본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 제공한다:
[화학식 1]
상기 식에서,
R1이 수소, C1 내지 C4의 알킬 또는 페닐 중 어느 하나이고, R2가 C1 내지 C16의 하이드록시알킬, C2 내지 C4의 (5-하이드록시-트리메틸피리딘-2-일)알콕시, C3 내지 C7의 사이클로알킬, 벤질, 페닐, C1 내지 C4의 알킬페닐, 니트로페닐, 할로페닐, 벤조[d][1,3]-디옥솔-5-일 또는 피리딘-2-일 중 어느 하나이거나; 또는 R1과 R2가 서로 연결되어 5원환 내지 6원환을 이루는 헤테로고리 화합물이며,
R3 내지 R5가 각각 같거나 다를 수 있으며, 수소 또는 C1 내지 C4의 알킬 중 어느 하나일 수 있다.
보다 바람직하게는, 본 발명에 따른 상기 유도체는 R1이 수소, C1 내지 C4의 알킬 또는 페닐 중 어느 하나이고, R2가 C1 내지 C6의 하이드록시알킬, (5-하이드록시-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)프로폭시, C5 내지 C6의 사이클로알킬, 벤질, 페닐, C1 내지 C4의 알킬페닐, 니트로페닐, 할로페닐, 벤조[d][1,3]-디옥솔-5-일 또는 피리딘-2-일 중 어느 하나이거나; 또는 R1과 R2가 서로 연결되어 5원환 내지 6원환을 이루는 헤테로고리 화합물로서, 피롤리딘-1-일, 4-메틸피페라진-1-일, 6-모폴리노 또는 1H-피롤-1-일 중 어느 하나이며, R3 내지 R5가 모두 메틸일 수 있다.
상기 약제학적 허용가능한 염은 옥살산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산 및 벤조산으로 이루어진 군에서 선택된 유기산이거나, 또는 염산, 황산, 인산 및 브롬화수소산으로 이루어진 군에서 선택된 무기산에 의해 형성되는 산부가염의 형태일 수 있다.
본 발명에 따른 상기 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 구체적으로 6-((3-하이드록시프로필)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-((3-Hydroxypropyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(3-((5-하이드록시-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)아미노)프로폭시)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(3-((5-Hydroxy-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)amino)propoxy)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(사이클로헥실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[(6-(Cyclohexylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(벤질아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Benzylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(페닐아미노)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(phenylamino)pyridin-3-ol]; 6-((2-이소프로필페닐)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-((2-Isopropylphenyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-((4-니트로페닐)아미노)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-((4-nitrophenyl)amino)pyridin-3-ol]; 6-((4-브로모페닐)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-((4-bromophenyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(페닐아미노)피리딘-3-올 하이드로브로마이드[2,4,5-Trimethyl-6-(phenylamino)pyridin-3-ol hydrobromide]; 6-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-ylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(디페닐아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Diphenylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(피롤리딘-1-일)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(pyrrolidin-1-yl)pyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(4-methylpiperazin-1-yl)pyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-모폴리노피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-morpholinopyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(1H-피롤-1-일)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(1H-pyrrol-1-yl)pyridin-3-ol]; 및 2,4,5-트리메틸-6-(메틸(피리딘-2-일)아미노)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(methyl(pyridin-2-yl)amino)pyridin-3-ol]로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1로 표시되는 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 하기 반응식 1과 같은 제조방법에 의해 제조될 수 있다:
[반응식 1]
보다 상세하게는, 피리독신 염산염에 SOCl2와 디메틸포름아마이드(DMF)를 가한 후 환류 교반하여 화합물 1을 얻고, 상기 화합물 1을 아세트산에 현탁시킨 반응액에 아연 분말을 소량 첨가하고 환류 교반하여 화합물 2를 얻으며, 상기 화합물 2를 테트라하이드로퓨란(THF)에 현탁시킨 반응액에 1,3-디브로모-5,5-디메틸히단토인(DBDMH)을 첨가하고 교반하여 화합물 3을 얻으며, 상기 화합물 3을 DMF에 용해시킨 반응액에 K2CO3와 염화벤질(PhCH2Cl)을 첨가하고 교반하여 화합물 4를 얻으며, 상기 화합물 4와 NaOtBu, 트리(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(Pd2(dba)3), 및 2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸(BINAP)을 톨루엔에 용해시킨 반응액에 아민 화합물을 첨가하고 환류 교반하여 화합물 5를 얻으며, 상기 화합물 5를 메탄올에 용해시킨 반응액에 Pd/C 첨가하고 수소 기류 하에서 교반하여 화합물 6을 얻을 수 있다. 한편, 상기 화합물 5를 CH2Cl2에 용해시킨 반응액에 BCl3을 첨가하여 화합물 6을 얻을 수도 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 유효성분으로 함유하는 혈관신생으로 인한 질환의 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다:
[화학식 1]
상기 식에서,
R1이 수소, C1 내지 C4의 알킬 또는 페닐 중 어느 하나이고, R2가 수소, C1 내지 C16의 알킬, C1 내지 C16의 하이드록시알킬, C2 내지 C4의 (5-하이드록시-트리메틸피리딘-2-일)알콕시, C3 내지 C7의 사이클로알킬, 벤질, 페닐, C1 내지 C4의 알킬페닐, 니트로페닐, 할로페닐, 벤조[d][1,3]-디옥솔-5-일 또는 피리딘-2-일 중 어느 하나이거나; 또는 R1과 R2가 서로 연결되어 5원환 내지 6원환을 이루는 헤테로고리 화합물로서, 피롤리딘-1-일, 4-메틸피페라진-1-일, 6-모폴리노 또는 1H-피롤-1-일 중 어느 하나이며,
R3 내지 R5가 각각 같거나 다를 수 있으며, 수소 또는 C1 내지 C4의 알킬 중 어느 하나일 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 상기 유도체는 R1이 수소, C1 내지 C4의 알킬 또는 페닐 중 어느 하나이고, R2가 수소, C6 내지 C16의 알킬, C1 내지 C6의 하이드록시알킬, (5-하이드록시-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)프로폭시, C5 내지 C6의 사이클로알킬, 벤질, 페닐, C1 내지 C4의 알킬페닐, 니트로페닐, 할로페닐, 벤조[d][1,3]-디옥솔-5-일 또는 피리딘-2-일 중 어느 하나이거나; 또는 R1과 R2가 서로 연결되어 5원환 내지 6원환을 이루는 헤테로고리 화합물로서, 피롤리딘-1-일, 4-메틸피페라진-1-일, 6-모폴리노, 또는 1H-피롤-1-일 중 어느 하나이며, R3 내지 R5가 모두 메틸일 수 있다.
