WO2014029250A1 - 苯并吡啶氮杂卓类化合物及其应用 - Google Patents

苯并吡啶氮杂卓类化合物及其应用 Download PDF

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WO2014029250A1
WO2014029250A1 PCT/CN2013/079879 CN2013079879W WO2014029250A1 WO 2014029250 A1 WO2014029250 A1 WO 2014029250A1 CN 2013079879 W CN2013079879 W CN 2013079879W WO 2014029250 A1 WO2014029250 A1 WO 2014029250A1
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WO
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phenyl
group
diamide
fluorophenyl
benzopyridine
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Application number
PCT/CN2013/079879
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English (en)
French (fr)
Inventor
李建其
王文雅
周斌
解鹏
杜振新
卢秀莲
翁志洁
张庆伟
黄道伟
Original Assignee
辰欣药业股份有限公司
上海医药工业研究院
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Publication date
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
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    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems

Definitions

  • the invention relates to a benzopyridinium azalea compound, a preparation method thereof and the use of the compound to prevent and treat tumors and the like by blocking the HGF/c-Met signal pathway. Background technique
  • Hepatocyte growth factor also known as Scatter Factor (SF)
  • SF Scatter Factor
  • the c-Met transmembrane protein is a protein product encoded by the c-met proto-oncogene and is a high affinity receptor for HGF.
  • HGF binds to its receptor c-Met, it leads to autophosphorylation of c-Met tyrosine kinase, which activates c-Met tyrosine kinase activity, further activates many different downstream signaling molecules in cells, induces cell development.
  • a range of biological effects such as cell dispersion, movement, proliferation, invasion, migration, and ultimately metastasis and angiogenesis (Bottaro et al, Science, 1991, 251, 802-804).
  • HGF/c-Met signaling plays an important role in the development, progression and secondary metastasis of malignant tumors, and is closely related to the poor prognosis of patients (Sattler et al, Curr Oncol Rep, 2007, 9). , 102-108; Mazzone et al, FASEB J, 2006, 20, 1611-1621; Trusolino et al, Nature Rev, Cancer 2002, 2, 289-300).
  • the continuous activation of c-Met will destroy the adhesion between tumor cells, promote cell movement and tumor angiogenesis, and make tumor cells easy to enter the blood circulation and obtain the ability to invade and metastasize.
  • c-Met and HGF are overexpressed relative to surrounding tissues, such as thyroid cancer, breast cancer, lung cancer, stomach cancer, colon cancer, pancreatic cancer, prostate cancer, kidney cancer, liver cancer, ovarian cancer, and brain glue.
  • Qualitative tumors, etc. Borchmeier et al, Nat Rev Mol Cell Biol, 2003, 4, 915-925; Otsuka et al, Cancer Res, 1998, 58, 5157-5167; Parr et al, Clin Cancer Res, 2004, 10, 202-211) .
  • MET gene amplification is closely related to 20% of epidermal growth factor inhibitor (EGFR-TKIs) acquired resistance (Engelman et al, Science, 2007, 316, 1039-1043 thus, targeting to c- Met's small molecule kinase inhibitors have important research significance for the treatment of the aforementioned cancers.
  • EGFR-TKIs epidermal growth factor inhibitor
  • c-Met small molecule inhibitors have been in preclinical and clinical research.
  • Crizotinib developed by Pfizer has been approved by the FDA in August 2011 for the treatment of patients with advanced non-small cell lung cancer (NSCLC) expressing abnormal anaplastic lymphoma kinase (ALK) gene, showing good results. treatment effect.
  • NSCLC non-small cell lung cancer
  • ALK abnormal anaplastic lymphoma kinase
  • C-Met inhibitors which are clinically studied, differ in their binding patterns to the c-Met kinase domain and can be divided into two broad categories:
  • U-type small molecule inhibitors such as Crizotinib and MK-2461;
  • Linear small molecule inhibitors such as Cabozantinib (XL184) and Foretinib (XL880).
  • the first type of U-type small molecule inhibitor acts on the ATP-binding site at the beginning of the c-Met kinase pocket, surrounding the amino acid residue Metl211, mainly as a highly selective inhibitor of c-Met;
  • the second type of linear type Small molecule inhibitors are novel c-Met inhibitors developed in recent years, acting through a stretched conformation on deep Ilel l45 hydrophobic pockets from the ATP-binding site, the kinase junction chain to the C-terminal helix region, mainly Target inhibitor.
  • the linear small molecule c-Met inhibitor consists of an aromatic ring, an aromatic ring linking region and a dicarbonyl side chain, which act on the ATP-binding site, the linking region and the C-terminal helix region of the c-Met enzyme, respectively.
  • the two carbonyl oxygen atoms in the dicarbonyl side chain can form two hydrogen bonds with the amino acid residues in the hydrophobic pocket, and are the basic pharmacological groups of such compounds having c-Met inhibitory activity.
  • the aromatic ring acting on the ATP-binding site has the function of regulating the physicochemical properties of the molecule, regulating the affinity and specificity of the inhibitor molecule and the c-Met target enzyme, and finally improving its inhibitory activity.
  • the object of the present invention is to disclose a benzopyridinium azide compound and its use as an antitumor drug to find a multi-target anti-tumor compound having a novel structural type of c-Met inhibitor, which meets the needs of clinical application. .
  • the benzopyridinium azide compound of the present invention is a compound having the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof:
  • X is selected from H, CN, methyl, methoxy or fluoro
  • Ri is selected from H or methyl
  • R 2 and R 3 are each independently selected from fluorene, 0, d- 5 alkyl, amino, NHR 6 , halogen, cyano, nitro, substituted amino, phenyl, heterocyclic, substituted phenyl or substituted heterocyclic base;
  • the d-5 alkyl group is preferably a methyl group, an ethyl group or an isopropyl group;
  • the substituted amino group is preferably Cw alkylamino, morpholine-N-propylamino, piperidine-4-methylamino or piperazin-1-propyl; heterocyclic group is preferably morpholine-1-yl, piperidine- ⁇ group Or piperazine-1-yl;
  • the substituted phenyl or substituted heterocyclic group is a phenyl or heterocyclic group having 1 to 4 substituents, and the substituent is preferably a hydroxyl group, a methoxy group, a methyl group or an amino group;
  • 16 is selected from the group consisting of hydrogen, C straight or branched alkyl, aryl, aralkyl, heterocyclic, heterocycloalkyl, substituted d- 5 alkyl, substituted aryl, substituted aralkyl, Substituted heterocyclic or substituted heterocycloalkyl;
  • the branched or branched alkyl group is preferably a methyl group, an ethyl group or an isopropyl group;
  • the aryl group is preferably a phenyl group, and the aralkyl group is preferably a benzyl group, a 3,4-dimethoxybenzyl group or a 3-(3,4-dimethoxyphenoloxy)propyl group;
  • the heterocyclic group is preferably an imidazolyl group, a thiazolyl group or a pyridyl group;
  • Heterocycloalkyl is preferably morphinolyl, piperidine-4-methyl, piperazin-1-propyl, N-methylpiperazine-1-propyl or pyrrolidinyl;
  • the substituted alkyl group is preferably a methylol group, an aminomethyl group, a 3-(hydroxy)propyl group or a 3-(dimethylamino)propyl group;
  • the substituted aryl group is preferably a 3,4-dimethoxyphenyl group.
  • the substituted heterocyclic group or substituted heterocycloalkyl group is a heterocyclic group or a heterocycloalkyl group having 1 to 4 substituents a substituent, preferably a hydroxy group, a methoxy group, a methyl group or an amino group;
  • Y is selected from the group consisting of NH, NCH 3 , 0 and S;
  • R 4 is selected from H, d- 4 alkyl group or d- 4, wherein: said d- 4 alkyl, preferably methyl, d_ 4 acyl group preferably acetyl;
  • R 5 is a halogen, preferably F.
  • the compound of the formula (I) or the salt of any one of 1-1 to 1-30 which is a hydrochloride, a hydrobromide, a sulfate, an acetate, a lactate, a tartrate, a citrate, Citrate, trifluoroacetate, malate, maleate, succinate, p-toluenesulfonic acid or methanesulfonate.
  • the compounds of the present invention can be synthesized by the method of Scheme 2 for the synthesis of the target compounds II, III, IV and V:
  • intermediate 5 In the synthesis of intermediate 5, when Y is 0, intermediate 4 and substituted phenol are reacted with K 2 C0 3 as a base at 60 ° C in DMF solution for 8 h to obtain intermediate 5;
  • intermediate 4 and substituted aniline are in Under the catalysis of concentrated hydrochloric acid, ethanol and water (V/V, 1/6) were used as a solvent, and the reaction was stirred under reflux overnight to obtain Intermediate 5.
  • the intermediate 5 was reacted with a mixed solution of ethyl formate and acetic anhydride to obtain a formylated product 6. This intermediate is refluxed in phosphorus oxychloride and polyphosphoric acid to give intermediate 7. Finally, intermediate 7 and intermediate 3 are docked to form the target compound.
  • the compound of the present invention which is substituted with a methyl group at the 5-position, can be obtained by the above-mentioned compound III, with methyl iodide in the presence of potassium carbonate in DMF and stirring at room temperature for 4 h.
  • the compound V having an acetyl group substituted at the 5-position of the target compound can be obtained by reacting the above compound III with acetyl chloride in the presence of triethylamine in CH 2 C 1 2 at room temperature for 2 h.
  • the compound of the present invention can also be subjected to the synthesis of the target compound III by the method of Scheme 3:
  • the above preparation method may further comprise reacting a compound of the formula I with a mineral acid or an organic acid in a solvent to cool a salt of the compound of the formula I.
  • Compounds 1, 4 and EDC.HC1 can be purchased commercially.
  • the in vitro inhibition assay showed that most of the compounds of the present invention have a strong inhibitory effect on c-Met (Example 38), Compounds 1-17, 1-18, 1-24, 1-27, 1-28. , 1-29 and B 1-30, the inhibitory activity against c-Met was comparable to or better than the positive control drug Cabozantinib (XL184, Phase III clinical drug). Among them, compounds 1-17, 1-18 The c-Met inhibitory activities of 1-29 and 1-30 were significantly better than those of the positive control drug XL184, especially compound 1-29, which was 6 times more active than the positive control drug XL184.
  • the in vitro anti-tumor cell proliferation activity test showed that the compound of the present invention had strong differentiation and anti-proliferative activity against various tumor cells as compared with the positive control drug XL184 (Example 40). Some compounds have better anti-tumor cell proliferation activity than the positive control drug XL184. Among them, compounds 1-17, 1-18, 1-24, 1-29 and 1-30, for human thyroid cancer cell line SW579, human renal clear cell carcinoma skin metastasis cell line Caki-1, human breast cancer cell line MDA -MB-435S, human lung cancer cell line A549 and human pancreatic cancer cell line PANC-1 all have higher inhibitory activity, which is superior to positive control drug XL184.
