WO2013097352A1

WO2013097352A1 - 联苯乙酸氨丁三醇盐在制备用于治疗眼部炎症的药物中的用途及包含其的滴眼液

Info

Publication number: WO2013097352A1
Application number: PCT/CN2012/072327
Authority: WO
Inventors: 杨威; 王伟; 王茜莎; 刘亚楠; 周亚耀
Original assignee: 广东中科药物研究有限公司
Priority date: 2011-12-29
Filing date: 2012-03-14
Publication date: 2013-07-04
Also published as: CN102885803A

Abstract

本发明提供了联苯乙酸氨丁三醇盐在制备用于治疗眼部炎症反应的药物中的用途。本发明还提供了一种用于治疗眼部炎症的滴眼液，所述滴眼液包含联苯乙酸氨丁三醇盐。此外，本发明提供了所述滴眼液的制备方法及其在制备用于治疗眼部炎症反应的药物中的用途。本发明还提供了一种用于治疗眼部炎症反应的方法，所述方法包括给有治疗需要的患者施用联苯乙酸氨丁三醇盐或所述滴眼液。

Description

联苯乙酸氨丁三醇盐在制备用于治疗眼部炎症的药物中的用途

及包含其的滴眼液技术领域

本发明属于医药领域，具体而言，本发明涉及联苯乙酸氨丁三醇盐在制备用于治疗眼部炎症的药物中的用途以及包含其的滴眼液。背景技术

变态反应性结膜炎是最常见的免疫性眼病之一，据统计世界上约有 5% 以上的人因变态反应性眼病而就诊，而其中变态反应性结膜炎的比例超过 50%。近年来，由于眼部化妆品的使用和某些地区空气污染的加重，变态反应性结膜炎的发病率进一步上升，因此研究变态反应性结膜炎的治疗方法意义重大。

人类应用解热镇痛药已有 150余年历史，现在，解热镇痛药已成为人们曰常生活中不可缺少的重要药品，是全球应用面最广，应用量最大的医药品种之一。全球解热镇痛药年产量已达 20余万吨，制剂数千亿片。在此类药物中，朴热息痛、阿司匹林、布洛芬、蔡普生、双氯芬酸为五大支柱产品，合计年销售额达 50多亿美元。但是，大多数的非 <甾类抗炎药由于其水溶性、刺激性等原因不能制备成滴眼液用于目艮部炎症反应的治疗，并且即使解决了其水溶性问题，仍然具有较强的刺激性。例如本发明人在实验过程中发现，布洛芬虽然可以与精氨酸配制成注射液使用，但依然对眼部具有较强的刺激性，因此不能制备成滴眼液。

因此，本领域仍然需要开发新型的安全、低刺激性的眼部炎症治疗药物，特别是需要开发新型的可方便、安全施用的滴眼液。发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明人进行了大量实验，寻找可有效治疗眼部炎症反应且刺激性低的药剂。通过药学、药理试验研究发现，采用联苯乙酸氨丁三醇盐，能够有效治疗目艮部炎症反应并同时具有良好耐受性。

因此，本发明的一个目的是提供联苯乙酸氨丁三醇盐制备治疗目艮部炎症的药物中的用途。本发明的另一个目的是提供一种用于治疗目艮部炎症反应的滴眼液。

本发明的又一个目的是提供该滴眼液的制备方法。

本发明的还一个目的是提供治疗患者的眼部炎症反应的方法。

为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一方面，本发明提供了联苯乙酸氨丁三醇盐在制备用于治疗眼部炎症反应的药物中的用途。

联苯乙酸氨丁三醇盐的结构如下式 I所示：

I

分子量为 333.14, 可以商购或根据中国专利 ZL200610143047.9公开的方法进行制备。

并且，所述眼部炎症反应优选结膜炎，进一步优选变态反应性结膜炎。另一方面，本发明还提供一种用于治疗眼部炎症的滴眼液，所述滴眼液包含联苯乙酸氨丁三醇盐；优选地，所述滴眼液还包含药学上可接受的添加剂，所述添加剂包括 pH调节剂、渗透压调节剂、抑菌剂和粘度调节剂。

其中，优选地，所述 pH调节剂为碳酸钠、氢氧化钠、磷酸盐、硼酸盐、硼酸中的一种或多种；

所述渗透压调节剂包括氯化钠、硼酸、葡萄糖、硼砂中的一种或多种；所述抑菌剂包括硝酸苯汞、苯扎氯铵、苯扎溴铵、洗必泰、尼泊金类、山梨酸、三氯叔丁醇、苯氧乙醇中的一种或几种；

