WO2013053942A1 - 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, deren herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe - Google Patents

4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, deren herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe Download PDF

Info

Publication number
WO2013053942A1
WO2013053942A1 PCT/EP2012/070403 EP2012070403W WO2013053942A1 WO 2013053942 A1 WO2013053942 A1 WO 2013053942A1 EP 2012070403 W EP2012070403 W EP 2012070403W WO 2013053942 A1 WO2013053942 A1 WO 2013053942A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
amino
phenylpyrazolo
phenylamino
phenyl
pyrimidine derivatives
Prior art date
Application number
PCT/EP2012/070403
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Peter Wutzler
Michaela Schmidtke
Vadim Makarov
Original Assignee
Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft Mbh & Co. Kg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from DE201110116373 external-priority patent/DE102011116373A1/de
Priority to US14/350,885 priority Critical patent/US9790225B2/en
Priority to RU2014118953/04A priority patent/RU2014118953A/ru
Priority to DK12775659.1T priority patent/DK2766367T3/da
Priority to ES12775659T priority patent/ES2924828T3/es
Priority to HRP20220928TT priority patent/HRP20220928T1/hr
Priority to KR1020147009385A priority patent/KR20140095467A/ko
Priority to EP12775659.1A priority patent/EP2766367B1/de
Priority to LTEPPCT/EP2012/070403T priority patent/LT2766367T/lt
Priority to MX2014003987A priority patent/MX2014003987A/es
Application filed by Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft Mbh & Co. Kg filed Critical Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft Mbh & Co. Kg
Priority to PL12775659.1T priority patent/PL2766367T3/pl
Priority to JP2014535117A priority patent/JP6071012B2/ja
Priority to SG11201401351PA priority patent/SG11201401351PA/en
Priority to BR112014008815-2A priority patent/BR112014008815B1/pt
Priority to NZ623573A priority patent/NZ623573B2/en
Priority to CA2850439A priority patent/CA2850439C/en
Priority to CN201280050298.6A priority patent/CN103946224A/zh
Priority to SI201232005T priority patent/SI2766367T1/sl
Priority to AU2012322750A priority patent/AU2012322750B2/en
Publication of WO2013053942A1 publication Critical patent/WO2013053942A1/de
Priority to ZA2014/02226A priority patent/ZA201402226B/en
Priority to IL231934A priority patent/IL231934A/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses

Definitions

  • the invention relates to novel 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives and their use as antiviral agents, preferably for the treatment of pi- cornavirusin Stammionen.
  • Picornaviruses are responsible for a wide range of human diseases.
  • Enteroviruses include more than 60 different human pathogenic serotypes (Melnick J in: Fields B et al., Editors, Virology, Philadelphia: Lippincott-Raven Publishers, 1996, 655-712).
  • Enterovirus, echovirus, coxsackievirus A and B infections are often associated with nonspecific fever and cause upper respiratory tract disorders, which are often indistinguishable from rhinovirus infections.
  • Haemorrhagic conjunctivitis, herpangina, hand-foot-and-mouth disease, aseptic meningitis, encephalitis, and acute myocarditis are among the more serious conditions that can also be epidemic.
  • Rhinovirus infections cause more than half of all respiratory diseases of the obe- ren respiratory tract in humans (Couch RB in: Fields BM et al., editors: Fields Virology, 3rd edition, Lippincott-Raven, Philadelphia, 1 996, 713-35). With a mean illness duration of approx. 1 0 days these usually harmless running colds lead annually to millions of physician visits, work and school failures. Complications may include otitis media, sinusitis, exacerbation of asthma and cystic fibrosis, and lower respiratory tract infections, especially in infants, the elderly, and immunocompromised patients. Because of the variety of types, vaccine prophylaxis is currently not possible.
  • ribavirin inhibits a host cell enzyme, inosine 5'-monophosphate (IMP) dehydrogenase. By eliminating this key enzyme for the synthesis of purine nucleotides, replication of picornaviruses in vitro and in vivo can be inhibited.
  • ribavirin should be incorporated directly into the genome of polioviruses and thereby additionally act as mutagen for RNA viruses (Crotty S et al .: Nat Med, 2000, 6 (12), 1375-9).
  • Enviroxime prevents the synthesis of plush strand RNA by binding to the viral protein 3A, which is necessary for the formation of RNA intermediates in virus replication (Heinz BA and Vance LM: J Virol, 1995, 69 (7), 4189-97). Moderate or no therapeutic effects, poor pharmacokinetics, and undesirable side effects have been reported in clinical trials (Miller FD et al .: Antimicrob Agents Chemother, 1985, 27 (1), 102-6). There are no clinical data on newer derivatives with better bioavailability and tolerability.
  • the protease inhibitor AG 7088 acts in cell culture in the nanomolar concentration range against 48 rhinovirus types as well as coxsackievirus A21, B3, enterovirus 70 and echovirus. Rus 1 1 (Pattick AK et al.: Antimicrobila Agents Chemother, 1999, 43 (10), 2444-50). So far, the final data from the clinical trials are not known.
  • the WIN substances were created (Diana GD: Curr Med Chem 2003, 2, 1-12). They prevent adsorption and / or uncoating of rhino and enteroviruses. Some of the WIN substances are highly specific only to single genera or virus types of picornaviruses. Other derivatives inhibit the proliferation of rhino and enteroviruses.
  • the WIN substances include z. Arildone, disoxaril and pirodavir. These compounds showed very good antiviral effects in cell culture.
  • Pleconaril has a very good oral bioavailability and after its binding into the hydrophobic pocket in the viral capsid inhibits the penetration of rhino, echo and coxsackieviruses (Pevear DC et al .: Antimicrob Agents Chemother 1999, 43 (9), 21 09-15; McKinlay MA et al .: Annu Rev Microbiol 1992, 46, 635-54).
  • CRF antagonists corticotropin-releasing factor antagonists
  • CRF antagonists corticotropin-releasing factor antagonists
  • EP 674 642 and EP 691 128 include, for example, adenosine kinase (EP 496 617 or US Pat. No. 4,904,666), xanthine oxigenase (J. Heterocyc Chem., 19, 1565, 1982) or other enzyme systems (US 2,965,643 and US 3,600,389).
  • WO 00/43394 A discloses substituted pyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives and their use as antiviral agents.
  • EP 2 049 540 also discloses 4-amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives and their use as antiviral agents.
  • the object of the invention is to provide further pyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives and their preparation and use, which can be used as antiviral agents against enteroviruses and rhinoviruses and the stated disadvantages of the prior art, for example in terms of stability and bioavailability of Avoid substances.
  • each additional hydrogen atom in each of the phenyl groups A and B replacing each other independently may be represented by a radical R 1 , wherein each R 1 is independently a halogen, a saturated or unsaturated, linear or branched aliphatic radical having 1-7 chain members, a saturated or unsaturated, linear or branched alkanoles radical having 1-8 chain members, N0 2 , CN, CONR 2 2 , COR 2 , COOR 2 , OR 2 , SR 2 , NR 2 2 , SO 2 NR 2 2 , CX 3 , CR 2 X 2 , OCX 3 , OCR 2 X 2 , or phenyl; each R 2 is independently hydrogen, a saturated or unsaturated, halogenated or non-halogenated, linear or branched aliphatic radical R 1 , wherein each R 1 is independently a halogen, a saturated or unsaturated, linear or branched aliphatic radical having 1-7 chain members, a saturated or
  • each of the aforementioned groups being depending on fluorine, chlorine, bromine, trifluoromethyl, alkyl, alkoxy, cyano, nitro, amino, aminoalkyl, C (O) alkyl, C (0) 0-alkyl, benzyl, phenyl or naphthyl may be substituted; and
  • X is independently F, Cl, Br, or I.
  • one, two or three hydrogen atoms are advantageously replaced by a substituent R H.
  • exactly one hydrogen atom in one of the phenyl groups A and B is replaced by a substituent R H.
  • the substituent R H may be located in the para position of the phenyl ring A or B.
  • each of the phenyl groups A and B may independently carry further radicals R 1 .
  • the phenyl groups A and B independently carry no, one, two or three further radicals R 1 , preferably no or one further radical R 1 .
  • Suitable alkyls in connection with the invention are in particular linear or branched, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl and butyl in question.
  • alkanols, alkylamines and alkylamides in connection with the invention are in particular linear or branched, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl and butyl in question.
  • alkanols, alkylamines and alkylamides in connection with the invention.
  • each substituent R A , R B is independently hydrogen, a halogen, a saturated or unsaturated, linear or branched aliphatic radical having 1-7 chain members, a saturated or unsaturated, linear or branched alkanoles radical having 1-8 chain members, N0 2 , CN , CONR 2 2 , COR 2 , COOR 2 , OR 2 , SR 2 , NR 2 2 , SO 2 NR 2 2 , CX 3 , CR 2 X 2 , OCX 3 , OCR 2 X 2 , or phenyl; and R 2 and X are as defined above; wherein at least one of the substituents R A , R B has a Hammett constant ⁇ ⁇ greater than 0.23.
  • the invention comprises in particular 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives of the general formula IIa
  • R H is selected from NO 2 , CN, CF 3 , CCI 3 , CBr 3 , OCF 3 , OCCl 3 , OCBr 3 , CHF 2 , CHCl 2 , CHBr 2 , OCHCl 2 , CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe or COOEt, preferably CF 3 or OCF 3 .
  • compositions containing a 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivative according to general formulas I, II, I Ia or IIb may contain other substances, for example pharmaceutically acceptable excipients and carriers.
  • the pharmaceutical compositions may comprise other active substances, in particular antiviral agents, in particular active substances against picornaviruses.
  • the 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives according to the invention have markedly improved stability in liver microsomes over the substances of the prior art .
  • studies on the pharmacokinetics in the mouse have shown that the inventive 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives have a significantly better bioavailability than prior art substances.
  • the compounds of the present invention show a strong antiviral activity against picornaviruses, especially enteroviruses and rhinoviruses in the nano- or micromolar concentration range.
  • the pharmaceutical preparations containing a compound of the formulas I, II, I Ia or I Ib are particularly suitable for the treatment of respiratory infections, aseptic meningitis, encephalitis, herpangina, etc. in humans and animals, those of picornaviruses in particular Entero- and rhinoviruses can be caused.
  • the 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine derivatives are characterized in that they carry on one or both phenyl groups at least one substituent R H , which has a Hammett constant ⁇ ⁇ greater than 0.23.
  • This value 0.23 corresponds to the Hammett constant ⁇ ⁇ of the bromine, which shows the highest Hammett constant for the para position among the halogens.
  • a method for determining the Hammett constant for various substituents in meta (a m ) and para position ( ⁇ ⁇ ) as well as already reported values of a plurality of substituents can be found in the publication by Hansch et al. , "A Survey of Hammett Substituent Constants and Resonance and Field Parameters", Chem. Rev. 1 991. 97, 1 65-1 95, which is incorporated herein by reference in its entirety in each case exclusively the value ⁇ for the para position ( ⁇ ⁇ ), irrespective of the position at which the at least one substituent R H is ultimately located.
  • Examples of the invention are compounds of Table 1, including their pharmaceutically acceptable salt compounds.
  • pro-drugs of the compounds, especially those characterized by a substituent on the pyrazole heteroatom in position 1. It has been found that such compounds are converted in vivo to the 1H pyrazole compound.
  • an imino (phenyl) methyl substituent for example 1 - [imino (phenyl) methyl] -4-amino-3- (4-trifluoromethylphenyl ) amino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine, also designated by the IUPAC name 1-benzylcarboximidoyl-6-phenyl-3-N- [4- (trifluoromethyl) phenyl] -1H-pyrazolo [3,4 -d] pyrimidine-3,4-diamine.
  • salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compound of the invention include addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g.
  • FIG. 1 shows a general scheme for the synthesis of pyrazolo [3,4-d] pyrimidine 1 and includes in the first step the condensation of [bis (methylthio) methylene] malononitrile 2 with phenylamines 3 in alcohol to give phenyl derivatives 4.
  • the latter can each be isolated and purified for further reactions or used directly without purification for subsequent reaction ("one-pot" reaction).
  • the next step is the interaction of phenyl derivative 4 with hydrazine or hydrazine derivatives.
  • the reaction proceeds with boiling for 1 to 4 hours and leads to a high yield of pyrazole 5.
  • the final step of the synthesis of pyrazolo [3,4-d] pyrimidine 1 consists in the condensation of pyrazole 5 with phenylamidines 6 in the presence of acetic acid, trifluoroacetic acid or sodium acetate.
  • the compounds can be advantageously obtained by reacting the pyrazole (5) in the last step of the synthesis with corresponding benzamidine hydrochloride in the presence of an excess of sodium acetate at 200-220 ° C. in the absence of solvent.
  • the compounds can be obtained by reacting the pyrazole (5) in the last step of the synthesis with corresponding benzonitrile (in large excess) under microwave irradiation and in the presence of potassium ferric butylate.
  • An alternative method of synthesis consists in the "one-pot" reaction of malononitrile with aryl isothiocyanates in the presence of sodium hydride and subsequent treatment of the reaction mixture with iodomethyl or dimethyl sulfate. In the process, large amounts of enamines are formed. Again, the condensation of pyrazole 5 with arylamidines 6 in the presence of acid, such as acetic acid or trifluoroacetic acid, or salts thereof (acetate) is the final step in the synthesis of pyrazolo [3,4-d] pyrimidine 1.
  • reaction of pyrazole (5) to pyrazolo [3,4-d] pyrimidine can be carried out with particularly high yields by using the benzamidine component as the free base and carrying out the reaction in polar solvents.
  • An additional advantage of this approach is that the proportion of difficult to separate by-products can be minimized.
  • This reaction can be, starting from substituted 5-amino-4-cyano-3-phenylamino-pyrazoles (5) with optionally substituted benzamidines as the free base (6) to 4-amino-3- (phenylamino) -6-phenylpyrazolo [3 , 4-d] pyrimidine (1) according to the following reaction scheme.
  • R A and R B are substituents as defined above for R 1 .
  • the present invention also relates to reactions as described above, wherein the radicals R A and R B independently of each other from N0 2 , CN, CONR 3 2 , COOR 3 , CHO, CHONH 2 , a halogen, an unsaturated or saturated linear or branched aliphatic radical (called alkyl group) having 1 to 6 chain members, a saturated or unsaturated linear or branched alkanol radical (also called alkoxy) with 1 to 6 chain members, OR 3 , SR 3 , NR 3 2 , S0 2 NR 3 , di- or trifluoromethyl may be selected and the radical R 3 may consist of H, methyl, ethyl, propyl or butyl groups. If the compounds according to the invention can occur in tautomeric forms, the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • the radicals R A and R B independently of each other from N0 2 , CN, CONR 3 2 , COOR 3 , CHO, CHONH 2
  • Alkyl and the alkyl moieties in alkoxy stand for straight-chain or branched alkyls and, unless stated otherwise, comprise (C 1 -C 6) -alkyl, in particular (C 1 -C 4) -alkyl, such as, for example, Methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl.
  • Alkoxy is preferably a straight-chain or branched alkoxy radical, in particular having 1 to 6, more preferably 1 to 4 and most preferably 1 to 3 carbon atoms. Examples which may be mentioned are methoxy, ethoxy, N-propoxy, isopropoxy, t-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
  • Aryl is a mono- to tricyclic aromatic, carbocyclic radical of usually 6 to 14 carbon atoms.
  • aryl is selected from phenyl, naphthyl and phenanthrenyl, more preferably phenyl.
  • Halogen is fluorine, chlorine, bromine and iodine, preferably fluorine and chlorine.
  • Inert polar organic solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, glycol diethyl ether or diethylene glycol dimethyl ether, cyclic ethers, such as dioxane, tetrahydrofuran, hydrocarbons, such as ethylbenzene, xylene, toluene or alcohols, such as ethanol, propanol , Butanol, isobutanol and isopropanol. Particularly pure products are obtained when using n-butanol as a solvent.
  • n-butanol is preferably in a molar ratio of 1 to 1 0, particularly preferably 1, 5 to 3, based on the initial value of the Pyrazolderivats to use.
  • benzamidines (6) in fresh form (as free bases) are freshly prepared.
  • the synthesis is carried out by conventional methods from the corresponding available salt. It is best to use benzamidines (6) in a molar ratio of 1 to 1.5, starting from the pyrazole derivatives (5).
  • the reaction is carried out at a temperature of 60 to 110 ° C, preferably 85 to 95 ° C, in the course of 10-30 hours, preferably 1 8-20 hours.
  • the purification of the resulting amino-3- (phenylamino) -6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidines (1) by recrystallization preferably tetrahydrofuran or a mixture of tetrahydrofuran with water or an organic solvent, particularly preferably with toluene is used.
  • the amino-3- (phenylamino) -6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidine may also be purified by precipitation from a hot solution in tetrahydrofuran with water or an organic solvent, preferably with toluene.
  • the following examples list specific compounds of the general formula (I) which are preferably suitable for applications against picornavirus infections, the compounds being in a solution or suspension in a pharmaceutically acceptable aqueous, organic or aqueous-organic medium for the local or parenteral Application by intravenous, subcutaneous or intramuscular injection or for intranasal administration or in the form of a tablet, capsule or aqueous suspension with conventional carrier for oral administration or as a suppository.
  • the compounds of the formula (I) can be used in dosages of 0.1 to 1000 mg / kg body weight.
  • the 5-amino-4-cyano-3-phenylaminopyrazoles were synthesized according to the method shown in FIG. 1 and as described by Tominaga Y et al. (J. Heterocycl Chem., 1990, 27, 775-799).
  • Arylamidines are synthesized according to the known prior art from the corresponding cyan starting compounds (Boere, RT et al .: J. Organomet Chem, 1987, 331, 1 61-167; Garigipati RS: Tetrahedron Lett., 1990, 31, 1969-1978; then 0 et al.: Justus Liebigs Ann. Chem., 1982, 1836-1839).
  • 5-Amino-4-cyano-3- (phenylamino) -pyrazole (6.0 g, Powder Ref-1) is dissolved in 10 ml of n-butanol and 4.0 g of benzamidine in 3 ml of n-butanol are added at room temperature given. The reaction takes place over 20 hours at 85 °. The solution is then cooled, the yellow precipitate is filtered off and washed with 5 ml of n-butanol and 5 ml of toluene.
  • the compound Ref-5 is prepared in the same manner as shown in Reference Example 2, except that 5-amino-4-cyano-3 - [(4-fluorophenyl) amino) pyrazole was used as the starting material. This forms a pale yellow crystalline precipitate.
  • the compound Ref-6 is prepared in the same manner as obtained in Referential Example 2 except that 5-amino-4-cyano-3 - [(3-fluorophenyl) amino] pyrazole was used as the starting component. This forms a pale yellow crystalline precipitate.
  • Example 2 4-Amino-6-phenyl-3 - [(4- (trifluoromethyl) phenyl] amino-pyrazolo [3,4-d] pyrimidine
  • the compound CRCV-340 was also prepared analogously to the reaction procedure shown in Reference Example 2. This forms a pale yellow crystalline precipitate.
  • Tests The tests carried out in w 'fro tests with CRCV-340 and the data obtained are compared with Ref-2 in Table 2 below.
  • Plasma stability 1 17.0% 100.0%
  • Substance CRCV-340 was characterized by a better stability in liver microsomes as well as a stronger release of plasma protein compared to Ref-2.
  • Substance and reference substance were administered to the mice once in each case in a concentration of 100 mg / kg body weight, in 0.5 ml of a 1 0% Cremophor solution per os. After 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6 and 7 h, the serum was recovered and the plasma levels of CRCV-340, Ref-2 and Ref-3 were determined by H PLC analysis.
  • Table 3 Pharmacokinetic data after single intragastric administration of 1 00 mg / kg CRCV-340, Ref-2 and Ref-3 in mice.
  • T max Time to reach the maximum concentration in the blood MRI mean residence time in the blood (mean residence time)
  • Aim To establish subacute toxicity in the mouse to eliminate potential side effects, e.g. to discover the general condition, weight, internal organs and metabolism that could occur during a subacute dose of CRCV-340 over 28 days.
  • mice were given 12.5, 50 or 200 mg / kg of the substance CRCV-340 in a cremophor formulation or the control group Cremophor once daily for 28 days intragastrically administered via a probe.
  • the condition of the coat and mucous membranes, excreta and general condition were evaluated.
  • the logging of the weight took place on days 7, 14, 21 and 28.
  • Approx. 24 hours after the last substance administration the orientation of the animals was examined.
  • the serum analyzed the following biochemical parameters: protein content, urea, creatinine, the serum activity of aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase and alkaline phosphatase.
  • the hemoglobin concentration, hematocrit, the number of red and white blood cells and blood platelets were determined in the blood smear.
  • the mice were sacrificed and dissected under anesthesia, the state of the internal organs was estimated macroscopically, the organ weight was determined and specimens were placed in formalin for subsequent histological examinations.
  • results show a very good compatibility of the substance concentrations examined. Neither the general condition of the animals, their fur, the excreta nor the orientation ability or the mobility changed as a result of the substance giving. Also in terms of body weight dynamics, the CRCV-340 treated animals did not differ from the control group. There were no differences between the substance-treated and vehicle-treated experimental groups in the blood smear and the biochemical blood parameters.
  • Aim To determine the antiviral activity spectrum of CRCV-340 against 50 different human rhinovirus serotypes and CVB3 patient isolates.
  • Table 5 Overview of the spectrum of action of Ref-3 and CRCV-340 against HRV. In summary, the mean and standard deviations were separated for all 50 serotypes tested and for the 45 pleconaril-sensitive and 5 pleconaril-resistant serotypes.
  • Table 6 Overview of the spectrum of action of Ref-3 and CRCV-340 against the clinical CVB3 isolates. In summary, the mean and standard deviation were separated for all 20 isolates tested, as well as for the 19 pleconaril-sensitive isolates and one pleconaril-resistant serotype.
  • CVB3 31 -1-93 and CVB3 H3-infected animals received 100 mg / kg of the substance in 50% or 20% PEG-400 in 1% CMC in water (placebo) for 7 days once or twice daily.
  • Parameters for evaluating the therapeutic effect included changes in body weight, general condition, virus titer in cardiac and pancreatic tissue, and histopathological changes in the heart and pancreas. Mock-infected, placebo-treated or CRCV-340-treated animals served as a negative control and infected, placebo- or pleconaril-treated animals as a positive control in the course of infection.
  • CRCV-340 In contrast to placebo and pleconaril, CRCV-340 was shown to mediate CVB3 31 -1 -93-induced chronic myocarditis in NMRI mice. Clinically and statistically significant effects were observed for all investigated parameters (body weight, general condition, virus titer in cardiac and pancreatic tissue on day 7 p.L, histopathology in the heart and pancreas on day 7 and 21 p.i.).

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft 5-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate der allgemeinen Formel (I) oder pharmazeutisch akzeptable Salze oder Propharmaka davon, wobei zumindest ein Wasserstoffatom in zumindest einer der Phenylgruppen A und B durch einen Substituenten RH ersetzt ist, der eine Hammett-Konstante σp größer als 0,23 aufweist. Die vorliegende Erfindung betrifft ebenfalls Verfahren zu deren Herstellung. Für entsprechende Verbindungen wurde überraschend eine besonders hohe Aktivität gegen Viren, insbesondere gegen Rhinoviren und Picornaviren, festgestellt. Darüber hinaus sind die Verbindungen sehr gut verträglich. Aus diesen Gründen sind die Verbindungen für die Behandlung von Vireninfektionen und als Medikamente geeignet.