  • Compound 1-17, IC 5Q for human kidney cancer cell line Caki-1, human breast cancer cell line MDA-MB-435S and human pancreatic cancer cell line PANC-1 were 2.54 ⁇ , 2.64 ⁇ and 2.67 ⁇ , respectively; Compounds 1-30 were 1.45 ⁇ , 1.57 ⁇ and 2.01 ⁇ , respectively; Compounds 1-29 reached 1.04 ⁇ , 1.20 ⁇ and 1.87 ⁇ , respectively, which was 2 to 6 times higher than the positive control drug XL184, with a broad spectrum. Efficient features.
  • the compound of the present invention has a good inhibitory activity against c-Met enzyme, and has a good inhibitory effect on various tumor cells of the human body, and has a broad spectrum and high efficiency.
  • the compound of the present invention has multi-target inhibitory activity and has good inhibitory activity against c-Met, VEGFR-2 and EGFR, and is important for overcoming tumor cell resistance.
  • the compound of the present invention has a weak inhibitory effect on normal cells while exhibiting a good selective inhibitory activity, and has a good anti-tumor clinical effect. Application prospects.
  • the compound of the present invention when used as an antitumor drug, it should have stronger antitumor activity and less toxic side effects, and is more easily used as an antitumor drug.
  • the compounds of the present invention can be administered to mammals (including humans) in need of tumor treatment by oral, injection or the like in the form of a composition; among them, oral administration is preferred.
  • the dosage is 0.0001 mg/kg to 200 mg/kg body weight per day. The optimal dose will depend on the individual, usually at the beginning of the dose, and then gradually increase the amount.
  • the composition comprises a therapeutically effective amount of a compound of formula (I) and a pharmaceutically acceptable carrier;
  • the carrier refers to a conventional carrier in the pharmaceutical field, for example: a diluent, an excipient such as water, etc.; a binder such as a cellulose derivative, gelatin, polyvinylpyrrolidone, etc.; a filler such as starch; a cracking agent such as calcium carbonate; Sodium bicarbonate; in addition, other adjuvants such as flavoring agents and sweeteners may also be added to the composition.
  • composition of the present invention can be prepared into a conventional solid preparation such as a tablet, a capsule or the like for oral administration; it can also be prepared into an injection preparation or the like for injection.
  • compositions of the present invention can be prepared by conventional methods in the pharmaceutical art, wherein the compound of the active ingredient I structure is present in an amount of from 0.1% to 99.5% by weight based on the total weight of the composition.
  • the invention combines the structure of the benzopyridinium azide structure with the c-Met pharmacodynamic side chain to form a series of benzopyridinium azide structural compounds.
  • the invention is characterized in that the ATP-binding site domain of the c-Met enzyme is diversified on the basis of retaining the dicarbonyl pharmacodynamic side chain of the linear small molecule c-Met inhibitor to increase the compound and The specificity and affinity of the c-Met target enzyme expands the structural type of such inhibitor molecules while modulating the physicochemical properties of the inhibitor molecules to discover new leader structures.
  • the compounds of the present invention have been subjected to a series of studies on in vitro inhibition and anti-tumor cell proliferation assays, and have found that such compounds have strong in vitro inhibitory activities and anti-tumor cell activities.
  • the new structural compound after structural transformation of this binding site, the new structural compound exhibits specificity and selectivity for tumor cells and normal cells while having strong enzyme inhibitory activity, and has significant scientific progress and in-depth. Research and development value.
  • the invention has the advantages that the compound has multi-target inhibitory activity on the tumor cell signal transduction pathway, and has good inhibitory effects on the target enzymes c-Met, VEGFR-2 and EGFR, and shows various tumor cells. Good inhibitory activity and anti-tumor cell resistance prospects, suitable for use as a broad-spectrum, high-efficiency and low-toxic anti-tumor drug.
  • An advantage of the present invention is that the compound and its medicinal preparation have a good therapeutic effect for treating diseases caused by abnormal gene expression, such as tumors, endocrine disorders, immune system diseases, genetic diseases and nervous system diseases.
  • the compound of the present invention has stronger antitumor activity, selectivity and less toxic side effects when used as an antitumor drug, and is more easily used as an antitumor drug, which is equivalent to the prior art.
  • the invention has novel, creative and substantial scientific advances. Specific way
  • the target compound 1 can be prepared by using 2,4-dichloro-6-methylpyridin-3-amine and N-benzylaniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6. -7, the yield was 26.9%.
  • the target compound 1-10 can be prepared by using 4,6-dichloro-5-methylpyridin-3-amine and aniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6. The rate is 27.4%.
  • the target compound 1-11 can be prepared by using 4,6-dichloro-5-methoxypyridin-3-amine and aniline as raw materials, followed by Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6. The yield was 24.1%.
  • the title compound 1-12 can be prepared by using 4,6-dichloro-5-fluoropyridin-3-amine and aniline as starting materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6. 19.7%.
  • the target compound 1- 1 (0.10 g, 0.2 mmol) and methyl iodide (0.06 g, 0.4 mmol) were dissolved in 5 mL of DMF, and K 2 C0 3 (0.06 g, 0.4 mmol) was added thereto, and the reaction was stirred at room temperature. 4 h. After completion of the reaction, the mixture was filtered, and the solvent was evaporated to dryness. After suction filtration, the obtained solid was purified by EtOAc EtOAc EtOAc (EtOAc)
  • Example 3 4,6-dichloropyridin-3-amine and 4-methoxyaniline as raw materials, followed by Example 3, Example 4, In Example 5 and Example 6, the title compound 1-16 was obtained in a yield of 32.7%.
  • the target compound 1- can be prepared by using 4,6-dichloropyridin-3-amine and 3,4-dimethoxyaniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6. 17, the yield was 34.1%.
  • Example 4 4,6-dichloropyridin-3-amine and 4-methoxy-3-(3-morpholinepropoxy)aniline were used as raw materials, followed by Example 3, Example 4, Example 5 and Examples. 6, the target compound 1- 18 can be prepared in a yield of 24.6%.
  • target compound 1-19 N-(4-fluorophenyl)-indole ⁇ [(9-methyl-11H-benzopyridine [3,2-b][l,4]diazepin-4-yl)oxy]phenyl ⁇
  • the target compound 1-19 can be prepared by using 4,6-dichloropyridin-3-amine and 4-methylaniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6. 29.4%.
  • the target compound 1-20 can be prepared by using 4,6-dichloropyridin-3-amine and 4-fluoroaniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6 in a yield of 36.2. %.
  • the target compound 1-21 can be prepared by using 4,6-dichloropyridin-3-amine and 3-cyanoaniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6, yield. 33.8 %.
  • the target compound 1-22 can be prepared by using 4,6-dichloropyridin-3-amine and 4-nitroaniline as raw materials according to Example 3, Example 4, Example 5 and Example 6, yield. 27.5 %.
  • the target compound 1-22 (0.1 g, 0.18 mmol) was dissolved in 3 mL of methanol, 10% Pd-C (5 mg) was added, and the reaction was stirred under hydrogen atmosphere at room temperature. 6 ho After completion of the reaction, diatomaceous earth Filtration and concentration of the filtrate gave a pale yellow solid (yield: 86).
  • Example 3 4,6-dichloropyridin-3-amine and 3-[(3-dimethylamino)propoxy]-4-methoxyaniline were used as raw materials, followed by Example 3, Example 4, and Example 5
  • Example 3 4,6-dichloropyridin-3-amine and 3-[(3-dimethylamino)propoxy]-4-methoxyaniline were used as raw materials, followed by Example 3, Example 4, and Example 5
  • Example 3 Example 4
  • Example 5 The title compound 1-24 was obtained in the same manner as in Example 6, yield 20.1%.
  • Example 4 4,6-dichloropyridin-3-amine and 3-(lH-imidazol-5-yl)-4-methoxyaniline were used as raw materials, followed by Example 3, Example 4, Example 5 and Examples. 6, the target compound 1-25 was prepared in a yield of 19.4%.
  • the target compound 1-27 can be prepared by using 4,6-dichloropyridin-3-amine and 3,4-dimethoxyaniline as starting materials according to Example 3, Example 11 and Example 6, yield. 35.2%.
  • Example 3 4,6-dichloropyridin-3-amine and 4-methoxy-3-(3-morpholinepropoxy)aniline are used as raw materials, followed by Example 3, Example 11 and Example 6, The title compound 1-28 was prepared in a yield of 28.4%.
  • the title compound 1-30 was obtained according to Example 10, yield 87.5%.
  • the above 1-30 (0.25 g) was dissolved in hot ethanol (5 mL), and a solution of methanesulfonic acid in ethanol was added thereto, and the mixture was heated under reflux for 30 min, then concentrated and evaporated to dryness. , that is, a mesylate compound of 1-30.
  • the inhibitory activity of the compound on c-Met was tested using a MET enzyme (Cat: 14-526) kit from Millipore. The experimental procedure was carried out according to the kit instructions. First, the percentage of inhibition of c-Met enzyme by the compound at 10 ⁇ and ⁇ ⁇ was tested. The compound with better enzyme inhibitory activity was selected to continue the inhibitory IC 5Q test. The experimental results are shown in Table 2.
  • the compounds of the present invention which were randomly selected for testing have strong inhibitory activity against c-Met enzyme, such as compounds 1-17, 1-18, 1-24, 1-27, 1-28, 1 Both -29 and 1-30, the inhibitory activity against c-Met was comparable to or superior to the positive control drug Cabozantinib (XL184, Phase III clinical drug).
  • compound 1-29 was 6 times more active than the positive control XL184.
  • VEGFR2 and EGFR Some compounds with better inhibitory activity against c-Met in vitro were selected for their enzyme inhibitory activity against VEGFR2 and EGFR in vitro.
  • the anti-enzyme IC 5 o test of VEGFR2 and EGFR was performed using the VEGFR2 enzyme (Cat: K2643) kit from Sigma and the EGFR (Cat: PV3872) kit from Invitrogen, respectively.
  • the experimental procedure was carried out according to the kit instructions. The experimental results are shown in Table 3.
  • the compound of the present invention tested showed good inhibitory activity against VEGFR2 and EGFR while inhibiting c-Met, and its inhibitory activity was comparable to or superior to that of the positive control drug XL184.
  • the compounds 1-17, 1-18, 1-29 and 1-30 had better inhibitory activities against the three target enzymes c-Met, VEGFR2 and EGFR than the positive control drug XL184.
  • the compounds of the present invention were assayed for SW579 (human thyroid cancer cell line), Caki-1 (human kidney clear cell carcinoma skin metastasis cell line), MDA-MB-435S (human breast cancer cell line), A549 (human lung cancer cell line)
  • SW579 human thyroid cancer cell line
  • Caki-1 human kidney clear cell carcinoma skin metastasis cell line
  • MDA-MB-435S human breast cancer cell line
  • A549 human lung cancer cell line
  • B PANC-1 human pancreatic cancer cell line
  • its IC 5Q value was measured by CCK-8 method (Cat# CK04-13, Dojindo)
  • XL184 was selected as a control drug.
  • Table 4 (unit: ⁇ ):
  • the compound of the present invention showed good anti-tumor cell proliferation activity in vitro, and some compounds were superior to the positive control drug XL184 in anti-tumor cell proliferation activity.
  • compounds 1-17, 1-18, 1-24, 1-29 and 1-30 for human thyroid cancer cell line SW579, human renal clear cell carcinoma skin metastasis cell line Caki-1, human breast cancer cell line MDA -MB-435S, human lung cancer cell line A549 and human pancreatic cancer cell line PANC-1 all have higher inhibitory activity, which is superior to positive control drug XL184.
