WO2013064388A2

WO2013064388A2 - Kosmetische formulierung

Info

Publication number: WO2013064388A2
Application number: PCT/EP2012/070909
Authority: WO
Inventors: Mike Farwick; Matthias MENTEL; Tim KÖHLER
Original assignee: Evonik Industries Ag
Priority date: 2011-10-31
Filing date: 2012-10-23
Publication date: 2013-05-10
Also published as: DE102011085497A1; KR20140096042A; US20140309309A1; BR112014010349A2; JP2014532675A; CN103917217A; EP2744475A2; WO2013064388A3

Abstract

Gegenstand der Erfindung ist eine kosmetische Formulierung, so wie ihre Verwendung.

Description

Kosmetische Formulierung Gebiet der Erfindung

Unter einer Formulierung ist eine Zubereitung aus einem Wirkstoff und mindestens einem Hilfsstoff zu verstehen. Bei dem Hilfsstoff kann es sich beispielsweise um ein Lösungsmittel handeln.

Eine kosmetische Formulierung ist entsprechend so zusammengesetzt, dass sie aufgrund ihrer geringen Toxizität und ihren physikalischen Eigenschaften (beispielsweise Viskosität) entsprechend ihrer jeweiligen Bestimmung am Menschen angewendet werden kann.

Stand der Technik

In EP 2 051 691 B1 wird eine Zusammensetzung beschrieben, welche mindestens zwei Ceramide umfasst. Ceramide bestehen aus einer langkettigen Sphingoid-Base, deren

Amino-Gruppe mit einer Fettsäure acyliert ist. Die Alkyl-Kettenlänge, der Desaturierungs- und der Hydroxylierungsgrad können jeweils variieren. Die in der Anmeldung beschriebene Zusammensetzung wird zur Behandlung von trockener Haut verwendet. In EP 0 994 888 B1 wird ein Verfahren zur Herstellung von Phytosphingosin-basierten Ceramiden beschrieben.

Beschreibung der Erfindung Aufgabe der Erfindung war es, eine neue kosmetische Formulierung bereitzustellen, oder eine kosmetische Formulierung für einen neuen kosmetischen Zweck zu verwenden.

Die Aufgabe wird gelöst durch eine kosmetische Formulierung gemäß Anspruch 1. Keine zuvor beschriebenen Zusammensetzungen weist die in Anspruch 1 beanspruchte Kombination auf.

Gealterte Haut zeigt unter anderem einen Verlust der Spannkraft. Durch die Gravitation kommt es zu einer Verformung unter der Eigenlast. Kosmetische Probleme durch diesen Effekt manifestieren sich zum Beispiel durch Hängebrüste, Schlupflieder sowie hängende Gesichtshaut.

Überraschenderweise wurde gefunden, dass die beanspruchte Kombination von N-Acyl- Phytosphingosin und 1 ,2-Pentandiol sich deutlich besser zu kosmetischen

Formulierungen verarbeiten lässt, als Kombinationen aus N-Acyl-Phytosphingosin und anderen Lösungsmitteln. Durch die beanspruchte Kombination von N-Acyl- Phytosphingosin und 1 ,2-Pentandiol kommt es zu einer Aufhebung von bestehenden Formulierungseinschränkungen.

Des Weiteren lassen sich aus der Kombination von N-Acyl-Phytosphingosin und 1 ,2- Pentandiol kosmetische Formulierungen herstellen, welche sich besonders gut für die Anwendung auf der Haut eignen. In einer bevorzugten Ausführungsform handelt es sich bei dem N-Acyl-Phytosphingosin um N-Hexanoyl-Phytosphingosin. Hier konnte eine besonders gute kosmetische Wirkung bezüglich der Haut erzielt werden.

In einer weiteren Ausführungsform umfasst die Formulierung neben dem N-Acyl- Phytosphingosin keine weiteren Ceramide. Überraschenderweise wurde gefunden, dass bereits nur mit N-Acyl-Phytosphingosin als einzigem Ceramid sehr gute kosmetische Wirkungen erzielt werden konnten.

In einer Ausführungsform ist das N-Acyl-Phytosphingosin in einer Konzentration von 0,02 Massen-% bis 2 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten. Vorzugsweise ist das N-Acyl-Phytosphingosin in einer Konzentration von 0,1 Massen-% bis 1 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten. Für diese Massenkonzentrationen konnten besonders gut kosmetische

Wirkungen erzielt werden. In einer Ausführungsform ist das 1 ,2-Pentandiol in einer Konzentration von 0,2 Massen-% bis 15 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten. Vorzugsweise ist das 1 ,2-Pentandiol in einer Konzentration von 0,5 Massen-% bis 10 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten. Besonders bevorzugt ist das 1 ,2-Pentandiol in einer Konzentration von 1 Massen-% bis 5 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten. Für diese

Massenkonzentrationen konnten besonders gut kosmetische Wirkungen erzielt werden.

In einer weiteren Ausführungsform liegt das Verhältnis von N-Acyl-Phytosphingosin zu 1 ,2- Pentandiol im Bereich von 1 :100 bis 1 :1. Vorzugsweise liegt das Verhältnis von N-Acyl- Phytosphingosin zu 1 ,2-Pentandiol im Bereich von 1 :25 bis 1 :1. Besonders bevorzugt liegt das Verhältnis von N-Acyl-Phytosphingosin zu 1 ,2-Pentandiol im Bereich von 1 :15 bis 1 :1 . Das Verhältnis von N-Acyl-Phytosphingosin zu 1 ,2-Pentandiol ist wichtig für die

Formulierung, da durch sie unter anderem die Anwendungseigenschaften, wie

beispielsweise die Viskosität der Formulierung oder das Vermögen von der Haut aufgenommen zu werden, beeinflusst werden.

