CN113262235B

CN113262235B - 新琼寡糖在治疗眼科疾病方面的新用途

Info

Publication number: CN113262235B
Application number: CN202110450034.0A
Authority: CN
Inventors: 产竹华; 易志伟; 曾润颖; 曾翰庭
Original assignee: Third Institute of Oceanography MNR
Current assignee: Third Institute of Oceanography MNR
Priority date: 2021-04-25
Filing date: 2021-04-25
Publication date: 2022-10-21
Anticipated expiration: 2041-04-25
Also published as: CN113262235A

Abstract

本发明涉及新琼寡糖在治疗眼科疾病方面的新用途，具体为新琼寡糖在制备治疗和/或预防眼科疾病的药物中的用途，其中，所述眼科疾病包括干眼症以及因眼表干燥而引起的其他眼科疾病。本发明通过动物实验证明，新琼寡糖对于干眼症的治疗具有优异的技术效果，而且，针对由眼表干燥所引起的角膜缺陷、结膜缺陷等症状或疾病，新琼寡糖也能起到明显的改善和治疗作用。

Description

新琼寡糖在治疗眼科疾病方面的新用途

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及新琼寡糖在治疗干眼症方面的新用途。

背景技术

干眼症是临床上常见的眼部疾病，又称角结膜干燥症。我国干眼症患病率大幅上升，已达21-30％，成为眼科门诊最常见的疾病。我国干眼发病率高于欧美国家，预计未来5年干眼患者人数还将以每年10％以上的速度上升，并趋于年轻化。干眼症会引起眼部不适，如灼烧感、刺痛感、异物感、流泪、眼疲劳、干燥、视物模糊、眼表上皮细胞病变等，严重影响视力相关的生活质量，已成为危害人民群众公共卫生健康、影响民众日常生活质量的一类重要的眼科疾病。

泪液对眼睛具有天然的防护机制，对眼睛具有重要的保护和营养作用。泪液能冲洗有害物质，保持眼睛清洁；泪液含有多种溶菌酶和免疫球蛋白，能预防眼睛感染；泪液能润滑眼球，使眼球转动时感到舒适。干眼症患者主要的表现为泪液分泌量降低，从而引起眼睛的不适感，因此治疗干眼症一般要从保护泪液着手。

目前，人工泪液是治疗干眼症的主要手段，人工泪液对轻中度干眼有效，但对重度干眼症的治疗效果尚未见报道。对于重度干眼，临床常使用免疫抑制剂如环孢素A(CsA)以及糖皮质激素、四环素等药物治疗。CsA于2002年12 月获得FDA批准，成为唯一被批准用于治疗干眼的临床药物。然而，约有17％的患者报告说使用CsA后眼睛出现刺痛，约6％的患者因为不适而停止治疗。也有报道认为CsA会升高炎症信号通路STAT磷酸化，并导致内皮细胞凋亡，这可能是CsA引起毒性的原因之一。

根据现有技术可知，临床上用于治疗干眼的药物可选择性有限，本领域亟需开发一种有效治疗干眼症的药物。

发明内容

本发明的目的在于提供新琼寡糖在治疗眼科疾病方面的新用途，对于干眼症、角膜损伤、结膜损伤以及其他因眼表干燥而引起的眼科疾病，新琼寡糖具有优异的疗效。

为此，第一方面，本发明提供新琼寡糖在制备治疗和/或预防眼科疾病的药物中的用途。

根据本发明第一方面所述的用途，所述眼科疾病包括干眼症。

进一步，所述干眼症为泪液缺乏性干眼症或蒸发过强性干眼症。

进一步，所述干眼症为重度干眼症。

根据本发明第一方面所述的用途，所述眼科疾病包括因眼表干燥而引起的其他眼科疾病。

进一步，所述因眼表干燥而引起的其他眼科疾病包括：角膜孙损伤如干燥性角膜炎，结膜损伤如干燥性结膜炎，由于眼表干燥引起的泪囊炎、泪腺炎、睑缘炎、视网膜血管炎、巩膜炎、眼眶骨膜炎、眼色素层炎或葡萄膜炎。

进一步，所述新琼寡糖作为制备治疗和/或预防眼科疾病的药物的活性成分。

进一步，所述新琼寡糖选自下组中的一种或两种以上：新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖、新琼十二糖。

新琼寡糖是提取自红藻的寡糖，按聚合度多少区分，主要包括新琼二糖、新琼四糖、新琼六糖、新琼八糖、新琼十糖、新琼十二糖等。新琼寡糖已经被批准可用于食品、药物、化妆品等领域，具有良好的生物安全性，无副作用、无刺激性。