  • compounds 1- 17, IC 5Q for human kidney cancer cell line Caki-1, human breast cancer cell line MDA-MB-435S and human pancreatic cancer cell line PANC-1 were 2.54 ⁇ , 2.64 ⁇ and 2.67 ⁇ , respectively.
  • Compounds 1-30 were 1.45 ⁇ , 1.57 ⁇ and 2.01 ⁇ , respectively, and Compounds 1-29 reached 1.04 ⁇ , 1.20 ⁇ and 1.87 ⁇ , respectively, which was 2 to 6 times higher than the positive control drug XL184.
  • the compound of the present invention tested was less active against normal cells than the control drug XL184, and had lower toxic side effects, indicating that the benzopyridinium compound of the present invention is tumor-targeted.
  • Cells and normal cells have better selectivity in inhibiting proliferation, indicating that they will have lower toxic side effects when used as antitumor drugs, and are easily used as tumor drugs.
  • Acute toxicity test The method reported by Zhang Juntian, "Modern Pharmacological Experimental Method” (Beijing Medical University, China Union Medical University, United Press, 1998), preliminary screening, using Bliss method statistics ("Practical pharmaceutical preparations” Technology, People's Health Publishing House, published in 1999), LD 5 Q for single-dose of Compounds 1-17, 1-18, 1-29 and 1-30 mice were 1.87g/kg and 1.98g/kg, respectively. 2.24g/kg and 2.19g/kg.
  • Tablet any compound selected from I-1 to 1-30 or a salt thereof lOOmg
  • Preparation method The active ingredient 1-1 to 1-30 or a salt thereof is mixed with sucrose and corn starch, moistened with water, stirred uniformly, dried, pulverized and sieved, added with calcium stearate, uniformly mixed, and tableted. Each tablet weighs 290 mg and has an active ingredient content of 100 mg.
  • Preparation method Dissolving any compound of active ingredient 1- 1 to 1-30 or a salt thereof in water for injection, uniformly mixing, filtering, and dissolving the obtained solution in an ampoule under sterile conditions, 95 mg per bottle, The active ingredient content is 15 mg/bottle.

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Abstract

提供了苯并吡啶氮杂卓类化合物、含有该化合物的组合物及该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。所述苯并吡啶氮杂卓类化合物为式（I）所示的化合物或其药学上可接受的盐，其具有更强的抗肿瘤活性、选择性和更小的毒副作用。

Description

苯并吡啶氮杂卓类化合物及其应用 技术领域
本发明涉及苯并吡啶氮杂卓类化合物、 其制备方法及该类化合物通过阻断 HGF/c-Met信号通路在防治肿瘤等相关疾病中的应用。 背景技术
原发性肿瘤局部侵袭并转移至其它组织中， 是影响肿瘤患者生存的最主要因素之 一， 绝大多数癌症患者死亡是由于肿瘤转移引起的， 而该进程极大地依赖于肿瘤细胞的 运动性及细胞增殖。
月干细胞生长因子 (hepatocyte growth factor, HGF), 也称离散因子 ( Scatter Factor, SF)， 是一种多功能的细胞因子， 具有促进肝细胞、 上皮细胞、 内皮细胞、 造血细胞等 多种类型细胞的生长、 迁移和形态发生的作用。 c-Met跨膜蛋白是一种由 c-met原癌基 因编码的蛋白产物，为 HGF的高亲和性受体。当 HGF与其受体 c-Met结合后，导致 c-Met 酪氨酸激酶发生自身磷酸化， 从而激活 c-Met酪氨酸激酶活性， 进一步活化细胞内多种 不同的下游信号分子， 诱导细胞发生一系列生物学效应， 如细胞分散、 运动、 增殖、 侵 袭、 迁移、 以及最终转移及血管生成等 (Bottaro等， Science, 1991 , 251， 802-804)。
大量研究已表明， HGF/c-Met信号传递在恶性肿瘤的发生、 发展及继发的转移中发 挥着重要的作用， 同时与患者的不良预后密切相关 （Sattler等， Curr Oncol Rep， 2007 , 9， 102-108； Mazzone等， FASEB J， 2006， 20， 1611—1621 ; Trusolino等， Nature Rev, Cancer 2002, 2， 289-300)。 c-Met的持续激活将破坏肿瘤细胞间的粘附， 促进细胞运动 及肿瘤新生血管的生成， 使肿瘤细胞易于进入血液循环并获得侵袭转移的能力。 在多种 癌症中， c-Met和 HGF相对于周围组织呈过度表达， 如甲状腺癌、乳腺癌、肺癌、 胃癌、 结肠癌、 胰腺癌、 前列腺癌、 肾癌、 肝癌、 卵巢癌、 和脑胶质瘤等（Birchmeier等， Nat Rev Mol Cell Biol, 2003， 4， 915-925； Otsuka等， Cancer Res, 1998， 58， 5157-5167； Parr等， Clin Cancer Res， 2004， 10， 202-211 )。 另有研究显示， MET基因扩增与 20% 的表皮生长因子抑制剂 （EGFR-TKIs ) 获得性耐药密切相关（Engelman等， Science , 2007， 316, 1039-1043 因而， 靶向作用于 c-Met的小分子激酶抑制剂对于上述癌症的 治疗具有重要的研究意义。
目前， 已有多个 c-Met小分子抑制剂处于临床前及临床研究阶段。 其中， 辉瑞公司 开发的 Crizotinib (XALKORI) 已于 2011年 8月经 FDA批准上市， 用于治疗表达异常 的间变性淋巴瘤激酶（ALK)基因的晚期非小细胞肺癌（NSCLC)患者， 显示了良好的 治疗效果。 此标志着 c-Met作为新型抗肿瘤靶标已得到确证， 同时预示着 c-Met抑制剂 具有广阔的开发及治疗前景。
临床在研的 c-Met抑制剂以其与 c-Met激酶结构域的结合模式不同，可分为两大类:
( 1 ) U型小分子抑制剂： 如 Crizotinib和 MK-2461；
(2) 直线型小分子抑制剂： 如 Cabozantinib (XL184 ) 和 Foretinib (XL880)。 其中， 第一类 U型小分子抑制剂作用于 c-Met激酶口袋起始端的 ATP-结合位点， 环绕氨基酸残基 Metl211， 主要为 c-Met的高选择性抑制剂； 第二类直线型小分子抑制 剂是近几年开发的新型 c-Met抑制剂，通过伸展的构象作用于从 ATP-结合位点、激酶连 接链直至 C端螺旋区域附近的深的 Ilel l45疏水口袋， 主要为多靶点抑制剂。 鉴于肿瘤 复杂的发病机制， 单一抑制某一信号转导通路易使肿瘤通过逃避机制产生耐药。 已有研 究表明， c-Met活性位点附近的某些突变会导致第一类小分子抑制剂产生耐药性 (Berthou 等， Oncogene 2004, 23， 5387—5393; Buchanan等， Mol. Cancer Ther. 2009, 8， 3181—3190)。 而第二类直线型小分子抑制剂不仅作用于 c-Met活性位点的起始端， 有助于防止耐药性 生成， 且多靶点同时抑制会带来更好的抑瘤效果， 故此类抗肿瘤药物将会达到更好的治 疗效果。 其中， 具有代表性的两个药物为 Elixis公司分别与百时美施贵宝和葛兰素史克 联合开发的 Cabozantinib (临床 III期） 和 Foretinib (临床 II期）。 因此， 设计、 合成新 型 c-Met抑制剂， 尤其是多靶点抑制剂有助于发现抗肿瘤活性强、 毒副作用低且能抑制 肿瘤细胞生长转移的新型抗恶性肿瘤药物， 同时也为 c-Met抑制剂的结构多样性研究及 与靶酶的结合模式研究提供科学的指导意义。
直线型小分子 c-Met抑制剂由芳香环、 芳环连接区和二羰基侧链三部分构成， 分别 作用于 c-Met酶的 ATP-结合位点、连接区和 C端螺旋区域附近的深的 Ilel l45疏水口袋。 其中， 二羰基侧链中的两个羰基氧原子， 能与疏水口袋中的氨基酸残基形成两个氢键， 是这类化合物具有 c-Met抑制活性的基本药效基团。 而作用于 ATP-结合位点的芳香环 具有调节分子理化性质、 调节抑制剂分子与 c-Met靶酶的亲和力和特异性， 并最终改善 其抑酶活性的作用。
为了发现与进入临床阶段的药物活性相当或更优的化合物， 扩充此类化合物的结构 类型， 研究人员对该类化合物进行了大量的研究， 其中保持三元碳环二酰胺侧链这一药 效片段和连接片段不变， 将芳香环母核进行结构优化， 以发现活性更强、 选择性和安全 性更高的衍生物为此类抑制剂的主要研究方向。 同时， 在提高或保留抗肿瘤药效活性的 基础上， 减少对人体正常组织或细胞的影响， 也是开发此类抗肿瘤药物中非常重要的课 题。
寻求较现有进入临床阶段药物更具有开发价值的新型抗肿瘤活性分子， 是本领域的 一个重要的研究课题， 亦是人们所十分期望的。 发明内容
本发明的目的是公开一种苯并吡啶氮杂卓类化合物及其作为抗肿瘤药物的应用， 以 发现具有新结构类型的 c-Met抑制剂类多靶点抗肿瘤化合物， 满足临床应用的需要。
本发明所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 为具有如式 （I ) 所示的化合物或其药学 上可接受的盐：
Figure imgf000004_0001
其巾：
X选自 H、 CN、 甲基、 甲氧基或氟；
Ri选自 H或甲基；
R2和 R3各自独立地选自 Η、 0 、 d-5烷基、 氨基、 NHR6、 卤素、 氰基、 硝基、 取代氨基、 苯基、 杂环基、 取代苯基或取代杂环基；
其巾：
所述的 d— 5烷基优选甲基、 乙基或异丙基；
取代氨基优选 Cw烷基氨基、 吗啡啉 -N-丙基氨基、哌啶 -4-甲基氨基或哌嗪 -1-丙基； 杂环基优选吗啡啉 - 1-基、 哌啶 -Φ基或哌嗪 -1-基；
取代苯基或取代杂环基为苯基或杂环基含有 1~4个取代基， 取代基优选羟基、 甲氧 基、 甲基或氨基；
1 6选自氢、 C 直链或支链烷基、 芳基、 芳烷基、 杂环基、 杂环烷基、 取代的 d— 5 烷基、 取代的芳基、 取代的芳烷基、 取代的杂环基或取代的杂环烷基；
其巾：
所述的 支链或支链烷基优选甲基、 乙基、 异丙基；
所述芳基优选苯基， 所述芳烷基优选苄基、 3,4-二甲氧基苄基或 3-(3,4-二甲氧基酚 氧基）丙基；
杂环基优选咪唑基、 噻唑基或吡啶基；
杂环烷基优选吗啡啉 丙基、 哌啶 -4-甲基、 哌嗪 -1-丙基、 N-甲基哌嗪 -1-丙基或吡 咯烷 丙基； 所述取代的 烷基优选羟甲基、 氨基甲基、 3- (羟基)丙基或 3- (二甲氨基)丙基； 所述取代的芳基优选 3,4-二甲氧基苯基、 4-甲基苯基、 4-氨基苯基或 4-氟苯基； 所述取代的杂环基或取代的杂环烷基为杂环基或杂环烷基中含有 1~4个取代基，取 代基优选羟基、 甲氧基、 甲基或氨基；
Y选自 NH， NCH3， 0及 S ;
R4分两种情况：
当七元环为 C=N时， 无 R4;