상기 약제학적 허용가능한 염은 옥살산, 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산 및 벤조산으로 이루어진 군에서 선택된 유기산이거나, 또는 염산, 황산, 인산 및 브롬화수소산으로 이루어진 군에서 선택된 무기산에 의해 형성되는 산부가염의 형태일 수 있다.
상기 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 구체적으로는 6-아미노-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-Amino-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(헥실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Hexylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(헥사데실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Hexadecylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-((3-하이드록시프로필)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-((3-Hydroxypropyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(3-((5-하이드록시-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)아미노)프로폭시)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(3-((5-Hydroxy-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)amino)propoxy)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(사이클로헥실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[(6-(Cyclohexylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(벤질아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Benzylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(페닐아미노)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(phenylamino)pyridin-3-ol]; 6-((2-이소프로필페닐)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-((2-Isopropylphenyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-((4-니트로페닐)아미노)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-((4-nitrophenyl)amino)pyridin-3-ol]; 6-((4-브로모페닐)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-((4-bromophenyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(페닐아미노)피리딘-3-올 하이드로브로마이드[2,4,5-Trimethyl-6-(phenylamino)pyridin-3-ol hydrobromide]; 6-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-ylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 6-(디페닐아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올[6-(Diphenylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(피롤리딘-1-일)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(pyrrolidin-1-yl)pyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(4-methylpiperazin-1-yl)pyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-모폴리노피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-morpholinopyridin-3-ol]; 2,4,5-트리메틸-6-(1H-피롤-1-일)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(1H-pyrrol-1-yl)pyridin-3-ol]; 및 2,4,5-트리메틸-6-(메틸(피리딘-2-일)아미노)피리딘-3-올[2,4,5-Trimethyl-6-(methyl(pyridin-2-yl)amino)pyridin-3-ol]로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
상기 혈관신생으로 인한 질환은 류마티스성 관절염, 골관절염, 패혈증성 관절염, 건선, 각막궤양, 노화와 관련된 황반 변성, 당뇨성 망막병증, 증식성 유리체 망막병증, 미성숙 망막병증, 안과 염증, 원추 각막, 쇼그렌 증후군, 근시 안과종양, 각막이식 거부, 이상 창상 유합, 골질환, 단백뇨증, 복대동맥류 질환, 외상성 관절 손상에 따른 퇴행성 연골손실, 신경계의 수초탈락 질환, 간경변, 신사구체 질환, 배태막의 미성숙 파열, 염증성 장질환, 치근막 질환, 동맥경화증, 재협착증, 중추신경계의 염증질환, 알츠하이머 질환, 피부노화 및 암의 침윤과 전이로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나일 수 있다.
본 발명에 따른 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 닭의 융모요막 모델에서 혈관내피성장인자와 같은 신생혈관형성 유도물질의 처리에 따른 신생혈관형성 증가를 억제하므로, 혈관신생으로 인한 질환의 예방 및 치료용 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 약학조성물의 적용량 및 적용방법은 제형 및 사용목적에 따라 다를 수 있다.
본 발명에 따른 약학조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염을 0.1 내지 50 중량%로 포함할 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 약학조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.
이러한 담체, 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.
또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에 따른 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 사용량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.001 내지 100 mg/㎏, 바람직하게는 0.01 내지 10 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한, 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내(intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.
본 발명에 따른 6-아미노피리딘-3-올 유도체 또는 이의 약제학적 허용가능한 염은 50% 치사량(LC50)이 2 g/kg 이상으로 안정성이 확보된 것으로서, 본 발명의 약학조성물에 사용할 수 있다.
이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 4,5-비스(클로로메틸)-2-메틸피리딘-3-올 하이드로클로라이드 [4,5-bis(chloromethyl)-2-methylpyridin-3-ol hydrochloride; 1] 합성
피리독신·HCl (5 g, 24.31 mmol)에 SOCl2 (30 mL)와 DMF (0.2 mL, 2.583 mmol)를 가한 후 80℃에서 3시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 냉각한 후 Et2O (70 mL)를 가하고 빙냉 하에서 1시간 교반하였다. 석출된 고체를 감압여과하고 걸러진 고체를 Et2O로 세척한 후 건조시켜 목적화합물 1 (5.5 g, 93%)을 흰색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 8.42 (s, 1H), 4.99 (s, 2H), 4.96 (s, 2H), 2.63 (s, 3H) ppm.