Als in der kosmetischen Formulierung enthaltenen Hilfsstoffe kommen beispielsweise außerdem Emollients, Emulgatoren und Tenside, Verdicker/Viskositätsregler/Stabilisatoren, UV-Lichtschutzfilter, Antioxidantien, Hydrotrope (oder Polyole), Fest- und Füllstoffe,

Filmbildner, Perlglanzadditive, Deodorant- und Antitranspirantwirkstoffe, Insektrepellentien, Selbstbräuner, Konservierungsstoffe, Konditioniermittel, Parfüme, Farbstoffe, biogene Wirkstoffe, Pflegeadditive, Überfettungsmittel und weitere Lösungsmittel in Frage.

Insbesondere enthält die kosmetische Formulierung mindestens einen weiteren biogenen Wirkstoff; unter biogenen Wirkstoffen sind beispielsweise Tocopherol, Tocopherolacetat, Tocopherolpalmitat, Ascorbinsäure, Polyphenole, Desoxyribonucleinsäure, Coenzym Q10, Retinol, AHA-Säuren, Aminosäuren, Hyaluronsäure, alpha-Hydroxysäuren, Isoflavone, Polyglutaminsäure, Creatin (und Creatinderivate), Guanidin (und Guanidinderivate), Pseudoceramide, essentielle Öle, Peptide, Proteinhydrolysate, Pflanzenextrakte, Bisabolol, Allantoin, Panthenol, Phytantriol, Idebenon, Lakritz Extrakt, Glycyrrhizidin und Idebenon, Skleroglucan, ß-Glucan, Santalbinsäure und Vitaminkomplexe zu verstehen. Beispiele für Pflanzenextrakte sind Kastanien Extrakt, Kamillen Extrakt, Rosmarin Extrakt, schwarze und rote Johannisbeer Extrakt, Birken Extrakt, Hagebutten Extrakt, Algen Extrakte, Grüner Tee Extrakt, Aloe Extrakt, Ginseng Extrakt, Ginko Extrakt, Grapefruit Extrakt, Calendula Extrakt, Gurken Extrakt, Kampher, Thymus Extrakt, Mangosteen Extrakt, Cystus Extrakt, Terminalia Arjuna Extrakt, Hafer Extrakt, Oregano Extrakt, Himbeer Extrakt, Erdbeer Extrakt, etc. Zu den biogenen Wirkstoffen können auch die sogenannten Barriere Lipids gezählt werden, für welche beispielhaft Ceramide, Phytosphingosin und Derivate, Sphingosin und Derivate, Sphinganin und Derivate, Pseudoceramide, Phospholipide, Lysophospholipide, Cholesterin und Derivate, Cholesteryl Ester, freie Fettsäuren, Lanolin und Derivate, Squalan, Squalen und verwandte Substanzen genannt werden. Zu den biogenen Wirkstoffen werden im Sinne der Erfindung auch anti-Akne wie z.B. Benzylperoxid, Phytosphingosin und Derivate, Niacinamid Hydroxybenzoat, Nicotinaldehyd, Retinolsäure und Derivate, Salicylsäure und Derivate, Citronellsäure etc. und anti-Cellulite wie z.B. Xanthin Verbindungen wie Coffein, Theophyllin, Theobromin und Aminophyllin, Carnitin, Carnosin, Salicyloyl Phytosphingosin, Phytosphingosine, Santalbinsäure etc. gezählt, ebenso wie Antischuppenmittel wie beispielsweise Salicylsäure und Derrivate, Zink Pyrithion, Selensulfid, Schwefel,

Ciclopiroxolamin, Bifonazol, Climbazol, Octopirox und Actirox etc, ebenso wie Adstringetien wie z.B. Alkohol, Aluminium Derivate, Gallsäure, Pyridoxinsalicylat, Zinksalze wie z.B.

Zinksulfat, -acetat, -chlorid, -lactat, Zirconiumchlorohydrate etc. Ebenso können Bleichmittel wie Kojisäure, Arbutin, Vitamin C und Derivate, Hydroquinon, Turmeric oil, Creatinin, Sphingolipide, Niacinamid, etc. zu den biogenen Wirkstoffen gezählt werden.

In einer weiteren Ausführungsform umfasst die kosmetische Formulierung

Partitionsmodifizierer wie beispielsweise Benzylalkohol, alpha-Bisabolol, Cetylalkohol,

Chitosan, Decanol, Decylmethylsulfoxid, Diethylenglycolmonoethylether, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, EDTA, Ethylenglykol, 2-Pyrrolidon, /V-Methyl-2- pyrrolidon, 1 -Dodecylazacycloheptan-2-on, 4-Decyloxazolidin-2-on, Ethanol, Glycerin, Laurinsäure, Laurylalkohol, Lecithin, Harnstoff, Ölsäure, Linolsäure, Linolensäure,

Dimethylisosorbid, Isopropylmyristat, Propylenglycol, Natriumlaurylsulfat,

Cetyltrimethylammoniumbromid, Dodecylbetain, Terpene wie d-Limonen, N- Methylformamid, Stearinsäure, Polyethoxyethylene, Limonenoxide, Hydrophobine, 3- Methoxy-3-methyl-1 -butanol, 3-Methyl-1 ,3-butandiol, 1 ,3-Propandiol, Glycerinmonopalmitat, Dodecanoylacetat, Cetyl Ethylhexanoat, Stearyl Ethylhexanoat, Ethyllactat, Isobutyllactat, Triethylacetylcitrat, Phytantriol, Salicylsäure und deren Derivate, Ascorbinsäure und deren Derivate, Butylenglykol, Thiazon, Natriumdodecylsulfat, Nerolidol und 1 ,8-Cineol,

Glycolipide, mittelkettige Triglyceride, verzweigtkettige Fettalkohole wie Octyldodecanol, Taurin, Phospholipide, 1 ,2-Pentylenglykol und C8/C10-Glycerinpartialester

(Veresterungsprodukt von Glycerin mit einer unterstöchiometrischen Mischung enthaltend n-Octansäure und n-Decansäure), insbesondere C8/C10-Glycerinpartialester, wie beispielsweise in der PCT/EP201 1/056616 beschrieben. Mit diesem zusätzlichen Hilfsstoff können besonders gute Werte erzielt werden.