当七元环为 C-N时， R4选自 H、 d— 4烷基或 d— 4酰基， 其中： 所述的 d— 4烷基优选 甲基， d_4酰基优选乙酰基；
R5为卤素， 优选 F。
为方便理解本发明， 从式 （I ) 结构的化合物中优选了下述具体的化合物， 但本发 明的苯并吡啶氮杂卓类化合物不限于下述化合物：
I-l N-{4-[(llH-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-2 N-[4- (苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 -Φ基氧基)苯基] -N-(4-氟苯基)环丙烷 -U-二 酰胺、
1-3 N-[4- (苯并吡啶 [2,3-b][l,4] 硫氮杂卓 -4-基氧基)苯基] -N-(4-氟苯基)环丙烷 -U-二 酰胺、
1-4 N-{4-[(6,ll-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
I-5 N-{4-[(5, 二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 -4-基)氧基]苯基 N-(4-氟苯基)环丙 浣 - U-二酰胺、
I-6 N-{4-[(5, 二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]硫氮杂卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙 浣 - U-二酰胺、
1-7 N-(4-氟苯基 )-{4-[(2-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙 浣 - U-二酰胺、
1-8 N-(4-氟苯基) -Λ Φ[(2-甲基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] 苯基 }-环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-9 N- [(13-氰基 - 1H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环 丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-10 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(3-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、 I-ll N-(4-氟苯基) -N-{4-[(3-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-12 N- [(3-氟 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环 丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-13 N-(4-氟苯基) -N-{4-[(ll-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
I-14 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(5-甲基 -6,11-5H-二氢苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] 苯基 }环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-15 N-{4-[(5-乙酰基 -6,11 -二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -Φ基）氧基]苯 基} (4-氟苯基)-环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-16 N-(4-氟苯基) -N-{4-[(8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-17 N- [(8,9-二甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟 苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-18 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[8-甲氧基 -9-(3-吗啡啉丙氧基) - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二 氮卓 -4-基氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-19 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(9-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-20 N-{4-[(8-氟 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环 丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-21 N-{4-[(9-氰基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-22 N-(4-氟苯基) -N-{4-[(8-硝基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-23 N-{4-[(8-氨基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-24 N-{4-[(9-(3-二甲氨基丙氧基) -8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基） 氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-25 N-{4-[(9-( lH-咪唑 -5-基) -8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] 苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-26 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(8-甲氧基 -9- (噻吩 -2-基氧基) -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮 卓 -4-基氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺、 1-27 N-{4-[(8,9-二甲氧基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-28 N-(4-氟苯基） -Λ Φ [8-甲氧基 -9-(3-吗啡啉丙氧基 )-6,11-二氢 -5H-苯并吡啶
[3,2-b][l,4]二氮卓 -Φ基氧基]苯基 }环丙烷 -U-二酰胺、
1-29 N-{4-[(8,9-二甲氧基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基）氧基 ]-3-氟苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-30 N- [(8,9-二甲氧基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] -3-氟 苯基 } (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺
所述的式（I)化合物或 1-1至 1-30任一化合物的盐， 为盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、 乙酸盐、 乳酸盐、 酒石酸盐、 鞣酸盐、 枸橼酸盐、 三氟醋酸盐、 苹果酸盐、 马来酸盐、 琥珀酸盐、 对甲苯磺酸或甲磺酸盐。
上述化合物的结构式见表 1。
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Figure imgf000009_0001
8
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6
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II
0ZN3/X3d 請 Ϊ0Ζ OAV 
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将环丙烷 - 1,1-二羧酸溶于无水四氢呋喃中，氮气保护下，向其中滴入三乙胺，于 o°c 搅拌反应 0.5小时。 接着， 加入氯化亚砜， 同样条件下搅拌反应 0.5小时， 得到环丙烷 - 1-羧酸 -1-酰氯活性形式，最后加入 4-氟苯胺的四氢呋喃溶液， 0°C下搅拌反应 0.5小时， 得到中间体 2。 中间体 2在 EDC.HC1催化下， 于室温下在 DMF溶液中与 4-氨基苯酚或 4-氨基 -2-氟苯酚反应， 即得到 N-(4-氟苯基 ) (4-羟基苯基)环丙浣 -U-二酰胺 （中间体 3- 1 ) 或 N-(4-氟苯基 ) (3-氟 -4-羟基苯基)环丙浣 -U-二酰胺 （中间体 3-2)。
本发明的化合物可采用方案 2的方法进行目标化合物 II、 III、 IV和 V的合成：
Figure imgf000014_0001
在中间体 5的合成中，当 Y为 0时，中间体 4与取代的苯酚以 K2C03为碱，于 60°C 在 DMF溶液中搅拌反应 8 h， 得到中间体 5; 当 Y为 NH时， 中间体 4与取代的苯胺在 浓盐酸催化下， 以乙醇和水 （V/V， 1/6) 为溶剂， 回流搅拌反应过夜， 得到中间体 5。 将中间体 5与甲酸乙酯和乙酸酐的混合溶液反应， 得到甲酰化产物 6。 该中间体在 三氯氧磷和多聚磷酸中回流， 即得到中间体 7。 最后， 中间体 7和中间体 3对接生成目 标化合物。 参考文献 Tetrahedron Letters, 2006, 47, 5045-5048, 中间体 7与中间体 3在 Cu催化下，发生 Ullmann反应，制得七元环为 C-N双键的目标化合物 II。七元环为 C-N 单键的目标化合物 III可通过上述化合物 II， 在四氢呋喃溶液中， 经硼氢化钠还原得到。
目标化合物 5-位为甲基取代的化合物 IV可通过上述化合物 III，与碘甲烷在碳酸钾存 在下， 于 DMF中， 室温搅拌反应 4 h制得。
目标化合物 5-位为乙酰基取代的化合物 V可通过上述化合物 III，与乙酰氯在三乙胺 存在下， 于 CH2C12中， 室温搅拌反应 2 h制得。
本发明的化合物也可采用方案 3的方法进行目标化合物 III的合成：
Figure imgf000015_0001
中间体 5与多聚甲醛在三氟乙酸和无水 MgS04存在下， 于二氯甲烷溶液中 40°C搅 拌反应过夜， 经 Mannich关环得到关键中间体 8。 中间体 8与中间体 3在 Cu催化下， 发生 Ullmann反应， 制得目标化合物 III。
上述制备方法还可以进一步包括式 I结构的化合物与无机酸、有机酸在溶剂中反应， 冷却析出式 I结构的化合物的盐。
上述反应通法中的 Ri、 R2、 R3、 R4、 R5 X、 Y同上所述；
化合物 1、 4和 EDC.HC1等可以通过商业渠道购买。
体外抑酶试验表明， 本发明所述化合物， 大部分对 c-Met具有较强的抑制作用 （实 施例 38 )， 化合物 1-17、 1-18、 1-24、 1-27、 1-28、 1-29禾 B 1-30， 对 c-Met的抑制活性均与 阳性对照药 Cabozantinib (XL184, III期临床药）相当或更优。 其中， 化合物 1-17、 1-18 、 1-29和 1-30对 c-Met抑酶活性均显著优于阳性对照药 XL184的抑制活性， 尤其是化 合物 1-29， 其活性为阳性对照药 XL184的 6倍。
体外抑酶实验表明， 本发明所述化合物， 对 VEGFR2和 EGFR也显示了良好抑制 活性 （实施例 39)， 如化合物 1-17、 1- 18、 1-29和 1-30， 对 VEGFR2和 EGFR的抑制活 性均优于阳性对照药 XL184。
体外抗肿瘤细胞增殖活性试验表明， 本发明所述化合物， 与阳性对照药 XL184 相 比， 对多种肿瘤细胞均具有较强的诱导分化和抗增殖活性 （实施例 40)。 部分化合物抗 肿瘤细胞增殖活性优于阳性对照药 XL184。其中， 化合物 1-17、 1-18、 1-24、 1-29和 1-30， 对人甲状腺癌细胞株 SW579、人肾透明细胞癌皮肤转移细胞株 Caki-1、人乳腺癌细胞株 MDA-MB-435S、人肺癌细胞株 A549和人胰腺癌细胞株 PANC-1均具有较高的抑制活性， 优于阳性对照药 XL184。 尤其是化合物 1-17， 对人肾癌细胞株 Caki- 1、 人乳腺癌细胞株 MDA-MB-435S和人胰腺癌细胞株 PANC-1的 IC5Q分别为 2.54 μΜ、2.64 μΜ和 2.67 μΜ; 化合物 1-30分别为 1.45 μΜ、 1.57 μΜ和 2.01 μΜ;化合物 1-29分别达到了 1.04 μΜ、 1.20 μΜ禾 Β 1.87 μΜ， 与阳性对照药 XL184相比， 提高了 2~6倍， 具有广谱高效的特点。
