WO2014129792A1 - 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물 - Google Patents

줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물 Download PDF

Info

Publication number
WO2014129792A1
WO2014129792A1 PCT/KR2014/001332 KR2014001332W WO2014129792A1 WO 2014129792 A1 WO2014129792 A1 WO 2014129792A1 KR 2014001332 W KR2014001332 W KR 2014001332W WO 2014129792 A1 WO2014129792 A1 WO 2014129792A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
stem cells
brain
encephalitis
cells
treatment
Prior art date
Application number
PCT/KR2014/001332
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
장윤실
박원순
Original Assignee
사회복지법인 삼성생명공익재단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 사회복지법인 삼성생명공익재단 filed Critical 사회복지법인 삼성생명공익재단
Priority to EP14754748.3A priority Critical patent/EP2959909B1/en
Priority to US14/768,734 priority patent/US10493104B2/en
Publication of WO2014129792A1 publication Critical patent/WO2014129792A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/28—Bone marrow; Haematopoietic stem cells; Mesenchymal stem cells of any origin, e.g. adipose-derived stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
    • A61K35/48—Reproductive organs
    • A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
    • A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]

Definitions

  • the present invention relates to a composition for treating brain inflammatory diseases comprising stem cells as an active ingredient.
  • Stem cells are cells that have the ability of self-replication and differentiate into two or more cells. Totipotent stem cells, pluripotent stem cells, and multipotent stem cells can be classified as a multipotent stem cell.
  • Pluripotent stem cells are pluripotent cells that can develop into a complete individual. Cells up to 8 cell stages after fertilization of eggs and sperm have these properties. Transplantation into the uterus can result in one complete individual.
  • Pluripotent stem cells are cells that can develop into various cells and tissues derived from ectoderm, mesoderm, and endodermal layer.Inner cell masses located inside the blastocyst appearing after 4-5 days of fertilization. ), which are called embryonic stem cells and differentiate into various tissue cells, but do not form new organisms.
  • Multipotent stem cells are stem cells that can only differentiate into cells specific to the tissues and organs that contain them, as well as the growth and development of individual tissues and organs in the prenatal, neonatal, and adult phases. It is involved in maintaining homeostasis of adult tissues and inducing regeneration in case of tissue damage.
  • Adult tissue-specific pluripotent cells are collectively called adult stem cells.
  • Adult stem cells are cells that are already present in various organs of the human body, and developed into stem cells, and are characterized by differentiation only into specific tissues. Recently, however, it is noted that experiments using adult stem cells to differentiate into various tissues such as hepatocytes have been successful.
  • Stem cells are characterized by self-renewing, differentiation, and immortality, and adult stem cells from a variety of tissues are typically faced by an unlimited number of sources and researchers compared to embryonic stem cells. It is widely used for research because it can avoid ethical problems. Moreover, stem cells isolated from umbilical cord blood have greater advantages than other adult stem cells because, unlike bone marrow or adipose tissue, donors are not at risk of further harm.
  • the brain inflammatory disease refers to an inflammatory disease occurring in the brain due to a specific cause and includes all of encephalitis, meningitis, meningoencephalitis, and the like.
  • Encephalitis is a general term for inflammatory diseases of the brain parenchyma and is distinguished from inflammation (meningitis) occurring in the meninges surrounding the brain. When meningitis and encephalitis are called meningoencephalitis.
  • Encephalitis can be broadly classified into infectious, vasculitis, neoplastic, chemical and idiopathic, depending on the cause, and can be reclassified as encephalitis for specific etiologies according to specific details. It is also classified as acute, subacute, or chronic encephalitis over time.
  • antibiotics have been used as a method for the treatment of inflammatory diseases of the brain.
  • the causative organism is treated by antibiotic treatment, it causes side effects such as severe brain damage, hydrocephalus, deafness, and epilepsy. It is required.
  • systematic studies on the treatment of inflammatory brain diseases using stem cells have been insufficient.
  • the present inventors continued to develop new therapeutic agents for brain inflammatory diseases.
  • brain damage due to inflammatory reactions such as edema is greatly reduced and weight loss is achieved.
  • Excellent treatment effect for inflammatory diseases such as significantly reduced symptoms, reduced cell death and reactive glialization, and significantly reduced brain macrophage and inflammatory cytokine levels.
