WO2013033981A1 - 一类2,7-萘啶衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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WO2013033981A1
WO2013033981A1 PCT/CN2012/070639 CN2012070639W WO2013033981A1 WO 2013033981 A1 WO2013033981 A1 WO 2013033981A1 CN 2012070639 W CN2012070639 W CN 2012070639W WO 2013033981 A1 WO2013033981 A1 WO 2013033981A1
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WO
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alkyl
compound
hydrogen
group
fluorophenyl
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PCT/CN2012/070639
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English (en)
French (fr)
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黄伟
丛欣
赵兴俄
明志会
叶军
王佳
袁云霞
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江苏先声药物研究有限公司
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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Definitions

  • the present invention relates to the field of biomedicine, in particular to a class of 2,7-naphthyridine derivatives, and to a process for the preparation of such compounds and as a tyrosine kinase inhibitor or a serine-threonine kinase inhibitor application.
  • Background technique
  • Mammalian cells have similar molecular mechanisms that regulate cell proliferation, differentiation, and death throughout the cell cycle. Among them, protein tyrosine kinase and protein serine/threonine kinase play an important role in the signal transduction mechanism of normal cells, and their abnormal expression will lead to the development of many diseases such as tumor, arteriosclerosis, psoriasis and inflammatory reaction. Therefore, regulating the activity of these kinases and restoring physiological balance can be used as a new treatment.
  • the tyrosine kinase family is widely involved in cell signaling in transmembrane receptors (receptor tyrosine kinases, RTKs) or in cytoplasmic forms (non-receptor tyrosine kinases, CTKs).
  • the protein kinase group includes 30 tyrosine kinase families with a total of 90 different protein tyrosine kinases, of which 58 are receptor tyrosine kinases.
  • the known receptor tyrosine kinases cover 20 families, and many are oncogenes (Blume-Jensen P, Nature, 2001, 411:355). Many diseases are associated with the sustained activation of receptor tyrosine kinases caused by this mutation and the misexpression or overexpression of PTKs. Nearly half of known PTKs, such as c-Met, EGFR, ErbB2, Ret, Kit, Src, Abl, PDGFR, VEGF 1/2/3 FGFR1/2/3, are found in the molecular characterization of malignant tumors. Mutation or overexpression.
  • tyrosine kinases are important for physiological autoregulation. Gene mutations/rearrangements can cause abnormal or overexpression of PTKs, leading to disease, and thus can be treated with agonists or antagonists of these enzymes.
  • Non-receptor tyrosine kinases represented by src gene products, in addition to Yes, Fyn, Lck, Fgr, Lyn, Fps/Fes and AM. Except for the latter two, the other non-receptor protein tyrosine kinase Src family is about 60kDa protein, and the other parts are very similar except for the 80 amino acid composition of the N-terminus.
  • the regulatory mechanisms of non-receptor tyrosine kinases (CTKs) vary widely, and they participate in extracellular signal responses by interacting with transmembrane receptors such as hormones, cytokines, and growth factor receptors.
  • Bruton protein tyrosine kinase belongs to the Src family and is a tyrosine kinase necessary for B cell maturation, and Btk mutation causes congenital non-immunoglobulinemia (Cheng G, Et al, Proc Natl Acad Sci USA, 1994, 91:8152; Maas A, et al, J Immunol, 1999, 162:6526).
  • Tyrosine protein kinases also have important physiological roles in the central nervous system, and their dysfunction can lead to the development of corresponding diseases, such as neuronal plaques and neuregulin in patients with Alzheimer disease (AD). 1 (neuregulin-1) is associated with the immunoreactivity of ErbB4 (Ferguson SS, Trends Neurosci, 2003, 26: 119; Chaudhury AR, et al, J Neuropathol Exp Neurol, 2003, 62: 42). Insulin-like growth factors (IGFs) and their regulatory proteins are secreted by the cardiovascular system. Abnormal regulation of these factors leads to the development of coronary atherosclerosis and restenosis, and the role of IGFs is determined by specific membrane receptors.
  • IGFs Insulin-like growth factors
  • IGF receptor type I Mediated by IGF receptor type I with tyrosine kinase activity, smooth muscle cells, inflammatory cells and arterial endothelial cells present in atherosclerotic lesions (Bayes-genis A, et al, Circ Res, 2000, 86 :125; Bayes-genis A, et al, Artherio Thromb and Vascu Biol, 2001, 21 : 335; Che WY, et al, Circ Res, 2002, 90: 1222).
  • Vascular endothelial growth factor and its receptor are expressed in a variety of cells of rheumatoid arthritis and are key factors in the pathological angiogenesis of rheumatoid arthritis (De Bandt M, et al, J Immunol, 2003, 1712 :4853).
  • Jak2 is a cytoplasmic non-receptor tyrosine kinase, and JAK2 mutation causes at least three diseases (Spivak JL, Blood, 2002, 100: 4272; Thiele J, et al, Acta Haematol, 2004, 111: 155) - true Polycythemia (PV), idiopathic myelofibrosis (IMF), essential thrombocythemia (ET), and some other atypical myeloproliferative disorders (MPD).
  • PV Polycythemia
  • IMF idiopathic myelofibrosis
  • ET essential thrombocythemia
  • MPD atypical myeloproliferative disorders
  • Serine-threonine kinases are a large family of kinases that specifically phosphorylate serine and threonine residues of the protein, number: EC 2.7.1.37. Like non-receptor tyrosine kinases, serine-threonine kinases are dominant in cells, although only several serine-threonine-type receptor kinases are present. Serine-threonine kinases are the most common cytosolic kinases, that is, kinases function in the cytoplasmic fraction rather than in the cytoplasmic organelles and cytoskeleton, which in turn affects the internal biochemistry of cells, often as a tyrosine kinase event.
  • Serine-threonine Acid kinases are involved in the signaling process, which initiates DNA synthesis and subsequent mitosis that causes cell proliferation. Furthermore, serine-threonine kinases have been implicated in various types of cancer, such as breast cancer (Cance et al, Int. J. Cancer, 1993, 55, 571) and the like. In summary, both tyrosine kinases and serine-threonine kinases are associated with pathological conditions in the host including cancer.
  • pathological conditions associated with protein kinases include psoriasis, cirrhosis, diabetes, angiogenesis, restenosis, ophthalmologic diseases, rheumatoid arthritis and other inflammatory diseases, immune diseases, cardiovascular diseases such as arteriosclerosis and various kidney diseases.
  • tyrosine kinases and serine-threonine kinases play an important role in the carcinogenic transformation of cells and are directly or indirectly related to tumor production and development, tyrosine kinase inhibitors or serine-sulphide Lysine kinase inhibitors are particularly suitable for the treatment of tumors.
  • Naphthyridine derivatives have a wide range of biological activities and have important applications in the field of medicine.
  • many naphthyridine small molecule compounds have been used as protein kinase inhibitors and are widely used to treat a variety of diseases associated with abnormal kinase activity, such as tumors, psoriasis, cirrhosis, diabetes, angiogenesis, ophthalmic diseases, rheumatoid Arthritis and other inflammatory diseases, immune diseases, cardiovascular diseases such as arteriosclerosis and various kidney diseases.
  • 2,7-naphthyridines (WO0192256, WO0242264), 1,5-naphthyridines (WO2006106046), 1,6-naphthyridines (WO2007060028, WO2010037249 WO2010088177) 2,6-naphthyridines (WO2008122614), heterocyclic fused naphthyridine compounds (WO2009148887 WO2009148916) 2, 7-naphthyridinone compounds (WO2008109613 WO2009097287) 1,8-naphthyridinone compounds (WO2010002779) and the like are all used for tyrosine kinases and / or a serine-threonine kinase inhibitor.
  • 2,7-naphthyridin-1 (2H)-ketones for the treatment of tyrosine kinases and/or serine-threonine kinase inhibitors has not
  • 2,7-naphthyridin-1 (2H)-one having a molecular formula of 146.1, has the following chemical structure.
  • 2,7-naphthyridin-1 (2H)-ketone is an important class of heterocyclic structures, thus providing a 2-pyridone compound and a process for its preparation, and the compound as a tyrosine kinase and/or serine-
  • the use of threonine kinase inhibitors is of great significance. Summary of the invention
  • Another object of the present invention is to provide the use of the above 2,7-naphthyridine derivative as a tyrosine kinase and/or a serine-threonine kinase inhibitor.
  • These compounds have significant inhibitory effects on tyrosine kinase and/or serine-threonine kinase in vitro biochemical level and cell level (P ⁇ 0.05), which can significantly inhibit cancer cell proliferation (P ⁇ 0.05).
  • the growth of living tumors in animals has excellent inhibitory activity.
  • the object of the invention can be achieved by the following measures:
  • the present invention provides a structure such as formula (I, a pharmaceutically acceptable equivalent thereof or salt:
  • X is selected from C or N;
  • X is C, m is selected from 0-4; if X is N, m is selected from 0-3;
  • B is selected from the group consisting of -0-, -NR 7 -, -NR 7 CH 2 -, -S -, -SO-, -S0 2 -, -CR 8 R 9 -;
  • RR 2, R 3, R 4 and R5 are the same or different, are each selected from hydrogen, halo, haloalkyl d- 6 alkyl, d- 6 alkyl, C 3 - 6 cycloalkyl group, containing one or more N a 3- to 9-membered heterocyclic group of a hetero atom of 0 or S, -OR 1Q , -NR 7 R n ; or each of the hydrogen atoms of R ⁇ R 2 , R 3 , R 4 and R 5 is selectively Multiple R 28 substitutions;
  • R 6 is selected from the group consisting of fi, Cl-6 C 3 - 6 ring; ⁇ group, C 3 - 6 heterocyclic ring; ⁇ group, C 2 -6 3 ⁇ 43 ⁇ 4 C 2 - 6 block group, C 6 - K) aryl group,
  • each of the hydrogen atoms in R 6 is optionally substituted with one or more R 29 ;
  • A is selected from the following groups:
  • R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 15 , R 16 , R 17 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 , R 21 , R 22 , R 22 , R 23 , R 24 R 25 , R 26 or R 27 are the same or different and are independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, amino, -OR 1Q , -NR 7 R", -C0 2 R 1Q , -C(0)NR 7 R U , -S0 2 R 10 -S(0) 2 NR 7 R N -NR 7 S(0) 2 R 10 -NR 7 C(0)R 10 -NR 7 C0 2 R 10 -CO(CH 2 ) R R 10 , CONH(CH 2 ) R R 10 -SR 1Q , -SOR 1Q , C R6 alkyl, C 3 - 6 heterocyclenyl, C 3 -6 cycloalkenyl, C 2 - 6 alkenyl, C 2 - 6
  • R 7 , R 8 , R 9 , R 10 and R 11 are the same or different and are each selected from the group consisting of hydrogen, d- 6 alkyl, d- 6 alkoxy substituted d- 6 fluorenyl, containing 1 or more N a 3- to 9-membered heterocyclic group substituted with a heterocyclic atom of 0 or S, - 6 alkyl;
  • R 28 , R 29 and R 3Q are the same or different and are each selected from the group consisting of halogen, halogenated d- 6 alkyl, d- 6 alkyl, d- 6 alkoxycarbonyl, -N0 2 , -OR 1Q , -NR 7 R U , a 3- to 9-membered heterocyclic group containing 1 or more heteroatoms of N, 0 or S, a halogen-substituted or unsubstituted C 6 -K) aryl group or a 5 to 10 membered heteroaryl group;
  • G is selected from S or NH; D is selected from N or CH; and Z is selected from N or CH.
  • Alkyl represents an unsubstituted or substituted straight or branched chain saturated hydrocarbon group.
  • a straight or branched chain group of 1 to 20 carbon atoms is included.
  • the substituent is preferably one or more The groups each selected from the group consisting of: halogen, halogenated d- 6 alkyl, d- 6 alkyl, d- 6 alkoxycarbonyl, -N0 2 , -OR 1Q ,
  • -NR 7 R a 3- to 9-membered heterocyclic group containing 1 or more hetero atoms of N, 0 or S, a halogen-substituted or unsubstituted C 6 - 10 aryl group or a 5- to 10-membered heteroaryl group.
  • Cycloalkyl represents a monocyclic or fused ring which is all carbon.
  • Examples of cycloalkyl groups are cyclopropane, cyclobutane, cyclopentane, cyclopentene, cyclohexane, adamantane, cyclohexadiene, cycloheptane, and cycloheptatriene.
  • C 3 - 6 cycloalkyl is unsubstituted or substituted, typically by one or more, more preferably 1-3, most preferably 1 or 2 substituents selected from halo, d- 6 alkyl, d- 6 Alkoxycarbonyl, -OR ⁇ -Nl ⁇ R ⁇ a 3- to 9-membered heterocyclic group containing one or more heteroatoms of N, 0 or S, a halogen-substituted or unsubstituted C 6 _ 1Q aryl group or 5 to Substituent substitution of a 10-membered heteroaryl group.
  • Heterocyclyl means a monocyclic or fused ring containing one or more heteroatoms of N, 0 or S. Typically a 3 to 9 membered heterocyclic group containing one or more heteroatoms of N, 0 or S, such as tetrahydropyranyl, 2,2-dimethyl-1,3-dioxolane, Piperidino, N-methylpiperidin-3-yl, piperazino, N-methylpyrrolidin-3-yl, pyrrolidinyl, morpholino, thiomorpholino, thio Morpholino-1-oxide, thiomorpholino-1,1-dioxide, 4-ethoxycarbonylpiperazino, 3-oxopiperazino, 2-imidazolidinone, 2- Pyrrolidone, tetrahydropyrimidin-2-one and derivatives thereof.
  • the heterocyclic group may be one or more, more preferably 1-3, most preferably 1 or 2 selected from the group consisting of halogen, d- 6 alkyl, d- 6 alkoxycarbonyl, -OR 1Q , -NR 7 R", a substituent of a 3- to 9-membered heterocyclic group containing 1 or more heteroatoms of N, 0 or S, a halogen-substituted or unsubstituted C 6 - 1Q aryl group or a 5- to 10-membered heteroaryl group .
  • Piperazinolide refers to a group having the following chemical structure.
  • Morpholino group refers to a group having the following chemical structure ⁇
  • Piperidino group refers to a group having the following chemical structure ⁇
  • Pyrrolidinyl refers to a group having the following chemical structure.
  • the alkenyl group is an unsubstituted or substituted linear or branched hydrocarbon group having one or more double bonds.
  • a c 2 -8 alkenyl group such as a c 2 - 6 alkenyl group, such as an allyl, butenyl, butadienyl, pentenyl or hexenyl group, when the alkenyl group is substituted, typically One or more, more preferably 1-3, most preferably 1 or 2 selected from the group consisting of Cr6 alkyl, Cr6 alkoxycarbonyl, -OR 1Q , -NR 7 R", containing one or more N, Substituent of a 3- to 9-membered heterocyclic group of a hetero atom of 0 or S, a halogen-substituted or unsubstituted C 6 - 1Q aryl group or a 5- to 10-membered heteroaryl group.
  • the block group is an unsubstituted or substituted linear or branched hydrocarbon group having one or more triple bonds.
  • it is a C 2 -8 block group, preferably a C 2 - 6 block group, such as an ethyl group, a propyl group, a butyl group, and when the block is substituted, it is typically one or more, more preferably 1 -3, most preferably 1 or 2 selected from d- 6 alkyl, d- 6 alkoxycarbonyl, -OR 1Q , -NR 7 R", heteroatoms containing 1 or more N, 0 or S Substituent substitution of a 3- to 9-membered heterocyclic group, a halogen-substituted or unsubstituted C 6 - 1Q aryl group or a 5- to 10-membered heteroaryl group.
  • Aryl represents an all-carbon monocyclic or fused polycyclic group of 6 to 12 carbon atoms having a fully conjugated pi-electron system. Typically phenyl, naphthyl, biphenyl, anthracenyl, indanyl, 1,2-dihydronaphthyl, 1,2,3,4-tetrahydronaphthyl.
  • the aryl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent is preferably one or more, more preferably one, two or three, and still more preferably one or two selected from halogen, halogenated.
  • Heteroaryl denotes a monocyclic or fused ring group of 5 to 12 ring atoms, containing one, two, three or four ring heteroatoms selected from N, 0 or S, the remaining ring atoms being C, in addition A fully conjugated ⁇ -electron system.
  • Non-limiting examples of unsubstituted heteroaryl groups are: pyrrole, furan, thiophene, imidazole, oxazole, thiazole, pyrazole, pyrimidine, pyridine, quinoline, isoquinoline, quinazoline, thienopyridine, thieno Pyrimidine, pyrrolopyridine, hydrazine, tetrazole, triazine and carbazole.
  • the heteroaryl group may be substituted or unsubstituted, and when substituted, the substituent is preferably one or more groups each selected from the group consisting of hydrogen, halogen, amino, -OR 1Q , -NR 7 R U -C0 2 R 1Q , -C(0)NR 7 R n -S0 2 R 1Q , -S(0) 2 NR 7 R n -NR 7 S(O) 2 R 10 , -NR 7 C(O) R 10 , -NR 7 CO 2 R 10 , -CO(CH 2 ) r R 10 , -CONH(CH 2 ) r R 10 , -SR 10 , -SOR 10 , d- 6 alkyl, C 3 - 6 Cycloalkenyl, C 3 -6 cycloalkenyl, C 2 - 6 alkenyl, C 2 - 6 block, C 6 - 1Q aryl, 5 to 10 membered heteroaryl; r is 0-4.
  • the cycloalkenyl group is an unsubstituted or substituted monocyclic or fused ring group having one or more double bonds.
  • C 3 -6 cycloalkenyl, such as cyclopropenyl, cyclobutenyl, cyclopentenyl or cyclohexenyl, when the alkenyl group is substituted typically one or more, more preferably 1-3 Most preferably, one or two substituents selected from the group consisting of d- 6 alkyl, d- 6 alkoxycarbonyl are substituted.
  • the d- 6 alkoxy group is straight or branched.
  • d- 4 alkoxy such as methoxy, ethoxy, propoxy, isopropoxy, n-propoxy, n-butoxy, isobutoxy or tert-butoxy
  • d- 6 alkoxy is unsubstituted or substituted, typically one or more, more preferably 1-3, most preferably 1 or 2 selected from d- 6 alkyl, d- 6 alkoxy, - NR 7 R", substituted with a substituent of a 3- to 9-membered heterocyclic group containing one or more heteroatoms of N, 0 or S.
  • Halogen or halogen groups are fluorine, chlorine, bromine or iodine. Preferred are fluorine, chlorine, and bromine.
  • the d- 6 alkyl group substituted by halogen means an alkyl group in which one or more hydrogens are replaced by halogen, and preferably contains one, two or three halogen groups. A preferred embodiment of such a group is trifluoromethyl.
  • Amino means a -NH 2 group.
  • “Pharmaceutically acceptable salt” means those salts which retain the biological effectiveness and properties of the parent compound. Such salts include:
  • salt formation with an acid obtained by the reaction of a free base of a parent compound with an inorganic or organic acid, such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, phosphoric acid, metaphosphoric acid, sulfuric acid, sulfurous acid, perchloric acid, etc.
  • an inorganic or organic acid such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, phosphoric acid, metaphosphoric acid, sulfuric acid, sulfurous acid, perchloric acid, etc.
  • organic acids including acetic acid, propionic acid, acrylic acid, oxalic acid, (D) or (L) malic acid, fumaric acid, maleic acid, hydroxybenzoic acid, ⁇ -hydroxybutyric acid, methoxybenzoic acid, phthalic acid
  • malic acid fumaric acid, maleic acid, hydroxybenzoic acid, ⁇ -hydroxybutyric acid, methoxybenzoic acid, phthalic acid
  • an organic base such as ethanolamine, diethanolamine, or the like.
  • substituted by one or more groups means that one, two, three or four hydrogen atoms in a given atom or group are each selected from a specified range of groups. Replace the same or different groups.
  • the present invention provides a structure wherein the compound represented by the formula (I) is selected from the group consisting of -0, -S -, -CH 2 - or
  • X is selected from C.
  • the present invention provides a structure wherein, in the compound of the formula (I), m is selected from 0 or 1; n is selected from 0 or 1; and p is selected from 0 or 1.
  • R 1 is selected from hydrogen or halogen.
  • R 2 or R 3 are each selected from hydrogen.
  • R 4 is selected from the group consisting of hydrogen, d- 6 alkyl or halogen. Prime.
  • R 5 is selected from hydrogen, C r6 alkyl, haloalkyl d- 6 alkyl, -NR 7 R "substituted d- 6 alkyl, containing one or more N, 3-9 membered heterocyclyl 0 or S heteroatom substituted C r6 alkyl; more preferably hydrogen, methyl, halo-C r6 alkyl, -CH 2 NMe 2 , -CH 2 NEt 2 or morpholinyl substituted methylene.
  • A may be selected from substituted pyridine or quinoline, quinazoline, thienopyridine, thienopyrimidine, pyrazolopyridine, pyridyl Pyrazinopyridine;
  • the present invention provides a compound of the formula (I) wherein A is an aminopyridine and an alkoxy-substituted quinazoline.
