CN111718349A - 含氟吡唑并嘧啶化合物和药物组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药领域，公开了含氟吡唑并嘧啶化合物和药物组合物及其应用，该含氟吡唑并嘧啶化合物具有式(I)所示的结构。本发明提供的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药对TRK激酶的野生酶和多种突变体均表现出优异的抑制活性。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种含氟吡唑并嘧啶化合物、一种含有该含氟吡唑并嘧啶化合物的药物组合物、前述含氟吡唑并嘧啶化合物及药物组合物的应用。
背景技术
NTRK/TRK(Tropomyosin receptor kinase)为祌经营养因子酪氨酸受体，隶属于受体酪氨酸激酶家族。TRK家族主要包括3个成员，NTRK1/TRKA，NTRK2/TRKB和NTRK3/TRKC。完整的TRK激酶包括胞外区、跨膜区和胞内区三个部分。TRK激酶的胞外区与相应的配体结合之后，能够引起激酶构型变化，形成二聚体。TRK激酶的胞内区发生自体磷酸化从而激活自身的激酶活性，进而进一步激活下游的信号转导通路(如MAPK，AKT，PKC等)，产生相应的生物学功能；其中NGF(神经生长因子)结合TRKA，BDNF(衍生的神经营养因子)结合TRKB，以及NT3(神经营养因子3)结合TRKC。
TRK激酶在神经的发育过程中发挥重要的生理功能，包括神经元轴突的生长与功能维持、记忆的发生发展以及保护神经元免受伤害等等。同时，大量的研究表明TRK信号转导通路的活化与肿瘤的发生发展密切相关，在神经细胞瘤、前列腺癌、乳腺癌等中都发现了活化的TRK信号蛋白。
近几年来多种TRK融合蛋白的发现，更显示了其促进肿瘤发生的生物学功能。最早的TPM3-TRKA融合蛋白是在结肠癌细胞中发现的，在检测的临床病人中约有1.5％的发生率。后来在不同类型的临床肿瘤病人样本如肺癌，头颈癌、乳腺癌、甲状腺癌、神经胶质瘤等中发现了不同类型的TRK融合蛋白，如CD74-NTRK1，MPRIP-NTRK1，QKI-NTRK2，ETV6-NTRK3，BTB1-NTRK3等。这些不同的NTRK融合蛋白在不需要配体结合的情况下，自身处于高度活化的激酶活性状态，因而能够持续性的磷酸化下游的信号途径，诱导细胞增殖，促进肿瘤的发生、发展。
因此，近几年来，TRK融合蛋白己经成为一个有效的抗癌靶点和研究热点，例如WO2010048314、WO2012116217、WO2011146336、W02010033941、WO2018077246等均公开了具有不同结构类型的TRK激酶抑制剂。
此外，持续给药后出现的靶标突变是肿瘤产生耐药性的重要原因，近期临床上已经出现了TRK突变的病例，如TRKA G595R、G667C、G667S和F589L的突变(Russo M等.CancerDiscovery,2016,6(1)，36-44)、TRKC G623R和G696A的突变(Drilon A.等Annals ofOncology 2016,27(5),920-926)，而寻找新的TRK激酶抑制剂有望解决TRK突变引起的肿瘤耐药性问题。
另外，含氮芳杂环通常具有较好的成药性，典型的例子是ALK激酶抑制剂克唑替尼(Cui J.等.J.Med.Chem.2011,54,6342–6363)。WO2007147647和WO2007025540也分别公开了吡唑取代的吡唑并吡啶化合物和吡唑取代的咪唑并哒嗪化合物作为ALK激酶抑制剂及其在疾病治疗中的应用。
发明内容
本发明的目的之一是为了提供一种新的具有优异的抗肿瘤活性的含氟吡唑并嘧啶化合物。
现有技术中提供的典型化合物A和典型化合物B虽然对ALK激酶具有良好的抑制活性，但是，以典型化合物A和典型化合物B为代表的结构类似物对TRK激酶的抑制效果却并不佳。本发明的发明人通过大量的科学研究发现，具有本发明式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物对TRK激酶表现出优异的抑制活性，且其抑制活性明显优于现有技术的典型化合物A和典型化合物B。更为重要的是，本发明的该类含有苯基结构的含氟吡唑并嘧啶化合物在动物水平上的抗肿瘤活性同样明显优于典型化合物A和典型化合物B，从而表现出较现有技术更为优异的肿瘤治疗效果。
为了实现上述目的，本发明的第一方面提供一种具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药，
其中，在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、卤素、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基；
R5选自由1-6个卤素取代的C1-12的烷基；
R6选自H、C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基和卤素；
R7选自H、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基、氰基取代的C2-12的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-12的环烷基、C2-12的酰基、磺酰基，
且R1、R2、R3、R4和R5中的至少一个基团中含有F原子。
本发明的第二方面提供前述第一方面中所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药在制备用于预防和/或治疗TRK激酶受体介导的疾病的药物中的应用。
本发明的第三方面提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，以及作为活性成分的本发明第一方面所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药。
本发明的第四方面提供本发明第三方面所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗TRK激酶受体介导的疾病的药物中的应用。
本发明的第五方面提供本发明第一方面中所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药，或者本发明第三方面中所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
本发明提供的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药对TRK激酶表现出优异的抑制活性，同时，在动物水平上表现出良好的抗肿瘤活性。
具体实施方式
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。
如前所述，本发明的第一方面提供一种含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药。
以下先对本发明中涉及的部分术语进行解释：
“C1-12的烷基”表示碳原子总数为1-12的烷基，包括直链烷基、支链烷基或者环烷基，例如可以为碳原子总数为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12的直链烷基、支链烷基或者环烷基，例如可以为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、正己基、环丙基、甲基环丙基、乙基环丙基、环戊基、甲基环戊基、环己基等。针对“C1-8的烷基”、“C1-6的烷基”具有与此相似的解释，所不同的是，碳原子数不同。