  • An object of the present invention to provide a pharmaceutical composition for the treatment of brain inflammatory diseases comprising stem cells as an active ingredient.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for the treatment of brain inflammatory diseases comprising stem cells as an active ingredient.
  • Stem cells according to the present invention when directly administered to an animal model of brain inflammatory disease, significantly reduce brain damage due to inflammatory reactions such as edema and greatly alleviate weight loss. The degree is reduced, and the number of active macrophages and inflammatory cytokine level of the brain is significantly reduced, such as having excellent therapeutic effect on brain inflammatory diseases, it can be usefully used in the treatment of brain inflammatory diseases.
  • FIG. 1 is a diagram showing an experimental design for confirming the therapeutic effect of stem cells inflammatory diseases of the brain.
  • Figure 2 is a diagram showing the brain changes before and after the induction of brain inflammation, and whether the stem cells administered through MRI imaging.
  • Figure 3 is a diagram showing the changes in the brain injury site / whole brain area according to whether or not stem cells in the encephalitis animal model.
  • Figure 4 is a diagram showing the weight change according to whether or not stem cells in the encephalitis animal model.
  • Figure 5 is a diagram showing the results of immunofluorescence staining of brain tissue according to whether or not stem cells in the encephalitis animal model.
  • Figure 6 is a diagram showing the change in protein expression in the brain tissue according to whether or not stem cells in encephalitis animal model.
  • Figure 7 is a diagram showing the change in inflammatory cytokine expression in brain tissue according to whether or not stem cells in the encephalitis animal model.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for treating brain inflammatory diseases comprising stem cells as an active ingredient.
  • a stem cell is a cell that is the basis of a cell or tissue constituting an individual, and has an undifferentiated cell having the ability to differentiate into any specific or plural functional cells and a self-replicating ability to repeatedly produce the same cell by itself. It can be called. It occurs in all tissues during fetal development and can be found in some tissues, such as bone marrow and epithelial tissues, which are actively replaced even in adults.
  • the stem cells may be autologous or allogeneic stem cells, may be from any type of animal, including humans and non-human mammals, and is not limited to whether the stem cells are derived from adults or embryos. .
  • the stem cells of the present invention include embryonic stem cells or adult stem cells, preferably adult stem cells.
  • the adult stem cells may be mesenchymal stem cells, human tissue-derived mesenchymal stromal cells, human tissue-derived mesenchymal stem cells, multipotent stem cells or amniotic epithelial cells, the mesenchymal stem cells are umbilical cord , Umbilical cord blood, bone marrow, fat, muscle, nerve, skin, amniotic membrane and placental mesenchymal stem cells (mesenchymal stem cells) selected from the group consisting of, but is not limited thereto.
  • cord blood-derived mesenchymal stem cells were used as the stem cells.
  • Stem cells used in one embodiment of the present invention is isolated and cultured in the cord blood of the human body, the stem cells are expressed CD105 and CD73 markers, CD34, CD45 and CD14 markers are hardly expressed.
  • the stem cells are positive for HLA-AB, negative for HLA-DR, and have the characteristics of expressing the multipotent markers Oct4 and SSEA-4.
  • the method of collecting and separating cord blood is as follows. Normal vaginal delivery can be taken from the umbilical vein, which has been left out of the uterus after birth, and from the umbilical vein. .
  • Umbilical cord blood is collected from the umbilical vein that has been removed out of the uterus after childbirth, and is collected by sterile manipulation from the umbilical vein that has connected the placenta and fetus after birth. In this case, cord blood may be collected before birth of the placenta in the uterus after birth, or cord blood may be collected in vitro after placental detachment occurs. In the case of cesarean section, the placental blood is collected after placenta detachment. After securing the umbilical vein, the cord blood is collected in the cord blood collection bag (bag) containing anticoagulant.
  • bag cord blood collection bag
  • the cells are cultured by injecting mononuclear cells into a culture vessel at an appropriate density.
  • the cells proliferate as a monolayer, of which homogeneous and spindle-shaped cells are observed in a phase contrast microscope.
  • Mesenchymal stem cells are cells that proliferate in the colony form. Subsequently, when the cells are cultured and grown, subculture is performed, and the cells are grown until the required number of cells is reached.