  • the present invention provides a structure wherein the compound of the formula (I) is selected from the group consisting of:
  • R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 15 , R 17 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 , R 21 , R 22 , R 22 , R 26 or R 27 may be further independently selected from hydrogen, halo, amino, C r6 alkyl, -C0 2 R 1Q, -OR 1Q , 5 to 10-membered heteroaryl group, d- 6 alkyl substituted 5-10 membered heteroaryl, C 3 - 6 heterocycloalkenyl, d- 6 alkoxycarbonyl-substituted C 3 - 6 heterocycloalkenyl; wherein R 1Q as defined above, may be further selected from hydrogen, C r6 An alkyl group, a Cr6 alkoxy-substituted d- 6 alkyl group, a 3-9 membered heterocyclic group substituted with one or more N, 0 or S hetero atoms, a d- 6 al
  • A may be selected from the group consisting of:
  • the present invention provides a structure of the compound of formula (I), R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 15 , R 17 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 , R 21 , R 22 , R 22 , R 26 or R 27 are the same or different and may be independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, amino, hydroxy, d- 6 alkyl, C 2 -6 alkoxycarbonyl, d 6 alkyl Oxyl, d- 6 alkoxy substituted Cr6 alkoxy, morpholinyl substituted- 6 alkoxy, imidazolyl, d- 6 alkyl substituted imidazolyl, tetrahydropyridyl, d- 6 alkoxycarbonyl of Tetrahydropyridyl.
  • the present invention provides a structure of the compound of formula (I), R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 15 , R 17 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 , R 21 , R 22 , R 22 , R 26 or R 27 are the same or different and may be independently selected from hydrogen, halogen,
  • the present invention provides a compound represented by the formula (I) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and as a preferred structure, the structure can be as shown in the formula (II):
  • A is preferably selected from the following groups: And wherein each group is as defined above for formula (I).
  • X is selected from C and B is selected from -0-.
  • the present invention provides a compound represented by the formula (A) or a pharmaceutically acceptable salt thereof, and more typically, the structure may be as shown in the formula (III):
  • R 2 and R 3 are selected from hydrogen
  • R 5 is selected from the group consisting of hydrogen, methyl, halo fluorenyl, -CH 2 NMe 2 , -CH 2 NEt 2 or 0" ⁇
  • R 12 , R 13 , R 14 , R 15 , R 15 ', R 17 , R 17 , R 18 , R 19 , R 20 , R 21 , R 22 , R 22 , R 26 or R 27 are the same or different , independently selected from the group consisting of hydrogen, halogen, amino, hydroxy, C 1-6 alkyl, -COOEt, -OCH 3 , -0(CH 2 ) 2 OCH 3 , Specific examples of the naphthyridine compounds of the formulas ⁇ ), ( ⁇ ) and ⁇ ) include those listed in the following table:
  • the present invention also provides a compound of the formula (IV) or a pharmaceutically acceptable salt thereof,
  • R 5 ' is selected from the group consisting of hydrogen, d- 6 alkyl, halo d- 6 alkyl, -NR 7 'R"' substituted d- 6 alkyl, 3 or more heteroatoms containing 0 or S To a 9-membered heterocyclic substituted d- 6 alkyl group.
  • R 7 ' or R 11 ' are the same or different and are independently selected from hydrogen or d- 6 alkyl.
  • the compound of formula (IV) can be used as an intermediate of the compound of formula (I).
  • the present invention provides a compound represented by the formula (IV), specifically:
  • Another aspect of the invention relates to a process for the preparation of a compound of the intermediate (IV), characterized in that it
  • Compound d is a compound of formula (IV) obtained by the action of a chlorinating reagent, and the chlorinating reagent is phosphorus oxychloride or dichlorosulfoxide;
  • R 4 ' is selected from hydrogen
  • R 5 ' is selected from hydrogen, d- 6 alkyl or halogenated d- 6 alkyl
  • R 31 ' is selected from hydrogen or halogen.
  • Process A 2-oxo-1,2-dihydropyridine compound a and iodobenzene compound are subjected to a coupling reaction to obtain compound b.
  • a preferred embodiment is: 2-oxo-1,2 - dihydropyridine compound a and iodobenzene compound e in solvent 1,4-dioxane or ethylene glycol dimethyl ether, preferably 1,4-dioxane, in cuprous iodide, N , ⁇ 1 -dimethylethylenediamine, potassium phosphate, reacted at 90 ⁇ 120 °C for 3 to 12 hours to obtain compound b, or
  • the acid is selected from the group consisting of concentrated sulfuric acid, acetic acid or hydrochloric acid, preferably It is concentrated sulfuric acid.
  • the naphthyridinone compound d is in the chlorinating reagent phosphorus oxychloride or thionyl chloride, preferably phosphorus oxychloride; the reaction temperature is generally 90 to 120 ° C, preferably 110 to 120 ° C; The reaction time is 2 to 6 hours, preferably 2 to 4 hours, to obtain a compound of the formula (IV).
  • the invention further relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as an active ingredient, a therapeutically effective amount of the compound of formula (I) in free form or in a pharmaceutically acceptable salt form; one or more pharmaceutically acceptable carrier materials and/or diluents.
  • the compound of the formula (I) of the present invention and a pharmaceutically acceptable carrier, excipient or diluent may also be included.
  • the invention further relates to a combined pharmaceutical composition
  • a combined pharmaceutical composition comprising an effective amount of a compound of formula (I) in free form or in a pharmaceutically acceptable salt form; one or more pharmaceutically acceptable carrier materials and/or diluents.
  • “Pharmaceutical composition” means mixing one or more of the compounds of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt, solvate, hydrate or prodrug thereof with another chemical component, such as a pharmaceutically acceptable carrier. . Purpose of the pharmaceutical composition It is a process that promotes administration to an animal.
  • “Pharmaceutically acceptable carrier” refers to an inactive ingredient in a pharmaceutical composition that does not cause significant irritation to the organism and does not interfere with the biological activity and properties of the administered compound, such as, but not limited to, calcium carbonate, calcium phosphate, various Sugar (eg lactose, mannitol, etc.), starch, cyclodextrin, magnesium stearate, cellulose, magnesium carbonate, acrylic polymer or methacrylic acid polymer, gel, water, polyethylene glycol, propylene glycol, B Glycol, castor oil or hydrogenated castor oil or polyethoxylated hydrogenated castor oil, sesame oil, corn oil, peanut oil, and the like.
  • the aforementioned pharmaceutical composition may include, in addition to a pharmaceutically acceptable carrier, an adjuvant which is commonly used in medicine, for example, an antibacterial agent, an antifungal agent, an antimicrobial agent, a shelf life agent, and a tone.
  • an adjuvant which is commonly used in medicine, for example, an antibacterial agent, an antifungal agent, an antimicrobial agent, a shelf life agent, and a tone.
  • the fused heterocyclic derivative and pharmaceutical composition represented by the formula (I) according to the present invention can be applied to the preparation of a medicament for treating a disease mediated by a protein kinase. It is characterized in that the protein kinase comprises c-Met, KDR or c-kit.
  • the protein kinase-associated disease is selected from the group consisting of a receptor tyrosine kinase-related disease, a non-receptor tyrosine kinase-related disease, or a serine-threonine kinase-related disease.
  • the protein kinase-associated disease is selected from the group consisting of a hepatocyte growth factor, a vascular endothelial growth factor receptor-associated disease, a stem cell factor receptor-associated disease, an epidermal growth factor receptor-associated disease, and a platelet-derived growth factor receptor-associated disease.
  • Disease insulin-like growth factor receptor-associated disease or fetal liver kinase-associated disease.
  • the protein kinase-related disease is selected from the group consisting of diabetes, hyperproliferative diseases, angiogenesis, inflammatory diseases, immune diseases, or cardiovascular diseases.
  • the protein kinase-related disease is selected from the group consisting of colorectal cancer, bladder cancer, breast cancer, liver cancer, lung cancer, pancreatic cancer, gastrointestinal cancer, leukemia, ovarian cancer, head and neck cancer, prostate cancer , kidney cancer, nasopharyngeal carcinoma, glioblastoma, squamous cell carcinoma, astrocytoma, Kaposi's sarcoma, melanoma, glioma, genitourinary tract cancer or myeloproliferative disorder.
  • biochemical level enzyme activity assays To test the level of action of the compounds provided by the present invention on protein kinases, biochemical level enzyme activity assays, cell level enzyme activity assays, inhibition of tumor cell proliferation activity assays are used to determine the activity of various compounds of the invention on one or more PKs. And the level of action. Similar experiments can be designed in the same manner for any kinase using methods well known in the art.
  • HTRF High-Resolved Fluorescence
  • FRET fluorescence resonance energy transfer
  • TR time-resolved
  • the FRET signal could not be formed, and the tyrosine kinases such as c-Met, Flt-3, VEGFR-2, PDGFR, and c-Kit were determined at different concentrations by measuring the difference in fluorescence signals at 665 nm and 620 nm. Inhibition activity.
  • the activity of the compounds of the present invention against the biochemical levels of the above tyrosine kinases can be determined by this method, and similar assays can be used for other protein kinases using methods well known in the art.
  • an enzyme-linked immunosorbent assay can be used to test and determine the presence of tyrosine kinase activity.
  • the ELISA can be carried out according to known methods, for example, Voller et al., 1980, "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay", see “Handbook of Clinical Immunology” by Rose and Friedman.
  • Tyrosine kinases such as c-Met, Flt-3, VEGFR-2, PDGFR-P, and c-Kit catalyze the phosphorylation of ATP with a biotin-labeled substrate peptide, and inhibition of enzyme activity will inhibit this reaction.
  • the anti-Met antibody is coated on a solid phase carrier to capture the total protein of Met in the cell lysate; then the phosphorylated part of the Met protein is labeled with an anti-tyrosine phosphorylation antibody; Horseradish peroxidase (HRP)-labeled antibody was conjugated to an anti-tyrosine phosphorylated antibody; finally, HRP substrate TMB was added for color development.
  • HRP horseradish peroxidase
  • the level of Met receptor autophosphorylation in the cells was measured by measuring the absorbance at the absorption wavelength of 450 nM, thereby determining the test substance at different concentrations for c-Met, Flt-3, VEGFR-2, PDGFR- ⁇ , c-Kit
  • the inhibitory activity of tyrosine kinases can be determined by this method, and similar assays can be used for other protein kinases by methods well known in the art.
  • the assay was conventionally carried out using a tetrazolium bromide (MTT) method.
  • TMT tetrazolium bromide
  • the succinate dehydrogenase in the mitochondria of the living cells enables exogenous yellow 3-(4,5-dimethylthiazole-2)-2,5-diphenyltetrazolium bromide
  • MMTT poorly soluble blue-violet crystal formazan
  • DMSO dimethyl sulfoxide
  • the enzyme-linked immunosorbent assay measures the absorbance at 570 nm, which indirectly reflects the number of viable cells. Therefore, the amount of formazan production is usually proportional to the number of living cells, and the number of living cells can be estimated based on the OD value to understand the ability of the drug to inhibit or kill cells.
  • the assay method can be used to determine the ability of different compounds of the invention to inhibit proliferation of one or more cancer cells, using the art A well-known method can use similar assays for any cancer cell.
  • the compound prepared by the invention has the structure of the compound represented by the formula (I), which has a good inhibitory effect on various kinase activities, and the half-inhibitory concentration (IC 5 ) of the kinases such as c-Met, KDR and c-kit is generally 10- 7 mol / L or less.
  • the compound (I) prepared in the configuration of the embodiment of the present invention having the formula inhibit the proliferation of many tumor cells, wherein the compound inhibits tumor cell proliferation most remarkable effect, in which IC 5Q 10- 5 mol / L the following. It is thus inferred that the compound of the present invention having the structure of the formula (I) can be applied to the preparation of a medicament for treating a protein kinase-related disease in an organism.
  • a 2-oxo-1,2-dihydropyridine compound a and an iodobenzene compound can be obtained by a coupling reaction, or a 2-oxo-1,2-dihydropyridine compound can be used.
  • a benzyl bromide or benzyl chloride compound is obtained by nucleophilic substitution reaction under the action of an inorganic base, or acetamide compound e and diketone compound f in an alcohol solvent, preferably ethanol, under the action of piperidine
  • the reaction temperature is 60-80 ° C, and the reaction time is 3-6 hours; the compound b is introduced into the alkenyl group under the action of DMF-DMA to obtain the compound c, and then the ring is closed under concentrated sulfuric acid to obtain the intermediate d, the intermediate d
  • the chlorination of phosphorus oxychloride is continued to give the compound of the formula (IV).
  • Method A The base fragment (V) is reacted with a chloroheterocyclic ring (VI) in the presence of a base B in the solvent Si, a catalyst C, and a ligand L to form a compound (1) at a temperature of ⁇ , or
  • Process B The base fragment (V) is reacted with a chloroheterocyclic ring (VI) in the presence of an acid in a solvent S 2 at a temperature T 2 to give a compound (1).
  • ⁇ , ⁇ , X, R ⁇ R 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and m are as defined above.
  • the production method A wherein, during preparation, the solvent 81 is selected from ether solvents such as 1,4-dioxo Hexacyclohexane, ethylene glycol dimethyl ether, preferably 1,4-dioxane;
  • the base B is selected from inorganic bases such as sodium hydroxide, sodium hydride, sodium t-butoxide, potassium t-butoxide, preferably Is sodium t-butoxide and potassium t-butoxide;
  • the catalyst C may be palladium acetate, tetrakistriphenylphosphine palladium, dichlorotriphenylphosphine palladium, tris(dibenzylideneacetone) dipalladium, preferably Tris(dibenzylideneacetone)dipalladium;
  • ligand L is a phosphine ligand, preferably 1,2-bis(diphenylphosphino)propane, 4,5
  • the invention further relates to a process for the preparation of the formula (I), characterized in that the phenolic segment (VIII) is reacted with a halogenated heterocyclic ring (VII) in the presence of acid A 2 in the solvent S 3 at a temperature T 3
  • the compound (1) is produced, and the specific embodiment is as follows:
  • A, X, RR 2 , R 3 , R 4 , R 5 , R 6 and m are as defined above, and B is preferably -0-.
  • the solvent S 3 is selected from a protic solvent, preferably isopropanol, ethanol, methanol;
  • the acid A 2 is selected from the group consisting of inorganic acids, including hydrochloric acid, sulfuric acid, phosphoric acid, etc., organically
  • the acid compound includes p-toluenesulfonic acid, acetic acid, etc.; and the temperature T 3 is 60-110 ° C, preferably 85-95 ° C. detailed description
  • the invention discloses a compound, a preparation method thereof, an intermediate of the compound and a preparation method thereof, and the use thereof as a tyrosine kinase and/or a serine-threonine kinase inhibitor, and those skilled in the art can Use this article to improve the implementation of process parameters. It is to be understood that all such alternatives and modifications are obvious to those skilled in the art and are considered to be included in the present invention.
  • the method and the application of the present invention have been described by the preferred embodiments, and it is obvious that the method and application described herein may be modified or appropriately modified and combined without departing from the scope of the present invention. The technique of the present invention is applied.
  • Triethylamine (160.9 mg, 1.5 eq) was added to a solution of 3,4-dichloropicolinamide (300 mg, 1 eq) in ethyl acetate (18 mL), and stirred for 5 min. Trifluoroacetic anhydride (333.9 mg, 1.5 eq), the reaction was continued for 2 hours in an ice bath. The reaction was completed and the reaction was completed.
  • the preparation method is the same as that in Example 4, 8-(4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluorobenzyl) Synthesis of -2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-
  • the fluoroaniline was changed to 3-fluoro-4-(thieno[3,2-b]pyridin-7-yloxy)aniline, and the reaction time was 16.5 hours.
  • the preparation method is the same as in Example 3, 4-(4-((7-benzyl-8-oxo-7,8-dihydro-2,7-naphthyridin-1-yl)amino)-2-fluorobenzene)- Synthesis of 3-chloro-2-aminopyridine, except that 2-benzyl-8-chloro-2,7-naphthyridin-1(2H)-one was changed to 8-chloro-2-(4-fluorobenzyl) Base) -2,7-naphthyridin-1(2H)-one.
  • MS: [M+H]+ 506.0.
  • the preparation method is the same as that in the first embodiment of 2-mercapto-8-((4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2 Synthesis of 7-naphthyridin-1(2 ⁇ )-one, except that 2-benzyl-8-chloro-2,7-naphthyridin-1(2 ⁇ )-one was changed to 8-chloro-2- (4-Fluorophenyl)-2,7-naphthyridin-1(2H)-one.
  • MS: [M+H] + 553.9.
  • the preparation method is the same as that in Example 11 8-((3-fluoro-4-((7-methoxy-6-(3-morpholinepropoxy)quinazolin-4-yl)oxy)phenyl) Synthesis of amino)-2-(4-fluorophenyl)-2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 3-fluoro-4-((7-methoxy-6-) (3-morpholinepropoxy)quinazolin-4-yl)oxy)aniline to 4-(6,7-bis(2-methoxyethoxy)quinazolin-4-yl)oxy ) 3-fluoroaniline, reaction time is 6 hours.
  • MS: [M+H] + 642.2.
  • the preparation method is the same as that in Example 9 8-(4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluorobenzene) Synthesis of -2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3- The fluoroaniline was changed to 4-((6,7-dimethoxyquinolin-4-yl)oxy)-3-fluoroaniline.
  • the preparation method is the same as that in Example 11 8-((3-fluoro-4-((7-methoxy-6-(3-morpholinepropoxy)quinazolin-4-yl)oxy)phenyl) Amino)-2-(4-fluorophenyl)-2,7-naphthyridin-1(2H)-one, the difference being that 3-fluoro-4-((7-methoxy-6-(3) -morpholinepropoxy)quinazolin-4-yl)oxy)aniline was changed to 3-fluoro-4-((7-methoxyquinolin-4-yl)oxy)aniline.
  • MS: [M+H] + 522.9.
  • the preparation method is the same as that in Example 17 8-((3-fluoro-4-(thieno[3,2-b]pyridin-7-yloxy)phenyl)amino)-2-(4-fluorophenyl)- Synthesis of 2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 3-fluoro-4-(thieno[3,2-b]pyridin-7-yloxy)benzene
  • the amine was changed to ethyl 7-(2-fluoro-4-aminophenoxy)thieno[3,2-b]pyridine-2-carboxylate.
  • the reaction time was 4.5 hours.
  • the preparation method is the same as that in Example 17 8-((3-fluoro-4-(thieno[3,2-b]pyridin-7-yloxy)phenyl)amino)-2-(4-fluorophenyl)- Synthesis of 2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 3-fluoro-4-(thieno[3,2-b]pyridine-7-oxy)aniline was changed to 4-( (2-(l-Ethyl-lH-imidazol-4-yl)thieno[3,2-b]pyridin-7-yl)oxy)-3-fluoroaniline.
  • Preparation methods include:
  • the preparation method is the same as in Example 28, 8-((4-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluoro Synthesis of benzyl)-3-methyl-2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl) The oxy)-3-fluoroaniline was changed to 3-fluoro-4-((6-methoxy-7-(3-morpholinepropoxy)quinolin-4-yl)oxy)aniline.
  • the preparation method is the same as in Example 28, 8-((4-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluoro Synthesis of benzyl)-3-methyl-2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl) The oxy)-3-fluoroaniline was changed to 3-fluoro-4-((6-methoxy-7-(2-methoxyethoxy)quinazolin-4-yl)oxy)aniline.
  • MS: [M+H] + 612.2.
  • the preparation method is the same as in Example 28, 8-((4-(6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluoro Synthesis of benzyl)-3-methyl-2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 4-((6,7-dimethoxyquinazolin-4-yl) The oxy)-3-fluoroaniline was changed to 4-((6,7-dimethoxyquinolin-4-yl)oxy)-3-fluoroaniline.
  • the preparation method is the same as in Example 21, 8-((4-((2-amino-3-chloropyridin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluorophenyl) -2,7-naphthyridin-1(2H)-one synthesis, except that 8-chloro-2-(4-fluorophenyl)-2,7-naphthyridin-1(2H)-one was changed It is 8-chloro-2-(4-fluorophenyl)-3-methyl--2,7-naphthyridin-1(2H)-one.
  • the preparation method is the same as in Example 22, 8-((4-((2,3-diaminopyridin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluorophenyl)- Synthesis of 2,7-naphthyridin-1(2H)-one, except that 8-chloro-2-(4-fluorophenyl)-2,7-naphthyridin-1(2H)-one was changed to 8 -Chloro-2-(4-fluorophenyl)-3-methyl--2,7-naphthyridin-1(2H)-one.
  • the preparation method is the same as in Example 26, 8-((4-((2-amino-3-iodopyridin-4-yl)oxy)-3-fluorophenyl)amino)-2-(4-fluorophenyl) -2,7-naphthyridin-1(2H)-one synthesis, except that 8-chloro-2-(4-fluorophenyl)-2,7-naphthyridin-1(2H)-one was changed It is 8-chloro-2-(4-fluorophenyl)-3-methyl--2,7-naphthyridin-1(2H)-one.