Description

4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate, deren Herstellung und deren Verwendung als antivirale Wirkstoffe
Beschreibung
Die Erfindung betrifft neuartige 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin- Derivate und deren Verwendung als antivirale Wirkstoffe, vorzugsweise zur Behandlung von Pi- cornavirusinfektionen.
Picornaviren, insbesondere Entero- und Rhinoviren, sind für ein breites Spektrum von Erkrankungen beim Menschen verantwortlich. Zu den Enteroviren gehören mehr als 60 verschiedene humanpathogene Serotypen (Melnick J in: Fields B et al., editors. Virology. Philadelphia: Lippincott-Raven Publishers; 1996, 655-712). Enterovirus-, Echovirus-, Coxsackievirus A- und B- Infektionen verlaufen oftmals mit unspezifischem Fieber und rufen Erkrankungen des oberen Respirationstraktes hervor, die sich häufig nicht von Rhinovirusinfektionen unterscheiden lassen. Zu den schwereren Krankheitsbildern, die auch epidemisch auftreten können, gehören die hämorrhagische Konjunktivitis, Herpangina, Hand-Fuß-Mund-Krankheit, aseptische Meningitis, Enzephalitis und akute Myokarditis. Dabei können verschiedene Virustypen gleiche Symptome bzw. ein Virustyp ganz unterschiedliche Krankheitsbilder herbeiführen. Mit der Einführung moderner und sensitiver Methoden in die Virusdiagnostik gelang der Nachweis persistierender enteroviraler RNA sowie von Virusproteinen im Zusammenhang mit chronischen Erkrankungen wie z. B. dem Typ I I Diabetes, Poliomyositis und vor allem der chronischen Myokarditis. Persistierende Entero- virusinfektionen kommen auch bei Patienten mit Agammaglobulinämie vor und äußern sich hierbei als persistierende Enterovirus-Meningoenzephalitis. Als Begleiterscheinungen traten häufig eine Dermatomyositis oder Polymyositis auf. Zu den Rhinoviren gehören ca. 100 Serotypen. Rhinovirusinfektionen verursachen mehr als die Hälfte aller respiratorischen Erkrankungen des obe- ren Respirationstraktes beim Menschen (Couch RB in : Fields BM et al., editors: Fields Virology, 3rd edition. Lippincott-Raven, Philadelphia, 1 996, 713-35). Bei einer mittleren Krankheitsdauer von ca. 1 0 Tagen führen diese meist harmlos verlaufenden Erkältungen jährlich zu millionenfachen Arztbesuchen, Arbeits- und Schulausfällen. Als Komplikationen können eine Otitis media, Sinusitis, Exazerbation von Asthma und zystischer Fibrose sowie Infekte des unteren Respirationstraktes vor allem bei Kleinkindern, älteren Patienten und immunsupprimierten Patienten auftreten. Auf Grund der Typenvielfalt ist eine Impfprophylaxe zurzeit nicht möglich. Bedingt durch die mit diesen Erkrankungen verbundenen Arbeitsausfälle, Arztbesuche und Medikamente verursachen Rhino- und Enteroviren jährlich enorme Kosten. Die Behandlung dieser Virusinfektionen erfolgt bisher symptombezogen, da keine virusspezifischen Therapeutika zur Verfügung stehen (Rotbart HA: Antiviral Res 2002, 53(2), 83-98). Zudem werden häufig unnütz Antibiotika verordnet. Die Entwicklung von neuen Virustatika ist deshalb unbedingt notwendig.
Die Ergebnisse der intensiven Suche nach Behandlungsmöglichkeiten von Enterovirus- und Rhi- novirus-lnfektionen wurden von Rotbart 2002 in einem Übersichtsartikel zusammengefasst (Rotbart HA: Antiviral Res 2002, 53(2), 83-98). Beispielsweise hemmt Ribavirin ein Wirtszellenzym , die Inosin 5'-Monophosphat (IMP)-Dehydrogenase. Durch die Ausschaltung dieses Schlüsselen- zymes für die Synthese von Purinnukleotiden, lässt sich die Replikation von Picornaviren in vitro und in vivo hemmen. Ribavirin soll außerdem direkt in das Genom von Polioviren eingebaut werden und dadurch zusätzlich als Mutagen für RNA- Viren wirken (Crotty S et al. : Nat Med, 2000, 6(12), 1375-9). Wegen starker Nebenwirkungen werden diese Verbindungen nicht zur Behandlung von Rhino- und Enterovirusinfektionen eingesetzt. Spezifische Targets zur Hemmung der viralen RNA-Synthese stellen das Genom an sich, die virale RNA-abhängige RNA-Polymerase sowie weitere für den Replikationskomplex notwendige virale Proteine dar. Guanidine, Thiosemi- carbazone, Benzimidazole, Dipyridamole und Flavone sind seit langem als Inhibitoren der Polymerasen von verschiedenen Picornaviren in der Zellkultur bekannt. Sehr unterschiedliche Erfolge wurden damit in vivo erzielt. Als aussichtsreichster Kandidat mit breiter anti-Enterovirus- und antiRhin ovi rus- Aktivität gelten Enviroximderivate. Enviroxim verhindert die Synthese von Plusstrang RNA durch Bindung an das Virusprotein 3A, welches zur Bildung von RNA- Intermediaten bei der Virusvermehrung notwendig ist (Heinz BA und Vance LM: J Virol, 1995, 69(7), 4189-97). In klinischen Studien wurden moderate oder keine therapeutische Wirkungen, eine schlechte Pharmakokinetik und unerwünschte Nebenwirkungen festgestellt (Miller FD et al. : Antimicrob Agents Chemother, 1985, 27(1 ), 1 02-6). Von neueren Derivaten mit besserer Bioverfügbarkeit und Verträglichkeit liegen bisher keine klinischen Daten vor.
Basierend auf dem Wissen der Feinstruktur und Funktion der viralen Protease 2C wurde der Pro- teaseinhibitor AG 7088 entwickelt. AG 7088 wirkt in der Zellkultur im nanomolaren Konzentrationsbereich gegen 48 Rhinovirustypen sowie Coxsackievirus A21 , B3, Enterovirus 70 und Echovi- rus 1 1 (Pattick AK et al. : Antimicrobila Agents Chemother, 1999, 43(10), 2444-50). Bisher sind die abschließenden Daten der klinischen Studien nicht bekannt.
Mit der Aufklärung der molekularen Struktur der viralen Kapside wurden die Voraussetzungen für ein zielgerichtetes Design von Kapsidblockern, den "WIN-Substanzen", geschaffen (Diana GD: Curr Med Chem 2003, 2, 1 -12). Sie verhindern die Adsorption und/oder das Uncoating von Rhino- und Enteroviren. Einige der WIN-Substanzen wirken hochspezifisch nur gegen einzelne Gattungen oder Virustypen der Picornaviren. Andere Derivate hemmen die Vermehrung von Rhino- als auch Enteroviren. Zu den WIN-Substanzen gehören z. B. Arildone, Disoxaril und Pirodavir. Diese Verbindungen zeigten sehr gute antivirale Wirkungen in der Zellkultur. Eine schlechte Löslichkeit (Arildone), niedrige Bioverfügbarkeit (Arildone und Disoxaril), schnelle Metabolisierung und Ausscheidung (Disoxaril und W IN 54954) sowie Nebenwirkungen, wie beispielsweise Hautausschlag (WIN 54954), machten eine klinische Anwendung unmöglich. Große Hoffnungen wurden auf Pleconaril, einen weiteren Kapsidblocker, gesetzt. Pleconaril besitzt eine sehr gute orale Bioverfügbarkeit und hemmt nach seiner Bindung in die hydrophobe Tasche im Viruskapsid die Penetration von Rhino-, Echo- und Coxsackieviren (Pevear DC et al.: Antimicrob Agents Chemother 1999, 43(9), 21 09-15; McKinlay MA et al.: Annu Rev Microbiol 1992, 46, 635-54). Dadurch ist es potenziell wirksam gegen ein breites Spektrum von Viruserkrankungen, von der gewöhnlichen Erkältung bis hin zur viralen Meningitis oder Myokarditis. Resistenzen wurden bei Rhinoviren, Enterovirus 71 und Coxsackievirus B3 beobachtet (Ledford RM et al. : J Virol 2004, 78(7), 3663-74; Groarke JM et al.: J Infect Dis 1 999, 179(6), 1538-41 ). Klinische Studien bei Kindern und Erwachsenen mit einer Enterovirusmeningitis (Abzug MJ et al. : Pediatr Infect Dis J, 2003, 22, 335-41 ) sowie Rhinovirus-verursachten respiratorischen Infektionen (Hayden FG et al.: Antivir Ther, 2002, 7, 53-65; Hayden FG et al. : Clin Infect Dis, 2003, 36, 1 523-32) verliefen positiv. Die nachgewiesene therapeutische Wirkung reichte jedoch nicht für die Zulassung von Pleconaril (Picovir, Viropharma, USA) zur Behandlung von Rhinovirusinfektionen in den USA. Im März 2002 wurde ein entsprechender Antrag von der Nahrungs- und Arzneimittel-Behörde (Food and Drug Administration: FDA) wegen einer ungünstigen Nutzen-Risiko-Bewertung abgelehnt.
Es sind auch Pyrazolopyrimidine als CRF-Antagonisten (Corticotropin-Releasing Factor Antagonisten) beschrieben (z. B. EP 674 642 und EP 691 128), welche beispielsweise die Adenosinki- nase (EP 496 617 oder US 4,904,666), die Xanthinoxigenase (J. Heterocyc. Chem. 19, 1565, 1982) oder andere Enzymsysteme (US 2,965,643 und US 3,600,389) hemmen.
Somit besteht weiterhin als eine dringliche Aufgabe der antiviralen Forschung die Entwicklung hocheffektiver Virustatika zur Behandlung von Rhino- und Enteroviruserkrankungen. Die neuen Verbindungen sollten gut verträglich sein und existierende Resistenzen, z. B. gegenüber Pleconaril, überwinden. WO 00/43394 A offenbart substituierte Pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate und deren Verwendung als antivirale Wirkstoffe.
Auch EP 2 049 540 offenbart 4-Amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate und deren Verwendung als antivirale Wirkstoffe.
Aufgabe der Erfindung ist es, weitere Pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate sowie deren Herstellung und Verwendung anzugeben, welche als antivirale Wirkstoffe gegenüber Enteroviren und Rhinoviren einsetzbar sind sowie die angegebenen Nachteile des Standes der Technik zum Beispiel hinsichtlich Stabilität und Bioverfügbarkeit der Substanzen vermeiden.
Gelöst wird diese Aufgabe durch spezifisch substituierte 4-Amino-3-phenylamino-6- phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate der allgemeinen Formel I, einschließlich ihrer pharmazeutisch verträglichen Salzverbindungen und ihrer Pro-Pharmaka,
Figure imgf000006_0001
wobei zumindest ein Wasserstoffatom in zumindest einer der Phenylgruppen A und B durch einen Substituenten RH ersetzt ist, der eine H am mett- Konstante σρ größer als 0,23 aufweist, wobei jedes weitere Wasserstoffatom in jeder der Phenylgruppen A und B unabhängig voneinander ersetzt sein kann durch einen Rest R1 , wobei jedes R1 unabhängig ein Halogen, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes aliphatisches Radikal mit 1 -7 Kettengliedern, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes alkanoles Radikal mit 1 -8 Kettengliedern, N02, CN, CONR2 2, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR2 2, S02NR2 2, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, oder Phenyl sein kann; jedes R2 unabhängig Wasserstoff, ein gesättigtes oder ungesättigtes, halogeniertes oder nicht halogeniertes, lineares oder verzweigtes aliphatisches Radikal mit 1 -7 Kettengliedern, Benzyl, Phenyl oder Naphtyl, ein gesättigter oder ungesättigter, Mono- oder Polyheterozyklus mit den Heteroatomen N, S oder 0 ist, wobei jede der vorstehenden genannten Gruppen un- abhängig mit Fluor, Chlor, Brom, Trifluormethyl, Alkyl, Alkoxy, Cyano, Nitro, Amino, Aminoal- kyl, C(0)-Alkyl, C(0)0-Alkyl, Benzyl, Phenyl oder Naphtyl substituiert sein kann; und
X unabhängig F, Cl, Br, oder I ist.
In den Unteransprüchen sind vorteilhafte Ausführungen der spezifisch substituierten 4-Amino-3- phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate sowie Anwendungsmöglichkeiten ausgeführt, ohne die Erfindung jeweils darauf zu beschränken.
Vorteilhaft sind 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate der allgemeinen Formel I, wobei zumindest ein Wasserstoffatom in zumindest einer der Phenylgruppen A und B durch einen Substituenten RH ersetzt ist, ausgewählt aus N02, CN , CF3, CCI3, CBr3, OCF3, OCCI3, OCBr3, CHF2, CHCI2, CHBr2, OCHCI2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe oder COOEt, bevorzugt CF3 oder OCF3. Vorteilhaft sind in einer oder beiden Phenylgruppen A und B ein, zwei oder drei Wasserstoffatome durch einen Substituenten RH ersetzt. In einer speziellen Ausführungsform ist genau ein Wasserstoffatom in einer der Phenylgruppen A und B durch einen Substituenten RH ersetzt. Der Substituent RH kann sich in para-Position des Phenylrings A oder B befinden.
