WO2013143499A1

WO2013143499A1 - 一种高纯度环肽类物质的晶体及其制备方法和用途

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Publication number: WO2013143499A1
Application number: PCT/CN2013/073512
Authority: WO
Inventors: 刘石东; 张兆利; 王修胜; 张晓�; 唐志军; 季晓铭
Original assignee: 上海天伟生物制药有限公司
Priority date: 2012-03-30
Filing date: 2013-03-29
Publication date: 2013-10-03
Also published as: KR20140139123A; RU2014143717A; EP2832743A1; JP6250629B2; EP2832743A4; JP2015516947A; CN102659930B; US9580470B2; US20150105331A1; AU2016200474B2; EP2832743B1; CN102659930A; RU2607083C2; AU2016200474A1; CA2869011A1; AU2013242653A1

Abstract

一种高纯度结晶型环肽类物质，其结构如式I所示，其中，R表示H或者能形成药物上可接受的盐的阳离子。并且公开了它们的制备方法和用途。

Description

一种高纯度环肽类物质的晶体及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及化合物晶体，更具体地涉及一种高纯度环肽类物质的晶体及其制备方法和用途。背景技术

真菌感染已经成为免疫缺陷病人发病率和死亡率居高不下的主要原因。在过去的 20年里，霉菌感染的发病率显著增加。真菌感染的高危人群包括重症病人，外科病人以及那些患有 HIV感染，血癌和其它肿瘤疾病的病人。那些经过器官移植的病人同样是真菌感染的高危人群。

棘球白素作为一类新的抗真菌药物，在治疗由念珠菌或曲霉引起的感染方面效果良好。这类药物又以卡泊芬净和米卡芬净为代表。棘球白素类药物通过抑制 1， 3- β糖苷键的形成来抑制真菌，从而更好地减小了对人体的伤害，在高效的同时尽可能的降低了副作用，因此它们在使用过程中比传统抗真菌药更安全。

FK463 , 又名米卡芬净钠，为如式 I I所示的化合物（R为钠离子），由日本藤泽公司 ( Japan Fuj i saw a Toyama Co. , Ltd, Takaoka Plant ) 开发，其商品名为米开民（Mycamine ) ，目前作为静脉给药的抗真菌药在多个国家销售。它是以 FR901379 , 如式 II I所示化合物（R为钠离子或氢离子）为前体通过酶解除掉侧链后得到 FR179642 , 如式 I所示化合物，（R为氢离子或钠离子），（具体方法参见美国专利 US5376634, EP0431350及中国专利 CN1161462C, )然后经过化学修饰得到的，具体制备及纯化方法参见专利公开 W09611210、 W09857923,

W02004014879 o

111 具体路线如下：

本领域众所周知，晶体物质一般较其无定形状态更加稳定。因此，本发明人希望在式 I化合物中间体阶段找到式 I化合物合适的晶体，使得式 I化合物在保存储藏的过程中更加的稳定。

式 I化合物难于被结晶，通常情况下为无定形状态。对于该化合物作为治疗的最终用途或者作为式 I I化合物的中间体而言，希望得到稳定性好且纯度高的晶体。

通过本发明方法，得到的几种稳定性好的晶体，更加适合运输保藏，并且制备过程中收率高。发明内容

本发明的一个目的旨在提供式 I化合物的几种晶体。

本发明的另一个目的是提供所述新晶体的制备方法。

本发明的又一个目的是提供所述几种晶体的用途。式 I化合物晶体的制备

在本发明中，术语 "晶体" 是指分子或原子复合物呈特定排列形式的固体。本发明提供了一种式 I所示化合物晶体的制备方法。例如，利用不同的溶剂体系以及干燥方法，可以制备出多种不同晶型的晶体。

发明人经过研究惊奇地发现，式 I化合物溶解在水或与水相互溶解的低级醇的混合溶液中，且含式 I化合物的溶解液维持在饱和溶解度附近。这时将溶解液的 pH控制在规定的范围内，式 I化合物形成形态优异的晶体。式 I化合物所形成的晶体，含有结晶水。式 I化合物的晶体在真空干燥的过程中，晶体会失去结晶水，式 I化合物的晶体会发生转晶现象。因此，本发明介绍了式 I化合物转晶前以及转晶后的多种晶型以及这些晶型的制备方法。

另一方面，本发明人在研究式 I化合物结晶的溶剂体系以及晶体结晶水对晶型的影响时发现。低级醇和水作为结晶的溶剂体系时，可以将晶型分为三大类。具体地讲，正丙醇，乙醇，异丙醇和水作为结晶溶剂，获得的晶体 X-射线粉末衍射（XRPD) 图谱基本一致，可以归为一种晶型。另外，甲醇和水作为结晶的溶剂体系，获得另外一种晶型。水作为唯一的结晶溶剂，通过降温的方式获得的又是另一种晶体形式。当然，本制备方法在结晶溶剂的筛选方面做了大量细致的工作，除上述介绍的适合式 I化合物结晶的溶剂体系，像丙酮，乙腈，异丁醇，正丁醇，乙酸乙酯，二氯甲垸等溶剂都不适合作为式 I化合物结晶的溶剂。在这些溶剂体系下得到的固体，都是无定形的固体形式且稳定性很差。

另一方面，上述在不同溶剂中结晶的晶体，晶型与结晶水的含量有着密切的关系。研究者发现，上述所有晶体在真空干燥，也就是晶体在失去水分的过程中都会发生转晶现象。例如，晶体 A水分含量在 30%-12%时保持同一种晶型。利用真空干燥结合除湿剂（五氧化二磷）去除晶体 A的水分，当水分在含量（12%-6%) 时，晶体 A转化为晶体 B。继续将晶体 B除水，当水分含量小于 6%，晶体 B转化为晶体 C。同样地，甲醇和水作为结晶的溶剂体系，水分含量大于 10%得到晶体0。利用真空干燥结合除湿剂（五氧化二磷）去除晶体 D的水分，小于 10%时，晶体 D 转化为晶体 E。水作为唯一的结晶溶剂，水分含量大于 10%得到晶体F。利用真空干燥结合除湿剂（五氧化二磷）去除晶体 F的水分，小于 10%时，晶体 F转化为晶体 G。

另外说明：在晶体 A干燥转晶的过程中可能存在晶体 A和晶体 B同时存在的状态，我们称之为式 I化合物的混晶。同样的，晶体 B和晶体 C也有同时存在的状态，我们称之为式 I化合物的混晶。同样的，晶体 D和晶体 E，晶体 F和晶体 G 也存在这样的混晶形态。

具体关系归纳如下:

结晶溶剂正丙醇和水异丙醇和水乙醇和水甲醇和水水

晶体 A，水分含量在 30%-12% 晶体 D，水晶体 F，水分含量不分含量不小小于 10% 于 10% 干燥除水晶体 B，水分在含量 12%-6% 晶体 E，水晶体 G，水干燥除水晶体 C，水分含量小于 6% 分含量小分含量小于于 10% 10% 本发明一方面提供了化合物 I的新晶型。

一种环肽类物质的晶体八，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 A的 X-射线粉末衍射（XRPD)图上在下述 2 Θ 角有峰： 7.1±0.2， 8.0±0.2， 14.7±0.2， 16.8±0.2， 18.9±0.2， 20.3±0.2， 21.1±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 A的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 7.3±0.2， 11.9±0.2， 12.3±0.2， 16.1±0.2， 18.5±0.2， 19.6±0.2， 22.1±0.2， 22.8±0.2， 23.1±0.2， 24.3±0.2， 25.4±0.2， 28.3 ±0.2， 33.5±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 A的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 9.1±0.2， 10.4±0.2， 15.6±0.2， 24.9±0.2， 26.0±0.2， 28.8 ±0· 2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 A有如图 1所示的 X-射线粉末衍射

(XRPD) 图谱。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 A有如图 2所示的红外光谱。一种环肽类物质的晶体^ 其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 B的 X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角有峰： 7.3±0.2 °， 11.9±0.2 °， 12.8±0.2 °， 16.8±0.2 °， 19.6±0.2 。， 21.1±0.2 °，22.1±0.2 °，22.8±0.2 °，24.3±0.2 °， 25.4±0.2 °。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 B的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 8·3±0· 2 ° ， 13·4±0·2 °，14·0±0·2 °， 15·3±0· 2 °, 15.9 ±0.2 °，18.5±0.2 °，26.9±0.2 °， 30.5±0.2 °。

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 Β有如图 3所示的 X-射线粉末射（XRPD) 图谱。一种环肽类物质的晶体，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 C的 X-射线粉末衍射（XRPD)图上在下述 2 Θ 角有峰： 8.6±0.2 °， 11.9±0.2 °。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 C的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 20.7±0.2 °。

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 C有如图 4所示的 X-射线粉末射（XRPD) 图谱。

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 C如图 5所示的红外光谱。一种环肽类物质的晶体0，其结构如式 I所示，其中 R表示 Η或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 D的 X-射线粉末衍射（XRPD)图上在下述 2 Θ 角有峰: 5.6±0.2, 14.4±0.2, 19.8±0.2, 22.7±0.2, 23.0±0.2, 23.9±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 D的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 7.4±0.2， 8.2±0.2， 9.7±0.2， 12.2±0.2， 16.5±0.2， 18.6士 0.2, 22.3±0.2, 28.2±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 D的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 6· 0±0· 2， 6.4±0.2， 6.8±0.2， 11.2±0.2， 14.9±0.2， 15.5 ±0.2, 17.3±0.2， 19.1±0.2， 20.3±0.2， 21.5±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 D有如图 6所示的 X-射线粉末射（ RPD ) 图谱。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 D有如图 7所示的红外光谱。一种环肽类物质的晶体£，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 E的 X-射线粉末衍射（XRPD)图上在下述 2 Θ 角有峰： 9.7±0.2 °，19.8±0.2 °，23.0±0.2 °。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 E的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 6· 9±0· 2 °，13· 0±0· 2 °，17· 5±0· 2 °，24· 5±0· 2

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 Ε如图 8所示的 X-射线粉末射（XRPD) 图谱。

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 E有如图 9所示的红外光谱。一种环肽类物质的晶体F，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 F的 X-射线粉末衍射（XRPD)图上在下述 2 Θ 角有峰： 7· 0±0· 2， 7· 9±0· 2， 12· 6±0· 2， 14· 1±0· 2， 18.5±0· 2， 20.6±0· 2， 21.6±0.2， 35.6±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 F的 X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 7.3±0.2， 12.1±0.2， 14.4±0.2， 16.7±0.2， 19.8±0.2， 21.1 ±0.2， 22.9±0.2， 23.6±0.2， 24.9±0.2， 30.7±0.2。在本发明的另一优选例中，所述晶体 F的 X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 15.8±0.2， 18.0±0.2， 19.3±0.2， 25.4±0.2。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 F有如图 10所示的 X-射线粉末射（XRPD) 图谱。

在本发明的另一优选例中，所述晶体 F有如图 11所示的红外光谱。一种环肽类物质的晶体6，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 G的 X-射线粉末衍射（XRPD)图上在下述 2 Θ 角有峰： 7.3±0.2 °， 19.8±0.2 °，21.1±0.2

在本发明的另一优选例中，所述晶体 G的 X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述

2 Θ 角还有峰： 8·3±0·2 °， 12·0±0·2 °， 12·9±0·2 °， 13·3±0·2 °， 14· 1±0·2 °， 15·3±0·2 °， 16·8±0·2 °， 18·6±0·2 °，22·7±0·2 °，25·8±0·2 °, 26.9 + 0.2 。

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 G有如图 12所示的 X- 射线粉末射（XRPD) 图谱。

在本发明的另一优选例中，所述的环肽类物质的晶体 G有如图 13所示的红外光谱。本发明另一方面提供了所述环肽类物质晶体 A-G的制备方法。环肽类物质晶体 A-G的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(a)将如式 I所示化合物溶解在水或有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i )得到所述环肽类物质晶体。

其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C，优选 20至 40 °C。

其中，步骤（a) 中所述有机溶剂（ i )的水性溶液中，有机溶剂（ i )与水的体积比 0.01至 100，优选 0.1至 10，更优选 0.5至 3.0。

其中，步骤（a) 中以所述溶解液的总体积计，其中含有如式 I所示化合物 50至 500mg/ml, 优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。

其中，步骤（b) 中所述有机溶剂（ i )与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的一个实施方式中，步骤（b ) 之后还可以包含步骤（c ) 通过离心或过滤获得环肽类物质晶体。在本发明的一个实施方式中，步骤（c )之后还可以包含步骤（d ) 真空干燥，控制水分含量，得到所述晶体。环肽类物质晶体 A的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(a)将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i )得到所述环肽类物质晶体 A。

其中，步骤（a) 中以所述溶解液的总体积计，其中含有如式 I所示化合物 50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 V，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。

其中，步骤（b) 中所述有机溶剂（ i )与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1 至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。环肽类物质晶体 A还可以采用以下步骤来获得：

( a) 将如式 I所示化合物溶解在水中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

( b ) 降低溶液温度，加入有机溶剂（ i )，使得式 I化合物晶体 A完全析出；或者加入有机溶剂（i ) ，使得式 I化合物晶体 A完全析出。

其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50 °C , 优选 20至 40 V。其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2. 0-5. 0，优选 3. 5-4. 5。