  • MS: [M+H] + 598.0.
  • Electromagnetic stirring external temperature 90 ° C for 4 hours, solid precipitation, filtration, washing 4-bromo-8-((3-fluoro-4-hydroxyphenyl)amino)-2-(4-fluorophenyl)-3-methyl-2,7-naphthyridin-1(2H)-one 2.7 g).
  • the selected positive BMS777607 structure is as follows:
  • test compound was formulated into a mother liquor of 0.5-10 mmol/L in DMSO, and stored at -20 ° C after dispensing;
  • Enzymatic buffer Dilute 5xEnzymatic buffer from HTRF kit to 1.33x with deionized water and add the appropriate concentration of 1.33x final concentration: 1.33 mmol/L DTT and B 1.33 mmol/L MgC12;
  • Preparation of the kinase working solution Dilute Met to 2x with a 1.33x Enzymatic buffer to a final concentration of 0.2 ⁇ .
  • Preparation of the substrate working solution Dilute the substance-biotin (derived from HTRF kit) and ATP (10 mM) to 1.33x Enzymatic buffer 4x of the desired final concentration of the mixture;
  • test solutions Dilute 16.67 ⁇ /L of Streptavidin-XL665 to a desired final concentration of 4x using HTRF detection buffer, then mix with an equal volume of Antibody-Cryptate (both from the HTRF kit).
  • Enzyme reaction step Add 4 ⁇ L of ⁇ l of kinase working solution to each well of a low volume 384 microplate, and add 4 ⁇ L of 1.33x Enzymatic buffer as a negative control; add 2 ⁇ of the compound working solution to the well while simultaneously Add 2 8% aqueous DMSO solution as a zero compound concentration control (ie positive control, Positive); incubate at 5 (10 °C) for 5 -10 min; add 2 substrate working solution to the well to start the enzyme reaction at 25 ° C (or 30 ° C) shaking reaction for 15-60 min.
  • HTRF reagent detection step adding 8 ⁇ of detection working solution to the well to terminate the reaction; 25 ° C reaction for 1 h;
  • Reading of HTRF signal Using PHERAstar FS reading detection signal, the instrument is set as follows:
  • the ratio 665 nm / 620 nm
  • the present invention provides a half-inhibitory concentration (IC 5Q ) of a compound of formula I for c-Met kinase activity as shown in Table 1: Table 1 Half-inhibitory concentration of compound on c-Met kinase activity (IC 5() )
  • Bu represents a IC 50 ⁇ 500nM; represents the range of IC 50 of 500-5000nM; + represents the range of IC 50 of 5000 ⁇ -50 ⁇ ; - indicates no
  • Human gastric adenocarcinoma cell line MK-45 was obtained from Shanghai Cell Bank of Chinese Academy of Sciences; 1640 medium (GIBCO); fetal bovine serum (GIBCO); 24-well cell culture plate (Costar); 96 wells Color transparent high affinity microtiter plate (Costar); HGF (R&D System); cell lysate (Biyuntian); c-Met capture antibody (R&D System); Anti-phosphotyrosine antibody, clone 4G10 (Upstate) ; HRP labeled goat-anti-mouse antibody; TMB (Pierce); enzyme labeling detector (Tecan, Infinite M200); multi-function washing machine (Bio-Rad) Compound configuration: The positive drug and each test compound were formulated into 10 mM mother liquor in DMSO and stored at -20 °C.
  • Met antibody coating Dilute c-Met antibody to 2 g/mL, add 100 ⁇ M per well to the plate, and coat overnight at 4 °C (16-18 h) o PBST (PBS I 0.05% Tween20, pH 7.4) Wash 3 times; add blocking solution (5 % BSA I PBS) 200 ⁇ l per well, block for 2 h at 37 °C; wash 3 times with PBST; grab c-Met protein: inoculate in 24-well cell culture plate 80 to 90% confluency of MK-45 cells, 8-10 h cells adherent, replace serum-free 1640 medium, starved overnight; compound diluted with serum-free 1640 medium; aspirate 24-well plate medium , quickly add 180 ⁇ 7-well compound concentration gradient dilution, and incubate the cells of the compound in the incubator for 1 h; configure HGF into 800 ng/mL solution in serum-free 1640 medium, and add per well in 24-well plate.
  • Detection of Phosphotyrosine Primary antibody incubation: 100 ⁇ of mouse anti-phosphotyrosine antibody per well, Clone 4G10 (0.5% BSA/PBS (W/V) 1:2000 dilution), shaking at 1-100 h at 37 °C 100 rpm Wash PBST 3 times; secondary antibody incubation: add 100 ⁇ HRP goat anti mouse IgG per well (0.5 % BSA/PBS (W/V) 1: 3000-fold dilution), shake at 37 ° ⁇ 100 ⁇ ⁇ 1 1 11; 6 times washing with PBST; color development of TMB substrate: ⁇ TMB substrate per well, dark room at room temperature for 2-10 min ; 50 ⁇ L of 2M H 2 S0 4 per well after substrate to appropriate color; 450 nm absorption by microplate reader The absorbance is measured at the wavelength.
  • Negative control group SCP-1 with high concentration of 10-5mol/L was added without stimulation with HGF.
  • Positive control group no drug was added, only HGF stimulation was used.
  • Inhibition rate % (1 - negative control OD value - no enzyme control well OD) xl 00 %
  • RPMI 1640 medium (RPMI 1640 + 12% calf serum + HEPES 3.5 g / L + NaHC0 3 2.2 g / L + penicillin 0.13 g / L + streptomycin 0.15 g / L);
  • RPMI 1640 medium RPMI 1640 + 12% fetal bovine serum + HEPES 3.5g / L + NaHCOa 3 2.2g / L + penicillin 0.13g / L + streptomycin 0.15g / L;
  • High glucose DMEM medium (DMEM + 10% calf serum + HEPES 3.5g / L + NaHC0 3 2.2g / L + penicillin 0.13g / L + streptomycin 0.15g / L);
  • High glucose DMEM medium (DMEM + 12% fetal bovine serum + HEPES 3.5g / L + NaHC0 3 2.2g / L + penicillin 0.13g / L + streptomycin 0.15g / L);
  • MC COYS 5-A medium (DMEM + 12% fetal bovine serum + HEPES 3.5g / L + NaHC0 3 2.2g / L + penicillin 0.13g / L + streptomycin 0.15g / L);
  • BGC Human gastric adenocarcinoma cell line
  • A549 human non-small cell lung cancer
  • K562 human leukemia cell line
  • PANC-1 human pancreatic cancer cell line
  • NCI-H446 human small cell lung cancer
  • Human pancreatic cancer cell line (BXPC-3); human bladder cancer cell line (T24); listed cancer cell line with 12% fetal bovine serum in RPMI 1640 medium, in 37 ° C, 5% CO 2 incubator to cultivate;
  • Human liver cancer cell line (HEPG2); human breast cancer cell line (MCF-7); listed cancer cell line with 12% calf serum in high glucose DMEM medium, in 37 ° C, 5% CO 2 incubator to cultivate;
  • Human colon adenocarcinoma cell line (CACO-2) was cultured in a high glucose DMEM medium containing 12% fetal bovine serum at 37 ° C in a 5% CO 2 incubator;
  • Human colon cancer cell line (HT29); human colon cancer cell line (HCT116); human ovarian cancer cell line (SK-OV-3); listed cancer cell line with 12% fetal bovine serum MC COYS 5-A medium , Incubate in a 37 ° C, 5% CO 2 incubator.
  • Inoculation Take a bottle of cells in good condition in the exponential growth phase, add appropriate trypsin digest, digest and let the adherent cells fall off, and mix with RPMI1640 (or DMEM or 5A) medium containing 12% calf serum. The solution was counted, and the cell density was adjusted to 1.67 x 10 4 /mL. The cell suspension was inoculated into a 96-well plate, 180 ⁇ 7 well (containing tumor cells 3000/well).
  • the plate was transferred to a constant temperature C0 2 incubator and incubated at 37 ° C, 5% CO 2 and saturated humidity for 24 hours.
  • test compound in DMSO to a concentration of 0.1M formulated then make three dilutions for screening, concentrations of the order of 10- 5 mol / L, 10- 6 mol / L Wo B 10- 7 mol / L.
  • the test compound was added, 20 ⁇ M 7 well, and cultured for 72 hours. Three parallel holes were set in each group and repeated three times. The absorbance of each well of the 96-well plate was measured, and the cell growth inhibition rate was calculated by recording the results, and the average value was taken three times.
  • Staining Add sputum to a 96-well plate (adherent cells), 20 ⁇ 7 wells, incubate in an incubator for 4 hours, aspirate the supernatant in the well, add DMSO 100 ⁇ 7 wells, and shake on a plate shaker for 5 minutes. Add sputum to a 96-well plate (suspended cells), 20 ⁇ 7 wells, incubate in an incubator for 4 hours, add 20% SDS 50 L/well, and place in an incubator overnight.
  • the microplate reader was set at a wavelength of 570 nm and a reference wavelength of 630 nm. The absorbance of each well of a 96-well plate was measured, and the results were recorded and the cell growth inhibition rate was calculated to determine the antitumor activity of the test drug.
  • the logarithm of the compound concentration is linearly regressed with Logit to obtain the inhibition.
  • the concentration of the test compound at a growth rate of 50%, that is, IC 5Q was taken as three average values.
  • Test Results The compounds having the structure of the formula (I) prepared in Examples 1 to 43 of the present invention have an inhibitory effect on the proliferation of various tumor cells, and statistically, the effect is remarkable (P ⁇ 0.05), and the IC 5Q thereof is 10 — 5 mol/L or less.

Abstract

本发明公开了一类2,7-萘啶衍生物及其制备方法和应用，其为结构如式（I）所示的化合物、其药学上可接受的等价物或盐。本发明的结构如式（I）所示的化合物对多种激酶活性具有很好的抑制作用，其对c-Met、KDR、c-kit等激酶的半数抑制浓度普遍在10-7mol.L-1以下。同时，本发明实施例中制备的具有式（I）结构的化合物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。另外，本发明还涉及该类化合物的中间体及中间体的制备方法。

Description

说明书 一类 2,7-萘啶衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一类 2，7-萘啶衍生物，本发明还涉及该类化合物的 制备方法及其作为酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂中的应用。 背景技术
哺乳动物细胞之间具有相似的分子机制， 在整个细胞周期内调节细胞的增殖、 分化和 死亡。 其中， 蛋白酪氨酸激酶和蛋白丝氨酸 /苏氨酸激酶在正常细胞的信号转导机制中具有 重要作用， 它们的异常表达将导致许多疾病的产生， 如肿瘤、 动脉硬化、 牛皮癣和炎症反 应等， 因而调控这些激酶的活性， 恢复生理平衡可以作为一种新的治疗手段。
酪氨酸激酶家族以跨膜受体 （受体酪氨酸激酶， RTKs) 或胞质形式 （非受体酪氨酸激 酶， CTKs) 广泛地参与细胞信号转导。 人体基因组中， 蛋白激酶组包括 30种酪氨酸激酶家 族， 共含有 90种不同的蛋白酪氨酸激酶， 其中 58种是受体酪氨酸激酶。
已知的受体酪氨酸激酶涵盖 20个家族， 并且许多是致癌基因 （ Blume-Jensen P, Nature, 2001, 411 :355 )。 许多疾病与这种突变导致的受体酪氨酸激酶持续激活以及 PTKs错 误表达或过度表达相关。在恶性肿瘤的分子表征过程中发现近一半已知的 PTKs,例如 c-Met、 EGFR、 ErbB2、 Ret、 Kit、 Src、 Abl、 PDGFR、 VEGF 1/2/3 FGFR1/2/3等， 都存在突变或 过度表达的情况。 同时， 临床研究显示酪氨酸激酶的过度表达或失调对肿瘤病人的以及病 征的预测具有重要参考价值 （Madhusudan S, et al, Clin Biochem, 2004, 37:618) 。 由上所述， 酪氨酸激酶对生理自体调节十分重要， 基因突变 /重排会使 PTKs异常或过度表达， 从而导致 疾病的发生， 因此可以使用这些酶的激动剂或拮抗剂进行治疗。
非受体酪氨酸激酶（CTKs): 以 src基因产物为代表， 此外还有 Yes、 Fyn、 Lck、 Fgr、 Lyn、 Fps/Fes及 AM等。 除后两者外， 其余非受体型蛋白酪氨酸激酶 Src家族分子理约 为 60kDa的蛋白质，它们之间除了 N末端 80个氨基酸组成不同外，其他部分都非常相似。 非受体酪氨酸激酶 （CTKs) 的调节机制差异较大， 它们通过与跨膜受体 （如荷尔蒙、 细胞 因子和生长因子受体）发生物理性作用， 进而参与胞外信号响应。 在细胞周期的特定阶段， 当这些受体与细胞外的配体或细胞黏着成分相结合时即被活化。 蛋白激酶的突变、 信号蛋 白的困扰是造成肿瘤的病理原因， 同样也会导致其它疾病的发生。 在一些免疫缺陷症中， 可以观察到非受体酪氨酸的突变性失活， 例如 JAK3的失活引起严重的联合免疫缺陷
(Leonard WJ, Nat Rev Immunol, 2001, 1 :200； Leonard WJ, Int J Hematol, 2001, 73:271 )。 Bruton蛋白酪氨酸激酶 （BTK or BPK、 ATK) 属于 Src家族， 是 B细胞发育成熟所必须的一 种酪氨酸激酶， 而 Btk基因突变会导致先天性无免疫球蛋白血症 （Cheng G, et al, Proc Natl Acad Sci USA, 1994， 91 :8152； Maas A, et al, J Immunol, 1999， 162:6526)。
酪氨酸蛋白激酶在中枢神经系统中也具有重要的生理作用， 其失常也会导致相应疾病 的发生， 例如在阿尔茨海默病 （Alzheimer disease，AD ) 患者体内神经元斑与神经调节蛋 白 -1 (neuregulin-1 )和 ErbB4的免疫反应性相关（Ferguson SS， Trends Neurosci, 2003, 26:119； Chaudhury AR， et al, J Neuropathol Exp Neurol, 2003, 62:42)。 胰岛素样生长因子 （IGFs) 及 其调节蛋白是由心血管系统分泌而来， 这些因子调节异常会导致冠状动脉粥样硬化和再狭 窄的发生发展， 而 IGFs的作用是由特异性膜受体所介导， 其中 IGF受体 I型具有酪氨酸激 酶活性，出现于动脉粥样硬化损伤处的平滑肌细胞，炎性细胞及动脉内皮细胞 (Bayes-genis A, et al, Circ Res, 2000, 86:125； Bayes-genis A, et al, Artherio Thromb and Vascu Biol, 2001, 21 :335； Che WY, et al, Circ Res, 2002, 90:1222)。血管内皮生长因子及其受体在类风湿关节 炎的多种细胞内表达， 并且是类风湿性关节炎病理性血管新生过程中的关键因子（De Bandt M， et al, J Immunol, 2003, 1712:4853 )。 Jak2是胞浆非受体酪氨酸激酶， 而 JAK2基因突变至 少引起三种疾病 （Spivak JL， Blood, 2002,100:4272； Thiele J， et al, Acta Haematol, 2004, 111 :155 ) —真性红细胞增多症 （PV) 、 特发性骨髓纤维化 （IMF) 、 原发性血小板增多 症 （ET) 以及一些其它不典型骨髓增殖性疾病 （MPD)。 成纤维细胞生长因子受体跨区域 突变会导致最常见遗传性侏儒症一骨软骨发育不良 （Shiang R，et al，Cell， 1994, 78: 335 )。 此外， 许多疾病与缺乏酪氨酸信号相关， 例如非胰岛素依赖性糖尿病和外周神经疾病， 而 通过增强相应信号的传递可以有效地改善症状（Hunter T， Cell, 2000， 100:111 )。 针对其它一 些与血管发生相关的疾病， 例如某些心血管疾病， 刺激血管生成比抑制更为有效。
有关酪氨酸激酶详细的讨论， 参见 Manning G, Science, 2002, 298:1912。
丝氨酸 -苏氨酸激酶（STKs)是一大类特异性催化蛋白丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化的激 酶家族， 编号： EC 2.7.1.37。 与非受体酪氨酸激酶一样， 丝氨酸 -苏氨酸激酶在细胞内占据 主导地位， 尽管仅具有几种丝氨酸-苏氨酸型受体激酶。丝氨酸-苏氨酸激酶是最常见的细胞 溶胶激酶， 即激酶在细胞质部分而不是在细胞质的细胞器和细胞骨架内发挥它们的功能， 进而影响细胞的内部生物化学， 经常作为对酪氨酸激酶事件的下行反应。 同时丝氨酸 -苏氨 酸激酶可参与发信号过程， 后者引发 DNA合成和随后引起细胞增殖的有丝分裂。此外丝氨 酸-苏氨酸激酶已涉及多种类型的癌症， 如乳腺癌 （Cance et al, Int. J. Cancer, 1993, 55， 571 ) 等。 综上， 酪氨酸激酶和丝氨酸-苏氨酸激酶均与宿主的病理状况包括癌症有关。 与蛋白激 酶有关的其它病理状况还包括牛皮癣、 肝硬化、 糖尿病、 血管发生、 再狭窄、 眼科疾病、 类风湿关节炎和其它的炎症疾病、 免疫疾病、 心血管疾病如动脉硬化和多种肾病。
随着分子生物学的研究深入， 在分子水平上针对细胞信号转导， 调节生长因子的功能 和调控致癌基因是抑制细胞增殖和治疗肿瘤的有效途径。 该途径可以减弱非正常信号通道 的效应， 阻止肿瘤的生长， 同时也可促使肿瘤细胞死亡。 迄今发现有一半原癌基因在蛋白 编码上都具有酪氨酸结构， 它们通过磷酸化和去磷酸化参与细胞信号转导， 同时在肿瘤发 生过程中， 变异或过度表达的酪氨酸激酶可以将正常细胞转变为癌细胞， 同时促进肿瘤细 胞的生长和有丝分裂。 由于酪氨酸激酶和丝氨酸-苏氨酸激酶在细胞的致癌性转化过程中具 有重要的作用， 并与肿瘤的产生和发展有着直接或间接联系， 因此将酪氨酸激酶抑制剂或 丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂应用于肿瘤的治疗尤为合适。