Zusätzlich zu RH kann jede der Phenylgruppen A und B unabhängig voneinander weitere Reste R1 tragen. Vorzugsweise tragen die Phenylgruppen A und B unabhängig voneinander keinen, einen, zwei oder drei weitere Reste R1 , bevorzugt keinen oder einen weiteren Rest R1.
Als Alkyle kommen im Zusammenhang mit der Erfindung insbesondere lineare oder verzweigte zum Beispiel Methyl, Ethyl, n-Propyl, i-Propyl und Butyl infrage. Entsprechendes gilt für Alkanole, Alkylamine und Alkylamide im Zusammenhang mit der Erfindung.
Umfasst sind von der Erfindung insbesondere 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4- djpyrimidin-Derivate der allgemeinen Formel I I
Figure imgf000007_0001
wobei jeder Substituent RA, RB unabhängig Wasserstoff, ein Halogen, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes aliphatisches Radikal mit 1 -7 Kettengliedern, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes alkanoles Radikal mit 1 -8 Kettengliedern, N02, CN, CONR2 2, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR2 2, S02NR2 2, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, oder Phenyl sein kann; und R2 und X wie oben definiert sind; wobei zumindest einer der Substituenten RA, RB eine Hammett-Konstante σρ größer 0,23 aufweist.
Die Erfindung umfasst insbesondere 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin- Derivate der allgemeinen Formel IIa
Figure imgf000008_0001
oder IIb
Figure imgf000008_0002
wobei RH ausgewählt ist aus N02, CN, CF3, CCI3, CBr3, OCF3, OCCI3, OCBr3, CHF2, CHCI2, CHBr2, OCHCI2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe oder COOEt ist, bevorzugt CF3 oder OCF3.
Ebenfalls umfasst sind pharmazeutische Zusammensetzungen, die ein 4-Amino-3-phenylamino- 6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivat gemäß der allgemeinen Formeln I, I I, I Ia oder IIb enthalten. Solche pharmazeutischen Zusammensetzungen können weitere Substanzen enthalten, beispielsweise pharmazeutisch akzeptable Hilfsstoffe und Träger. In einem besonderen Aspekt können die pharmazeutischen Zusammensetzungen weitere Wirkstoffe umfassen, insbesondere antivirale Wirkstoffe, vor allem Wirkstoffe gegen Picornaviren. Es hat sich überraschend gezeigt, dass die erfindungsgemäßen 4-Amino-3-phenylam ino-6- phenylpyrazolo[3,4-d]pyrim idin-Derivate über eine deutlich verbesserte Stabilität in Leberm ikro- somen gegenüber den Substanzen des Standes der Technik verfügen. Darüber hinaus haben Untersuchungen zur Pharmakokinetik in der Maus ergeben, dass die erfindungsgemäßen 4- Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrim idin-Derivate eine deutlich bessere Bioverfügbarkeit aufweisen als Substanzen des Standes der Technik. Gleichzeitig zeigen die Verbindungen der vorliegenden Erfindung eine starke antivirale Aktivität gegenüber Picornaviren, insbesondere Entero- und Rhinoviren im nano- bzw. m ikromolaren Konzentrationsbereich.
Daher sind die pharmazeutischen Zubereitungen, die eine Verbindung der Formeln I , I I , I Ia oder I Ib enthalten, besonders geeignet für die Behandlung von respiratorischen Infekten, der aseptischen Meningitis, der Enzephalitis, Herpangina usw. bei Mensch und Tier, die von Picornaviren insbesondere Entero- und Rhinoviren hervorgerufen werden können.
Die 4-Am ino-3-phenylam ino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate zeichnen sich dadurch aus, dass sie an einer oder an beiden Phenylgruppen mindestens einen Substituenten RH tragen, der eine Hammett-Konstante σρ größer als 0,23 aufweist. Dieser Wert 0,23 entspricht der Ham- mett-Konstante σρ des Broms, das unter den Halogenen die höchste Hammett-Konstante für die para-Position zeigt.
Die Bestimmung der Hammett-Konstanten für verschiedene Substituenten basiert auf den loni- sierungskonstanten der Benzoesäure gemäß der Hammett-Gleichung σχ = log Κχ - log KH wobei KH die lonisierungskonstante für Benzoesäure in Wasser bei 25 °C ist und Kx die korrespondierende Konstante für eine meta- oder para-substituierte Benzoesäure ist. Ein Verfahren zur Bestimmung der Hammett-Konstante für verschiedene Substituenten in meta- (am) und paraPosition (σρ) sowie bereits erm ittelte Werte einer Vielzahl von Substituenten können der Veröffentlichung von Hansch et al. ,„A Survey of Hammett Substituent Constants and Resonance and Field Parameters", in Chem . Rev. 1 991 . 97, 1 65-1 95, entnommen werden, die hierin in ihrer Gesamtheit eingearbeitet ist. Für die vorliegende Erfindung von Bedeutung ist dabei jeweils ausschließlich der Wert σ für die para-Position (σρ), unabhängig davon, an welcher Position sich der zumindest eine Substituent RH letztlich befindet.
Beispiele der Erfindung sind Verbindungen der Tabelle 1 , einschließlich ihrer pharmazeutisch verträglichen Salzverbindungen .
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
Tabelle 1
Ebenfalls umfasst sind Pro-Pharmaka (Prodrugs) der Verbindungen, insbesondere jene, die sich durch einen Substituenten am Pyrazol-Heteroatom in Position 1 auszeichnen. Es hat sich gezeigt, dass derartige Verbindungen in vivo zur 1 H Pyrazol-Verbindung umgesetzt werden. Beispielhalber erwähnt seien Verbindungen, bei denen das Pyrazol-Heteroatom in Position 1 durch einen lmino(phenyl)methyl-Substituenten substituiert ist, wie beispielsweise 1 - [lmino(phenyl)methyl]-4-amino-3-(4-trifluormethyl-phenyl)amino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin, auch bezeichnet mit dem IUPAC Namen 1 -Benzylcarboximidoyl-6-phenyl-3-N-[4- (trifluormethyl)phenyl]-1 H-pyrazolo[3,4-d]-pyrimidin-3,4-diamin. Hierbei handelt es sich um ein Nebenprodukt bei der Herstellung der oben bezeichneten Verbindung CRCV-340, das aus der Reaktion der Verbindung CRCV-340 mit einem Überschuss an Benzamidin in der Reaktionsmischung resultiert und folgende Formel aufweist:
Figure imgf000012_0001
CRCV-340-Prodrug
Es wurde gefunden, dass diese Verbindungen (z.B. CRCV-340-Prodrug) in vivo sehr leicht zur Zielverbindung umgesetzt werden, derart dass im Serum im Wesentlichen nur noch der letztendliche Wirkstoff (z.B. CRCV-340) nachgewiesen werden kann. Weiterhin umfasst sind die aus den vorstehenden Verbindungen hergestellten Salze, Solvate oder Solvate der Salze. Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindung umfassen Additionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methan- sulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalinsulfonsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Citronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Die Erfindung soll nachfolgend anhand von Syntheseverfahren, speziellen 4-Amino-3- phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivaten der allgemeinen Formel (I) sowie deren Wirkung und Anwendung gegen Picornavirusinfektionen näher erläutert werden. Abb. 1 zeigt ein allgemeines Schema zur Synthese von Pyrazolo[3,4-d]Pyrimidin 1 und schließt im ersten Schritt die Kondensation von [Bis(methylthio)methylen]malononitril 2 mit Phenylaminen 3 in Alkohol zu Phenylderivaten 4 ein. Letztere können jeweils isoliert und für weitere Reaktionen aufgereinigt werden oder direkt ohne Aufreinigung für nachfolgende Reaktion verwendet werden ("one-pot" Reaktion). Der darauf folgende Schritt besteht in der Wechselwirkung des Phenylderi- vats 4 mit Hydrazin oder Hydrazinderivaten. Die Reaktion verläuft unter Kochen über 1 bis 4 Stunden und führt zu einer hohen Ausbeute an Pyrazol 5. Der abschließende Schritt der Synthese von Pyrazolo [3,4-d]Pyrimidin 1 besteht in der Kondensation des Pyrazol 5 mit Phenylamidi- nen 6 in Gegenwart von Essigsäure, Trifluoressigsäure oder Natriumacetat.
Figure imgf000013_0001
Die Verbindungen können vorteilhaft dadurch erhalten werden, dass das Pyrazol (5) im letzten Syntheseschritt mit korrespondierendem Benzamidinhydrochlorid in der Anwesenheit eines Überschusses an Natriumacetat bei 200-220 °C in Abwesenheit von Lösungsmittel umgesetzt wird. Alternativ können die Verbindungen dadurch erhalten werden, dass das Pyrazol (5) im letzten Syntheseschritt mit korrespondierendem Benzonitril (in großem Überschuss) unter Mikrowellenbestrahlung und unter Anwesenheit von Kalium-ferf-butylat umgesetzt wird.
Eine alternative Synthesemethode besteht in der "one-pot" Reaktion von Malononitril mit Aryli- sothiocyanaten in Anwesenheit von Natriumhydrid und einer nachfolgenden Behandlung des Reaktionsgemisches mit Jodmethyl oder Dimethylsulfat. Dabei werden große Mengen an Enami- nen gebildet. Auch hier ist wiederum die Kondensation von Pyrazol 5 mit Arylamidinen 6 in Gegenwart von Säure, wie Essigsäure oder Trifluoressigsäure, bzw. deren Salzen (Acetat) der abschließende Syntheseschritt zur Herstellung von Pyrazolo[3,4-d]Pyrimidin 1 .
Es hat sich gezeigt, dass die Umsetzung des Pyrazols (5) zum Pyrazolo[3,4-d]Pyrimidin mit besonders hohen Ausbeuten durchgeführt werden kann, indem die Benzamidin-Komponente als freie Base verwendet und die Reaktion in polaren Lösungsmitteln durchgeführt wird. Ein Vorteil dieses Vorgehens besteht zusätzlich darin, dass der Anteil schwer abtrennbarer Nebenprodukte minimiert werden kann. Diese Reaktion lässt sich, ausgehend von substituierten 5-Amino-4- cyano-3-phenylamino-Pyrazolen (5) mit optional substituierten Benzamidinen als freie Base (6) zu 4-Amino-3-(phenylamino)-6-phenylpyrazolo[3,4-d]Pyrimidin (1 ) gemäß dem folgenden Reaktionsschema durchführen.
Abb. 2
Die Reste RA und RB sind Substituenten, wie sie vorstehend für R1 definiert sind.
Während sich die wie vorstehend beschriebene Umsetzung insbesondere für die Herstellung von 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivaten der vorstehenden allgemeinen Formel (I) eignet, wobei mindestens ein Wasserstoffatom in mindestens einer der Phenyl- gruppen A und B durch einen Substituenten RH ersetzt ist, der eine Hammett-Konstante σρ > 0,23 aufweist, kann das Verfahren ebenso für die Herstellung von 4-Amino-3-phenylamino-6- phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidinen, die keinen solchen Substituenten aufweisen, d.h. in denen dieser Rest Wasserstoff oder einen Rest R1 , wie er vorstehend im Zusammenhang mit der Formel I definiert ist, darstellt. Bevorzugt betrifft die vorliegende Erfindung auch Reaktionen, wie vorstehend beschrieben, indem die Reste RA und RB voneinander unabhängig aus N02, CN, CONR3 2, COOR3, CHO, CHONH2, einem Halogen, einem ungesättigten oder gesättigten linearen oder verzweigten aliphatischen Radikal (Alkylgruppe genannt) mit 1 bis 6 Kettengliedern, einem gesättigten oder ungesättigten linearen oder verzweigten Alkanolradikal (auch Alkoxygruppe genannt) mit 1 bis 6 Kettengliedern, OR3, SR3, NR3 2, S02NR3, Di- oder Trifluormethyl ausgewählt sein können und der Rest R3 aus H, Methyl-, Ethyl-, Propyl- oder Butylgruppen bestehen kann. Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Die im vorstehenden Absatz genannten Substituenten haben, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl sowie die Alkylteile in Alkoxy stehen für geradkettige oder verzweigte Alkyle und umfassen, wenn nicht anders angegeben, (C1 -C6)-Alkyl, insbesondere (C1 -C4)-Alkyl, wie z.B. Methyl, Ethyl, Propyl, Isopropyl, Butyl, Isobutyl. Alkoxy steht vorzugsweise für einen geradkettigen oder verzweigten Alkoxyrest, insbesondere mit 1 bis 6, besonders bevorzugt 1 bis 4 und am meisten bevorzugt 1 bis 3 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise seien genannt Methoxy, Ethoxy, N-Propoxy, Isopropoxy, t-Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy. Aryl steht für einen mono- bis tricyclischen aromatischen, carbocyclischen Rest mit in der Regel 6 bis 14 Kohlenstoffatomen. Beispielhaft und vorzugsweise ist Aryl ausgewählt aus Phenyl, Naphthyl und Phenantrenyl, besonders bevorzugt Phenyl. Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod, bevorzugt Fluor und Chlor.