药理试验表明， 本发明所述化合物， 相对于对照药物 XL184, 对正常细胞的抑制活 性很弱， 说明具有更低的毒副作用 （实施例 41 )， 提示本发明的苯并吡啶氮杂卓类化合 物对肿瘤细胞和正常细胞的抑制增殖方面具有更好的选择性， 预示其作为抗肿瘤药物使 用时将具有更低的毒副作用。
药理实验表明， 本发明所述化合物具有以下有益效果：
1 ) 本发明所述化合物具有良好的对 c-Met酶的抑制活性， 并且对人体多种肿瘤细 胞均有很好的抑制效果， 具有广谱高效的特点。
2) 本发明所述化合物具有多靶点抑制活性， 对 c-Met、 VEGFR-2和 EGFR均具有 良好的抑制活性， 对于克服肿瘤细胞耐药性具有重要意义。
3)与临床期的阳性对照药物相比， 本发明所述化合物在有效抑制肿瘤细胞的同时， 对正常细胞的抑制作用很弱， 表现出较好的选择抑制活性， 具有很好的抗肿瘤临床应用 前景。
综上所述， 本发明所述的化合物作为抗肿瘤药物应用时， 应具有更强的抗肿瘤活 性和更小的毒副作用， 更易于作为抗肿瘤药物使用。
本发明所述化合物可以以组合物的形式通过口服、 注射等途径施用于需要肿瘤治 疗的哺乳动物 （包括人）； 其中尤以口服方式最佳。 用药剂量为每日 0.0001mg/kg〜 200mg/kg体重。 最佳剂量视个体而定， 通常开始时剂量较小， 然后逐渐增加用量。
所述组合物包括治疗有效量的式 （I ) 所示的化合物和药学上可接受的载体； 所述的载体是指药学领域常规的载体， 例如： 稀释剂、 赋形剂如水等； 粘合剂如 纤维素衍生物、 明胶、 聚乙烯吡咯烷酮等； 填充剂如淀粉等； 崩裂剂如碳酸钙、 碳酸氢 钠； 另外， 还可以在组合物中加入其他辅助剂如香味剂和甜味剂。
本发明的组合物可以制备成常规的固体制剂， 如片剂、 胶囊等， 用于口服； 也可 以将其制备成注射剂等剂型用于注射。
本发明的组合物的各种剂型可以采用药学领域常规的方法进行制备， 其中活性成 分式 I结构的化合物的含量为组合物重量的 0.1%〜99.5% (重量比）。
本发明将苯并吡啶氮杂卓结构与 c-Met药效侧链进行有效的结构融合， 合成了一 系列苯并吡啶氮杂卓结构化合物。 本发明的特点是在保留直线型小分子 c-Met抑制剂的 二羰基药效侧链基础上， 对其与 c-Met酶的 ATP-结合位点结构域进行多样化改造， 以增 加化合物与 c-Met靶酶的特异性和亲和力， 扩充此类抑制剂分子的结构类型， 同时调节 抑制剂分子的理化性质， 以发现新的先导结构。
本发明化合物在进行一系列体外抑酶及抗肿瘤细胞增殖试验研究后发现， 此类化 合物具有较强的体外抑酶活性和抗肿瘤细胞活性。 此外， 对这一结合位点进行结构变换 后， 使本新结构化合物在具有较强酶抑制活性的同时， 对肿瘤细胞和正常细胞亦显示出 特异性和选择性， 具有显著的科学进步和深入的研究开发价值。
本发明优点在于， 所述化合物对肿瘤细胞信号转导通路具有多靶点抑制活性， 对靶 酶 c-Met、 VEGFR-2及 EGFR均具有较好的抑制效果， 对多种肿瘤细胞均显示了良好的 抑制活性及具有抗肿瘤细胞耐药性的前景， 适于作为广谱、 高效和低毒抗肿瘤药物的使 用。
本发明优点在于， 所述化合物及其药用制剂对于治疗基因表达异常而引起的疾病， 如： 肿瘤、 内分泌紊乱、 免疫系统疾病、 遗传病和神经系统疾病有很好的疗效。
综上所述， 本发明所述的化合物作为抗肿瘤药物应用时， 具有更强的抗肿瘤活性、 选择性和更小的毒副作用， 更易于作为抗肿瘤药物使用， 相当于现有技术， 本发明具有 新颖性、 创造性和实质的科学进步。 具体 施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述， 但发明的实施方式不限于此。
实施例 1
1- [(4-氟苯基)酰胺基]环丙烷羧酸 （中间体 2) 的合成
取 1.3-环丙烷二羧酸（13.01 g, 0.10 mol)溶于 THF 120 mL中， 氮气保护下， 于 0°C 向其中缓慢滴加三乙胺（10.12 g, 0.10 mol),搅拌 15 min。向上述体系中缓慢滴加 SOC12 ( 9.95 g, 0.10 mol), 维持此温度， 继续搅拌 30 min。 最后， 向反应液中滴加溶有 4-氟苯 胺 （12.22 g, 0.11 mol) 的 THF溶液 60 mL， 冰浴条件下反应至完全。 反应结束后， 用 10%氢氧化钠溶液调节反应液至 pH 9.0， 搅拌 lOmin后， 用 1 N HC1调体系 pH 5.0， 析 出固体， 搅拌 15 min后过滤。 水洗滤饼至中性， 真空干燥， 得到白色固体 14.71 g， 收 率 65.9%。 产品无需纯化， 可直接进行下一步反应。
ESI-MS [M+H]+: m/z 224.5
JH NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 13.05 (br， 1H， COOH), 10.58 (s, 1H， CONH), 7.12-7.67 (m, 4H, Ar-H), 1.47 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 2
N-(4-氟苯基 )-N-(4-羟基苯基)环丙浣 -U-二酰胺（中间体 3-1 ) 的合成
取 4-氨基苯酚 （0.59 g, 5.38 mmol) 和中间体 2 ( 1 g, 4.48 mmol) 溶于 DMF 15 mL 中， 向其中加入 EDC.HC1 ( 1.03 g, 5.38 mmol) , 室温下搅拌反应 3 h。 反应结束后， 向反应液中加水， 析出白色固体， 加入 1 N HC1调节 pH至 4.0~5.0， 搅拌 15 min后， 过滤， 水洗涤滤饼至中性， 真空干燥， 得到白色固体 1.23 g， 收率 87.9%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 315.4
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 10.17 (s, 1H, CONH), 9.73 (s, 1H, CONH), 9.23 (s, 1H, OH), 6.68-7.83 (m, 8H, Ar-H), 1.48 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 3
N2-苄基 -4-氯 -N2-苯基吡啶 -2,3-二胺 （中间体 5-1 ) 的合成
取 2,4-二氯吡啶 -3-胺 （1.63 g, 10 mmol) 和 N-苄基苯胺 （2.38 g, 13 mmol) 溶于乙 醇： 水（V/V, 1:6 ) 30 mL中， 向其中加入浓盐酸 0.5 mL， 升温至 100°C， 回流反应 8 h。 反应结束后， 冷却至室温， 析出白色固体， 抽滤， 滤饼用水洗后， 加入饱和 NaHC03 : EtOAc (V/V, 1:1) 的混合溶液 140 mL。 搅拌 30 min后， 分层， 有机层用饱和氯化钠溶 液洗后， 干燥， 过滤， 浓縮， 得灰白色固体 1.78 g， 收率 57.4%。 产品无需纯化， 可直 接进行下一步反应。
ESI-MS [M+H]+: m/z 310.4
JH NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 8.02 (d， 1H, / = 8 Hz, pyridine- 5 -H), 6.85-7.79 (m， 11H, Ar-H), 5.25 (s, 2H， NH2)， 4.51 (s, 2H， CH2).
实施例 4
N-{4- [节基 (苯基)氨基] -6-氯 -吡啶 -5-基]甲酰胺 （中间体 6-1 ) 的合成
取甲酸乙酯 （0.28 g, 6 mmol) 于 0°C下加入至乙酸酐 （0.92 g, 9 mmol) 中， 搅拌反 应 0.5 h后， 加入溶有中间体 5-1 ( 1.55 g, 5 mmol) 的二氯甲烷溶液 15 mL， 室温搅拌反 应 2 h。 反应结束后， 蒸干溶剂， 残余物柱层析纯化， 展开剂为石油醚： 乙酸乙酯（V/V, 2:1 )， 得到白色固体 0.87 g， 收率 51.5%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 339.7
JH NMR (400MHz, DMS d6) 5ppm: 9.17 (s, 1H， CHO), 8.45 (s, 1H， NHCHO), 8.11 (d 1H， / = 8 Hz, pyridine-5-H), 6.91-7.85 (m， 11H, Ar-H), 4.51 (s, 2H， CH2).
实施例 5
11-苄基 -4-氯 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 （中间体 7-1 ) 的合成
取中间体 6-1 ( 0.34 g, 1 mmol) 禾卩 PPA ( 0.51 g, 1.5 mmol) 溶于 P0C13 6 mL中， 回 流反应过夜。 反应结束后， 蒸干溶剂， 残余物加水 20 mL稀释， 乙酸乙酯提取（15 mL x 3)， 水层用 1 N NaOH溶液调 ΡΗ至 9~10， 乙酸乙酯提取 （ 10 mL x 2)， 合并有机层， 分别用饱和 1^1¾ 03溶液和饱和食盐水洗， 无水硫酸钠干燥， 过滤， 浓縮。 残余物柱层 析纯化， 展开剂为为石油醚： 乙酸乙酯（V/V, 5:l )， 得到黄色固体 0.17 g， 收率 53.1%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 320.2
JH NMR (400MHz, DMS d6) 5ppm: 8.81 (s, 1H， C(H)=N), 7.95 (d, 1H, / = 8 Hz, pyridine-5-H), 7.23-7.79 (m, 10H, Ar-H), 4.50 (s， 2H， CH2).
实施例 6
N-{4-[(llH-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 -U-二酰胺 (目标化合物 1- 1 ) 的合成
取中间体 7-1 ( 0.32 g, 1 mmol)和中间体 3-1 ( 0.47 g, 1.5 mmol)溶于 DMF 3 mL中， 向其中加入 Cu粉（6.1 mg, 0.1 mmol)禾卩 Cs2C(¾ ( 0.98 g, 3 mmol), 置于微波反应器中， 功率设定 60 W， 于 10CTC搅拌反应 10 min。 反应结束后， 过滤， 蒸干溶剂， 搅拌下缓慢 滴加水 10 mL， 析出固体， 柱层析纯化， 展开剂为石油醚： 乙酸乙酯 （V/V, 1:1 )， 得到 N-{4-[(ll-苄基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺为白色固体 0.27 g o将所得固体和 10% Pd-C ( 15 mg)溶于乙酸乙酯 5 mL中， 通入 1¾条件下， 搅拌反应过夜， 脱除苄基。 反应结束后， 经硅藻土过滤， 浓縮， 冷的 乙酸乙酯洗， 得目标化合物 1- 1为白色固体 0.19 g， 收率 37.2%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 508.7
JH NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.10 (s, 1H, C(O)NH), 10.03 (s, 1H, C(O)NH), 9. 11 (s， 1H， NH)， 8.70 (s， 1H， C(H)=N), 7.94 (d， 1H, / = 8 Hz, pyridine-5-H), 7.10-7.91 (m， 13H, Ar-H), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 7
4-氯 -2-酚氧基吡啶 -3-胺 （中间体 5-2) 的合成 取 2,4-二氯吡啶 -3-胺（1.63 g, 10 mmol)和苯酚（0.94 g, lO mmol)溶于 DMF 25 mL 中， 向其中加入 K2C03 (4.14 g, 30 mmol), 升温至 60°C， 搅拌反应 8 h。 反应结束后， 加乙酸乙酯 60 mL稀释， 先后用水 50 mL和饱和氯化钠溶液洗， 干燥， 过滤， 浓縮， 柱 层析纯化， 展开剂为石油醚： 乙酸乙酯 （V/V, 3:l ) 得黄色固体 0.09 g， 收率 40.9%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 221.9
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 8.05 (d, 1H, / = 8 Hz, pyridine- 5 -H), 6.80-7.59 (m， 6H， Ar-H), 5.26 (s, 2H， NH2).