其中，步骤（a) 中以所述溶解液的总体积计，其中含有如式 I 所示化合物 50至 500mg/ml , 优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（b ) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。

其中，步骤（b ) 中所述有机溶剂（ i )与步骤（a) 所述溶解液的体积比为

0. 1至 50，优选 0. 1至 10，最优选为 1至 5。其中，步骤（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 A: (a)将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b)降低溶解液温度，加入有机溶剂（ i )，使得式 I化合物晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体八。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a) 中以所述溶解液的总体积计，其中含有如式 I 所示化合物 50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（a) 和（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的另一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 A: (a)将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 降低溶解液温度，使得式 I化合物晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体八。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a)所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。

其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。在本发明的一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 A: (a)将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 加入有机溶剂（ i )，使得式 I化合物晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体八。

其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C，优选 20至 40 V。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a) 和（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的另一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 A: (a) 将如式 I所示化合物溶解在水中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH; (b) 降低溶液温度，加入有机溶剂（ i )，使得式 I化合物晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体八。

其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50 °C, 优选 20至 40 V。其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 A: (a)将如式 I所示化合物溶解在水中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH; (b) 加入有机溶剂（ i )，使得式 I化合物晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体八。其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10至 50°C，优选 20至 40°C。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a) 中以所述溶解液的总体积计，其中含有如式 I 所示化合物

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（b) 中所述有机溶剂（ i )与步骤（a) 所述溶解液的体积比为

0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。环肽类物质晶体 B和 C的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(a) 将如式 I 所示化合物溶解在有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I 化合物的溶解液的 pH;

(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i )得到如权利要求 1或 2所述环肽类物质晶体 A;

(c) 真空干燥步骤（b) 所得的晶体 A，控制水分含量，得到所述晶体。其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C，优选 20至 40 V。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。

其中，步骤（c) 真空干燥时，所述控制水分含量低于 6%，得到式 I化合物晶体 C; 控制水分含量范围为 6%-12%，得到式 I化合物晶体 B。环肽类物质晶体 B和 C还可以采用以下步骤获得：

(a) 将如式 I所示化合物溶解在水中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b)通过降温和，添加有机溶剂（ i )，得到如权利要求 1或 2所述环肽类物质晶体 A;或者添加有机溶剂（ i )，得到如权利要求 1或 2所述环肽类物质晶体 A;

(c) 真空干燥步骤（b) 所得的晶体 A，控制水分含量，得到所述晶体。其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C，优选 20至 40 V。其中，步骤（a) 中所述有机溶剂（ i )与水的体积比 0. 01至 100，优选 0. 1 至 10，更优选 0. 5至 3. 0。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2. 0-5. 0，优选 3. 5-4. 5。

其中，步骤（b ) 中所述有机溶剂（ i )与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0. 1至 50，优选 0. 1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（a) 和 /或（b ) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。

其中，步骤（c ) 真空干燥时，所述控制水分含量低于 6%，得到式 I化合物晶体 C; 控制水分含量范围为 6%-12%，得到式 I化合物晶体 B。在本发明的一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 B或 C: 将式 I化合物晶体 A进行真空干燥，控制水分含量，得到晶体 B或 C，或其组合物。

真空干燥时，控制水分含量低于 6%，得到式 I化合物晶体 C; 控制水分含量范围为 6%-12%，得到式 I化合物晶体 B。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 B:

(a) 将如式 I所示化合物溶解在有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i M吏所述环肽类物质晶体 A完全析出；

( c ) 离心或过滤，得到晶体 A;

( d) 真空干燥步骤（c ) 所得的晶体 A，控制水分含量为 6%-12%，得到晶体

B。

其中，步骤（a) 中所述有机溶剂（ i )的水性溶液中，有机溶剂（ i )与水的体积比 0. 01至 100，优选 0. 1至 10，更优选 0. 5至 3. 0。

其中，步骤（b ) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。其中，步骤（b) 中所述有机溶剂（ i )与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 B:

(b) 通过降温和添加有机溶剂（ i ) 使所述环肽类物质晶体 A完全析出；或者添加有机溶剂（i) 使所述环肽类物质晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 A;

(d) 真空干燥步骤（c) 所得的晶体 A，控制水分含量为 6%-12%，得到晶体

B。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 C:

(b) 通过降温和 /或添加有机溶剂（ i M吏环肽类物质晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 A;

(d) 真空干燥步骤（c) 所得的晶体 A，控制水分含量为小于 6%，得到晶体

C。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 C: (a) 将如式 I所示化合物溶解在水中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 通过降温和添加有机溶剂（ i ) 使环肽类物质晶体 A完全析出；或者添加有机溶剂（i) 使晶体 A完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 A;

(d) 真空干燥步骤（c) 所得的晶体 A，控制水分含量为小于 6%，得到晶体 C。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。

其中，步骤（a) 和 /或（b) 中所述的有机溶剂（ i )为乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。环肽类物质晶体 D的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(a)将如式 I所示化合物溶解在含有甲醇的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 通过降温和 /或添加甲醇得到所述环肽类物质晶体0。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（a) 中所述甲醇的水性溶液中，甲醇与水的体积比 0.01至 100，优选 0.1至 10，更优选 0.5至 3.0。

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 V，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。环肽类物质晶体 D还可以采用以下步骤来获得：

(b) 降低溶液温度，加入甲醇，使得式 I化合物晶体 D完全析出；或者加入甲醇，使得式 I化合物晶体 D完全析出。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的温度为 -40至 35 °C，优选 -5至 30 V，最优的 5 至 10°C。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。在本发明的一个实施方式中，步骤（b) 之后还可以包含步骤（c) 通过离心或过滤获得环肽类物质晶体 D。在本发明的一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 D: (a)将如式 I所示化合物溶解在含甲醇的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 降低溶解液温度，加入甲醇，使得式 I化合物晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体0。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。在本发明的另一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 D: (a)将如式 I所示化合物溶解在含甲醇的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 降低溶解液温度，使得式 I化合物晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体0。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。在本发明的另一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 D:

(a)将如式 I所示化合物溶解在含甲醇的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b) 加入甲醇，使得式 I化合物晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 D。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。在本发明的另一个实施方式中，采用以下步骤来获得式 I化合物的晶体 D:

(b) 降低溶液温度，加入甲醇，使得式 I化合物晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体0。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 D:

(b) 加入甲醇，使得式 I化合物晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 D。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。环肽类物质晶体 E的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(b) 通过降温和 /或添加甲醇使式 I化合物晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 D;

(d)真空干燥步骤（c)所得的晶体 D，控制水分含量小于 10%，得到晶体E。其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C，优选 20至 40 °C。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。环肽类物质晶体 E还可以通过以下步骤获得：