Es ist auch möglich mit diesem Verfahren allgemein Arylpyrazolo[3,4d]pyrimidin-Derivate herzustellen, wobei in diesem Fall das Phenylamidin 6 durch ein entsprechendes Arylamidin zu ersetzen ist. Insbesondere können anstelle der Phenylringe A und B auch Naphthyl, Pyridyl, Chinolyl, Pyrazinyl, Pyrimidyl, Pyrazolyl, Triazinyl, Imidazolyl, Furanyl, Thienyl im Endprodukt enthalten sein, wobei jedes Wassertstoffatom in jeder der vorstehend genannten Gruppe unabhängig voneinander durch einen Rest R1 , wie er vorstehend im Zusammenhang mit der Formel I definiert ist, ersetzt sein kann. Ein solches Verfahren ist ebenfalls Gegenstand der vorliegenden Erfindung.
Die in Abb. 2 gezeigt Reaktion wird in inerten, polaren organischen Lösungsmitteln durchgeführt. Inerte polare organische Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethylether, Methyl-tert.- butylether, 1 ,2-Dimethoxyethan, Glycoldiethylether oder Diethylenglycoldimethylether, cyclische Ether, wie Dioxan, Tetrahydrofuran, Kohlenwasserstoffe, wie Ethylbenzol, Xylol, Toluol oder Alkohole, wie Ethanol, Propanol, Butanol, Isobutanol und Isopropanol. Besonders reine Produkte werden bei Verwendung von n-Butanol als Lösungsmittel erhalten. n-Butanol ist vorzugsweise in einem Molverhältnis von 1 bis 1 0 , besonders bevorzugt 1 ,5 bis 3, bezogen auf den Anfangswert des Pyrazolderivats, einzusetzen.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung hat es sich als besonders zweckmäßig herausgestellt, wenn die Benzamidine (6) in Grundform (als freier Basen) frisch zubereitet werden. Die Synthese erfolgt mit üblichen Methoden aus dem entsprechenden verfügbaren Salz. Es ist am besten, Benzamidine (6) in einem Molverhältnis 1 bis 1 ,5, ausgehend von den Pyrazolderivaten (5) einzusetzen.
Die Reaktion wird bei einer Temperatur von 60 bis 1 10°C, vorzugsweise 85 bis 95 °C, im Laufe von 10-30 Stunden, vorzugsweise 1 8-20 Stunden, durchgeführt.
Die Reinigung der so erhaltenen Amino-3-(phenylamino)-6-phenylpyrazolo[3,4-d]Pyrimidine (1 ) erfolgt durch Umkristallisation. Hierfür wird vorzugsweise Tetrahydrofuran oder ein Gemisch von Tetrahydrofuran mit Wasser oder einem organischen Lösungsmittel, besonders bevorzugt mit Toluol verwendet. Alternativ dazu kann das Amino-3-(phenylamino)-6-phenylpyrazolo[3,4- d]Pyrimidin auch durch Ausfällen aus einer heißen Lösung in Tetrahydrofuran mit Wasser oder einem organischen Lösungsmittel, bevorzugt mit Toluol, gereinigt werden.
In den nachfolgenden Beispielen sind spezielle Verbindungen der allgemeinen Formel (I) aufgelistet, welche bevorzugt für Anwendungen gegen Picornavirusinfektionen geeignet sind, wobei die Verbindungen in einer Lösung oder einer Suspension in einem pharmazeutisch akzeptablen wässrigen, organischen oder wässrig-organischen Medium für die lokale oder parenterale Anwendung durch intravenöse, subkutane oder intramuskuläre Injektion oder für die intranasale Verabreichung zubereitbar ist, oder sie sind in Form einer Tablette, Kapsel bzw. wässrigen Suspension mit konventionellem Träger für die orale Verabreichung oder als Suppositorium ausgebildet.
Die vorgestellten Verbindungen der Formel (I) können dabei in Dosierungen von 0,1 bis 1000 mg/kg Körpergewicht verwendet werden.
Herstellung und Analyse der 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin- Derivate
Die Strukturaufklärung der erfindungsgemäßen Verbindungen erfolgte durch die Art der Synthese, Elementaranalysen, NMR - und Massenspektroskopie. Ausgangsmaterialien:
Die 5-Amino-4-cyano-3-phenylaminopyrazole wurden gemäß dem in Abb. 1 dargestellten Verfahren sowie nach der Beschreibung von Tominaga Y et al. (J. Heterocycl. Chem., 1990, 27, 775- 779), synthetisiert. Arylamidine werden gemäß dem bekannten Stand der Technik aus den entsprechenden Cyan-Ausgangsverbindungen synthetisiert (Boere, RT et al. : J. Organomet. Chem., 1987, 331 , 1 61 -167; Garigipati RS: Tetrahedron Lett., 1990, 31 , 1969-1978; Dann 0 et al. : Justus Liebigs Ann. Chem ., 1982, 1836-1839).
Referenzbeispiel 1 : 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo [3,4-d] pyrimidin
(3-N,6-diphenyl-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3,4-diamin)
Unter Rühren werden zu 2,3 g (1 1 ,5 mmol) 5-Amino-4-cyano-3-phenylaminopyrazol 3,0 g (17,24 mmol) Benzamidin Hydrochlorid Hydrat und 2,2 g (23,0 mmol) Natriumacetat zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird für 30 min bei 220 °C erhitzt. Das resultierende Material wird mit 50 ml Wasser behandelt, gefiltert und mit 20 ml kaltem Methanol sowie 20 ml kaltem Ester gewaschen. Das Produkt wird mittels Kristallisation aus DMF/Wasser gereinigt.
Figure imgf000017_0001
Hellgelber, fester kristalliner Stoff. Ausbeute 57 %. mp 253-5 °C. ^Chloroform - Methanol; 10/1 ) - 0.8 (Silikagel 60). MS m/z 302 (M+).
Referenzbeispiel 2: 4-Amino-3-(phenylamino)-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin (alternative Herstellung)
5,22 g Benzamidin Hydrochlorid, das zuvor 2,5 h lang bei 1 15°C getrocknet wurde, wird langsam zu einer Lösung von 1 ,74 g Natriummethylat in 100 ml Methanol gegeben und 30 min bei Raum- temperatur gerührt. Nach Abfiltrieren des anorganischen weißen Niederschlages wird 3,5 ml n- Butanol hinzu gegeben und das Volumen im Vakuum auf 3 ml reduziert. Der Rückstand ist ein weißliches Öl, und entspricht 4,0 g Benzamidin, das sofort im nächsten Reaktionsschritt verwendet wird.
5-Amino-4-cyano-3-(phenylamino)-pyrazol (6,0 g ; Pulver Ref-1 ) wird in 10 ml n-Butanol gelöst und 4,0 g Benzamidin in 3 ml n-Butanol werden bei Raumtemperatur hinzu gegeben. Die Reaktion erfolgt im Laufe von 20 Stunden bei 85Ό. Anschließend wird die Lösung abgekühl, der gelbe Niederschlag abfiltriert und mit 5 ml n-Butanol und 5 ml Toluol gewaschen.
Ausbeute: 68%
Eigenschaften: Schmelzpunkt: 265-267°C (Tetrahydrofuran) ; MS (m/z) 302 (M+) ; 1 H NMR (DMSO-d6) : δ 12,38 (1 H, s, NH), 8,30-8,36 (2H, q, 2 CH), 8,23 (1 H, br. s., NH), 7,67 (2H, d, 2CH), 7,48 (2H, br. s., NH2), 7,42 (3H, m, 3CH), 7,12 (2H, d, 2CH) und 6,98 (1 H, m , CH) ppm ; Elementaranalyse C17H14N6: Berechnet %: C, 67,54; H, 4,67; N, 27,80; Gefunden %: C, 67,49; H, 4,53; N, 27,74.
Referenzbeispiel 3: 4-Amino-3-(4-chlorphenyl)amino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin
(3-N-(4-chlorphenyl)-6-phenyl-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3,4-diamin)
Figure imgf000018_0001
Referenzbeispiel 4: 4-Amino-3-(3,4-difluorphenyl)amino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin
(3-N-(3,4-difluorphenyl)-6-phenyl-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3,4-diamin)
Figure imgf000019_0001
Referenzbeispiel 5: 4-Amino-3-[(4-fluorophenyl)amino]-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin
Figure imgf000019_0002
Die Verbindung Ref-5 wird auf die gleiche Weise, wie in Referenzbeispiel 2 dargestellt, hergestellt, wobei jedoch als Ausgangsstoff 5-Amino-4-cyano-3-[(4-fluorophenyl)amino)-pyrazol verwendet wurde. Dabei bildet sich ein hellgelber kristalliner Niederschlag.
Ausbeute: 70%
Eigenschaften: Schmelzpunkt: 262-263°C (THF/Toluol) ; MS (m/z) : 320 (M') ; 1 H NMR (DMSO-d6) : δ 12,69 (1 H, s, NH), 8,33-8,41 (4H, m , 4CH), 8,18 (1 H, br. s., NH), 7,58-7,65 (5H, m , NH2, 3CH), 7,27-7,31 (2H, n, 2CH) ppm ; Elementaranalyse C17H14FN6: Berechnet %: C, 63,74; H , 4,09; N, 26,24; Gefunden %: C, 63,81 ; H, 4,1 1 ; N, 26,27.
Referenzbeispiel 6: 4-Amino-3-[(3-fluorophenyl)amino]-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin
Figure imgf000020_0001
Die Verbindung Ref-6 wird auf die gleiche Weise, wie in Referenzbeispiel 2 erhalten, hergestellt, wobei jedoch als Ausgangskomponente 5-Amino-4-cyano-3-[(3-fluorophenyl)amino]-pyrazol verwendet wurde. Dabei bildet sich ein hellgelber kristalliner Niederschlag.
Ausbeute: 76%
Eigenschaften: Schmelzpunkt: 278-279°C (THF/Toluol) ; MS (m/z) : 320 (M+); 1 H NMR (DMSO-d6); δ 12,61 (1 H, s, NH), 8,34-8,42 (2H, q, 2CH), 8,14 (1 H, br. s., NH), 7,48 (2H, br. s., NH2), 7,3-7,43 (6H, m , 6CH), 6,60 (1 H, s, CH) ppm ; Elementaranalyse für C17H14FN6: Berechnet %: C, 63,74; H, 4,09; N, 26,24; Gefunden %: C, 63,81 ; H, 4,1 1 ; N , 26,27.
Beispiel 1 : 4-Amino-3-(4-trifluormethyl-phenyl)amino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin (CRCV-340)
(6-phenyl-3-N-[4-(trifluormethyl)phenyl]-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3,4-diamin)
Die Herstellung erfolgte wie im Referenzbeispiel 1 beschrieben, unter Verwendung der entsprechend substituierten Vorläuferverbindungen.
Figure imgf000020_0002
Beispiel 2: 4-Amino-6-phenyl-3-[(4-(trifluoromethyl)-phenyl]amino-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin Die Verbindung CRCV-340 wurde ebenfalls analog der in Referenzbeispiel 2 dargestellten Reaktionsvorschrift hergestellt. Dabei bildet sich ein hellgelber kristalliner Niederschlag.
Ausbeute: 58%
Eigenschaften: Schmelzpunkt: 313-314°C (THF/Toluol) ; MS (m/z) : 370 (M+); 1 H NMR (DMSO-d6): δ 12,77 (1 H, s, NH), 8,91 (1 H, s, NH), 8,47 (2H, s, N H2), 7,81 , 7,79, 7,63, 7,58 und 7,47 (9H, m, C6H4 und C6H5) ppm ; Elementaranalyse C18H13F3N6: Berechnet %: C, 58,38; H, 3,54; N, 22,69; Gefunden %: C, 58,41 ; H, 3,58; N, 22,74; HPLC: 99,30% (Säule Luna C18 (2), Acetoni- tril/Wasser - 90:10, Durchfluss von 0,6 ml/min, UV 254 nm ; tR = 5,3 min)
Beispiel 3: 4-Amino-3-phenylamino-6-[4-(trifluormethoxy)-phenyl]pyrazolo[3,4-d]pyrimidin (MS-112)
(3-N-phenyl-6-[4-(trifluormethoxy)phenyl]-2H-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin-3,4-diamin)
Die Herstellung erfolgte wie im Referenzbeispiel 1 beschrieben, unter Verwendung der entsprechend substituierten Vorläuferverbindungen.
Figure imgf000021_0001
Beispiel 4: 4-Amino-6-phenyl-3-[(4-(trifluoromethoxy)-phenylamino]-pyrazolo[3,4- djpyrimidin
Diese Verbindung wurde ebenfalls analog der in Referenzbeispiel 2 dargestellten Reaktionsvorschrift hergestellt, wobei 5-Amino-4-cyano-3-[(4-trifluormethoxyphenyl)amino]pyrazol aus Ausgangsverbindung verwendet wurde. Dabei bildete sich ein weißer kristalliner Niederschlag. Ausbeute: 68%
Eigenschaften: Schmelzpunkt: 260-262°C (Tetrahydrofuran/DMF) ; MS (m/z) : 386 (M') ; 1 H NMR (DMSO-d6) : δ 12,56 (1 H, s, NH), 8,82 (2H, q, 2CH), 8,16 (1 H, br. s., NH), 7,48 (2H, br. s., NH2), 7,3-7,43 (4H, m, C6H5), 7,05-7,1 1 (2H, 2 s, 2CH), 6,98 (1 H , m , CH) ppm ; Elementaranalyse C18H13F3N60: Berechnet %: C, 55,96; H, 3,39; N, 21 ,75; Gefunden %: C, 56,07; H , 3,36; N, 21 ,61 .
Beispiel 5: Reinigung von 4-Amino-6-phenyl-3-[(4-(trifluoromethyl)-phenyl]amino- pyrazolo[3,4-d]pyrimidin
