WO2014069434A1 - 新規チアゾリジノン誘導体 - Google Patents

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WO2014069434A1
WO2014069434A1 PCT/JP2013/079206 JP2013079206W WO2014069434A1 WO 2014069434 A1 WO2014069434 A1 WO 2014069434A1 JP 2013079206 W JP2013079206 W JP 2013079206W WO 2014069434 A1 WO2014069434 A1 WO 2014069434A1
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substituent
methyl
room temperature
group
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綾子 澤
匡明 澤
里奈 長尾
正敏 萩原
博 小野木
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カルナバイオサイエンス株式会社
株式会社キノファーマ
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    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the present invention relates to a pharmaceutical, particularly a novel thiazolidinone derivative having a DYRK1A inhibitory action among DYRK inhibitory actions, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • DYRK dual-specificity tyrosine-phosphorylation regulated kinase
  • DYRK1A, DYRK1B, DYRK2, DYRK3, and DYRK4 are known in humans (Non-patent Document 1), and various relationships between the DYRK family and diseases have been reported.
  • DYRK1A is closely related to neuropsychiatric disorders, and its gene is located in the Down syndrome critical region, and in mice overexpressing DYRK1A, it is reported that the neuropsychiatric function is abnormal and Down syndrome-like neuropsychiatric symptoms are shown. (Non-Patent Document 2).
  • Non-patent Document 3 DYRK1A expression is elevated in the brains of Down syndrome patients and Down syndrome-like model mice.
  • Non-patent Document 5 abnormal phosphorylation of tau protein (Tau), which is a cause of the onset of Alzheimer's disease. It is speculated that DYRK1A is involved (Non-patent Document 6).
  • Non-patent Document 4 In Down syndrome patients, it has been reported that juvenile Alzheimer's disease frequently occurs, which indicates that DYRK1A is closely related to Alzheimer's disease (Non-patent Document 4). Accordingly, compounds that inhibit DYRK1A are believed to be useful in the prevention or treatment of Alzheimer's disease, Down's syndrome, and even mental retardation, memory impairment, memory loss, and depression.
  • An object of the present invention is to provide a pharmaceutical, particularly a novel thiazolidinone derivative having a DYRK1A inhibitory action or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the present invention is achieved by the following (1) to (2).
  • (1) A thiazolidinone derivative represented by the following formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • R 1 represents an aryl group which may have a substituent, a heteroaryl group which may have a substituent, a heterocyclic condensed ring which may have a substituent
  • R 2 represents , An alkyl group which may have a substituent, a cycloalkyl group which may have a substituent, an aryl group which may have a substituent, a heteroaryl group which may have a substituent, a substituent (It represents an optionally substituted heterocyclic ring or an optionally substituted alkoxy group, and R 3 represents a hydrogen atom or an optionally substituted alkyl group.)
  • R 1 represents an aryl group which may have a substituent, a heteroaryl group which may have a substituent, a heterocyclic condensed ring which may have a substituent
  • R 4 , R 5 , R 6 and R 7 are the same or different and each represents a hydrogen atom or an optionally substituted alkyl group, and R 4 and R 5 form a bond to form a saturated ring.
  • Z represents a hydrogen atom or an alkoxycarbonyl group which may have a substituent.
  • the novel thiazolidinone derivative represented by the formula (I) or (II) and a pharmaceutically acceptable salt thereof are excellent.
  • the present invention was completed by finding that it has a DYRK1A inhibitory action.
  • the compounds provided by the present invention are known to be associated with abnormal cellular responses via DYRK1A, such as Alzheimer's disease, Down's syndrome, mental retardation, memory impairment, memory loss, depression It is useful as a preventive or therapeutic agent for psychiatric / neurological disorders.
  • a DYRK1A inhibitor it is useful as a reagent for pathological imaging related to the above-mentioned diseases, a reagent for basic experiments, and a research.
  • novel thiazolidinone derivative of the present invention is a compound represented by the following formula (I) or (II).
  • R 1 represents an aryl group which may have a substituent, a heteroaryl group which may have a substituent, a heterocyclic condensed ring which may have a substituent
  • R 2 represents , An alkyl group which may have a substituent, a cycloalkyl group which may have a substituent, an aryl group which may have a substituent, a heteroaryl group which may have a substituent, a substituent (It represents an optionally substituted heterocyclic ring or an optionally substituted alkoxy group, and R 3 represents a hydrogen atom or an optionally substituted alkyl group.)
  • R 1 represents an aryl group which may have a substituent, a heteroaryl group which may have a substituent, a heterocyclic condensed ring which may have a substituent
  • R 4 , R 5 , R 6 and R 7 are the same or different and each represents a hydrogen atom or an optionally substituted alkyl group, and R 4 and R 5 form a bond to form a saturated ring.
  • Z represents a hydrogen atom or an alkoxycarbonyl group which may have a substituent.
  • the aryl group part of the aryl group which may have a substituent may be any aryl group having 6 to 14 carbon atoms, and specific examples include phenyl, naphthyl, indenyl and the like.
  • monocyclic 6-membered heteroaryl such as thiophene, furan, pyrrole, imidazole, pyrazole, thiazole, oxazole, isothiazole, isoxazole, monocyclic 6 such as pyridine, pyrimidine, pyrazine, pyridazine, and triazine.
  • heteroaryl indole, isoindole, indolizine, indazole, purine, 4-H-quinolidine, quinoline, isoquinoline, phthalazine, naphthyridine, quinoxaline, quinazoline, benzimidazole, imidazopyridine, benzthiazole, thienopyridine, benzoxazole, benzo Bicyclic heteroaryls such as oxadiazole, benzofuran, benzothiophene and the like can be mentioned.
  • the heterocyclic condensed ring portion of the heterocyclic condensed ring which may have a substituent is, for example, a bicyclic condensed 5- to 6-membered ring, and is selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom
  • a condensed heterocyclic group containing at least one hetero atom is exemplified. Specific examples include chroman, chromene, dihydrobenzodioxin, dihydrobenzofuran, benzoxazine, benzodioxole and the like.
  • the alkyl group which may have a substituent may be any of a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and specifically includes a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, Examples thereof include isopropyl group and tert-butyl group.
  • the cycloalkyl group which may have a substituent may be any of a cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, and specific examples thereof include a cyclopropyl group, a cyclopentyl group and a cyclohexyl group.
  • heterocyclic portion of the heterocyclic ring which may have a substituent include a 3- to 8-membered heterocyclic group containing at least one heteroatom selected from a nitrogen atom, a sulfur atom and an oxygen atom.
  • Specific examples include aziridine, azetidine, pyrrolidine, piperidine, piperazine, azepan, morpholine, thiomorpholine, imidazolidine and the like.
  • the alkoxy group part of the alkoxy group which may have a substituent may be any alkoxy group having a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, specifically, methoxy Group, ethoxy group, isopropyloxy group, cyclopropyloxy group and the like.
  • the alkoxycarbonyl group part of the alkoxycarbonyl group which may have a substituent may be any carbonyl group to which an alkoxy group having a linear, branched or cyclic alkyl group having 1 to 6 carbon atoms is bonded. Specific examples include an ethoxycarbonyl group, a propoxycarbonyl group, a tert-butoxycarbonyl group (Boc), and the like.
  • one or two or more kinds of substituents may be present at any chemically possible position, and when there are two or more substituents,
  • the groups may be the same or different.
  • an oxygen atom for example, an oxygen atom, a halogen atom, a substituted or unsubstituted alkyl group, a substituted or unsubstituted alkoxy group, a substituted or unsubstituted amino group, an aromatic heterocyclic group, an acetoxy group , Nitro group, hydroxy group A substituted or unsubstituted carbamoyl group, an azide group, a substituted or unsubstituted acylamino group, carbamate group, and a phenyl group.
  • the compounds (I) and (II) of the present invention may have isomers depending on, for example, the type of substituent.
  • the chemical structure of only one form of those isomers may be described, but the present invention includes all isomers (geometric isomers, optical isomers, tautomers) that can occur structurally. Etc.) and also includes isomers alone or a mixture thereof.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the compounds (I) and (II) of the present invention include inorganic acid salts with hydrochloric acid, sulfuric acid, carbonic acid, phosphoric acid, fumaric acid, maleic acid, methanesulfonic acid, p. -Organic acid salts with toluenesulfonic acid and the like.
  • ammonium salts and the like are also included in the present invention.
  • the compounds (I), (II) and pharmaceutically acceptable salts thereof of the present invention can be produced, for example, by the following method.
  • a method commonly used in organic synthetic chemistry such as functional group Protection, deprotection [T. W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis 3rd Edition, John Wiley & Sons, Inc. , 1999] can be easily manufactured.
  • the order of reaction steps such as introduction of substituents can be changed as necessary.
  • the meanings of the abbreviations and symbols used in the following description are as follows.
  • the compound (I) of the present invention is prepared by subjecting compound (III) and 0.9 to 2 molar equivalents of aldehyde (IV) to a heating reaction in a solvent under the conditions of Kunafener gel condensation reaction, that is, in the presence of a catalyst base such as piperidine. Can be obtained.
  • the solvent is not particularly limited as long as it is inert to the reaction.
  • a lower alcohol preferably EtOH can be used.
  • a catalytic amount to 3 molar equivalents, preferably 0.05 to 0.1 molar equivalents of piperidine or proline can be used with respect to compound (III).
  • the reaction can be carried out in the range of room temperature to reflux temperature for 1 hour to 1 week, but can be preferably synthesized by reacting in EtOH under reflux conditions for 3 hours to 1 day.
  • This reaction can also be produced under other normal conditions used in the Knoevenager condensation reaction, for example, acidic conditions such as hydrochloric acid and acetic acid.
  • Aldehyde (IV) used as a raw material in scheme 1 can be obtained by a commercially available product (for example, a product of Tokyo Kasei Co., Ltd., a product of SIGMA-ALDRICH, etc.), or a known method or a method usually used in organic synthetic chemistry.
  • compound (III) used as a raw material of Scheme 1 can be produced as a commercially available product or, for example, by the method shown in Scheme 2.
  • Compound (III) can be obtained by subjecting compound (V) and 1 to 3 equivalents of ethyl mercaptoacetate to a cyclocondensation reaction by heating in a solvent such as EtOH in the presence of a base such as TEA.
  • the reaction can be carried out in the range of room temperature to reflux temperature for 2 hours to 2 days. Preferably, it can be synthesized by reacting in EtOH under reflux conditions for 12 hours.
  • the compound (V) used as the raw material of Scheme 2 can be produced as a commercially available product or by the method shown in Scheme 3, for example. [Scheme 3]
  • R 8 represents a lower hydrocarbon group such as a methyl group.
  • Compound (V) can be obtained by reacting compound (VI) with nitrile (VII) in a solvent such as anhydrous THF in the presence of a base such as tert-butoxy potassium or tert-amyloxy potassium.
  • compound (II) of the present invention can be obtained by reacting compound (VIII) and aldehyde (IV) in the same manner as in Scheme 1.
  • Compound (VIII) used as a raw material of Scheme 4 can be produced as a commercially available product or, for example, by the method shown in Scheme 5. [Scheme 5]
  • Compound (IX) can be obtained by subjecting compound (X) to a cyclization reaction in a solvent in the presence of a base.
  • the solvent is not particularly limited as long as it is inert to the reaction.
  • toluene or 1,4-dioxane can be used.
  • As the base for example, 1.0 to 2 molar equivalents, preferably 1.5 molar equivalents of sodium hydride, etc. can be used with respect to compound (X).
  • the reaction can be carried out in the range of room temperature to reflux temperature for 2 hours to 1 day, but it can be synthesized preferably by reacting for 3 hours.
  • Compound (X) used in Scheme 6 can be produced, for example, by the method shown in Scheme 7. [Scheme 7]
  • Compound (X) can be obtained by reacting compound (XI) with compound (XII) in a solvent in the presence of a base.
  • the solvent is not particularly limited as long as it is inert to the reaction, and, for example, THF can be used.
  • As the base for example, 1.0 to 2.0 molar equivalents, preferably 1.0 molar equivalents of TEA or DIEA can be used relative to compound (XI).
  • the reaction can be carried out in the range of ice cooling to reflux temperature for 0.5 hour to 1 day, but it can be synthesized preferably by reacting at room temperature for 2 hours.
  • compound (X) is obtained by esterifying carboxylic acid obtained by reacting compound (XIII) with compound (XIV) in a solvent in the presence of a base by a general method used in organic chemistry, It can also be obtained by introducing the substituent R 8 .
  • any solvent may be used as long as it is inert to the reaction, and it is not particularly limited.
  • water can be used.
  • the base for example, 1.0 to 3.0 molar equivalents, preferably 1.0 molar equivalents of sodium hydroxide or potassium hydroxide can be used relative to compound (XIII).
  • the reaction can be carried out in the range of room temperature to reflux temperature for 2 hours to 1 day, but it can be preferably synthesized by reacting at room temperature overnight.
  • the compound (XIII) and the compound (XIV) used as raw materials in Scheme 8 can be produced as commercially available products, or by a known method or a method usually used in organic synthetic chemistry.
  • the substituent Z in schemes 4 to 8 is a method commonly used in organic synthetic chemistry (for example, an alkylation reaction of an amino group) by appropriately combining the above methods and repeating protection and deprotection of an amino group as necessary. , Acylation reaction, carbamoylation reaction, carbamate reaction), the desired substituent Z can be obtained.
  • the compounds (I) and (II) or pharmaceutically acceptable salts thereof of the present invention are prepared in the form of conventional pharmaceutical preparations (pharmaceutical compositions) suitable for oral, parenteral or topical administration. Can do.
  • Formulations for oral administration include solid preparations such as tablets, granules, powders, capsules, and liquid preparations such as syrups. These formulations can be prepared by conventional methods. Solid preparations can be prepared by using conventional pharmaceutical carriers such as lactose, starch such as corn starch, crystalline cellulose such as microcrystalline cellulose, hydroxypropylcellulose, calcium carboxymethylcellulose, talc, magnesium stearate, etc. it can. Capsules can be prepared by wrapping the granules or powders thus prepared in capsules.
  • a syrup can be prepared by dissolving or suspending the compounds (I) and (II) of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in an aqueous solution containing sucrose, carboxymethylcellulose and the like.
  • Formulations for parenteral administration include infusions such as instillations.
  • Injectable formulations can also be prepared by conventional methods, including isotonic agents (eg, mannitol, sodium chloride, glucose, sorbitol, glycerol, xylitol, fructose, maltose, mannose), stabilizers (eg, sodium sulfite, Albumin) and preservatives (eg, benzyl alcohol, methyl p-oxybenzoate).
  • isotonic agents eg, mannitol, sodium chloride, glucose, sorbitol, glycerol, xylitol, fructose, maltose, mannose
  • stabilizers eg, sodium sulfite, Albumin
  • preservatives eg, benzyl alcohol, methyl p-oxybenzoate
  • the dose of the compounds (I) and (II) or pharmaceutically acceptable salts thereof of the present invention can be varied according to the disease type, severity, patient age, sex, and body weight, dosage form, etc. It is usually in the range of 1 mg to 1,000 mg per day in adults, which can be administered once or divided into two or three times by the oral or parenteral route.
  • the compounds (I) and (II) of the present invention or pharmaceutically acceptable salts thereof can be used as DYRK1A inhibitors as reagents for pathological imaging relating to the above diseases, as well as for basic experiments and research. it can.
  • the 10-% aqueous sodium hydroxide solution (72 mL) of ethyl 6-bromo-4-hydroxy-3-quinolinecarboxylate (11 g, 0.037 mol) obtained in the third step was heated to reflux for 2 hours.
  • the reaction solution was allowed to cool to room temperature, 18% hydrochloric acid (120 mL) was added, and the precipitated solid was collected by filtration. After washing with water and drying, 6-bromo-4-hydroxy-3-quinolinecarboxylic acid was obtained (yield 8.5 g).
  • the diphenyl ether solution (50 mL) of 6-bromo-4-hydroxy-3-quinolinecarboxylic acid (8.5 g, 0.032 mol) obtained in the fourth step was heated to reflux for 5 hours.
  • the reaction solution was allowed to cool to room temperature, petroleum ether (60 mL) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 15 min.
  • the precipitated solid was collected by filtration, washed with petroleum ether and dried to give 6-bromo-4-hydroxyquinoline (yield 6.8 g).
  • the 6-bromo-4-hydroxyquinoline (6.8 g, 0.030 mol) phosphorus oxychloride solution (60 mL) obtained in the fifth step was heated to reflux for 2 hours.
  • the reaction solution was allowed to cool to room temperature, excess phosphorus oxychloride was distilled off under reduced pressure, and the residue was slowly added to ice water.
  • This aqueous solution was neutralized with 25% aqueous ammonia (50 mL), extracted with DCM, and the organic layer was washed with saturated brine.
  • the obtained organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under reduced pressure, and the residue was recrystallized from ethyl acetate to obtain 6-bromo-4-chloroquinoline (yield 6.1 g).
  • N- [6- (hydroxymethyl) pyridin-2-yl] acetamide (0.095 g, 0.57 mmol) obtained in the second step in ethyl acetate (8 mL) at room temperature
  • 2-iodoxybenzoic acid 0.96 g, 3.4 mmol
  • the reaction solution was allowed to cool to room temperature, insoluble matters were removed by Celite filtration, and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give N- (6-formylpyridin-2-yl) acetamide as a crude product (yield: 0. 11g).
  • Citric acid was added to the aqueous layer to adjust the pH to 3-4, and the mixture was extracted twice with ethyl acetate. The organic layer was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and concentrated under reduced pressure to give 2- (N-tert-butoxycarbonyl) (2-cyanoethyl) aminoisobutyric acid (yield 1.0 g).
  • N-tert-butoxycarbonyl-4-cyano-2-methyl-3-oxopyrrolidine (0.30 g, 1.3 mmol) and ethyl mercaptoacetate (0.14 mL, 1.3 mmol) obtained in the third step.
  • EtOH solution 10 mL
  • TEA 0.3 mL, 2.0 mmol
  • the reaction solution was allowed to cool to room temperature, diluted with water, and extracted with ethyl acetate.
  • the organic layer was washed with saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, and the solvent was evaporated under reduced pressure.
  • N-Butyllithium (2.0 M THF solution, 3.0 mL, 6.0 mmol) was added dropwise to a THF solution (5 mL) of acetonitrile (0.48 g, 0.012 mol) at ⁇ 78 ° C. and stirred for 45 minutes. .
  • a THF solution (2 mL) of ethyl 2-[(methoxyethoxy) methoxy] isobutyrate (0.65 g, 3.0 mmol) obtained in the first step was added dropwise and stirred for 2 hours.
  • the reaction solution was neutralized with 1M hydrochloric acid, and extracted twice with ethyl acetate.
  • reaction solution was ice-cooled, diluted with water, and extracted with ethyl acetate.
  • organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was purified by column chromatography (silica gel, hexane / ethyl acetate) and 2- [2-[(tert-butyldimethylsilyl) oxy] ethoxy Ethyl isobutyrate was obtained (yield 0.80 g).
  • Example compounds [Table 1-1] to [Table 1-20] were prepared using the corresponding starting materials (commercially available products, or compounds derivatized from commercially available compounds by known methods or equivalent methods). According to the method described in the examples, the methods usually used in organic synthetic chemistry were appropriately combined as necessary. The physicochemical data of each compound are shown in [Table 2-1] to [Table 2-9].
  • Test Example 1-1 Activity inhibition test for DYRK1A (method for measuring kinase activity)
  • the kinase activity was measured by a mobility shift assay (MSA) method using QuickScout Screening Assist TM MSA (commercially available kit manufactured by Carna Biosciences).
  • MSA mobility shift assay
  • TM MSA QuickScout Screening Assist TM MSA (commercially available kit manufactured by Carna Biosciences).
  • the substrate for the kinase reaction the FITC-labeled DYRKtide peptide attached to the kit was used.
  • the substrate mixture was prepared using substrate (1 ⁇ M), MgCl 2 (5 mM) and ATP (25 ⁇ M). Created.
  • an enzyme solution was prepared by diluting a kinase (DYRK1A, catalog No. 04-130, manufactured by Carna Biosciences) with an assay buffer so as to have a concentration of 0.1 nM. From 10 mM DMSO solution of test compound to 10 concentrations (0.00003 mM, 0.0001 mM, 0.0003 mM, 0.001 mM, 0.003 mM, 0.01 mM, 0.03 mM, 0.1 mM, 0.3 mM, 1 mM) Further diluted with DMSO, each was diluted 25-fold with assay buffer to give a drug solution (4% DMSO solution).
  • the height of each peak of “substrate” and “phosphorylated substrate” was S and P, respectively, and a blank was added with assay buffer instead of the enzyme solution.
  • A, B, and C represent P / (P + S) in the blank well, P / (P + S) in the control solution well, and P / (P + S) in the compound addition well, respectively.
  • IC 50 value was calculated by regression analysis of inhibition rate and test compound concentration (logarithm). (Evaluation results)
  • the IC 50 value of the compound of the present invention against DYRK1A showed a strong inhibitory activity of 1 ⁇ M or less.
  • Table 3 shows the inhibitory activity against DYRK1A of the representative compounds of the present invention. The inhibitory action of kinase activity was indicated by ** mark when the IC 50 value was less than 0.1 ⁇ M and ** mark when 0.1-1 ⁇ M.
  • test compounds (the compounds of the present invention (I) and (II)) have strong DYRK1A inhibitory activity.
  • Test Example 1-2 Activity inhibition test for DYRK family (DYRK1B, DYRK2, DYRK3, DYRK4)
  • kinases are DYRK1B (Catalog No. 04-131, Carna Biosciences), DYRK2 (Catalog No. 04-132, Carna Biosciences), DYRK3 (Catalog No. 04-133, Carna Biosciences).
  • DYRK4 catalog No. 04-434, manufactured by Carna Biosciences
  • the kinase activity was measured so that the concentration of each component was adjusted to the values shown in Table 4.
  • the results of the inhibitory activity against DYRK1A obtained in Test Example 1-1 are also shown by specific values.
  • Table 5 shows the inhibitory activity of the representative compounds of the present invention on the DYRK family.
  • Test Examples 1-1 and 1-2 show that the test compounds (the compounds (I) and (II) of the present invention) have a more selective inhibitory activity against DYRK1A.
  • Test example 2 Intracellular Tau phosphorylation inhibition test (cells used and their culture)
  • DYRK1A is known to phosphorylate Tau
  • expression of DYRK1A and Tau is induced, and cultured cells in which Tau is phosphorylated by DYRK1A (DYRK1A-Tau co-expressing cells, background HEK293 cells) are used. Then, Tau phosphorylation inhibitory activity of intracellular DYRK1A by the test compound was measured.
  • FIG. 1 shows an example of the results of Western blotting using an antibody that specifically recognizes phosphorylation of the 212th threonine residue of Tau (upper) and an antibody that specifically recognizes Tau (lower) on the cultured cells. Is shown.
  • DYRK1A-Tau co-expressing cells were 10% FBS (GIBCO), 5% penicillin streptomycin (Nacalai), 0.1% Blasticidin (Invitrogen), 1% Hygromycin (Invitrogen) in a 10 cm dish. The cells were cultured in a 5% CO 2 incubator using DMEM medium (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) supplemented with 0.0004% Puromycin (Invitrogen). (Addition of test compound)
  • the cultured DYRK1A-Tau co-expressing cells are diluted with a DMEM medium (hereinafter referred to as medium) excluding antibiotics (Blasticidin, Hydromycin, Puromycin) so that the cell density becomes 2.0 ⁇ 10 6 cells / mL, and 6 wells 2 mL each was added to the plate.
  • a 10 mM DMSO solution of the test compound is further diluted with DMSO to 1 mM, 0.3 mM, and 0.1 mM, and 3 ⁇ L each is added to 600 ⁇ L of the medium containing the expression-inducing stimulant of Tau and DYRK1A, followed by stirring with a vortex mixer.
  • the drug solution was adjusted. 500 ⁇ L of the drug solution was added to each 6-well plate seeded with cells on the previous day and incubated for 20 hours (final concentrations of test compound: 1 ⁇ M, 0.3 ⁇ M, 0.1 ⁇ M).
  • the compounds provided by the present invention are known to be associated with abnormal cellular responses via DYRK1A, such as Alzheimer's disease, Down's syndrome, mental retardation, memory impairment, memory loss, depression It is useful as a preventive or therapeutic agent for psychiatric / neurological disorders.
  • DYRK1A inhibitor it is useful as a reagent for pathological imaging related to the above-mentioned diseases, a reagent for basic experiments, and a research.