萘啶衍生物具有广泛的生物活性， 在医药领域具有重要的应用。 近年来， 许多萘啶类 小分子化合物已被作为蛋白激酶抑制剂， 广泛用于治疗多种与异常激酶活性相关的疾病， 如肿瘤、 牛皮癣、 肝硬化、 糖尿病、 血管发生、 眼科疾病、 类风湿关节炎和其它的炎症疾 病、免疫疾病、心血管疾病如动脉硬化和多种肾病。其中， 2， 7-萘啶类化合物（WO0192256、 WO0242264)、 1,5-萘啶类化合物 （WO2006106046)、 1,6-萘啶类化合物 （ WO2007060028、 WO2010037249 WO2010088177 ) 2,6-萘啶类化合物 （ WO2008122614)、 杂环稠合萘啶类 化合物 ( WO2009148887 WO2009148916 ) 2， 7-萘啶酮类化合物 ( WO2008109613 WO2009097287) 1,8-萘啶酮类化合物（WO2010002779 )等均用于酪氨酸激酶和 /或丝氨酸 -苏氨酸激酶抑制剂。 但 2， 7-萘啶 -1 (2H) -酮类化合物用于治疗酪氨酸激酶和 /或丝氨酸- 苏氨酸激酶抑制剂还未见报道。
2，7-萘啶 -1 (2H) -酮， 分子式为0 为 146.1， 具有以下化学结构。
Figure imgf000005_0001
2，7-萘啶 -1 (2H) -酮是一类重要的杂环结构， 因此提供一种 2-吡啶酮类化合物及其制 备方法， 以及该化合物作为酪氨酸激酶和 /或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂的用途， 具有重要意 义。 发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上提供一类 2，7-萘啶衍生物。
本发明的另一目的是提供上述 2，7-萘啶衍生物作为酪氨酸激酶和 /或丝氨酸 -苏氨酸激酶 抑制剂的用途。该类化合物在体外生化水平和细胞水平均对酪氨酸激酶和 /或丝氨酸-苏氨酸 激酶具有显著抑制效果（P<0.05 )， 可显著抑制癌细胞增殖（P<0.05 )， 并能对动物活体肿瘤 的生长有优异的抑制活性。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
本发明提供了结构如式 （I 、 其药学上可接受的等价物或盐：
Figure imgf000006_0001
其巾：
X选自 C或 N;
如果 X是 C， m选自 0-4; 如果 X是 N， m选自 0-3;
B选自 -0-、 -NR7-、 -NR7CH2-、 -S -、 -SO-、 -S02-、 -CR8R9-;
R R2、 R3、 R4和 R5相同或不同， 各自选自氢、 卤素、 卤代 d-6烷基、 d-6烷基、 C3-6 环烷基、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 -OR1Q、 -NR7Rn; 或者 R\ R2、 R3、 R4和 R5中各个氢原子选择性的被一个或者多个 R28取代；
R6选自 fi、 Cl-6 C3-6环; ^基、 C3-6杂环; ^基、 C2-6 ¾¾ C2-6块基、 C6—K)芳基、
5至 10元杂芳基； 或者 R6中各个氢原子选择性的被一个或者多个 R29取代；
A选自以下基团：
Figure imgf000007_0001
R12、 R13、 R14、 R15、 R15，、 R16、 R17、 R17，、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22，、 R23、 R24、 R25、 R26或 R27相同或不同，独立选自氢、卤素、氨基、 -OR1Q、 -NR7R"、 -C02R1Q、 -C(0)NR7RU、 -S02R10 -S(0)2NR7RN -NR7S(0)2R10 -NR7C(0)R10 -NR7C02R10 -CO(CH2)R R10、 -CONH(CH2)RR10 -SR1Q、 -SOR1Q、 CR6烷基、 C3-6杂环烯基、 C3-6环烯基、 C2-6烯基、 C2-6 块基、 CWQ芳基、 5至 10元杂芳基； r为 0-4; 或者 R12、 R13、 R14、 R15、 R15，、 R16、 R17、 R17，、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22，、 R23、 R24、 R25、 R26或 R27中各个氢原子选择性的被 一个或者多个 R3Q取代；
R7、 R8、 R9、 R10、 R11相同或不同， 各自选自氢、 d-6烷基、 d-6烷氧基取代的 d-6浣 基、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基取代的 -6烷基；
R28、 R29、 R3Q相同或不同， 各自选自卤素、 卤代 d-6烷基、 d-6烷基、 d-6烷氧羰基、 -N02、 -OR1Q、 -NR7RU、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或 非取代 C6_K)芳基或 5至 10元杂芳基；
G选自 S或 NH; D选自 N或 CH; Z选自 N或 CH。 发明详述
烷基表示未经取代或经取代的直链或支链饱和烃基。包括 1至 20个碳原子的直链或支 链基团。 优选含有 1至 10个碳原子的中等大小烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正 丁基、 异丁基、 叔丁基、 戊基等。 更优选的是含有 1至 4个碳原子的低级烷基， 例如甲基、 乙基、 丙基、 2-丙基、 正丁基、 异丁基或叔丁基等。 当被取代时， 取代基优选为一个或多个 各自选自以下的基团， 包括： 卤素、 卤代 d-6烷基、 d-6烷基、 d-6烷氧羰基、 -N02、 -OR1Q、
-NR7R"、 含 1个或多个 N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或非取代 C6_10 芳基或 5至 10元杂芳基。
环烷基表示全部为碳的单环或稠合的环。 环烷基的实例 （不局限于） 为环丙烷、 环丁 烷、 环戊烷、 环戊烯、 环己烷、 金刚烷、 环己二烯、 环庚烷和环庚三烯。 优选 C3-6环烷基， 例如环丙烷、 环丁烷、 环戊烷、 环己烷。 C3-6环烷基为未经取代或经取代的， 典型地被一或 多个，更优选 1-3个，最优选 1或 2个选自卤素、 d-6烷基、 d-6烷氧羰基、 -OR^^ -Nl^R^ 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或非取代 C6_1Q芳基或 5至 10元杂芳基的取代基取代。
杂环基表示含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的单环或稠合的环。 典型地为含 1个或 多个 N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基， 例如四氢吡喃基、 2，2-二甲基 -1,3-二氧戊环、 哌啶子基、 N-甲基哌啶 -3-基、 哌嗪子基、 N-甲基吡咯烷 -3-基、 吡咯烷基、 吗啉代基、 硫代 吗啉代基、 硫代吗啉代 -1-氧化物、 硫代吗啉代 -1，1-二氧化物、 4-乙氧羰基哌嗪子基、 3-氧代 哌嗪子基、 2-咪唑啉酮、 2-吡咯烷酮、 四氢嘧啶 -2-酮及其衍生物。 优选地， 杂环基团可被一 或多个，更优选 1-3个，最优选 1或 2个选自卤素、 d-6烷基、 d-6烷氧羰基、 -OR1Q、 -NR7R"、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或非取代 C6_1Q芳基或 5至 10元杂芳基的取代基取代。
哌嗪子基指的是具有以下化学结构的基团。
Figure imgf000008_0001
吗啉代基指的是具有以下化学结构的基团 <
,〇、
哌啶子基指的是具有以下化学结构的基团 <
Figure imgf000008_0002
吡咯烷基指的是具有以下化学结构的基团。
Figure imgf000009_0001
烯基为未经取代或经取代的， 具有 1 个或多个双键的直链或支链烃基。 典型地为 c2_8 烯基， 例如 c2-6烯基， 例如烯丙基、 丁烯基、 丁二烯基、 戊烯基或己烯基， 所述烯基被取 代时， 典型地被一或多个， 更优选 1-3个， 最优选 1或 2个选自 Cr6烷基、 Cr6烷氧羰基、 -OR1Q、 -NR7R"、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或非取代 C6_1Q芳基或 5至 10元杂芳基的取代基取代。
块基为未经取代或经取代的， 具有 1 个或多个三键的直链或支链烃基。 典型地为 C2_8 块基， 优选 C2-6块基， 例如乙块基、 丙块基、 丁块基， 所述块基被取代时， 典型地被一或 多个， 更优选 1-3个， 最优选 1或 2个选自 d-6烷基、 d-6烷氧羰基、 -OR1Q、 -NR7R"、 含 1个或多个 N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或非取代 C6_1Q芳基或 5至 10 元杂芳基的取代基取代。
芳基表示 6至 12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团， 具有完全共轭的 π电子系统。 典型地为苯基、 萘基、 联苯基、 茚基、 茚满基、 1，2-二氢萘基、 1，2，3，4-四氢萘基。 芳基可以 是取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基优选为一个或多个， 更优选为一个、 两个或三 个， 进而更优选为一个或两个选自卤素、 卤代 d-6烷基、 d-6烷基、 Cr6烷氧羰基、 -N02、 -OR1Q、 -NR7R"、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或非取代 C6_1Q芳基或 5至 10元杂芳基的取代基取代。
杂芳基表示 5至 12个环原子的单环或稠合环基团， 含有一个、 两个、 三个或四个选自 N、 0或 S的环杂原子， 其余环原子是 C， 另外具有完全共轭的 π电子系统。 未取代的杂芳 基非限制性的实例有： 吡咯、 呋喃、 噻吩、 咪唑、 噁唑、 噻唑、 吡唑、 嘧啶、 吡啶、 喹啉、 异喹啉、 喹唑啉、 噻吩并吡啶、 噻吩并嘧啶、 吡咯并吡啶、 嘌呤、 四唑、 三嗪和咔唑。 杂 芳基可以是取代的或未取代的， 当被取代时， 取代基优选为一个或多个各自选自以下的基 团，包括：氢、卤素、氨基、 -OR1Q、 -NR7RU、 -C02R1Q、 -C(0)NR7Rn -S02R1Q、 -S(0)2NR7Rn -NR7S(O)2R10、 -NR7C(O)R10、 -NR7CO2R10、 -CO(CH2)r R10、 -CONH(CH2)rR10、 -SR10、 -SOR10、 d-6烷基、 C3-6杂环烯基、 C3-6环烯基、 C2-6烯基、 C2-6块基、 C6_1Q芳基、 5至 10元杂芳基； r为 0-4。
环烯基为未经取代或经取代的， 具有 1 个或多个双键的单环或稠合环基团。 典型地为 C3-6环烯基， 例如环丙烯基、 环丁烯基、 环戊烯基或环己烯基， 所述烯基被取代时， 典型地 被一或多个， 更优选 1-3个， 最优选 1或 2个选自 d-6烷基、 d-6烷氧羰基的取代基取代。
d-6烷氧基为直链或支链的。 典型地为 d-4烷氧基， 如甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异 丙氧基、 正丙氧基、 正丁氧基、 异丁氧基或叔丁氧基， d-6烷氧基为未经取代或经取代的， 典型地被一或多个， 更优选 1-3个， 最优选 1或 2个选自 d-6烷基、 d-6烷氧基、 -NR7R"、 含 1个或多个 N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基的取代基取代。
卤素或卤素基团为氟、 氯、 溴或碘。 优选为氟、 氯、 溴。 被卤素取代的 d-6烷基基团 表示其中 1 个或多个氢被卤素置换的烷基， 优选含一个、 两个或三个卤素基团。 此类基团 的优选实施例为三氟甲基。
"氨基 "表示 -NH2基团。
"药学上可接受的盐 "表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。 这类盐包 括：
( 1 ) 与酸成盐， 通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得， 无机酸包括 盐酸、 氢溴酸、 硝酸、 磷酸、 偏磷酸、 硫酸、 亚硫酸和高氯酸等， 有机酸包括乙酸、 丙酸、 丙烯酸、 草酸、 （D) 或 （L) 苹果酸、 富马酸、 马来酸、 羟基苯甲酸、 γ-羟基丁酸、 甲氧基 苯甲酸、 邻苯二甲酸、 甲磺酸、 乙磺酸、 萘 -1-磺酸、 萘 -2-磺酸、 对甲苯磺酸、 水杨酸、 酒 石酸、 柠檬酸、 乳酸、 扁桃酸、 琥珀酸或丙二酸等。
(2)存在于母体化合物中的酸性质子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的 盐， 金属例子例如碱金属离子、 碱土金属离子或铝离子， 有机碱例如乙醇胺、 二乙醇胺、 三乙醇胺、 氨丁三醇、 Ν-甲基葡糖胺等。
本发明基团中的波浪线表示与其他基团的连接点。
在一些实施方案中， "被一个或多个基团取代"是指在指定的原子或基团中的一个、 两 个、 三个或四个氢原子分别被指定范围的基团中选出的相同或不同的基团替换。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， Β选自 -0-、 -S -、 -CH2-或
-NHR7; 进一步的优选为 -0-。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， X选自 C。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， m选自 0或 1 ; n选自 0 或 1 ; p选自 0或 1。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， R1选自氢或卤素。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， R2或 R3均选自氢。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I)所示的化合物中， R4选自氢、 d-6烷基或卤 素。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， R5选自氢、 Cr6烷基、 卤代 d-6烷基、 -NR7R"取代的 d-6烷基、 含 1个或多个N、 0或 S的杂原子的 3-9元杂环 基取代的 Cr6烷基； 进一步的优选为氢、 甲基、 卤代 Cr6烷基、 -CH2NMe2、 -CH2NEt2或吗 啉基取代的亚甲基。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， A可以选自取代的吡啶 或喹啉、 喹唑啉、 噻吩并吡啶、 噻吩并嘧啶、 吡唑并吡啶、 吡嗪并吡啶；
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， A为氨基吡啶和烷氧基 取代的喹唑啉。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， A选自以下基团：
Figure imgf000011_0001
其中 R12、 R13、 R14、 R15、 R15，、 R17、 R17，、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22，、 R26或 R27 的定义如上所述， 也可以进一步地独立选自氢、 卤素、 氨基、 Cr6烷基、 -C02R1Q、 -OR1Q、 5至 10元杂芳基、 d-6烷基取代的 5至 10元杂芳基、 C3-6杂环烯基、 d-6烷氧羰基取代的 C3-6杂环烯基； 其中 R1Q的定义如上所述， 也可以进一步地选自氢、 Cr6烷基、 Cr6烷氧基 取代的 d-6烷基、 含 1个或多个 N、 0或 S的杂原子的 3-9元杂环基取代的 d-6烷基； G 为 S或 NH; D为 N或 CH; Z为 N或 CH。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物中， A可以选自以下基团：
Figure imgf000011_0002
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 (I)所示的化合物中， R12、 R13、 R14、 R15、 R15，、 R17、 R17，、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22，、 R26或 R27相同或不同， 可以独立选自氢、 卤素、 氨基、 羟基、 d_6烷基、 C2_6烷氧羰基、 d_6烷氧基、 d_6烷氧基取代的 Cr6烷氧基、 吗啉 基取代的 -6烷氧基、 咪唑基、 d_6烷基取代的咪唑基、 四氢吡啶基、 d_6烷氧羰基取代的 四氢吡啶基。
作为一种优选， 本发明提供的结构如式 (I)所示的化合物中， R12、 R13、 R14、 R15、 R15，、 R17、 R17，、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22，、 R26或 R27相同或不同， 可以独立选自氢、 卤素、
氨基、 羟基、 C1-6烷基、 -COOEt、 -OCH3、 -0(CH2)2OCH3、
Figure imgf000012_0001
本发明提供的结构如式 （I) 所示的化合物或其药学上可接受的盐， 作为一种优选， 结 构可以如式 (II) 所示：
Figure imgf000012_0002
式 （II)
其中： n选自 0-2; p选自 0-5; R31选自氢、 卤素或 d-6烷基； 并且 m、 A、 B、 X、 R R2、 R3、 R R5 如上对式 (I) 中的定义。
作为一种优选， 在式 （Π) 中， A优选自以下基团:
Figure imgf000012_0003
并且其中各基团如上对式 （I) 中的定义。
作为优选， 在式 （Π) 中， X选自 C， B选自 -0-。
作为优选， 在式 （Π) 中， m优选为 0或 1; n优选为 0或 1; p优选为 0或 1。
本发明提供的结构如式 （Π)所示的化合物或其药学上可接受的盐， 更典型地， 结构可 以如式 （III) 所示： ),
Figure imgf000012_0004
式 （III)
其中： m选自 1; n选自 0或 1; p选自 0或 1; R R4和 R31相同或不同， 各自选自氢或卤素；
R2、 R3选自氢;
R5选自氢、 甲基、 卤代垸基、 -CH2NMe2、 -CH2NEt2或 0"^
Figure imgf000013_0001
R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R17、 R17，、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22，、 R26或 R27相同 或不同， 独立选自氢、 卤素、 氨基、 羟基、 C1-6烷基、 -COOEt 、 -OCH3、 -0(CH2)2OCH3、
Figure imgf000013_0002
式 α)、 （π) 和 απ) 的萘啶类化合物的具体实例包括下表所列的那些化合物:
/:/:/ O 6ε90/-οίϊοίζ>1£20ίAV
Figure imgf000014_0001
Figure imgf000015_0001
Figure imgf000015_0002
Figure imgf000016_0001
或其药学上可接受的盐。
作为优选， 本发明还提供了一种结构如式 （IV) 所示的化合物或其药学上可接受的盐，
Figure imgf000016_0002
式 （IV)
其特征在于，
n'选自 0或 1; p'选自 0或 1; R4' 和 R31'相同或不同， 独立选自氢、 卤素或 d-6烷基；
R5'选自氢、 d-6烷基、 卤代 d-6烷基、 -NR7'R"'取代的 d-6烷基、 含 1个或多个 0 或 S的杂原子的 3至 9元杂环基取代的 d-6烷基。
R7'或 R11'相同或不同，， 独立选自氢或 d-6烷基。
作为优选， 式 （IV) 化合物可以作为式 （I) 化合物的中间体。
作为优选， 本发明提供的结构如式 （IV) 所示化合物， 具体为：
Figure imgf000017_0001
本发明的另一个方面是涉及制备中间体 （IV) 所示化合物的方法， 其特征在于该方法
Figure imgf000017_0002
(1) 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与化合物 e反应得到化合物 b， 化合物 e中 X'选自氯、 溴或碘；
(2) 化合物 b与 DMF-DMA反应得到化合物 c; (3) 化合物 c在酸作用下关环得到萘啶二酮类化合物 d;
(4) 化合物 d在氯化试剂作用下得到式 (IV)化合物， 所述氯化试剂为三氯氧磷或二氯亚 砜；
其巾：
n'选自 0或 1 ; p'选自 0或 1 ;
R4'选自氢；
R5'选自氢、 d-6烷基或卤代 d-6烷基；
R31'选自氢或卤素。
为了完成本发明的目的， 本发明采用如下技术方案：
(1)
方法 A: 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与碘苯类化合物通过偶联反应得到化合物 b， 在本发明中， 优选的实施方式是： 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与碘苯类化合物 e在溶剂 1，4-二氧六环或乙二醇二甲醚， 优选为 1，4-二氧六环中， 在碘化亚铜、 N, ^1-二甲基乙二胺、 磷酸钾作用下， 于 90〜120 °C反应 3〜12小时得到化合物 b， 或
方法 B: 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与苄溴或苄氯类化合物在溶剂 DMF中， 在无 机碱氢化钠作用下， 于 0〜30 °C反应 2〜10小时得到化合物 b。
(2) 化合物 b与 DMF-DMA在溶剂 DMF或甲苯， 优选为 DMF中， 于 90〜120 °C反应 1〜4小时得到化合物0。
(3) 化合物 c在酸作用下于 90〜120 °C反应 1〜3小时， 关环得到萘啶二酮类化合物 d， 在本发明中， 所述酸选自浓硫酸、 醋酸或盐酸， 优选为浓硫酸。
(4) 萘啶二酮类化合物 d在氯化试剂三氯氧磷或二氯亚砜， 优选为三氯氧磷中； 反应温 度一般为 90〜120 °C， 优选为 110〜120 °C; 反应时间为 2〜6小时， 优选为 2〜4小时， 反应得 到通式化合物 (IV)。
本发明还涉及一种药用组合物， 包含治疗有效量的游离形式或可药用盐形式的通式化 合物 （I)作为活性成分； 一种或多种药用载体物质和 /或稀释剂。 也可以包括本发明提供的 通式化合物 （I) 和药学上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂。
本发明还涉及一种组合的药用组合物， 包含有效量的游离形式或可药用盐形式的通式 化合物 （I); 一种或多种药用载体物质和 /或稀释剂。
"药物组合物 "指将本发明中的化合物中的一个或多个或其药学上可接受的盐、 溶剂化 物、 水合物或前药与别的化学成分， 例如药学上可接受的载体， 混合。 药物组合物的目的 是促进给药给动物的过程。
"药用载体"指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和 性质的药物组合物中的非活性成分， 例如但不限于： 碳酸钙、 磷酸钙、 各种糖 （例如乳糖、 甘露醇等）、 淀粉、 环糊精、 硬脂酸镁、 纤维素、 碳酸镁、 丙烯酸聚合物或甲基丙烯酸聚合 物、 凝胶、 水、 聚乙二醇、 丙二醇、 乙二醇、 蓖麻油或氢化蓖麻油或多乙氧基氢化蓖麻油、 芝麻油、 玉米油、 花生油等。
前述的药物组合物中， 除了包括药学上可接受的载体外， 还可以包括在药 （剂） 学上 常用的辅剂， 例如： 抗细菌剂、 抗真菌剂、 抗微生物剂、 保质剂、 调色剂、 增溶剂、 增稠 剂、 表面活性剂、 络合剂、 蛋白质、 氨基酸、 脂肪、 糖类、 维生素、 矿物质、 微量元素、 甜味剂、 色素、 香精或它们的结合等。
本发明涉及的通式 （I) 所示的稠杂环衍生物、 药物组合物可应用于制备治疗经蛋白激 酶中介的疾病药物方面。 其特征在于所述蛋白激酶包括 c-Met、 KDR或 c-kit。
作为优选， 所述蛋白激酶相关疾病选自受体酪氨酸激酶相关的疾病、 非受体酪氨酸激 酶相关的疾病或丝氨酸 -苏氨酸激酶相关的疾病。
作为优选， 所述蛋白激酶相关疾病选自肝细胞生长因子、 血管内皮生长因子受体相关 的疾病、 干细胞因子受体相关的疾病、 表皮生长因子受体相关的疾病、 血小板衍生生长因 子受体相关的疾病、 胰岛素样生长因子受体相关的疾病或胎肝激酶相关的疾病。
作为优选， 所述蛋白激酶相关疾病选自糖尿病、 过度增殖性疾病、 血管发生、 炎性疾 病、 免疫性疾病或心血管疾病。
作为优选， 所述蛋白激酶相关疾病 （或增殖性疾病） 选自结肠直肠癌、 膀胱癌、 乳腺 癌、 肝癌、 肺癌、 胰腺癌、 胃肠癌、 白血病、 卵巢癌、 头和颈癌、 前列腺癌、 肾癌、 鼻咽 癌、 成胶质细胞瘤、 鳞状细胞癌、 星形细胞癌、 卡波济氏肉瘤、 黑素瘤、 神经胶质瘤、 泌 尿生殖道癌或骨髓增殖性疾患。
为了检验本发明提供的化合物对于蛋白激酶的作用水平， 采用生化水平酶活性测试、 细胞水平酶活性测试、 抑制肿瘤细胞增殖活性测试来确定本发明的各种化合物对一种或多 种 PK的活性和作用水平。使用工艺中熟知的方法，对于任何激酶均可按照同样的方式设计 类似的实验。
在生化水平酶活性测试中，利用 HTRF技术检测酪氨酸激酶的活性， HTRF是一种时间 分辨荧光共振能力转移技术， 可以按照已知的说明书或文献方法进行， 参看 Kolb 等， "Tyrosine kinase assays adapted to homogenous time -resolved fluorescence". Drug Discovery Today杂志. 3卷: pp 333-342。 HTRF (均相时间分辨荧光)是用来检测均相体系中待测物的一 种最常用的方法， 这种技术结合了荧光共振能量转移 (FRET)和时间分辨技术 (TR)， 已经被 广泛应用于基于细胞实验和生化实验的药物研发的不同阶段。 根据 HTRF法的测定原理， 将纯酶 Met与生物素化的底物以及 ATP—起孵育反应后， 加入亲和素标记的 XL-665和识 别底物磷酸化的 Eu标记的抗体， 当底物被 Met磷酸化后， Eu标记的抗体即可以识别该磷 酸化产物， 与亲和素标记的 XL665形成时间分辨的荧光共振能量转移 （FRET), 而未被磷 酸化的底物由于不能倍抗体识别而无法形成 FRET信号， 通过测定 665 nm和 620 nm的荧 光信号差值测定待测物在不同浓度下对 c-Met、 Flt-3、 VEGFR-2、 PDGFR 、 c-Kit等酪氨 酸激酶的抑制活性。 因而， 采用此法可测定本发明化合物对上述酪氨酸激酶的生化水平的 活性作用， 同时利用本领域熟知的方法， 可以对其它蛋白激酶使用相似的测定方法。
在细胞水平酶活性测试中， 酶联免疫吸附测定（ELISA)可以用来检验和测定酪氨酸激 酶活性的存在。 ELISA可以按照已知的方法进行， 例如 Voller等， 1980， "酶联免疫吸附测 定" （Enzyme-Linkd Immunosorbent Assay), 见 Rose和 Friedman编著的 《临床免疫学手册》
( Manual of Clinical Immunology) ,第 2版， pp 359-371, 美国微生物学会出版，华盛顿特区。 c-Met、 Flt-3、 VEGFR-2、 PDGFR-P、 c-Kit等酪氨酸激酶催化 ATP与生物素标标记的底物 肽的磷酸化反应， 抑制酶活性将抑制这一反应。 根据 ELISA法测定原理， 将抗 Met抗体包 被在固相载体上，来抓取细胞裂解液中的 Met总蛋白；然后用抗酪氨酸磷酸化抗体标记 Met 蛋白中发生磷酸化的部分； 加入辣根过氧化物酶 （HRP) 标记的抗体， 使之与抗酪氨酸磷 酸化抗体结合； 最后加入 HRP的底物 TMB显色。 通过测定 450 nM 吸收波长处的吸光度 而检测细胞中 Met 受体自磷酸化水平， 从而测定待测物在不同浓度下对 c-Met、 Flt-3、 VEGFR-2、 PDGFR-β, c-Kit等酪氨酸激酶的抑制活性。 因而， 采用此法可测定本发明化合 物对上述酪氨酸激酶细胞水平的活性作用， 同时利用本领域熟知的方法， 可以对其它蛋白 激酶使用相似的测定方法。