In einer weiteren Ausführungsform umfasst die kosmetische Formulierung C12-15 Alkyl Benzoate, insbesondere TEGOSOFT^® TN. Mit diesem zusätzlichen Hilfsstoff konnten besonders gute Werte erzielt werden.

In einer weiteren Ausführungsform umfasst die kosmetische Formulierung PPG-13 Myristyl Ether, insbesondere TEGOSOFT^® APM. Mit diesem zusätzlichen Hilfsstoff konnten besonders gute Werte erzielt werden.

In einer weiteren Ausführungsform umfasst die kosmetische Formulierung Octyl Dodecanol, insbesondere TEGOSOFT^® G20. Mit diesem zusätzlichen Hilfsstoff konnten besonders gute Werte erzielt werden.

Neben der kosmetischen Formulierung selbst, werden auch unterschiedliche

Verwendungen derselben beansprucht. Beansprucht wird die Verwendung einer zuvor beschriebenen Formulierung zum Auftragen auf die Haut.

Des Weiteren wird beansprucht die Verwendung einer zuvor beschriebenen Formulierung zur Reduzierung der Hauterschlaffung.

Es konnte gezeigt werden, dass durch die Verwendung einer zuvor beschriebenen

Formulierung die Hauterschlaffung merklich reduziert werden konnte.

Des Weiteren wird beansprucht die Verwendung einer zuvor beschriebenen Formulierung zur Aufpolsterung der Haut.

Auch in Bezug auf die Aufpolsterung konnten merkliche Besserungen erzielt werden.

Durch eine Kombination von Aufpolsterung und Reduzierung der Erschaffung kann ein Lifting-Effekt erzielt werden. In einer bevorzugten Variante der Verwendung wird die kosmetische Formulierung auf das Gesicht aufgetragen. Hier konnten vor allem im Bereich der Augenlieder sowie der Wangen sehr gut Ergebnisse erzielt werden. In einer weiteren bevorzugten Variante der Verwendung wird die kosmetische Formulierung auf die Brust aufgetragen. Auch hier konnten sehr gute Ergebnisse erzielt werden.

Neben dem Lifting-Effekt kann auch eine gezieltere Formgebung („shaping") erfolgen. Es wird auch die Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend ein N-Acyl- Phytosphingosin zur Reduzierung der Hauterschlaffung beansprucht. Bei dem in der kosmetischen Formulierung enthaltenen Hilfsstoff kann es sich beispielsweise um ein Lösungsmittel und somit beispielsweise um 1 ,2-Pentandiol handeln.

In einer bevorzugten Variante der Verwendung ist der Hilfsstoff 1 ,2-Pentandiol.

Des Weiteren wird die Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend N- Hexanoyl-Phytosphingosin zur Reduzierung der Hauterschlaffung beansprucht. Auch hier kann es sich bei dem in der kosmetischen Formulierung enthaltenen Hilfsstoff

beispielsweise um ein Lösungsmittel und somit beispielsweise um 1 ,2-Pentandiol handeln. In einer bevorzugten Variante der Verwendung ist der Hilfsstoff 1 ,2-Pentandiol.

Beansprucht wird des Weiteren die Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend N-Hexanoyl-Phytosphingosin als einziges Ceramid zur Reduzierung der Hauterschlaffung. Auch hier kann es sich bei dem in der kosmetischen Formulierung enthaltenen Hilfsstoff beispielsweise um ein Lösungsmittel und somit beispielsweise um 1 ,2-Pentandiol handeln.

Die in den letzten drei Absätzen beschriebene Verwendung erfolgt vorzugsweise im Bereich des Gesichts und der Brust.

Es wird auch die Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend N-Hexanoyl- Phytosphingosin zur kosmetischen Brustvergrößerung beansprucht. Auch hier kann es sich bei dem in der kosmetischen Formulierung enthaltenen Hilfsstoff beispielsweise um ein Lösungsmittel und somit beispielsweise um 1 ,2-Pentandiol handeln. In einer bevorzugten Variante der Verwendung ist der Hilfsstoff 1 ,2-Pentandiol.

In den nachfolgend aufgeführten Beispielen wird die vorliegende Erfindung beispielhaft beschrieben, ohne dass die Erfindung, deren Anwendungsbreite sich aus der gesamten Beschreibung und den Ansprüchen ergibt, auf die in den Beispielen genannten

Ausführungsformen beschränkt sein soll.

Beispiele: Beispiel 1: Untersuchung des Einflusses von N-Hexanoyl-Phytosphingosin auf die

Genexpression in humanen dermalen Fibroblasten

Im vorliegenden Beispiel wurde die Wirkung von N-Hexanoyl-Phytosphingosin auf die Genexpression in Fibroblasten (normal human dermal fibroblasts, NHDFs) untersucht. Dazu wurden zunächst primäre humane dermale Fibroblasten (human dermal fibroblasts derived from neonatal skin, HDF), cryokenserviert, Lifeline Cell Technology, bezogen über CellSystems® Biotechnologie Vertrieb GmbH, in Minimum Essential Medium (MEM) mit Earle's Salzen (EMEM) (PAA Laboratories GmbH) unter Zusatz von 10 % fetalem

Kälberserum (FBS - fetal bovine serum, Invitrogen Ltd, UK), 1 % nicht essentieller

Aminosäuren (NEAA) (100x) - non essential amino acids, (PAA Laboratories GmbH), 1 % L- Glutamin (100x) (Invitrogen Ltd) und 1 % Penicillin/Streptomycin (5000U/mL Penicillin und 5000 g/mL Streptomycin/mL, (Invitrogen Ltd) bei 37 °C und 5% C0₂ kultiviert. Für

Genexpressionsstudien wurden die Zellen in 6-Well-Platten ausgesät und bis zur

Subkonfluenz (maximal 60%) kultiviert.