  • a culture medium that can be used for isolation and culture of mesenchymal stem cells a cell culture medium including 10% to 30% FBS can be used, and as a cell culture medium, Dulbecco's modified eagle medium (Dulbecco's modified eagle) can be used.
  • DMEM minimal essential medium
  • MEM minimal essential medium
  • -MEM alpha-minimum essential medium
  • McCoys 5A medium eagle's basal medium
  • CMRL Consaught Medical Research Laboratory
  • Stem cells according to the present invention when directly administered to the ventricles of brain inflammatory disease animal model, while reducing side effects such as greatly reduced brain damage due to inflammatory reactions such as edema and greatly reduced weight loss phenomenon, cell death and reactivity It has an excellent therapeutic effect on inflammatory diseases of the brain, such as a decrease in the degree of entrainment, a significant decrease in the number of active macrophages and inflammatory cytokines in the brain, and thus can be useful for the treatment of brain inflammatory diseases. .
  • the brain inflammatory disease is a general term for all inflammatory diseases occurring in the brain, including but not limited to encephalitis, meningitis, meningoencephalitis.
  • composition of the present invention may further contain at least one known effective ingredient having a therapeutic effect on brain inflammatory diseases together with stem cells.
  • compositions of the present invention can be administered in a dosage form, formulated in a unit dosage form suitable for administration in the body of a subject according to conventional methods in the pharmaceutical art.
  • Formulations suitable for this purpose include parenteral injectables such as injectable ampoules, injectables such as infusion bags, sprays such as aerosol preparations and the like.
  • the injection ampoule may be mixed with the injection solution immediately before use, and physiological saline, glucose, Ringer's solution, etc. may be used as the injection solution.
  • the infusion bag may be made of polyvinyl chloride or polyethylene.
  • composition of the present invention may further comprise a suitable carrier commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
  • a suitable carrier commonly used in the manufacture of pharmaceutical compositions.
  • a preservative, a painless agent, a solubilizer, or a stabilizer may be further included, and in the case of a topical administration, a base, an excipient, a lubricant, or a preservative may be further included.
  • the term "administration" means providing a subject with a composition of the present invention in any suitable manner.
  • the daily dose of stem cells may be administered 1.0 ⁇ 10 2 to 1.0 ⁇ 10 10 cells / kg body weight once or divided into several doses.
  • the actual dosage of the active ingredient should be determined in light of several relevant factors such as the disease to be treated, the severity of the disease, the route of administration, the individual's weight, age and gender, and therefore the dosage may be It is not intended to limit the scope of the present invention in terms of aspects.
  • composition of the present invention can be administered to a subject by various routes. All modes of administration can be envisaged, for example by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intrauterine dural or cerebrovascular injections, preferably directly in the ventricles of the subject in need of treatment. It is possible to engraft or transplant, but is not limited thereto.
  • compositions of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers for the treatment of brain inflammatory diseases.
  • the collected cord blood was centrifuged using a Ficoll-Hypaque gradient to separate monocytes including hematopoietic stem cells and mesenchymal stem cells, and then washed several times to remove foreign substances. After washing, the mononuclear cells were planted in a culture vessel and cultured. The colony of long-shaped cells having a homogeneous shape and a spindle shape among cells proliferating in a single layer was homogeneous. Mesenchymal stem cells, which are proliferating cells, were isolated and passaged of the cells. The characteristics of the cord blood-derived mesenchymal stem cells passaged 5 times were confirmed.
  • the stem cells of the present invention express CD105 and CD73 markers, and rarely CD34, CD45 and CD14 markers.
  • the stem cells are positive for HLA-AB, negative for HLA-DR, and expression of the multipotent markers Oct4 and SSEA-4.
  • Example 2 Verification of intraventricular transplantation and encephalitis treatment effect of mesenchymal stem cells in encephalitis animal model
  • a 10-day-old newborn rat was inhaled anesthetized with nitric oxide (NO), and then a stereotaxic frame was used to store 1 ⁇ 10 3 colony forming unit E in the right ventricle.
  • coli Esscherichia coli
  • antibiotics Amicilline, 200 mg / kg