“由1-6个卤素取代的C1-12的烷基”表示碳原子总数为1-12的烷基，包括直链烷基、支链烷基和环烷基，并且该C1-12的烷基中的1-6个H由选自卤素的卤原子取代，例如该C1-12的烷基中的1、2、3、4、5或6个H由选自氟、氯、溴、碘中的任意一个或者多个卤原子取代，例如可以为三氟甲基、二氟甲基、一氟甲基、二氟乙基等。针对“由1-6个卤素取代的C1-8的烷基”、“由1-6个卤素取代的C1-6的烷基”具有与此相似的解释，所不同的是，碳原子数不同。
“羟基取代的C1-12的烷基”表示碳原子总数为1-12的烷基，包括直链烷基、支链烷基或者环烷基，并且该C1-12的烷基中的至少一个H由羟基取代。
“氰基取代的C2-12的烷基”表示碳原子总数为2-12的烷基，包括直链烷基、支链烷基或者环烷基，并且该C2-12的烷基中的至少一个H由氰基取代，且该“氰基”中的碳原子计入该基团的碳原子总数中。
“含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-12的环烷基”表示碳原子总数为2-12的环烷基，且形成环的原子中的1-3个原子选自N、O和S的杂原子，并且形成环的原子上可以含有烷基取代基，该烷基取代基中含有的碳原子数包括在前述碳原子总数范围内。C2-12的环烷基例如可以为三元环、四元环、五元环、六元环、七元环、八元环、九元环、十元环、十一元环或十二元环，并且，C2-12的环烷基中的H可以任意地被取代基取代或者未取代，若被取代，其中的取代基各自独立地选自卤素、羟基、硝基和巯基中的至少一种。
“C2-12的酰基”表示碳原子总数为2-12的酰基，例如可以为乙酰基，丙酰基等。
“磺酰基”中可以含有C1-6的烷基。
以下提供本发明的所述式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物的几种优选的具体实施方式：
具体实施方式1：
在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R5选自由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R6选自H、C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基和卤素；
R7选自H、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基、氰基取代的C2-8的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-10的环烷基、C2-8的酰基、磺酰基；
且R1、R2、R3、R4和R5中的至少一个基团中含有F原子。
具体实施方式2：
在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-6的烷基、由1-4个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-6的烷基；
R5选自由1-4个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-6的烷基；
R6选自H、C1-6的烷基、羟基取代的C1-6的烷基和卤素；
R7选自H、C1-6的烷基、由1-4个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-6的烷基、羟基取代的C1-6的烷基、氰基取代的C2-6的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-8的环烷基、C2-6的酰基、磺酰基；
且R1、R2、R3、R4和R5中的至少一个基团中含有F原子。
特别地，本发明的发明人发现，当所述R5为-CH2CHF2时，本发明提供的式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物对TRK激酶，特别是突变的TRK激酶表现出更高的抑制活性；同时表现出更合理的药代动力学性质，更优异的体内抗肿瘤活性。因此，提供以下具体实施方式3、具体实施方式4、具体实施方式5和具体实施方式6以说明本发明提供的化合物的更加优异的效果。
具体实施方式3：
在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、卤素、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基；
R5为-CH2CHF2；
R6选自C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基和卤素；
R7选自H、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基、氰基取代的C2-12的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-12的环烷基、C2-12的酰基、磺酰基。
具体实施方式4：
在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R5为-CH2CHF2；
R6选自C1-8的烷基、、羟基取代的C1-8的烷基和卤素；
R7选自H、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基、氰基取代的C1-8的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-10的环烷基、C2-8的酰基、磺酰基。
具体实施方式5：
在式(I)中，
R1、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R2为H或F；
R5为-CH2CHF2；
R6选自C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基和卤素；
R7选自H、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基、氰基取代的C2-8的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-10的环烷基、C2-8的酰基、磺酰基。
具体实施方式6：
所述含氟吡唑并嘧啶化合物为权利要求5中所列举的化合物中的至少一种，或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药。
需要说明的是，在前述权利要求5所示的化合物中，未标示手性中心具体构型的化合物，即表示为外消旋体。
本发明对制备具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物的方法没有特别的限定，例如可以采用如下制备方法获得：
上述制备方法中涉及的是Suzuki偶联反应，对所述偶联反应的反应条件没有特别的限定，本领域技术人员可以根据有机合成领域内的公知常识以及本发明实施例部分提供的具体实例获得适宜的反应条件。
如前所述，本发明的第二方面提供本发明的第一方面中所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药在制备用于预防和/或治疗TRK激酶受体介导的疾病的药物中的应用。
如前所述，本发明的第三方面提供一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，以及作为活性成分的本发明第一方面所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药。