(a) 将如式 I所示化合物溶解在水中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH; (b)通过降温和添加甲醇使所述环肽类物质晶体 D完全析出；或者添加甲醇使晶体 D完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 D;

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -40至 35 °C，优选 -10至 35°C，更优选 -5至 30 V，最优的 5至 10°C。

其中，步骤（b) 中所述甲醇与步骤（a) 所述溶解液的体积比为 0.1至 50，优选 0.1至 10，最优选为 1至 5。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 E: 将式 I化合物晶体 D进行真空干燥，控制水分含量，得到晶体 E或晶体 D和

E的组合物。

真空干燥时，控制水分含量小于 10%，得到式 I化合物晶体 E。环肽类物质晶体 F的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(b) 通过降温得到环肽类物质式 I化合物晶体 F。

其中，步骤（a) 中所述溶解液 pH控制在 2.0-5.0，优选 3.5-4.5。

其中，步骤（b) 中所述的降温的温度为 -10 °C至 35 °C, 优选 -5至 30 °C，最优的 5至 10°C。在本发明的一个实施方式中，步骤（b) 之后还可以包含步骤（c) 通过离心或过滤获得环肽类物质晶体 F。环肽类物质晶体 G的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：

(b) 通过降温使式 I化合物晶体 F完全析出；

(c) 离心或过滤，得到晶体 F;

(d)真空干燥步骤（c)所得的晶体 F，控制水分含量小于 10%，得到晶体6。其中，步骤（a) 中所述溶解的温度为 10 至 50°C，优选 20至 40 V 。

50至 500mg/ml，优选 80— 450mg/ml，更优选 100至 300mg/ml。

其中，步骤（b ) 中所述的降温的温度为 -10 至 35 °C , 优选 -5至 30 °C , 最优的 5至 10°C。在本发明的另一个实施方式中，采用下述步骤来获得式 I化合物的晶体 G:

将式 I化合物晶体 F进行真空干燥，控制水分含量，得到晶体 G或晶体 F和 G 的组合物。

真空干燥时，控制水分含量小于 10%，得到式 I化合物晶体 G。如本文所用， "化合物 I " ， "式 I化合物"和 "如式 I所示的化合物"可以互换使用，都是指一种化学结构如式 I 的无定形物或者本发明所述式 I化合物晶体 A-G以外的其他晶型的物质，都是指具有以下结构式的化合物或其药学上可接受的盐:

其中， R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子。

药学上可接受的盐优选：包括金属盐例如碱金属盐（如钠盐、钾盐）、碱土金属盐（如钙盐、镁盐等）、铵盐、与有机碱形成的盐（如三甲胺盐、三乙胺盐、吡啶盐、甲基吡啶盐、二环己铵盐、 N，N，-二苄基乙二胺盐、二异丙基乙胺盐等）等、有机酸加成盐（如甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐等）、无机酸加成盐（如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、磷酸盐等）、与氨基酸（如精氨酸、天冬氨酸、谷氨酸等）形成的盐等。

式 I 化合物可以使用本领域常规的方法获得，例如但不限于，专利 W09611210 报道的该化合物的制备方法；也可以通过商业渠道获得，例如但不限于，如日本藤泽公司。式 I化合物晶体的鉴定和性质

本发明人在获得式 I 化合物晶体后进一步采用多种方式和仪器对其性质进行了研究。

"X射线粉末衍射"又称 "X射线多晶衍射（XRD或 XRPD ) "是目前用于测定晶体构造（即晶型）的常用试验方法。采用 X射线粉末衍射仪，在 X射线透过晶体时产生一系列衍射图谱，该图谱中不同的衍射线及其强度有一定结构的原子团所决定，由此确定晶体结构。

测定晶体的 X 射线粉末衍射的方法在本领域是已知的。例如使用 Bruker D8 Advanced型号的 X射线粉末衍射仪，以 2 ° 每分钟的扫描速度，采用铜辐射靶获取图谱。

也可以采用红外图谱法（IR) 来确定晶体结构，其测定方法在本领域是已知的。例如可采用 PE Spectrum One B，以 KBr: 样品 =200: 1压片，并在 400-4000cm— ¹范围扫描。

测定晶体的水分含量采用本领域通用的检测方法。例如使用 Karl Fischer (KF) 测定水分含量。式 I化合物晶体的用途及其组合物

在本发明中，提供式 I化合物晶体的用途。一方面可以用于制备如式 II所示的化合物;

合成路线在多个专利，例如 WO961 1210,9857923,2004014879等中均有报道。另一方面，本发明提供的式 I化合物的晶体也可以直接用于制备治疗真菌感染的药物。可以提供一种含有式 I化合物的晶体，和药学上可接受的载体的药物组合物。如本文所用，术语"药学上可接受的载体"指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。该术语指这样一些药剂载体：它们本身并不是必要的活性成分，且施用后没有过分的毒性。合适的载体是本领域普通技术人员所熟知的。在 Remington's Pharmaceutical Sciences(Mack Pub. Co. , N.J. 1991)中可找到关于药学上可接受的赋形剂的充分讨论。在组合物中药学上可接受的载体可包括液体，如水、盐水、甘油和乙醇。另外，这些载体中还可能存在辅助性的物质，如崩解剂、润湿剂、乳化剂、 pH 缓冲物质等。 ο 本发明的主要优点在于：

1. 本发明极大地提高了式 I化合物晶体的纯度，极大地减少了其中的杂质，获得了非常高纯度的式 I化合物晶体，晶型稳定性好，解决了现有技术中迄待解决的技术问题。

2. 本发明通过对制备条件的反复多次实验，选择了特定的制备条件，产生了预想不到的技术效果，提供了制备纯度高的式 I化合物晶体的方法，且所述方法非常适 o

合规模化生产，收率高。

3. 本发明提供了一种制备稳定性好的高纯度式 II化合物的方法，利用前体式 I 化合物晶体制备式 II化合物，极大程度地减轻式 II化合物纯化步骤的工艺压力，利用简便的纯化工艺得到高纯度的最终药物产品一式 II化合物，同时收率也获得了大幅度地提高，产生了预料不到的技术效果。附图说明