在抑制肿瘤细胞增殖活性测试中， 测定按常规采用溴化四氮唑蓝 （MTT) 法。 活细胞 线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性黄色的溴化 3-(4，5-二甲基噻唑 -2)-2，5-二苯基四氮唑
(MTT)还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲臢（Formazan), 并沉积在细胞中， 而死细胞无此 功能， 二甲基亚砜（DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物甲臢， 用酶联免疫检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值， 可间接反映活细胞数量。 因而甲臢生成量在通常情况下与活细胞 数成正比， 可根据 OD值推测出活细胞的数目， 了解药物抑制或杀伤细胞的能力。 该测定 方法可以用于测定不同的本发明化合物对一种或多种癌细胞增殖的抑制能力， 利用本领域 熟知的方法， 可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。
本发明制备的结构如式 （I) 所示的化合物对多种激酶活性具有很好的抑制作用， 其对 c-Met、 KDR、 c-kit等激酶的半数抑制浓度 （IC5。） 普遍在 10—7 mol/L以下。 同时， 本发明 实施例中制备的具有式 （I) 结构的化合物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用， 其中大部 分化合物抑制肿瘤细胞增殖的效果显著， 其 IC5Q在 10—5 mol/L以下。 由此推知， 本发明具有 式 （I) 结构的化合物可应用于制备治疗有机体中蛋白激酶相关疾病的药物。 本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的， 本发明采用如下技术方案:
Figure imgf000021_0001
为得到化合物 b，可以通过 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与碘苯类化合物通过偶联反 应制得， 或者用 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与苄溴或苄氯类化合物在无机碱作用下通 过亲核取代反应制得，或者用乙酰胺类化合物 e与二酮类化合物 f在醇类溶剂，优选乙醇中， 在哌啶作用下， 反应温度为 60〜80 °C， 反应时间为 3〜6小时制得； 化合物 b在 DMF-DMA 作用下引入烯基得到化合物 c， 然后在浓硫酸作用下关环得到中间体 d， 中间体 d继续在三 氯氧磷作用下氯化得到通式化合物 （IV)。
其中， n'选自 0或 1 ; p'选自 0或 1 ; R4'选自氢； R5'选自氢、 d-6烷基或卤代 d-6烷基；
Figure imgf000022_0001
为得到化合物 （1)， 可以采取的方法包括:
方法 A: 碱片段 （V) 与氯代杂环 （VI) 在溶剂 Si中碱 B、 催化剂 C、 配体 L存在下 在温度 ^条件下反应生成化合物 （1)， 或者
方法 B: 碱片段（V)与氯代杂环（VI)在溶剂 S2中酸 存在下在温度 T2条件下反应 生成化合物 （1)。
其中 Α、 Β、 X、 R\ R2、 R3、 R4、 R5、 R6和 m如上所定义。
为了制备本发明通式 （I) 中所述的化合物， 所述的制备方法 A， 其特征在于， 在制备 过程中， 所述的溶剂 81选自醚类溶剂， 如 1，4-二氧六环、 乙二醇二甲醚， 优选为 1，4-二氧 六环； 所述的碱 B选自无机碱， 如氢氧化钠、 氢化钠、 叔丁醇钠、 叔丁醇钾， 优选为叔丁 醇钠、叔丁醇钾；所述的催化剂 C可以是醋酸钯、四三苯基磷钯、二氯二三苯基磷钯、三 (二 亚苄基丙酮)二钯， 优选为三 (二亚苄基丙酮)二钯； 配体 L为膦配体， 优选为 1，2-双 （二苯 基膦） 丙烷、 4，5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽； 温度 1 为 90-115 °C， 优选为 100-110 °C; 所述的制备方法 B， 其特征在于， 溶剂 S2选自质子性溶剂， 优选为异丙醇、 乙醇、 甲 醇； 酸 为选自无机酸类， 包括盐酸、硫酸、 磷酸等， 有机酸类化合物， 包括对甲苯磺酸、 乙酸等； 温度 T2为 60-110 °C， 优选为 85-95 °C。
本发明还涉及具有通式 （I) 的另一种制备方法， 其特征在于酚片段 （VIII) 与卤代杂 环 （VII) 在溶剂 S3中酸 A2存在下在温度 T3条件下反应生成化合物 （1)， 具体实施方式如 下：
流程图 3 :
Figure imgf000023_0001
其中 A、 X、 R R2、 R3、 R4、 R5、 R6和 m如上所定义， B优选为 -0-。
其特征在于， 在制备过程中， 所述的溶剂 S3选自质子性溶剂， 优选为异丙醇、 乙醇、 甲醇； 酸 A2为选自无机酸类， 包括盐酸、 硫酸、 磷酸等， 有机酸类化合物， 包括对甲苯磺 酸、 乙酸等； 温度 T3为 60-110 °C， 优选为 85-95 °C。 具体实施方式
本发明公开了一种化合物及其制备方法、 该化合物的中间体及其制备方法， 及其该化 合物作为酪氨酸激酶和 /或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂的应用，本领域技术人员可以借鉴本文 内容， 适当改进工艺参数实现。 特别需要指出的是， 所有类似的替换和改动对本领域技术 人员来说是显而易见的， 它们都被视为包括在本发明。 本发明的方法及应用已经通过较佳 实施例进行了描述， 相关人员明显能在不脱离本发明内容、 精神和范围内对本文所述的方 法和应用进行改动或适当变更与组合， 来实现和应用本发明技术。
下面结合实施例， 进一步阐述本发明：
实施
Figure imgf000023_0002
(E)- 2-氯 -4- (2- (二甲氨基） 乙烯基） -3-氰吡啶的制备
向圆底烧瓶中加入 2-氯 4-甲基 -3-氰吡啶 （2 g， l eq)， DMF (50 mL)， 向反应液中缓慢滴加 DMF-DMA (3.7 mL，2 eq)， 滴加完毕后， 升温至 110°C反应 1小时， 点板， 原料反应完全， 冷至室温， 停止反应， 减压除去溶剂， 二氯甲烷与水洗涤、 萃取， 合并有机相， 无水硫酸 钠干燥， 抽滤， 浓縮， 过柱 (PE/EA从 20/1到 1/1 )得到 (E)- 2-氯 -4- (2- (二甲氨基) 乙烯 基） -3-氰吡啶 （2.3 g)。
8-氯 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 (E)- 2-氯 -4- (2- (二甲氨基） 乙烯基） -3-氰吡啶 （2.3 g，l eq)， 浓硫酸 （19 mL)， 油浴 110 °C反应 1小时， 点板反应完全， 反应液倒入冰水中， 加 K2C03中和调至 pH 为 8， 乙酸乙酯萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤后浓縮得到 8-氯 -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮 （2 g)。
2-苄基 -8-氯 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向三颈瓶中加入 8-氯 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （900 mg， l eq)， DMF (40 mL), 抽充氮气三次， 冰浴下冷却， 向体系中加入氢化钠 （200 mg， 1 eq)， 冰浴下继续搅拌， 半小时后， 向体系中 加入苄氯 （696 mg， 1.1 eq), 继续冰浴下反应 4小时， 点板， 原料反应完全， 加水， 乙酸 乙酯萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 过柱 （从 PE到 PE/EA = 1/1 ) 得 到 2-苄基 -8-氯 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （920 mg)。
2-苄基 -8- ( (4- ( (6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 的制备
向反应瓶中加入 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基) 氧基） -3-氟苯胺 (50 mg, 1.0 eq), 2-苄基 -8-氯 -2， 7-萘啶 -1(2H)-酮 (42.9 mg, 1.0 eq), 三 (二亚苄基丙酮)二钯 (29.2 mg, 0.2 eq), 1,2- 双（二苯基膦）丙烷（26 mg，0.4 eq)，叔丁醇钠（19.8 mg， 1.3 eq)和 1， 4-二氧六环（ 10 mL)， 抽充氮气三次， 于 106 °C反应 4小时， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶 柱层析 (PE / EA 6/1 to 3.5/1 ) 得到 2-苄基 -8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基) 氧基） -3- 氟苯基） 氨基） —2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （10.8 mg)， MS: [M+H]+ = 550.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 12.11 (b， 1H), 8.57 (s, 1H), 8.29-8.30 (d， 1H), 8.24-8.27 (d， 1H), 7.87-7.89 (d, 1H)， 7.59 (s, 1H)， 7.48-7.50 (d, 1H)， 7.38-7.41 (d, 2H), 7.30-7.35 (m， 4H)， 6.96-6.97 (d， 1H)， 6.68-6.69 (d， 1H)， 5.22 (s, 2H), 4.06 (s, 6H) ppm。
实施例 2: 化合物 2的制备
Figure imgf000025_0001
2-苄基 -8- ((3-氟 -4- (噻吩并 [3,2-d]嘧啶 -4-基氧）苯基）氨基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备 制备方法同实施例一中 2-节基 -8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3- 氟苯胺改为 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-d]嘧啶 -4-基氧）苯胺， 反应时间减少 1小时。 MS: [M+H]+ = 496.0.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 12.13 (b， 1H), 8.74 (s， 1H), 8.50-8.52 (d， 1H), 8.25-8.31 (m， 2H), 7.87-7.90 (d， 1H), 7.70-7.72 (d， 1H), 7.45-7.50 (m， 2H), 7.33-7.37 (m， 4H)， 6.96-6.98 (d，
1H), 6.67-6.70 (d， 1H), 5.25 (s， 2H) ppm。
3: 化合物 3的制备
Figure imgf000025_0002
,4-二氯 -2-氰基吡啶的制备
冰浴下向 3，4-二氯吡啶酰胺（300 mg， 1 eq) 的乙酸乙酯（18 mL)溶液中加入三乙胺（ 160.9 mg，1.5 eq)， 搅拌 5 min后向溶液中缓慢加入三氟乙酸酐（333.9 mg， 1.5 eq)， 于冰浴下继续 反应 2小时，点板，原料反应完全，停止反应，向体系中慢慢加入饱和碳酸氢钠溶液（20 mL), 乙酸乙酯 （30 mL * 5 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 滤液浓縮， 粗品硅胶 柱层析 （PE/EA 200/l to 20/l ) 得到 3,4-二氯 -2-氰基吡啶 （269 mg)。 4- (4-氨基 -2-氟苯） -3-氯 -2-氰基吡啶的制备
向反应瓶中加入 3,4-二氯 -2-氰基吡啶（227 mg， 1.0 eq)，碳酸钾（543 mg， 3 eq)，乙腈（65 mL), 加热至 80 °C反应过夜， 点板反应完全， 停止反应， 加水（65 mL)淬灭反应， 乙酸乙酯（60 mL * 5) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 滤液浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 4- 氨基 氟苯) 氯 氰基吡啶 mg
苄基 氧 二氢 萘啶小基）氨基） 氟苯） 氯 氰基吡啶的制备 向反应瓶中加入 4- (4-氨基 -2-氟苯） -3-氯 -2-氰基吡啶 （200 mg， 1.0 eq)， 2-节基 -8-氯 -2， 7- 萘啶 -1(2H)-酮 (205 mg， 1.0 eq)， 三 (二亚苄基丙酮)二钯 (139.6 mg， 0.2 eq)， 1,2-双 (二苯 基膦） 丙烷 （ 124.4 mg， 0.4 eq)， 叔丁醇钠 （95mg，1.3eq) 和 1,4-二氧六环 （ 75 mL)， 抽 充氮气三次， 于 106 °C反应 4小时， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱 层析得到 4- (4- ((7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢- 2，7-萘啶 -1-基） 氨基） -2-氟苯） -3-氯 -2-氰基吡啶
(159mg
苄基 氧 二氢 萘啶小基）氨基） 氟苯） 氯 酰胺吡啶的制备 向反应瓶中加入 4- (4- ((7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢- 2，7-萘啶 -1-基) 氨基） -2-氟苯) -3-氯 -2-氰 基吡啶 （200mg，l eq)， 2，2，6，6-四甲基 -N-哌啶基 -1-醇 （316mg，5eq)， 甲醇 （20mL)， 加 热回流反应 5小时， 停止反应， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 4- (4- ( (7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢- 2，7-萘啶 -1-基) 氨基） -2-氟苯) -3-氯 -2-酰胺吡啶 (180mg)。
苄基 氧 二氢 萘啶小基）氨基） 氟苯） 氯 氨基吡啶的制备 室温下向 4- (4- ((7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢- 2，7-萘啶 -1-基） 氨基） -2-氟苯) -3-氯 -2-酰胺吡啶 (100 mg, leq), 乙腈 （18mL)， 乙酸乙酯 （18mL)， 水 （9mL)， 搅拌 5min后向反应中 加入醋酸碘苯（125mg，2eq)， 抽充氮气， 氮气保护下反应 1小时， 点板反应完全， 停止反 应， 加水 （20mL)， 乙酸乙酯 （20mL*5) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓 縮， 粗品硅胶柱层析得到 4- (4- ((7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基）氨基） -2-氟苯） -3- 氯 -2-氨基吡啶 （61.5 mg)。 MS: [M+H]+ = 488.0.
1H-NMR (500 M， DMSO- 6) δ 12.12 (s， 1H), 8.26-8.29 (m， 2H), 7.87-7.88 (d， 1H)，
7.75-7.76 (d, 1H)， 7.45-7.47 (m， 1H)， 7.26-7.37 (m， 6H)， 6.96-6.97 (d, 1H)， 6.67-6.68 (d,
1H),6.36 (s， 2H), 5.94-5.95 (d， 1H), 5.24 (s， 2H) ppm。
实施例 4: 化合物 4的制备
Figure imgf000027_0001
8-氯 -2- (4-氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向三颈瓶中加入 8-氯 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （900 mg， l eq)， DMF (40 mL), 抽充氮气三次， 冰浴下冷却， 向体系中加入氢化钠 （200mg， 1 eq)， 冰浴下继续搅拌， 半小时后， 向体系中 加入对氟苄氯 （795 mg， 1.1 eq), 继续冰浴下反应 6小时， 点板， 原料反应完全， 加水， 乙酸乙酯萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 过柱 （从 PE到 PE/EA= 1/1) 得到 8-氯 -2- (4-氟苄基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 (l g)。
8- (4- ((6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
制备方法同实施例 1 中 2-节基 -8- ((4- ((6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨 基） -2,7-萘啶 - 2H)-酮的合成， 不同之处在于将 2-苄基 -8-氯 -2,7-萘啶 - 2H)-酮改为 8氯 -2- (4-氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮。 MS: [M+H]+ = 568.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 12.10 (b， 1H), 8.57 (s, 1H), 8.29-8.30 (d， 1H), 8.24-8.27 (dd， 1H，J= 2.45Hz), 7.89-7.90 (d, 1H)， 7.59 (s, 1H)， 7.47-7.50 (m， 1H)， 7.39-7.45 (m， 4H)， 7.20-7.21 (m， 2H), 6.95-6.97 (d， 1H)， 6.67-6.70 (d， 1H)， 5.23 (s， 2H), 4.00 (s， 6H) ppm。
Figure imgf000027_0002
(4- (6-苄氧基 -7-甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺的制备
向反应瓶中加入 6-苄氧基 -4-氯 -7-甲氧基喹唑啉（10.0g， 1 eq)、 4-氨基 -2-氟苯酚（4.65 g， 1.1 eq)、 叔丁醇钾 （4.5 g， 1.2 eq)、 DMF (500 mL), 加热至 55 °C反应 3小时， 停止反应， 减 压去除溶剂后， 干法过柱， 得到（4- (6-苄氧基 -7-甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺 7 g。 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -7-甲氧基喹唑啉 -6-醇的制备
向反应瓶中加入 (4- (6-苄氧基 -7-甲氧基喹唑啉 -4-基)氧基） -3-氟苯胺 (3.0 g，l eq)、 甲醇 ( 150 mL)、 Pd-C (0.6 g)， 在氢气作用下于 0 °C反应 6小时， 停止反应， 过滤除去不溶物， 浓縮后过柱得到 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -7-甲氧基喹唑啉 -6-醇 1.6 g。
3-氟 -4- ((7-甲氧基 -6- (3-吗琳丙氧基） 喹唑啉 -4-基）氧基）苯胺的制备
向反应瓶中加入 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -7-甲氧基喹唑啉 -6-醇（200 mg， 1 eq)、 4- (3-氯丙 基） 吗啉 （326 mg，3 eq)、 碳酸钾 （275 mg， 3 eq)、 DMF (30 mL), 加热至 80 °C反应 2小 时， 停止反应， 过滤、 浓縮得到粗品 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯胺 136 mg。
8- ( (3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基）氧基） 苯基）氨基） -2- (4-氟 苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 4中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺改为 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- ( 3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯胺， 反应时 间为 22小时。 MS: [M+H]+ = 681.2.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 12.00 (b， 1H), 8.62 (s, 1H), 8.27-8.28 (d, 1H), 8.21-8.25 (m， 1H), 7.60 (s， 1H), 7.47-7.49 (m， 1H), 7.31-7.34 (m， 4H)， 7.05-7.08 (d， 2H), 6.69-6.70 (d， 2H), 6.38-6.40 (d， 1H), 5.16 (s， 2H), 4.29-4.31 (m， 2H), 4.04 (s， 3H), 3.73 (m， 2H), 2.14-2.59 (m， 8H)， 1.23-1.26 (m, 2H) ppm。
实施例 6: 化合物 6的制备
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000029_0002
- (苄氧基） -4- (2-氟 -4-硝基苯氧基） -6- 甲氧基喹啉的制备
向反应瓶中加入 7-苄氧基 -6-甲氧基喹啉 -4-醇 （0.84 g， 1 eq)、 碳酸铯 （6.5 g， 10 eq)、 DMF (50 mL)、 乙腈 (50 mL)， 室温下反应 1小时， 然后向体系中加入 1，2-二氟 -4-硝基苯 (0.48 g，1.5 eq)， 加热至 40 °C反应 6小时， 停止反应， 减压去除溶剂后， 干法过柱， 得到 7- (苄 氧基） —4- (2-氟 -4-硝基苯氧基) -6- 甲氧基喹啉 0.75 g。
4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -6-甲氧基喹啉 -7-醇的制备
向反应瓶中加入 7- (苄氧基） -4- (2-氟 -4-硝基苯氧基） -6- 甲氧基喹啉 （0.75 g， 1 eq)、 甲 醇（50 mL)、 Pd-C (0.1 g)， 在氢气作用下于室温反应 2小时， 停止反应， 过滤除去不溶物， 浓縮后得到 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -6-甲氧基喹啉 -7-醇 0.5 g。
3-氟 -4-((6-甲氧基 -7-(3-吗啉丙氧基)喹啉 -4-基)氧)苯胺的制备
向反应瓶中加入 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -6-甲氧基喹啉 -7-醇（500 mg， 1 eq)、 4- (3-氯丙基） 吗啉 （817 mg，3 eq)、 碳酸钾 （690 mg，3 eq)、 DMF (75 mL)， 加热至 80 °C反应 2小时， 停止反应， 过滤、浓縮得到粗品 3-氟 -4-((6-甲氧基 -7-(3-吗啉丙氧基)喹啉 -4-基)氧)苯胺 213.5 mg。
8- ( (3-氟 -4- ( (6-甲氧基 -7- (3-吗啉丙氧基） 喹啉 -4-基）氧基）苯基）氨基） -2- (4-氟苄 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 4中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺改为 3-氟 -4- ( (6-甲氧基 -7- ( 3-吗啉丙氧基） 喹啉 -4-基） 氧基） 苯胺， 反应时间 为 16.5小时。 MS: [M+H]+ = 679.9, [M-H]+ = 678.0. 1H-NMR (300 M， DMSO- e) δ 12.37 (b， 1H), 8.35-8.45 (m， 2H), 7.92-7.94 (d， 2H),
7.45-7.61 (m， 5H)， 7.19-7.23 (m， 2H), 7.03-7.07 (m， 1H), 6.70-6.74 (m， 1H), 6.30-6.35 (d， 1H):
6.09-6.14 (d， 1H)， 5.25 (s， 2H), 3.85-3.91 (m， 5H)， 3.45-3.50 (m， 3H), 2.22-2.27 (m， 5H)，
1.80-1.1.85 (m, 2H), 1.20-1.23 (m, 2H) ppm。
实施例 7: 化合物 7的制备
Figure imgf000030_0001
8- ( ( 3-氟 -4- (噻吩并 [3,2-b]吡啶 -7-基氧) 苯基） 氨基） -2- (4 -氟苄基) -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
制备方法同实施例 4中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺改为 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-b]吡啶 -7-基氧）苯胺， 反应时间为 16.5小时。 MS: [M+H]+ = 512.8, [M-H]+ = 510.9.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 12.02 (b, 1H), 8.50-8.51 (m， 1H), 8.28-8.29 (d, 1H)，
8.21-8.25 (m， 1H), 7.74-7.75 (d， 1H), 7.57-7.58 (d， 1H), 7.45-7.47 (m， 1H), 7.31-7.34 (m， 2H), 7.21-7.26 (d， 2H), 7.04-7.08 (m， 2H), 6.71-6.72 (d， 1H)， 6.57-6.58 (d， 1H)， 6.40-6.41 (d， 1H)， 5.16 (s, 2H) ppm。
Figure imgf000030_0002
Figure imgf000031_0001
3-氯 -4- (2-氟 -4- ( (7- (4-氟苄基 - 8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基）氨基）苯氧基） -2-氨基吡啶 的制备
制备方法同实施例 3中 4- (4- ( ( 7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢- 2，7-萘啶 -1-基） 氨基） -2-氟苯） -3- 氯 -2-氨基吡啶的合成， 不同之处在于将 2-苄基 -8-氯 -2, 7-萘啶 -1(2H)-酮改为 8氯 -2- (4-氟苄 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮。 MS: [M+H]+ = 506.0.