Abstract

【課題】新規なチアゾリジノン誘導体の提供。 【解決手段】式（Ｉ）あるいは（ＩＩ）で示されるチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩。

Description

新規チアゾリジノン誘導体
　本発明は、医薬、特にＤＹＲＫ阻害作用のうち、ＤＹＲＫ１Ａ阻害作用を有する新規なチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩に関する。
　ＤＹＲＫ（ｄｕａｌ－ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ　Ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　Ｋｉｎａｓｅ）は、チロシンおよびセリン、スレオニンをリン酸化する二重特異性プロテインキナーゼの一種で、自己リン酸化の場合のみ、チロシンリン酸化酵素として機能し、外因性基質に対しては、セリンまたはスレオニン残基をリン酸化する酵素である。ＤＹＲＫファミリーのメンバーとして、ヒトでは、ＤＹＲＫ１Ａ、ＤＹＲＫ１Ｂ、ＤＹＲＫ２、ＤＹＲＫ３およびＤＹＲＫ４の５つが知られており（非特許文献１）、ＤＹＲＫファミリーと疾病との関係は種々報告されている。
　ＤＹＲＫ１Ａは、精神神経疾患と関連性が深く、その遺伝子はダウン症クリティカル領域に位置しており、ＤＹＲＫ１Ａの過剰発現したマウスでは、精神神経機能に異常をきたしダウン症様の精神神経症状を示すことが報告されている（非特許文献２）。
　また、ダウン症患者およびダウン症様モデルマウスの脳内では、ＤＹＲＫ１Ａ発現が上昇していることが報告されている（非特許文献３）。これらのことは、ダウン症患者の神経症状の発症に、ＤＹＲＫ１Ａが関わっていることを示唆している（非特許文献４）。
　一方、アルツハイマー病患者では、βアミロイドの発現亢進とＤＹＲＫ１Ａの発現とが有意に一致しており（非特許文献５）、さらにアルツハイマー病発症の一因とされるタウ蛋白質（Ｔａｕ）の異常リン酸化に、ＤＹＲＫ１Ａが関与すると推測されている（非特許文献６）。またダウン症患者では、若年性アルツハイマー病が多発することが報告されていることからも、ＤＹＲＫ１Ａがアルツハイマー病に密接に関係していることがわかる（非特許文献４）。したがって、ＤＹＲＫ１Ａを阻害する化合物は、アルツハイマー病、ダウン症、さらには精神遅滞、記憶障害、記憶喪失、および鬱病の予防または治療に有用であると考えられる。
　これまでにも、ＤＹＲＫ１Ａ阻害作用を有する化合物が報告されているが、本発明の新規チアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩が、ＤＹＲＫ１Ａ阻害作用を有することは報告されていない。
Ｂｅｃｋｅｒ，Ｗ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，２７３，２５８９３－２５９０２ Ａｌｔａｆａｊ，Ｘ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．，２００１，１０,１９１５－１９２３ Ｄｏｗｊａｔ，Ｗ．Ｋ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．，２００７，４１３，７７－８１ Ｗｅｇｉｅｌ，　Ｊ．，ｅｔ　ａｌ．，ＦＥＢＳ　Ｊ．，２０１１，２７８，２３６－２４５ Ｋｉｍｕｒａ，Ｒ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅ．，２００７，１６，１５－２３ Ｒｙｏｏ，Ｓ．Ｒ．，ｅｔ　ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２００７，２８２，３４８５０－３４８５７
　本発明は、医薬、特にＤＹＲＫ１Ａ阻害作用を有する新規なチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩を提供することを課題とする。
本発明は以下の（１）～（２）によって達成される。
（１）下式（Ｉ）で示されるチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000003
  