50 g trockenes 4-Amino-6-phenyl-3-[(4-trifluoromethyl)-phenyl]amino-pyrazolo[3,4-d]pyrimidin, synthetisiert nach dem in Referenzbeispiel 2 beschriebenen Verfahren, werden unter Erwärmen in 300 ml von THF gelöst. Diese Lösung wird mit 300 ml kaltem Toluol behandelt. Die resultierende Lösung wird bei einer Temperatur unter 0°C im Laufe von 6 Stunden in einem Gefrierschrank gehalten. 36 g 4-Amino-3-(4-trifluorophenyl)amino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin in gelben Kristallen werden durch Filtration erhalten.
Schmelzpunkt: 313-314Ό (THF/DMF)
HPLC: 99,16% (Säule Luna C18(2), Acetonitril/Wasser -90:1 0, Durchfluss von 0,6 ml/min, UV 254 nm ; tR = 5,3 min)
ADMET-Studien zum Metabolismus von OBR 5-340 in vitro
Ziel: Überprüfung der Aufnahme (Absorption), Verteilung (Distribution), des biochemischen Um- bzw. Abbaus (Metabolismus), der Ausscheidung (Exkretion) sowie Toxizität (abgekürzt: ADMET) von OBR 5-340 in vitro, sowie In w'fro-Untersuchungen zur Plasmaproteinbindung und zur Stabilität im Plasma und in Lebermikrosomen.
Untersuchungen: Die durchgeführten In w'fro-Tests mit CRCV-340 sowie die erhaltenen Daten sind im Vergleich zu Ref-2 in Tabelle 2 zusammengefasst.
Tabelle 2: Zusammenfassung der Ergebnisse aus den ADMET-Studien für CRCV-340 im Vergleich zu Ref-2. Untersuchungsparameter Ref-2 CRCV-340
Bindung an Plasmaprotein 99,5 % 96,7 %
Freisetzung von Plasmaprotein 61 ,0 % 122,3 %
Plasmastabilität 1 17,0 % 100,0 %
Stabilität in Lebermikrosomen 32,0 % 1 12,0 %
Zusammenfassung: Die Substanz CRCV-340 zeichnete sich durch eine bessere Stabilität in Lebermikrosomen sowie eine stärkere Freisetzung von Plasmaprotein im Vergleich zu Ref-2 aus.
Untersuchung der Pharmakokinetik von CRCV-340 in der Maus
Ziel: Erhebung pharmakokinetischer Daten zu CRCV-340.
Untersuchungen: Substanz und Referenzsubstanz wurden jeweils einmalig in einer Konzentration von 100 mg/kg KG, in 0,5 ml einer 1 0%igen Cremophorlösung per os den Mäusen appliziert. Nach 0,5, 1 , 2, 3, 4, 5, 6 und 7 h wurde das Serum gewonnen und mittels H PLC-Analyse die Konzentrationen von CRCV-340, Ref-2 und Ref-3 im Plasma der Mäuse bestimmt.
Anhand der mittels HPLC-festgestellten Substanzkonzentrationen im Blutplasma wurden die pharmakokinetischen Parameter der Substanzen mit dem Computerprogramm ESTRIP berechnet (Tabelle 3).
Tabelle 3: Pharmakokinetische Daten nach einmaliger, intragastraler Applikation von 1 00 mg/kg CRCV-340, Ref-2 und Ref-3 in Mäuse.
Substanz C T MRT T K CL V AUC AUC C /A max max 1/2 el d o-t 0-« max uc o-t
(ng/ml) (h) (h) (h) ( (mix (ml/k (ngximl (ngximl/
h/kg) g) /h) ( h)
Ref-2 1295,4 1 ,0 2,14 2,96 0,23 36,6 156,7 2354,5 2732,1 0,55
Ref-3 424,5 0,5 2,44 1 ,47 0,55 91 ,8 168,1 1085,7 1089,4 0,39
CRCV- 1254,4 3,0 3,54 3,54 0,18 10,4 52,7 6418,3 9598,5 0,20 340
Cmax Maximalkonzentration im Blut
Tmax Zeit bis zum Erreichen der Maximalkonzentration im Blut MRT Mittlere Verweilzeit im Blut (mean residence time)
T1/2 Halbwertszeit
Kei Eliminationskonstante
CL Beseitigung (clearance)
Vd Verteilungsvolumen (volume of distribution)
AUC Fläche unter der Kurve (area under curve)
Cmax/AUC Absorptionsgeschwindigkeit von Magen zum Blut
Ergebnis: Die Untersuchungen zur Pharmakokinetik in der Maus ergaben für CRCV-340 eine deutlich bessere Bioverfügbarkeit als für Ref-2 und Ref-3.
Untersuchungen zur akuten Toxizität von CRCV-340 in der Maus
Ziel: Bestimmung der 50 % letalen Dosis von CRCV-340
Untersuchungen: Die akute Toxizität der Substanz CRCV-340 wurde in 19,5 - 20,5 g schweren Mäusen überprüft, denen per os 40, 60, 80 bzw. 120 mg Substanz/Maus (je 5 Mäuse pro Substanz und Konzentration) verabreicht wurden. Dies entspricht einer Dosis von ca. 2g, 3g, 4g bzw. 6g pro Kilogramm Körpergewicht. Die im Ergebnis beobachteten toxischen Effekte korrelierten mit der applizierten Substanzdosis. Bei den 40 und 60 mg/Maus-Dosierungen wurden bis zu 3 h nach Substanzgabe Koordinationsstörungen und Hyperaktivität als Nebenwirkungen beobachtet. Nach Applikation der zwei höheren Dosierungen kamen Atembeschwerden, aggressives Verhalten und Hyperkinesie dazu. Für CRCV-340 wurde eine LD50 von 3120 mg/kg bestimmt (Tabelle 4).
Tabelle 4: Ergebnisse der Untersuchungen zur akuten Toxizität der Substanz CRCV-340 nach einmaliger peroraler Applikation in der Maus
Dosis Tote/Überlebende 72 h nach Applikation
Ref-2 CRCV-340
40 mg/Maus 0/5 1 /5
60 mg/Maus 1 /5 1 /5
80 mg/Maus 3/5 3/5
120 mg/Maus 4/5 5/5
LD50 78,6 mg/Maus (3930 mg/kg) 62,4 mg/Maus (3120 mg/kg) Ergebnis: Die erhaltenen Daten zur Überlebensrate belegen eine sehr gute Verträglichkeit beider Testsubstanzen.
Langzeituntersuchungen zur Toxizität in der Maus
Ziel: Feststellung der subakuten Toxizität in der Maus, um mögliche Nebenwirkungen z.B. auf das Allgemeinbefinden, Gewicht, die inneren Organe und den Stoffwechsel, die bei einer subakuten Gabe von CRCV-340 über 28 Tage auftreten könnten, aufzudecken.
Untersuchungen: Dazu erhielten ca. 20 g schwere männlich und weibliche Mäuse 12,5, 50 oder 200 mg/kg der Substanz CRCV-340 in einer Cremophorformulierung bzw. die Kontrollgruppe Cremophor einmal täglich über 28 Tage intragastral über eine Sonde verabreicht. Im gesamten Versuchszeitraum wurde der Zustand des Fells und der Schleimhäute, der Exkrete und das Allgemeinbefinden bewertet. Die Protokollierung des Gewichts erfolgte an den Tagen 7, 14, 21 und 28. Ca. 24 h nach der letzten Substanzgabe wurde das Orientierungsvermögen der Tiere untersucht. Im Serum wurden folgende biochemische Parameter analysiert: Proteingehalt, Harnstoff, Creatinin, die Serumaktivität von Aspartataminotransferase, Alaninaminotransferase und alkalischer Phosphatase. Die Hämoglobinkonzentration, Hämatokrit, die Anzahl der roten und weißen Blutzellen sowie der Blutblättchen wurde im Blutausstrich bestimmt. Zum Versuchsende wurden die Mäuse unter Narkose getötet und seziert, der Zustand der inneren Organe makroskopisch eingeschätzt, das Organgewicht bestimmt und Proben für nachfolgende histologische Untersuchungen in Formalin eingelegt.
Ergebniszusammenfassung: Die Ergebnisse belegen eine sehr gute Verträglichkeit der untersuchten Substanzkonzentrationen. Weder das Allgemeinbefinden der Tiere, ihr Fell, die Exkrete noch das Orientierungsvermögen bzw. die Beweglichkeit veränderten sich infolge der Substanzgabe. Auch in Bezug auf die Körpergewichtsdynamik unterschieden sich die CRCV-340- behandelten Tiere nicht von der Kontrollgruppe. Es ließen sich keine Unterschiede zwischen den substanzbehandelten und vehikelbehandelten Versuchsgruppen im Blutausstrich, bei den biochemischen Blutparametern feststellen. Gleiches gilt für die makroskopische Begutachtung der inneren Organe (Leber, Niere, Herz, Lunge, Milz, Pankreas und Hoden), die Organgewichte sowie die Ergebnisse der histologischen Untersuchungen von Herz-, Lungen-, Leber-, Milz-, Thymus-, Pankreas-, Nieren-, Drüsen-, Hoden-, Magen- und Darmgewebsproben (Ergebnisse nicht dargestellt). Bestimmung des antiviralen Spektrums gegen Rhinoviren
Ziel: Bestimmung des antiviralen Wirkspektrums von CRCV-340 gegenüber 50 verschiedenen humanen Rhinovirus-Serotypen und CVB3-Patientenisolaten.
Untersuchungen: Die 50 HRV-Serotypen und 20 klinischen CVB3-lsolate wurden in HeLa-, HeLa Wis- und/oder LF-Zellen vermehrt, ihr Titer bestimmt und mittels Sequenzierung der Serotyp überprüft. Danach wurden zpE (zytopathischer Effekt)-Hemmtests mit den HRV bzw. Plaque- Reduktions-Tests mit den CVB3 Isolaten etabliert. In den entsprechenden antiviralen Tests erfolgten Dosis-Wirkungs-Untersuchungen mit Ref-3 sowie CRCV-340. Eine Übersicht zu den ermittelten mittleren 50 %-Hemmkonzentrationen geben die Tabellen 5 und 6.
Tabelle 5: Übersicht zum Wirkspektrum von Ref-3 und CRCV-340 gegenüber HRV. Zusammen- gefasst wurden die Mittelwerte und Standardabweichungen für alle 50 untersuchten Serotypen sowie für die 45 Pleconaril-sensitiven und 5 Pleconaril-resistenten Serotypen getrennt.
Substanz IC [uM] IC [μΜ] Plecon- IC [μΜ] Plecon- Anzahl der
50 L r J 50 L r J 50 L r J
alle HRV aril-sensitive aril-resistente sensitiven (n = 50) HRV HRV HRV
(n = 45) (n = 5)
mean S. D mean S. D mean S. D.
Ref-3 16,1 1 1 1 ,94 18,52 10,88 0,07 0,01 23
CRCV-340 25,73 21 ,49 26,09 18,98 22,62 40,69 49
Tabelle 6: Übersicht zum Wirkspektrum von Ref-3 und CRCV-340 gegenüber den klinischen CVB3-lsolaten. Zusammengefasst wurden die Mittelwerte und Standardabweichungen für alle 20 untersuchten Isolate sowie für die 19 Pleconaril-sensitiven Isolate und das eine Pleconaril- resistente Serotypen getrennt.
Substanz IC [μΜ] IC [μΜ] Plecon- IC [μΜ] Plecon- Anzahl der
50 L r J 50 L r J 50 L r J
alle CVB3 aril-sensitive aril-resistente sensitiven (n = 20) CVB3 CVB3 CVB3
(n = 1 9) (n = 1 )
mean S. D. mean S. D mean S. D.
Ref-3 0,68 0,90 0,71 0,91 0,13 20
CRCV-340 4,97 4,05 5,16 4,10 1 ,39 18*
* maximal getestete Konzentration 13,5 μΜ
Ergebniszusammenfassung: Das Wirkspektrum von CRCV-340 gegenüber HRV fiel im Vergleich zu Ref-3 deutlich breiter aus. Untersuchungen zur antiviralen Wirkung in vivo im Mausmodell der CVB3-induzierten chronischen Myokarditis
Ziel: Bestätigung der antiviralen Wirkung von CRCV-340 im Mausmodell
Untersuchungen: Die Wirkung des CRCV-340 wurde im Modell der CVB 3-induzierten Myokarditis in 8-Wochen-alten männlichen NMRI Mäusen untersucht. Dazu erhielten CVB3 31 -1 -93 bzw. CVB3 H3-infizierte Tiere ein- oder zweimal täglich 100 mg/kg der Substanz in 50 % oder 20 % PEG-400 in 1 % CMC in Wasser (Placebo) über 7 Tage verabreicht. Parameter zur Bewertung des therapeutischen Effekts schlössen Veränderungen im Körpergewicht, Allgemeinbefinden, Virustiter in Herz- und Pankreasgewebe sowie histopathologische Veränderungen im Herz und Pankreas ein. Scheininfizierte, Placebo-behandelte bzw. CRCV-340-behandelte Tiere dienten als Negativkontrolle und infizierte, Placebo- bzw. Pleconaril-behandelte Tiere als Positivkontrolle im Infektionsverlauf.
Ergebniszusammenfassung: Im Gegensatz zu Placebo und Pleconaril wirkte CRCV-340 im Modell der CVB3 31 -1 -93-induzierten chronischen Myokarditis in NMRI-Mäusen. Dabei waren klinisch und statistisch signifikante Effekte für alle untersuchten Parameter (Körpergewicht, Allgemeinbefinden, die Virustiter im Herz- und Pankreasgewebe am Tag 7 p.L, die Histopathologie im Herz- und Pankreas am Tag 7 und 21 p.i.) zu beobachten.
Studien zur in vivo-Wirksamkeit von CRCV-340 im letalen Mausmodell im Vergleich zur Referenzsubstanz Pleconaril
Ziel: Verifizierung der antiviralen Wirkung von CRCV-340 im letalen Mausmodell
Untersuchungen: Die Wirkung des Entwicklungskandidaten CRCV-340 wurde nach Austestung der Infektionsdosis im Modell der CVB 3-induzierten Myokarditis in 6 - 7 Wochen alten männlichen BALB/c Mäusen untersucht. Dazu erhielten CVB3 31 -1 -93 bzw. CVB3 H3-infizierte Tiere zweimal täglich 100 mg/kg der Substanz in 20 % PEG-400 in 1 % CMC in Wasser (Placebo) über 7 Tage verabreicht. Veränderungen im Körpergewicht, Allgemeinbefinden und die über den Sur- rogatmarker 25 % Körpergewichtsverlust definierte Letalität dienten als Parameter zur Bewertung des therapeutischen Effekts. Scheininfizierte, Placebo-behandelte bzw. CRCV-340-behandelte Tiere stellten die Negativkontrolle und infizierte, Placebo- bzw. Pleconaril-behandelte Tiere die Positivkontrolle im Infektionsverlauf dar. Ergebniszusammenfassung: Im Gegensatz zu Placebo und Pleconaril wirkte CRCV-340 im letalen BALB/c-Mausmodell nach Infektion mit CVB3 31 -1 -93. Dabei waren klinisch und statistisch signifikante Effekte für alle untersuchten Parameter (Körpergewicht, Allgemeinbefinden sowie die Letalität) zu beobachten.