如前所述，本发明的第四方面提供本发明的第三方面中所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗TRK激酶受体介导的疾病的药物中的应用。
如前所述，本发明的第五方面提供本发明的第一方面中所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药，或者本发明第三方面所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
优选情况下，所述肿瘤为乳腺癌、大肠癌、肺癌、甲状腺癌、皮肤癌、骨癌、黑色素瘤、白血病、唾液腺肿瘤、神经内分泌肿瘤、淋巴瘤、脑肿瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、间皮瘤、食管癌、肺肉瘤、成神经管细胞瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、肝癌、成视网膜细胞瘤、肾癌、膀胱癌、骨肉瘤、胃癌、子宫癌、外阴癌、小肠癌、前列腺癌、胆管癌、输尿管癌、肾上腺皮质癌或头颈部癌症中的至少一种。
以下将通过实例对本发明进行详细描述。以下实例中，在没有特别说明的情况下，使用的各种原料均来自商购，且为分析纯。
实施例1：(R)-N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物1)的制备
步骤1)：将(R)4-氟-2-(1-(吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-基氨基)乙基)苯酚(11.0mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(16.5mmol)，碳酸铯(22mmol)加入到200mL的梨形瓶中，向其中加入DMF(50mL)。油浴(100℃)中加热过夜。将反应冷却至环境温度，粗品经柱层析纯化得白色固体，收率90％。
步骤2)：将(R)-N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(9.8mmol)，加入到200mL的梨形瓶中，向其中加入乙腈(50mL)。在室温，磁力搅拌条件下，加入N-碘代丁二酰亚胺(NIS，14.85mmol)。室温反应1h，TLC监测反应完毕。减压尽量除去乙腈后用250mL乙酸乙酯稀释，并转移到分液漏斗中。用1mol/L得NaOH洗3次，饱和食盐水洗两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩得红色油状粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率67％。
步骤3)：将(R)-N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.50mmol)，1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(0.75mmol)，无水碳酸钾(2.00mmol)，四(三苯基膦)钯(0.05mmol)加入到100ml反应管中，氩气置换3次，加入10ml无水DMF,2ml水。100℃，氩气氛围下反应2h，TLC监测反应完毕。冷却至50℃，硅藻土过滤，滤液加水并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩得黑色油状粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率50％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),8.49(d,J＝7.6Hz,1H),8.08(s,1H),8.04(d,J＝6.8Hz,1H),7.85(s,2H),7.16–6.99(m,3H),6.70–6.32(m,2H),5.63–5.44(m,1H),4.58–4.44(m,2H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例2：(R)-N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物2)的制备
制备方法同实施例1，不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯改为1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝7.6Hz,1H),8.05(s,1H),8.02(d,J＝9.2Hz,1H),7.75(s,2H),7.23–6.99(m,3H),6.70–6.30(m,2H),5.57–5.46(m,1H),4.49(t,J＝14.4Hz,2H),3.85(s,3H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例3：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物3)的制备
步骤1)：N-(1-(5-氟-2-(2-氟乙氧基)苯基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺的合成，采用实施例1中的步骤1的方法，不同之处在于将碘甲烷替换为1,1-二氟-2-碘乙烷。
步骤2)：N-(1-(5-氟-2-(2-氟乙氧基)苯基)乙基)-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺的合成，采用实施例1中的步骤2的方法。
步骤3)：合成方法同实施例1中的步骤3。不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换为1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝7.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.19(s,1H),8.13(d,J＝6.0Hz,2H),7.99–7.53(m,1H),7.21–6.96(m,3H),6.64–6.30(m,2H),5.55–5.46(m,1H),4.45(ddq,J＝17.6,11.2,3.2Hz,2H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例4：3-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物4)的制备
合成方法同实施例3,不同之处在于将1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑替换为1-环丙基吡唑-4-硼酸片呐醇酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝7.6Hz,1H),8.04(s,1H),8.00(d,J＝6.8Hz,1H),7.81(s,1H),7.73(s,1H),7.25–6.96(m,3H),6.67–6.29(m,2H),5.55–5.44(m,1H),4.48(t,J＝14.4Hz,2H),3.77–3.54(m,1H),1.47(d,J＝6.8Hz,3H),1.08–0.96(d,J＝6.4Hz,4H).