图 1所示为式 I化合物晶体 A的 X射线粉末衍射图谱；其中

峰号 2 - Θ d (A) 1% (相对强度）峰号 2 - Θ d (A) 1% (相对强度）

1 7. 080 12. 4748 100 21 22. 780 3. 9005 48. 7

2 7. 339 12. 0352 30. 0 22 3. 8372 50. 0

3 8. 040 10. 9882 56. 7 23 24. 360 3. 6509 45. 4

4 9. 080 9. 7318 11. 0 24 24. 819 3. 5844 25. 2

5 10. 379 8. 5160 10. 6 25 25. 440 3. 4983 41. 7

6 11. 840 7. 4681 24. 8 26 25. 961 3. 4293 28. 6

7 12. 319 34. 3 27 26. 961 3. 3043 17. 3

8 12. 861 6. 8777 26. 6 28 27. 740 3. 2132 28. 4

9 13. 540 6. 5343 15. 1 29 28. 319 3. 1488 24. 2

10 14. 381 6. 1537 25. 2 30 28. 800 3. 0974 19. 8

11 14. 720 6. 0131 42. 4 31 29. 221 3. 0537 17. 7

12 15. 079 5. 8705 18. 3 32 29. 861 2. 9897 18. 2

13 5. 4873 30. 3 33 31. 440 2. 8430 27. 2

14 16. 799 5. 2732 57. 3 34 33. 540 2. 6697 22. 1

15 18. 540 4. 7817 42. 7 35 34. 040 2. 6316 17. 2

16 18. 920 4. 6866 53. 3 36 34. 700 2. 5830 15. 3

17 19. 600 4. 5255 29. 9 37 37. 680 2. 3853 17. 9

18 20. 360 4. 3582 66. 5 38 38. 420 2. 3411 16. 2

19 21. 141 52. 1 39 39. 480 2. 2806 14. 9 20 22. 141 4. 0115 39. 0 40 40. 480 2. 2265 15. 1 图 2所示为式 I化合物晶体 A的红外（IR) 图谱。

o

ο

ο

图 4所示为式 I化合物晶体 C的 X射线粉末衍射图谱；其中

图 5所示为式 I化合物晶体 C的红外（IR) 图谱。

图 6所示为式 I化合物晶体 D的 X t线粉 3 ζ衍射图谱；其中

峰号 2 - Θ d (A) 1% (相对强度）峰号 2 - Θ d (A) 1% (相对强度）

1 5. 579 15. 8267 100. 0 19 4. 6425 46. 1

2 6. 019 14. 6712 42. 6 20 19. 819 4. 4760 49. 3

3 6. 339 13. 9319 48. 0 21 20. 280 4. 3753 35. 8

4 6. 739 23. 2 22 21. 539 35. 3

5 7. 380 23. 9 23 22. 241 3. 9937 44. 8

6 10. 7744 36. 5 24 22. 661 3. 9207 87. 7

7 9. 679 9. 1304 16. 0 25 22. 978 3. 8673 60. 8

8 11. 161 7. 9214 21. 3 26 23. 920 3. 7170 62. 6

9 12. 160 7. 2724 36. 8 27 24. 300 3. 6598 44. 1

10 12. 879 6. 8680 21. 6 28 25. 200 3. 5311 38. 7

11 14. 379 72. 7 29 27. 421 3. 2499 32. 6

12 14. 839 5. 9649 18. 9 30 28. 219 3. 1597 45. 0

13 15. 500 5. 7120 17. 1 31 29. 899 2. 9859 35. 1

14 16. 480 5. 3745 37. 4 32 34. 219 2. 6182 29. 8

15 17. 280 5. 1274 34. 6 33 34. 778 2. 5774 29. 0

16 4. 8811 36. 8 34 35. 740 2. 5102 24. 6

17 18. 342 4. 8328 37. 3 35 40. 620 2. 2192 23. 3

18 18. 663 4. 7505 32. 9 图 7所示为式 I化合物晶体 D的红外（IR) 图谱。

o

图 9所示为式 I化合物晶体 E的红外（IR) 图谱。

图 10所示为式 I化合物晶体 F的 X射线粉末衍射图谱；其中

ο

图 11所示为式 I化合物晶体 F的红外（IR) 图谱,

图 12所示为式 I化合物晶体 G的 X射线粉末衍射

峰号 2 - Θ d (A) 1% (相对强度）峰号 2 - θ d (A) 1% (相对强度）

1 7. 320 100. 0 15 20. 420 4. 3456 75. 1

2 8. 320 10. 6180 49. 8 16 4. 2151 90. 4

3 9. 360 9. 4412 21. 4 17 22. 201 4. 0009 75. 6

4 10. 620 8. 3237 21. 5 18 22. 679 3. 9175 82. 6

5 11. 982 7. 3804 33. 9 19 24. 577 3. 6191 60. 1

6 12. 860 6. 8779 39. 8 20 25. 780 3. 4529 63. 3

7 13. 301 6. 6511 38. 7 21 26. 823 3. 3210 58. 0

8 14. 080 6. 2848 39. 9 22 29. 085 3. 0677 43. 2

9 14. 881 5. 9482 50. 0 23 30. 585 2. 9205 42. 0

10 15. 260 5. 8015 55. 5 24 2. 8378 39. 2

11 15. 881 5. 5758 40. 8 25 32. 740 2. 7330 44. 2

12 16. 820 5. 2666 65. 2 26 34. 280 2. 6137 39. 9

13 18. 579 4. 7718 62. 8 27 36. 579 2. 4545 35. 6

14 19. 820 4. 4982 68. 0 图 13所示为式 I化合物晶体 G的红外（IR) 图谱。

图 14所示为式 I化合物无定型粉末的 X射线粉末衍射图谱。具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。

本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在 100毫升的溶液中溶质的重量。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。实施例 1

制备化合物 I

参照美国专利 5376634实施例 1的方法，制备制得化合物 I的固体无定形粉末 76g，其 XRPD图谱参见附图 14。实施例 2

制备式 I化合物晶体 A

50°C下，将 3. 5g由实施例 1制得的化合物 I固体粉末，溶于 5ml水和 3ml 正丙醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 2. 0，将溶液冷却至 30°C，化合物 I的晶体析出，在 30°C继续搅拌 5小时，使得化合物 I的晶体逐渐长大。抽滤，得到式 I化合物晶体 A。其 XRPD、 IR图谱参见附图 1-2。实施例 3

制备式 I化合物晶体 A

10°C下，将 1. 5g由实施例 1制得的化合物 I固体粉末，溶于 20ml水和 10ml 正丙醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 5. 0。然后慢慢滴加 40ml正丙醇，再将溶液冷却至 -5°C， -5°C下搅拌 2小时。抽滤，得到式 I化合物晶体 A。其 XRPD、 IR图谱参见附图 1-2。实施例 4

制备式 I化合物晶体 A

30°C下，将 1. 6g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 9ml水中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 2. 8，将溶液冷却至 11°C，化合物 I的晶体析出，然后慢慢滴加 61ml乙醇， 11°C下继续搅拌 2小时。抽滤，得到式 I化合物晶体 A。其 XRPD、 IR图谱参见附图 1-2。实施例 5

制备式 I化合物晶体 A

28°C下，将 1. 8g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 5ml水中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 6， 28°C下缓慢滴加正丙醇 30ml，化合物 I的晶体析出。抽滤，得到式 I化合物晶体 A。其 XRPD、 IR图谱参见附图 1-2。实施例 6