<실시예 2> 2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethylpyridin-3-ol; 2] 합성
화합물 1 (10 g, 41.23 mmol)의 아세트산 (50 mL) 현탁액에 아연분말 (8.08 g, 123.69 mmol)을 소량씩 나누어 넣고 130℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 반응액을 감압여과하고, 10 M NaOH 용액을 사용하여 여액의 pH를 6으로 조절하였다. 상기 여액을 소금으로 포화시킨 후 EtOAc (100 mLX6)로 추출하였다. EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 2 (5.2 g, 92%)를 흰색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 8.49 (s, 1H), 7.72 (s, 1H), 2,31 (s, 3H), 2.12 (s, 3H), 2.08 (s, 3H) ppm.
<실시예 3> 6-브로모-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-Bromo-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol] 합성
화합물 2 (2.5 g, 18.22 mmol)의 THF (30 mL) 현탁액에 1,3-디브로모-5,5-디메틸하이단토인 (DBDMH, 2.5 g, 9.11 mmol)을 가한 뒤 실온에서 3시간 교반하였다. 반응액을 농축시킨 후 잔사를 EtOAc (500 mL)과 물 (20 mL)로 희석하고 수층을 EtOAc (100 mLX3)로 추출하였다. EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 3 (3.22 g, 80%)을 연노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 5.56 (br s, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.25 (s, 3H) ppm.
<실시예 4> 3-(벤질옥시)-6-브로모-2,4,5-트리메틸피리딘 [3-(Benzyloxy)-6-bromo-2,4,5-trimethylpyridine ; 4] 합성
화합물 3 (6.5 g, 30.08 mmol)의 DMF (15 mL) 용액에 K2CO3 (20.78 g, 150.04 mmol), 염화벤질 (5.2 mL, 45.12 mmol)을 차례로 가한 후 실온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 EtOAc (700 mL)로 희석하고 물 (20 mLX10)로 세척하였다. EtOAc 용액을 포화소금물로 세척하고 MgSO4로 건조, 여과하여 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAC:Hex=1:20)로 정제하여 목적화합물 4 (8.9 g, 97%)를 흰색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.387.43 (m, 5H), 4.77 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.24 (s, 3H) ppm.
<실시예 5> 5-(벤질옥시)-N-(디페닐메틸렌)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-(diphenylmethylene)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; (5a-1)] 합성
화합물 4 (3 g, 9.80 mmol), NaOtBu (1.36 g, 13.71 mmol), 트리(디벤질리덴아세톤)디팔라듐 [(Pd2(DBA)3, 203 mg, 0.20 mmol], 2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-비나프틸 (BINAP, 249 mg, 0.39 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 벤조페논 이민 (1.73 mL, 9.80 mmol)을 가한 후 120℃에서 12시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (700 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (30 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 5a-1 (3.28 g, 83%)을 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.80 (d, J=7.1 Hz, 2H), 7.177.48 (m, 13H), 4.69 (s, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.91 (s, 3H) ppm.
<실시예 6> 5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; (5a-2)] 합성
메탄올 (50 mL)에 염화아세틸 (2 mL)을 빙냉 하에서 조금씩 떨어뜨려 녹이고, 이 용액을 화합물 5a-1 (2 g, 4.920 mmol)의 메탄올 (50 mL) 및 THF (5 mL) 혼합용액에 가한 다음 실온에서 12시간 교반하였다. 반응액을 감압농축한 후 반응액을 EtOAc (300 mL)로 희석시키고 포화 NaHCO3 용액 (20 mLX4)으로 세척하였다. EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mL)로 세척하고 MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 5a-2 (992 mg, 83%)를 연노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.317.45 (m, 5H), 4.68 (s, 2H), 4.25 (br s, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.99 (s, 3H) ppm.
<실시예 7> 6-아미노-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 (6-Amino-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6a) 합성
화합물 5a-2 (50 mg, 0.206 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (10 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 3시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하여 얻은 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6a (31 mg, 100%)을 주황색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.44 (s, 1H), 4.85 (s, 2H), 2.16 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.91 (s, 3H) ppm.
<실시예 8> 5-(벤질옥시)-N-헥실-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-hexyl-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5b] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 헥실아민 (0.97 mL, 7.35 mmol)을 가한 후 100℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:15)로 정제하여 목적화합물 5b (1.58 g, 97%)을 노란색의 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.347.48 (m, 5H), 4.69 (s, 2H), 3.47 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.99 (s, 3H), 1.571.65 (m, 2H), 1.251.35 (m, 6H), 0.870.92 (m, 3H) ppm.
<실시예 9> 6-(헥실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Hexylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6b] 합성
화합물 5b (100 mg, 0.306 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6b (72 mg, 99%)를 연노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.47 (s, 1H), 5.10 (s, 1H), 3.23 (t, J=6.8 Hz, 2H), 2.21 (s, 3H), 2.05 (s, 3H), 1.92 (s, 3H), 1.501.52 (m, 2H), 1.27 (m, 6H), 0.830.86 (m, 3H) ppm.