实施例5：(R)-2-(4-(5-((1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙醇(化合物5)的制备
制备方法同实施例1，不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换为4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-乙醇。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(d,J＝7.6Hz,1H),8.04(s,1H),7.98(d,J＝6.8Hz,1H),7.77(d,J＝11.2Hz,2H),7.19–6.96(m,3H),6.67–6.30(m,2H),5.60–5.41(m,1H),4.94(t,J＝5.2Hz,1H),4.47(qd,J＝12.8,10.8,5.6Hz,2H),4.11(t,J＝5.6Hz,2H),3.73(q,J＝5.6Hz,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例6：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1-(2,2-二氟乙基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物6)的制备
制备方法同实施例3，不同之处在于将1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑替换为1-(2,2-二氟乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.50(d,J＝7.6Hz,1H),8.09(s,1H),8.02(d,J＝7.2Hz,1H),7.88(d,J＝7.6Hz,2H),7.22–6.96(m,3H),6.70–6.14(m,3H),5.58–5.48(m,1H),4.59(dt,J＝15.2,9.2Hz,2H),4.46(dt,J＝14.4,3.6Hz,2H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例7：((R)-2-(4-(5-((1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙腈(化合物7)的制备
制备方法同实施例1，不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换为2-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-基)吡唑-1-基]乙腈。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝7.6Hz,1H),8.09(s,1H),8.05(d,J＝7.2Hz,1H),7.91(d,J＝7.6Hz,2H),7.21–6.97(m,3H),6.67–6.30(m,2H),5.54–5.42(m,3H),4.61–4.35(m,2H),1.45(d,J＝7.2Hz,3H).
实施例8：2-(4-(5-((1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-1H-吡唑哌嗪-1-基)环戊烷-1-醇(化合物8)的制备
在茄形瓶中加入N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.22mmol)，1,2-环氧环戊烷(0.22mmol)，无水DMF(10mL)和碳酸铯(0.6mmol)。在油浴(100℃)中加热回流过夜。将反应冷却至环境温度，减压浓缩尽量除去DMF得黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率60％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.46(d,J＝7.6Hz,1H),8.03(d,J＝1.2Hz,1H),7.95(t,J＝7.6Hz,1H),7.81(d,J＝10.0Hz,1H),7.77(s,1H),7.20–6.97(m,3H),6.67–6.31(m,2H),5.55–5.44(m,1H),5.07(dd,J＝6.4,4.8Hz,1H),4.60–4.36(m,2H),4.34–4.10(m,2H),2.22–2.06(m,1H),2.03–1.88(m,2H),1.78(p,J＝7.2Hz,2H),1.63–1.52(m,1H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例9：2-(4-(5-((1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-1H-吡唑哌嗪-1-基)环己烷-1-醇(化合物9)的制备
制备方法同实施例8，不同之处在于将1,2-环氧环戊烷替换为1,2-环氧环己烷。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.49(d,J＝7.6Hz,1H),8.05(s,1H),7.98(t,J＝7.6Hz,1H),7.84–7.74(m,2H),7.23–6.97(m,3H),6.72–6.29(m,2H),5.60–5.47(m,1H),4.79(dd,J＝11.6,5.2Hz,1H),4.59–4.40(m,2H),3.86–3.67(m,2H),2.07–1.64(m,5H),1.58–1.17(m,6H).
实施例10：N-((R)-1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物10)的制备
制备方法同实施例1，不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换为1-(四氢吡喃-2-基)-1H-吡唑-4-硼酸频哪醇酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝7.6Hz,1H),8.12–8.06(m,1H),8.04–7.96(m,1H),7.93(s,1H),7.83(s,1H),7.20–6.94(m,3H),6.68–6.30(m,2H),5.54–5.41(m,1H),5.41–5.28(m,1H),4.45(td,J＝14.4,3.6Hz,2H),3.98–3.84(m,1H),3.70–3.58(m,1H),2.15–1.84(m,3H),1.74–1.63(m,1H),1.58–1.50(m,2H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例11：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1-(四氢-2H-吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物11)的制备
制备方法同实施例3，不同之处在于将1-(二氟甲基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼烷-2-基)-1H-吡唑替换为1-(四氢吡喃-4-基)-1H-吡唑-4-硼酸频哪醇酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(d,J＝7.6Hz,1H),8.04(s,1H),7.96(d,J＝7.2Hz,1H),7.82(s,1H),7.76(s,1H),7.20–6.99(m,3H),6.66–6.32(m,2H),5.54–5.39(m,1H),4.57–4.26(m,3H),4.07–3.92(m,2H),3.57–3.44(m,2H),2.03–1.88(m,4H)，1.46(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例12：(R)-1-(4-(5-((1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)氨基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-3-基)-1H-吡唑-1-基)乙酮(化合物12)的制备