Claims

Ansprüche
4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate der allgemeinen Formel I
Figure imgf000029_0001
oder ein pharmazeutisch akzeptables Salz oder Pro-Pharmakon davon, wobei zumindest ein Wasserstoffatom in zumindest einer der Phenylgruppen A und B durch einen Substi- tuenten RH ersetzt ist, der eine Hammett-Konstante σρ größer als 0,23 aufweist, wobei jedes weitere Wasserstoffatom in jeder der Phenylgruppen A und B unabhängig voneinander ersetzt sein kann durch einen Rest R1 , wobei jedes R1 unabhängig ein Halogen, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes aliphatisches Radikal mit 1 -7 Kettengliedern, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes alkanoles Radikal mit 1 -8 Kettengliedern, N02, CN, CONR2 2, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR2 2, S02NR2 2, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, oder Phenyl sein kann; jedes R2 unabhängig Wasserstoff, ein gesättigtes oder ungesättigtes, halogenier- tes oder nicht halogeniertes, lineares oder verzweigtes aliphatisches Radikal mit 1 -7 Kettengliedern, Benzyl, Phenyl oder Naphtyl, ein gesättigter oder ungesättigter, Mono- oder Polyheterozyklus mit den Heteroatomen N, S oder 0 ist, wobei jede der vorstehenden genannten Gruppen unabhängig mit Fluor, Chlor, Brom, Trifluormethyl, Alkyl, Alkoxy, Cyano, Nitro, Amino, Aminoalkyl, C(0)-Alkyl, C(0)0-Alkyl, Benzyl, Phenyl oder Naphtyl substituiert sein kann; und
X unabhängig F, Cl, Br, oder I ist.
4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach Anspruch 1 , dadurch gekennzeichnet, dass der zumindest eine Substituent RH unabhängig N02, CN, CF3, CCI3, CBr3, OCF3, OCCI3, OCBr3, CHF2, CHCI2, CH Br2, OCHCI2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe oder COOEt ist, bevorzugt CF3 oder OCF3.
3. 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach Anspruch 1 der allgemeinen Formel I I
Figure imgf000030_0001
wobei jeder Substituent RA, RB unabhängig Wasserstoff, ein Halogen, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes aliphatisches Radikal mit 1 -7 Kettengliedern, ein gesättigtes oder ungesättigtes, lineares oder verzweigtes alkanoles Radikal mit 1 -8 Kettengliedern, N02, CN, CONR2 2, COR2, COOR2, OR2, SR2, NR2 2, S02NR2 2, CX3, CR2X2, OCX3, OCR2X2, oder Phenyl sein kann; wobei R2 und X wie in Anspruch 1 definiert sind; dadurch gekennzeichnet, dass zumindest einer der Substituenten RA, RB eine Hammett- Konstante σρ größer als 0,23 aufweist.
4. 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach einem der Ansprüche 1 oder 2 der allgemeinen Formel I Ia
Figure imgf000030_0002
oder I Ib
Figure imgf000031_0001
dadurch gekennzeichnet, dass FT N02, CN, CF3, CCI3, CBr3, OCF3, OCCI3, OCBr3, CHF2, CHCI2, CHBr2, OCHCI2, CHO, COOH, COMe, COEt, COOMe oder COOEt ist, bevorzugt CF3 oder OCF3.
4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach Anspruch 4 der Formel
Figure imgf000031_0002
6. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend ein 4-Amino-3-phenylamino-6- phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivat nach einem der vorherigen Ansprüche.
7. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 6, ferner enthaltend einen pharmazeutisch akzeptablen Träger.
8. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 6 oder 7, ferner enthaltend einen oder mehrere weitere Wirkstoffe.
9. Pharmazeutische Zusammensetzung nach Anspruch 8, wobei der eine oder die mehreren weiteren Wirkstoffe antivirale Wirkstoffe sind, bevorzugt Wirkstoffe gegen Picornaviren.
10. Verfahren zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung, umfassend Formulieren eines 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivats nach einem der Ansprüche 1 -5 mit einem pharmazeutisch akzeptablen Träger.
1 1 . 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach einem der Ansprüche 1 -5 zur Verwendung als Medikament.
12. 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach einem der Ansprüche 1 -5 zur Verwendung bei der prophylaktischen oder therapeutischen Behandlung von Virusinfektionen.
13. 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Virusinfektionen Picornavirusinfektionen sind.
14. Verfahren zur Herstellung eines 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4- d]pyrimidin-Derivats nach einem der Ansprüche 1 bis 5 oder gemäß der Formel I in Anspruch 1 , wobei jedes Wasserstoffatom in jeder der Phenylgruppen A und B unabhängig voneinander duch einen Rest R1 , wie er in Anspruch 1 definiert ist, ersetzt sein kann, umfassend die Umsetzung eines 5-Amino-4-Cyano-3-phenylaminopyrazols mit der freien Base eines Benzamidins in einem polaren organischen Lösungsmittel, bevorzugt in n- Butanol.
15. Verfahren gemäß Ansprcuh 14, wobei das erhaltene 4-Amino-3-phenylamino-6- phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivat anschließend durch Umkristallisation aus Tetra- hydrofuran oder einem Gemisch davon mit Wasser oder einem organsichen Lösungsmittel oder durch Ausfällen aus einer heißen Lösung in Tetrahydrofuran mit Wasser oder einem organischen Lösungsmittel, wobei das organische Lösungsmittel bevorzugt Toluol ist.
PCT/EP2012/070403 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, deren herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe WO2013053942A1 (de)

Priority Applications (20)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PL12775659.1T PL2766367T3 (pl) 2011-10-14 2012-10-15 Pochodne 4-amino-3-fenyloamino-6-fenylopirazolo[3,4-d]pirymidyny do leczenia infekcji wirusowych, zwłaszcza infekcji pikornawirusowych
JP2014535117A JP6071012B2 (ja) 2011-10-14 2012-10-15 ４−アミノ−３−フェニルアミノ−６−フェニルピラゾロ［３，４−ｄ］ピリミジン誘導体、その製造および抗ウイルス剤としての使用
RU2014118953/04A RU2014118953A (ru) 2011-10-14 2012-10-15 4-АМИНО-3-ФЕНИЛАМИНО-6-ФЕНИЛПИРАЗОЛО[3,4-d] ПИРИМИДИНОВЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ, ИХ ПРОИЗВОДСТВО И ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В КАЧЕСТВЕ АНТИВИРУСНЫХ СРЕДСТВ
ES12775659T ES2924828T3 (es) 2011-10-14 2012-10-15 Derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo[3,4-d]pirimidina para el tratamiento de infecciones virales, en particular infecciones por picornavirus
HRP20220928TT HRP20220928T1 (hr) 2011-10-14 2012-10-15 Derivati 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo[3,4-d]pirimidina za liječenje virusnih infekcija, posebno pikornavirusnih infekcija
KR1020147009385A KR20140095467A (ko) 2011-10-14 2012-10-15 4-아미노-3-페닐아미노-6-페닐피라졸로[3,4-d]피리미딘 유도체들, 이들의 제조 및 이들의 항바이러스제로서의 사용
EP12775659.1A EP2766367B1 (de) 2011-10-14 2012-10-15 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate zur Behandlung von viralen Infekten, insbesondere von Picornavirusinfektionen
LTEPPCT/EP2012/070403T LT2766367T (lt) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol[3,4-d]pirimidino derivatai virusinėms infekcijoms, ypač pikornaviruso infekcijai, gydyti
SG11201401351PA SG11201401351PA (en) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d] pyrimidine derivatives, their manufacture and their use as antiviral active substances
US14/350,885 US9790225B2 (en) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives, their manufacture and their use as antiviral active substances
AU2012322750A AU2012322750B2 (en) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d] pyrimidine derivatives, their manufacture and their use as antiviral active substances
DK12775659.1T DK2766367T3 (da) 2011-10-14 2012-10-15 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidinderivater, deres fremstilling og deres anvendelse som antivirale aktive stoffer
MX2014003987A MX2014003987A (es) 2011-10-14 2012-10-15 Derivados de 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo[3,4-d] pirimidina, su manufactura y uso como agentes antivirales.
BR112014008815-2A BR112014008815B1 (pt) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazolo[3,4-d]pirimidina, composição farmacêutica método para preparar uma composição farmacêutica e método para fabricar um 4-amino-3-fenilamino-6- fenilpirazolo[3,4-d]pirimidina
NZ623573A NZ623573B2 (en) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d] pyrimidine derivatives, manufacture and their use as antiviral active substances
CA2850439A CA2850439C (en) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives, their manufacture and use as antiviral agents
CN201280050298.6A CN103946224A (zh) 2011-10-14 2012-10-15 4-氨基-3-苯氨基-6-苯基吡唑并[3,4-d]嘧啶衍生物，其制备和作为抗病毒剂的用途
SI201232005T SI2766367T1 (sl) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-fenilamino-6-fenilpirazol(3,4-D)primidinski derivati za zdravljenje virusnih okužb, zlasti pikornavirusnih okužb
ZA2014/02226A ZA201402226B (en) 2011-10-14 2014-03-26 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d] pyrimidine derivatives, their manufacture and their use as antiviral active substances
IL231934A IL231934A (en) 2011-10-14 2014-04-03 4-Amino-3-Phenylamino-6-Phenylpyrazolo (4,3-d) Pyramidine derivatives, their production and use as active antiviral substances