Anschliessend wurde das Medium von den Zellen abgenommen und durch frisches Medium mit N-Hexanoyl-Phytosphingosin ersetzt. Als Vehikel wurde Methanol eingesetzt, wobei die Endkonzentration des Vehikels im Medium bei 0,05% (v/v) lag. Endkonzentration von N- Hexanoyl-Phytosphingosin im Medium war 5 μΜ. Als Kontrolle wurde die Kultivierung ohne Wirkstoff, nur mit Medium (Vehikel) durchgeführt. Sämtliche Kultivierungen wurden doppelt (mit Zellen 2 verschiedener Spender) vorgenommen.

Nach 24-stündiger Kultivierung wurde das Medium abgenommen und die Zellen durch Zugabe von RNeasy Lysis Buffer (Qiagen) lysiert. Die Isolation der Gesamt-RNA erfolgte nach Herstellerangaben. Zusammengefasst wurde die Gesamt-RNA mittels RNeasy Mini Kit (Qiagen) isoliert. Die RNA-Konzentration wurde spektrophotometrisch mit einem SmartSpec Plus (Biorad) bestimmt. Reinheit und Integrität der RNA wurden mittels Agilent 2100 Bioanalyzer mit einem 6000 Nano LabChip Reagenzienset (Agilent Technologies, Inc.) bestimmt. RNA-Proben wurden bis zur Weiterverarbeitung bei -80 °C gelagert.

Die Analyse der Genexpression erfolgte mittels Affymetrix HGU133 plus 2.0 GeneChips (Affymetrix), wobei 2 μg Gesamt-RNA eingesetzt wurden. Dafür wurde die RNA der beiden unterschiedlichen Spenderkulturen gepoolt. Expressionsanalysen inkl. Standard- Datenauswertung wurden nach Herstellerangaben (AFFYMETRIX, INC.) durchgeführt. Überraschenderweise wurde gefunden, dass die Behandlung der Fibroblasten mit N- Hexanoyl-Phytosphingosin zur veränderten Expression einer Reihe von Genen führte, denen eine zentrale Bedeutung für die Stärkung der extrazellulären Matrix der Dermis und damit für die Straffung, die Elastizität und die Festigkeit der Haut zukommt, wodurch die Hauterschlaffung deutlich Reduziert werden kann, so wie die Haut aufgepolstert werden kann. Die Gene und das Ausmaß ihrer Regulation durch N-Hexanoyl-Phytosphingosin sind in Tabelle 1 gezeigt.

Tabelle 1 : Auswahl mindestens 1 ,4-fach hoch- oder runter-regulierter Gene in humanen dermalen Fibroblasten 24 h nach Applikation von 5 μΜ N-Hexanoyl-Phytosphingosin. Alle Werte beziehen sich auf den Vergleich mit Vehikel-behandelten Fibroblasten

Zum einen wurde eine Reihe von Genen reguliert, die eine zentrale Bedeutung für die Ausbildung und Stärkung der dermalen extrazellulären Matrix haben. Darunter ACAN, welches ein Proteoklykan und damit eine Komponente der extrazellulären Matrix kodiert. COL10A1 und COL11A1 kodieren verschiedene Kollagen-Untereinheiten. Damit wird die Ausbildung von Kollagen-Fibrillen positiv beeinflusst. Das /7G42-Genprodukt ist Bestandteil des Rezeptors für Laminin, Kollagen, Fibronektin und andere wichtige Bestandteile der extrazellulären Matrix. Ihm kommt eine besondere Bedeutung für die Organisation der neugebildeten extrazellulären Matrix zu. HAPLN1 kodiert für ein Brückenprotein, welches Aggregate von Proteoglykan-Monomeren und Hyaluronsäure in der extrazellulären Matrix stabilisiert. MMP3 kodiert ein Enzym, welches verschiedene Moleküle der extrazellulären Matrix abbaut. Da die Expression von MMP3 durch N-Hexanoyl-Phytosphingosin vermindert wird, wird somit die extrazelluläre Matrix vor Abbau geschützt. IGF1, LEP und FGF18 schließlich kodieren für Wachstumsfaktoren bzw. hormonähnliche Moleküle, welchen wichtige Signaltransduktionsfunktionen zukommen, die ihrerseits die Struktur der dermalen Matrix, und damit die Festigkeit, Kompaktheit, Spannkraft und Elastizität der Haut positiv beeinflussen.

Beispiel 1 zeigt somit deutlich, dass N-Hexanoyl-Phytosphingosin ausgesprochen gut zur Reduzierung der Hauterschlaffung und zur Aufpolsterung der Haut geeignet ist.

Beispiel 2: Untersuchung des Einflusses von N-Hexanoyl-Phytosphingosin auf die

Genexpression in Adipozyten

In diesem Beispiel wurde die Wirkung von N-Hexanoyl-Phytosphingosin auf die

Genexpression in differenzierten humanen Adipozyten untersucht.

Zellen, Medien und Reagenzien wurden von PromoCell bezogen. Die Kultivierung wurde entsprechend der Protokolle von PromoCell durchgeführt. Sofern nicht anders angegeben, wurden die Zellen bei 37 °C und 5% C0₂ kultiviert. Zunächst wurden proliferierende subkutane primäre humane weisse Präadipozyten (human white preadipocytes, HWP) von zwei verschiedenen Spendern in einem speziellen Präadipozyten-Wachstumsmedium (Preadipocyte Growth Medium) bis zum Erreichen der vollständigen Konfluenz kultiviert. Anschliessend wurde das Medium gegen ein spezielles Differenzierungsmedium

(Preadipocyte Differentiation Medium) ausgetauscht, die Zellen wurden mit diesem Medium 72 Stunden inkubiert. Anschliessend wurde das Medium gegen ein weiteres Medium (Adipocyte Nutrition Medium) ausgetauscht, um den Differenzierungsprozess

abzuschließen. Die Zellen wurden mit diesem Medium für 12 Tage weiterinkubiert, wobei alle drei Tage ein Medienwechsel durchgeführt wurde. Im Anschluss wurde das Medium von den Zellen abgenommen und durch frisches Medium mit N-Hexanoyl-Phytosphingosin ersetzt. Als Vehikel wurde Methanol eingesetzt, wobei die Endkonzentration des Vehikels im Medium bei 0,05% (v/v) lag. Endkonzentration von N-Hexanoyl-Phytosphingosin im Medium war 2,5 μΜ. Als Kontrolle wurde die Kultivierung ohne Wirkstoff, nur mit Medium (Vehikel) durchgeführt. Sämtliche Kultivierungen wurden doppelt (mit Zellen 2

verschiedener Spender) vorgenommen.