在茄形瓶中加入N-(1-(5-氟-2-(2,2-二氟乙氧基)苯基)乙基)-3-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.26mmol)，乙酰氯(0.26mmol)，无水DCM(10mL)和三乙胺(0.52mmol)。在0℃下反应4h。减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率70％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.53(d,J＝7.6Hz,1H),8.41(s,1H),8.25(d,J＝8.0Hz,2H),8.19(d,J＝6.8Hz,1H),7.18–6.93(m,3H),6.68–6.32(m,2H),5.50(t,J＝7.2Hz,1H),4.65–4.36(m,2H),2.64(s,3H),1.45(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例13：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1-(甲基磺酰基)-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-A]嘧啶-5-胺(化合物13)的制备
在茄形瓶中加入N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-5-氟苯基)乙基)-3-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.26mmol)，甲基磺酰氯(0.26mmol)，无水DCM(10mL)和三乙胺(0.52mmol)。在0℃下反应4h。减压浓缩得粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率70％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.52(d,J＝7.6Hz,1H),8.31(d,J＝11.2Hz,2H),8.24(s,1H),8.13(d,J＝7.2Hz,1H),7.19–6.94(m,3H),6.63–6.27(m,2H),5.56–5.42(m,1H),4.58–4.32(m,2H),3.49(s,3H),1.46(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例14：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙基)-3-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物14)的制备
步骤1)：将1-(3,5-二氟-2-羟基苯基)乙-1-酮(29.0mmol)，1,1-二氟-2-碘乙烷(43.5mmol)，碳酸铯(58mmol)加入到200mL的梨形瓶中，向其中加入DMF(50mL)。油浴(80℃)中加热过夜。将反应冷却至环境温度，粗品经柱层析纯化得白色固体，收率78％。
步骤2)：将1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙酮(22.3mmol)，盐酸羟胺(33.9mmol)，碳酸铯(44.6mmol)加入到200mL的梨形瓶中，向其中加入甲醇(50mL)。在室温，磁力搅拌条件下，反应4h。将反应液倒入水中，抽滤，干燥，得到白色固体，收率98％。
步骤3)：将1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙-1-酮肟(21.4mmol)，锌粉(321mmol)，氯化铵(321mmol)，乙酸(321mmol)加入到200ml的梨形瓶中，向其中加入甲醇(50mL)。油浴(80℃)中加热过夜。将反应冷却至环境温度，中和，硅藻土过滤，滤液加水并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩得黄色液体，收率77％。
步骤4)：将5-氯吡唑并[1,5-a]嘧啶(16.5mmol)，1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙-1-胺(16.5mmol)，无水正丁醇(50mL)和N,N-二异丙基乙胺(DIPEA，49.5mmol)加入到200ml的梨形瓶中。在油浴(140℃)中加热过夜。将反应冷却至环境温度，减压浓缩尽量除去正丁醇和N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)得黄色油状粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率68％。
步骤5)：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(11.2mmol)，加入到200mL的梨形瓶中，向其中加入乙腈(50mL)。在室温，磁力搅拌条件下，加入N-碘代丁二酰亚胺(NIS，13.4mmol)。室温反应1h，TLC监测反应完毕。减压尽量出去乙腈后用250mL乙酸乙酯稀释，并转移到分液漏斗中。用1mol/L得NaOH洗3次，饱和食盐水洗两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩得红色油状粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率67％。
步骤6)：将N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙基)-3-碘吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(0.50mmol)，1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯(0.75mmol)，无水碳酸钾(2.00mmol)，四(三苯基膦)钯(0.05mmol)加入到100ml反应管中，氩气置换3次，加入10ml无水DMF,2ml水。100℃，氩气氛围下反应2h，TLC监测反应完毕。冷却至50℃，硅藻土过滤，滤液加水并用乙酸乙酯萃取。有机相用饱和食盐水洗两次，用无水硫酸钠干燥，浓缩得黑色油状粗品，粗品经柱层析纯化得淡黄色固体，收率50％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),8.49(d,J＝7.6Hz,1H),8.07(s,1H),7.99(d,J＝6.8Hz,1H),7.87(s,2H),7.26–7.18(m,1H),7.07–7.01(m,1H),6.63–6.25(m,2H),5.56–5.50(m,1H),4.62–4.30(m,2H),1.49(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例15：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)-3,5-二氟苯基)乙基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物15)的制备
制备方法同实施例14，不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换为1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.47(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(d,J＝16.4Hz,2H),7.82(s,1H),7.68(s,1H),7.24(d,J＝9.6Hz,1H),7.02(d,J＝9.2Hz,1H),6.62–6.26(m,2H),5.59–5.39(m,1H),4.55–4.31(m,2H),3.84(s,3H),1.49(d,J＝6.8Hz,3H).