  • Brain MRI imaging, cerebrospinal fluid culture and body weight were measured using the encephalitis animal model established in 2-1 above. More specifically, the brain of the white paper at 11 days of age (P11), one day after the induction of encephalitis, was photographed using 7-teslar magnetic resonance imaging (MRI), and the degree of damage due to encephalitis was measured by DWI (Diffusion Weighted Image) Identified by the area.
  • DWI diffusion Weighted Image
  • Brain MRI images were defined as brain injury by measuring ventricular increase and DWI parenchymal infarction using Image J program, and obtained "volume of total brain / volume of whole brain”.
  • the weight of each white paper was measured before and after the experiment.
  • encephalitis-induced white rats (P11) showed severe cerebral parenchymal edema and damage and ventricular dilatation, and cerebrospinal fluid culture examination. In E. coli culture was confirmed that encephalitis was induced. In addition, in the brain MRI observed on the 16th day of life (P16), the degree of ventricular dilatation was higher in the case of the white papers in which the stem cells of the present invention were administered into the ventricles after the encephalitis was induced. It was found to decrease significantly.
  • the encephalitis induction group brain damage was increased compared to normal (Normal), before the administration of each substance (P0) encephalitis control group (Meningitis control) and the administration of the present invention
  • P0 encephalitis control
  • the brain damage increased significantly in the encephalitis control group. Since brain damage did not increase, it was confirmed that the extent of brain damage was significantly improved by the stem cell administration of the present invention after encephalitis induction.
  • the average body weight was similar between all groups at the beginning of the experiment (P0), but after administration of each substance (P7) encephalitis induced and encephalitis control group (Meningitis control) not receiving stem cells
  • P7 encephalitis induced and encephalitis control group
  • Meningitis control encephalitis induced and encephalitis control group
  • CSF cerebrospinal fluid
  • the rib cage was cut out to expose the heart and lung tissue, and a 23 gauge needle was fixed in the left ventricle, followed by puncture of the right atrium to perfusion 4% paraformaldehyde.
  • the skull was then incised and the brain tissues were carefully collected and fixed in 4% formalin, or the periventricular sections were cut and rapidly frozen using nitrogen gas and then frozen at -70 ⁇ C.
  • Immunofluorescence staining using immunofluorescent terminal deoxynycleotidyltransferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling (TUNEL), neuronal specific glial fibrillary acidic protein (GFAP), and ED-1 according to a conventionally known method using brain tissue isolated through the above procedure Western blot was used to analyze the expression levels of GFAP and Caspase-3.
  • inflammatory cytokines IL-1, IL-1 ⁇ , IL-6, and TNF- ⁇
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • FIGS. 5-7 Each experimental result is shown in FIGS. 5-7.
  • the number of active macrophages in the brain that appeared positive was significantly increased in the encephalitis control group that induced encephalitis and did not receive stem cells, compared to normal normal cells, but the stem cells of the present invention.
  • the encephalitis stem cell treatment group was administered showed a tendency to decrease significantly compared to the control.
  • the brain inflammatory disease can be treated through the intraventricular transplantation of stem cells according to the present invention.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 줄기세포는 뇌 염증성 질환 동물모델에 직접 투여될 경우, 부종 등 염증 반응으로 인한 뇌 손상이 크게 감소하며, 체중 감소 현상이 크게 완화되는 등, 뇌 염증성 질환에 대한 우수한 치료 효과를 가지고 있어, 뇌 염증성 질환의 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물
본 발명은 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물에 관한 것이다.
줄기세포(stem cell)란 자기 복제 능력을 가지면서 두 개 이상의 세포로 분화하는 능력을 갖는 세포를 말하며, 만능 줄기세포(totipotent stem cell), 전분화능 줄기세포(pluripotent stem cell), 다분화능 줄기세포(multipotent stem cell)로 분류할 수 있다.
만능 줄기세포(totipotent stem cell)는 하나의 완전한 개체로 발생해 나갈 수 있는 만능의 성질을 가진 세포로, 난자와 정자의 수정 이후 8 세포기까지의 세포가 이러한 성질을 가지며, 이 세포를 분리하여 자궁에 이식하면 하나의 완전한 개체로 발생해 나갈 수 있다.
전분화능 줄기세포(pluripotent stem cell)는 외배엽, 중배엽, 내배엽층 유래의 다양한 세포와 조직으로 발생할 수 있는 세포로서, 수정 4~5일 후 나타나는 배반포(blastocyst)의 안쪽에 위치한 내세포괴(inner cell mass)에서 유래하고, 이를 배아 줄기세포라 하며 다양한 조직 세포로 분화되지만 새로운 생명체를 형성하지는 못한다.
다분화능 줄기세포(multipotent stem cell)는 이 세포가 포함되어 있는 조직 및 기관에 특이적인 세포로만 분화할 수 있는 줄기세포로서, 태아기, 신생아기 및 성체기의 각 조직 및 장기의 성장과 발달은 물론 성체조직의 항상성 유지와 조직 손상 시 재생을 유도하는 기능에 관여하고 있으며, 조직 특이적 다능성 세포들을 총칭하여 성체 줄기세포라 한다. 성체 줄기세포는 인체의 각종 장기에 이미 존재하는 세포를 채취, 줄기세포로 발전시킨 것으로 특정 조직으로만 분화되는 특징이 있다. 그러나 최근에는 성체 줄기세포를 이용하여 간세포 등 각종 여러 조직으로 분화시키는 실험이 성공을 거두고 있어 주목된다.
줄기 세포들은 자기 재생(self-renewing), 분화, 영구성(immortal) 등의 특징을 가지고 있으며, 다양한 조직으로부터 얻을 수 있는 성체 줄기 세포는 일반적으로 배아 줄기 세포에 비해 무제한적인 소스와 연구자들이 직면할 수 있는 윤리적 문제를 피할 수 있기 때문에 널리 연구에 이용되고 있다. 더욱이, 제대혈로부터 분리한 줄기세포는 골수나 지방 조직과 달리 기증자가 추가적인 해를 입을 염려가 없기 때문에 다른 성체 줄기세포들보다 더 큰 장점을 가지고 있다.