（式中、Ｒ１は、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環式縮合環を表し、Ｒ２は、置換基を有してもよいアルキル基、置換基を有してもよいシクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環、または置換基を有してもよいアルコキシ基を表し、Ｒ３は水素原子、置換基を有してもよいアルキル基を表す。）
（２）下式（ＩＩ）で示されるチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000004
  
（式中、Ｒ１は、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環式縮合環を表し、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は同一もしくは異なって、水素原子、置換基を有してもよいアルキル基を表し、また、Ｒ４とＲ５は、結合を形成し飽和の環を形成してもよい。Ｚは、水素原子、置換基を有してもよいアルコキシカルボニル基を表す。）
　本発明者らは、上記の課題を解決するために種々検討を重ねた結果、前記式（Ｉ）または（ＩＩ）で示される新規なチアゾリジノン誘導体およびその薬学的に許容される塩が、優れたＤＹＲＫ１Ａ阻害作用を有することを見出し、本発明を完成させた。本発明により提供される化合物は、ＤＹＲＫ１Ａを介した異常な細胞応答に関連していることが知られている疾患、例えば、アルツハイマー病、ダウン症、精神遅滞、記憶障害、記憶喪失、鬱病のような精神・神経疾患に対する予防または治療剤として有用である。また、ＤＹＲＫ１Ａ阻害剤として、上記の疾患に関する病態イメージングの試薬や基礎実験用、研究用の試薬に有用である。
リン酸化Ｔａｕ特異的抗体（上段）およびＴａｕ特異的抗体（下段）を用いたウエスタンブロッティングにより調べた、培養細胞内におけるＤＹＲＫ１ＡによるＴａｕのリン酸化を示す一例の図である。
　以下、本発明を詳細に説明する。
　本発明の新規なチアゾリジノン誘導体は、下式（Ｉ）あるいは（ＩＩ）で示される化合物である。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000005
  
（式中、Ｒ１は、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環式縮合環を表し、Ｒ２は、置換基を有してもよいアルキル基、置換基を有してもよいシクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環、または置換基を有してもよいアルコキシ基を表し、Ｒ３は水素原子、置換基を有してもよいアルキル基を表す。）
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000006
  
（式中、Ｒ１は、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環式縮合環を表し、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は同一もしくは異なって、水素原子、置換基を有してもよいアルキル基を表し、また、Ｒ４とＲ５は、結合を形成し飽和の環を形成してもよい。Ｚは、水素原子、置換基を有してもよいアルコキシカルボニル基を表す。）
前記式（Ｉ）および（ＩＩ）において、
　置換基を有してもよいアリール基のアリール基部分としては、炭素数６から１４のアリール基のいずれでもよく、具体的には、フェニル、ナフチル、インデニル等を挙げることができる。
　置換基を有してもよいヘテロアリール基部分としては、例えば、窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる少なくとも１個のヘテロ原子を含む５または６員のヘテロアリール基などが挙げられる。具体的には、チオフェン、フラン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール等の単環性５員環ヘテロアリール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピリダジン、トリアジン等の単環性６員環ヘテロアリール、インドール、イソインドール、インドリジン、インダゾール、プリン、４－Ｈ－キノリジン、キノリン、イソキノリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、ベンズイミダゾール、イミダゾピリジン、ベンズチアゾール、チエノピリジン、ベンズオキサゾール、ベンゾオキサジアゾール、ベンゾフラン、ベンゾチオフェン等の二環性ヘテロアリールなどが挙げられる。
　置換基を有してもよい複素環式縮合環の複素環式縮合環部分としては、例えば、５から６員の環が縮合した二環性で、窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる少なくとも１個のヘテロ原子を含む縮合複素環基などが挙げられる。具体的には、クロマン、クロメン、ジヒドロベンゾジオキシン、ジヒドロベンゾフラン、ベンゾオキサジン、ベンゾジオキソールなどが挙げられる。
　置換基を有してもよいアルキル基としては、炭素数１から６の直鎖状、分枝状のアルキル基のいずれでもよく、具体的には、メチル基、エチル基、ｎ－プロピル基、イソプロピル基、ｔｅｒｔ－ブチル基などを挙げることができる。
　置換基を有してもよいシクロアルキル基としては、炭素数１から６の環状のアルキル基のいずれでもよく、具体的には、シクロプロピル基、シクロペンチル基、シクロヘキシル基などを挙げることができる。
　置換基を有してもよい複素環の複素環部分としては、例えば、窒素原子、硫黄原子および酸素原子から選ばれる少なくとも１個のヘテロ原子を含む３から８員の複素環基などが挙げられる。具体的には、アジリジン、アゼチジン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジン、アゼパン、モルホリン、チオモルホリン、イミダゾリジンなどが挙げられる。
　置換基を有してもよいアルコキシ基のアルコキシ基部分としては、炭素数１から６の直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基を有するアルコキシ基のいずれでもよく、具体的には、メトキシ基、エトキシ基、イソプロピルオキシ基、シクロプロピルオキシ基等を挙げることができる。
　置換基を有してもよいアルコキシカルボニル基のアルコキシカルボニル基部分としては、炭素数１から６の直鎖状、分枝状もしくは環状のアルキル基を有するアルコキシ基が結合したカルボニル基のいずれでもよく、具体的には、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基、ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル基（Boc）などを挙げることができる。
　置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環、置換基を有してもよい複素環式縮合環、置換基を有してもよいアルキル基の置換基、置換基を有してもよいシクロアルキル基、置換基を有してもよいアルコキシ基、あるいは置換基を有してもよいアルコキシカルボニル基の置換基としては、特に記載のない限り、１または２個以上の任意の種類の置換基を、化学的に可能な任意の位置に有してもよく、置換基が２個以上の場合、それぞれの置換基は同一であっても異なっていてもよく、例えば、酸素原子、ハロゲン原子、置換もしくは非置換アルキル基、置換もしくは非置換アルコキシ基、置換もしくは非置換アミノ基、芳香族複素環基、アセトキシ基、ニトロ基、ヒドロキシ基、置換もしくは非置換カルバモイル基、アジド基、置換もしくは非置換アシルアミノ基、カルバメート基、フェニル基などが挙げられる。
　本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）は、例えば、置換基の種類によって、異性体が存在する場合がある。本明細書において、それらの異性体の一形態のみの化学構造で記載することがあるが、本発明には、構造上生じ得るすべての異性体（幾何異性体、光学異性体、互変異性体など）も含有し、異性体単体、またはそれらの混合物も含有する。
　また、本発明の化合物である式（Ｉａ）、（Ｉｂ、）（Ｉｃ）、（Ｉｄ）、（ＩＩａ）、（ＩＩｂ、）（ＩＩｃ）、（ＩＩｄ）で具体的に示されるこれら立体異性体およびこれらの混合物も本発明に包含される。
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000007
  
 
　また、本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）の薬学的に許容される塩としては、塩酸、硫酸、炭酸、リン酸等との無機酸塩、フマル酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸等との有機酸塩等が挙げられる。また、ナトリウム、カリウム等とのアルカリ金属塩、マグネシウム、カルシウム等とのアルカリ土類金属塩、低級アルキルアミン、低級アルコールアミン等との有機アミン塩、リジン、アルギニン、オルニチン等との塩基性アミノ酸塩の他、アンモニウム塩等も本発明に包含される。
　本発明の化合物（Ｉ）、（ＩＩ）およびその薬学的に許容される塩は、たとえば以下の方法によって製造することができる。なお、以下に示した製造法において、定義した基が実施方法の条件下で変化するか、または方法を実施するのに不適切な場合、有機合成化学で通常用いられる方法、例えば、官能基の保護、脱保護［Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ　Ｇｒｏｕｐｓ　ｉｎ　Ｏｒｇａｎｉｃ　Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ　３ｒｄ　Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆Ｓｏｎｓ、ｌｎｃ．、１９９９］などの手段を付すことにより容易に製造することができる。また、必要に応じて置換基導入などの反応工程の順序を変えることもできる。
　以下の説明で使用される略語、記号の意味は次の通りである。
ＡＩＢＮ　：　２，２’－アゾビス（イソブチロニトリル）
ＤＣＭ　：　ジクロロメタン
ＤＭＡＰ　：　Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン
ＥＤＣ　：　１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩
ＨＡＴＵ　：　Ｏ－（７－アザベンゾトリアゾール－１－イル）－Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’－テトラメチルウロニウム　ヘキサフルオロホスファート
ＴＨＦ　：　テトラヒドロフラン
ＤＩＥＡ　：　Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＦ　：　Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ　：　ジメチルスルホキシド
ＴＥＡ　：　トリエチルアミン
ＭｅＯＨ　：　メタノール
ＥｔＯＨ　：　エタノール
ＬＡＨ　：　水素化リチウムアルミニウム
［本発明の化合物（Ｉ）の製法］
　式（Ｉ）で表される本発明の化合物は、例えばスキーム１によって製造することができる。
［スキーム１］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000008
   
（式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は前記と同義である。）
　本発明の化合物（Ｉ）は、化合物（ＩＩＩ）と０．９～２モル当量のアルデヒド（ＩＶ）を溶媒中、クネーフェナーゲル縮合反応の条件、即ちピペリジンなどの触媒塩基存在下、加熱反応させることによって得ることができる。溶媒は反応に不活性なものであればいずれでも良く、特に限定されるものではないが、例えば、低級アルコール、好ましくはＥｔＯＨを用いることができる。塩基は、例えば化合物（ＩＩＩ）に対して、触媒量～３モル当量、好ましくは０．０５～０．１モル当量のピペリジン、またはプロリンを用いることができる。反応は室温から還流温度の範囲において、１時間～１週間で実施することができるが、好ましくはＥｔＯＨ中で還流条件下、３時間～１日間反応させることにより合成することができる。また本反応は、クネーフェナーゲル縮合反応で用いられる他の通常の条件、例えば塩酸や酢酸などの酸性条件下でも製造できる。
スキーム１の原料として用いられるアルデヒド（ＩＶ）は市販品（例えば、東京化成社製品、ＳＩＧＭＡ－ＡＬＤＲＩＣＨ社製品など）、または公知の方法あるいは有機合成化学で通常用いられる方法により得ることができる。
　また、スキーム1の原料として用いられる化合物（ＩＩＩ）は、市販品として、または例えばスキーム２に示す方法によって製造することができる。
［スキーム２］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000009
   
（式中、Ｒ２およびＲ３は前記と同義である。）
　化合物（ＩＩＩ）は、化合物（Ｖ）と１～３当量のメルカプト酢酸エチルをＥｔＯＨなどの溶媒中、ＴＥＡなどの塩基存在下、加熱反応させることによって環化縮合させて得ることができる。反応は室温から還流温度の範囲において、２時間～２日間で実施することができるが、好ましくはＥｔＯＨ中で還流条件下、１２時間反応させることにより合成することができる。
　スキーム２の原料として用いられる化合物（Ｖ）は、市販品として、または例えばスキーム３に示す方法によって製造することができる。
［スキーム３］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000010
   
（式中、Ｒ２およびＲ３は前記と同義である。Ｒ８はメチル基などの低級炭化水素基を表す。）
　化合物（Ｖ）は、化合物（ＶＩ）を無水ＴＨＦなどの溶媒中、ｔｅｒｔ－ブトキシカリウムあるいはｔｅｒｔ－アミルオキシカリウムなどの塩基存在下、ニトリル（ＶＩＩ）と反応させることによって得ることができる。
　スキーム３の原料として用いられる化合物（ＶＩ）およびニトリル（ＶＩＩ）は、市販品として、または公知の方法あるいは有機合成化学で通常用いられる方法によって製造することができる。
［本発明の化合物（ＩＩ）の製法］
　式（ＩＩ）で表される本発明の化合物は、例えばスキーム４によって製造することができる。
［スキーム４］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000011
   
（式中、Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＺは前記と同義である。）
　すなわち、本発明の化合物（ＩＩ）は、化合物（ＶＩＩＩ）とアルデヒド（ＩＶ）を用い、スキーム１と同様に反応させることによって得ることができる。
　スキーム４の原料として用いられる化合物（ＶＩＩＩ）は市販品として、または例えばスキーム５に示す方法によって製造することができる。
［スキーム５］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000012
   
（式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７およびＺは前記と同義である。）
　化合物（ＶＩＩＩ）は、化合物（ＩＸ）とメルカプト酢酸エチルを用い、スキーム２と同様に反応させることによって得ることができる。
　スキーム５の原料として用いられる化合物（ＩＸ）は、市販品として、または例えばスキーム６に示す方法によって製造することができる。
［スキーム６］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000013
   
（式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＺは前記と同義である。）
　化合物（ＩＸ）は、化合物（Ｘ）を溶媒中、塩基存在下で環化反応させることによって得ることができる。溶媒は反応に不活性なものであればいずれでも良く、特に限定されるものではないが、例えば、トルエンあるいは１，４－ジオキサンを用いることができる。塩基は、例えば化合物（Ｘ）に対して、１．０～２モル当量、好ましくは１．５モル当量の水素化ナトリウムなどを用いることができる。反応は室温から還流温度の範囲において、２時間～１日間で実施することができるが、好ましくは３時間反応させることにより合成することができる。
　スキーム６で用いられる化合物（Ｘ）は、例えばスキーム７に示す方法によって製造することができる。
［スキーム７］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000014
   
（式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＺは前記と同義である。）
　化合物（Ｘ）は、化合物（ＸＩ）を溶媒中、塩基存在下で、化合物（ＸＩＩ）と反応させることによって得ることができる。溶媒は反応に不活性なものであればいずれでも良く、特に限定されるものではないが、例えば、ＴＨＦを用いることができる。塩基は、例えば化合物（ＸＩ）に対して、１．０～２．０モル当量、好ましくは１．０モル当量のＴＥＡあるいはＤＩＥＡを用いることができる。反応は氷冷から還流温度の範囲において、０．５時間～１日間で実施することができるが、好ましくは室温で２時間反応させることにより合成することができる。
　スキーム７の原料として用いられる化合物（ＸＩ）および化合物（ＸＩＩ）は、市販品として、または公知の方法あるいは有機合成化学で通常用いられる方法によって製造することができる。
　またスキーム６で用いられる化合物（Ｘ）は、例えばスキーム８に示す方法によっても製造することができる。
［スキーム８］
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000015
   