实施例16：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)苯基)乙基)-3-(1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物16)的制备
步骤1)：采用实施例14中的步骤1的方法，不同之处在于将1-(3,5-二氟-2-羟基苯基)乙-1-酮替换为1-(2-羟基苯基)乙烷-1-酮。
步骤2)：采用实施例14中的步骤2的方法。
步骤3)：采用实施例14中的步骤3的方法。
步骤4)：采用实施例14中的步骤4的方法。
步骤5)：采用实施例14中的步骤5的方法。
步骤6)：合成方法同实施例14中步骤6。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.68(s,1H),8.43(d,J＝7.6Hz,1H),8.02(s,1H),7.99(d,J＝7.2Hz,1H),7.83(s,2H),7.31(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),7.23–7.12(m,1H),7.06(d,J＝8.0Hz,1H),6.92(t,J＝7.6Hz,1H),6.67–6.28(m,2H),5.58–5.51(m,1H),4.50–4.40(m,2H),1.43(d,J＝6.4Hz,3H).
实施例17：N-(1-(2-(2,2-二氟乙氧基)苯基)乙基)-3-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-5-胺(化合物17)的制备
制备方法同实施例16，不同之处在于将1-Boc-吡唑-4-硼酸频哪醇酯替换为1-甲基吡唑-4-硼酸频哪醇酯。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝7.2Hz,1H),7.98(m,2H),7.72(d,J＝7.2Hz,2H),7.31(m,1H),7.19(m,1H),7.11(m,1H),6.93(m,1H),6.71–6.23(m,2H),5.59–5.47(m,1H),4.55–4.38(m,2H),3.81(s,3H),1.44(d,J＝7.2Hz,3H).
测试例1：体外生化水平抑制蛋白激酶(PK)活性实验
材料与方法：TRKA、TRKB和TRKC等野生型激酶和TRKA-G595R、TRKA-G667C、TRKA-F589L、TRKC-G623R、TRKC-G696A等突变的激酶，来源于Carna Biosciences 08-186，08-187，08-197；HTRF KinEASE TK kit(Cisbio公司62TK0PEC)；384孔板(Greiner公司)；ATP(Life technologies PV3227)，MgCl2(sigma)公司；PHERAstar FS多功能酶标仪(BMG公司)；低速离心机(StaiteXiangyi公司)；恒温箱(Binder公司)。
选取的对照化合物为WO2007147647中公开的典型化合物A、WO2007025540中公开的典型化合物B，以及对比化合物C、对比化合物D，其中，对比化合物C(核磁数据为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.78–12.66(m,1H),8.45(d,J＝7.6Hz,1H),8.05(s,1H),8.01–7.80(m,3H),6.94(s,1H),6.90(d,J＝9.2Hz,1H),6.77(dt,J＝10.8,2.4Hz,1H),6.56–6.21(m,2H),5.20(d,J＝6.0Hz,1H),4.31(tt,J＝14.4,3.6Hz,2H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H))和对比化合物D(核磁数据为：1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.70(br,1H),8.44(d,J＝7.6Hz,1H),8.05(s,1H),7.94(d,J＝6.8Hz,2H),7.85(s,1H),7.35–7.14(m,3H),6.54–6.20(m,2H),5.28–5.11(m,1H),4.39–4.30(m,2H),1.48(d,J＝6.8Hz,3H))的制备方法参照前述实施例3的制备方法，仅是原料不同，结构如下：
化合物溶解及保存：根据溶解性，用二甲基亚砜(DMSO)将受试化合物配置成10mmol/L的母液，分装后-20℃保存；
化合物工作液的配制：测试前将分装的化合物从冰箱取出，用纯DMSO稀释到100×所需浓度；然后用去离子水将化合物稀释至4×所需浓度；
1.33×酶缓冲液(Enzymatic buffer)的配制：将5×酶缓冲液(来源于HTRF试剂盒)用去离子水稀释到1.33×，并且加入1.33×终浓度的相应成分：1.33mmol/L二硫苏糖醇(DTT)、1.33mmol/L MnCl2、6.65mmol/L MgCl2和39.9nmol/L SEB；
激酶工作液的配制：用1.33×酶缓冲液将TRKA、TRKB和TRKC稀释到2×所需浓度分别为0.404ng/μL、0.304ng/μL和0.236ng/μL；
底物工作液的配制：用1.33×酶缓冲液将TK Substrate–biotin(来源于HTRF试剂盒)和ATP(10mM)稀释为4×所需终浓度的混合液；TRKA、TRKB和TRKC的ATP终浓度分别为：3.727μmol/L、2.56μmol/L和2.526μmol/L。TK Substrate–biotin(来自HTRF KinEASE TKkit)终浓度均为：0.2μmol/L。
检测工作液的配制：用HTRF测试缓冲液将16.67μmol/L的抗生蛋白链菌-XL665(Streptavidin-XL665)稀释到4×所需终浓度，然后与等体积的抗体-铕隐酸盐(Antibody-Cryptate)混合(均来源于HTRF试剂盒)。
酶反应步骤：向低体积384微孔板的每个孔中加入4μL的激酶工作液，同时加入4μL的1.33×酶缓冲液作为阴性对照(Negative)；向孔加入2μl的化合物工作液，同时加入2μL的8％DMSO水溶液作为零化合物浓度对照(即阳性对照，Positive)；于25℃，孵育5min；向孔中加入2μL底物工作液启动酶反应，于37℃，振荡反应30min。
HTRF试剂检测步骤：向孔加入8μL的检测工作液终止反应；25℃反应1h；