Nach 6-stündiger Kultivierung wurde das Medium abgenommen und die Zellen durch Zugabe von RNeasy Lysis Buffer (Qiagen) lysiert. Die Isolation der Gesamt-RNA erfolgte nach Herstellerangaben. Zusammengefasst wurde die Gesamt-RNA mittels RNeasy Mini Kit (Qiagen) isoliert. Die RNA-Konzentration wurde spektrophotometrisch mit einem SmartSpec Plus (Biorad) bestimmt. Reinheit und Integrität der RNA wurden mittels Agilent 2100 Bioanalyzer mit einem 6000 Nano LabChip Reagenzienset (Agilent Technologies, Inc.) bestimmt. RNA-Proben wurden bis zur Weiterverarbeitung bei -80 °C gelagert.

Die Analyse der Genexpression erfolgte mittels Affymetrix HGU133 plus 2.0 GeneChips (Affymetrix), wobei 2 μg Gesamt-RNA eingesetzt wurden. Dafür wurde die RNA der beiden unterschiedlichen Spenderkulturen gepoolt. Expressionsanalysen inkl. Standard- Datenauswertung wurden nach Herstellerangaben (Affymetrix) durchgeführt.

Überraschenderweise wurde gefunden, dass die Behandlung der differenzierten Adipozyten mit N-Hexanoyl-Phytosphingosin zur veränderten Expression einer Reihe von Genen führte, denen eine zentrale Bedeutung für die Biosynthese von Speicherfetten im subkutanen Fettgewebe der Haut zukommt. Das beobachtete Regulationsmuster deutet auf eine gesteigerte Biosynthese von Speicherfett hin (Lipogenese). Ein derartiger Mechanismus kann die bei der in v/Vo-Studie (s.u.) beobachteten Effekte, d.h. die Glättung der Haut und die Reduktion der Schlaffheit der Haut, erklären. Die Haut wird gewissermassen durch neugebildetes Fett aufgepolstert.

Die Gene und das Ausmaß ihrer Regulation durch N-Hexanoyl-Phytosphingosin sind in Tabelle 2 gezeigt.

Gene Protein Regulation der

Genexpression durch N- Hexanoyl-Phytosphingosin

ADIPOQ adiponectin + 2,2

LEP leptin + 2,7

LEPR leptin receptor + 4,1

PPARG peroxisome proliferator activated receptor, + 2,5

gamma

PPARD peroxisome proliferator activated receptor, + 1 ,7

delta

CEBPB CAA T/enhancer binding protein (C/EBP), + 2,1

beta

LIPC lipase - 2,5

FAS fatty acid synthase + 1 ,4

ACACA acetyl-coenzyme Acarboxylase alpha + 1 ,5

THBS1 thrombospondin 1 + 5,9

Tabelle 2: Auswahl mindestens 1 ,4-fach hoch- oder runter-regulierter Gene in

differenzierten humanen Adipozyten 6 h nach Applikation von 2,5 μΜ N-Hexanoyl- Phytosphingosin. Alle Werte beziehen sich auf den Vergleich mit Vehikel-behandelten Adipozyten.

Hinsichtlich der Gene des Fettstoffwechsels sind vor allem LIPC, FAS und ACACA auffällig. Ersteres kodiert eine Lipase. Diese Enzyme katalysieren allgemein den Abbau von

Triglyceriden. Da das Gen LIPC im vorliegenden Beispiel durch die Testsubstanz runterreguliert wurde, kann somit ein Aufbau von Unterhaut-Fettgewebe postuliert werden. FAS kodiert für das Enzym Fettsäuresynthase, ACACA für die Acetyl-Coenzym A

Carboxylase. Beides sind Schlüsselenzyme für die Triglycerid-Biosynthese. Da beide entsprechenden Gene durch die Testsubstanz hochreguliert wurden, lässt sich auch hier ein positiver Effekt auf den Aufbau von Fettgewebe postulieren. CEBPB, PPARG und PPARG kodieren Transkriptionsfaktoren, welche unter anderem dafür bekannt sind, die Lipid-Biosynthese zu regulieren. Auch hier deutet das Regulationsmuster wieder auf eine Stimulation der Fettbildung (Lipogenese) hin. Neben diesen Genen des Fettstoffwechsels wurde auch die Expression einer Reihe von Genen kodierend für Wachstumsfaktoren bzw. Hormon-ähnliche Substanzen in den Adipozyten reguliert. Zu nennen sind hier LEP, LEPR und ADIPOQ. Diese haben allesamt Bedeutungen für die Regulation der Neubildung und Stärkung der dermalen extrazellulären Matrix. Insofern können diese durch die Adipozyten gebildeten Faktoren vermutlich in vivo über Zell-Kommunikations-Mechanismus zur Stärkung der Hautstruktur beitragen.

Somit kann auch in Beispiel 2 klar gezeigt werden, dass N-Hexanoyl-Phytosphingosin ausgesprochen gut zur Reduzierung der Hauterschlaffung und zur Aufpolsterung der Haut geeignet ist.

Beispiel 3: Reduzierung der Schlaffheit und der Rauhigkeit und Erhöhung der Echogenität der Haut durch N-Hexanoyl-Phytosphingosin Die Verbesserung der Parameter Schlaffheit der Haut, Rauhigkeit der Haut und Echogenität der Haut durch topische Applikation von N-Hexanoyl-Phytosphingosin in Formulierung wurde in einer humanen Studie demonstriert.