实施例 8
N-[4- (苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 -4-基氧基)苯基] (4-氟苯基)环丙烷 -U-二酰胺 （目 标化合物 1-2) 的合成
以中间体 5-2为原料， 先后按照实施例 4和实施例 5制备 4-氯-苯并吡啶 [2,3-b][l,4] 氧氮杂卓 （中间体 7-2)， 接着， 按照实施例 6， 即可制备目标化合物 1-2， 收率 27.5%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 509.2
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 8.74 (s, 1H， C(H)=N), 7.06-7.85 (m, 14H, Ar-H), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 9
N-[4- (苯并吡啶 [2,3-b][l,4] 硫氮杂卓 -Φ基氧基)苯基] -N- (4-氟苯基)环丙烷 -U-二酰胺（目 标化合物 1-3 ) 的合成
以 2,4-二氯吡啶 -3-胺和苯硫酚为原料， 先后按照实施例 7、 实施例 4和实施例 5制 备 4-氯-苯并吡啶 [2,3-b][l,4]硫氮杂卓（中间体 7-3)， 接着， 按照实施例 6， 即可制备目 标化合物 1-3， 收率 25.4%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 525.1
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.10 (s, 1H, C(O)NH), 10.08 (s, 1H, C(O)NH), 8.72 (s, 1H， C(H)=N), 7.08-7.87 (m, 14H, Ar-H), 1.47 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 10
N-{4-[(6,ll-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-4) 的合成
取目标化合物 1- 1 ( 0.10 g, 0.2 mmol)溶于干燥的 THF 10 mL中，向其中加入 NaBH4 (22 mg, 0.59 mmol), 于室温下搅拌反应 4 h。 反应结束后， 蒸干溶剂， 加入乙酸乙酯 20 mL溶解，分别用水 10 mL和饱和食盐水 10 mL洗，有机层用无水硫酸钠干燥，过滤， 减压浓縮， 柱层析纯化， 展开剂为石油醚： 乙酸乙酯 （V/V, 3:2)， 得到白色固体 0.07 g， 收率 70.0%。 ESI-MS [M+H]+: m/z 510.6
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH), 9.26 (s, IH, Ar-NH), 6.71-7.79 (m, 14H, Ar-H), 5.58 (s, IH, CH2NH), 4.20 (s, 2H, CHiNH), 1.47 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 11
4-氯 -5,6-二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 （中间体 8-5 ) 的合成
取中间体 5-2 ( 1.10 g, 5 mmol)、多聚甲醛（0.23 g, 7.5 mmol)和无水硫酸镁（1.20 g, 10 mmol) 溶于二氯甲烷 20 mL中， 向其中加入三氟乙酸 （0.33 mL, 4.5 mmol), 升温至 40°C， 搅拌反应过夜。 反应结束后， 冷却至室温， 过滤， 滤饼用二氯甲烷 20 mL搅洗， 合并二氯甲烷层， 分别用水 20 mL和饱和食盐水 20 mL洗。 有机层干燥， 过滤， 浓縮， 产物用石油醚： 乙酸乙酯（V/V, 10:1 )于 40°C搅洗 30 min。 冷却， 过滤， 得到淡黄色固 体 0.78 g， 收率 67.2%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 233.7
JH NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 6.72-7.15 (m, 6H, Ar-H), 5.72 (s, IH, CH2NH), 4. 18 (s, 2H, CH2).
实施例 12
N-{4-[(5,6-二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙浣 -1,1- 二酰胺 （目标化合物 1-5 ) 的合成
以中间体 8-5为原料， 按照实施例 6， 即可制备目标化合物 1-5， 收率 27.8%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 511.1
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH), 7.08-7.89 (m， 14H, Ar-H), 5.85 (s， 1H， CH2NH), 4.35 (s， 2H， CH2NH), 1.47 (s， 4H， 实施例 13
N-{4-[(5,6-二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]硫氮杂卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙浣 -1,1- 二酰胺 （目标化合物 1-6) 的合成
以 2,4-二氯吡啶 -3-胺和苯硫酚为原料， 先后按照实施例 7、 实施例 11和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-6， 收率 30.4%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 527.8
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.10 (s, IH, C(O)NH), 10.09 (s, IH, C(O)NH), 7.05-7.88 (m, 14H, Ar-H), 5.85 (s, IH, CH2NH), 4.35 (s, 2H, CH2NH), 1.46 (s, 4H， CH2CH2). 实施例 14
N-(4-氟苯基 )-{4-[(2-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 -1,1- 二酰胺 （目标化合物 1-7 ) 的合成
以 2,4-二氯 -6-甲基吡啶 -3-胺和 N-苄基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-7， 收率 26.9%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 522.7
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.10 (s, IH, C(O)NH), 10.08 (s, IH, C(O)NH), 9.11 (s, IH, NH), 8.70 (s, IH, C(H)=N), 7.10-7.57 (m, 13H, Ar-H), 2.45 (s, 3H, CH3), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 15
N-(4-氟苯基) -Λ Φ[(2-甲基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1- 8 ) 的合成
以 2,4-二氯 -6-甲基吡啶 -3-胺和苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 11和实施 例 6， 即可制备目标化合物 1-8， 收率 24.8%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 524.6
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH), 9.25 (s， 1H， Ar-NH), 7.01-7.59 (m， 13H, Ar-H), 5.58 (s， 1H， CH2NH), 4.20 (s， 2H， C NH), 2.42 (s, 3H， CH3), 1.47 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 16
N-{4-[(13-氰基 -IH-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-9) 的合成
以 5-氨基 -4,6-二氯烟腈和苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和 实施例 6， 即可制备目标化合物 1-9， 收率 23.9%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 533.1
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH), 9.27 (s, IH, Ar-NH), 8.95 (s, IH, pyridine- 2-H), 6.97-7.61 (m, 12H, Ar-H), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 17
N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(ll-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-10) 的合成
以 4,6-二氯 -5-甲基吡啶 -3-胺和苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-10， 收率 27.4%。 ESI-MS [M+H]+: m/z 522.8
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH),
9.26 (s, 1H， Ar-NH), 7.01-7.60 (m， 13H, Ar-H), 2.43 (s, 3H， CH3), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 18
N-(4-氟苯基) -N-{4-[(3-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-11 ) 的合成
以 4,6-二氯 -5-甲氧基吡啶 -3-胺和苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施 例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-11， 收率 24.1%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 538.1
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.24 (s, 1H， Ar-NH), 7.05-7.61 (m, 13H, Ar-H), 3.98 (s, 3H， OCH3)， 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 19
N-{4-[(3-氟 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环丙烷 -1,1- 二酰胺 （目标化合物 1- 12) 的合成
以 4,6-二氯 -5-氟吡啶 -3-胺和苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5 和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-12， 收率 19.7%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 526.1
lH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH),
9.27 (s， 1H， Ar-NH), 7.01-7.72 (m， 13H, Ar-H), 1.46 (s， 4H， CH2CH2).
实施例 20
N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(ll-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-13 ) 的合成
取目标化合物 1- 1 ( 0.10 g, 0.2 mmol) 和碘甲烷 （0.06 g, 0.4 mmol) 溶于 DMF 5 mL 中， 向其中加入 K2C03 ( 0.06 g, 0.4 mmol), 于室温下搅拌反应 4 h。 反应结束后， 过滤， 蒸干溶剂， 向残余物中加入水， 析出固体。 抽滤， 所得固体经柱层析纯化， 展开剂为石 油醚： 乙酸乙酯 （V/V, 3:2)， 得到白色固体 0.06 g， 收率 60.0%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 522.7
JH NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.15 (s, 1H, NH), 8.70 (s, 1H, C(H)=N), 6.83-7.71 (m, 14H, Ar-H), 2.11 (s, 3H, NCH3), 1.46 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 21
N-(4-氟苯基) -N-{4-[(5-甲基 -6,11-5H-二氢苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环 丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1- 14) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 N-苄基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 11和实施 例 6制备得到 Λ Φ[(11-苄基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 N-(4-氟苯基)环丙烷 -U-二酰胺。接着， 按照实施例 20， 得到甲基化产物 N-{4-[(ll-苄基 -5-甲基 -6,11 -二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 N-(4-氟苯基） 环丙 烷 - 1,1-二酰胺。 最后， 将所得固体和 10% Pd-C ( 15 mg) 溶于乙酸乙酯 5 mL中， 通入 Η2条件下， 搅拌反应过夜， 脱除苄基。 反应结束后， 经硅藻土过滤， 浓縮， 冷的乙酸乙 酯洗， 得目标化合物 1- 14为白色固体， 收率 18.5%。
ESI-MS [Μ+Η]+: m/z 524.0
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.26 (s, 1H， Ar-NH), 6.69-7.77 (m， 14H, Ar-H), 5.56 (s, 1H， CH2NH), 4.21 (s, 2H， CH2NH), 2.10 (s, 3H, NCH3), 1.47 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 22
N-{4-[(5-乙酰基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 N-(4-氟苯 基)-环丙浣 -U-二酰胺 （目标化合物 1-15 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 N-苄基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 11和实施 例 6制备得到 Λ Φ[(11-苄基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 N-(4-氟苯基)环丙浣 -U-二酰胺。
取 Λ Φ[(11-苄基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4- 氟苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺（0.60 g, 1 mmol)和三乙胺（0.15 g, 1.5 mmol)溶于 THF 10 mL 中， 冰浴下向其中滴入乙酰氯 （0.09 g, 1.2 mmol)。 滴毕， 室温下搅拌反应 2 h。 反应结 束后， 蒸干溶剂， 加石油醚搅洗， 过滤。 将所得固体和 10% Pd-C ( 15 mg) 溶于乙酸乙 酯 5 mL中， 通入 H2条件下， 搅拌反应过夜， 脱除苄基。 反应结束后， 经硅藻土过滤， 浓縮， 冷的乙酸乙酯洗， 得目标化合物 1- 15为白色固体， 收率 20.1%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 552.9
1H NMR (400MHz, DMSO-de) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.26 (s, 1H， Ar-NH), 6.70-7.78 (m, 14H, Ar-H), 4.25 (s, 2H， CHaN), 2.25 (s, 3H， CH3), 1.46
Figure imgf000024_0001
实施例 23
N-(4-氟苯基) -N-{4-[(8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-16) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 4-甲氧基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施 例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-16， 收率 32.7%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 538.9
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH),
9.25 (s, 1H， NH)， 8.65 (s, 1H， C(H)=N), 7.08-7.76 (m, 13H, Ar-H), 4.15 (s, 3H， OCH3)， 1.46 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 24
N-{4-[(8,9-二甲氧基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙 烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-17 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 3,4-二甲氧基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-17， 收率 34.1%。
将上述 1- 17 ( 0.25 g) 于 4 mol/L盐酸 /乙醇 （5 mL) 中加热溶解， 浓縮蒸干溶剂， 再经乙醇重结晶， 冷却析出固体， 即为 1- 17的盐酸盐化合物。
ESI-MS [M+H]+: m/z 538.9
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.23 (s, 1H， NH)， 8.62 (s, 1H， C(H)=N), 6.78-7.79 (m， 12H, Ar-H), 4.15 (s, 6H， 2xOCH3),
Figure imgf000025_0001
实施例 25
N-(4-氟苯基) -N-{4-[8-甲氧基 -9-(3-吗啡啉丙氧基) -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基 氧基]苯基 }环丙烷 -1,1-二酰胺 （目标化合物 1-18 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 4-甲氧基 -3-(3-吗啡啉丙氧基)苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1- 18， 收率 24.6%。
将上述 1- 18 ( 0.25 g) 溶于热的乙醇 （5 mL) 中， 缓慢滴加浓硫酸 （98% ) 0.1 mL, 浓縮蒸干溶剂， 再经乙醇重结晶， 冷却析出固体， 即为 1- 18的硫酸盐化合物。
ESI-MS [M+H]+: m/z 681.3
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH),
9.26 (s， 1H， NH)， 8.64 (s， 1H， C(H)=N), 7.08-7.76 (m, 12H, Ar-H), 4.16 (t， 2H， / = 5.6 Hz, CH20), 3.98 (s, 3H, OCH3), 3.68-3.76 (m, 4H, morpholine-3,5-2CH2), 2.56 (t, 2H, J = 6.2 Hz. NCH2), 2.45-2.51 (m, 4H, morpholine-2,6-2CH2), 2.11-2.13 (m, 2H, CH2CH2CH2), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 26
N-(4-氟苯基) -Λ Φ [(9-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-19) 的合成 以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 4-甲基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-19， 收率 29.4%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 522.9
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH),
9.26 (s, 1H， NH), 8.67 (s, 1H， C(H)=N), 7.08-7.76 (m, 13H, Ar-H), 2.45 (s, 3H， CH3)， 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 27
N-{4-[(8-氟 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 -1,1- 二酰胺 （目标化合物 1-20) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 4-氟苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5 和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-20， 收率 36.2%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 526.1
1H NMR (400MHz, DMSO-de) 5ppm: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH),
9.27 (s, 1H， NH), 8.64 (s, 1H， C(H)=N), 7.09-7.76 (m, 13H, Ar-H), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 28
N-{4-[(9-氰基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-21 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 3-氰基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-21， 收率 33.8 %。
ESI-MS [M+H]+: m/z 533.7
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH), 9.29 (s, 1H， NH), 8.70 (s, 1H， C(H)=N), 7.06-7.76 (m, 13H, Ar-H), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 29
N-(4-氟苯基) -Λ Φ [(8-硝基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-22) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 4-硝基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-22， 收率 27.5 %。
ESI-MS [M+H]+: m/z 553.6
1H NMR (400MHz, DMSO-de) 5ppm: 10.09 (s, IH, C(O)NH), 10.07 (s, IH, C(O)NH),
9.28 (s, 1H， NH), 8.67 (s, 1H， C(H)=N), 7.08-7.76 (m, 13H, Ar-H), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 30
N-{4-[(8-氨基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-23 ) 的合成
取目标化合物 1-22 ( 0.1 g, 0.18 mmol) 溶于甲醇 3 mL中， 加入 10% Pd-C ( 5 mg)， 通入氢气条件下， 室温搅拌反应 6 h o 反应结束后， 经硅藻土过滤， 浓縮滤液， 得到淡 黄色固体 86 mg， 收率 90.5%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 523.6
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9. 18 (s, 1H, NH), 8.64 (s, 1H, C(H)=N), 7.08-7.76 (m, 13H, Ar-H), 4.89 (s, 2H, NH2), 1.46 (s， 4H, CH2CH2).