HTRF信号的读取：采用PHERAstar FS读数检测信号，仪器相应设置如下：
Optic module
积分延迟(Integration delay，lag time)50μs
积分时间(Integration time)400μs
闪光次数(Number of flashes)200
对于每孔读出的原始数据，比值＝665nm/620nm；
抑制率的计算：
IC50值的计算：以化合物浓度的对数为横坐标，抑制率为纵坐标，在GraphPadPrism 5中，拟合非线性曲线：log(inhibitor)vs.response--Variable slope，求出酶活抑制率为50％时的待测化合物浓度即IC50。
实验结果：TRKA、TRKB和TRKC激酶活性半数抑制浓度(IC50,nM)
本发明提供结构如式(I)所示化合物以及对照化合物对TRKA、TRKB和TRKC的半数抑制浓度(IC50)见表1：
表1：化合物的TRKA、TRKB和TRKC激酶抑制活性
如表1所示，本发明提供的化合物对野生的TRKA、TRKB和TRKC激酶均表现出优异的抑制活性，显著优于典型化合物A、典型化合物B、对比化合物C和对比化合物D。
测试例2：大鼠体内药物代谢研究
将实施例1、2和5提供的化合物以聚乙二醇400水溶液(70％)形式大鼠给药。对于口服给药，大鼠给予5mg/kg的剂量。口服组给药后15、30、45min、1、2、4、6、8、10、24h各采集血样约0.3mL至肝素化的Eppendorf管中，于冰上暂存至离心。全血经8000rpm离心5min后收集血浆，转移血浆至96孔板中，于-20℃保存至LC-MS/MS检测。
采用软件WinNonlin软件的非室模型计算大鼠给药后的药代动力学参数。
达峰浓度Cmax：采用实测值；
药时曲线下面积AUC0-t值：采用梯形法计算；AUC0-∞＝AUC0-t+Ct/ke，Ct为最后一个可测得时间点的血药浓度，ke为消除速率常数；
消除半衰期t1/2＝0.693/ke；
绝度生物利用度F＝Doseiv*AUC0-t，ig/Doseig*AUC0-t，iv×100％。
表2列出了静注给药后，实施例1、2和5的化合物在大鼠体内的药代动力学参数。结果表明，实施例1、2和5的化合物具有良好的药代动力学性质，包括理想的清除率(CL)、半衰期(t1/2)、峰浓度(Cmax)和暴露量(AUC0-t)。
表3列出了口服给药后，实施例1、2和5的化合物在大鼠体内的药代动力学参数。结果表明，实施例1、2和5的化合物具有良好的药代动力学性质，包括理想的清除率(CL)、半衰期(t1/2)、峰浓度(Cmax)、暴露量(AUC0-t)和口服生物利用度。
表2：实施例1、2和5化合物的大鼠静注给药的主要药代动力学参数
表3：实施例1、2和5化合物的大鼠口服给药的主要药代动力学参数
测试例3：本发明的化合物对五种TRK激酶突变体的抑制活性
本测试例采用与测试例1相同的测试方法进行。
本测试例的结果列于表4中。
表4
由表4可见，本发明的化合物对五种TRK激酶突变体的抑制活性优于对野生的TRK激酶的活性，有望有效克服临床报道的肿瘤耐药性。
测试例4：本发明的化合物在裸鼠异体移植瘤模型上的抗肿瘤活性
本发明化合物的药效通过移植肿瘤的标准鼠类模型来进行评价。人非小细胞肺癌H2228培养、收集后，于后腹侧皮下接种于5-6周龄的雌性裸小鼠体内(BALB/c，上海灵畅生物科技有限公司)。当肿瘤体积达到100-150mm3时，动物随机地分为溶剂对照组(70％PEG-400的水溶液)和化合物组(每组6只动物)。后续采用实施例的化合物对动物进行灌胃给药(相应剂量，溶解在70％PEG-400的水溶液中)，从肿瘤细胞接种后的0到7天中的任何地方开始，并且在试验中每天进行两次。
实验指标为考察实施例化合物对肿瘤生长的影响，具体指标为T/C％或抑瘤率TGI(％)。
每周二次用游标卡尺测量肿瘤直径，肿瘤体积(V)计算公式为：
V＝1/2×a×b2其中a、b分别表示长、宽。
T/C(％)＝(T-T0)/(C-C0)×100其中T、C为实验结束时的肿瘤体积；T0、C0为实验开始时的肿瘤体积。
抑瘤率(TGI)(％)＝100-T/C(％)。
当肿瘤出现消退时，抑瘤率(TGI)(％)＝100-(T-T0)/T0×100
如果肿瘤比起始体积缩小，即T<T0或C<C0时，即定义为肿瘤部分消退(PR)；如果肿瘤完全消失，即定义为肿瘤完全消退(CR)。
二组肿瘤体积之间比较采用双尾Student’s t检验，P<0.05定义为有统计学显著性差异。
本测试例的结果列于表5中。
以下BID表示一天两次给药。
表5
| 分组 | 给药 | 抑瘤率D14 | 完全消退 | 部分消退 |
| 溶剂 | BID,D0-7 | - | - | - |
| 化合物5,50mg/kg | BID,D0-7 | 155％ | 3/6 | 2/6 |
由表5可见，本发明的化合物在人非小细胞肺癌H2228裸鼠异体移植瘤模型上表现出优异的抗肿瘤活性。其中，化合物5(50mg/kg,BID×8)明显抑制人非小细胞肺癌H2228裸小鼠皮下移植瘤的生长，给药至D7时，抑瘤率为182％，4/6肿瘤完全消退；从D8开始停止给药，至实验结束(D14)，抑瘤率为155％，3/6动物肿瘤完全消退，2/6动物肿瘤出现部分消退。
上述结果表明，本发明提供的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药对TRK激酶表现出优异的抑制活性，同时，能够在动物水平上表现出良好的抗肿瘤活性。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药，
其中，在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、卤素、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基；
R5选自由1-6个卤素取代的C1-12的烷基；
R6选自H、C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基和卤素；
R7选自H、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基、氰基取代的C2-12的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-12的环烷基、C2-12的酰基、磺酰基，