한편, 뇌 염증성 질환이란 특정 원인에 의해 뇌에 발생하는 염증성 질환을 의미하는 것으로, 뇌염, 뇌수막염, 수막뇌염 등을 모두 포함한다. 뇌염이란 뇌 실질의 염증성 질환을 총칭하는 말로서 뇌를 싸고 있는 뇌수막에 생기는 염증(뇌수막염)과는 구별되는 질환이다. 뇌수막염과 뇌염이 함께 있는 경우는 이를 수막뇌염이라고 한다. 뇌염은 원인에 따라 감염성, 혈관염성, 종양성, 화학성, 특발성 등으로 크게 분류할 수 있으며, 각각 세부 항목에 따라 구체적인 병인에 대한 뇌염으로 다시 분류를 할 수 있다. 또한 질환의 시간적 경과에 따라 급성, 아급성, 만성 뇌염으로 분류하기도 한다. 현재까지 뇌 염증성 질환의 치료를 위한 방안으로 항생제를 이용하고 있으나, 항생제 치료에 의해 원인균이 치료된다 하더라도 심각한 뇌 손상, 뇌 수두증, 난청, 간질 등의 부작용을 일으키고 있어, 이에 대한 새로운 치료법의 개발이 요구되고 있다. 그러나, 현재까지 줄기세포를 이용한 뇌 염증성 질환의 치료에 대해서는 체계적인 연구가 미비한 실정이다.
이에 본 발명자들은 새로운 뇌 염증성 질환의 치료제를 개발하기 위해 연구를 계속한 결과, 줄기세포를 뇌 염증성 질환 동물모델의 뇌실에 직접 투여할 경우, 부종 등 염증 반응으로 인한 뇌 손상이 크게 감소하고 체중 감소 현상이 크게 완화되는 등 부작용이 적으면서도, 세포 사멸 및 반응성 아교화의 정도가 감소하며, 뇌의 활성 대식세포의 수 및 염증성 사이토카인 수치가 현저하게 감소되는 등, 뇌 염증성 질환에 대한 우수한 치료 효과를 가지고 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 줄기세포는 뇌 염증성 질환 동물모델에 직접 투여될 경우, 부종 등 염증 반응으로 인한 뇌 손상이 크게 감소하고 체중 감소 현상이 크게 완화되는 등 부작용이 적으면서도, 세포 사멸 및 반응성 아교화의 정도가 감소하며, 뇌의 활성 대식세포의 수 및 염증성 사이토카인 수치가 현저하게 감소되는 등, 뇌 염증성 질환에 대한 우수한 치료 효과를 가지고 있어, 뇌 염증성 질환의 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
도 1은 줄기세포의 뇌 염증성 질환에 대한 치료 효과를 확인하기 위한 실험 설계도를 나타낸 도이다.
도 2는 뇌 염증 유도 전 후, 및 줄기세포 투여 여부에 따라 변화한 뇌를 MRI 촬영을 통해 나타낸 도이다.
도 3은 뇌염 동물모델에서 줄기세포 투여 여부에 따른 뇌 손상 부위/전체 뇌 부위의 변화를 나타낸 도이다.
도 4는 뇌염 동물모델에서 줄기세포 투여 여부에 따른 체중 변화를 나타낸 도이다.
도 5는 뇌염 동물모델에서 줄기세포 투여 여부에 따른 뇌 조직의 면역 형광 염색 결과를 나타낸 도이다.
도 6은 뇌염 동물모델에서 줄기세포 투여 여부에 따른 뇌 조직 내 단백질 발현의 변화를 나타낸 도이다.
도 7은 뇌염 동물모델에서 줄기세포 투여 여부에 따른 뇌 조직 내 염증성 사이토카인 발현의 변화를 나타낸 도이다.
본 발명은 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 줄기세포란 개체를 구성하는 세포나 조직의 근간이 되는 세포로서, 어느 특정한 또는 복수 개의 기능적 세포로 분화되는 능력 및 스스로 동일한 세포를 반복적으로 생산할 수 있는 자기 복제 능력을 가진, 미분화 세포를 일컫을 수 있다. 이것은 태아의 발생과정 중 모든 조직에서 생겨나며, 성인이 되어서도 골수, 상피조직 등 세포가 활발히 교체되는 일부 조직에서 발견될 수 있다.
상기 줄기세포는, 자가 또는 동종 유래 줄기세포일 수 있으며, 인간 및 비인간 포유류를 포함한 임의 유형의 동물 유래일 수 있고, 상기 줄기세포가 성체로부터 유래된 것이든 배아로부터 유래된 것이든 이에 한정되지 않는다.
또한, 본 발명의 줄기세포는 배아 줄기세포 또는 성체 줄기세포를 포함하며, 바람직하게는 성체 줄기세포이다. 상기 성체 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 인간 조직 유래 중간엽 기질세포(mesenchymal stromal cell), 인간 조직 유래 중간엽 줄기세포, 다분화능 줄기세포 또는 양막상피세포일 수 있으며, 상기 중간엽 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 유래의 중간엽 줄기세포(mesenchymal stem cell)일 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 일 실시예에서는, 상기 줄기세포로서 제대혈 유래 중간엽 줄기세포를 사용하였다.
본 발명의 일 실시예에서 이용된 줄기세포는 인체의 제대혈에서 분리, 배양한 것으로, 상기 줄기세포는 CD105와 CD73 표지자가 발현되고, CD34, CD45 및 CD14 표지자는 거의 발현되지 않는다. 또한, 상기 줄기세포는 HLA-AB에 양성이고, HLA-DR에는 음성이며, 다분화 표지자인 Oct4 및 SSEA-4가 발현되는 특성을 가지고 있다.
본 발명의 줄기세포를 수득하기 위하여, 제대혈을 채취, 분리하는 방법은 다음과 같다. 정상 질식분만의 경우에는 아기 출산 후 자궁 내에 아직 태반이 남아있는 상태에서 밖으로 만출된 제대정맥으로부터 채취할 수 있으며, 제왕절개의 경우에는 아기 출산 후 태반 역시 자궁 밖으로 만출된 상태에서 제대정맥으로부터 채취한다. 출산 후 자궁 밖으로 만출된 제대정맥으로부터 제대혈을 채취할 때는, 신생아가 태어난 후 태반과 태아를 연결하고 있던 제대정맥으로부터 무균적 조작법에 의해 채취한다. 이때, 출산 후 자궁에서 태반박리가 일어나기 전에 제대혈을 채취하거나, 태반박리가 일어난 후 체외에서 제대혈을 채취하는 두 가지 방법을 모두 사용할 수 있다. 제왕절개의 경우에는 태반박리가 일어난 후 체외에서 제대혈을 채취하는 방법을 사용하며, 제대정맥을 확보한 후에 채취침을 이용하여 항응고제가 함유된 제대혈 채취백(주머니)에 제대혈을 채취한다.
채취된 제대혈로부터 간엽줄기세포를 분리배양하는 방법으로는 대한민국 공개특허 제2003-0069115호의 방법을 비롯하여 당업계에 공지된 통상의 방법(Pittinger MF et al. Science, 284: 143-7, 1999; 및 Lazarus HM et al. Bone Marrow Transplant, 16: 557-64, 1995)을 사용할 수 있으며, 그 중 한 예를 들면 다음과 같다. 먼저, 채취된 제대혈을, 예를 들어, 피콜-하이팩 농도구배(Ficoll-Hypaque gradient)를 이용하여 원심분리함으로써 조혈모세포 및 간엽줄기세포를 포함하는 단핵구 세포들을 분리한 후, 여러 번 세척하여 이물질을 제거한다. 세척 후 적절한 밀도로 단핵세포들을 배양용기에 심어 배양하면, 단일층을 이루면서 세포들이 증식하는데, 이 중 위상차 현미경으로 관찰되는 모양이 동질성(homogeneous)이면서, 방추형 모양(spindle shape)의 긴 형태의 세포들의 집락(colony) 형태로 증식하는 세포가 간엽줄기세포이다. 이후 세포가 배양되어 자라게 되면 계대배양을 실시하여, 필요한 만큼의 세포수가 될 때까지 증식시킨다.
본 발명에서 간엽줄기세포의 분리 및 배양에 사용 가능한 배양 배지로는 10% 내지 30% FBS를 포함하는 세포 배양용 배지를 사용할 수 있으며, 세포 배양용 배지로는 둘베코 변형 이글 배지(Dulbecco's modified eagle medium, DMEM), 최소 필수 배지(minimal essential medium, MEM)를 비롯하여 알파-최소 필수 배지(-MEM), 맥코이스(McCoys) 5A 배지, 이글스 기본 배지(eagle's basal medium), CMRL(Connaught Medical Research Laboratory) 배지, 글래스고우(Glasgow) 최소 필수 배지, Ham's F-12 배지, IMDM(Iscove's modified Dulbecco's medium), 리보비츠(Liebovitz') L-15 배지, RPMI(Roswell Park Memorial Institute) 1640 배지 등 당업계에서 통상적으로 사용되는 세포 배양용 배지는 모두 사용 가능하다.
본 발명에 따른 줄기세포는 뇌 염증성 질환 동물모델의 뇌실에 직접 투여될 경우, 부종 등 염증 반응으로 인한 뇌 손상이 크게 감소하고 체중 감소 현상이 크게 완화되는 등 부작용이 적으면서도, 세포 사멸 및 반응성 아교화의 정도가 감소하며, 뇌의 활성 대식세포의 수 및 염증성 사이토카인 수치가 현저하게 감소되는 등, 뇌 염증성 질환에 대한 우수한 치료 효과를 가지고 있어, 뇌 염증성 질환의 치료에 유용하게 이용될 수 있다.
본 발명에서 뇌 염증성 질환은 뇌에 발생하는 모든 염증성 질환을 총칭하는 것으로, 뇌염, 뇌수막염, 수막뇌염을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 조성물은 줄기세포와 함께 뇌 염증성 질환의 치료 효과를 갖는 공지의 유효성분을 1종 이상 더 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 분야에서 통상의 방법에 따라 개체의 신체 내 투여에 적합한 단위투여형의 제제로 제형화시켜 투여할 수 있다. 이러한 목적에 적합한 제형으로는 비경구투여 제제로서 주사용 앰플과 같은 주사제, 주입 백과 같은 주입제, 및 에어로졸 제제와 같은 분무제 등이 바람직하다. 상기 주사용 앰플은 사용 직전에 주사액과 혼합 조제할 수 있으며, 주사액으로는 생리 식염수, 포도당, 링거액 등을 사용할 수 있다. 또한, 주입 백은 염화폴리비닐 또는 폴리에틸렌 재질의 것을 사용할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체를 더 포함할 수 있다. 예를 들어, 주사제의 경우에는 보존제, 무통화제, 가용화제 또는 안정화제 등을, 국소 투여용 제제의 경우에는 기제(base), 부형제, 윤활제 또는 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "투여"는 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다. 바람직한 효과를 위해서, 줄기세포의 1일 투여량은 1.0×102 내지 1.0×1010 세포/kg 체중을 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나, 유효성분의 실제 투여량은 치료하고자 하는 질환, 질환의 중증도, 투여경로, 개체의 체중, 연령 및 성별 등의 여러 관련 인자에 비추어 결정되어야 하는 것으로 이해되어야 하며, 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으며, 바람직하게는 치료가 필요한 개체의 뇌실 내에 직접 생착 또는 이식하는 것이 가능하나 이에 한정되지는 않는다.