1H-NMR (500 M， CDC13) δ 12.01 (s, 1Η), 8.27-8.28 (d, 1H), 8.20-8.23 (dd， 1H), 7.72-7.73 (d, 1H)， 7.41-7.46 (m， 1H), 7.30-7.33 (m， 2H), 7.23-7.26 (m， 1H), 7.11-7.13 (t, 1H), 7.04-7.08 (m， 2H), 6.72-6.73 (d, 1H), 6.40-6.41 (d， 1H), 6.13-6.15 (d, 1H), 5.17 (s， 2H), 2.09 (s， 2H) ppm。
实施例 9: 化合物 9的制备
Figure imgf000031_0002
- (4-氟苯基） -4-甲基 2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈的制备
向反应瓶中加入 4-甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈 （35 g， 1 eq)， 对氟碘苯 （63 g， 1.1 eq)， 碘化亚铜 （53 g，l . l eq)， 磷酸钾 （60 g，1.2 eq)， N，N"-二甲基乙二胺 （30 mL， 1.1 eq)， 抽 充氮气三次， 向反应瓶中加入 1， 4-二氧六环（1200 mL)，抽充氮气，在室温下搅拌 15分钟， 然后升至 120 °C反应过夜， 停止反应， 抽滤掉不溶物， 滤液浓縮， 二氯甲烷为洗脱剂柱层 析得到 1- (4-氟苯基） -4-甲基 2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈 （12.5 g)。
(E) -4- (2- (二甲氨基) 乙烯基） -1- (4-氟苯基) -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 - 3-腈的制备 向圆底烧瓶中加入 1- (4-氟苯基） -4-甲基 2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈（10.3 g， 1 eq)， DMF (20 mL)， 向反应液中缓慢滴加 DMF-DMA ( 10 mL)， 滴加完毕后， 升温至 100 °C反应 4小时， 点板， 原料反应完全， 停止反应， 减压除去溶剂， 二氯甲烷与水洗涤、 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮得到粗产品 （E) -4- (2- (二甲氨基） 乙烯基） -1- (4-氟苯基） -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 - 3-腈 （7.2 g)。
2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1,8(2H,7H)-二酮的制备
向反应瓶中加入 (E) -4- (2- (二甲氨基) 乙烯基） -1- (4-氟苯基) -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 - 3- 腈 （6 g，l eq)， 浓硫酸 （10 mL)， 油浴 100 °C反应 3小时， 点板反应完全， 反应液倒入冰 水中， 加 K2C03中和调至 pH为 8， 乙酸乙酯萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤后 浓縮得到 2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1，8(2H，7H)-二酮 （3.8 g)。
8-氯 -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
称取 2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1，8(2H，7H)-二酮 (3.8 g， 1 eq)， 三氯氧磷 ( 10 mL) 和 DMF (0.5 mL) 于圆底烧瓶中， 加热至 110 °C反应 4小时后冷至室温， 旋去溶剂， 残余物用饱 和碳酸氢钠和二氯甲烷萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 柱层析得到 8- 氯—2— (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （2.4 g)。
8- (4- ((6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
制备方法同实施例 1 中 2-节基 -8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨 基） -2,7-萘啶 -1(2Η)-酮的合成， 不同之处在于将 2-苄基 -8-氯 -2,7-萘啶 -1(2Η)-酮改为 8-氯 -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮。 MS: [M+H]+ = 553.9.
1H-NMR (500 M， CDCI3) δ 11.86 (b， 1Η), 8.64 (s， 1H), 8.33-8.34 (d， 1H), 8.24-8.27 (d， 1H)， 7.59 (s, 1H)， 7.40-7.46 (m， 4H)， 7.23-7.29 (m， 4H)， 6.76-6.77 (d, 1H)， 6.47-6.49 (d, 1H)， 4.08 (s， 6H) ppm。
Figure imgf000032_0001
- ( (3-氟 -4- ((6-甲氧基 -7- (3-吗啉丙氧基)喹啉 -4-基）氧基）苯基）氨基） -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 9中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺改为 3-氟 -4- ( (6-甲氧基 -7- (3-吗啉丙氧基）喹啉 -4-基）氧基）苯胺。 MS: [M+H]+ = 553.9.
1H-NMR (500 M， CDC13) δ 12.13 (s, 1Η), 8.38-8.41 (m， 2H), 7.51-7.53 (m， 1H), 7.32-7.47 (m， 4H)， 7.25-7.30 (m， 4H)， 6.86-6.88 (d， 1H), 6.53-6.54 (d， 1H), 6.33-6.35 (m， 2H), 3.98 (s， 3H), 3.89-3.90 (m， 2H), 3.62-3.66 (m， 4H)， 2.39-2.41 (m， 6H)， 1.4-1.45 (m， 2H) ppm。
Figure imgf000033_0001
- ((3-氟 -4- ((7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基）喹唑啉 -4-基）氧基）苯基）氨基） -2- (4-氟苯 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基）喹唑啉 -4-基）氧基）苯胺（42.8 mg， l.O eq), 8-氯 -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 (27.5 mg, 1.0 eq), 三 (二亚苄基丙酮)二钯 ( 18.4 mg, 0.2 eq), 4,5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽 (23.9 mg, 0.4 eq),叔丁醇钠 ( 12.5 mg, 1.3eq) 和 1， 4-二氧六环 （10 mL)， 抽充氮气三次， 于 106 °C反应 4小时， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱层析（DCM/MeOH= 20/l )得到 8- ( (3-氟 -4- ( (7-甲氧 基—6— ( 3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮 （20 mg)。 MS: [M+H]+ = 666.8.
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.98 (b， 1H), 8.56 (s， 1H), 8.35-8.36 (d, 1H), 7.70-7.72 (d， 1H), 7.57-7.61 (m， 3H), 7.47-7.49 (m， 1H), 7.37-7.43 (m， 5H)， 7.02-7.03 (d， 1H), 6.70-6.72 (d， 1H), 4.22-4.24 (m， 2H), 3.97-4.00 (m， 3H), 3.56-3.58 (m， 4H)， 2.00-2.51 (m， 6H)， 1.96-1.97 (d， 2H) ppm。
实施例 12: 化合物 12的制备
Figure imgf000034_0001
Figure imgf000034_0002
(4- (7-苄氧基 -6-甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺的制备
向反应瓶中加入 7-苄氧基 -4-氯 -6-甲氧基喹唑啉 （11.5 g， 1 eq)、 4-氨基 -2-氟苯酚 （5.3 g， 1.1 eq)、 叔丁醇钾 （5.1 g， 1.2 eq)、 DMF (250 mL), 加热至 80 °C反应 2小时， 停止反应， 减 压去除溶剂后， 干法过柱， 得到 （4- (7-苄氧基 -6-甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺 8.1 g。
4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -6-甲氧基喹唑啉 -7-醇的制备
向反应瓶中加入 （4- (7- (苄氧基） -6-甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺 （3.91 g， 1 eq)、 甲醇 （240mL)、 Pd-C (0.4 g)， 在氢气作用下于 0°C反应 6小时， 停止反应， 过滤除去不 溶物， 浓縮后过柱得到 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -6-甲氧基喹唑啉 -7-醇 2.3 g。
3-M-4- ((6-甲氧基 -7- (2-甲氧乙氧基） 喹唑啉 -4-基）氧）苯胺的制备
向反应瓶中加入 4- (4-氨基 -2-氟苯氧基） -6-甲氧基喹唑啉 -7-醇 （200 mg， 1 eq)、 1-氯 -2-甲 氧基乙烷 （188mg，3 eq)、 碳酸钾 （183mg，3 eq)、 DMF (30 mL), 加热至 80 °C反应 2小 时， 停止反应， 过滤、 浓縮得到粗品 3-氟 -4- ((6-甲氧基 -7- (2-甲氧乙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧） 苯胺 134 mg。
8- ((3-氟 -4- ((6-甲氧基 -7- (2-甲氧乙氧基) 喹唑啉 -4-基)氧基） 苯基）氨基） -2- (4-氟 苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 11中 8- ((3-氟 -4- ((7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 3-氟 -4- ((7-甲氧 基—6— (3-吗啉丙氧基）喹唑啉 -4-基）氧基）苯胺改为 3-氟 -4- ((6-甲氧基 -7- (2-甲氧乙氧基） 喹唑啉—4-基） 氧基） 苯胺。 MS: [M+H]+ = 598.2.
1H-NMR (400 M， DMSO- e) δ 12.00 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.36-8.37 (d, 1H), 8.25-8.29 (dd， 1H), 7.72-7.74 (m， 1H)， 7.59-7.63 (m， 3H), 7.39-7.51 (m， 5H)， 6.73 (s, 1H)， 6.72 (s, 1H)， 4.34-4.36 (m， 2H), 4.00 (s， 3H), 3.76-3.79 (m， 2H), 3.50 (s， 3H) ppm。
实施
Figure imgf000035_0001
4-((7-甲氧基 -6-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉 -4-基)氧)苯胺的制备
向反应瓶中加入 4- (4-氨基苯氧基） -7-甲氧基喹唑啉 -6-醇 （200 mg，l eq)、 1-氯 -2-甲氧基 乙烷 （200 mg，3 eq)、 碳酸钾 （293 mg， 3 eq)、 DMF (30 mL)， 加热至 80 °C反应 2小时， 停止反应，过滤、浓縮得到粗品 4-((7-甲氧基 -6-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉 -4-基)氧)苯胺 120 mg。 8- ( (3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (2-甲氧乙氧基) 喹唑啉 -4-基)氧基） 苯基）氨基） -2- (4-氟 苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 11中 8- ( (3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 3-氟 -4- ( (7-甲氧 基—6— (3-吗啉丙氧基）喹唑啉 -4-基）氧基）苯胺改为 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (2-甲氧乙氧基） 喹唑啉—4-基） 氧基） 苯胺， 反应时间为 6小时。 MS: [M+H]+ = 597.9.
1H-NMR (400 M， DMSO- e) δ 11.99 (s, 1H)， 8.35-8.37 (d, 1H)， 8.25-8.29 (m， 1H)， 8.20-8.22 (d， 1H), 7.72-7.73 (d， 1H), 7.59-7.63 (m， 3H), 7.48-7.51 (m， 1H), 7.38-7.45 (m， 4H)， 7.02-7.04 (d， 1H), 6.71-6.73 (d， 1H), 4.31-4.34 (m， 2H), 4.01 (s, 3H), 3.75-3.77 (m， 2H), 3.50 (s， 3H) ppm。
Figure imgf000035_0002
- ((6, 7-二（2-甲氧乙氧基） 喹唑啉 -4-基）氧） -3-氟苯胺的制备
向 4-氨基 -2-氟苯酚 (200 mg, 2 eq) 的 DMF ( 10 mL)溶液中加入 60%的氢化钠 (94.5 mg, 3 eq)，室温下搅拌 10分钟，向体系中慢慢加入 4-氯 -6,7-二（2-甲氧基乙氧基）喹唑啉（492 mg, l eq) 的 DMF ( 15 mL)溶液， 滴加完后在室温下反应 2小时， 停止反应， 浓縮、 过柱得到
4- ( (6， 7-二 （2-甲氧乙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧） -3-氟苯胺 200 mg。
8- ((4- ((6,7-二 (2-甲氧乙氧基) 喹唑啉 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 11中 8- ( (3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 3-氟 -4- ( (7-甲氧 基—6— (3-吗啉丙氧基）喹唑啉 -4-基）氧基）苯胺改为 4- (6,7-二 （2-甲氧乙氧基）喹唑啉 -4- 基） 氧基） -3-氟苯胺， 反应时间为 6小时。 MS: [M+H]+ = 642.2.
1H-NMR (400 M， DMSO- e) δ 12.00 (s, 1H), 8.35-8.37 (d, 1H), 8.25-8.29 (m， 1H)， 7.72-7.74 (d, 1H)， 7.59-7.62 (m， 3H), 7.48-7.49 (m， 1H)， 7.41-7.45 (m， 5H)， 7.02-7.05 (d, 1H)， 6.71-6.73 (d， 1H), 4.33-4.38 (m， 4H)， 3.76-3.79 (m， 4H)， 3.70 (s， 6H) ppm。
实施例 15:
Figure imgf000036_0001
8- ((4- ((6,7-二甲氧基喹啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苄基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
制备方法同实施例 9中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺改为 4- ( (6，7-二甲氧基喹啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺。 MS: [M+H]+ = 553.0， [M-H]+ = 551.1.
1H-NMR (500 M， CDCls) δ 12.11 (s, 1H)， 8.37-8.40 (m， 2H), 7.83 (s, 1H)， 7.52-7.53 (m， 1H): 7.51-7.52 (d， 1H)， 7.39-7.47 (m， 2H), 7.24-7.31 (m， 5H)， 6.86-6.87 (d， 1H)， 6.53-6.54 (m， 2H), 4.00 (s， 3H)， 3.73 (s， 3H) ppm。
实施例 16: 化合物 16的制备
Figure imgf000037_0001
8- ((3-氟 -4- ((7-甲氧基喹啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7 -萘啶 -1(2H)- 酮的制备
制备方法同实施例 11中 8- ( (3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮， 不同之处在于将 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基）喹唑啉 -4-基）氧基）苯胺改为 3-氟 -4- ( (7-甲氧基喹啉 -4-基）氧基）苯胺。 MS: [M+H] + = 522.9.
1H-NMR (500 M, CDCls) δ 11.87 (b， 1H), 8.59-8.60 (d， 1H), 8.34-8.35 (d, 1H), 8.29-8.31 (d， 1H), 8.22-8.35 (m， 1H)， 7.49 (s， 1H)， 7.40-7.46 (m， 4H)， 7.27-7.30 (m， 1H)， 7.16-7.20 (m， 2H), 6.78-6.79 (d， 1H)， 6.47-6.50 (d， 2H), 3.98 (s, 3H) ppm。
实施例 17: 化合物 1
Figure imgf000037_0002
8- ( ( 3-氟 -4- (噻吩并 [3,2-b]吡啶 -7-基氧) 苯基） 氨基） -2- (4 -氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
制备方法同实施例 9中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苯基） —2,7-萘啶 -1(2H)-酮， 不同之处在于将 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑 啉—4-基） 氧基） 苯胺改为 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-b]吡啶 -7-基氧） 苯胺。 反应温度从 90 °C逐 渐升至 110 °C， 反应时间为 17.5小时。 MS: [M+H]+ = 498.8， [M-H]+ = 496.8.
1H-NMR (300 M， CDCls) δ 11.93 (b, 1H)， 8.57-8.60 (d, 1H)， 8.34-8.36 (d, 1H)， 8.25-8.31 (m: 1H), 7.38-7.43 (m， 4H)， 7.29-7.32 (m， 2H), 7.21-7.22 (m， 2H), 6.80-6.82 (d, 1H), 6.65-6.70 (m， 1H), 6.50-6.52 (d， 2H) ppm。
实施例 18: 化合物 18的制备
Figure imgf000038_0001
7-氯噻吩并 [3,2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯的制备
氮气保护下， 向 -78 °C的 7-氯噻吩并 [3，2-b]吡啶 （7.0 g，l eq) 的 THF ( lOO mL) 溶液中加 入正丁基锂 （24.7 mL， 2.5 M 正己烷溶液， 2 eq)。 反应 1小时后， 向体系中加入氯甲酸乙酯 ( 13.45g，3 eq)， 继续在 -78 °C反应 1小时， 反应用过量的乙醇淬灭， 慢慢升至室温， 减压 除去溶剂， 粗产品柱层析得到 7-氯噻吩并 [3，2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯 3.9
7- (2-氟 -4-硝基苯氧基） 噻吩并 [3,2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯的制备
向反应瓶中加入 7-氯噻吩并 [3，2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯（3.9 g， 1 eq)， 2-氟 -4-硝基苯酚（5.1 g， 1 eq)， 碳酸钾 （6.7 g，5 eq)， 二苯醚 （35 mL) 于 180 °C反应 5小时后， 冷至室温， 乙酸乙 酯稀释， 水洗， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤、 浓縮、 过柱得到 7- (2-氟 -4-硝基苯 氧基） 噻吩并 [3，2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯 2.9
7- (2-氟 -4-氨基苯氧基） 噻吩并 [3,2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯的制备
向反应瓶中加入 7- (2-氟 -4-硝基苯氧基） 噻吩并 [3，2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯 （2.9 g，l eq)， THF ( 120 mL)， 水（15 mL)， 于 0 °C加入浓盐酸（6 mL)， 再向体系中加入二水合氯化镍（5.15 g，3 eq)， 加热至 80 °C反应 4小时， 停止反应， 加氨水 （120 mL)， 乙酸乙酯萃取， 合并有 机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤、 浓縮、 过柱得到 7- (2-氟 -4-氨基苯氧基）噻吩并 [3，2-b]吡啶 -2-羧酸乙酯 1.5
7- (2-氟 -4- ((7- (4-氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 - 2,7-萘啶小基)氨基）苯氧基） 噻吩并 [3,2-b] 吡啶 -2-羧酸乙基的制备
制备方法同实施例 17中 8- ( (3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-b]吡啶 -7-基氧） 苯基） 氨基） -2- (4 -氟 苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-b]吡啶 -7-基氧） 苯 胺改为 7- (2-氟 -4-氨基苯氧基）噻吩并 [3,2- b]吡啶 -2-羧酸乙酯。 反应时间为 4.5小时。 MS:
[M+H]+ = 570.8.