进一步，所述治疗和/或预防眼科疾病的药物中，所述新琼寡糖的浓度为0.01wt％至10wt％。

进一步，所述新琼寡糖在制备治疗和/或预防眼科疾病的药物中与药学上可接受的辅料联合使用。

进一步，所述药学上可接受的辅料包含含水溶液载体。

进一步，所述含水溶液载体包括选自下组中的一种或两种以上：蒸馏水、磷酸缓冲盐水、平衡盐溶液和盐水。

进一步，所述治疗和/或预防眼科疾病的药物的剂型为溶液、胶、滴液、膏、悬浮液、微乳、纳米颗粒、脂质体、乳液或糊等。

进一步，所述新琼寡糖与药学上可接受的辅料制备成滴眼剂。

进一步，所述治疗和/或预防眼科疾病的药物施用于眼部。

本发明的第二方面，提供一种治疗和/或预防眼科疾病的方法，包括向有需要的对象施用有效剂量的新琼寡糖。

进一步，所述有需要的对象为哺乳动物，例如鼠、猴、马、猫、犬、人等。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本发明提供了新琼寡糖在治疗和/或预防眼科疾病方面的新用途，已通过动物实验证明，新琼寡糖对于干眼症的治疗具有优异的技术效果，甚至优于临床药物环孢素A。此外，本发明还发现，针对眼表干燥所引起的角膜功能缺陷、结膜细胞功能缺陷等症状或疾病，新琼寡糖也能起到明显的改善和治疗作用。根据本发明已经公开的新琼寡糖的上述功能，可知晓新琼寡糖对于由眼表干燥引起的其他眼科疾病也具有一定的治疗和预防作用。

附图说明

通过阅读下文优选实施方式的详细描述，各种其他的优点和益处对于本领域普通技术人员将变得清楚明了。附图仅用于示出优选实施方式的目的，而并不认为是对本发明的限制。在附图中：

图1为小鼠泪液分泌量检测结果；

图2为小鼠角膜上皮OGD染色的荧光成像结果图；

图3为小鼠角膜上皮OGD染色评分的统计分析结果；

图4为小鼠结膜杯状细胞PAS染色的显微镜成像结果图；

图5为小鼠结膜杯状细胞PAS染色结果的定量统计分析图。

具体实施方式

下面将参照附图更详细地描述本公开的示例性实施方式。虽然附图中显示了本公开的示例性实施方式，然而应当理解，可以以各种形式实现本公开而不应被这里阐述的实施方式所限制。相反，提供这些实施方式是为了能够更透彻地理解本公开，并且能够将本公开的范围完整的传达给本领域的技术人员。

本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。

实施例1东莨菪碱诱导构建小鼠干眼模型

取8-12周龄雌性C57BL/6小鼠，皮下注射200μL氢溴酸东莨菪碱(2.5 mg/mL，4次/d，注射时间分别为：8am、12am、4pm、8pm)，左右肢交替注射。将小鼠置于干眼专用通风设备(温度：25℃，相对湿度：30-40％，24小时对流风)中模拟干燥环境以促进诱发干眼症。连续造模5天。对照小鼠皮下注射200μL生理盐水，处理流程同上，专用设备中无对流风，相对湿度为 50-60％。

实施例2动物实验

将实施例1得到的干眼模型小鼠随机分为9组，每组15只，分别为干眼组 (DED)、CsA组、新琼二糖组(BIO)、新琼四糖组(TET)、新琼六糖组 (HEX)以及新琼二四糖组(NAB)、新琼二六糖组(NAH)、新琼四六糖组 (NAT)、新琼二四六糖组(NAX)。其中，CsA组中，环孢菌素(CsA)为阳性对照药物，浓度为0.5％；新琼寡糖组中，参考在人工泪液中海藻糖的使用浓度为3％，新琼寡糖的浓度为10mg/mL，溶剂为无菌蒸馏水。在含两种以上新琼寡糖的组中，各组分的浓度相同，其总浓度为10mg/mL(例如在NAB组中，新琼二糖5mg/mL，新琼四糖5mg/mL；在NAH组中，新琼二糖5mg/mL，新琼六糖5mg/mL；在NAT组中，新琼四糖5mg/mL，新琼六糖5mg/mL；在NAX组中，新琼二糖3.3333mg/mL，新琼四糖3.3333mg/mL，新琼六糖 3.3333mg/mL)。此外，还设有正常组，正常组为未构建干眼模型小鼠。