所述粘度调节剂包括曱基纤维素、聚乙烯醇、聚维酮、聚乙二醇中的一种或几种。

实验证明，本发明提供的滴眼液无菌、无刺激性，可以有效治疗眼部炎症反应。

在本发明提供的滴眼液中，所述联苯乙酸氨丁三醇盐的浓度为

0.01-1.0%; 优选为 0.48~0.96%。

并且，所述滴眼液的 pH为 6~8 , 优选 7~8。

又一方面，本发明提供上述滴眼液的制备方法，包括下述步骤：将联苯乙酸氨丁三醇盐溶解于水中，任选地加入药学上可接受的添加剂，然后用 pH调节剂调节 pH为 6~8、优选 7~8, 过滤除菌，灌装，封盖，包装。还一方面，本发明还提供上述滴眼液在制备用于治疗眼部炎症反应的药物中的用途。其中，所述眼部炎症反应优选结膜炎，进一步优选变态反应性结膜炎。

再一方面，本发明提供一种用于治疗眼部炎症反应的方法，所述方法包括给有治疗需要的患者施用联苯乙酸氨丁三醇盐或上述滴眼液。

其中，所述眼部炎症反应优选结膜炎，进一步优选变态反应性结膜炎。具体而言，本发明人设计了一系列不同浓度的联苯乙酸氨丁三醇盐的药效和刺激性实验，其中配制了浓度分别为 0.04%、 0.08%、 0.16%、 0.32%、 0.48%、 0.96%的联苯乙酸氨丁三醇溶液，并调节 pH值至 7~8 , 进行了 "联苯乙酸氨丁三醇系列不同浓度滴眼液对豚鼠结膜炎的影响试验研究 "及刺激性试验，结果发现， 0.04%的联苯乙酸氨丁三醇溶液对豚鼠结膜炎症状就具有良好的改善作用， 0.08%、 0.16%、 0.32%、 0.48%、 0.96%对豚鼠结膜炎症状的改善具有剂量相关性，并且优于 0.1%的普拉洛芬滴眼液（市售）。另外刺激性试验发现对新西兰兔眼睛未见刺激性反应。

综上所述，本发明人通过大量实验发现，联苯乙酸氨丁三醇盐或包含其的滴眼液可以用于治疗眼部炎症反应，并且该滴眼剂消炎效果显著，且对眼部无刺激，受试者可以良好耐受，因此具有优良的应用前景。实施发明的最佳方式

下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等，如无特殊说明，均可自常规生化试剂商店或药品经营企业购买得到。其中实施例中采用的联苯乙酸氨丁三醇盐中国专利 ZL200610143047.9制备得到。实施例 1: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐，分别加入到 1000ml的注射用水中，搅拌 5~10分钟，用碳酸钠调节 pH值至 7~8之间，过滤除菌，灌装到 5ml的经过洗涤干燥的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6, 联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为 0.04%、 0.08%、 0.16%、 0.32%, 0.48%, 0.96%。实施例 2: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐， 9g的氯化钠， 3g的羟丙曱纤维素，分别加入到 800ml的注射用水中，搅拌 5~10分钟，用 1%的无水碳酸钠调节 pH值至 7~8之间，补加注射用水至 1000ml,经 0.22 μ m的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装到 1ml的经过洗涤干燥辐射灭菌的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6, 联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分另¹ J为 0·04^ο/_ο、 0.08%, 0.16%, 0.32%, 0.48%, 0·96^ο/_ο。实施例 3: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取磷酸氢二钠 29.9g, 磷酸二氢钠 7.5g, 加入到 800ml的注射用水中，搅拌使澄清后，分别加入 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐，搅拌 5~10分钟至溶解后，补加注射用水至 1000ml, 经 0.22 μ ηι的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装到 lml的经过洗涤干燥辐射灭菌的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6, 联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为