본 발명의 조성물은 뇌 염증성 질환의 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
이하 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 중간엽 줄기세포의 준비 및 특징 분석
인간 제대혈(human umbilical cord blood)로부터 중간엽 줄기세포를 분리하기 위하여, 하기와 같은 실험을 수행하였다. 먼저, 채취된 제대혈을 피콜-하이팩 농도구배(Ficoll-Hypaque gradient)를 이용하여 원심분리함으로써 조혈모세포 및 간엽 줄기세포를 포함하는 단핵구 세포들을 분리한 후, 이를 여러 번 세척하여 이물질을 제거하였다. 세척 후 단핵세포들을 배양용기에 심어 배양한 후, 단일층을 이루면서 증식하는 세포 중 위상차 현미경으로 관찰되는 모양이 동질성(homogeneous)이면서, 방추형 모양(spindle shape)의 긴 형태의 세포들의 집락(colony) 형태로 증식하는 세포인 간엽 줄기세포를 분리하였으며, 상기 세포의 계대배양을 수행하였다. 5회째 계대배양한 제대혈 유래 중간엽 줄기세포의 특성을 확인하였다.
그 결과, 본 발명의 줄기세포는 CD105와 CD73 표지자가 발현되고, CD34, CD45 및 CD14 표지자는 거의 발현되지 않음을 확인하였다. 또한, 상기 줄기세포는 HLA-AB에 양성이고, HLA-DR에는 음성이며, 다분화 표지자인 Oct4 및 SSEA-4가 발현됨을 확인하였다.
실시예 2. 뇌염 동물 모델에서 중간엽 줄기세포의 뇌실 내 이식 및 뇌염 치료 효과 검증
2-1. 뇌염 동물 모델의 디자인
뇌염 동물 모델을 만들기 위해, 생후 10일 된 신생 백서를 일산화질소(NO)로 흡입 마취한 후, 스테레오텍식 프레임(stereotaxic frame)을 이용하여 오른쪽 뇌실에 1×103 CFU(colony forming unit)의 E. coli(Escherichia coli) (10 ul)를 31 gauze 주사기로 60초에 걸쳐서 천천히 투여하고, 항생제(Ampicilline, 200 mg/kg)를 12시간 간격으로 2일간 투여하였다. 본 발명의 줄기세포의 뇌염 치료 효과를 확인하기 위해, 모델링(뇌염 유발) 1일 후인, 생후 11일(P11) 째에 중간엽 줄기세포 1×105개를 10 ul PBS에 희석하고, 일산화질소(NO) 흡입 마취 하에 스테레오텍식 프레임을 이용하여, 백서의 오른쪽 뇌실 내로 천천히 투여하였다. 뇌염 대조군의 경우 생리식염수를 백서의 오른쪽 뇌실 내에 투여하였다. 이상의 실험 과정을 도 1에 나타내었다.
2-2. 뇌 MRI 촬영 및 체중 측정
상기 2-1에서 확립한 뇌염 동물 모델을 이용하여 뇌 MRI 촬영, 뇌척수액 배양 및 체중을 측정하였다. 보다 구체적으로, 뇌염 유발 1일 후인, 생후 11일 째(P11)의 백서의 뇌를 7-teslar 자기공명영상(MRI)을 이용하여 촬영하고, 뇌염으로 인한 손상의 정도를 DWI(Diffusion Weighted Image) 영역으로 확인하였다. 또한, 뇌척수액 감염을 확인하고자, 각 백서에 Cistern tap을 시행하여 뇌척수액을 얻었고, 상기 뇌척수액의 배양을 통해 E.coli를 확인하였다. 또한, 백서의 생후 16일 째(P16)에 모든 백서의 뇌를 7-teslar MRI를 이용하여 촬영하여 뇌 손상 정도를 추적 관찰하였다. 뇌 MRI 이미지는 Image J 프로그램을 이용하여 뇌실 증가와 DWI의 뇌실질 경색부위를 측정하여 뇌 손상으로 정의하고 "전체 손상된 뇌의 부피/전체 뇌의 부피"를 구하였다. 또한, 실험 전후로 각 백서의 체중을 측정하였다.
각 실험 결과를 도 2 내지 도 4에 나타내었다.
도 2에 나타낸 바와 같이, 생후 11일 째의 정상 백서(Normal)에 비하여, 뇌염이 유도된 백서(P11)의 경우 심각한 뇌실질의 부종(edema) 및 손상 소견과 뇌실확장 소견이 보였고, 뇌척수액 배양검사에서 E.coli가 배양되어 뇌염이 유도되었음을 확인하였다. 또한, 생후 16일(P16) 째에 추적 관찰한 뇌 MRI에서, 뇌염이 유도된 이후 본 발명의 줄기세포를 뇌실 내로 투여받은 백서의 경우, 줄기세포를 투여받지 않은 백서에 비해 뇌실 확장의 정도가 의미 있게 감소함을 확인하였다.
또한, 도 3에 나타낸 바와 같이, 뇌염 유도군은 정상 백서(Normal)에 비해 뇌 손상이 증가하였으며, 각 물질의 투여 전(P0)에는 생리식염수를 투여한 뇌염 대조군(Meningitis control)과 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(Meningitis+MSC) 간에 뇌 손상 정도의 차이가 없었으나, 각 물질의 투여 후(P7)에는 뇌염 대조군에선 뇌 손상이 유의하게 증가한대 비해, 뇌염 줄기세포 치료군은 뇌 손상이 증가하지 않아, 뇌염 유도 후 본 발명의 줄기세포 투여에 의해 뇌 손상의 정도가 현저히 개선됨을 확인하였다.
또한, 도 4에 나타낸 바와 같이, 실험 시작 시점(P0)에는 모든 그룹간에 평균 몸무게가 유사하였으나, 각 물질의 투여 후(P7)에는 뇌염이 유도되고 줄기세포를 투여받지 못한 뇌염 대조군(Meningitis control)의 경우 뇌염으로 인한 전신 상태 약화로 몸무게가 크게 감소하였으며, 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(Meningitis+MSC)의 경우 몸무게의 감소 정도가 현저하게 적은 경향을 나타냄을 확인하였다.
2-3. 뇌 조직의 염색 및 단백질 발현 분석
상기 2-1에서 확립한 뇌염 동물 모델의 실험 종료(생후 16일 째, P16) 후, 각 백서에 케타민을 복강 내 주사하여 마취를 시행하였다. 이후 31 gauze 주사기로 각 백서의 소뇌숨뇌수조(cistern magna)에서 뇌척수액(CSF)을 채취하였으며, 이를 급속 냉동시킨 후, -70˚C에 보관하였다.
또한, 각 백서의 사지 고정 후 흉곽을 절개하여 심장과 폐 조직을 드러나게 하여 23 게이지 바늘을 좌심실 내에 고정한 후 우심방을 천자하여 4% 파라포름알데하이드(paraformaldehyde)를 관류시켰다. 이후 두개골을 절개하고, 조심스럽게 뇌 조직을 채취하여 4% 포르말린에 고정하거나, 뇌실 주위 부분을 잘라낸 후 질소 가스를 이용하여 이를 급속 냉동시킨 후 -70˚C에 냉동 보관하였다.
상기 과정을 통해 분리한 뇌 조직을 이용하여 종래 공지된 방법에 따라 TUNEL(immunofluorescent terminal deoxynycleotidyltransferase-mediated deoxyuridine triphosphate nick end labeling), GFAP(neuronal specific glial fibrillary acidic protein) 및 ED-1 등 면역 형광염색을 수행하였으며, 웨스턴 블랏을 통해 GFAP와 Caspase-3의 발현 정도를 분석하였다.
또한, 상기 과정을 통해 분리한 뇌실 주위 조직과 뇌 척수액을 이용하여 종래 공지된 ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 방법을 통해 염증성 사이토카인(IL-1, IL-1β, IL-6, TNF-α)의 발현 정도를 측정하였다.
각 실험 결과를 도 5 내지 도 7에 나타내었다.
도 5에 나타낸 바와 같이, TUNEL 염색 결과, 양성으로 보이는 세포의 사멸 정도가 정상 백서(Normal)에 비하여 뇌염이 유도되고 줄기세포를 투여받지 못한 뇌염 대조군(Control)에서 크게 증가되었으나, 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(MSC)에서는 대조군에 비하여 현저하게 감소되는 경향을 보였다. 또한, GFAP 염색 결과, 양성으로 보이는 반응성 아교화의 정도가 정상 백서(Normal)에 비하여 뇌염이 유도되고 줄기세포를 투여받지 못한 뇌염 대조군(Control)에서 크게 증가하였으나, 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(MSC)에서는 대조군에 비하여 현저하게 감소되는 경향을 보였다. 또한, ED-1 염색 결과, 양성으로 보이는 뇌의 활성 대식세포의 수가 정상 백서(Normal)에 비하여 뇌염이 유도되고 줄기세포를 투여받지 못한 뇌염 대조군(Control)에서 크게 증가하였으나, 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(MSC)에서는 대조군에 비하여 현저하게 감소되는 경향을 보였다.
또한, 도 6에 나타낸 바와 같이, 웨스턴 블랏 결과, 정상 백서(Normal)에 비하여 뇌염이 유도되고 줄기세포를 투여받지 못한 뇌염 대조군(Control)에서 GFAP와 Caspase-3의 비(ratio)가 유의하게 증가되었다. 그러나, 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(MSC)에서는 반응성 아교화의 정도와 세포의 사멸 정도를 판단할 수 있는 GFAP와 Caspase-3의 비가 대조군에 비하여 현저하게 감소되었다.
또한, 도 7에 나타낸 바와 같이, ELISA 결과, 뇌의 염증성 사이토카인의 발현 정도가 정상 백서(Normal)에 비하여 뇌염이 유도되고 줄기세포를 투여받지 못한 뇌염 대조군(Control)에서 급격하게 증가되었다. 그러나, 본 발명의 줄기세포를 투여한 뇌염 줄기세포 치료군(MSC)에서는 염증성 사이토카인의 수치가 대조군에 비하여 유의하게 호전되었다.
이상의 실험 결과를 통하여, 본 발명에 따른 줄기세포의 뇌실 내 이식을 통해 뇌 염증성 질환을 치료할 수 있음을 확인하였다.