1H-NMR (300 M， CDCls) δ 11.88 (s, 1Η), 8.50-8.51 (d, 1H), 8.34-8.36 (d， 1H), 8.21-8.27 (m: 1H), 7.75-7.77 (d, 1H), 7.58-7.60 (d， 1H), 7.21-7.22 (m， 2H), 6.80-6.82 (d， 1H), 6.65-6.70 (m， 1H), 6.50-6.52 (d， 2H) ppm。
实施例 19: 化合物 19
Figure imgf000039_0001
8- ((4- ((2- ( 1-乙基 -IH-咪唑 -4-基)噻吩并 [3,2- b]吡啶 -7-基）氧基） -3-氟苯基)氨基） -2-
(4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 17中 8- ( (3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-b]吡啶 -7-基氧） 苯基） 氨基） -2- (4 -氟 苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2-b]吡啶 -7-氧基） 苯 胺改为 4- ( (2- ( l-乙基-lH-咪唑-4-基）噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基）氧基）-3-氟苯胺。MS: [M+H]+ = 592.8, [M-H]+ = 590.8.
1H-NMR (500 M， CDCI3) δ 11.89 (s, IH), 8.48-8.50 (d， IH), 8.34-8.35 (d， IH), 8.23-8.26 (m: IH), 7.69 (s, 1H)， 7.53 (s, 1H)， 7.38-7.42 (m， 4H)， 7.28-7.30 (d, 1H)， 7.18-7.25 (m， 3H), 6.79-6.80 (d, IH)， 6.58-6.59 (d, IH), 6.49-6.50 (d， IH), 4.21-4.25 (m， 2H), 1.30-1.34 (m， 3H) ppm。
实
Figure imgf000039_0002
3-氟 -4- (噻吩并 [3,2 -d]嘧啶 -4-基氧）苯胺的制备 向反应瓶中加入 4-氯噻吩并 [3，2 -d]嘧啶 （1 g， 1 eq)， 4-氨基 -2-氟苯酚 （0.745 g， 1 eq)， 碳 酸钾 （1.62 g，2 eq)， 乙腈 （80 mL)， 抽充氩气三次， 在氩气保护下于 90 °C反应 17小时， 点板， 原料反应完全， 停止反应， 抽滤、 浓縮、 过柱得到 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2 -d]嘧啶 -4-基 氧） 苯胺 0.74 g。
8- ((3-氟 -4- (噻吩并 [3,2-d]嘧啶 -4-氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 的制备
制备方法同实施例 9中 8- (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苯基） —2,7-萘啶 -1(2H)-酮， 不同之处在于将 3-氟 -4- ( (7-甲氧基 -6- (3-吗啉丙氧基） 喹唑 啉—4-基） 氧基） 苯胺改为 3-氟 -4- (噻吩并 [3，2 -d]嘧啶 -4-基氧） 苯胺。 反应时间为 3小时。 MS: [M+H]+ = 499.8.
1H-NMR (500 M， CDCls) δ 11.86 (b， 1Η), 8.72 (s, 1H), 8.33-8.34 (d， 1H), 8.22-8.25 (m， 1H): 7.96-7.97 (m， 1H), 7.57-7.58 (m， 1H), 7.39-7.42 (m， 3H), 7.21-7.29 (m， 4H)， 6.76-6.77 (d， 1H)， 6.47-6.49 (d， 1H) ppm。
实施例 21: 化合物 21的制备
制备方法包括：
Figure imgf000040_0001
8- ( (4- ((2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4 -氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮
此方法同实施例 3中 4- (4- ( (7-苄基 -8-氧 -7,8-二氢 - 2,7-萘啶 -1-基）氨基） -2-氟苯） -3-氯 -2- 氨基吡啶的合成， 不同之处在于将 2-苄基 -8-氯 -2, 7-萘啶 - 2H)-酮改为 8-氯 -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮。
或
Figure imgf000041_0001
3-氯 -4- (2-氟 -4- ((7- (4-氟苯基） -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基）氨基）苯氧基） -2-酰胺吡 啶的制备
向反应瓶中加入 8-氯 -2-C4-氟苯基 )-2，7-奈啶 -1C2H)-酮 （824mg， l eq)， 4- (4-氨基 -2-氟苯氧 基） -3-氯 -2-酰胺吡啶 （845 mg， l eq)， 异丙醇 （30mL)， 浓盐酸 （0.1 mL) 电磁搅拌， 设 外温 90 °C反应 4小时， 有固体析出， 过滤， 洗涤， 滤饼柱层析得 3-氯 -4- (2-氟 -4- ((7- (4- 氟苯基） —8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基） 氨基） 苯氧基） -2-酰胺吡啶 （669mg)。
8- ((4- ((2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
室温下向 3-氯 -4- (2善 4- ((7- (4-氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） -2-酰胺吡啶（520 mg， leq), 乙腈（lOOmL), 乙酸乙酯（lOOmL), 水（20mL)， 搅拌 5 min 后向反应中分批加入醋酸碘苯（644mg，2eq)， 抽充氮气， 氮气保护下反应 2小时， 点板反 应完全， 停止反应， 加水 （lOOmL), 乙酸乙酯 （100mL*5)萃取， 合并有机相， 无水硫酸 钠干燥， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 8- ((4- ((2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟 苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （344mg)。 MS: [M+H]+ = 491.8， [M-H]+ = 489.9.
1H-NMR (500 M， CDC13) δ 11.83 (s, 1H), 8.32-8.34 (d， 1H), 8.17-8.20 (dd， 1H), 7.78 (s, 1H): 7.37-7.41 (m， 2H), 7.34-7.36 (m， 1H), 7.23-7.26 (m， 4H)， 7.07-7.10 (t， 1H), 6.77-6.78 (d， 1H)， 6.47-6.50 (d， 1H), 5.04 (s， 2H) ppm。
实施例 22: 化合物 22的制备
Figure imgf000042_0001
4-氯 -3-硝基吡啶 -2-氨基的制备
取浓硫酸 （40 mL) 于冰浴下冷却， 向体系中缓慢滴加 4-氯 -B比啶 -2-氨基 （5g， leq)， 15 min 以后， 向体系中加入硝酸 （2.6 mL) 与硫酸 （5 mL) 的混合物， 自然升温至室温下反应 3 小时， 停止反应， 反应液倒入冰中， 用氨水调节 pH = 5左右， 过滤出固体， 固体用二氯甲 烷柱层析分离后得到 4-氯 -3-硝基吡啶 -2-氨基 （ 1.2 g)。
N， N-二叔丁基 （4-氯 -3-硝基吡啶 -2-基） 氨基甲酸的制备
室温下取 4-氯 -3-硝基吡啶 -2-氨基（1.09 g，l eq)， DMAP ( 140 mg， 0.2 eq)， Boc20 (3.78g, 3 e) 溶于二氯甲烷 （50 mL) 中， 氮气保护下反应过夜， 点板反应完全， 停止反应， 用饱和 碳酸氢钠溶液 （50 mL) 洗， 二氯甲烷 （50 mL * 3 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤、 浓縮， 粗品柱层析分离得到 N， N-二叔丁基（4-氯 -3-硝基吡啶 -2-基）氨基甲酸（1.25 g)。
4- (4-氨基 -2-氟苯） -3-硝基吡啶 -2- (N, N-二叔丁基氨基甲酸） 的制备
取 4-氨基 -2-氟苯酚 (386 mg, leq) 加入 DMF (20 mL) 和叔丁醇钾 (375 mg, 1.1 eq) 后在 氮气保护下搅拌 30 min，加入 N， N-二叔丁基（4-氯 -3-硝基吡啶 -2-基）氨基甲酸（1.25 g， 1.1 eq) 的 DMF ( lO mL)溶液， 慢慢升温至 90 °C下反应过夜， 停止反应， 减压除去溶剂， 残 余物柱层析分离得到 N， N-二叔丁基 -4- (4-氨基 -2-氟苯） -3-硝基吡啶 -2-氨基甲酸（750 mg)。 8- ( (4- ( (2- (N, N-二叔丁基氨基甲酸） -3-硝基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 4- (4-氨基 -2-氟苯） -3-硝基吡啶 -2- (N， N-二叔丁基氨基甲酸） (700 mg, 1.0 eq), 8-氯 -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 (420 mg, 1.0 eq), 三 (二亚苄基丙酮)二钯 (350 mg，0.2 eq)， 4,5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽（220 mg， 0.4 eq)， 叔丁醇钠（240 mg， 1.4eq) 和 1，4-二氧六环（50 mL)， 抽充氮气三次， 于 100 °C反应过夜， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 8- ( (4- ( (2- (N， N-二叔丁基氨基甲酸） -3-硝基吡啶 -4- 基） 氧基） -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 (390 mg)。
8- ((4- ((2-氨基 -3-硝基吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
向 8- ( (4- ( (2- (N， N-二叔丁基氨基甲酸） -3-硝基吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基）-2，7-萘啶 -1(2H)-酮（750 mg， 1 eq)中加入三氟乙酸（2 mL)和二氯甲烷（ 10 mL)， 氮气保护下反应 3小时。 停止反应， 饱和碳酸钾溶液 （15 mL) 洗， 二氯甲烷 （20 mL * 3 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤、 浓縮， 粗产品柱层析分离得到 8- ( (4- ( (2- 氨基 -3-硝基吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（230 mg)。 8- ((4- ((2,3-二氨基吡啶 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
向反应瓶中加入 8- ( (4- ( (2-氨基 -3-硝基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 (50 mg, 1 eq), 二水合二氯亚锡（80 mg)， 盐酸 (0.2 mL), 乙醇 ( 10 mL), 氮气保护下反应 2.5小时， 停止反应， 向溶液中加入饱和碳酸钾溶液（20 mL)， 二氯 甲烷 （100 mL * 3 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤、 浓縮， 粗产品柱层析分离 得到 8- ( (4- ( (2,3-二氨基吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮 （43 mg)。 MS: [M+H]+ = 473.1, [M-H]+ = 471.1.
1H-NMR (300 M， DMSO- e) δ 11.91 (s, 1H), 8.32-8.34 (d， 1H), 8.20-8.25 (d, 1H), 7.69-7.72 (d, 1H), 7.56-7.60 (m, 2H), 7.37-7.43 (m, 3H), 7.20-7.22 (d, 1H), 7.06-7.13 (t, 1H), 7.00-7.02 (d, 1H), 6.69-6.71 (d, 1H), 5.89-5.91 (d， 1H), 5.55 (s， 2H), 4.48 (s， 2H) ppm。
实施例 23: 化合物
Figure imgf000043_0001
8- ( (3-氟 -4- ( (2-氧代 -2,3-二氢 -1H-咪唑并 [4,5- b]吡啶 -7-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4- 氟苯基） -2，7-萘啶 -1(2H)-酮
向反应瓶中加入 8- ( (4- ( (2,3-二氨基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（30 mg， leq), 二（1H-咪唑 -1-基） 甲酮（13 mg， 1.2 eq)和四氢呋喃（15 mL), 氩气保护下升温回流并反应过夜。 点板反应完全， 停止反应， 减压除去溶剂， 干法 过柱得到 8- ( (3-氟 -4- ( (2-氧代 -2,3-二氢 -1H-咪唑并 [4，5-b]吡啶 -7-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （15 mg)。 MS: [M+H]+ = 499.1, [M-H]+ = 497.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.98 (s, 1H), 11.37 (s, 1H), 11.23 (s, 1H), 8.34-8.35 (d, 1H): 8.27-8.30 (m， 1H)， 7.75-7.76 (d, 1H)， 7.70-7.72 (d, 1H)， 7.57-7.60 (m， 2H), 7.46-7.47 (d, 1H) 7.39-7.42 (t， 2H), 7.28-7.32 (t， 1H)， 7.02-7.04 (d， 1H)， 6.70-6.72 (d， 1H)， 6.33-6.34 (d， 1H) ppm。 实施例 24: 化合物 24的制备
Figure imgf000044_0001
8- (2-氟 -4- ( (7- (4-氟苯基） -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基） 氨基） 苯氧基） 吡啶并 [2，3-B] 吡嗪 -3 (4H)-酮
向反应瓶中加入 8- ( (4- ( (2,3-二氨基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（30 mg， leq),乙基 -2-氧乙酸酯（2.3 mL， 50 % 甲苯溶液）和乙醇（30 mL)， 氩气保护下升温回流并反应过夜。 点板反应完全， 停止反应， 减压除去溶剂， 干法过柱得 到 8- (2-氟 -4- ( (7- (4-氟苯基） -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基）氨基）苯氧基）吡啶并 [2，3-B] 吡嗪 -3 (4H) -酮 （15 mg)。 MS: [M+H]+ = 511.1, [M-H]+ = 509.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.98 (s, 1H), 8.32-8.36 (m， 1H), 8.23-8.29 (m， 2H), 7.71-7.72 (d， 1H), 7.58-7.59 (m， 2H), 7.39-7.42 (m， 3H), 7.29-7.31 (m， 1H), 7.03-7.04 (d， 1H)， 6.71-6.72 (m, 2H) ppm。
Figure imgf000044_0002
-氯 -3-甲基吡啶 -2-羧酸的制备
向茄形瓶中加入 4-氯 -吡啶 -2-羧酸（ 1.50g， leq), TMEDA ( l.Og, 1.5 eq)，无水 THF (20 mL)， 降温至 -78 °C， 滴入 n-BuLi ( 10 mL，2.5 M)， 再搅拌 2小时。 滴入碘甲烷 （2.0 g)， 待其自 然升至室温。 加入饱和氯化铵溶液终止反应， 加水， 乙酸乙酯萃取。 萃取液干燥、 浓縮得 到 4-氯 -3-甲基吡啶 -2-羧酸 （0.53 g)。
4-氯 -3-甲基吡啶 -2-酰胺的制备
向反应瓶中加入 4-氯 -3-甲基吡啶 -2-羧酸 （1.70 g)， S0C12 ( 10 mL)， 于 80 °C反应 1 小时 后回收 S0C12， 加入二氯甲烷 （20 mL) 溶解固体， 加入浓氨水 2 (mL)， 有固体析出， 过 滤， 得 4-氯 -3-甲基吡啶 -2-酰胺 （1.1 g)。
4- (2-氟 -4- ((7-氟苯基) -8-氧代 -7, 8-二氢 -2, 7-萘啶小基） 氨基） 苯氧基） -3-甲基 -2-吡啶 甲酰胺的制备
向反应瓶中加入 8- ( (3-氟 -4-羟基苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2，7-萘啶-1 (2H) -酮 （0.36 g，l eq)， 4-氯 -3-甲基吡啶 -2-酰胺 （0.17 g，l eq)， 叔丁醇钾 （0.22 g，2 eq)， DMF ( lO mL), 电磁搅拌， 设外温 110 °C反应过夜。 过滤， 回收 DMF， 粗品柱层析过柱得到 4- (2-氟 -4- ( (7-氟苯基） -8-氧代 -7， 8-二氢 -2， 7-萘啶 -1-基）氨基）苯氧基） -3-甲基 -2-吡啶甲酰胺（0.15 g)
8- ((4- ((2-氨基 -3-甲基吡啶 -4-基) 氧基） -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -2, 7-萘啶 -1 (2H) -酮的制备
向反应瓶中加入 4- (2-氟 -4- ( (7-氟苯基） -8-氧代 -7， 8-二氢 -2， 7-萘啶 -1-基）氨基） 苯氧基） -3-甲基 -2-吡啶甲酰胺 (0.40 g, 1 eq), 乙腈 ( lO mL), 水 （2 mL)， 加入醋酸碘苯 (052 g, 2 eq)， 常温搅拌 2小时。 停止反应， 回收溶剂， 粗品柱层析过柱得到 8- ( (4- ( (2-氨基 -3-甲 基吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -2，7-萘啶-1 (2H) -酮 (0.11 g) MS: [M+H]+ = 472.2.
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.93 (s, 1H)， 8.33-8.34 (d, 1H)， 8.21-8.24 (dd， 1H)， 7.70-7.71 (d, 2H), 7.65-7.66 (d, 2H), 7.38-7.42 (t， 2H), 7.14-7.17 (t， 1H)， 7.01-7.02 (d, 1H)， 6.70-6.71 (d， 1H), 5.94-5.96 (m， 1H), 5.72-5.78 (m， 3H), 5.19-5.22 (d， 1H), 2.04 (s, 3H) ppm。 实施例 26: 化合物 26的制备
Figure imgf000046_0001
8- ((4- (苄氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 4- (苄氧基) -3-氟苯胺 (325.9 mg, 1.0 eq), 8-氯 -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 (412 mg, 1.0 eq), 三 (二亚苄基丙酮)二钯 （276 mg， 0.2 eq)， 4,5-双二苯基膦 -9,9- 二甲基氧杂蒽 (347 mg, 0.4 eq), 叔丁醇钠 ( 173 mg, 1.2eq) 和 1, 4-二氧六环 （70 mL)， 抽 充氮气三次， 于 106 °C反应 19小时， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱 层析 (PE/EA = 20/1-6/1 ) 得到 8- ( (4- (苄氧基) -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮 （340 mg)。
8- ((3-氟 -4-羟基苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 8- ( (4- (苄氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（340 mg, 1 eq), 钯碳 （102 mg)， 甲醇 （40 mL)， 抽充氢气， 氢气保护下在室温反应 3小时， 点 板原料消失， 停止反应， 抽滤， 浓縮， 过柱 （PE/EA = 4/1-3/1 ) 得 8- ( (3-氟 -4-羟基苯基） 氨基） —2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 ( 85 mg)
4- (2 -氟 -4- ((7- (4 -氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） -3-碘 -2-氰基 吡啶的制备
向微波瓶中加入 8- ( (3-氟 -4-羟基苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （100 mg， 1 6 )，4-氯-3-碘4-氯-2-氰基吡啶（109 1¾， 1.5 eq)，叔丁醇钾（46 mg， 1.5 eq)， DMF(2.5 mL)， 微波下于 150 °C反应 1.5小时后点板反应未完全， 继续反应 1.5小时， 过滤， 浓縮， 粗品柱 层析过柱 (PE/EA = 4/1 ) 得到 4- (2 -氟 -4- ( (7- (4 -氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） —3-碘 -2-氰基吡啶 （91 mg)。
4- (2 -氟 -4- ((7- (4 -氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） -3-碘 -2-酰胺 吡啶的制备 向反应瓶中加入 4- (2 -氟 -4- ( (7- (4 -氟苯基） -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基） 氨基） 苯氧 基） —3—碘—2-氰基吡啶 (91 mg， 1 eq)， 2，2，6，6-四甲基 -N-哌啶基小醇 ( 121 mg， 5 eq)， 甲醇 (20 mL), 加热回流反应 24小时， 停止反应， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 4- (2 -氟 -4- ( (7- (4 -氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） -3-碘 -2-酰胺吡啶 （70 mg)。
8- ( (4- ((2-氨基 -3-碘吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7 -萘啶 -1(2H)- 酮的制备
室温下向 4- (2 -氟 -4- ( (7- (4 -氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） -3- 碘 -2-酰胺吡啶 （70 mg， leq)， 乙腈（15 mL)， 水 （3 mL)， 搅拌 5 min后向反应中加入醋 酸碘苯 （74 mg， 2 eq), 抽充氮气， 氮气保护下反应 1.5小时， 点板反应完全， 停止反应， 加水 （20 mL)， 乙酸乙酯 （20 mL*5 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 8- ( (4- ( (2-氨基 -3-碘吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟 苯基） -2,7 -萘啶 -1(2H)-酮 （22 mg)。 MS: [M+H]+ = 584.0.
