.

Claims (5)

  1. 세포 배양을 위한 농도 구배 칩이 상단에 배치되고 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩의 위치를 조정하는 스테이지 모듈; 및
    상기 농도 구배 칩에서 배양된 세포 및 상기 농도 구배 칩의 배양조건을 측정하는 광학 모듈;
    을 포함하는 것을 특징으로 하는 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템은 상기 스테이지 모듈의 상단에 배치된 농도 구배 칩과 상기 광학 모듈 사이의 위치 관계를 자동으로 인식하는 자동인식 모듈을 더 포함하고,
    상기 스테이지 모듈은 상기 자동인식 모듈에 의해 인식된 상기 농도 구배 칩과 상기 광학 모듈 사이의 위치 관계에 따라, 가로 방향 및 세로 방향 중 적어도 하나의 방향으로 상기 농도 구배 칩의 위치를 조정하는 것을 특징으로 하는 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템.
  3. 제2항에 있어서,
    상기 광학 모듈은 상기 농도 구배 칩과 상기 광학 모듈과의 거리 및 상기 광학 모듈의 초점 거리에 따라 자동 초점(Auto-focusing) 기능을 수행하는 것을 특징으로 하는 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템.
  4. 제3항에 있어서,
    상기 광학 모듈은 일정한 시간 간격에 따라 상기 농도 구배 칩에 배양된 세포를 측정하는 것을 특징으로 하는 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 광학 모듈은 광학 현미경 기능, 형광 현미경 기능 및 인광 현미경 기능 중 적어도 하나를 수행하는 것을 특징으로 하는 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템.
PCT/KR2014/003833 2013-04-30 2014-04-30 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템 WO2014178641A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2013-0048242 2013-04-30
KR1020130048242A KR20140130279A (ko) 2013-04-30 2013-04-30 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014178641A1 true WO2014178641A1 (ko) 2014-11-06

Family

ID=51843694

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2014/003833 WO2014178641A1 (ko) 2013-04-30 2014-04-30 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템

Country Status (2)

Country Link
KR (1) KR20140130279A (ko)
WO (1) WO2014178641A1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111172025A (zh) * 2020-01-14 2020-05-19 中国科学院烟台海岸带研究所 一种基于细胞的硫化氢活性检测复合微流控芯片装置

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102442858B1 (ko) 2022-02-16 2022-09-14 주식회사 큐리오시스 원추형 나사로 고정하는 베셀홀더

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030062353A (ko) * 2000-11-22 2003-07-23 카가쿠키쥬쯔 신코지교단 단세포 장기배양 현미경 관찰장치
KR100745110B1 (ko) * 2006-01-31 2007-08-01 김광훈 계속적 현미경 관찰이 가능한 세포 배양장치
KR20080046732A (ko) * 2005-10-13 2008-05-27 가부시키가이샤 도카이히트 현미경 스테이지 및 현미경 관찰용 유닛
KR20090093757A (ko) * 2008-02-29 2009-09-02 아주대학교산학협력단 기계적 자극에 대한 줄기세포 분화의 최적의 조건을 검출할수 있는 셀-칩 및 이의 자동 제어 시스템
JP2010004805A (ja) * 2008-06-27 2010-01-14 Olympus Corp 細胞操作観察装置
KR20110064445A (ko) * 2009-12-08 2011-06-15 공주대학교 산학협력단 시간 의존형 농도 구배 형성용 미세 유체 칩

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030062353A (ko) * 2000-11-22 2003-07-23 카가쿠키쥬쯔 신코지교단 단세포 장기배양 현미경 관찰장치
KR20080046732A (ko) * 2005-10-13 2008-05-27 가부시키가이샤 도카이히트 현미경 스테이지 및 현미경 관찰용 유닛
KR100745110B1 (ko) * 2006-01-31 2007-08-01 김광훈 계속적 현미경 관찰이 가능한 세포 배양장치
KR20090093757A (ko) * 2008-02-29 2009-09-02 아주대학교산학협력단 기계적 자극에 대한 줄기세포 분화의 최적의 조건을 검출할수 있는 셀-칩 및 이의 자동 제어 시스템
JP2010004805A (ja) * 2008-06-27 2010-01-14 Olympus Corp 細胞操作観察装置
KR20110064445A (ko) * 2009-12-08 2011-06-15 공주대학교 산학협력단 시간 의존형 농도 구배 형성용 미세 유체 칩

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111172025A (zh) * 2020-01-14 2020-05-19 中国科学院烟台海岸带研究所 一种基于细胞的硫化氢活性检测复合微流控芯片装置
CN111172025B (zh) * 2020-01-14 2022-11-15 中国科学院烟台海岸带研究所 一种基于细胞的硫化氢活性检测复合微流控芯片装置

Also Published As

Publication number Publication date
KR20140130279A (ko) 2014-11-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US9023642B2 (en) Method and apparatus for a miniature bioreactor system for long-term cell culture
Bodénès et al. Microfluidic techniques for enhancing biofuel and biorefinery industry based on microalgae
CN106238112B (zh) 一种微流控芯片及其在病原体的鉴定与药敏实验中的应用
US11427851B2 (en) Use of a fluidic device
CN106399094A (zh) 细胞培养和梯度迁移化验方法和装置
JP2005502378A (ja) 微生物個別細胞培養物の培養方法及び解析方法
CN102580794A (zh) 可定位细胞及生物体的微流控芯片及其应用
CN102822333A (zh) 监控干细胞的分化状态的方法
US20190247847A1 (en) Methods and apparatus for performing metabolic measurements of individual cell types within non-contact co-cultured systems
CN106811409A (zh) 基于微流控芯片的多器官肿瘤靶向药物测试平台及其应用
WO2014178641A1 (ko) 세포 및 용액조건 스크리닝 시스템
CN108168968A (zh) 一种骨髓染色体g带的制作方法
CN106676004B (zh) 微流控培养装置及应用其培养细胞或微生物的方法
JP2023500055A (ja) 細胞培養ウェルプレートのための方法および装置
CN102816695A (zh) 一种微流控芯片及其研究流体剪切力对细胞作用的方法
CN102533647B (zh) 一种诱导干细胞神经分化的方法
CN104560715A (zh) 基于微流控芯片培养及检测肺癌细胞的方法
WO2019193126A1 (en) Microfluidic structure for carrying out biological assays and chip provided with such structure
CN109750065A (zh) 一种小鼠肠上皮隐窝细胞系及其构建与培养方法
Käßer et al. Turbidimetry and dielectric spectroscopy as process analytical technologies for mammalian and insect cell cultures
WO2020130335A1 (ko) 바이오 칩용 필라 구조체
Hsiao 3D spheroid culture systems for metastatic prostate cancer dormancy studies and anti-cancer therapeutics development
Aravamudhan et al. Confocal Microscopy of Reovirus Transport in Living Dorsal Root Ganglion Neurons
CN212568815U (zh) 一种用于治疗细胞分泌蛋白检测的微流控芯片
CN100355880C (zh) 高通量哺乳动物细胞培养基优化方法

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14791267

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 14791267

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1