制备式 I化合物晶体 A

30°C下，将 2. 8g由实施例 1制得的化合物 I固体粉末，溶于 7ml含有

0. 02mol/L, pH4. 0醋酸钠缓冲液的水溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 4. 0，缓慢滴加正丙醇 14ml，化合物 I的晶体析出。在 30°C继续搅拌 10小时，使得化合物 I的晶体逐渐长大。布式漏斗过滤，得到式 I化合物晶体 A。其 XRPD、 IR图谱参见附图 1-2。实施例 7

制备式 I化合物晶体 B

30°C下，将 2. 5g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 9ml水和 7ml正丙醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 4. 0，将溶液冷却至 10°C，化合物 I的晶体析出。然后慢慢滴加 16ml正丙醇， 10°C下搅拌 2小时。抽滤，真空干燥并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 6. 2%时，得到式 I化合物晶体 B。其 XRPD图谱参见附图 3。实施例 8

制备式 I化合物晶体 B

45°C下，将 1. 6g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 3ml水和 2ml乙醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 2，将溶液冷却至 30°C，化合物 I的晶体析出，慢慢降温至 10°C。然后慢慢滴加 25ml乙醇， 10°C下继续搅拌 2小时。抽滤，真空干燥，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 9. 0%时，得到式 I化合物晶体 B。其 XRPD图谱参见附图 3。实施例 9

制备式 I化合物晶体 B 28°C下，将 1. 8g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 5ml水和 5ml异丙醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 6，将溶液冷却至 17°C，化合物 I的晶体析出， 17°C下继续搅拌 2小时。抽滤，真空干燥，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 10. 1%时，得到式 I化合物晶体 B。其 XRPD图谱参见附图 3。实施例 10

制备式 I化合物晶体 B 将实施例 2所得到的晶型 A，真空干燥，去除水分，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 11. 9%时，得到式 I化合物晶体 B。其 XRPD图谱参见附图 3。实施例 11

制备式 I化合物晶体 C

将实施例 7所得到的晶型 B，继续真空干燥，去除水分，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含 t为 5. 1%时，得到式 I化合物晶体 C。其 XRPD、 IR图谱参见附图 4-5。实施例 12

制备式 I化合物晶体 C

将实施例 8所得到的晶型 B，继续真空干燥，去除水分，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 5. 9%时，得到式 I化合物晶体 C。其 XRPD、 IR图谱参见附图 4-5。实施例 13

制备式 I化合物晶体 C

将实施例 9所得到的晶型 B，继续真空干燥，去除水分，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 4. 1%时，得到式 I化合物晶体 C。其 XRPD、 IR图谱参见附图 4-5。实施例 14

制备式 I化合物晶体 C

0. 02mol/L, pH4. 0醋酸钠缓冲液的水溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 4. 0，缓慢滴加正丙醇 14ml，化合物 I的晶体析出。在 30°C继续搅拌 10小时，使得化合物 I的晶体逐渐长大。然后溶液冷却至 10°C，搅拌 3小时，布式漏斗过滤，得到式 I化合物晶体，真空干燥，去除水分，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 4. 5%时，得到式 I化合物晶体 C。其 XRPD、 IR 图谱参见附图 4-5。实施例 15

制备式 I化合物晶体 D

25°C下，将 2. 0g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 5ml水和 15ml甲醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 5，将溶液冷却至 10°C，化合物 I的晶体析出，然后慢慢降温至 -40°C， -40°C下继续搅拌 2小时。抽滤，得到式 I化合物晶体 D。其 XRPD、 IR图谱参见附图 6-7。实施例 16

制备式 I化合物晶体 E

40°C下，将 2. lg由实施例 1制得的化合物 I，溶于 5ml水和 16ml甲醇的混合溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 5，将溶液冷却至 12°C，化合物 I的晶体析出，然后慢慢加 60ml甲醇， 12°C下继续搅拌 2小时。抽滤，真空干燥，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 9. 5%时，得到式 I化合物晶体 E。其 XRPD、 IR图谱参见附图 8-9。实施例 17

制备式 I化合物晶体 F

40°C下，将 2. 5g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 5ml水，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 9，将溶液冷却至 35°C，化合物 I 的晶体析出， 35°C下继续搅拌 10小时。抽滤，得到式 I化合物晶体 F。其 XRPD、 IR图谱参见附图 10-11。实施例 18

制备式 I化合物晶体 G

20°C下，将 0. 23g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 5ml水，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 3. 9，将溶液冷却至 5°C，化合物 I的晶体析出， 5°C下继续搅拌 10小时。抽滤，真空干燥，并在真空干燥箱内放入五氧化二磷，当测得水分含量为 9. 8%时，得到式 I化合物晶体 G。其 XRPD、 IR图谱参见附图 12-13。实施例 19 用式 I化合物晶体 A制备式 II化合物

参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的合成

将本申请实施例 2所得到的式 I化合物晶体 A， (1. 07mmol , 1. 00g，）溶解于丽 F12ml，冰浴冷却至 0°C以下，加入二异丙基乙胺（ 0. 22g， 1. 67匪 ol ) ，保持温度在 0°C，缓慢加入 MKC-8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯基）异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2， 3-苯并三氮唑） (0. 53g， 1. 14mmol)，反应升温至 2- 6°C，反应 4小时，反应结束后直接将 60ml乙酸乙酯加入反应液中，继续搅拌 1小时，过滤，得米卡芬净二异丙基乙胺盐。将该盐溶于丙酮 30ml和乙酸乙酯 30ml，浆洗，过滤。真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度为 99. 15%，收率 91. 6%。实施例 20

分别用式 I化合物晶体 B、 C、 D、 E、 F、 G制备式 II化合物

将本申请实施例 7、实施例 14、实施例 15、实施例 16、实施例 17、实施例 18所得到的式 I化合物晶体 B、 C、 D、 E、 F、 G， (1. 07mmol , 1. 00g)。溶解于 DMF12ml，冰浴冷却至 0°C以下，各加入二异丙基乙胺（0. 22g， 1. 67匪 ol ) ，保持温度在 0 V，缓慢各加入 MKC-8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯基）异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2， 3-苯并三氮唑） (0. 53g， 1. 14mmol)，反应升温至 2- 6°C，反应 4小时，反应结束后，每反应液中分别加入 60ml乙酸乙酯，继续搅拌 1小时，过滤，得米卡芬净二异丙基乙胺盐。分别上述所得到盐用丙酮 30ml和乙酸乙酯 30ml，浆洗，过滤。真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度