<실시예 10> 5-(벤질옥시)-N-헥사데실-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-hexadecyl-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5c] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 1-헥사데실아민 (1.96 g, 7.35 mmol)을 가한 후 120℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=9:1)로 정제하여 목적화합물 5c (1.42 g, 63%)를 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.247.49 (m, 5H), 4.69 (s, 2H), 3.44 (t, J=7.0 Hz, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.561.65 (m, 2H), 1.131.36 (m, 26H), 0.850.91 (m, 3H) ppm.
<실시예 11> 6-(헥사데실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Hexadecylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6c] 합성
화합물 5c (100 mg, 0.214 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6c (73 mg, 90%)를 연갈색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 8.98 (s, 1H), 7.29 (s, 1H), 3.363.45 (m 2H), 2.48 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.521.65 (m, 2H), 1.151.37 (m, 26H), 0.790.86 (m, 3H) ppm.
<실시예 12 및 13> 3-((5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)아미노)프로판-1-올 [3-((5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)amino)propan-1-ol; (5d-1)] & 5-(벤질옥시)-N-(3-((5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)옥시)프로필)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-(3-((5-(benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)oxy)propyl)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; (5d-2)] 합성
화합물 4 (2 g, 6.53 mmol), NaOtBu (906 mg, 9.14 mmol), Pd2(DBA)3 (135 mg, 0.13 mmol), BINAP (166 mg, 0.26 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 3-아미노-1-프로판올 (0.6 mL, 7.83 mmol)을 가한 후 120℃에서 4시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:4)로 정제하여 목적화합물 5d-1 (550 mg)을 노란색의 고체로, 화합물 5d-2 (630 mg)을 연노란색의 고체로 각각 얻었다.
5d-1: 1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.317.48 (m, 5H), 5.47 (t, J=5.5 Hz, 1H), 4.64 (s, 2H), 3.47 (t, J=5.5 Hz, 2H), 3.303.40 (m, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.93 (s, 3H), 1.641.74 (m, 2H) ppm.
5d-2: 1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.307.47 (m, 10H), 5.49 (t, J=5.4 Hz, 1H), 4.70 (s, 2H), 4.63 (s, 2H), 4.29 (d, J=6.2 Hz, 2H), 3.443.51 (m, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.94 (s, 3H) ppm.
<실시예 14> 6-((3-하이드록시프로필)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-((3-Hydroxypropyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; (6d-1)] 합성
화합물 5d-1 (100 mg, 0.333 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6d-1 (70 mg, 100%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.42 (s, 1H), 5.16 (s, 1H), 3.45 (t, J=6.0 Hz, 2H), 3.31 (t, J=6.4 Hz, 2H), 2.19 (s,3H), 2.05 (s, 3H), 1.91 (s, 3H), 1.701.60 (m, 2H) ppm.
<실시예 15> 6-(3-((5-하이드록시-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)아미노)프로폭시)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(3-((5-Hydroxy-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)amino)propoxy)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; (6d-2)] 합성
화합물 5d-2 (100 mg, 0.190 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6d-2 (64 mg, 97%)을 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (br s, 1H), 7.43 (br s, 1H), 4.23 (t, J=6.3 Hz, 2H), 3.40 (t, J=6.3 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.85 (s, 3H) ppm.
<실시예 16> 5-(벤질옥시)-N-사이클로헥실-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-cyclohexyl-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5e] 합성
화합물 4 (1.8 g, 5.91 mmol), NaOtBu (820 mg, 8.27 mmol), Pd2(DBA)3 (122 mg, 0.12 mmol), BINAP (150 mg, 0.23 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 사이클로헥실아민 (0.81 g, 7.10 mmol)을 가한 후 120℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:19)로 정제하여 목적화합물 5e (1.73 g, 90%)를 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.297.48 (m, 5H), 4.68 (s, 2H), 3.924.01 (m, 1H), 2.38 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.042.11 (m, 2H), 1.95 (s, 3H), 1.091.77 (m, 8H) ppm.
<실시예 17> 6-(사이클로헥실아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Cyclohexylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6e] 합성
화합물 5e (100 mg, 0.308 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6e (71 mg, 98%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 (s, 1H), 4.51 (s, 1H), 3.77 (s, 1H), 2.19 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.90 (s, 3H), 1.101.66 (m, 10H) ppm.
<실시예 18> N-벤질-5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [N-Benzyl-5-(benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5f] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 벤질아민 (0.8 mL, 7.35 mmol)을 가한 후 120℃에서 4시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:15)로 정제하여 목적화합물 5f (1.6 g, 97%)을 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.247.52 (m, 10H), 4.74 (s, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.18 (s, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.00 (s, 3H) ppm.
<실시예 19> 6-(벤질아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Benzylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6f] 합성
화합물 5f (100 mg, 0.301 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6f (66 mg, 90%)를 노란색 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.157.34 (m, 5H), 5.69 (t, J=5.6 Hz, 1H), 4.50 (d, J=5.3 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.97 (s, 3H) ppm.
<실시예 20> 5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸-N-페닐피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethyl-N-phenylpyridin-2-amine; 5g] 합성
화합물 4 (2 g, 6.53 mmol), NaOtBu (906 mg, 9.14 mmol), Pd2(DBA)3 (135 mg, 0.13 mmol), BINAP (166 mg, 0.26 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 아닐린 (0.71 mL, 7.838 mmol)을 가한 후 120 ℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고, EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:20)로 정제하여 목적화합물 5g (1.94 g, 93%)를 노란색의 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.257.51 (m, 9H), 6.936.99 (m, 1H), 6.38 (s, 1H), 4.79 (s, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.11 (s, 3H) ppm.