0.04%, 0.08%, 0.16%, 0.32%, 0.48%, 0.96%。实施例 4: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐， 20g的甘油，分别加入到 800ml的注射用水中，搅拌 5~10分钟，用 1%的无水碳酸钠调节 pH值至 7~8之间，补加注射用水至 1000ml, 经 0.22 μ m的滤膜过滤除菌，无菌条件下灌装到 lml的经过洗涤干燥辐射灭菌的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6, 联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为 0.04%、 0.08%、 0.16%, 0.32%, 0.48%, 0.96%。实施例 5: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐，分别加入到 800ml的注射用水中，搅拌 5~10分钟，用 1%的无水碳酸钠调节 pH值至 7~8之间，补加注射用水至 1000ml, 121 °C热压灭菌 15min, 无菌条件下灌装到 lml的经过洗涤干燥辐射灭菌的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6, 联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为 0.04%、 0.08%、 0.16%、 0.32%、 0.48%, 0.96%。实施例 6: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐， O. lg 的苯扎溴铵或苯扎氯铵，分别加入到 800ml的注射用水中，搅拌 5~10分钟，用碳酸钠调节 pH值至 7~8之间，补加注射用水至 1000ml, 经 0.22 μ ηι的滤膜过滤除菌，制得滴眼液 1至 6,联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为 0.04%、 0.08%、 0.16%、 0.32%、 0.48%、 0.96%; 灌装到 5ml的经过洗涤干燥辐射灭菌的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。实施例 7: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取硼酸 10.5g, 硼砂 3g, 加入到 800ml的注射用水中，搅拌使澄清后，过滤除菌，分别加入 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g的联苯乙酸氨丁三醇盐， O. lg的苯扎溴铵或苯扎氯铵，搅拌 5~10分钟至溶解后，补加注射用水至 1000ml, 经 0.22 μ ηι的滤膜过滤除菌，灌装到 5ml的经过洗涤干燥的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6, 联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为

0.04%, 0.08%, 0.16%, 0.32%, 0.48%, 0.96%。实施例 8: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液的制备

称取磷酸氢二钠 29.9g, 磷酸二氢钠 7.5g, lg的硫柳汞，加入到 800ml的注射用水中，搅拌使澄清后，分别加入 0.4g、 0.8g、 1.6g、 3.2g、 4.8g、 9.6g 的联苯乙酸氨丁三醇盐，搅拌 5~10分钟至溶解后，补加注射用水至 1000ml, 经 0.22 μ m的滤膜过滤除菌，灌装到 5ml的经过洗涤干燥的滴眼液用塑瓶中，封盖，包装。制得滴眼液 1至 6,联苯乙酸氨丁三醇盐浓度分别为 0.04%、 0.08%、 0.16%, 0.32%, 0.48%, 0.96%。实施例 9: 联苯乙酸氨丁三醇不同浓度滴眼液对豚鼠结膜炎的影响试验研究

试验方法：

豚鼠（Hartley豚鼠， 3~4月龄，雌雄各半，体重 350 ~ 450g, 由广东省医学实验动物中心提供） 120只，除溶媒对照组（10只）夕卜，其余各组按文献报道的方法（ "麝香滴眼液对实验变应性结膜炎的治疗研究"，《中成药》， 2010, 32 ( 6 ) : 907-911 ; 《药理实验方法学》 [ Μ ] ·徐叔云，卞如濂，陈修等，第 3版，北京:人民卫生出版社， 2002:236-917 )制备变应性结膜炎动物模型。

①致敏：每只豚鼠分别给予腹腔注射 OVA (卵清白蛋白 )混悬液（ OVA 0.1 mg与 AL(OH)₃5mg, 溶于 1 mL生理盐水配成），同时给溶媒对照组每只注射生理盐水 lml, 14天后再次注射。

②模型评价及分组：腹腔注射完成以后第 7天，进行被动皮肤免疫反应 ( PCA )试验，确定 OVA-IgE抗体效价升高为造模成功。

随机选取造模成功动物 80只，其中有 60只分为模型组； 10只分为阳性对照组； 10只分为模型对照组。此外，选取溶媒对照组 10只。共 90只小鼠，每组雌雄各半。

③激发及给药：

将 OVA生理盐水稀释液 (5mg/mL)用微量加样器滴入双眼球结膜嚢内，每眼 20μ , 每日 1次，间隔一天激发一次，持续一周。同时，按照下表 1给每组小鼠双眼给予相应药液或生理盐水，每眼 20μΙ^，每日 1次，连续一周。

表 1 各组小鼠给药情况

④症状观察及指标测定：

( 1 ) 眼部症状观察和评分

于末次抗原攻击后 30min, 用裂隙灯对豚鼠眼部症状进行观察评分，评分标准如下： A. 结膜充血（指睑结膜、球结膜部位）：

血管正常 0分；

血管充血呈鲜红色 1分；

血管充血呈深红色，血管不易分辨 2分；

弥漫性充血呈紫红色 3分。

B. 结膜水肿：

无 0分；

轻微水肿（包括瞬膜） 1分；

明显水肿，伴部分眼睑外翻 2分；

水肿至眼睑近半闭合 3分；

水肿至眼睑大半闭合 4分。

C. 分泌物：

无 0分；

少量分泌物 1分；

分泌物使眼睑和睫毛湿或粘着 2分；

分泌物使整个眼区潮湿或粘着 3分。

评分的结果为 3项分值累计，即为充血、水肿和分泌物得分的合计得分。 ( 2 )搔抓反应计数

抗原攻击后连续观察 20 min, 记录搔抓次数，眼部搔抓反应以豚鼠前肢移向眼部超过 2次为一次进行定义。

试验结果：

2.1 目艮部症状观察评分

试验结果（表 2 )表明：模型组症状评分明显高于溶媒对照组（ρθ.001 ) , 各用药组的症状评分均低于模型组（ <0.05或 < 0. 01或 0.001 ) 。联苯乙酸氨丁三醇系列滴眼液剂量 2〜剂量 6均优于普拉洛芬滴眼液组 ( p <0.05或 p < 0. 01或 0.001 ) 。