Das Panel umfasste 60 gesunde weibliche Probandinnen kaukasischen Ursprungs bis siebzig Jahre, die sich in ihrer postmenopausalen Phase befanden (Mittelwert des Alters 59,4 Jahre). Die Applikation der Formulierungen erfolgte im Gesicht. Vehikel-Formulierung (Vehikel) und N-Hexanoyl-Phytosphingosin-Formulierung (N-Hexanoyl-Phytosphingosin) wurde von jeweils 30 Probandinnen appliziert. Bei der nichterfindungsgemäßen Vehikel- Formulierung, welche als Vergleichsformulierung dient, wurden die 0,2 Massen-% N- Hexanoyl-Phytosphingosin durch zusätzliche 0,2 Massen-% Wasser ersetzt.

Die Applikation erfolgte zweimal täglich, morgens und abends, über einen Zeitraum von zwölf Wochen. Messpunkte waren vor Beginn der Applikation (TO), nach vier Wochen (T4), nach acht Wochen (T8) und nach zwölf Wochen (T12). Ein Zeitraum über vier Wochen wird entsprechend als T4-T0 bezeichnet. Die Zusammensetzung der Formulierungen ist in der folgenden Tabelle 3 gezeigt:

Tabelle 3. Testformulierungen. Angaben in Massenprozent. Zur Herstellung der Formulierungen wurden dem Fachmann bekannte, übliche

Formulierungsverfahren eingesetzt.

Die Messungen fanden in einem Temperatur- und Luftfeuchtigkeit-kontrollierten Raum (24+2 °C, 50±10 relative Luftfeuchtigkeit) statt. Die Probanden wurden gebeten, bis zu zwölf Stunden vor der Messung kein Produkt zu applizieren und ihr Gesicht drei Stunden vor der Messung zu waschen. Die Schlaffheit der Haut wurde durch einen Dermatologen mittels visueller und taktiler Evaluierung anhand einer 4-Punkt-Skala (0 = abwesend, 1 = minimal, 2 = moderat, 3 = maximal) bewertet.

Die Rauhigkeit der Haut wurde mittels Primos Pico optischer 3D-Sensor (GF Messtechnik GmbH) bestimmt. Primos Pico nutzt eine digitale Streifen projektion basierend auf

Mikrospiegeln, welche eine schnelle und hoch präzise Datenaufnahme ermöglichen.

Streifen werden auf die Hautoberfläche projiziert und die Projektion wird unter einem definierten Triangulationswinkel mittels einer CCD-Kamera aufgenommen. Die Topographie des vermessenen Objekts wird durch die Position der Streifen und der Graustufen aller registrierten Bildpunkte berechnet. Das Messfeld beträgt 40 x 30 mm² mit einer lateralen Auflösung von 63 μηη, einer Höhenauflösung von > 4 μηη und einer Genauigkeit von > 6 μηη. Die Datenaufnahme erfolgt innerhalb von < 70 ms. Bestimmt wurde die mittlere Rauhigkeit Sa, welche das arithmetische Mittel der Hautrauhigkeit im aufgenommenen Bild wiedergibt.

Die Echogenität der Haut wurde mittels Ultraschall-Scanner DermaScan^® C gemessen. Das Gerät basiert auf dem physikalischen Prinzip der Ultraschall-Emission eines Transducers. Trifft ein Ultraschall-Strahl auf strukturell unterschiedliche Schichten der Haut wird dieser teilweise transmittiert, teilweise reflektiert. Dadurch werden Echoschallwellen mit unterschiedlicher Amplitude generiert. Ihre Intensität wird durch einen Mikroprozessor detektiert. DermaScan^® C Version 3 (Cortex Technology, Dänemark) ist ein

hochauflösender Scanner, der Hochfrequenz-Ultraschall (20 MHz) emittiert. Diese Frequenz erlaubt die Beobachtung von Gewebestrukturen bis zu einer Tiefe von 15 mm mit 60 μηη axialer und 200 μηη lateraler Auflösung. Die Echogenität wurde im B-Scan-Modus aufgenommen und in % wiedergegeben. Das Instrument misst die Dichte der

Hautschichten. Die Intensität der Schallwellen ist abhängig von der Gewebedichte. Jüngere Haut ist wesentlich dichter als gealterte Haut. Die Wirksamkeit einer gewebeverdichtenden Behandlung wird durch einen Anstieg der Hautdichte angezeigt.

In Abbildung 1 ist die Abnahme der Schlaffheit der Haut dargestellt.

Über einen Zeitraum von zwölf Wochen (T12-T0) wurde eine stetige Reduktion der

Schlaffheit der Haut sowohl in der Vehikel-Gruppe, als auch in der N-Hexanoyl- Phytosphingosin-Gruppe beobachtet, wobei die Abnahme der Schlaffheit der Haut in der N- Hexanoyl-Phytosphingosin-Gruppe zu allen Zeitpunkten jeweils stärker ausgeprägt war.

In Abbildung 2 ist die Änderung der Hautrauhigkeit (Sa-Parameter) dargestellt.

Die Hautrauhigkeit in der N-Hexanoyl-Phytosphingosin-Gruppe wurde stetig über den gesamten Studienzeitraum weiter reduziert, während in der Vehikel-Gruppe keine

Verbesserung der Hautrauhigkeit erzielt wurde. In Abbildung 3 ist die Änderung der Echogenität der Haut dargestellt.

Sowohl in der Vehikel-Gruppe als auch in der N-Hexanoyl-Phytosphingosin-Gruppe wurde eine leichte Abnahme der Echogenität nach 4 Wochen (T4-T0) detektiert. Während die Behandlung mit Vehikel-Formulierung im weiteren Verlauf der Studie keine Verbesserung gegenüber dem Ausgangswert zeigte, wurde die Echogenität in der N-Hexanoyl- Phytosphingosin-Gruppe stetig verbessert.

Diese Ergebnisse, welche in den Abbildungen 1 bis 3 zeigen, dass durch den Einsatz von N-Hexanoyl-Phytosphingosin in Formulierung eine Abnahme der Schlaffheit der Haut, eine Abnahme der Hautrauhigkeit und eine Zunahme der Echogenität der Haut erzielt werden kann.