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE201110116373 DE102011116373A1 (de) 2011-10-14 2011-10-14 Methode zur Herstellung von 4-Amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo[3, 4-d]pyrimidinen
DE102011116373.9 2011-10-14
DE102011116384.4 2011-10-20
DE102011116384 2011-10-20

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2013053942A1 true WO2013053942A1 (de) 2013-04-18

Family

ID=47071252

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/EP2012/070403 WO2013053942A1 (de) 2011-10-14 2012-10-15 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, deren herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe

Country Status (22)

Country Link
US (1) US9790225B2 (de)
EP (1) EP2766367B1 (de)
JP (1) JP6071012B2 (de)
KR (1) KR20140095467A (de)
CN (1) CN103946224A (de)
AU (1) AU2012322750B2 (de)
BR (1) BR112014008815B1 (de)
CA (1) CA2850439C (de)
DK (1) DK2766367T3 (de)
ES (1) ES2924828T3 (de)
HR (1) HRP20220928T1 (de)
HU (1) HUE059217T2 (de)
IL (1) IL231934A (de)
LT (1) LT2766367T (de)
MX (1) MX2014003987A (de)
PL (1) PL2766367T3 (de)
PT (1) PT2766367T (de)
RU (1) RU2014118953A (de)
SG (2) SG10201602846TA (de)
SI (1) SI2766367T1 (de)
WO (1) WO2013053942A1 (de)
ZA (1) ZA201402226B (de)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3064207A1 (de) 2015-03-04 2016-09-07 Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft mbH & Co. KG 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate zur verwendung als bcrp-hemmer in therapiebehandlungen

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR102205570B1 (ko) 2018-09-12 2021-01-20 김홍기 뿌리식물 수경재배용 시트

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2965643A (en) 1960-12-20 Derivatives of pyrazolo
US3600389A (en) 1956-02-10 1971-08-17 Ciba Geigy Corp N-substituted pyrazolo-pyrimidines
US4904666A (en) 1987-04-15 1990-02-27 Boehringer Mannheim Gmbh Pyrazolo(3,4-d)pyrimidine compounds, compositions and method of use
EP0496617A1 (de) 1991-01-23 1992-07-29 Gensia, Inc. Adenosinkinaseinhibitoren
WO1994013677A1 (en) * 1992-12-17 1994-06-23 Pfizer Inc. Pyrazolopyrimidines as crf antagonists
EP0691128A1 (de) 1994-06-15 1996-01-10 Pfizer Inc. Verfahren zur Verabreichung von CRF-Antagonisten
WO2000043394A1 (en) 1999-01-26 2000-07-27 Ústav Experimentální Botaniky Av Cr Substituted nitrogen heterocyclic derivatives and pharmaceutical use thereof
WO2007147401A1 (de) * 2006-06-22 2007-12-27 Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft Mbh & Co.Kg 4-amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2965643A (en) 1960-12-20 Derivatives of pyrazolo
US3600389A (en) 1956-02-10 1971-08-17 Ciba Geigy Corp N-substituted pyrazolo-pyrimidines
US4904666A (en) 1987-04-15 1990-02-27 Boehringer Mannheim Gmbh Pyrazolo(3,4-d)pyrimidine compounds, compositions and method of use
EP0496617A1 (de) 1991-01-23 1992-07-29 Gensia, Inc. Adenosinkinaseinhibitoren
WO1994013677A1 (en) * 1992-12-17 1994-06-23 Pfizer Inc. Pyrazolopyrimidines as crf antagonists
EP0674642A1 (de) 1992-12-17 1995-10-04 Pfizer Inc. Pyrazolopyrimidine als crf antagonisten
EP0691128A1 (de) 1994-06-15 1996-01-10 Pfizer Inc. Verfahren zur Verabreichung von CRF-Antagonisten
WO2000043394A1 (en) 1999-01-26 2000-07-27 Ústav Experimentální Botaniky Av Cr Substituted nitrogen heterocyclic derivatives and pharmaceutical use thereof
WO2007147401A1 (de) * 2006-06-22 2007-12-27 Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft Mbh & Co.Kg 4-amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe
EP2049540A1 (de) 2006-06-22 2009-04-22 Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft mbH & Co.KG 4-amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe

Non-Patent Citations (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABZUG MJ ET AL., PEDIATR INFECT DIS J, vol. 22, 2003, pages 335 - 41
BOERE, RT ET AL., J. ORGANOMET. CHEM., vol. 331, 1987, pages 161 - 167
COUCH RB ET AL.: "Fields Virology, 3rd edition.", 1996, LIPPINCOTT-RAVEN, pages: 713 - 35
CROTTY S ET AL., NAT MED, vol. 6, no. 12, 2000, pages 1375 - 9
DANN O ET AL., JUSTUS LIEBIGS ANN. CHEM., 1982, pages 1836 - 1839
DIANA GD, CURR MED CHEM, vol. 2, 2003, pages 1 - 12
GARIGIPATI RS, TETRAHEDRON LETT., vol. 31, 1990, pages 1969 - 1978
GROARKE JM ET AL., J INFECT DIS, vol. 179, no. 6, 1999, pages 1538 - 41
HANSCH ET AL.: "A Survey of Hammett Substituent Constants and Resonance and Field Parameters", CHEM. REV., vol. 97, 1991, pages 165 - 195, XP002447343, DOI: doi:10.1021/cr00002a004
HAYDEN FG ET AL., ANTIVIR THER, vol. 7, 2002, pages 53 - 65
HAYDEN FG ET AL., CLIN INFECT DIS, vol. 36, 2003, pages 1523 - 32
HEINZ BA; VANCE LM, J VIROL, vol. 69, no. 7, 1995, pages 4189 - 97
J. HETEROCYC. CHEM., vol. 19, 1982, pages 1565
LEDFORD RM ET AL., J VIROL, vol. 78, no. 7, 2004, pages 3663 - 74
MCKINLAY MA ET AL., ANNU REV MICROBIOL, vol. 46, 1992, pages 635 - 54
MELNICK J ET AL.: "Virology", 1996, PHILADELPHIA: LIPPINCOTT-RAVEN PUBLISHERS, pages: 655 - 712
MILLER FD ET AL., ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER, vol. 27, no. 1, 1985, pages 102 - 6
PATTICK AK ET AL., ANTIMICROBILA AGENTS CHEMOTHER, vol. 43, no. 10, 1999, pages 2444 - 50
PEVEAR DC ET AL., ANTIMICROB AGENTS CHEMOTHER, vol. 43, no. 9, 1999, pages 2109 - 15
ROTBART HA, ANTIVIRAL RES, vol. 53, no. 2, 2002, pages 83 - 98
TOMINAGA Y ET AL., J. HETEROCYCL. CHEM., vol. 27, 1990, pages 775 - 779

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3064207A1 (de) 2015-03-04 2016-09-07 Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft mbH & Co. KG 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate zur verwendung als bcrp-hemmer in therapiebehandlungen
WO2016139093A1 (en) 2015-03-04 2016-09-09 Dritte Patentportfolio Beteiligungsgesellschaft Mbh & Co. Kg 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives for use as bcrp inhibitors in therapeutic treatments
US20180044341A1 (en) * 2015-03-04 2018-02-15 Scandion Oncology A/S 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives for use as bcrp inhibitors in therapeutic treatments
US10975079B2 (en) * 2015-03-04 2021-04-13 Scandion Oncology A/S 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives for use as BCRP inhibitors in therapeutic treatments
AU2016227883B2 (en) * 2015-03-04 2021-05-27 Scandion Oncology A/S 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidine derivatives for use as BCRP inhibitors in therapeutic treatments

Also Published As

Publication number Publication date
JP6071012B2 (ja) 2017-02-01
HRP20220928T1 (hr) 2022-10-28
JP2014528468A (ja) 2014-10-27
SI2766367T1 (sl) 2022-10-28
US20140296259A1 (en) 2014-10-02
IL231934A (en) 2017-03-30
KR20140095467A (ko) 2014-08-01
BR112014008815A2 (pt) 2017-04-25
SG10201602846TA (en) 2016-05-30
MX2014003987A (es) 2014-09-22
SG11201401351PA (en) 2014-08-28
BR112014008815B1 (pt) 2021-01-12
CA2850439C (en) 2020-04-07
HUE059217T2 (hu) 2022-10-28
AU2012322750B2 (en) 2016-11-10
ZA201402226B (en) 2015-05-27
ES2924828T3 (es) 2022-10-11
CA2850439A1 (en) 2013-04-18
PL2766367T3 (pl) 2022-08-22
AU2012322750A1 (en) 2014-04-24
CN103946224A (zh) 2014-07-23
IL231934A0 (en) 2014-05-28
LT2766367T (lt) 2022-08-25
US9790225B2 (en) 2017-10-17
PT2766367T (pt) 2022-08-12
RU2014118953A (ru) 2015-11-20
NZ623573A (en) 2016-08-26
EP2766367B1 (de) 2022-05-18
DK2766367T3 (da) 2022-08-01
EP2766367A1 (de) 2014-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5926727B2 (ja) 置換イミダゾ［１，２−ｂ］ピリダジン
EP3313842B1 (de) Für die therapie nützliche pyrazolo[1,5-a]triazin-4-amin-derivate
CA2935658C (en) Pyrazolo[1,5-a]pyrimidin-7-amine derivatives useful in therapy
EP2049540B1 (de) 4-amino-3-arylamino-6-arylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und deren verwendung als antivirale wirkstoffe
CN107108557A (zh) 用于治疗和预防呼吸道合胞体病毒(rsv)感染的螺环二氢吲哚类
CN111718349A (zh) 含氟吡唑并嘧啶化合物和药物组合物及其应用
EP2766367B1 (de) 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate zur Behandlung von viralen Infekten, insbesondere von Picornavirusinfektionen
CN107033149B (zh) 一种dpp-4酶抑制剂及其制备和应用
CN111718350B (zh) 吡唑取代的吡唑并嘧啶化合物和药物组合物及其应用
DE102012004736A1 (de) 4-Amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d]pyrimidin-Derivate und deren Verwendung als antivirale Wirkstoffe
NZ623573B2 (en) 4-amino-3-phenylamino-6-phenylpyrazolo[3,4-d] pyrimidine derivatives, manufacture and their use as antiviral active substances
CN105175326A (zh) 5-甲基-2(1h)吡啶酮衍生物及其制备方法和用途
KR101773575B1 (ko) 테트라하이드로벤조티오펜 유도체, 이의 제조방법 및 이를 함유하는 바이러스성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 12775659

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2850439

Country of ref document: CA

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: MX/A/2014/003987

Country of ref document: MX

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 231934

Country of ref document: IL

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 20147009385

Country of ref document: KR

Kind code of ref document: A

Ref document number: 2014535117

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 14350885

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2012322750

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20121015

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2012775659

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2014118953

Country of ref document: RU

Kind code of ref document: A

REG Reference to national code

Ref country code: BR

Ref legal event code: B01A

Ref document number: 112014008815

Country of ref document: BR

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 112014008815

Country of ref document: BR

Kind code of ref document: A2

Effective date: 20140411