实施例 31
N-{4-[(9-(3-二甲氨基丙氧基) -8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺 （目标化合物 1-24) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 3-[(3-二甲氨基)丙氧基 ]-4-甲氧基苯胺为原料， 先后按照实 施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-24， 收率 20.1%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 639.6
JH NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH),
9.25 (s, 1H， NH), 8.65 (s, 1H， C(H)=N), 7.09-7.72 (m, 12H, Ar-H), 4.17 (t, 2H， / = 5.6 Hz, CH20), 3.98 (s, 3H, OCH3), 2.45 (t, 2H, J = 6.0 Hz, NCH2), 2.30 (s, 6H, N(CH3)2), 2.10-2.12 (m， 2H, CH2CH2CH2), 1.46 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 32
N-{4-[(9-(lH-咪唑 -5-基）-8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基）氧基]苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺 （目标化合物 1-25 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 3-(lH-咪唑 -5-基) -4-甲氧基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-25， 收率 19.4%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 604.7
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH),
9.26 (s, 1H， NH), 8.64 (s, 1H， C(H)=N), 7.08-7.75 (m， 14H, Ar-H), 3.98 (s, 3H， OCH3)， 1.47 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 33
N-(4-氟苯基 >N-{4-[(8-甲氧基 -9- (噻吩 -2-基氧基) -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基 氧基]苯基 }环丙烷 -1,1-二酰胺 （目标化合物 1-26) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3 ^安和 4-甲氧基 -3- (噻吩 -2-基氧基)苯胺为原料，先后按照实施例 3、 实施例 4、 实施例 5和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-25， 收率 18.7 %。 ESI-MS [M+H]+: m/z 636.4
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.27 (s, 1H， NH)， 8.66 (s, 1H， C(H)=N), 7.09-7.74 (m， 15H, Ar-H), 3.98 (s, 3H， OCH3)， 1.46 (s, 4H, CH2CH2).
实施例 34
N-{4-[(8,9-二甲氧基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟 苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺 （目标化合物 1-27 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 3,4-二甲氧基苯胺为原料， 先后按照实施例 3、实施例 11和 实施例 6， 即可制备目标化合物 1-27， 收率 35.2%。
将上述 1-27 ( 0.25 g) 溶于热的乙醇 （5 mL) 中， 向其中加入对甲苯磺酸 （0.1 g)， 加热回流 30 min后， 浓縮蒸干溶剂， 再经丙酮重结晶， 冷却析出固体， 即为 1-27的对 甲苯磺酸盐化合物。
ESI-MS [M+H]+: m/z 570.7
JH NMR (400MHz, DMSO-de) δρρηι: 10.08 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 6.71-7.73 (m， 11H, Ar-H), 5.49 (s， 1H， CH2聊， 4.16 (s， 2H， CH2NH), 3.98 (s， 6H， 2xCH3),
Figure imgf000028_0001
实施例 35
N-(4-氟苯基 )-N-{4-[8-甲氧基 -9-(3-吗啡啉丙氧基 )-6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二 氮卓 -4-基氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-28 ) 的合成
以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 4-甲氧基 -3-(3-吗啡啉丙氧基)苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 11和实施例 6， 即可制备目标化合物 1-28， 收率 28.4%。
ESI-MS [M+H]+: m/z 683.5
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 7.07-7.76 (m, 12H, Ar-H), 5.26 (s, 1H, CH2NH), 4.19 (s, 2H, CH2NH), 4.16 (t, 2H, J = 5.6 Hz, CH20), 3.98 (s, 3H, OCH3), 3.64-3.72 (m, 4H, morpholine-3,5-2CH2), 2.55 (t, 2H, J = 6.2 Hz, NCH2)， 2.45-2.51 (m, 4H， morpholine-2,6-2CH2), 2.11-2.13 (m, 2H， CH2CH2CH2), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 36
N-{4-[(8,9-二甲氧基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] -3-氟苯基 }-N-(4-氟苯基) 环丙烷 - 1,1-二酰胺 （目标化合物 1-29) 的合成
以中间体 2和 4-氨基 -2-氟苯酚为起始原料， 按照实施例 2，制得 N-(4-氟苯基 )-N-(3- 氟 -4-羟基苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺 （中间体 3-2)。 以 4,6-二氯吡啶 -3-胺和 3,4-二甲氧基 苯胺为原料， 先后按照实施例 3、 实施例 4和实施例 5制得 4-氯 - 8,9-二甲氧基 -11H-苯并 吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓（中间体 7-29)后， 再按照实施例 6， 与中间体 3-2反应， 即可制 备目标化合物 1-29， 收率 31.8 %。
将上述 1-29 ( 0.25 g) 溶于热的乙醇（5 mL ) 中， 向其中加入苹果酸（0.1 g )， 加热 回流 30 min后， 浓縮蒸干溶剂， 再经乙醇重结晶， 冷却析出固体， 即为 1-29的苹果酸 盐化合物。
ESI-MS [M+H]+: nVz 586.1
JH NMR (400MHz, DMSO-d6) 5ppm: 10.11 (s, 1H, C(O)NH), 10.08 (s, 1H, C(O)NH), 9.15 (s, 1H, NH), 8.75 (s, 1H, C(H)=N), 6.59-7.79 (m, 11H, Ar-H), 3.98 (s, 6H, 2xCH3), 1.47
Figure imgf000029_0001
实施例 37
N-{4-[(8,9-二甲氧基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基 )氧基] -3-氟苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺 （目标化合物 1-30) 的合成
以目标化合物 1-29为原料，按照实施例 10， 即可制备目标化合物 1-30，收率 87.5%。 将上述 1-30 ( 0.25 g) 溶于热的乙醇 （5 mL) 中， 向其中加入甲磺酸乙醇溶液， 加 热回流 30 min后， 浓縮蒸干溶剂， 再经丙酮重结晶， 冷却析出固体， 即为 1-30的甲磺 酸盐化合物。
ESI-MS [M+H]+: m/z 588.5
1H NMR (400MHz, DMSO-cfc) 5ppm: 10.09 (s, 1H, C(O)NH), 10.07 (s, 1H, C(O)NH), 9.26 (s， 1H， Ar-NH), 6.71-7.79 (m, 11H, Ar-H), 5.57 (s， 1H， CH2NH), 4.21 (s， 2H， CH2NH), 1.46 (s, 4H， CH2CH2).