2.2搔抓反应计数

试验结果（表 2 )表明：模型组豚鼠搔抓反应次数明显高于溶媒对照组 ( p <0.001 ) , 各用药组豚鼠搔抓反应次数均低于模型组（ρ <0.05 ) , 联苯乙酸氨丁三醇系列滴眼液剂量 2〜剂量 6均优于普拉洛芬滴眼液组（ p <0.05或 p < 0. 01或 0.001 ) 。

表 2 联苯乙酸氨丁三醇系列滴眼液对豚鼠结膜炎症状评分及搔抓反应的影响

与模型组比较： *ρ<0.05, **ρ<0.01, ***ρ<0.001

与普拉洛芬滴眼液组比较： #ρ<0.05, ##ρ<0.01, ###ρ<0.001

试验结论：联苯乙酸氨丁三醇系列不同浓度滴眼液对豚鼠结膜炎症状具有良好的改善作用，并且优于普拉洛芬滴眼液。实施例 10: 联苯乙酸氨丁三醇滴眼液新西兰兔眼刺激性试验研究方法：

( 1 )试验方法：

新西兰兔， 2.0-2.5kg, 雌雄各半，由广东省医学实验动物中心提供，按文献报道的方法（ "盐酸左氧氟沙星滴眼液兔眼刺激试验研究" ，《科技广场》， 2010, 10: 118-119; "2%含量的过乙酸眼刺激实验" ，《中国比较医学杂志》， 2007,17 ( 3 )： 168-170； "精胺普鲁兰糖对荧光素钠角膜通透性的影响" ，《眼科研究》， 2010, 1 28, ( 10 ) ： 917-920; "氯霉素及其主要降解产物滴眼液的家兔眼刺激试验" ，《食品与药品》， 2007, 9 ( 2 ) ： 25-26 )进行兔眼刺激试验。

a) 选用检疫合格并且用 0.5%荧光素钠及裂隙灯显微镜进行双眼检查合格（无眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤）的 6只动物用于本试验研究。荧光素钠染色后 1小时才能进行试验。采用同体左右侧眼自身对比法，左侧给予 2滴浓度为实施例 1的 0.48%联苯乙酸氨丁三醇滴眼液（每滴体积约为 50uL, 每次给药体积为 100 uL ) , 使兔眼睑被动闭合约 10秒；右侧给予等体积的 0.9 %氯化钠注射液。给药顺序为先左侧后右侧。

b) 荧光素钠检查方法：将试验眼的眼睑拉低呈杯状，滴入一滴 0.5%荧光素钠溶液到角膜表面，约 10秒后，用 0.9%氯化钠注射液充分沖洗，在暗室内用手握式长波紫外照明灯照明，如果出现角膜损伤，表现为亮的黄绿色荧光区域。

C) 裂隙灯检查方法：打开主电源开关，将照明亮度调节适当。调节裂隙宽度调节旋钮，使裂隙宽度为 2~3mm。用双手向两边掰动显微镜棱镜盒，调节瞳距至双眼同时通过目镜观察到瞄靶上的图像，即获得立体图像。把动物固定在颌托架前，调节颌托高度调节手柄，使动物的眼角大致在瞄靶的中心水平线上。移动滑盘，使光斑和显微镜大致对准目标。通过目镜边观察边调节，以准确对准目标，得到清晰得观察像。在水平面内转动滤色片选择杆，可在光路中分别转换四种不同的滤色片。首先使用隔热滤色片（白光），这样可以使动物感觉更舒适，检查角膜表面及虹膜并拍照，然后使用蓝色滤色片（蓝光）进行荧光素检查并拍照。拍照时，用 USB连接线使显微镜与计算机连接起来，打开 Phmias图像采集软件进行图像采集。