<실시예 21> 2,4,5-트리메틸-6-(페닐아미노)피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-(phenylamino)pyridin-3-ol; 6g] 합성
화합물 5g (100 mg, 0.314 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6g (70 mg, 98%)를 연노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 8.07 (br s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.257.28 (m, 2H), 7.107.16 (m, 2H), 6.686.73 (m, 1H), 2.27 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.08 (s, 3H) ppm.
<실시예 22> 5-(벤질옥시)-N-(2-이소프로필페닐)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-(2-isopropylphenyl)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5h] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 2-이소프로필아닐린 (1.03 mL, 7.35 mmol)을 가한 후 120℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=99:1)로 정제하여 목적화합물 5h (1.78 g, 99%)를 갈색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.257.49 (m, 7H), 7.067.13 (m, 1H), 6.947.01 (m, 1H), 5.92 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 3.133.24 (m, 1H), 2.42 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 2.03 (s, 3H), 1.32 (s, 3H), 1.29 (s, 3H) ppm.
<실시예 23> 6-((2-이소프로필페닐)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-((2-Isopropylphenyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6h] 합성
화합물 5h (100 mg, 0.277 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6h (72 mg, 96%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.19 (d, J=7.4 Hz, 1H), 6.777.01 (m, 4H), 3.113.22 (m, 1H), 2.20 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.17 (s, 3H), 1.14 (s, 3H) ppm.
<실시예 24> 5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸-N-(4-니트로페닐)피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethyl-N-(4-nitrophenyl)pyridin-2-amine; 5i] 합성
화합물 4 (2.18 g, 7.12 mmol), NaOtBu (987 mg, 9.96 mmol), Pd2(DBA)3 (147 mg, 0.14 mmol), BINAP (177 mg, 0.28 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 4-니트로아닐린 (1.03 mL, 7.35 mmol)을 가한 후 120℃에서 6시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3 only)로 정제하여 목적화합물 5i (2.36 g, 91%)를 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 8.12 (dd, J=7.2, 1.9 Hz, 2H), 7.357.46 (m, 7H), 6.50 (s, 1H), 4.77 (s, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.15 (s, 3H) ppm.
<실시예 25> 2,4,5-트리메틸-6-((4-니트로페닐)아미노)피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-((4-nitrophenyl)amino)pyridin-3-ol; 6i] 합성
화합물 5i (100 mg, 0.275 mmol), 펜타메틸벤젠 (122.4 mg, 0.825 mmol)의 CH2Cl2 (3 mL) 용액에 1 M BCl3 (0.55 mL, 0.55 mmol) 용액을 빙냉 하에서 적가한 후 30분 더 교반하였다. 반응액에 CHCl3:MeOH=9:1 용액 (1 mL)을 가하고 실온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=9:1)로 정제하여 목적화합물 6i (56 mg, 74%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 8.86 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.03 (d, J=9.1 Hz, 2H), 7.21 (d, J=9.1 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 2.10 (s, 3H) ppm.
<실시예 26> 5-(벤질옥시)-N-(4-브로모페닐)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N-(4-bromophenyl)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5j] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 4-브로모아닐린 (869 mg, 4.90 mmol)을 가한 후 120℃에서 6시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 5j (1.23 g, 63%)를 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.257.48 (m, 9H), 6.02 (s, 1H), 4.74 (s, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 2.09 (s, 3H) ppm.
<실시예 27> 6-((4-브로모페닐)아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-((4-bromophenyl)amino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6j] 합성
화합물 5j (100 mg, 0.251 mmol), 펜타메틸벤젠 (112 mg, 0.755 mmol)의 CH2Cl2 (3 mL) 용액에 1 M BCl3 (0.5 ml, 0.503 mmol) 용액을 빙냉 하에서 적가한 후 30분 더 교반하였다. 반응액에 CHCl3:MeOH=9:1 용액 (1 mL)을 가하고 실온에서 1시간 교반하였다. 반응액을 감압농축하고, 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=9:1)로 정제하여 목적화합물 6j (75 mg, 97%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 8.44 (br s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.30 (d, J=8.9 Hz, 2H), 7.19 (d, J=8.9 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.09 (s, 3H) ppm.
<실시예 28> 2,4,5-트리메틸-6-(페닐아미노)피리딘-3-올 하이드로브로마이드 [2,4,5-Trimethyl-6-(phenylamino)pyridin-3-ol hydrobromide; (6g-HBr)] 합성
화합물 5j (100 mg, 0.251 mmol)의 MeOH 및 THF (1:1) (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6g-HBr (76 mg, 98%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 9.63 (br s, 1H), 8.82 (br s, 1H), 7.257.31 (m, 2H), 6.927.02 (m, 3H), 2.44 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.17 (s, 3H) ppm.
<실시예 29> N-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)-5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-아민 [N-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)-5-(benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-amine; 5k] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 3,4-(메틸렌디옥시)아닐린 (1.01 g, 7.35 mmol)을 가한 후 120℃에서 2시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 5k (1.57 g, 88%)를 갈색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.337.47 (m, 5H), 7.17 (d, J=2.0 Hz, 1H), 6.616.72 (m, 2H), 5.89 (s, 3H), 4.73 (s, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 2.07 (s, 3H) ppm.