Beispiel 4: Erhöhung der Bioverfügbarkeit von N-Hexanoyl-Phytosphingosin durch

Formulierung mit 1,2-Pentandiol

Die Erhöhung der Hautpenetration von N-Hexanoyl-Phytosphingosin aus einer

kosmetischen Formulierung durch Zugabe von 1 ,2-Pentandiol wurde im Rahmen einer perkutanen Absorptionsstudie am Schweinehaut-Modell gezeigt. Die praktische

Durchführung der Studie erfolge nach einem gängigen Protokoll, wie zum Beispiel in S. Richert, A. Schräder, K. Schräder, Int. J. Cosmet. Sei. 2003, 25, 5-13 beschrieben.

Die untersuchten Formulierungen sind in folgender Tabelle 4 zusammengefasst. Rohstoff TN/ CT ParafTN/G2 CT+ 1 ,2- Paraffin

G20/ fin Oil 0/ Pentan- Oil+ 1 ,2-

APM APM diol Pentan-

1 :1 :1 1 :1 :1 + diol

1 ,2- Penta

n-diol

TEGINACID^® C 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00

(Ceteareth-25)

ABIL^® Care 85 (Bis-PEG/ 1 ,00 1 ,00 1 ,00 1 ,00 1 ,00 1 ,00

PPG-16/16 PEG/PPG16/

16 Dimethicone;Caprylic/

Capric Triglyceride)

TEGO^® Alkanol 1618 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00 5,00

(Cetearyl Alcohol)

Stearin (Stearic acid (and) 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 0,50 palmitic acid)

TEGOSOFT^® TN (C12-15 4,83 4,83

Alkyl Benzoate)

TEGOSOFT^® APM (PPG- 4,83 4,83

13 Myristyl Ether)

TEGOSOFT^® G20 (Octyl 4,83 4,83

Dodecanol)

TEGOSOFT^® CT 14,5 14,5

(Caprylic/Capric

Triglycerides)

Paraffinum Liquidum (30 14,5 14,5 mPa^*s)

N-Hexanoyl- 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2 0,2

Phytosphingosin

Wasser (Water) 72,26 72,25 72,25 70,46 70,45 70,45

Glycerol (Glycerin) 3 3 3 3 3 3

TEGO^® Carbomer 134 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20 0,20

(Carbomer)

TEGOSOFT^® Emollient 0,80 0,80 0,80 0,80 0,80 0,80 {viele supra)

D 1 ,2-Pentandiol (Pentylene - - - 1 ,80 1 ,80 1 ,80

Glycol)

Z Euxyl K220 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12 0,12

(Methylisothiazolinone,

Ethylhexylglycerin, Water)

NaOH 10% (Sodium 0,43 0,43 0,43 0,43 0,43 0,43

Hydroxide)

Tabelle 4: Testformulierungen. Angaben in Massen prozent.

Zur Herstellung der Formulierungen wurden dem Fachmann bekannte, übliche

Formulierungsverfahren eingesetzt.

In Abbildung 4 ist die Bioverfügbarkeit von N-Hexanoyl-Phytosphingosin aus

unterschiedlichen Formulierungen dargestellt. Diese Ergebnisse zeigen, dass durch den Einsatz von N-Hexanoyl-Phytosphingosin in

Kombination mit 1 ,2-Pentandiol in Formulierung eine Erhöhung der Bioverfügbarkeit erzielt werden kann. Die Bioverfügbarkeit ist für kosmetische Formulierungen ein wichtiger Faktor, da sie Auskunft darüber gibt, zu welchem Anteil der in der Formulierung vorhandene Wirkstoff auch dann tatsächlich durch den Organismus aufgenommen wird. Eine hohe Bioverfügbarkeit stellt somit einen klaren Vorteil dar. Beispielsweise kann hierdurch die

Menge an Wirkstoff, welcher in die Formulierung eingebracht werden muss, bei einer hohen Bioverfügbarkeit reduziert werden.

Die Ergebnisse aus Beispiel 4 zeigen, dass die Kombination aus N-Hexanoyl- Phytosphingosin und 1 ,2-Pentandiol einen deutlichen Vorteil verglichen mit den

entsprechenden Formulierungen ohne 1 ,2-Pentandiol aufweist.

Beispiel 5: Reduzierung der Hauterschlaffung am Oberarm durch N-Hexanoyl- Phytosphingosin Die Reduzierung der Hauterschlaffung am Oberarm, quantifizierbar durch den Parameter der Echogenität der Haut, durch topische Applikation von N-Hexanoyl-Phytosphingosin in Formulierung wurde in einer humanen Studie demonstriert. Das Panel umfasste gesunde weibliche Probandinnen kaukasischen Ursprungs bis siebzig Jahre, die sich in ihrer postmenopausalen Phase befanden. Die Echogenität der Haut an den Oberarmen der Probandinnen betrug höchstens 60% (DermaScan^® C, B-Scan-Modus). Die Applikation der Formulierungen erfolgte auf den Oberarmen. Vehikel-Formulierung (Vehikel) und Formulierung mit unterschiedlichen Konzentrationen N-Hexanoyl- Phytosphingosin (N-Hexanoyl-Phytosphingosin) wurde von jeweils 16 Probandinnen appliziert. Bei der nichterfindungsgemäßen Vehikel-Formulierung, welche als

Vergleichsformulierung dient, wurden die entsprechenden Massen-% N-Hexanoyl- Phytosphingosin durch zusätzliche Massen-% Wasser ersetzt. Die Applikation erfolgte zweimal täglich, morgens und abends, über einen Zeitraum von zwölf Wochen. Messpunkte waren vor Beginn der Applikation (TO), nach vier Wochen (T4), nach acht Wochen (T8) und nach zwölf Wochen (T12). Ein Zeitraum über vier Wochen wird entsprechend als T4-T0 bezeichnet. Die Zusammensetzung der Formulierungen ist in der folgenden Tabelle 3 gezeigt:

Phase Rohstoff Vehikel 0.02 %N- 0.05 %N-

Hexanoyl- Hexanoyl-

Phytosphingosin Phytosphingosin

A TEGINACID^® C (Ceteareth-25) 2,00 2,00 2,00

AB IL^® Care 85 (Bis-PEG/PPG- 1 ,00 1 ,00 1 ,00

16/16 PEG/PPG16/16

Dimethicone; Caprylic/Capric

Triglyceride)

TEGO^® Alkanol 1618 (Cetearyl 5,00 5,00 5,00

Alcohol)

Stearin (Stearic acid (and) palmitic 0,50 0,50 0,50

acid)

TEGOSOFT^® APM (PPG-13 4,83 4,83 4,83

Myristyl Ether) TEGOSOFT^® G20 (Octyl 4,83 4,83 4,83

Dodecanol)

TEGOSOFT^® TN (C12-15 Alkyl 4,83 4,83 4,83

Benzoate)

B Wasser (Water) 69,84 69,82 69,79

Glycerol (Glycerin) 2,50 2,50 2,50

TEGO^® Carbomer 134 (Carbomer) 0,15 0,15 0,15

TEGOSOFT^® APIW G20/ TN 1 :1 :1 0,60 0,60 0,60

D N-Hexanoyl-Phytosphingosin 0.02 0.05

1 ,2-Pentandiol (Pentylene Glycol) 3,80 3,80 3,80

Euxyl K220 (Methylisothiazolinone, 0,12 0,12 0,12

Ethylhexylglycerin, Water)

Sodium Hydroxide (10% in water) pH 5,5 pH 5,5 pH 5,5

Tabelle 5. Testformulierungen. Angaben in Massen prozent.

Zur Herstellung der Formulierungen wurden dem Fachmann bekannte, übliche

Formulierungsverfahren eingesetzt.

Die Messungen fanden in einem Temperatur- und Luftfeuchtigkeit-kontrollierten Raum (24+2 °C, 50±10 relative Luftfeuchtigkeit) statt. Die Probanden wurden gebeten, bis zu zwölf Stunden vor der Messung kein Produkt zu applizieren und ihre Arme ab drei Stunden vor der Messung nicht mehr zu waschen.

Die Hauterschlaffung wurde durch Messung der Echogenität der Haut mittels Ultraschall- Scanner DermaScan^® C gemessen. Die Echogenität wurde im B-Scan-Modus

aufgenommen und in % wiedergegeben. Die Wirksamkeit einer Hauterschlaffung reduzierenden Behandlung wird durch einen Anstieg der Echogenität in [%], und damit einhergehend einem Anstieg der Hautdichte, angezeigt.

In Abbildung 5 ist die Zunahme der Hautdichte am Oberarm dargestellt.

Über einen Zeitraum von vier, acht und zwölf Wochen wurde jeweils eine Zunahme der Echogenität der Haut durch Behandlung mit 0.05% N-Hexanoyl-Phytosphingosin, verglichen gegenüber dem Ausgangswert, beobachtet. Diese Zunahme war im Fall einer Behandlung mit 0.02% N-Hexanoyl-Phytosphingosin weniger stark ausgeprägt und erst ab einer Behandlungsdauer von acht Wochen messbar. Durch die Behandlung mit Vehikel- Formulierung wurde keine Zunahme der Echogenität der Haut, sondern zu sämtlichen Zeitpunkten jeweils eine Abnahme der Echogenität der Haut, erzielt. Dieses Ergebnis zeigt, dass durch den Einsatz von 0.02% als auch 0.05% N-Hexanoyl- Phytosphingosin in Formulierung eine Zunahme der Echogenität am Oberarm, im Vergleich zur eingesetzten Vehikel-Formulierung, erzielt werden kann. Die Zunahme der Echogenität am Oberarm ist gleichbedeutend mit einer Abnahme der Hauterschlaffung am Oberarm.

Claims

Ansprüche

1 . Kosmetische Formulierung umfassend:

- ein N-Acyl-Phytosphingosin und

- 1 ,2-Pentandiol.

2. Kosmetische Formulierung nach Anspruch 1 ,

wobei das N-Acyl-Phytosphingosin N-Hexanoyl-Phytosphingosin ist.

3. Kosmetische Formulierung nach Anspruch 1 oder 2,

wobei die Formulierung neben dem N-Acyl-Phytosphingosin keine weiteren Ceramide umfasst.

4. Kosmetische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 3,

wobei das N-Acyl-Phytosphingosin in einer Konzentration von 0,02 Massen-% bis 2 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten ist.

5. Kosmetische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 4,

wobei das 1 ,2-Pentandiol in einer Konzentration von 0,2 Massen-% bis 15 Massen-% bezogen auf die Gesamtformulierung in der Formulierung enthalten ist.

6. Kosmetische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 5,

wobei das Verhältnis von N-Acyl-Phytosphingosin zu 1 ,2-Pentandiol im Bereich von 1 :100 bis 1 :1 liegt.

7. Kosmetische Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 6,

wobei sie zusätzlich C8/C10-Glycerinpartialester enthält.

8. Verwendung einer kosmetischen Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zum Auftragen auf die Haut.

9. Verwendung einer kosmetischen Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Reduzierung der Hauterschlaffung.

10. Verwendung einer kosmetischen Formulierung nach einem der Ansprüche 1 bis 7 zur Aufpolsterung der Haut.

1 1 . Verwendung nach einem der Ansprüche 8 bis 10 im Gesicht.

12. Verwendung nach einem der Ansprüche 8 bis 10 auf der Brust.

13. Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend ein N-Acyl- Phytosphingosin zur Reduzierung der Hauterschlaffung.

14. Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend N-Hexanoyl- Phytosphingosin zur Reduzierung der Hauterschlaffung.

15. Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend N-Hexanoyl- Phytosphingosin als einziges Ceramid zur Reduzierung der Hauterschlaffung.

16. Verwendung nach einem der Ansprüche 13 bis 15 im Gesicht.

17. Verwendung nach einem der Ansprüche 13 bis 15 auf der Brust.

18. Verwendung einer kosmetischen Formulierung umfassend N-Hexanoyl- Phytosphingosin zur kosmetischen Brustvergrößerung.