结果和合成收率结果见表 1。

表 1

比较例 1

用式 I化合物无定形固体制备式 II化合物

参照 W02004014879中的米卡芬净合成工艺，由式 I化合物进行式 II化合物的成

将本申请实施例 1所得到的式 I化合物固体无定形粉末，（1. 07mmol， l. OOgJ o 溶解于丽 F12ml，冰浴冷却至 0°C以下，加入二异丙基乙胺 ( 0. 22g, 1. 67mmol ) ，保持温度在 0°C，缓慢加入 MKC- 8 ( 1- [4- [5- (4-戊氧基苯基）异噁唑 -3-基]苯甲酰氧基] -1H-1, 2 3-苯并三氮唑） (0. 53g, 1. 14 ol)，反应升温至 2-6°C，反应 4小时，反应结束后直接将 60ml乙酸乙酯加入反应液中，继续搅拌 1小时，过滤，得米卡芬净二异丙基乙胺盐。将该盐溶于丙酮 30ml和乙酸乙酯 30ml，浆洗，过滤。真空干燥米卡芬净二异丙基乙胺盐去除残留的有机溶剂， HPLC分析米卡芬净二异丙基乙胺盐纯度为 95. 75%, 收率 75. 2% 通过上述比较例可以得出，具有良好晶型的式 I化合物与无定形固体的 I化合物相比较，在制备式 II化合物时，式 II化合物的 HPLC纯度和合成收率都有显著的提高。比较例 2

_PH对制备式 I化合物晶体的影响

30°C下，将 1. 2 g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 6ml水，搅拌溶解。用冰乙酸调 pH至 1. 8，慢慢加入 20ml乙醇，化合物 I的固体析出。继续搅拌 1小时，抽滤，真空干燥，得到式 I化合物的固体 1. 0g。显微镜下观察固定的微观结构，为无定形固体，其 XRPD图谱参见附图 14 比较例 3

_PH对制备式 I化合物晶体的影响

30°C下，将 1. 2 g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 6ml水，搅拌溶解。用冰乙酸调 pH至 5. 4，慢慢加入 20ml乙醇，化合物 I的固体析出。继续搅拌 1小时，抽滤，真空干燥，得到式 I化合物的固体 0. 90g。显微镜下观察固定的微观结构，为无定形固体，其 XRPD图谱参见附图 14 比较例 4

_PH对制备式 I化合物晶体的影响

30°C下，将 1. 2 g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 6ml水，搅拌溶解。用冰乙酸调 pH至 6. 5，慢慢加入 20ml乙醇，化合物 I的固体析出。继续搅拌 1小时，抽滤，真空干燥，得到式 I化合物的固体 0. 86g。显微镜下观察固定的微观结构，为无定形固体，其 XRPD图谱参见附图 14 比较例 5

不同溶剂对制备式 I化合物晶体的影响

20°C下，将 2. 4g由实施例 1制得的化合物 I，溶于 7ml水，冰乙酸调 pH至 4. 0，搅拌，使化合物 I完全溶解。慢慢加入乙腈 15ml搅拌两小时有固体析出，显微镜下观察固定的微观结构，为无定形固体。抽滤，得到的化合物 I。其 XRPD 图谱参见附图 14。比较例 6

不同溶剂对对制备式 I化合物晶体的影响

8°C下，将 2. lg由实施例 1制得的化合物 I，溶于 7ml水，冰乙酸调 pH至 3. 8，搅拌，使化合物 I完全溶解。慢慢加入丙酮 20ml搅拌两小时有固体析出，显微镜下观察固定的微观结构，为无定形固体。抽滤，将得到的化合物 I，进行真空干燥。其 XRPD图谱参见附图 14。比较例 7

不同浓度溶解液对对制备式 I化合物晶体的影响

10°C下，将 l. Og由实施例 1制得的化合物 I固体粉末，溶于 25ml水溶液中，搅拌，使化合物 I完全溶解。冰乙酸调 pH至 4. 5。然后慢慢滴加 150ml正丙醇，再将溶液冷却至 -5°C， -5°C下搅拌 2小时。抽滤，真空干燥，得到式 I化合物的晶体 A 0. 41g。主要因为溶解液的浓度过低，导致式 I化合物结晶过程中收率偏低，即使再加入 150ml正丙醇， -5°C下搅拌 2小时。抽滤，真空干燥，得到式 I 化合物的晶体 A只得到 0. 52g。因此，化合物 I溶解液小于 50mg/ml的结晶制备工艺，不适合工业化生产。通过上述比较试验可以得出，结晶过程中 pH的选择对于获得式 I化合物是非常重要的。 pH控制在 2. 0-5. 0以外，则很难获得式 I化合物优异的晶体。显微镜观察为无定形固体， XRPD图谱也不具备晶体特征峰。

溶剂的选择对于获得式 I化合物是非常关键的。除上述实施例中提到的溶剂夕卜，其他的溶剂则很难获得式 I化合物优异的晶体。显微镜观察为无定形固体， XRPD图谱也不具备晶体特征峰。实施例 21

纯度与稳定性测试

在本实施例中，将比较例与实施例所得样品的纯度与稳定性进行比较。方法如下：

分别取比较例 2、比较例 3、比较例 4、比较例 5、比较例 6、比较例 7、实施例 1、实施例 2、实施例 3、实施例 4和实施例 5、实施例 6、实施例 7、实施例 8、实施例 9、实施例 10、实施例 11、实施例 12、实施例 13、实施例 14、实施例 15、实施例 16、实施例 17、实施例 18的样品，密闭置于 0-8°C保温放置 7天，然后分析样品的杂质含结果见下表 2:

由上述数据可见，式 I化合物的晶体具有更高的纯度，而且在长时间放置的青况下，具有更加优异的稳定性。实施例 22

药物组合物的制备

将 20g乳糖在低于 50°C加热下溶于纯水（200ml) 。冷却至 20°C—下后，向乳糖溶液中加入按实施例 7的方法获得的式 I化合物晶体 B 2.5g，在温和搅拌下避免产生气泡。在加入 2%柠檬酸水溶液（0.95ml) 后，向溶液中加入 0.4%氢氧化钠水溶液（约 24ml )，以调节 pH5. 5，然后用纯水稀释，产生给定的体积（ 250ml ) 。将所得的溶液分装到 100个 10ml体积的管形瓶中，每个管形瓶 2. 5ml。用常规方法，用冻干机将各个管形瓶中的溶液冻干，以获得各含 25mg式 I化合物晶体的冻干组合物。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用以限定本发明的实质技术内容范围，本发明的实质技术内容是广义地定义于申请的权利要求范围中，任何他人完成的技术实体或方法，若是与申请的权利要求范围所定义的完全相同，也或是一种等效的变更，均将被视为涵盖于该权利要求范围之中。

Claims

权利要求

1. 一种环肽类物质的晶体八，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 A的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角有峰： 7· 1±0· 2 °， 8·0±0·2 °， 14·7±0·2 °， 16·8±0· 2 °， 18.9±0.2 °， 20.3±0.2 °， 21.1±0.2 ° ；