<실시예 30> 6-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Benzo[d][1,3]dioxol-5-ylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6k] 합성
화합물 5k (100 mg, 0.276 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6k (75 mg, 100%)을 갈색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.33 (s, 1H), 7.11 (s, 1H), 6.71 (s, 2H), 5.87 (s, 2H), 2.24(s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.05 (s, 3H) ppm.
<실시예 30> 5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸-N,N-디페닐피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethyl-N,N-diphenylpyridin-2-amine; 5l] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 디페닐아민 (829 mg, 4.90 mmol)을 가한 후 120℃에서 6시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 5l (695 mg, 36%)을 갈색의 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.357.49 (m, 5H), 7.177.23 (m, 5H), 6.896.96 (m, 5H), 4.83 (s, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.94 (s, 3H) ppm.
<실시예 31> 6-(디페닐아미노)-2,4,5-트리메틸피리딘-3-올 [6-(Diphenylamino)-2,4,5-trimethylpyridin-3-ol; 6l] 합성
화합물 5l (100 mg, 0.253 mmol)의 MeOH 및 THF (1:1) (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 5시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 syringe filter (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6l (68 mg, 87%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 7.167.22 (m, 4H), 6.796.98 (m, 6H), 2.28 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.91 (s, 3H) ppm.
<실시예 32> 3-(벤질옥시)-2,4,5-트리메틸-6-(피롤리딘-1-일)피리딘 [3-(Benzyloxy)-2,4,5-trimethyl-6-(pyrrolidin-1-yl)pyridine; 5m] 합성
화합물 4 (1.5 g, 4.90 mmol), NaOtBu (680 mg, 6.86 mmol), Pd2(DBA)3 (101 mg, 0.10 mmol), BINAP (125 mg, 0.20 mmol)의 톨루엔 (25 mL) 용액에 피롤리딘 (0.40 mL, 4.90 mmol)을 가한 후 120℃에서 4시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 5m (1.04 g, 71%)을 노란색의 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.337.48 (m, 5H), 4.71 (s, 2H), 3.36 (t, J=6.7 Hz, 4H), 2.41 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.851.93 (m, 4H) ppm.
<실시예 33> 2,4,5-트리메틸-6-(피롤리딘-1-일)피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-(pyrrolidin-1-yl)pyridin-3-ol; 6m] 합성
화합물 5m (100 mg, 0.337 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 10시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6m (70 mg, 100%)을 분홍색 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d 6 ) δ 8.04 (br s, 1H), 3.23 (t, J=6.5 Hz, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.10 (s, 6H), 1.781.84 (m, 4H) ppm.
<실시예 34> 1-(5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)-4-메틸피페라진 [1-(5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)-4-methylpiperazine; 5n] 합성
화합물 4 (2 g, 6.53 mmol), NaOtBu (906 mg, 9.14 mmol), Pd2(DBA)3 (135 mg, 0.13 mmol), BINAP (166 mg, 0.26 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 N-메틸피페라진 (0.73 mL, 6.53 mmol)을 가한 후 120℃에서 6시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=20:1)로 정제하여 목적화합물 5n (918 mg, 43%)을 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.327.47 (m, 5H), 4.71 (s, 2H), 3.07 (t, J=4.7 Hz, 4H), 2.55 (br s, 4H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.14 (s, 3H) ppm.
<실시예 35> 2,4,5-트리메틸-6-(4-메틸피페라진-1-일)피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-(4-methylpiperazin-1-yl)pyridin-3-ol; 6n] 합성
화합물 5n (100 mg, 0.307 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6n (72 mg, 99%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 2.87 (t, J=4.7 Hz, 4H), 2.50 (t, J=1.9 Hz, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 2.08 (s, 6H) ppm.
<실시예 36> 4-(5-(벤질옥시)-3,4,6-트리메틸피리딘-2-일)모폴린 [4-(5-(Benzyloxy)-3,4,6-trimethylpyridin-2-yl)morpholine; 5o] 합성
화합물 4 (2 g, 6.53 mmol), NaOtBu (906 mg, 9.14 mmol), Pd2(DBA)3 (135 mg, 0.13 mmol), BINAP (166 mg, 0.26 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 모폴린 (0.59 mL, 6.53 mmol)을 가한 후 120 ℃에서 5시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 5o (1.38 g, 67%)을 노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.337.47 (m, 5H), 4.72 (s, 2H), 3.83 (t, J=4.6 Hz, 4H), 3.03 (t, J=4.6 Hz, 4H), 2.42 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 2.16 (s, 3H) ppm.
<실시예 37> 2,4,5-트리메틸-6-모폴리노피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-morpholinopyridin-3-ol; 6o] 합성
화합물 5o (100 mg, 0.320 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 2시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6o (71 mg, 99%)를 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 3.69 (t, J=4.5 Hz, 4H), 2.83 (t, J=4.6 Hz, 4H), 2.27 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.08 (s, 3H) ppm.
<실시예 38> 3-(벤질옥시)-2,4,5-트리메틸-6-(1H-피롤-1-일)피리딘 [3-(Benzyloxy)-2,4,5-trimethyl-6-(1H-pyrrol-1-yl)pyridine; 5p] 합성
화합물 4 (2 g, 6.53 mmol), NaOtBu (906 mg, 9.14 mmol), Pd2(DBA)3 (135 mg, 0.13 mmol), BINAP (166 mg, 0.26 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 피롤 (0.45 mL, 6.53 mmol)을 가한 후 120℃에서 12시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(EtOAc:Hex=1:9)로 정제하여 목적화합물 5p (1.43 g, 75%)을 연노란색의 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 7.367.50 (m, 5H), 6.96 (t, J=2.1 Hz, 2H), 6.30 (t, J=2.1 Hz, 2H), 4.82 (s, 2H), 2.49 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.14 (s, 3H) ppm.