（式中、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８およびＺは前記と同義である。）
　すなわち、化合物（Ｘ）は、化合物（ＸＩＩＩ）を溶媒中、塩基存在下で、化合物（ＸＩＶ）と反応させて得られたカルボン酸を、有機化学で用いられる一般的な方法によりエステル化して、置換基Ｒ８を導入することによっても得ることができる。化合物（ＸＩＶ）との反応において、溶媒は反応に不活性なものであればいずれでも良く、特に限定されるものではないが、例えば、水を用いることができる。塩基は、例えば化合物（ＸＩＩＩ）に対して、１．０～３．０モル当量、好ましくは１．０モル当量の水酸化ナトリウムあるいは水酸化カリウムを用いることができる。反応は室温から還流温度の範囲において、２時間～１日間で実施することができるが、好ましくは室温で一晩反応させることにより合成することができる。
　スキーム８の原料として用いられる化合物（ＸＩＩＩ）および化合物（ＸＩＶ）は、市販品として、または公知の方法あるいは有機合成化学で通常用いられる方法によって製造することができる。
　スキーム４～８中の置換基Ｚは、上記の方法を適宜組み合わせ、さらに必要に応じてアミノ基の保護、脱保護を繰り返し、有機合成化学で通常用いられる方法（例えば、アミノ基のアルキル化反応、アシル化反応、カルバモイル化反応、カルバメート化反応）を実施することにより、所望の置換基Ｚとすることができる。
　なお上記の方法を適宜組み合わせ、有機合成化学で通常用いられる方法（例えば、アミノ基のアルキル化反応、アシル化反応、カルバモイル化反応、カルバメート化反応、ヒドロキシル基のアルコキシ化、アシル化、カルバメート化、もしくはその逆へ変換する反応）を実施することにより、所望の位置に所望の官能基を有する本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）を得ることができる。
［本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）の用途］
　本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）またはその薬学的に許容される塩は、経口投与、非経口投与または局所的投与に適した従来の薬学製剤（医薬組成物）の形態に調製することができる。
　経口投与のための製剤は、錠剤、顆粒、粉末、カプセルなどの固形剤、およびシロップなどの液体製剤を含む。これらの製剤は従来の方法によって調製することができる。固形剤は、ラクトース、コーンスターチなどのデンプン、微結晶性セルロースなどの結晶セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、カルシウムカルボキシメチルセルロース、タルク、ステアリン酸マグネシウムなどのような従来の薬学的担体を用いることによって調製することができる。カプセルは、このように調製した顆粒または粉末をカプセルに包むことによって調製することができる。シロップは、ショ糖、カルボキシメチルセルロースなどを含む水溶液中で、本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）またはその薬学的に許容される塩を溶解または懸濁することによって調製することができる。
　非経口投与のための製剤は、点滴注入などの注入物を含む。注入製剤もまた従来の方法によって調製することができ、等張化剤（例えば、マンニトール、塩化ナトリウム、グルコース、ソルビトール、グリセロール、キシリトール、フルクトース、マルトース、マンノース）、安定化剤（例えば、亜硫酸ナトリウム、アルブミン）、防腐剤（例えば、ベンジルアルコール、ｐ－オキシ安息香酸メチル）中に適宜組み入れることができる。
　本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）またはその薬学的に許容される塩の用量は、疾患の種類、重症度、患者の年齢、性別、および体重、投薬形態などに従って変化させることができるが、通常は成人において１日あたり１ｍｇ～１，０００ｍｇの範囲であり、それは経口経路または非経口経路によって、１回、または２回もしくは３回に分割して投与することができる。
　また、本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）またはその薬学的に許容される塩は、ＤＹＲＫ１Ａ阻害剤として、上記の疾患に関する病態イメージングの試薬や基礎実験用、研究用の試薬として用いることができる。
　実施例１
　５－［（４－クロロ－６－キノリニル）メチレン］－２－（２－シクロヘキシル－２－オキソエチリデン）チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000016
  
（第１工程）
　アセトニトリル（０．１６ｍＬ，３．１ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５．１ｍＬ）に、氷冷下、シクロヘキサンカルボン酸エチル（０．５０ｇ，３．２ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－アミルオキシカリウム（５．５ｍＬ，３．９ｍｍｏｌ）混合溶液を加え、室温で３０分間攪拌した。不溶物をろ去後、ろ液を酢酸エチルで希釈し、１Ｍ塩酸、水で順に洗浄した。得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮して粗精製の３－シクロヘキシル－３－オキソプロパンニトリルを得た（収量０．５０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.12 (s, 2H), 2.37 - 2.47 (m, 1H), 1.52 - 1.88 (m, 4H), 1.07 - 1.37 (m, 6H); LCMS (m/z): 152.2 [M+H] + 
（第２工程）
　上記第１工程で得られた３－シクロヘキシル－３－オキソプロパンニトリル（０．５０ｇ，３．３ｍｍｏｌ）およびメルカプト酢酸エチル（０．５４ｍＬ，５．０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１２ｍＬ）に、室温でＴＥＡ（０．８３ｍＬ，６．０ｍｍｏｌ）を加え、５時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去した。析出した固体をろ取し、ジエチルエーテルで洗浄後、乾燥させて２－（２－シクロヘキシル－２－オキソエチリデン）チアゾリジン－４－オンを得た（収量０．２５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 11.59 (br. s, 1H), 6.05 (s, 1H), 3.70 (s, 2H), 2.17 - 2.34 (m, 1H), 1.54 - 1.82 (m, 5H), 1.03 - 1.36 (m, 5H); LCMS (m/z): 226.2 [M+H] + 
（第３工程）
　４－ブロモアニリン（１０ｇ，０．０５８ｍｏｌ）のエトキシメチレンマロン酸ジエチル溶液（１２ｍＬ）を、１００℃で２．５時間加熱攪拌した。反応溶液を室温まで放冷後、ジフェニルエーテル（６０ｍＬ）を加え、２４０℃で６時間加熱攪拌した。反応溶液を室温まで放冷後、石油エーテル（６０ｍＬ）を加え、室温で１５分間攪拌した。析出した固体をろ取し、石油エーテルで洗浄後、乾燥させて６－ブロモ－４－ヒドロキシ－３－キノリンカルボン酸エチルを得た（収量１１ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.45 (br. s, 1H), 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.86 (d, J = 8.76 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.72 Hz, 1H), 4.21 (q, J = 13.9 Hz, 2H), 1.10 - 1.40 (m, 3H) ; LCMS (m/z): 297.9 [M+H] + 
（第４工程）
　上記第３工程で得られた６－ブロモ－４－ヒドロキシ－３－キノリンカルボン酸エチル（１１ｇ，０．０３７ｍｏｌ）の１０％水酸化ナトリウム水溶液（７２ｍＬ）を２時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、１８％塩酸（１２０ｍＬ）を加え、析出した固体をろ取した。水で洗浄後、乾燥させて６－ブロモ－４－ヒドロキシ－３－キノリンカルボン酸を得た（収量８．５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 14.98 (br. s, 1H), 13.59 (br. s, 1H), 8.92 (s, 1H), 8.35 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.04 (dd, J = 1.3, 8.7 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.8 Hz, 1H) ; LCMS (m/z): 268.0 [M+H] + 
（第５工程）
　上記第４工程で得られた６－ブロモ－４－ヒドロキシ－３－キノリンカルボン酸（８．５ｇ，０．０３２ｍｏｌ）のジフェニルエーテル溶液（５０ｍＬ）を５時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、石油エーテル（６０ｍＬ）を加え、室温で１５分間攪拌した。析出した固体をろ取し、石油エーテルで洗浄後、乾燥させて６－ブロモ－４－ヒドロキシキノリンを得た（収量６．８ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.02 (br. s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.93 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 7.77 - 7.79 (m, 1H), 7.54 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 6.07 (d, J = 7.2 Hz, 1H) ; LCMS (m/z): 226.0 [M+H] + 
（第６工程）
　上記第５工程で得られた６－ブロモ－４－ヒドロキシキノリン（６．８ｇ，０．０３０ｍｏｌ）のオキシ塩化リン溶液（６０ｍＬ）を２時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、過剰のオキシ塩化リンを減圧留去し、残渣を氷水中にゆっくり加えた。この水溶液を２５％アンモニア水溶液（５０ｍＬ）で中和後、ＤＣＭで抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。得られた有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧濃縮後、残渣を酢酸エチルで再結晶させて、６－ブロモ－４－クロロキノリンを得た（収量６．１ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 8.77 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.82 - 7.84 (m, 1H), 7.50 (d, J = 4.5 Hz, 1H) ; LCMS (m/z): 244.2 [M+H] + 
（第７工程）
　窒素雰囲気下、上記第６工程で得られた６－ブロモ－４－クロロキノリン（１．０ｇ，４．２ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン溶液（２４ｍＬ）に、室温でトリブチルビニルすず（１．４ｇ，４．３ｍｍｏｌ）を加え、１５分間攪拌した。反応溶液にテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（０．０９２ｇ，０．０８ｍｍｏｌ）を加え、室温で１５分間攪拌後、３時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ）で精製して、４－クロロ－６－ビニルキノリンを得た（収量０．６６ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 8.71 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 8.05 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 6.89 - 6.96 (m, 1H), 5.95 (s, J = 17.6 Hz, 1H), 5.44 (d, J = 10.8 Hz, 1H) ; LCMS (m/z): 190.0 [M+H] + 
（第８工程）
　上記第７工程と同様にして得られた４－クロロ－６－ビニルキノリン（１．９ｇ，０．０１０ｍｏｌ）の７５％１，４－ジオキサン水溶液（１３１ｍＬ）に、室温で２，６－ルチジン（２．０ｇ，０．０１９ｍｏｌ）および過ヨウ素酸ナトリウム（８．４ｇ，０．０３９ｍｏｌ）を加えた後、四酸化オスミウム（４％　ｔｅｒｔ－ブタノール溶液、１．３ｇ，０．２０ｍｍｏｌ）を加え、室温で３．５時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製して、４－クロロキノリン－６－アルデヒドを得た（収量１．１ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 10.24 (s, 1H), 8.90 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.74 (s, 1H), 8.21 - 8.26 (m, 2H), 7.60 (d, J = 4.7 Hz, 1H) ; LCMS (m/z): 192.0 [M+H] + 
（第９工程）
　上記第２工程で得られた２－（２－シクロヘキシル－２－オキソエチリデン）チアゾリジン－４－オン（０．０５０ｇ，０．２２ｍｍｏｌ）および上記第８工程で得られた４－クロロキノリン－６－アルデヒド（０．０４３ｇ，０．２２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、室温でピペリジン（０．０３ｍＬ，０．３０ｍｍｏｌ）を加え、５時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、析出した固体をろ取し、ＥｔＯＨ、ヘキサンで順に洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０２６ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.39 (s, 1H), 8.90 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 8.47 (br. s, 1H), 8.24 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.77 - 7.92 (m, 2H), 6.27 (s, 1H), 1.54 - 2.00 (m, 6H), 0.97 - 1.39 (m, 5H) ; LCMS (m/z): 399.4 [M+H] + 
　実施例８
５－［（６－フルオロピリジン－３－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000017
  
（第１工程）
　２－メチル－２－（１，２，４－トリアゾリル）プロパン酸エチルを用い、実施例１の第１工程記載の方法と同様にして得られた４－メチル－３－オキソ－４－（１，２，４－トリアゾリル）ペンタンニトリル（０．４５ｇ，２．５ｍｍｏｌ）およびメルカプト酢酸エチル（０．４５ｇ，３．８ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（１０ｍＬ）に、室温でＴＥＡ（０．６ｍＬ，４．５ｍｍｏｌ）を加え、一晩加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製して、２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンを得た（収量０．２０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 11.58 (br. s, 1H), 8.77 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 5.44 (s, 1H), 3.73 (s, 2H), 1.69 (s, 6H); LCMS (m/z): 253.2 [M+H] + 
（第２工程）
　上記第１工程で得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．０５０ｇ，０．３９ｍｍｏｌ）および２－フルオロピリジン－５－アルデヒド（０．１０ｇ，０．３９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、室温でＬ－プロリン（６．０ｍｇ，０．０５２ｍｍｏｌ）を加え、１６時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、析出した固体をろ取し、ＥｔＯＨ、ヘキサンで順に洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０５１ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.32 (br. s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.58 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.17 - 8.28 (m, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.42 (dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 5.63 (s, 1H), 1.74 (s, 6H); LCMS (m/z): 360.2 [M+H] + 
　実施例１３
　５－［（６－ブロモピリジン－３－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000018
  
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび６－ブロモ－３－ピリジンアルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０７２ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.34 (br. s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.69 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.96 (dd, J = 8.4, 2.6 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 5.64 (s, 1H), 1.75 (s, 6H); LCMS (m/z): 421.8 [M+H] + 
　実施例１９
　５－［（２－アセトアミドチアゾール－５－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000019
  
（第１工程）
　２－アミノチアゾール－５－アルデヒド（０．３０ｇ，２．３ｍｍｏｌ）およびピリジン（０．３８ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）に、氷冷下、塩化アセチル（０．２５ｍＬ，１．５ｍｍｏｌ）を滴下し、窒素雰囲気下、室温で８時間攪拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出後、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－アセトアミドチアゾール－５－アルデヒドを得た（収量０．３０ｇ）。
（第２工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび上記第１工程で得られた２－アセトアミドチアゾール－５－アルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０６５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.59 (s, 1H), 12.15 (br. s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.01 - 8.11 (m, 2H), 7.86 (s, 1H), 5.55 (s, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.75 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 405.2 [M+H] + 
　実施例２０
５－［（６－アジドピリジン－３－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000020
  