给药方式：正常组和干眼组不给药；其他组下结膜囊滴眼给药，每日2次，每次50μL，连续给药5天。在连续5天给药结束后，按照以下实施例进行检测。

实施例3酚红棉线法检测泪液分泌量

对于实施例2的各组小鼠，于给药结束后第二天上午8点进行泪液分泌量检测，具体方法如下：轻拉小鼠下睑，使其暴露下结膜囊。将酚红棉线一端折弯1mm左右，置于下睑内侧1/3结膜囊内，15s后取出。测量被泪液浸湿的酚红棉线红色部分长度，于不同时间点重复测量3次，取平均值。测试完成后协助闭合小鼠眼睛，避免过度暴露及眼表刺激。

检测结果如图1所示，由图1可知，与正常小鼠对比，干眼模型小鼠的泪液分泌量显著降低。CsA略微升高泪液分泌量，新琼寡糖组显著升高泪液分泌量。

实施例4角膜上皮屏障功能检测

对于实施例2的正常组、干眼组(DED)、CsA组和新琼四六糖组(NAT) 的小鼠，于给药结束后的第二天进行角膜上皮屏障功能检测，具体方法包括：麻醉小鼠后，立即向小鼠下结膜囊内滴入0.5μL OGD，闭合眼睛，轻轻按摩1 分钟后，用5mL PBS冲洗OGD，尽量避免OGD沾染于眼睑和毛发。使用体式荧光显微镜观察并拍摄角膜上皮荧光染色情况，NIS-element软件测量染色荧光强度并进行统计。

干眼症的典型症状之一是角膜损伤，由于层状上皮细胞和结膜杯状细胞分泌的黏液减少，导致眼表干燥，屏障功能下降，临床表现为荧光素染料的通透性增强，因此荧光强度可以反应角膜上皮通透性，用以评估角膜损伤的程度和干眼的治疗效果。OGD染色平均评分采用Baylor分级方案。

OGD染色的荧光成像结果如图2所示，对荧光强度进行统计分析得到的结果如图3所示。根据图2和图3，干眼组(DED)小鼠角膜的OGD着色强度较正常组大(1.9±0.31vs 7.6±0.29)；CsA和新琼寡糖均能降低小鼠角膜的荧光强度(分别为5.3±0.38，4.3±0.32)，且新琼寡糖的效果较CsA更优。

实施例5结膜杯状细胞PAS染色

对于实施例2的正常组、干眼组(DED)、CsA组和新琼四六糖组(NAT) 的小鼠，于给药结束后的第二天，通过PAS染色对结膜杯状细胞形态、数量进行检测。具体方法如下：取小鼠全眼球，制备石蜡块切片备用。石蜡切片经脱蜡程序后，去离子水浸泡10min，滴加1-2滴高碘酸覆盖组织标本10min后去离子水冲洗干净，拭干蒸馏水，滴加1-2滴Schiff’s试剂，置37℃暗箱中染色8 min，滴加1-2滴亚硫酸钠2-3min，镜下观察返红程度，蒸馏水冲洗10min后浸入装有苏木素液的浸泡盒35s，蒸馏水反复冲洗，盐酸酒精分化1s，显微镜镜下观察结果。梯度乙醇脱水(75％-85％-95％-100％)，每次2min，二甲苯透明15min，中性树胶封固。光学显微镜观察结膜杯状细胞染色情况结果。

结膜杯状细胞是维持眼表稳态的重要细胞，是泪膜中黏液的主要来源。在泪液性干眼症中常发生结膜杯状细胞丢失。组织学上通常使用Periodic acid-Schiff(PAS)染色检测杯状细胞密度，进行各种眼部疾病的诊断和干预。 PAS染色的显微镜成像结果如图4所示，对染色结果进行定量统计分析得到的结果如图5所示。根据图4和图5，干眼组(DED)小鼠结膜杯状细胞形态萎缩、数量急剧减少。与干眼组相比，CsA和新琼寡糖滴眼液治疗组均能维持结膜杯状细胞的形态和数量接近正常水平，对维持眼部健康有重要作用。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims

1.新琼寡糖组合物在制备治疗和/或预防干眼症的药物中的用途，其特征在于，所述新琼寡糖组合物以新琼四糖和新琼六糖作为活性成分。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗和/或预防干眼症的药物中，所述新琼寡糖组合物的浓度为10 mg/mL。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗和/或预防干眼症的药物还包括药学上可接受的辅料。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的辅料包含含水溶液载体。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述含水溶液载体包括选自下组中的一种：蒸馏水、盐水。

6.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述治疗和/或预防干眼症的药物的剂型为溶液、悬浮液或乳液。

7.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述治疗和/或预防干眼症的药物施用于眼部。