且R1、R2、R3、R4和R5中的至少一个基团中含有F原子。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中，在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R5选自由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R6选自H、C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基和卤素；
R7选自H、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基、氰基取代的C2-8的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-10的环烷基、C2-8的酰基、磺酰基；
且R1、R2、R3、R4和R5中的至少一个基团中含有F原子；
优选地，在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-6的烷基、由1-4个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-6的烷基；
R5选自由1-4个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-6的烷基；
R6选自H、C1-6的烷基、羟基取代的C1-6的烷基和卤素；
R7选自H、C1-6的烷基、由1-4个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-6的烷基、羟基取代的C1-6的烷基、氰基取代的C2-6的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-8的环烷基、C2-6的酰基、磺酰基；
且R1、R2、R3、R4和R5中的至少一个基团中含有F原子。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中，在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、卤素、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基；
R5为-CH2CHF2；
R6选自C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基和卤素；
R7选自H、C1-12的烷基、由1-6个卤素取代的C1-12的烷基、羟基取代的C1-12的烷基、氰基取代的C2-12的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-12的环烷基、C2-12的酰基、磺酰基；
优选地，在式(I)中，
R1、R2、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R5为-CH2CHF2；
R6选自C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基和卤素；
R7选自H、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基、氰基取代的C1-8的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-10的环烷基、C2-8的酰基、磺酰基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中，在式(I)中，
R1、R3和R4各自独立地选自H、氟、氯、溴、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基；
R2为H或F；
R5为-CH2CHF2；
R6选自C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基和卤素；
R7选自H、C1-8的烷基、由1-6个选自氟、氯和溴的卤素取代的C1-8的烷基、羟基取代的C1-8的烷基、氰基取代的C2-8的烷基、含有1-3个选自N、O和S的杂原子的C2-10的环烷基、C2-8的酰基、磺酰基。
5.根据权利要求1所述的化合物，其中，所述含氟吡唑并嘧啶化合物为以下化合物中的至少一种，或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药：
化合物1：
化合物2：
化合物3：
化合物4：
化合物5：
化合物6：
化合物7：
化合物8：
化合物9：
化合物10：
化合物11：
化合物12：
化合物13：
化合物14：
化合物15：
化合物16：
化合物17：
6.权利要求1-5中任意一项所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药在制备用于预防和/或治疗TRK激酶受体介导的疾病的药物中的应用。
7.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，以及作为活性成分的权利要求1-5中任意一项所述的具有式(I)所示结构的含氟吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药。
8.权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗TRK激酶受体介导的疾病的药物中的应用。
9.权利要求1-5中任意一项所述的具有式(I)所示结构的吡唑并嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物，或其前药，或者权利要求7所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述肿瘤为乳腺癌、大肠癌、肺癌、甲状腺癌、皮肤癌、骨癌、黑色素瘤、白血病、唾液腺肿瘤、神经内分泌肿瘤、淋巴瘤、脑肿瘤、成神经细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、间皮瘤、食管癌、肺肉瘤、成神经管细胞瘤、成胶质细胞瘤、结肠癌、肝癌、成视网膜细胞瘤、肾癌、膀胱癌、骨肉瘤、胃癌、子宫癌、外阴癌、小肠癌、前列腺癌、胆管癌、输尿管癌、肾上腺皮质癌或头颈部癌症的至少一种。
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