　実施例１３記載の方法と同様にして得られた５－［（６－ブロモピリジン－３－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．２０ｇ，０．４８ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ溶液（２ｍＬ）に、室温でアジ化ナトリウム（０．１５ｇ，２．３ｍｍｏｌ）を加え、１００℃で１６時間加熱撹拌した。反応溶液を室温まで放冷後、反応溶液を水で希釈し、２－プロパノール／クロロホルム混合溶媒（１：４）で２回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、表題化合物を得た（収量０．０５０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.40 (br. s, 1H), 9.71 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.40 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 8.05 - 8.13 (m, 2H), 7.78 (s, 1H), 5.66 (s, 1H), 1.76 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 382.8 [M+H] + 
　実施例２１
　２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］－５－［（４－ニトロチオフェン－２－イル）メチレン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000021
  
（第１工程）
　濃硝酸（７．５ｍＬ，０．１７ｍｏｌ）および濃硫酸（７．５ｍＬ，０．１４ｍｏｌ）の混合溶液に、－１０℃で２－チオフェンアルデヒド（５．０ｇ，０．０４５ｍｏｌ）を１５分かけて少しずつ添加し、１時間攪拌した。反応溶液を氷水に加えＤＣＭで３回抽出し、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、４－ニトロ－２－チオフェンアルデヒドを得た（収量４．０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 9.94 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.58 - 8.66 (m, 1H), 8.26 (d, J = 1.4 Hz, 1H) 
（第２工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび上記第１工程で得られた４－ニトロ－２－チオフェンアルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．２２ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.34 (br. s, 1H), 9.05 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.18 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.91 (s, 1H), 5.64 (s, 1H), 1.75 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 392.2 [M+H] + 
　実施例２５
５－［（２－メチル－２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000022
  
（第１工程）
　３－ヒドロキシ－４－ヨードベンズアルデヒド（０．５０ｇ，２．０ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（１５ｍＬ）に、室温でエチレングリコール（０．１７ｍＬ，３．０ｍｍｏｌ）およびｐ－トルエンスルホン酸（４．０ｍｇ，０．０２ｍｍｏｌ）を加え、１６時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－（３－ヒドロキシ－４－ヨードベンゼン）－１，３－ジオキソランを得た（収量０．３２ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 10.39 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.65 (dd, J = 8.0, 1.7 Hz, 1H), 5.63 (s, 1H), 3.87 - 4.05 (m, 4H) ; LCMS (m/z): 293.2 [M+H] + 
（第２工程）
　窒素雰囲気下、上記第１工程で得られた２－（３－ヒドロキシ－４－ヨードベンゼン）－１，３－ジオキソラン（０．１１ｇ，１．１ｍｍｏｌ）およびプロピレンオキサイド（１．２ｍＬ，０．０１６ｍｏｌ）の混合物に、室温でカルシウムメトキシド（０．３２ｇ，１．１ｍｍｏｌ）を加えて封管し、８０℃で１６時間加熱撹拌した。室温まで放冷後、反応溶液に１Ｍ塩酸を加え、ＤＣＭで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－［３－（２－ヒドロキシプロポキシ）－４－ヨードベンゼン］－１，３－ジオキソランを得た（収量０．２３ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.81 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 4.86 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 3.89 - 4.08 (m, 6H), 1.22 (d, J = 5.8 Hz, 3H) ; LCMS (m/z): 351.2 [M+H] + 
（第３工程）
　窒素雰囲気下、上記第２工程で得られた２－［３－（２－ヒドロキシプロポキシ）－４－ヨードベンゼン］－１，３－ジオキソラン（０．２３ｇ，０．６６ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（４ｍＬ）に、室温で水素化ナトリウム（６０％　ｉｎ　ｏｉｌ，０．０３４ｇ，０．８５ｍｍｏｌ）を加え、１５分間撹拌した。この溶液に塩化銅（Ｉ）（３．２ｍｇ，０．０３３ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で２時間加熱撹拌した。反溶液を室温まで放冷後、１Ｍ塩酸を加え、ＤＣＭで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－メチル－２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－アルデヒドを得た（収量０．０６５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 9.81 (s, 1H), 7.44 (dd, J = 8.3, 1.8 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.33 - 4.46 (m, 2H), 3.88 (dd, J = 11.4, 7.7 Hz, 1H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 3H) ; LCMS (m/z): 179.0 [M+H] + 
（第４工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび上記第３工程で得られた２－メチル－２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－アルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０７５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.15 (br. s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.22 - 7.15 (m, 2H), 7.04 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.58 (s, 1H), 4.37 (t, J = 8.5 Hz, 2H), 3.88 (dd, J = 11.7, 8.1 Hz, 1H), 1.74 (s, 6H), 1.32 (d, J = 6.3 Hz, 3H) ; LCMS (m/z): 413.0 [M+H] + 
　実施例２６
　２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］－５－［（５－ニトロチオフェン－２－イル）メチレン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000023
  
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび５－ニトロ－２－チオフェンアルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．２７ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.43 (br. s, 1H), 8.85 (s, 1H), 8.24 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.10 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.70 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H), 1.76 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 392.0 [M+H] + 
　実施例２８
　５－［（５－アミノチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000024
  
　実施例２６で得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］－５－［（５－ニトロチオフェン－２－イル）メチレン］チアゾリジン－４－オン（０．０５０ｇ，０．１３ｍｍｏｌ）の８０％ＥｔＯＨ水溶液（１０ｍＬ）に、室温で鉄（０．０７１ｇ，１．３ｍｍｏ１）および塩化アンモニウム（３．４ｍｇ，０．０６４ｍｍｏ１）を加え、１時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、不溶物をセライトを用いてろ去した。ろ液を減圧濃縮し、析出した固体を集め、水、ジエチルエーテルで順に洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０１５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 8.79 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.62 (s, 1H), 6.92 - 7.46 (m, 3H), 6.05 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 5.48 (s, 1H), 1.73 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 362.2 [M+H] + 
　実施例２９
　５－［（２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン－６－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000025
  
（第１工程）
　４－ヒドロキシ－３－ニトロベンズアルデヒドを用い、実施例２５の第１工程記載の方法と同様にして得られた４－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－２－ニトロフェノール（０．５０ｇ，２．４ｍｍｏｌ）、ブロモ酢酸エチル（０．２６ｍＬ，２．４ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．３６ｇ，２．６ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（１０ｍＬ）を、１６時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、不溶物をろ去し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－［４－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－２－ニトロフェノキシ］酢酸エチルを得た（収量０．５０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 7.92 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.77 (s, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.16 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.92 - 4.09 (m, 4H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H) 
（第２工程）
　窒素雰囲気下、２－［４－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－２－ニトロフェノキシ］酢酸エチル（０．２０ｇ，０．６７ｍｍｏ１）およびシクロヘキセン（０．１０ｍＬ，０．９９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（２５ｍＬ）に、１０％パラジウム／炭素（０．１８ｇ）を加え、水素雰囲気下、室温で１．５時間攪拌した。不溶物をセライトを用いてろ去後、ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オンを得た（収量０．１２ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 10.72 (br. s, 1H), 6.91 - 7.00 (m, 3H), 5.63 (s, 1H), 4.57 (s, 2H), 3.88 - 4.06 (m, 4H); LCMS (m/z): 222 [M+H] + 
（第３工程）
　６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（０．１２ｇ，０．５２ｍｍｏｌ）の４Ｍ　塩酸－１，４－ジオキサン溶液（３．０ｍＬ，０．０１２ｍｏｌ）を、室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、析出した固体をろ取し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄後、乾燥させて３－オキソ－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－６－アルデヒドを得た（収量０．０６０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 10.97 (s, 1H), 9.84 (s, 1H), 7.53 (dd, J = 8.2, 1.9 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.72 (s, 2H) ; LCMS (m/z): 178.0 [M+H] + 
（第４工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび３－オキソ－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－６－アルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．１３ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.19 (br. s, 1H), 11.06 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.20 - 7.30 (m, 2H), 7.10 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.62 (s, 1H), 4.67 (s, 2H), 1.75 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 412.0 [M+H] + 
　実施例３１
５－［（５－アセトアミドチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000026
  
　実施例２８記載の方法と同様にして得られた５－［（５－アミノチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．０９０ｇ，０．２５ｍｍｏｌ）のピリジン溶液（３ｍＬ）に、室温で無水酢酸（０．５０ｍＬ，５．３ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、析出した固体を水、酢酸エチルで順に洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０３５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.06 (br. s, 1H), 11.71 (br. s, 1H), 8.72 - 8.92 (m, 1H), 8.00 - 8.17 (m, 1H), 7.70 - 7.84 (m, 1H), 7.40 - 7.52 (m, 1H), 6.68 - 6.86 (m, 1H), 5.46 - 5.63 (m, 1H), 2.15 (br. s, 3H), 1.75 (br. s, 6H) ; LCMS (m/z): 404.2 [M+H] + 
　実施例３３
　５－［（６－アセトアミドピリジン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000027
  
（第１工程）
　アルゴン雰囲気下、ＬＡＨ（０．４１ｇ，０．０１１ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）に、氷冷下、６－アミノピコリン酸（１．０ｇ，７．２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）を３０分間かけて滴下し、その後、室温で１５時間攪拌した。反応溶液を氷冷後、氷冷した飽和塩化アンモニウム水溶液を加え、不溶物をセライトを用いてろ去した。ろ液を減圧濃縮して得られた残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、(６－アミノピリジン－２－イル)メタノールを得た（収量０．３１ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 7.34 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 7.3 Hz, 1H), 6.27 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.77 (s, 2H), 5.07 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 4.31 (d, J = 5.8 Hz, 2H) :　LCMS (m/z): 124.8 [M+H] + 
（第２工程）
　（６－アミノピリジン－２－イル）メタノールを用い、実施例３１記載の方法と同様にして得られた（６－アセトアミドピリジン－２－イル）メチル　アセテート（０．１３ｇ，０．６３ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．３５ｇ，２．５ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（４ｍＬ）を、室温で３時間攪拌した。不溶物をシリカゲルろ過して除去し、ろ液を減圧濃縮して、Ｎ－［６－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－イル］アセトアミドを得た（収量０．１０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 10.43 (s, 1H), 7.91 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.74 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 4.48 (s, 2H), 2.07 (s, 3H) 
（第３工程）
　上記第２工程で得られたＮ－［６－（ヒドロキシメチル）ピリジン－２－イル］アセトアミド（０．０９５ｇ，０．５７ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（８ｍＬ）に、室温で２－ヨードキシ安息香酸（０．９６ｇ，３．４ｍｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、不溶物をセライトろ過して除去し、ろ液を減圧濃縮してＮ－（６－ホルミルピリジン－２－イル）アセトアミドを粗生成物として得た（収量０．１１ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 10.86 (br. s, 1H), 9.89 (s, 1H), 8.35 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 8.02 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 2.13 (s, 3H) 
（第４工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび上記第３工程で得られたＮ－（６－ホルミルピリジン－２－イル）アセトアミドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０２０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.11 (br. s, 1H), 10.34 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.99 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.87 (t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 7.50 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 5.59 (s, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.75 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 399.4 [M+H] + 
　実施例３７
　５－［（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）メチレン］－２－（５，５－ジメチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000028
  
（第１工程）
　２－アミノイソ酪酸（５．０ｇ，０．０４９ｍｏｌ）の水溶液（６．０ｍＬ）に、４℃で５Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（９．７ｍＬ，０．０４９ｍｏｌ）を加えた。この水溶液にアクリロニトリル（３．３ｍＬ，０．０５１ｍｏｌ）を加え、室温で一晩攪拌した。反応溶液を４℃まで冷却後、酢酸を加えた。析出した固体をろ取し、９５％ＥｔＯＨ水溶液で洗浄後、乾燥させて２－（２－シアノエチル）アミノイソ酪酸を得た（収量５．０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 2.72 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.59 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.18 (s, 6H) 
（第２工程）
　上記第１工程で得られた２－（２－シアノエチル）アミノイソ酪酸（２．０ｇ，０．０１３ｍｏｌ）のアセトニトリル溶液（２５０ｍＬ）に、室温でテトラメチルアンモニウムヒドロキシド（２５％　ＭｅＯＨ溶液，９．０ｍＬ，０．０１３ｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。反応溶液に、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（４．４ｇ，０．０２０ｍｏｌ）を加え、一晩攪拌した。溶媒を減圧留去後、析出した固体に水を加え、酢酸エチルで２回洗浄した。水層にクエン酸を加えてｐＨ３－４にし、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（２－シアノエチル）アミノイソ酪酸を得た（収量１．０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 3.54 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 2.70 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 1.28 - 1.52 (m, 15H) 
（第３工程）
　上記第２工程で得られた２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（２－シアノエチル）アミノイソ酪酸（０．８０ｇ，３．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）に、室温で炭酸水素カリウム（０．６０ｇ，６．４ｍｍｏｌ）を加え、数分間攪拌した後、ヨウ化メチル（０．５０ｍＬ，８．０ｍｍｏｌ）を加え、一晩攪拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、２－［（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（２－シアノエチル）アミノ］イソ酪酸メチルを得た（収量０．５３ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 3.69 (s, 3H), 3.61 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 2.65 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.55 (s, 6H), 1.43 (s, 9H) 
（第４工程）
　アルゴン雰囲気下、上記第３工程と同様にして得られた２－［（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）（２－シアノエチル）アミノ］イソ酪酸メチル（０．６８ｇ，２．５ｍｍｏｌ）の１，４－ジオキサン溶液（３．６ｍＬ）に、室温で水素化ナトリウム（６０％　ｉｎ　ｏｉｌ，１．１ｇ，０．０２７ｍｏｌ）を加え、１００℃で４時間加熱攪拌した。溶媒を減圧留去後、析出した固体に水および酢酸エチルを加えて溶解し、クエン酸を加えてｐＨ３－４にしてから、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４－シアノ－２，２－ジメチル－３－オキソピロリジンを得た（収量０．３０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.22 (br. s, 1H), 4.01 (d, J = 17.3 Hz, 1H), 3.57 (s, 1H), 2.58 - 2.83 (m, 1H), 1.42 (d, J = 11.7 Hz, 6H) 
（第５工程）
　上記第４工程と同様にして得られた４－シアノ－２，２－ジメチル－３－オキソピロリジン（０．６５ｇ，４．７ｍｍｏｌ）、メルカプト酢酸エチル（０．７８ｍＬ，７．１ｍｍｏｌ）および二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．０ｇ，９．２ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（６．０ｍＬ）に、室温でＴＥＡ（１．３ｍＬ，９．４ｍｍｏｌ）を加え、１２時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５，５－ジメチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンを得た（収量０．１６ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 11.76 (br. s, 1H), 4.18 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 3.85 (s, 2H), 1.44 (s, 9H), 1.29 (s, 6H) 
（第６工程）
　上記第５工程で得られた２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５，５－ジメチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンおよび２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－アルデヒドを用い、実施例１の第９工程記載の方法と同様にして得られた５－［（２，３－ジヒドロベンゾ［ｂ］［１，４］ジオキシン－６－イル）メチレン］－２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５，５－ジメチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オン（０．１５ｇ，０．３２ｍｍｏｌ）に、氷冷下、４Ｍ　塩酸－１，４－ジオキサン（１２ｍＬ，０．０４８ｍｏｌ）を加え、室温で４時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、析出した固体をろ取し、ジエチルエーテルで洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０９５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.70 (br. s, 1H), 9.85 (br. s, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.15 - 7.22 (m, 2H), 7.04 - 7.11 (m, 1H), 4.28 - 4.37 (m, 6H), 1.39 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 359.0 [M+H] + 
　実施例４２
　５－（イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イルメチレン）－２－（５－メチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オン 塩酸塩の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000029
  