( 2 )观察指标：

动物称重：检疫结束期、给药的第 8天、第 15天、第 22天、第 28天和末次给药后 72小时进行称重。

动物状态观察：给药期及停药期间，每天观察 1次每例动物的状态。 a) 动物眼部观察：

观察兔眼的局部反应情况：每天每次给药前，第 8天、第 15天、第 22天末次给药后约 1小时及第 28天末次给药后 1、 2、 4、 24、 48及 72小时观察动物双眼的局部反应情况和对眼部反应进行评分，评分标准详见表 3。按表 3的要求，将每一个观察时间点每一动物的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分总和除以动物数，即得最后均值。除了观察所列出的结膜、角膜和虹膜损伤外，其他所观察到的损伤也应记录。

眼刺激反应评

眼刺激反应分值角膜：

无混浊 0 散在或弥漫性混浊，虹膜清晰可见 1 半透明区易分辨，虹膜模糊不清 2 出现灰白色半透明区，虹膜细节不清，瞳孔大小勉强可见 3 角膜不透明，虹膜无法辨认 4 虹膜：

正常 0 皱褶明显加深，充血、肿胀、角膜周围有轻度充血，瞳孔对

1 光仍有反应

出血 /肉眼可见坏死 /对光无反应（或其中一种） 2 结膜：

充血（指睑结膜和球结膜）

血管正常 0 血管充血呈鲜红色 1 血管充血呈深红色，血管不易分辨 2 弥漫性充血呈紫红色 3 水肿：

无水肿 0 轻微水肿（含眼睑） 1 明显水肿伴部分眼睑外翻 2 水肿至眼睑近半闭合 3 水肿至眼睑超过半闭合 4 分泌物：

无分泌物 0 少量分泌物 1 分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 2 分泌物使整个眼区潮湿或粘着 3 最大总积分 16 b) 荧光素染色检查：每天第一次给药前、第 8天、第 15天、第 22天末次给药后约 1小时及第 28天末次给药后 1、 2、 4、 24、 48及 72小时均对兔双眼进行荧光素染色检查。

c) 裂隙灯检查：检疫结束期、给药的第 8天、第 15天、第 22天和末次给药后 72小时均对兔双眼进行裂隙灯检查。

( 3 )动物处理方法：试验结束后，动物移交至动物管理组用于试验技能培训。

( 4 )结果判定：按表 4判断联苯乙酸氨丁三醇滴眼液的目艮刺激程度，对所有肉眼观察结果进行综合评价。

表 4 目艮刺激性评价标准

结果：

( 1 )动物一般状况观察：试验期间各例动物外观特征、行为活动、呼吸及粪便性状等均未见明显异常。

( 2 ) 肉目艮观察：

目艮刺激反应评分结果：各例动物左右眼分别给予联苯乙酸氨丁三醇滴眼液和 0.9%氯化钠注射液后，在各个观察时间点内分别观察眼角膜、虹膜和结膜刺激反应情况，结果表明各例动物左右眼在各个观察时间点内角膜、虹膜的刺激性反应评分值均为 0 ,但部分动物左右眼出现结膜血管轻微充血现象，评分值较小，均为 1分，左眼评分均值在 0~1.00范围，右目艮评分均值在 0~0.83 范围。 6例动物左右眼刺激性反应评分情况，详见表 5和 6。

荧光素钠眼部检查结果：观察期间，各例动物左右眼角膜区域均出现不同程度的浅绿色或亮绿色荧光区域或荧光点现象，详见表 7和 8。

裂隙灯检查：给药前、给药第 8、 15、 22天及第 28天末次给药后 72小时均对兔双眼裂隙灯检查及拍照。白光检查结果为各检查时间点内，各例动物双眼角膜，虹膜及结膜均未见明显异常变化；蓝光检查结果为个别动物出现不同程度的浅绿色或亮绿色荧光区域或荧光点现象。表 5 联苯乙酸氨丁三醇滴眼液眼刺激性试验

受试物侧（左眼）每天眼刺激性反应评价表（n=6 )

表 6 联苯乙酸氨丁三醇滴眼液眼刺激性试验阴性对照侧（右眼）每天眼刺激性反应评价表（n=6 )

表 7 联苯乙酸氨丁三醇滴眼液眼刺激性试验受试物侧（左眼）角膜发生荧光现象一览表（n=6 )

备注： "+"表示角膜出现荧光区域， "-"表示未出现荧光区域。表 8 联苯乙酸氨丁三醇滴眼液眼刺激性试验

阴性对照侧（右眼）角膜发生荧光现象一览表（ n=6 )

备注： "+"表示角膜出现荧光区域， "-"表示未出现荧光区域。

结论：在本试验条件下，联苯乙酸氨丁三醇滴眼液（给药浓度： 0.48% ) 连续 28天多次滴眼，对兔眼未见引起刺激性反应。