<실시예 39> 2,4,5-트리메틸-6-(1H-피롤-1-일)피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-(1H-pyrrol-1-yl)pyridin-3-ol; 6p] 합성
화합물 5p (100 mg, 0.342 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 밤새 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압 농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6p (69 mg, 100%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 8.79 (s, 1H), 6.90 (t, J=2.0 Hz, 2H), 6.15 (t, J=2.0 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 2.00 (s, 3H) ppm.
<실시예 40> 5-(벤질옥시)-N,3,4,6-테트라메틸-N-(피리딘-2-일)피리딘-2-아민 [5-(Benzyloxy)-N,3,4,6-tetramethyl-N-(pyridin-2-yl)pyridin-2-amine; 5q] 합성
화합물 4 (2 g, 6.53 mmol), NaOtBu (906 mg, 9.14 mmol), Pd2(DBA)3 (135 mg, 0.13 mmol), BINAP (166 mg, 0.26 mmol)의 톨루엔 (30 mL) 용액에 2-(메틸아미노)피리딘 (0.68 mL, 6.53 mmol)을 가한 후 120℃에서 12시간 환류 교반하였다. 반응액을 실온으로 식힌 뒤 EtOAc (500 mL)와 물 (10 mL)로 희석하고 EtOAc 용액을 포화소금물 (20 mLX5)로 세척하였다. MgSO4로 건조, 여과한 후 감압 농축하였다. 잔사를 관크로마토그래피(CHCl3:MeOH=50:1)로 정제하여 목적화합물 5q (1.78 g, 81%)을 노란색의 액체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, CHCl3-d) δ 8.178.20 (m, 1H), 7.307.48 (m, 6H), 6.556.58 (m, 1H), 6.11 (d, J=8.5 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H), 3.40 (s, 3H), 2.47 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.98 (s, 3H) ppm.
<실시예 41> 2,4,5-트리메틸-6-(메틸(피리딘-2-일)아미노)피리딘-3-올 [2,4,5-Trimethyl-6-(methyl(pyridin-2-yl)amino)pyridin-3-ol; 6q] 합성
화합물 5q (100 mg, 0.299 mmol)의 메탄올 (2 mL) 용액에 10% Pd/C (20 mg)을 가하고 수소 기류 하 실온에서 10시간 교반하였다. 반응액을 여과하고 여액을 감압농축하였다. 잔사를 메탄올 (2 mL)에 녹인 후 이 용액을 시린지 필터 (Advantec JP050AN)를 사용하여 여과하고 농축하여 목적화합물 6q (72 mg, 98%)을 노란색 고체로 얻었다.
1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6) δ 9.48 (br s, 1H), 8.07 (d, J=4.2 Hz, 1H), 7.567.66 (m, 1H), 6.80 (t, J=6.0 Hz, 1H), 6.40 (d, J=8.6 Hz, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.98 (s, 3H) ppm.
<실험예 1> CAM 분석을 통한 혈관신생 억제효과 검토
생체내 시험상(in vivo)에서의 혈관신생 억제효과를 확인하기 위하여, 융모요막(chorioallantoic membrane, CAM) 분석을 실시하였다(Nguyen M et al., Microvascular Res., 47, pp31-40, 1994).
닭의 유정란을 온도 37℃, 상대습도 55%를 유지해주면서 배양시켜 10일째에 기낭(air sac) 부위에 피하주사침(hypodermic needle, 녹십자의료공업, 한국)을 이용하여 첫 번째 작은 구멍을 뚫고, 창(window)을 낼 유정란의 평평한 부위에 두 번째 구멍을 뚫었다.
첫 번째 구멍인 기낭 부위의 구멍을 통해 공기를 빼냄으로써, 융모요막 (CAM)이 유정란의 껍질로부터 분리가 되게 하여 이 부위를 회전연마기(grinding wheel, Multipro 395JA, Dremel, Mexico)로 절단하여 창을 만들었다.
다음으로, 와트만 필터 디스크(whatman filter disk #1, whatman사, USA)에 코티존 아세테이트(cortisone acetate) 3 ㎎/㎖을 처리하여 건조시킨 후 혈관내피성장인자(VEGF)는 20 ng/CAM의 농도로 적셔두었다.
만들어 둔 창을 통해 필터 디스크를 혈관 위에 얹고, 실시예의 화합물들을 각각 디메틸술폭사이드(DMSO)로 녹여 인산완충용액(PBS)으로 희석하여 각 농도별로 처리하였다.
화합물 처리 3일 뒤, 필터 디스크가 얹힌 CAM 부분을 떼어내어 인산완충용액을 이용하여 씻어준 후, 입체현미경(Stemi SV6 stereomicroscope, Carl Zeiss, Germany)과 Image-Pro Plus software(Media Cybernetics; Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 이미지를 촬영하여 혈관 가지의 개수를 측정하고 자료를 분석하였다.