（第１工程）
　２－シアノエチルアミン（０．８０ｇ，０．０１１ｍｏｌ）およびＴＥＡ（１．２ｇ，０．０１２ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１０ｍＬ）に、氷冷下、２－ブロモプロピオン酸エチル（２．０ｇ，０．１１ｍｏｌ）を加え、２時間攪拌後、室温に昇温してさらに２時間攪拌した。不溶物をセライトを用いてろ去し、ろ液を減圧濃縮した。残渣に酢酸エチルに溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、２－（２－シアノエチルアミノ）プロピオン酸エチルを得た（収量０．７５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.10 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.31 - 3.39 (m, 1H), 2.71 - 2.84 (m, 1H), 2.53 - 2.68 (m, 3H), 2.34 (s, 1H), 1.13 - 1.26 (m, 6H); LCMS (m/z): 170.9 [M+H] + 
（第２工程）
　上記第１工程で得られた２－（２－シアノエチルアミノ）プロピオン酸エチル（０．６５ｇ，３．８ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（２０ｍＬ）に、氷冷下、二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（１．２ｇ，５．７ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチルを加え、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄後、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－［Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－（２－シアノエチル）アミノ］プロピオン酸エチルを得た（収量０．７１ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 3.94 - 4.30 (m, 3H), 3.37 - 3.61 (m, 2H), 2.70 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.28 - 1.50 (m, 12H), 1.11 - 1.25 (m, 3H); LCMS (m/z): 271.1 [M+H] + 
（第３工程）
　上記第２工程と同様にして得られた２－［Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル（２－シアノエチル）アミノ］プロピオン酸エチル（０．８０ｇ，３．０ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（２０ｍＬ）に、室温でナトリウムメトキシド（０．３０ｇ，５．５ｍｍｏｌ）を加え、８０℃で３時間加熱攪拌した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去し、１Ｍ塩酸（１０ｍＬ）を加え、室温で２時間攪拌した。析出した固体を水で洗浄後、乾燥させてＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－シアノ－２－メチル－３－オキソピロリジンを得た（収量０．４０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.21 - 4.42 (m, 1H), 3.87 - 4.16 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.30 (t, J = 5.7 Hz, 3H) ; LCMS (m/z): 225.4 [M+H] + 
（第４工程）
　上記第３工程で得られたＮ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－４－シアノ－２－メチル－３－オキソピロリジン（０．３０ｇ，１．３ｍｍｏｌ）およびメルカプト酢酸エチル（０．１４ｍＬ，１．３ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（１０ｍＬ）に、室温でＴＥＡ（０．３ｍＬ，２．０ｍｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５－メチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンを得た（収量０．１０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.31 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 4.08 - 4.24 (m, 1H), 3.88 - 3.98 (m, 1H), 3.85 (s, 2H), 1.43 (s, 9H), 1.23 (d, J = 6.5 Hz, 3H) ; LCMS (m/z): 299.2 [M+H] + 
（第５工程）
　上記第４工程で得られた２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５－メチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンおよびイミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－アルデヒドを用い、実施例１の第９工程記載の方法と同様にして５－（イミダゾ［１，２－ａ］ピリジン－６－イルメチレン）－２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５－メチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンを合成した。得られた化合物を実施例３７の第６工程記載の方法と同様に処理して、表題化合物を得た（収量０．０８５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 10.36 (br. s, 1H), 9.98 (br. s, 1H), 9.25 (s, 1H), 8.48 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 8.06 (dd, J = 9.3, 1.7 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 4.42 (d, J = 14.2 Hz, 1H), 4.25 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.02 - 4.15 (m, 2H), 1.39 (d, J = 7.1 Hz, 3H) ; LCMS (m/z): 327.0 [M+H] + 
　実施例５６
　５－（｛５－［３－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノプロパンアミド］チオフェン－２－イル｝メチレン）－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000030
  
（第１工程）
　３－アミノプロピオン酸（１．０ｇ，０．０１１ｍｏｌ）の９０％ＴＨＦ水溶液（２０ｍＬ）に、氷冷下、炭酸ナトリウム（２．４ｇ，０．０２２ｍｏｌ）および二炭酸ジ－ｔｅｒｔ－ブチル（２．７ｇ，０．０１２ｍｏｌ）を加え、室温で２日間攪拌した。溶媒を減圧留去後、残渣に水を加え、クエン酸を加えてｐＨ２にし、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。有機層を減圧濃縮し、３－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノプロピオン酸を得た（収量１．５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.14 (br. s, 1H), 6.78 (br. s, 1H), 3.12 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 1.37 (s, 9H) 
（第２工程）
　実施例２８記載の方法と同様にして得られた５－［（５－アミノチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．１０ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３ｍＬ）に、氷冷下、ＨＡＴＵ（０．１５ｇ，０．４２ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．１４ｍＬ，０．８３ｍｍｏｌ）および上記第１工程で得られた３－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル）アミノプロピオン酸（０．０６２ｇ，０．３３ｍｍｏｌ）を加え、室温で１日間攪拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ）で精製し、表題化合物を得た（収量０．０９５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.04 (br. s, 1H), 11.70 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.46 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.77 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.55 (s, 1H), 3.29 - 3.19 (m, 2H), 2.54 - 2.63 (m, 2H), 1.75 (s, 6H), 1.37 (d, J = 3.9 Hz, 9H); LCMS (m/z): 533.4 [M+H] + 
　実施例５８
　５－｛［５－（２－アセトキシアセトアミド）チオフェン－２－イル］メチレン｝－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000031
  
　実施例２８記載の方法と同様にして得られた５－［（５－アミノチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよびアセトキシ酢酸を用い、実施例５６の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．１２ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.06 (br. s, 1H), 11.87 (br. s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.48 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.53 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.75 (s, 6H); LCMS (m/z): 462.2 [M+H] + 
　実施例５９
　５－｛［５－（２－ヒドロキシアセトアミド）チオフェン－２－イル］メチレン｝－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000032
  
　実施例５８記載の方法と同様にして得られた５－｛［５－（２－アセトキシアセトアミド）チオフェン－２－イル］メチレン｝－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．０４０ｇ，０．０８７ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液（３ｍＬ）に、炭酸カリウム（０．０３１ｇ，０．２６ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間攪拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄後、減圧濃縮し、表題化合物を得た（収量０．０３２ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 8.67 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.00 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 6.42 (br. s, 1H), 5.00 (s, 1H), 3.81 (s, 2H), 1.70 (s, 6H); LCMS (m/z): 420.2 [M+H] + 
　実施例６３
　５－［（２，２－ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）メチレン］－２－（５－メチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オン　塩酸塩の製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000033
  
　実施例４２の第４工程記載の方法と同様にして得られた２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５－メチル４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オンおよび２，２－ジフルオロ－５－ホルミルベンゾジオキソールを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして得られた５－［（２，２－ジフルオロベンゾ［ｄ］［１，３］ジオキソール－５－イル）メチレン］－２－（Ｎ－ｔｅｒｔ－ブトキシカルボニル－５－メチル－４－オキソピロリジン－３－イリデン）チアゾリジン－４－オン（０．０２０ｇ，０．０４３ｍｍｏｌ）の酢酸エチル溶液（０．２ｍＬ）に、氷冷下、４Ｍ　塩酸－酢酸エチル（０．２０ｍＬ，０．８０ｍｍｏｌ）を加え、室温で１日間攪拌した。析出した固体をろ取し、酢酸エチル、ヘキサンで順に洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０１０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.72 (br. s, 1H), 9.94 (br. s, 1H), 9.51 (br. s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.72 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.52 (dd, J = 8.6, 1.6 Hz, 1H), 4.38 (d, J = 14.1 Hz, 1H), 4.23 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 4.02 - 4.12 (m, 1H), 1.37 (d, J = 7.1 Hz, 3H); LCMS (m/z): 365.0 [M-H] - 
　実施例７２
　５－｛［５－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノカルボニルアミノ）チオフェン－２－イル］メチレン｝－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000034
  
　ジメチルアミノクロライド（０．０３７ｍＬ，０．４２ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍＬ）に、氷冷下、ピリジン（３．０ｍＬ）、実施例２８記載の方法と同様にして得られた５－［（５－アミノチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．１０ｇ，０．２８ ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを加え、室温で２日間攪拌後、さらに１６時間加熱還流した。溶媒を減圧留去後、残渣に水を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去し、得られた残渣をＨＰＬＣ分取クロマトグラフィーで精製して、表題化合物を得た（収量９．０ｍｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 11.98 (br. s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.39 (d, J = 4.3 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 4.1 Hz, 1H), 5.50 (s, 1H), 2.98 (s, 6H), 1.75 (s, 6H); LCMS (m/z): 433.0 [M+H] + 
　実施例７８
　５－（｛５－［２－（Ｎ，Ｎ－ジメチルアミノ）アセトアミド］チオフェン－２－イル｝メチレン）－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000035
  
　実施例２８記載の方法と同様にして５－［（５－アミノチオフェン－２－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オン（０．１０ｇ，０．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（５ｍＬ）に、室温でＥＤＣ（０．１１ｇ，０．５５ｍｍｏｌ）、ジメチルアミノ酢酸（０．０４２ｇ，０．４１ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＡＰを加え、８０℃で１６時間加熱撹拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出後、有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、析出した固体をろ取し、酢酸エチルで洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０５３ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.39 (br. s, 1H), 12.10 (br. s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.51 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 4.2 Hz, 1H), 5.63 (s, 1H), 4.18 (br. s, 2H), 2.86 (s, 6H), 1.76 (s, 6H); LCMS (m/z): 447.0 [M+H] + 
　実施例８０
　５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－｛３－［（２－メトキシエトキシ）メトキシ］－３－メチル－２－オキソブチリデン｝チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000036
  
（第１工程）
　２－ヒドロキシイソ酪酸エチル（０．５０ｇ，３．８ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２０ｍＬ）に、氷冷下、水素化ナトリウム（６０％　ｉｎ　ｏｉｌ，０．３０ｇ，７．５ｍｍｏｌ）を加え、１時間撹拌した。この反応溶液に、メトキシエトキシメチルクロライド（１．０ｇ，７．６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２ｍＬ）を滴下し、室温で１６時間撹拌した。反応溶液を氷水で希釈し、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、２－［（メトキシエトキシ）メトキシ］イソ酪酸エチルを得た（収量０．６５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.84 (s, 2H), 4.17 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.70 - 3.77 (m, 3H), 3.49 - 3.54 (m, 2H), 3.37 - 3.40 (m, 2H), 1.37 - 1.59 (m, 6H), 1.23 - 1.32 (m, 3H); LCMS (m/z) 
（第２工程）
　アセトニトリル（０．４８ｇ，０．０１２ｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（５ｍＬ）に、－７８℃で、ｎ－ブチルリチウム（２．０Ｍ　ＴＨＦ溶液，３．０ｍＬ，６．０ｍｍｏｌ）を滴下し、４５分間撹拌した。この反応溶液に、上記第１工程で得られた２－［（メトキシエトキシ）メトキシ］イソ酪酸エチル（０．６５ｇ，３．０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（２ｍＬ）を滴下し、２時間撹拌した。反応溶液に１Ｍ塩酸を加えて中和し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、４－［（メトキシエトキシ）メトキシ］－４－メチル－３－オキシペンタンニトリルを得た（収量０．８０ｇ）。
（第３工程）
　上記第２工程で得られた４－［（メトキシエトキシ）メトキシ］－４－メチル－３－オキシペンタンニトリルを用いて実施例１の第２工程記載の方法と同様にして得られた２－｛３－［（２－メトキシエトキシ）メトキシ］－３－メチル－２－オキソブチリデン｝チアゾリジン－４－オンおよび６－クロマンアルデヒドを用い、実施例１の第９工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．１１ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.21 (br. s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.35 - 7.44 (m, 2H), 6.88 - 6.95 (m, 1H), 6.56 (s, 1H), 4.73 (s, 2H), 4.21 (t, J = 5.1 Hz, 2H), 3.59 - 3.66 (m, 2H), 3.40 - 3.46 (m, 2H), 3.22 (s, 3H), 2.82 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.92 - 2.01 (m, 2H), 1.30 (s, 6H); LCMS (m/z): 434.6 [M+H] + 
　実施例８３
　５－［（３－メチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－イル）メチレン］－２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000037
  