实施例 38
化合物体外对 c-Met酶抑制活性试验：
选用 Millipore出品的 MET enzyme (Cat: 14-526) 试剂盒测试化合物对 c-Met的抑 制活性， 实验操作参照试剂盒说明书进行。 首先测试 10 μΜ和 Ι μΜ两个浓度下， 化合 物对 c-Met酶的抑制百分率， 选取酶抑制活性较好的化合物继续进行抑酶 IC5Q测试。 实 验结果见表 2。
表 2化合物对 c-Met体外抑酶试验活性结果
c-Met % Inhibition
c-Met
Rate
编号
IC50
10 μΜ 1 μΜ
(ηΜ) i3/: O 6/-86/-il£ osiiAV
O oo ( m Ο O 寸'
Figure imgf000030_0001
从上表 2可见， 随机选取的进行测试的本发明化合物对 c-Met酶具有较强的抑制活 性， 如化合物 1-17、 1-18、 1-24、 1-27、 1-28、 1-29和 1-30， 对 c-Met的抑制活性均与阳 性对照药 Cabozantinib (XL184, III期临床药） 相当或更优。 其中， 化合物 1-29， 其活 性为阳性对照样 XL184的 6倍。
实施例 39
化合物体外对 VEGFR2和 EGFR酶抑制活性试验：
选取体外对 c-Met抑制活性较好的部分化合物，进行其体外对 VEGFR2和 EGFR的 酶抑制活性试验。 分别选用 Sigma 出品的 VEGFR2 enzyme (Cat: K2643) 试剂盒和 Invitrogen出品的 EGFR (Cat: PV3872) 试剂盒进行化合物对 VEGFR2和 EGFR的抑酶 IC5o测试， 实验操作参照试剂盒说明书进行。 实验结果见表 3。
表 3 化合物对 VEGFR2和 EGFR体外抑酶试验活性结果
IC50
编号 VEGFR2 EGFR
(nM) (μΜ)
XL184 74.8 3.74
1-17 31.7 1.05
1-18 45.6 1.21
1-29 25.4 0.49
1-30 28.9 0.61
从上表 3可见，进行测试的本发明化合物在抑制 c-Met的同时，对 VEGFR2和 EGFR 也显示了良好抑制活性， 且其抑制活性与阳性对照药 XL184 相当或更优。 其中， 化合 物 1-17、 1-18、 1-29和 1-30对三个靶酶 c-Met、 VEGFR2和 EGFR的抑制活性均优于阳 性对照药 XL184。
实施例 40
本发明化合物的肿瘤细胞体外抑制活性试验测定：
测定本发明化合物对 SW579 (人甲状腺癌细胞株）、 Caki-1 (人肾透明细胞癌皮肤 转移细胞株）、 MDA-MB-435S (人乳腺癌细胞株）、 A549 (人肺癌细胞株） 禾 B PANC-1 (人胰腺癌细胞株) 的活性， 其 IC5Q值通过 CCK-8法 (Cat# CK04-13， Dojindo )测得， 选择 XL184为对照药物。 具体结果如表 4 (单位为： μΜ):
表 4化合物对肿瘤细胞的体外抑制活性 编号 SW579 Caki-1 MDA-MB-435S A549 PANC-1 XL184 4.29 6.26 5.03 8.61 5.50
1-17 3.44 2.54 2.64 3.67 2.67
1-18 3.65 3.72 3.43 4.05 3.48
1-24 4.07 4.15 3.97 4.95 3.72
1-27 6.01 4.68 4.29 8.61 4.87
1-28 8.27 6.05 4.85 9.37 5.13
1-29 3.01 1.04 1.20 2.84 1.87
1-30 3.21 1.45 1.57 3.04 2.01 从上表 4可见， 本发明化合物显示了良好的体外抗肿瘤细胞增殖活性， 部分化合物 抗肿瘤细胞增殖活性优于阳性对照药 XL184。 其中， 化合物 1-17、 1-18、 1-24、 1-29和 1-30， 对人甲状腺癌细胞株 SW579、 人肾透明细胞癌皮肤转移细胞株 Caki-1、 人乳腺癌 细胞株 MDA-MB-435S、 人肺癌细胞株 A549和人胰腺癌细胞株 PANC-1均具有较高的 抑制活性， 优于阳性对照药 XL184。 尤其是化合物 1- 17， 对人肾癌细胞株 Caki-1、 人乳 腺癌细胞株 MDA-MB-435S和人胰腺癌细胞株 PANC-1的 IC5Q分别为 2.54 μΜ、2.64 μΜ 和 2.67 μΜ, 化合物 1-30分别为 1.45 μΜ、 1.57 μΜ和 2.01 μΜ, 化合物 1-29分别达到了 1.04 μΜ、 1.20 μΜ禾 Β 1.87 μΜ， 与阳性对照药 XL184相比， 提高了 2~6倍。
实施例 41
化合物对正常细胞体外抑制活性试验测定：
测定本发明化合物对 MRC-5人胚肺成纤维细胞的活性， IC5Q值通过 CCK-8法（Cat# CK04-13, Dojindo) 测得。 选择 XL184 为阳性对照药物进行正常细胞株的体外抑制活 性 IC5Q测试。 具体结果如下 （单位为： μΜ):
表 5 化合物及对照药物对正常细胞的体外抑制活性 编号 MRC-5
XL184 28.2
1-17 327.5
1-18 312.3
1-24 291.7
1-27 280.4
1-28 240.5
1-29 352.4
1-30 343.8 从上表 5可以看出， 进行测试的本发明化合物相对于对照药物 XL184, 对正常细胞 的抑制活性较弱， 具有更低的毒副作用， 说明本发明的苯并吡啶氮杂卓类化合物对肿瘤 细胞和正常细胞的抑制增殖方面具有更好的选择性， 预示其作为抗肿瘤药物使用时将具 有更低的毒副作用， 易于作为肿瘤药物使用。
实施例 42
急性毒性试验： 采用张均田主编的〈〈现代药理实验方法〉〉 (北京医科大学、 中国协和 医科大学联合出版社， 1998年出版)报道的方法， 初步筛选， 经用 Bliss法统计（ 《实用 药物制剂技术》， 人民卫生出版社， 1999年出版)， 化合物 1-17、 1-18、 1-29和 1-30小鼠 单次灌服的 LD5Q分别为 1.87g/kg、 1.98g/kg、 2.24g/kg和 2.19g/kg。
实施例 43
片剂： 任一选自 I- 1至 1-30的化合物或其盐 lOOmg
蔗糖 150mg
玉米淀粉 38mg
硬脂酸钙 2mg
制备方法： 将活性成分 1-1至 1-30任一化合物或其盐与蔗糖、 玉米淀粉混合， 加水 湿润， 搅拌均匀， 干燥， 粉碎过筛， 加入硬脂酸钙， 混合均匀， 压片。 每片重 290 mg， 活性成分含量为 100mg。
实施例 44
注射剂： 任一选自 I- 1至 1-30的化合物或其盐 15mg
注射用水 80mg
制备方法： 将活性成分 1- 1至 1-30任一化合物或其盐溶解于注射用水， 混合均匀， 过滤， 将所获得的溶液在无菌条件下分装于安瓿瓶中， 每瓶 95mg， 活性成分含量为 15 mg/瓶。
上述实施例为本发明较佳的实施方式， 但本发明的实施方式并不受上述实施例的限 制， 其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、 修饰、 替代、 组合、 简 化， 均应为等效的置换方式， 都包含在本发明的包含范围之内。

Claims

权利要求书
1. 苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， 为具有如式 （I) 所示的化合物或其药 学上可接受的盐：
Figure imgf000034_0001
其巾：
X选自 H、 CN、 甲基、 甲氧基或氟；
选自 H或甲基；
R2和 R3各自独立地选自 Η、 0 、 d-5烷基、 氨基、 NHR6、 卤素、 氰基、 硝基、 取代氨基、 苯基、 杂环基、 取代苯基或取代杂环基；
R6选自氢、 d— 5直链或支链烷基、 芳基、 芳烷基、 杂环基、 杂环烷基、 取代的 d_5 烷基、 取代的芳基、 取代的芳烷基、 取代的杂环基或取代的杂环烷基；
Y选自 NH， NCH3， 0或 S;
R4分两种情况：
当七元环为 C=N时， 无 R4;
当七元环为 C-N时， 选自 H、 C14烷基或 C14酰基；
R5为卤素。
2. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， 和 所代表 的 d_5烷基为甲基、 乙基或异丙基。
3. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， 和 所代表 的取代氨基为 d— 5烷基氨基、 吗啡啉 -N-丙基氨基、 哌啶 -4-甲基氨基或哌嗪 -1-丙基。
4. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， 和 所代表 的杂环基为吗啡啉 - 1-基、 哌啶 -Φ基或哌嗪 -1-基。
5. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R2和 R3所代表 的取代苯基或取代杂环基为苯基或杂环基含有 1~4个取代基， 取代基为羟基、 甲氧基、 甲基或氨基。
6. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的 Cw 的支链或支链烷基为甲基、 乙基或异丙基。
7. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表芳基为 苯基。
8. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的芳烷 基为苄基、 3,4-二甲氧基苄基或 3-(3,4-二甲氧基酚氧基)丙基。
9. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的杂环 基为咪唑基、 噻唑基或吡啶基。
10. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的杂环 烷基为吗啡啉 丙基、哌啶 -4-甲基、哌嗪 -1-丙基、 N-甲基哌嗪 -1-丙基或吡咯烷 丙基。
11. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的取代 的 d_5烷基为羟甲基、 氨基甲基、 3- (羟基)丙基或 3- (二甲氨基)丙基。
12. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的取代 的芳基为 3,4-二甲氧基苯基、 4-甲基苯基、 4-氨基苯基或 4-氟苯基。
13. 根据权利要求 1所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， R6代表的取代 的杂环基或取代的杂环烷基为杂环基或杂环烷基中含有 1~4个取代基， 取代基为羟基、 甲氧基、 甲基或氨基。
14. 苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， 包括如下化合物或其药学上可接受的
1-1 N-{4-[(llH-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-2 N-[4- (苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 -Φ基氧基)苯基] -N-(4-氟苯基)环丙烷 -U-二 酰胺、
1-3 N-[4- (苯并吡啶 [2,3-b][l,4] 硫氮杂卓 -4-基氧基)苯基] -N-(4-氟苯基)环丙烷 -U-二 酰胺、 1-4 N-{4-[(6,ll-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
I-5 N-{4-[(5, 二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]氧氮杂卓 -4-基)氧基]苯基 N-(4-氟苯基)环丙 浣 -U-二酰胺、
I-6 N-{4-[(5, 二氢苯并吡啶 [2,3-b][l,4]硫氮杂卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙 浣 -U-二酰胺、
1-7 N-(4-氟苯基 )-{4-[(2-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }环丙 浣 -U-二酰胺、
1-8 N-(4-氟苯基) -Λ Φ [(2-甲基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] 苯基 }-环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-9 N- [(13-氰基 - 1H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环 丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-10 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(3-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
I-ll N-(4-氟苯基) -N-{4-[(3-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-12 N- [(3-氟 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基） 环 丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-13 N-(4-氟苯基) -N-{4-[(ll-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
I-14 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(5-甲基 -6,11-5H-二氢苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] 苯基 }环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-15 N-{4-[(5-乙酰基 -6,11 -二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -Φ基）氧基]苯 基} (4-氟苯基)-环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-16 N-(4-氟苯基) -N-{4-[(8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-17 N- [(8,9-二甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟 苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-18 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[8-甲氧基 -9-(3-吗啡啉丙氧基) - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二 氮卓 -4-基氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-19 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(9-甲基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-20 N-{4-[(8-氟 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环 丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-21 N-{4-[(9-氰基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基) 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-22 N-(4-氟苯基) -N-{4-[(8-硝基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 } 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-23 N-{4-[(8-氨基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基) 环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-24 N-{4-[(9-(3-二甲氨基丙氧基) -8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基) 氧基]苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙烷 -1,1-二酰胺、
1-25 N-{4-[(9-( lH-咪唑 -5-基) -8-甲氧基 -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] 苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-26 N-(4-氟苯基 )-N-{4-[(8-甲氧基 -9- (噻吩 -2-基氧基) -11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮 卓 -4-基氧基]苯基 }环丙烷 - 1,1-二酰胺、
1-27 N-{4-[(8,9-二甲氧基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基]苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺、
1-28 N-(4-氟苯基） -Λ Φ [8-甲氧基 -9-(3-吗啡啉丙氧基 )-6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -Φ基氧基]苯基 }环丙烷 -U-二酰胺、
1-29 N-{4-[(8,9-二甲氧基 - 11H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基）氧基 ]-3-氟苯 基} (4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺或
1-30 N- [(8,9-二甲氧基 -6,11-二氢 -5H-苯并吡啶 [3,2-b][l,4]二氮卓 -4-基)氧基] -3-氟 苯基 }-N-(4-氟苯基)环丙浣 -1,1-二酰胺。
15. 根据权利要求 1〜14任一项所述的苯并吡啶氮杂卓类化合物， 其特征在于， 所 述的盐为盐酸盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 乙酸盐、 乳酸盐、酒石酸盐、 鞣酸盐、 枸橼酸盐、 三氟醋酸盐、 苹果酸盐、 马来酸盐、 琥珀酸盐、 对甲苯磺酸或甲磺酸盐。
16. 一种组合物组， 包括治疗有效量的权利要求 1〜15任一项所述的苯并吡啶氮杂 卓类化合物和药学上可接受的载体。
17. 权利要求 1〜15任一项所述的化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
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