그 결과, 하기 표 1과 같이, VEGF로 유도된 신생혈관형성 증가가 본 발명에 따른 화합물들의 처리로 인해 농도의존적으로 감소됨을 확인할 수 있었다. 특히, 화합물 6a의 혈관신생 억제효과를 SU4312, 바티매스타트(batimastat) 및 α-토코페롤과 비교한 결과, 화합물 6a는 이러한 화합물들보다 저농도에서 혈관신생을 억제할 수 있는 뛰어난 혈관신생 억제효과를 나타내었다. 또한, 화합물 6d-2, 6g, 6k, 6l 및 6m도 뛰어난 혈관신생 억제효과를 나타내었다.
[규칙 제91조에 의한 정정 27.02.2013]
표 1
또한, 화합물 6a 및 6i를 농도별로 CAM에 처리하여 IC50을 구한 결과, 도 3과 같이 각각 2 nM과 1.8 nM 이었다.
<실험예 2> 종양 형성에 의한 혈관신생 및 종양 성장의 억제 효과
닭의 유정란을 배양시킨 9일째에 실험예 1과 동일하게 창을 만들고 디스크(disc) 대신 A549 폐암세포를 matrigel과 1:1로 혼합하고 화합물 6a 및 6i를 처리하여 1.5X106 세포/CAM의 밀도로 접종시켰다. 접종 5일 뒤 종양이 형성된 CAM 부분을 떼어내어 인산완충용액을 이용하여 씻어준 후, 입체현미경(Stemi SV6 stereomicroscope, Carl Zeiss, Germany)과 Image-Pro Plus software(Media Cybernetics; Silver Spring, MD, USA)를 이용하여 이미지를 촬영하여 혈관 가지의 개수를 측정하고 자료를 분석하였다.
그 결과, 도 4와 같이 농도별 화합물 6a 및 6i의 처리에 의해 종양 형성에 의한 혈관신생을 억제하였으며 종양의 성장 또한 억제하였다.
<실험예 3> HUVEC 세포에서의 VEGF 유도 활성산소종(ROS) 소거능 측정
VEGF로 유도된 HUVEC 세포 내 ROS의 소거능을 측정하기 위해 DCF-DA (2',7'-dichlorofluorescein diacetate)를 이용하였다. DCF-DA는 세포 내 ROS의 존재 시 형광의 DCF로 산화하여 녹색의 형광을 나타낸다. 0.2% 젤라틴 코팅된 8-well plates에 1X105의 농도로 HUVEC을 분주한 다음 24 시간 배양하였다. 화합물 6a 또는 6i를 3시간 동안 전처리 하고 VEGF로 15분간 유도한 후 PBS (pH 7.4)로 3회 세척한 다음 10 μM의 DCF-DA를 EBM-2 배지에 넣어 암소에서 30 분간 처리하였다. 다시 PBS로 3회 세척하고 세포 내 형광의 정도를 형광 현미경을 사용하여 측정하였다.
그 결과, 도 5와 같이 화합물 6a 또는 6i를 처리한 경우 VEGF에 비해 세포내 형광의 정도가 현저히 감소한 것을 확인할 수 있다.
<실험예 4> 황반변성 위험인자 유도 활성산소종(ROS) 소거능 측정
앞선 실험예 3과 동일한 방법으로 실험을 수행하되, 황반변성 위험인자인 4-하이드록시노네날(4-hydroxynonenal; 4-HNE) 또는 안지오텐신 II(angiotensin II; Ang II)를 ARPE-19(adult retinal pigment epithelium-19) 세포주에 처리하여 화합물 6a의 ROS 소거능을 관찰하였다.
그 결과, 도 6 및 도 7과 같이 화합물 6a를 처리한 경우 대조군에 비해 세포내 형광의 정도가 현저히 감소한 것을 확인 할 수 있다. 황반변성 위험인자인 4-HNE 또는 Ang II는 ARPE 세포에서 ROS 발생을 통해 세포 손상을 야기하여 궁극적으로 브루크막 손상 및 혈관신생을 야기하여 황반변성 및 실명을 초래하게 되는데, 상기의 실험결과를 토대로 화합물 6a가 4-HNE 및 Ang II의 ROS 발생을 강력하게 억제함으로써 황반변성의 치료 효과가 있을 것으로 확인되었다.
<실험예 5> 독성실험
웅성 Balb/c 마우스에 화합물 6a를 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 각각 현탁하여 0.5g/kg, 1g/kg 및 2g/kg의 용량으로 1회 단회 경구투여하고 7일간 마우스의 생존율 및 체중을 조사하였다.
이러한 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적 검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.
그 결과, 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.
이상의 결과, 본 발명의 화합물들은 마우스에서 2g/㎏까지 독성변화를 나타내지 않으며, 따라서, 경구 투여 중간치사량(LD50)은 2g/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.
하기에 본 발명에 따른 화합물 6a를 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제제예 1> 산제의 제조
화합물 6a 20 mg, 유당 100 mg 및 탈크 10 mg을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
화합물 6a 20 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캅셀제의 제조
화합물 6a 10 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2mg을 혼합한 후 통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
화합물 6a 10 mg, 주사용 멸균 증류수 적량 및 pH 조절제 적량을 혼합한 후 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조하였다.
<제제예 5> 연고제의 제조
화합물 6a 10mg, PEG-4000 250mg, PEG-400 650mg, 백색바셀린 10mg, 파라옥시안식향산메칠 1.44mg, 파라옥시안식향산프로필 0.18mg 및 잔량의 정제수를 혼합한 후 통상의 연고제의 제조방법에 따라서 연고제를 제조하였다.
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.