（第１工程）
　４－ヒドロキシ－３－ヨード安息香酸メチル（１．０ｇ，３．６ｍｍｏｌ）、臭化アリル（０．６０ｍＬ，７．３ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（１．３ｇ，９．１ｍｍｏｌ）およびヨウ化カリウム（０．１３ｇ，０．７６ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（７ｍＬ）を、１８時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去し、残渣に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、４－（アリルオキシ）－３－ヨード安息香酸メチルを得た（収量１．１ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 8.47 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.99 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.97 - 6.12 (m, 1H), 5.50 - 5.57 (m, 1H), 5.32 - 5.38 (m, 1H), 4.66 (dt, J = 4.9, 1.7 Hz, 2H), 3.89 (s, 3H) 
（第２工程）
　上記第１工程で得られた４－（アリルオキシ）－３－ヨード安息香酸メチル（０．５１ｇ，１．６ｍｍｏｌ）およびＡＩＢＮ（０．０２６ｇ，０．１６ｍｍｏｌ）の無水トルエン溶液（４５ｍＬ）に、室温でトリブチルすず（０．５８ｍＬ，２．２ｍｍｏｌ）を滴下し、３時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、３－メチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－カルボン酸メチルを得た（収量０．３１ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 7.83 - 7.90 (m, 2H), 6.79 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 4.71 - 4.83 (m, 1H), 4.16 (dd, J = 8.8, 7.4 Hz, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.48 - 3.64 (m, 1H), 1.36 (d, J = 6.9 Hz, 3H) 
（第３工程）
　上記第２工程で得られた３－メチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－カルボン酸メチルを用い、実施例３３の第１工程記載の方法と同様にして得られた１－［５－（３－メチル－２，３－ジヒドロ）ベンゾフラン］メタノール（０．２２ｇ，１．３ｍｍｏｌ）のＤＣＭ（２ｍＬ）に、氷冷下、デス－マーチンペルヨージナン（０．６７ｇ，１．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で１．５時間撹拌した。反応溶液に飽和亜硫酸ナトリウム水溶液を加え、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、３－メチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－アルデヒドを粗生成物として得た（収量０．１７ｇ）。
（第４工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび上記第３工程で得られた３－メチル－２，３－ジヒドロベンゾフラン－５－アルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０２８ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.13 (br. s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.57 (s, 1H), 7.53 (br. s, 1H), 7.47 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 5.59 (s, 1H), 4.77 (t, J = 9.0 Hz, 1H), 4.17 (dd, J = 8.9, 7.1 Hz, 1H), 3.56 - 3.69 (m, 1H), 1.74 (s, 6H), 1.31 (d, J = 6.8 Hz, 3H); LCMS (m/z): 396.9 [M+H] + 
　実施例８６
　５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－（３－ヒドロキシ－３－メチル－２－オキソブチリデン）チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000038
  
　実施例８０で得られた５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－｛３－［（２－メトキシエトキシ）メトキシ］－３－メチル－２－オキソブチリデン｝チアゾリジン－４－オン（０．０５０ｇ，０．１１ｍｍｏｌ）の４Ｍ　塩酸－１,４－ジオキサン溶液（１．５ｍＬ，６．０ｍｍｏｌ）を、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、得られた残渣をＨＰＬＣ分取クロマトグラフィーで精製して、表題化合物を得た（収量９．０ｍｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 7.22 - 7.41 (m, 3H), 6.86 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.32 (s, 1H), 5.01 (s, 1H), 4.12 - 4.25 (m, 2H), 2.80 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.85 - 2.02 (m, 3H), 1.21 (s, 6H); LCMS (m/z): 346.4 [M+H] + 
　実施例８７
　５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－［３－（２－ヒドロキシエトキシ）－３－メチル－２－オキソブチリデン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000039
  
（第１工程）
　２－ブロモエタノール（１０ｇ，０．０８１ｍｏｌ）のＤＣＭ（８０ｍＬ）溶液に、氷冷下、ＴＥＡ（１７ｍＬ，０．１２ｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（０．４８ｇ，８．１ｍｍｏｌ）およびｔｅｒｔ－ブチルジメチルクロロシラン（１８ｇ，０．１２ｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応溶液を水で希釈し、ＤＣＭで２回抽出した。有機層を水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、１－ブロモ－２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エタンを得た（収量２０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 3.88 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.52 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.07 (s, 6H) 
（第２工程）
　水素化ナトリウム（６０％　ｉｎ　ｏｉｌ，０．９０ｇ，０．０３８ｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１５ｍＬ）に、室温でヨウ化テトラブチルアンモニウム（０．５５ｇ，１．５ｍｍｏｌ）を添加した後、氷冷下、２－ヒドロキシイソ酪酸エチル（２．０ｇ，０．０１５ｍｏｌ）を滴下し、室温で１時間撹拌した。この反応溶液に氷冷下、上記第１工程で得られた１－ブロモ－２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エタン（５．０ｇ，０．０２２ｍｏｌ）を加え、室温で１６時間撹拌した。反応溶液を氷冷後、水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、２－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エトキシ］イソ酪酸エチルを得た（収量０．８０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.10 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.66 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.36 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 1.32 (s, 6H), 1.20 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.86 (s, 9H), 0.04 (s, 6H) 
（第３工程）
　上記第２工程で得られた２－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エトキシ］イソ酪酸エチルを用い、実施例８０の第２工程記載の方法と同様にして得られた４－［２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エトキシ］－４－メチル－３－オキシペンタンニトリルを、実施例１の第２工程記載の方法と同様に処理して２－（３－｛２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エトキシ｝－３－メチル－２－オキソブチリデン）チアゾリジン－４－オンを合成した。得られた化合物および６－クロマンアルデヒドを用いて実施例１の第９工程記載の方法と同様にして、５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－（３－｛２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エトキシ｝－３－メチル－２－オキソブチリデン）チアゾリジン－４－オンを得た（収量０．０７０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.24 (br. s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.34 - 7.44 (m, 2H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.11 - 4.31 (m, 2H), 3.70 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.27 - 3.32 (m, 2H), 2.82 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 1.86 - 2.03 (m, 2H), 1.24 (s, 6H), 0.86 (s, 9H), 0.05 (s, 6H); LCMS (m/z): 502.2 [M+H] + 
（第４工程）
　上記第３工程で得られた５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－（３－｛２－［（ｔｅｒｔ－ブチルジメチルシリル）オキシ］エトキシ｝－３－メチル－２－オキソブチリデン）チアゾリジン－４－オン（０．０５０ｇ，０．０９９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍＬ）に、室温でフッ化テトラブチルアンモニウム（１．０Ｍ　ＴＨＦ溶液，０．２０ｍＬ，０．２０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍＬ）を滴下し、３時間撹拌した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、表題化合物を得た（収量０．０２５ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.21 (br. s, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.35 - 7.43 (m, 2H), 6.92 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.59 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.15 - 4.26 (m, 2H), 3.52 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 3.23 - 3.35 (m, 1H), 2.82 (t, J = 6.2 Hz, 2H),  1.87 - 2.02 (m, 2H),, 1.24 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 390.2 [M+H] + 
　実施例９８
　２－［３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソプロピリデン］－５－（クロマン－６－イルメチレン）チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000040
  
（第１工程）
　グリコール酸エチル（３．０ｇ，０．０２８ｍｏｌ）のＤＣＭ（１０ｍＬ）に、室温でＡｍｂｅｒｌｙｓｔ－１５（０．７０ｇ）を加え、－２０℃でイソブチレンガスを１０分間吹き込み、室温で一晩撹拌した。不溶物をろ去し、ろ液を減圧濃縮した。残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、ｔｅｒｔ－ブトキシグリコール酸エチルを得た（収量２．０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.19 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.00 (s, 2H), 1.12 - 1.35 (m, 12H) 
（第２工程）
　上記第１工程で得られたｔｅｒｔ－ブトキシグリコール酸エチルを用い、実施例８０の第２工程記載の方法と同様にして得られた４－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－３－オキシブタンニトリルを、実施例１の第２工程記載の方法と同様に処理して２－［３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソプロピリデン］チアゾリジン－４－オンを合成した。得られた化合物および６－クロマンアルデヒドを用いて実施例１の第９工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．１３ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.19 (br. s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.38 (dd, J = 11.3, 2.7 Hz, 2H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.48 (s, 1H), 4.16 - 4.26 (m, 2H), 3.93 (s, 2H), 2.81 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 1.89 - 2.02 (m, 2H), 1.18 (s, 9H) ; LCMS (m/z): 374.2 [M+H] + 
　実施例９９
　５－（クロマン－６－イルメチレン）－２－（３－ヒドロキシ－２－オキソプロピリデン）チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000041
  
　実施例９８で得られた２－［３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソプロピリデン］－５－（クロマン－６－イルメチレン）チアゾリジン－４－オン（０．０４０ｇ，０．１３ｍｍｏｌ）に、氷冷下、４Ｍ　塩酸－１，４－ジオキサン（１．５ｍＬ，６．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、析出した固体をジエチルエーテルで洗浄後、乾燥させて表題化合物を得た（収量０．０３４ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.23 (br. s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.33 - 7.42 (m, 2H), 6.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.46 (s, 1H), 4.15 - 4.27 (m, 2H), 4.00 (s, 1H), 3.57 (s, 1H), 2.81 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 1.86 - 2.01 (m, 2H) ; LCMS (m/z): 318.0 [M+H] + 
　実施例１００
　２－［４－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソブチリデン］－５－（クロマン－６－イルメチレン）チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000042
  
（第１工程）
　３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）プロピオン酸（１．０ｇ，６．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ溶液（５ｍＬ）に、室温で濃硫酸（０．０３ｍＬ，０．５６ｍｍｏｌ）を加え、２時間加熱還流した。反応溶液を水で希釈し、酢酸エチルで２回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧濃縮し、３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）プロピオン酸エチルを得た（収量０．９０ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 4.13 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.62 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.50 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 1.22 - 1.28 (m, 3H), 1.17 (s, 9H) 
（第２工程）
　上記第１工程で得られた３－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）プロピオン酸エチルを用い、実施例８０の第２工程記載の方法と同様にして得られた５－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－３－オキシペンタンニトリルを、実施例１の第２工程記載の方法と同様に処理して２－［４－（ｔｅｒｔ－ブトキシ）－２－オキソブチリデン］チアゾリジン－４－オンを合成した。得られた化合物および６－クロマンアルデヒドを用いて実施例１の第９工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０６８ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.16 (br. s, 1H), 7.49 (s, 1H), 7.32 - 7.41 (m, 2H), 6.92 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.20 (s, 1H), 4.16 - 4.25 (m, 2H), 3.56 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.81 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.58 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 1.88 - 2.03(m, 2H), 1.12 (s, 9H) ; LCMS (m/z): 388.2 [M+H] + 
　実施例１３９
　２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１Ｈ－１，２，４－トリアゾリル－１－イル）ブチリデン］－５－［（４－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－６－イル）メチレン］チアゾリジン－４－オンの製造
Figure JPOXMLDOC01-appb-C000043
  
（第１工程）
　窒素雰囲気下、ＬＡＨ（０．０７９ｇ，２．１ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（７ｍＬ）に、実施例２９の第２工程記載の方法と同様にして得られた６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－３（４Ｈ）－オン（０．２０ｇ，０．９０ｍｍｏｌ）の無水ＴＨＦ溶液（２ｍＬ）を９分間かけて滴下し、１時間攪拌した後、さらに室温で１．５時間攪拌した。反応溶液を氷冷後、酢酸エチル（１０ｍＬ）を加え、５分間攪拌した後、水（０．０７５ｍＬ，４．２ｍｍｏｌ）を滴下し、１１分間攪拌した。１５％水酸化ナトリウム水溶液（０．０７５ｍＬ）、水（０．２２ｍＬ）を順に加え、室温で１時間攪拌後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。不溶物をろ去後、ろ液を減圧濃縮し、６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジンを得た（収量０．１９ｇ）
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 6.63 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.52 (dd, J = 8.2, 2.0 Hz, 1H), 5.79 (br. s, 1H), 5.51 (s, 1H), 4.08 - 4.12 (m, 2H), 3.94 - 4.01 (m, 2H), 3.85 - 3.93 (m, 2H), 3.23 - 3.28 (m, 2H) ; LCMS (m/z): 208.0 [M+H] + 
（第２工程）
　ヨウ化メチル（０．２７ｇ，１．９ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（０．３７ｇ，２．７ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（２ｍＬ）に、氷冷下、上記第１工程で得られた６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン（０．１８ｇ，０．８９ｍｍｏｌ）のアセトン溶液（８ｍＬ）を滴下し、２０時間加熱還流した。反応溶液を室温まで放冷後、溶媒を減圧留去し、残渣に酢酸エチルを加え、水、飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－４－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジンを得た（収量０．１０ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 6.78 (s, 1H), 6.75 - 6.77 (m, 2H), 5.72 (s, 1H), 4.25 - 4.32 (m, 2H), 4.07 - 4.15 (m, 2H), 3.98 - 4.06 (m, 2H), 3.23 - 3.28 (m, 2H), 2.90 (s, 3H) 
（第３工程）
　上記第２工程で得られた６－（１，３－ジオキソラン－２－イル）－４－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン（０．１０ｇ，０．４６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（３ｍＬ）に、室温で２Ｍ塩酸（０．７ｍＬ，１．４ｍｍｏｌ）を加え、５０℃で２時間攪拌した。反応溶液を室温まで放冷後、２Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（１．０ｍＬ）を加え、５分間攪拌した後、酢酸エチルで抽出した。有機層を水、飽和食塩水で順に洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を減圧留去後、残渣をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、ヘキサン／酢酸エチル）で精製し、４－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－６－アルデヒドを得た（収量０．０７７ｇ）。
１H NMR (CDCl3) δ (ppm) 9.80 (s, 1H), 7.16 - 7.21 (m, 2H), 6.84 - 6.89 (m, 1H), 4.35 - 4.40 (m, 2H), 3.28 - 3.33 (m, 2H), 2.95 (s, 3H) ; LCMS (m/z): 178.0 [M+H] + 
（第４工程）
　実施例８の第１工程記載の方法と同様にして得られた２－［３－メチル－２－オキソ－３－（１，２，４－トリアゾリル）ブチリデン］チアゾリジン－４－オンおよび上記第３工程で得られた４－メチル－３，４－ジヒドロ－２Ｈ－ベンゾ［ｂ］［１，４］オキサジン－６－アルデヒドを用い、実施例８の第２工程記載の方法と同様にして、表題化合物を得た（収量０．０２８ｇ）。
１H NMR (DMSO-d6) δ (ppm) 12.09 (br. s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 6.97 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 6.93 (dd, J = 8.3, 2.0 Hz, 1H), 6.85 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 5.57 (s, 1H), 4.28 - 4.33 (m, 2H), 3.27 - 3.30 (m, 2H), 2.90 (s, 3H), 1.74 (s, 6H) ; LCMS (m/z): 412.1 [M+H] + 
　以下の実施例化合物［表１－１］～［表１－２０］は、それぞれ対応する原料（市販品、または市販化合物から公知の方法もしくはそれに準じた方法により誘導体化した化合物）を用い、上述の実施例記載の方法に従い、必要に応じて、有機合成化学で通常用いられる方法を適宜組み合わせて製造した。また、各々の化合物の物理化学データを［表２－１］～［表２－９］に示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000044
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000045
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000046
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000047
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000048
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000049
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000050
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000051
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000052
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000053
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000054
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000055
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000056
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000057
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000058
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000059
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000060
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000061
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000062
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000063
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000064
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000065
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000066
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000067
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000068
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000069
  　
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000070
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000071
  