Claims (7)

  1. 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 줄기세포는 자가 또는 동종 유래 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 줄기세포는 배아 줄기세포 또는 성체 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  4. 제 3항에 있어서, 상기 성체 줄기세포는 중간엽 줄기세포, 인간 조직 유래 중간엽 기질세포(mesenchymal stromal cell), 인간 조직 유래 중간엽 줄기세포, 다분화능 줄기세포 및 양막상피세포로 구성된 군에서 선택되는 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 중간엽 줄기세포는 제대, 제대혈, 골수, 지방, 근육, 신경, 피부, 양막 및 태반으로 구성된 군에서 선택되는 유래의 중간엽 줄기세포인 것을 특징으로 하는, 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
  6. 제 1항에 있어서, 상기 줄기세포는 하기와 같은 특성을 갖는 것을 특징으로 하는, 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
    (1) CD 105, CD73 및 HLA-AB에 대하여 양성의 면역학적 특성;
    (2) CD34, CD45, CD14 및 HLA-DR에 대하여 음성의 면역학적 특성; 및
    (3) Oct4 및 SSEA-4의 발현;
  7. 제 1항에 있어서, 상기 뇌 염증성 질환은 뇌염, 뇌수막염 및 수막뇌염으로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것을 특징으로 하는, 뇌 염증성 질환의 치료용 약학적 조성물.
PCT/KR2014/001332 2013-02-20 2014-02-19 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물 WO2014129792A1 (ko)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP14754748.3A EP2959909B1 (en) 2013-02-20 2014-02-19 Composition for treating inflammatory brain diseases which includes stem cell as active ingredient
US14/768,734 US10493104B2 (en) 2013-02-20 2014-02-19 Composition for treating inflammatory brain diseases which includes stem cell as active ingredient