式 I

2.如权利要求 1所述的环肽类物质的晶体 A，其特征在于，所述晶体 A的 X- 射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2 Θ 角还有峰： 7.3±0.2 °， 11.9±0.2 °， 12.3±0.2 °， 16.1±0.2 °， 18.5±0.2 °， 19.6±0.2 °， 22.1±0.2， 22.8士 0.2 °， 23.1±0.2 °， 24.3±0.2 °， 25.4±0.2 °， 28.3±0.2 °， 33.5±0.2 °。

3. 一种环肽类物质的晶体其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 B的 X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述 2Θ角有峰: 7.3±0.2 °， 11.9±0.2 °， 12.8±0.2 °， 16.8±0.2 °， 19.6±0.2 21.1±0.2 °，22.1±0.2 °，22.8±0.2 °，24.3±0.2 °， 25.4±0.2 °。

4. 一种环肽类物质的晶体0：，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 C的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2Θ角有峰： 8.6±0.2 °，11.9±0.2

5. 一种环肽类物质的晶体1)，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 D的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2Θ角有峰： 5.6±0.2 °，14.4±0.2 °，19.8±0.2 °，22.7±0.2 °，23.0±0.2 °,23.9 + 0.2 °。

6. 如权利要求 5所述的环肽类物质的晶体 D，其特征在于，所述晶体 D的 X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述 2Θ角还有峰： 7.4±0.2 °，8.2±0.2 °，9.7±0.2 °，12.2±0.2 °，16.5±0.2 °，18.6±0.2 °，22.3±0.2 °，28.2±0.2 °。

7. 一种环肽类物质的晶体5，其结构如式 I所示，其中 R表示 Η或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 Ε的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2Θ角有峰： 9.7±0.2 °，19.8±0.2 °，23.0±0.2

8. 一种环肽类物质的晶体？，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 F的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2Θ角有峰： 7.0±0.2 °， 7.9±0.2 °， 12.6±0.2 °， 14.1±0.2 °， 18.5±0.2 °， 20.6±0.2 °， 21.6±0.2 °， 35.6±0.2

9. 如权利要求 8所述的环肽类物质的晶体 F，其特征在于，所述晶体 F的

X-射线粉末射（XRPD) 图上在下述 2Θ角还有峰： 7.3±0.2 °， 12.1 ±0.2 °， 14.4 + 0.2 °， 16.7±0.2 °， 19.8±0.2 °， 21.1±0.2 °， 22.9±0.2 °， 23.6±0.2 °， 24.9 ±0.2 °， 30.7±0.2 °。

10. 一种环肽类物质的晶体 G，其结构如式 I所示，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳离子，所述晶体 G的 X-射线粉末衍射（XRPD) 图上在下述 2Θ角有峰： 7.3±0.2 °， 19.8±0.2 °，21.1±0.2 °。

11.一种制备如权利要求 1或 2所述的环肽类物质晶体 A的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(a) 将如式 I所示化合物溶解在水或有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH；

(b)通过降温和 /或添加有机溶剂（ i )得到如权利要求 1或 2所述环肽类物质晶体 A;

其中，所述有机溶剂（i)选自：乙醇、正丙醇、异丙醇中的一种或一种以上。

12. 如权利要求 11所述的制备方法，其特征在于，所述步骤 (a)的溶解液控制 pH在 2.0至 5.0。

13. 如权利要求 11所述的制备方法，其特征在于，步骤（a) 中所述溶解液的总体积计，其中含有如式 I所示化合物 50至 500 mg/ml。

14. 一种制备如权利要求 3或 4所述的环肽类物质晶体的方法，其特征在于，所述的方法包含以下步骤：

(a) 将如式 I所示化合物溶解在水或有机溶剂（ i )的水性溶液中，控制含式

I化合物的溶解液的 pH;

(c) 真空干燥步骤（b) 所得的晶体 A，控制水分含量，得到如权利要求 3 或 4所述晶体；

15. 如权利要求 14所述的制备方法，其特征在于，所述控制水分含量小于 6%，得到如权利要求 4所述的晶体 C; 控制水分含量范围为 6%-12%，得到如权利要求 3所述的晶体 B。

16. 一种制备如权利要求 5或 6所述的环肽类物质晶体 D的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

( a) 将如式 I所示化合物溶解在水或含甲醇的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b)通过降温和 /或添加甲醇得到如权利要求 5或 6所述环肽类物质晶体 D。

17. 一种制备如权利要求 7所述的环肽类物质晶体 E的方法，其特征在于，所述的方法包含以下步骤：

( a) 将如式 I所示化合物溶解在水或含有甲醇的水性溶液中，控制含式 I化合物的溶解液的 pH;

(b)通过降温和 /或添加甲醇得到如权利要求 5或 6所述环肽类物质晶体 D;

( c) 真空干燥步骤（b) 所得的晶体 D，控制水分含量，得到所述晶体 E。

18.—种制备如权利要求 8或 9所述的环肽类物质晶体 F的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(b) 通过降温得到如权利要求 8或 9所述环肽类物质晶体 F。

19. 一种制备如权利要求 10所述的环肽类物质晶体 G的方法，其特征在于，所述的方法包含以下步骤：

(b) 通过降温得到如权利要求 8或 9所述环肽类物质晶体 F;

( c) 真空干燥步骤（b) 所得的晶体 F，控制水分含量，得到所述晶体 G。

20. 一种如权利要求 1-10任一所述的环肽类物质晶体的用途，其特征在于，备如式 II所示的化合物，其中 R表示 H或者能形成药学上可接受的盐的阳

21. 一种如权利要求 1 -10任一所述的环肽类物质晶体的用途，其特征在于，用于制备治疗真菌感染的药物。

22.—种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物中含有如权利要求 1-10 任一所述的环肽类物质晶体和药学上可接受的载体。

23.一种如权利要求 22所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

将如权利要求 1-10任一所述的环肽类物质晶体和药学上可接受的载体混合，得到如权利要求 22所述的药物组合物。

24. 一种环肽类物质的组合物，其特征在于，所述的组合物中含有权利要求 1或 2所述的环肽类物质晶体、权利要求 3所述的环肽类物质晶体 B和权利要求 4所述的环肽类物质晶体 C中的一种或多种混合物。

25. 一种环肽类物质的组合物，其特征在于，所述的组合物中含有权利要求 5或 6所述的环肽类物质晶体 D和权利要求 7所述的环肽类物质晶体 E。

26. 一种环肽类物质的组合物，其特征在于，所述的组合物中含有权利要求 8或 9所述的环肽类物质晶体 F和权利要求 10所述的环肽类物质晶体 G。