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000072
  
試験例１－１
ＤＹＲＫ１Ａに対する活性阻害試験
（キナーゼ活性の測定方法）
　キナーゼ活性の測定は、ＱｕｉｃｋＳｃｏｕｔ　Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　Ａｓｓｉｓｔ（商標）ＭＳＡ（カルナバイオサイエンス社製市販キット）を用い、モビリティシフトアッセイ（ＭＳＡ）法により行った。キナーゼ反応の基質は、キット付属のＦＩＴＣ標識ＤＹＲＫｔｉｄｅペプチドを用いた。アッセイバッファー［２０ｍＭ　ＨＥＰＥＳ、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ-１００（商標）、２ｍＭ　ｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ、ｐＨ７．５］を用い、基質（１μＭ）、ＭｇＣｌ２（５ｍＭ）およびＡＴＰ（２５μＭ）を用いて基質混合液を作成した。また、キナーゼ（ＤＹＲＫ１Ａ、カタログＮｏ．０４－１３０、カルナバイオサイエンス社製）を０．１ｎＭとなるようアッセイバッファーで希釈して酵素溶液を調整した。被験化合物の１０ｍＭ　ＤＭＳＯ溶液から、１０濃度（０．００００３ｍＭ、０．０００１ｍＭ、０．０００３ｍＭ、０．００１ｍＭ、０．００３ｍＭ、０．０１ｍＭ、０．０３ｍＭ、０．１ｍＭ、０．３ｍＭ、１ｍＭ）にＤＭＳＯでさらに希釈し、それぞれをアッセイバッファーで２５倍希釈して、薬物溶液とした（４％ＤＭＳＯ溶液）。薬物溶液もしくはコントロール溶液（４％ＤＭＳＯ－アッセイバッファー）５μＬ、基質混合液５μＬ、および酵素溶液１０μＬをポリプロピレン製３８４穴プレートのウェル中で混合し、１時間室温で反応させた後、６０μＬのキット付属のターミネーションバッファーを添加し反応を停止させた。ついで、反応溶液中の、基質（Ｓ）およびリン酸化された基質（Ｐ）の量をＬａｂＣｈｉｐ　ＥＺ　Ｒｅａｄｅｒ　ＩＩシステム（Ｃａｌｉｐｅｒ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ社製）を用い、アッセイキットのプロトコールにしたがって測定した。
（阻害活性の評価方法）
　「基質」および「リン酸化された基質」の各ピークの高さをそれぞれＳおよびＰとし、またブランクとして酵素溶液の代わりにアッセイバッファーを添加したものを測定した。
　被験化合物の阻害率（％）は、次の式に従って算出した。
阻害率（％）＝（１－（Ｃ－Ａ）／（Ｂ－Ａ））×１００
　ただし、Ａ、Ｂ、Ｃは、それぞれブランクウェルのＰ／（Ｐ＋Ｓ）、コントロール溶液ウェルのＰ／（Ｐ＋Ｓ）、化合物添加ウェルのＰ／（Ｐ＋Ｓ）を示す。
　また、ＩＣ５０値は、阻害率と被験化合物濃度（対数）の回帰分析により算出した。
（評価結果）
　本発明化合物のＤＹＲＫ１Ａに対するＩＣ５０値は、１μＭ以下の強い阻害活性を示した。本発明の代表化合物のＤＹＲＫ１Ａに対する阻害活性を表３に示す。キナーゼ活性阻害作用はＩＣ５０値が、０．１μＭ未満を＊＊＊印、０．１－１μＭを＊＊印で示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000073
  
 
　この結果は、被験化合物（本発明化合物（Ｉ）および（ＩＩ））が、強いＤＹＲＫ１Ａ阻害活性を有することを示している。

試験例１－２
ＤＹＲＫファミリー（ＤＹＲＫ１Ｂ、ＤＹＲＫ２、ＤＹＲＫ３、ＤＹＲＫ４）に対する活性阻害試験
　キナーゼ活性の測定方法およびＤＹＲＫファミリーに対する阻害活性の評価方法は、試験例１－１に準じて行った。ただし、キナーゼは、ＤＹＲＫ１Ｂ（カタログＮｏ．０４－１３１、カルナバイオサイエンス社製）、ＤＹＲＫ２（カタログＮｏ．０４－１３２、カルナバイオサイエンス社製）、ＤＹＲＫ３（カタログＮｏ．０４－１３３、カルナバイオサイエンス社製）、ＤＹＲＫ４（カタログＮｏ．０４－４３４、カルナバイオサイエンス社製）を用いて、キナーゼ活性の測定においては、各成分の濃度が表４の値になるよう調整した。
尚、比較のために、試験例１－１で得られたＤＹＲＫ１Ａに対する阻害活性の結果も、具体的な値によって併記した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000074
  
（結果）
　本発明の代表化合物のＤＹＲＫファミリーに対する阻害活性は、表５に示すとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000075
  
 
　以上試験例１－１、１－２より、被験化合物（本発明化合物（Ｉ）および（ＩＩ））が、ＤＹＲＫ１Ａに対して、より選択的に阻害活性を有することを示している。

試験例２
細胞内Ｔａｕのリン酸化阻害試験
（使用する細胞およびその培養）
　ＤＹＲＫ１ＡはＴａｕをリン酸化することが知られていることから、ＤＹＲＫ１ＡおよびＴａｕをそれぞれ発現誘導させて、ＴａｕがＤＹＲＫ１Ａによってリン酸化される培養細胞（ＤＹＲＫ１Ａ－Ｔａｕ共発現細胞、バックグラウンドＨＥＫ２９３細胞）を構築し、被験化合物による細胞内ＤＹＲＫ１ＡのＴａｕリン酸化阻害活性を測定した。
　図１は、当該培養細胞に対するＴａｕの２１２番目のスレオニン残基のリン酸化を特異的に認識する抗体（上段）およびＴａｕを特異的に認識する抗体（下段）を用いたウエスタンブロッティングの結果の一例を示したものである。
　図１に示すとおり、当該培養細胞内では、ＴａｕおよびＤＹＲＫ１Ａがそれぞれ別個に発現可能であり、またＴａｕは、ＤＹＲＫ１Ａが存在することによりリン酸化が促進されることがわかる。
　ＤＹＲＫ１Ａ－Ｔａｕ共発現細胞は、１０ｃｍディッシュ中、１０％ＦＢＳ（ＧＩＢＣＯ社製）、５％ペニシリンストレプトマイシン（ナカライ社製）、０．１％Ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ（インビトロジェン社製）、１％Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ（インビトロジェン社製）、０．０００４％Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ（インビトロジェン社製）を添加したＤＭＥＭ培地（和光純薬社製）を用いて５％ＣＯ２インキュベーター内で培養した。
（被験化合物の添加）
　培養したＤＹＲＫ１Ａ－Ｔａｕ共発現細胞を細胞密度２．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬになるように、抗生物質（Ｂｌａｓｔｉｃｉｄｉｎ、Ｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎ、Ｐｕｒｏｍｙｃｉｎ）を除いたＤＭＥＭ培地（以後、培地）で希釈し、６ウェルプレートに２ｍＬずつ添加した。被験化合物の１０ｍＭ　ＤＭＳＯ溶液を、１ｍＭ、０．３ｍＭ、０．１ｍＭにＤＭＳＯでさらに希釈し、ＴａｕおよびＤＹＲＫ１Ａの発現誘導刺激剤を加えた培地６００μＬに、それぞれ３μＬずつ添加後ボルテックスミキサーで撹拌して薬物溶液を調整した。前日に細胞を播種した６ウェルプレートに、薬物溶液を５００μＬずつ添加し、２０時間インキュベートした（被験化合物の最終濃度：１μＭ、０．３μＭ、０．１μＭ）。
（タンパク質の抽出）
　培養上清を吸引除去した後、ＳＤＳ－サンプルバッファー（１ｍＬ／ウェル）を添加後、セルスクレーパで細胞を剥離し、超音波破砕（１５秒間隔でＯＮ、ＯＦＦ）を１５分間繰り返して細胞を破砕した。遠心操作（１５０００ｒｐｍ、１０分間）により上清を回収し、９５℃で５分間加熱処理しタンパク質を変性させてサンプル溶液とした。
（Ｔａｕまたはリン酸化Ｔａｕの検出）
　ゲル濃度５－２０％のグラジエントアクリルアミドゲル（オリエンタルインスツルメンツ株式会社製、カタログＮｏ．６１－０７２－００２）の各ウェルにサンプル溶液を５μＬずつ添加し、電気泳動を行った。その後、ｉＢｌｏｔゲルトランスファーシステム（ライフテクノロジーズ社製）を用いてＰＤＶＦ膜にゲル中のタンパク質を転写した。転写したＰＶＤＦ膜を５％Ｎｏｎｆａｔ　Ｄｒｙ　Ｍｉｌｋ（Ｃｅｌｌ　Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ社製）で１時間ブロッキング処理した後、一次抗体として抗Ｔａｕマウス抗体（ＣＡＬＢＩＯＣＨＥＭ社製、カタログＮｏ．５７７８０１）もしくは抗リン酸化Ｔａｕラビット抗体（ｐＴ２１２、インビトロジェン社製、カタログＮｏ．４４７４０Ｇ）を用い、５％Ｎｏｎｆａｔ　Ｄｒｙ　Ｍｉｌｋを添加したＴＢＳＴバッファー中、４℃で一晩反応させた。未反応の一次抗体をＴＢＳＴバッファー（１０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１５０ｍＭ　ＮａＣｌ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０）で洗浄後、二次抗体としてＨＲＰラベルした抗マウスＩｇＧヤギ抗体（ＢＩＯ　ＲＡＤ社製、カタログＮｏ．１７０－５０４７）あるいは抗ウサギＩｇＧヤギ抗体（ＢＩＯ　ＲＡＤ社製、カタログＮｏ．１７０－５０４６）を用い、５％Ｎｏｎｆａｔ　Ｄｒｙ　Ｍｉｌｋを添加したＴＢＳＴバッファー中、室温で１時間反応させた。未反応の二次抗体をＴＢＳＴバッファーで洗浄後、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ（商標）　Ｗｅｓｔ　Ｄｕｒａ　Ｅｘｔｅｎｄｅｄ　Ｄｕｒａｔｉｏｎ　Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ社製、ＰＣＣ－３４０７６）を用いて添付のプロトコールどおりに反応させた後、ＣＣＤカメラ（ＡＴＴＯ、Ｌｉｇｈｔ－ＣａｐｔｕｒｅＩＩ）を用いて、それぞれのバンドを化学発光で検出した。検出されたバンドをデンシトメトリー（ＡＴＴＯ　ＣＳ　Ａｎａｌｙｚｅｒ　ｖｅｒ３．０）により数値化し、ＴａｕおよびＤＹＲＫ１Ａ発現誘導かつ化合物非添加のバンドの発光を１００％、Ｔａｕのみ発現誘導かつ化合物非添加のバンドの発光を０％とし、各群におけるバンドの強度から阻害率を算出した。
　本試験で用いた一次抗体と二次抗体の組み合わせおよび希釈濃度は以下のとおりである。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000076
  
　被験化合物濃度１μＭの場合の結果を、表７に示す。
　Ｔａｕリン酸化阻害活性は、７０％以上のものは＊＊＊印、５０％以上７０％未満のものは＊＊印、３０％以上５０％未満のものは＊印で示した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000077
  
本試験において、表７のとおり、本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）は１μＭの濃度で、細胞内Ｔａｕリン酸化阻害活性を強く阻害した。
　この結果は、本発明の化合物（Ｉ）および（ＩＩ）が、細胞内においても“ＤＹＲＫ１ＡによるＴａｕのリン酸化”に対して強い阻害活性を有していることを示している。
　本発明により提供される化合物は、ＤＹＲＫ１Ａを介した異常な細胞応答に関連していることが知られている疾患、例えば、アルツハイマー病、ダウン症、精神遅滞、記憶障害、記憶喪失、鬱病のような精神・神経疾患に対する予防または治療剤として有用である。また、ＤＹＲＫ１Ａ阻害剤として、上記の疾患に関する病態イメージングの試薬や基礎実験用、研究用の試薬に有用である。
 

Claims (2)

  1. 下式（Ｉ）で示されるチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000001
      
    （式中、Ｒ１は、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環式縮合環を表し、Ｒ２は、置換基を有してもよいアルキル基、置換基を有してもよいシクロアルキル基、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環、または置換基を有してもよいアルコキシ基を表し、Ｒ３は水素原子、置換基を有してもよいアルキル基を表す。）
  2. 下式（ＩＩ）で示されるチアゾリジノン誘導体またはその薬学的に許容される塩。
    Figure JPOXMLDOC01-appb-C000002
      
    （式中、Ｒ１は、置換基を有してもよいアリール基、置換基を有してもよいヘテロアリール基、置換基を有してもよい複素環式縮合環を表し、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６およびＲ７は同一もしくは異なって、水素原子、置換基を有してもよいアルキル基を表し、また、Ｒ４とＲ５は、結合を形成し飽和の環を形成してもよい。Ｚは、水素原子、置換基を有してもよいアルコキシカルボニル基を表す。）
     
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