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2013-0017935 2013-02-20
KR20130017935 2013-02-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2014129792A1 true WO2014129792A1 (ko) 2014-08-28

Family

ID=51391523

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2014/001332 WO2014129792A1 (ko) 2013-02-20 2014-02-19 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물

Country Status (4)

Country Link
US (1) US10493104B2 (ko)
EP (1) EP2959909B1 (ko)
KR (1) KR101654970B1 (ko)
WO (1) WO2014129792A1 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20200141501A (ko) * 2016-05-06 2020-12-18 각코우호징 오사카 이카야쿠카 다이가쿠 염증성 질환 치료용 줄기세포의 기능 강화를 위한 스타틴 봉입 나노입자 제제, 및 이를 함유하는 염증성 질환 치료용 기능 강화 줄기세포
KR102042210B1 (ko) 2017-07-21 2019-11-27 서울대학교산학협력단 자석을 이용한 줄기세포의 표적 전달 플랫폼
KR20210089517A (ko) * 2020-01-08 2021-07-16 코아스템(주) 중간엽 줄기세포를 포함하는 퇴행성 신경계 질환의 치료용 조성물

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009129616A1 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Tissue Regeneration Therapeutics, Inc. Genetically modified human umbilical cord perivascular cells for prophylaxis against or treatment of biological or chemical agents
KR20110087263A (ko) * 2008-11-14 2011-08-02 메디포스트(주) 간엽 줄기세포 또는 이의 배양액을 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20120013923A (ko) * 2011-12-28 2012-02-15 서울대학교산학협력단 제대혈 유래 줄기세포를 함유한 신경퇴행성 질환 예방 및 치료용 조성물
US20120269774A1 (en) * 2006-09-21 2012-10-25 Medistem Laboratories, Inc Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040161419A1 (en) * 2002-04-19 2004-08-19 Strom Stephen C. Placental stem cells and uses thereof
EP1812556A4 (en) * 2004-10-05 2011-02-02 Univ Georgia NEURONAL PRECURSORS OF FEEDER-FREE HUMAN EMBRYONIC STEM CELL CULTURE
CN108559725A (zh) * 2005-12-29 2018-09-21 人类起源公司 胎盘干细胞群
EP1845154A1 (en) 2006-04-12 2007-10-17 RNL Bio Co., Ltd. Multipotent stem cells derived from placenta tissue and cellular therapeutic agents comprising the same
US20080066297A1 (en) * 2006-09-19 2008-03-20 Caleb Technology Corporation Forming Solid Electrolyte Interface Layer on Lithium-Ion Polymer Battery Electrode
US20110008764A1 (en) 2009-06-02 2011-01-13 Davinci Biosciences Llc Human gonadal stem cells
EP2507362A2 (en) * 2009-11-30 2012-10-10 Pluristem Ltd. Adherent cells from placenta and use of same in disease treatment

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120269774A1 (en) * 2006-09-21 2012-10-25 Medistem Laboratories, Inc Allogeneic stem cell transplants in non-conditioned recipients
WO2009129616A1 (en) * 2008-04-21 2009-10-29 Tissue Regeneration Therapeutics, Inc. Genetically modified human umbilical cord perivascular cells for prophylaxis against or treatment of biological or chemical agents
KR20110087263A (ko) * 2008-11-14 2011-08-02 메디포스트(주) 간엽 줄기세포 또는 이의 배양액을 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20120013923A (ko) * 2011-12-28 2012-02-15 서울대학교산학협력단 제대혈 유래 줄기세포를 함유한 신경퇴행성 질환 예방 및 치료용 조성물

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LAZARUS HM ET AL., BONE MARROW TRANSPLANT, vol. 16, 1995, pages 557 - 64
PITTINGER MF ET AL., SCIENCE, vol. 284, 1999, pages 143 - 7
See also references of EP2959909A4

Also Published As

Publication number Publication date
EP2959909A4 (en) 2016-08-17
US20160000831A1 (en) 2016-01-07
EP2959909B1 (en) 2019-12-18
US10493104B2 (en) 2019-12-03
KR20140104377A (ko) 2014-08-28
KR101654970B1 (ko) 2016-09-06
EP2959909A1 (en) 2015-12-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2015142061A1 (ko) 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물
KR101662405B1 (ko) 줄기세포 유래 엑소좀을 유효성분으로 포함하는 뇌혈관 질환 치료용 약학적 조성물
KR100837167B1 (ko) 제대혈로부터 분리 또는 증식된 세포를 포함하는 발달성,만성 폐질환 치료용 조성물
JP6338331B2 (ja) 脳損傷及び疾患のｍａｐｃ治療
US20060210544A1 (en) Internally administered therapeutic agents for cranial nerve diseases comprising mesenchymal cells as an active ingredient
BRPI0919020B1 (pt) Uso de células de linhagem monocitária enriquecidas para tratar isquemia e para tratar angina pectoris
JP5432527B2 (ja) 脳損傷及び疾患のｍａｐｃ治療
JP2012518646A (ja) 免疫抑制−関連疾患の治療
AU2017305067B2 (en) Alleviation and treatment of ischemia reperfusion-induced lung injury using pluripotent stem cells
WO2014129792A1 (ko) 줄기세포를 유효성분으로 포함하는 뇌 염증성 질환의 치료용 조성물
US9539285B2 (en) Composition for treating intraventricular hemorrhage in preterm infants comprising mesenchymal stem cells
CN106701669A (zh) 临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途
WO2006117237A2 (en) Regeneration system, its production and use
JP6994200B2 (ja) 多能性幹細胞による周産期脳障害の改善及び治療
Bērziņš et al. Characterisation and Safety of Canine Adipose-Derived Stem Cells
Wu et al. Transplantation routes affect the efficacy of human umbilical cord mesenchymal stem cells in a rat GDM model
CA3179498A1 (en) High-potential pluripotent stem cells
JP7165352B2 (ja) 多能性幹細胞による慢性肺疾患の改善及び治療
US20140286910A1 (en) Stem cells and methods incorporating environmental factors as a means for enhancing stem cell proliferation and plasticity
KR20120041706A (ko) 제대혈 또는 지방조직유래 성체줄기세포를 함유한 항암용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 14754748

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14768734

Country of ref document: US

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2014754748

Country of ref document: EP