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.98 (s, 1H), 8.32-8.36 (d, 1H), 8.25-8.29 (m， 1H)， 7.70-7.76 (m， 2H), 7.57-7.59 (m， 2H), 7.46-7.47 (m， 1H)， 7.40-7.42 (m， 2H), 7.22-7.24 (m， 1H)， 7.02-7.04 (d， 1H)， 6.70-6.72 (m， 1H)， 6.17 (s, 1H)， 5.80-5.82 (d， 1H) ppm。
Figure imgf000047_0001
Figure imgf000048_0001
- (4-氟苯基） -4,6-二甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈的制备
向反应瓶中加入 2-氰基 -N- (4-氟苯基） 乙酰胺 （1 g， 1 eq) 和乙醇 （22 mL)， 再向体系中 加入戊烷 -2,4-二酮（0.56 g， 1 eq),加热至 78 °C， 固体逐渐溶解， 再向体系中加入哌啶（0.28 mL)， 反应 4小时后停止反应， 冷至室温， 有固体析出， 抽滤， 用少量乙醇洗涤得到 1- (4- 氟苯基） —4,6-二甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈 （1.56 g)。
(E) -4- (2- (二甲氨基) 乙烯基） -1- (4-氟苯基) -6-甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈的制 备
向反应瓶中加入 1- ( 4-氟苯基） -4,6-二甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈 （1.14 g， 1 eq) , DMF-DMA (0.56 g， 1 eq), DMF ( lO mL), 加热至 120 °C反应 1小时， 点板反应完全， 旋 去溶剂， 二氯甲烷与水洗涤、 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 过柱得 (E) -4- (2- (二甲氨基)乙烯基） -1- (4-氟苯基) -6-甲基 -2-氧代 -1,2-二氢吡啶 -3-腈 (0.8 g)。 2- (4-氟苯基) -3-甲基 -2,7-萘啶 -1, 8 (2H, 7H ) -二酮的制备
向反应瓶中加入 E) -4- (2- (二甲氨基） 乙烯基） -1- (4-氟苯基） -6-甲基 -2-氧代 -1,2-二氢 吡啶 -3-腈 （0.8 g， l eq)， 再缓慢加入浓硫酸 （10 mL)， 反应放热， 滴加完毕以后， 加热至 120 °C反应 2小时， 点板反应完全， 停止反应， 冷却， 用饱和碳酸钾中和， 二氯甲烷萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮得粗产品 2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1， 8
(2H, 7H) -二酮 （0.7 g)。
8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 2- (4-氟苯基) -3-甲基 -2,7-萘啶 -1， 8 (2H, 7H) -二酮 (0.7 g, 1 eq), 三氯氧 磷 （10 mL)， 加热至 120 °C反应 2小时， 回收三氯氧磷， 油状物用二氯甲烷溶解， 饱和碳 酸氢钠中和调至 pH为 8， 分液， 水相用二氯甲烷萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽 滤， 浓縮， 过柱得 8-氯 -2- (4-氟苯基) -3-甲基 -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮 (160mg)。
叔丁基 -4- (4-氨基 -2-氟苯） -2-氰基 -5',6'二氢 -[3,4'-联吡啶 ]-1' (2Ή) -羧酸的制备 向反应瓶中加入 4- (4-氨基 -2-氟苯） -3-碘 -2-氰基吡啶 （355 mg，l eq)， 叔丁基 -4- (4,4,5,5- 四甲基 -1，3，2-二氧杂硼烷 -2-基） -5,6-二氢 -1 (2H) -羧酸 （ 113 mg， 1.3 eq)， 四三苯基膦化钯 (32.5 mg, 0.1 eq), 在氩气保护下抽真空， 氩气保护下搅拌约 15分钟， 向体系中加入 DME (20mL)， 再向体系中加入碳酸钠 （150mg) 的水 （2mL) 溶液， 抽充氩气， 氩气保护下 慢慢升温至 90 °C下反应过夜， 停止反应， 浓縮， 过柱得到叔丁基 -4- (4-氨基 -2-氟苯） -2- 氰基 -5'，6'-二氢 -[3，4'-联吡啶 ]-Γ (2Ή) -羧酸 （130mg)。
叔丁基二氰基 -4- (2-氟 -4- ((7- (4 -氟苯基) -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基） 苯氧基） -5',6' -二氢-[3,4'-联吡啶]-1' (2Ή) -羧酸的制备
向反应瓶中加入叔丁基 -4- (4-氨基 -2-氟苯） -2-氰基 -5'，6'-二氢 -[3，4'-联吡啶 ]-Γ (2Ή) -羧酸 (200 mg, 1.0 eq), 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -8，8a-二氢 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（ 160 mg， 1.0 eq), 三 (二亚苄基丙酮)二钯（90mg，0.2eq)， 4，5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽（56 mg， 0.4 eq)， 叔丁醇钠（70mg， 1.5eq)和 1， 4-二氧六环（50mL)， 抽充氮气三次， 于 106 °C反应 5小时， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤，浓縮， 粗品硅胶柱层析得到叔丁基二氰基 -4- (2-氟 -4- ((7- (4-氟苯基） -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基）氨基）苯氧基） -5'，6' -二氢- [3，4'-联吡啶] -Γ (2Ή) -羧酸 (160 mg)o
叔丁基二甲酰 -4- (2-氟 -4- ((7- (4 -氟苯基) -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基） 氨基） 苯氧基） -5',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1' (2Ή) -羧酸的制备
向反应瓶中加入叔丁基二氰基 -4- (2-氟 -4- ((7- (4-氟苯基） -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基) 氨基） 苯氧基） -5'，6' -二氢 - [3，4'-联吡啶 ] -Γ (2Ή) -羧酸 (180mg，l eq)， 2,2,6,6-0 甲基 -N-哌啶基 -1-醇 （1.8 g)， 二氯甲烷 （36mL)， 加热回流反应过夜， 停止反应， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到叔丁基二甲酰 -4- (2-氟 -4- ((7- (4-氟苯基） -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7- 萘啶 -1-基） 氨基） 苯氧基） -5'，6'-二氢 - [3，4'-联吡啶 ]-Γ (2Ή) -羧酸 （142mg)。
叔丁基二氨基 -4- (2-氟 -4- ((4- (4 -氟苯基) -6甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1 -基) 氨基） 苯氧基） -5',6'-二氢-[3,4'-联吡啶]-1' (2Ή) -羧酸的制备
室温下向叔丁基二甲酰 -4- (2-氟 -4- ((7- (4-氟苯基） -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基） 氨基） 苯氧基）—5'，6'-二氢 - [3，4'-联吡啶 ]-Γ (2Ή) -羧酸 (30 mg, leq), 乙腈 （4mL)， 乙酸 乙酯 （4mL)， 水 （2mL)， 搅拌 5 min后向反应中加入三氟醋酸碘苯 （37.9 mg， 2 eq)， 抽 充氮气， 氮气保护下反应 8小时， 点板反应完全， 停止反应， 加水 （20 mL)， 饱和碳酸氢 钠 （20mL) 洗涤， 二氯甲烷 （50 mL*3 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓 縮， 粗品硅胶柱层析得到叔丁基二氨基 -4- (2-氟 -4- ( (4- (4 -氟苯基） -6甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1 -基）氨基）苯氧基） -5'，6'-二氢- [3，4'-联吡啶] -Γ (2Ή) -羧酸（6 mg)。 MS: [M+H]+ = 653.2, [M-H]+ = 651.2
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.86 (s, 1H), 8.28-8.29 (d， 1H), 8.19-8.21 (d, 1H), 7.71-7.72 (d， 1H)， 7.46-7.49 (m， 2H), 7.36-7.42 (m， 3H), 7.11-7.15 (t， 1H), 6.89-6.90 (d， 1H), 6.64 (s， 1H)， 5.86-5.87 (d, 1H), 4.30-4.32 (t， 1H), 3.94 (s， 2H), 3.52-3.55 (m， 2H), 2.25 (s， 2H), 1.99 (s， 3H), 1.40 (s， 9H) ppm。
实施例 28: 化合 28的制备
Figure imgf000050_0001
8- ((4- ((6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苄基) -3-甲基 -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺（lOO mg, l.O eq), 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -8，8a-二氢 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（92.2 mg， l.O eq), 三 (二亚苄基丙酮)二钯 (58.4 mg， 0.2 eq)， 4,5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽（52 mg， 0.4 eq)， 叔丁醇钠 (39.6 mg,
1.3eq) 和 1， 4-二氧六环 （20 mL)， 抽充氮气三次， 于 110 °C反应 4小时， 点板反应完全， 冷至室温， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱层析 （DCM / MeOH = 20/l ) 得到 8- ( (4- ( (6，7-二甲 氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苄基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（54.0 mg), MS: [M+H]+ = 568.1， [M-H]+ = 566.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 11.90 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.30-8.31 (d, 1H), 8.23-8.27 (dd，
1H), 7.58 (s， 1H), 7.47-7.51 (m， 3H), 7.36-7.43 (m， 4H)， 6.90-6.92 (d， 1H), 6.66 (s， 1H), 3.99 (s，
6H)， 1.99 (s， 3H) ppm。
实施例 29: 化合物 29的制备
Figure imgf000051_0001
8- ((3-氟 -4- ((7-甲氧基 -6- (3-吗琳丙氧基) 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟 苯基） -3-甲基 2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 28中 8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苄基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯胺改为 3-氟 -4- ( (6-甲氧基 -7- (3-吗啉丙氧基） 喹啉 -4-基） 氧基） 苯 胺。 MS: [M+H]+ = 681.2, [M-H]+ = 679.1.
1H-NMR (500 M， CDCls) δ 11.72 (b， 1H), 8.60 (s, 1H), 8.27-8.30 (d， 1H), 8.22-8.25 (dd， 1H), 7.59 (s， 1H), 7.38-7.41 (m， 2H), 7.18-7.29 (m， 4H)， 6.67-6.67 (d， 1H), 6.35 (s， 1H)，
4.27-4.30 (m， 2H), 4.03 (s, 3H), 3.70-3.73 (m， 4H)， 2.50-2.59 (m， 5H)， 2.03-2.04 (m， 2H), 1.84 (s, 3H)， 1.23-1.26 (m, 2H) ppm.
实施例 30: 化合物 30的制备
Figure imgf000051_0002
8- ((3-氟 -4- ((6-甲氧基 -7- (2-甲氧乙氧基) 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟 苯基） -3-甲基 2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 28中 8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苄基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯胺改为 3-氟 -4- ( (6-甲氧基 -7- (2-甲氧乙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） 苯胺。 MS: [M+H]+ = 612.2.
1H-NMR (400 M， DMSO- 6) δ 12.00 (s, 1H), 8.57 (s, 1H), 8.26-8.32 (m， 2H), 7.39-7.59 (m， 8H)， 6.92-6.93 (d， 2H), 4.35 (s， 2H), 4.00 (s， 3H), 3.78 (s， 2H), 3.50 (s， 3H), 2.00 (s， 3H) ppm. 实施例 31: 化合物 31的制备
Figure imgf000052_0001
8- ((4- ((6,7-二 (2-甲氧乙氧基) 喹唑啉 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -3-甲基- 2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 28中 8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苄基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯胺改为 4- ( (6，7-二 （2-甲氧乙氧基） 喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯胺。 MS: [M+H]+ = 656.2.
1H-NMR (400 M, DMSO- e) ^ 11.93 (s， lH) , 8.57 (s, IH), 8.25-8.32 (m, IH), 7.62 (s, 1H)， 7.37-7.55 (m， 8H)， 6.92-6.93 (d， IH), 6.67 (s, IH), 4.33-4.38 (m， 4H)， 3.76-3.79 (m， 4H)， 3.37 (s， 6H)， 2.00 (s， 3H) ppm.
实施例 32: 化合 32的制备
Figure imgf000052_0002
8- ((4- ((6,7-二甲氧基喹啉 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苄基) -3-甲基 -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 28中 8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苄基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺改为 4- ( (6，7-二甲氧基喹啉 -4-基）氧基） -3-氟苯胺。 MS: [M+H]+ = 567.1, [M-H]+ = 565.1.
1H-NMR (500 M， CDCls) δ 11.01 (s， IH), 8.37-8.40 (m， IH), 8.33-8.34 (d， IH), 7.82 (s， 1H)， 7.48-7.51 (m， 2H), 7.24-7.31 (m， 5H)， 6.78-6.79 (d, 1H)， 6.41-6.42 (m， 2H), 6.35 (s, 1H)， 4.00 (s， 3H)， 3.73 (s， 3H), 2.06 (s， 3H) ppm。
实施例 33: 化合物 33的制备
Figure imgf000053_0001
((4- ( (2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4 -氟苯基） -3-甲基 - -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 21中 8- ( (4- ( (2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4 -氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 8-氯 -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮改为 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基- -2,7-萘啶 -1(2H)-酮。 MS: [M+H]+ = 506.1， [M-H]+ = 504.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- 6) δ 11.90 (s, 1H), 8.25-8.30 (m， 2H), 7.74-7.75 (d, 1H)，
7.40-7.50 (m， 3H), 7.25-7.27 (t， 2H), 6.91-6.92 (m， 1H)， 6.35 (s, 2H), 5.92-5.93 (d, 2H), 3.27 (s， 3H) ppm。
实施例 34: 化合物 34的
Figure imgf000053_0002
8- ((4- ((3-氯吡啶 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮的制备
向微波瓶中加入 3-氯 -4- (2-氟 -4- ( (7- (4 -氟苯基) -6-甲基 -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基) 氨基）苯氧基） -2-氰基吡啶（11.5 mg)， PPA ( l mL), 于微波下 140 °C反应 1小时， 加冰， 加水 （25 mL)， 乙酸乙酯 （30 mL * 3 ) 萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 过柱得 8- ( (4- ( (3-氯吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2,7-萘 啶 -1(2H)-酮 （ 12 mg)。 MS: [M+H]+ = 491.0， [M-H]+ = 489.0.
1H-NMR (500 M， DMSO- e) δ 11.94 (s， 1H), 8.65 (s， 1H), 8.36-8.37 (d， 1H), 8.30-8.34 (m， 2H), 7.47-7.52(m, 3H), 7.40-7.43 (t， 2H), 7.33-7.37 (t， 1H), 6.92-6.93 (d, 1H), 6.78-6.80 (d， 1H)， 6.66 (s， 1H), 1.99 (s， 3H) ppm。
实施例 35: 化合物 35的制备
Figure imgf000054_0001
8- ((4- ((2,3-二氨基吡啶 -4-基) 氧基） -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -3-甲基 - 2,7-萘 啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 22中 8- ( (4- ( (2,3-二氨基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4- 氟苯基） - 2，7萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 8-氯 -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮改为 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基- -2,7-萘啶 -1(2H)-酮。 MS: [M+H]+ = 487.1， [M-H]+ = 485.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 11.83 (s, 1H), 8.27-8.28 (d， 1H), 8.20-8.23 (dd， 1H)，
7.46-7.49 (m， 2H), 7.35-7.43 (m， 3H), 7.20-7.22 (d, 1H)， 7.06-7.10 (t， 1H)， 6.87-6.89 (d, 1H)， 6.63 (s, 1H)， 5.90-5.91 (d, 1H)， 5.55 (s, 2H), 4.47 (s, 2H), 1.98 (s, 3H) ppm。
实施例 36: 化合
Figure imgf000054_0002
8- ((3-氟 -4- ((2-甲基 -3H-咪唑并 [4,5- b]吡啶 -7-基)氧基）苯基）氨基） -2- (4-氟苯基) -3- 甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 8- ( (4- ( (2,3-二氨基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲基 - 2，7-萘啶 -1(2H)-酮 (35 mg), PPA ( 1.5 mL), 乙酸 (0.3 mL), 混合后在氩气保护 下升至 140 °C反应 6小时， 停止反应， 向体系中加入饱和碳酸钾 （15 mL)， 二氯甲烷 （50 mL * 3 )萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 过柱得 8- ( (3-氟 -4- ( (2-甲基 -3H-咪唑并 [4,5- b]吡啶 -7-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮 （15 mg)。 MS: [M+H]+ = 511.1, [M-H]+ = 509.1.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 11.90 (s, 1H)， 8.28-8.30 (m， 2H), 8.07-8.08 (d, 1H)， 7.48-7.50 (m， 3H), 7.40-7.43 (m， 2H), 7.30-7.31 (t， 1H)， 6.90-6.92 (d, 1H)， 6.65 (s, 1H)， 6.44-6.45 (d， 1H)， 3.50 (s， 3H), 1.99 (s， 3H) ppm。
实施例 37: 化合物 37的制备
Figure imgf000055_0001
8- ((3-氟 -4- ((2-氧代 -2,3-二氢 -1H-咪唑并 [4,5-b]吡啶 -7-基） 氧基） 苯基） 氨基） -2- (4- 氟苯基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 23中 8- ( (3-氟 -4- ( (2-氧代 -2,3-二氢 -1H-咪唑并 [4,5- b]吡啶 -7-基）氧基） 苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 8- ( (4- ( (2，3-二 氨基吡啶 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） - 2，7萘啶 -1(2H)-酮改为 8- ( (4- ( (2,3-二氨基吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲基 - 2,7-萘啶 -1(2H)- 酮。 MS: [M+H]+ = 513.1， [M-H]+ = 511.1.
1H-NMR (300 M， DMSO- e) δ 11.91 (s, 1H), 11.39 (s, 1H), 11.26 (s, 1H), 8.26-8.30 (m， 2H): 7.74-7.76 (d， 1H), 7.26-7.39 (m， 6H)， 6.91-6.93 (d， 1H), 6.67 (s, 1H), 6.32-6.34 (d, 1H), 1.99 (s， 3H) ppm。
Figure imgf000055_0002
- ((4- ((2-氨基 -3-碘吡啶 -4-基) 氧基） -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -3-甲基 -2,7 -萘 啶 -1(2H)-酮的制备
制备方法同实施例 26中 8- ( (4- ( (2-氨基 -3-碘吡啶 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4- 氟苯基） -2，7 -萘啶 -1(2H)-酮的合成， 不同之处在于将 8-氯 -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮改为 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基 - -2，7-萘啶 -1(2H)-酮。 MS: [M+H]+ = 598.0.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 11.90 (s, 1H), 8.24-8.30 (m， 2H), 7.72-7.73 (d, 1H)， 7.40-7.50 (m， 5H)， 7.20-7.24 (t， 1H)， 6.90-6.91 (d, 1H)， 6.65 (s, 1H)， 6.16 (s, 2H), 5.79-5.80 (d: 1H), 2.00 (s， 3H) ppm o
实施例 39: 化 39的制备
Figure imgf000056_0001
3- (溴甲基) -8-氯 -2- (4 -氟苯基) -2,7 -萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 3-甲基 -8-氯 -2-(4-氟苯基 )-2，7-奈啶 -1(2H)-酮 （2.88 g， 1 eq)， NBS ( 1.99 g), AIBN (0.5 g)， 四氯化碳 （30 mL)， 电磁搅拌， 设外温 50 °C， 光照使 CC14回流。 3小时后 停止反应， 回收溶剂， 用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱， 得 3- (溴甲基） -8-氯 -2- (4 -氟苯基） -2，7 -萘啶 -1(2H)-酮 (0.74g) o
8-氯 -2- (4-氟苯基） -3- (吗啉甲基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中， 加入 3- (溴甲基) -8-氯 -2-(4-氟苯基 )-2，7-奈啶 -1(2H)-酮（0.35 g， 1 eq)， DCM (20 mL)， 电磁搅拌， 冰水浴冷却。 加入吗啉 （0.3 g)， 电磁搅拌 1小时。 回收 DCM， 上柱， 用 DCM-MeOH洗脱， 得 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3- (吗啉甲基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （0.12 g)。 8- ((4- ((6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -3- (吗啉甲 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应中加入 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3- (吗啉甲基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（0.37 g， 1 eq)， 4-(6,7- 二甲氧基喹唑啉 -4-基氧基 )-3-氟苯胺（0.32 g， 1 eq)，三 (二亚苄基丙酮)二钯（0.18 g， 0.2 eq)， 4，5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽 （0.23 g， 0.4 eq)， 叔丁醇钠 （0.12 g， 1.3 eq)， 电磁搅拌。 抽气并通入氩气， 加入二氧六环 （30 mL)， 升温至 110 °C反应 4小时。 停止反应， 过滤， 滤液回收溶剂， 用 DCM-MeOH梯度洗脱， 得 8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -3- (吗啉甲基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮（60 mg)。 MS: [M+H]+ = 653.2.
1H-NMR (500 M， DMSO- ) δ 11.91 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 8.33-8.34 (d, 1H), 8.22-8.25 (dd， 1H), 7.57 (s， 1H), 7.48-7.51 (m， 3H), 7.36-7.40 (m， 4H)， 7.00-7.01 (d， 1H), 6.76 (s， 1H), 3.99 (s， 6H), 3.48-3.57 (m， 6H), 2.18-2.20 (m， 4H) ppm。
实施例
Figure imgf000057_0001
4-溴 -8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2 ,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 3-甲基 -8-氯 -2-(4-氟苯基 )-2，7-奈啶 -1(2H)-酮 （2.88 g，l eq), NBS ( 1.99 g), AIBN (0.5 g)， 四氯化碳 （30 mL)， 电磁搅拌， 设外温 50 °C， 光照使 CC14回流。 3小时后 停止反应， 回收溶剂， 用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱， 得 4-溴 -8-氯 -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2 ,7- 萘啶 -1(2H)-酮 (0.8 g)。
4-溴 -8- ((3-氟 -4-羟基苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备 向反应瓶中加入 4-溴 -8-氯 -2-(4-氟苯基 )-3-甲基 -2,7-奈啶 -1(2H)-酮（3.6 g, l eq)， 4-氨基 -2氟 苯酚 （1.2 g，l eq)， 异丙醇 （30 mL)， 浓盐酸 （0.1 mL) 电磁搅拌， 设外温 90 °C反应 4小 时， 有固体析出， 过滤， 洗涤得 4-溴 -8- ( ( 3-氟 -4-羟基苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲 基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （2.7 g)。
4-溴 -8- ((4- ((6,7- 二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -3-甲 基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 4-溴 -8- ( ( 3-氟 -4-羟基苯基）氨基） -2- (4-氟苯基） -3-甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)- 酮（0.45 g， 1 eq)， 4-氯 -6,7-二甲氧基喹唑啉（0.32 g， 1 eq)， 碳酸钾（0.28 g, 2 eq)， DMF (20 mL), 电磁搅拌， 设外温 110 °C反应过夜， 过滤， 回收 DMF， 过柱， 用 DCM-MeOH洗脱， 得 4善 8- ( (4- ( (6,7- 二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -3- 甲基 -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （ 130 mg)。 MS: [M+H]+ = 646.0， [M-H]+ = 644.0.
1H-NMR (500 M， DMSO-i 6) δ 12.02 (s， 1H), 8.56 (s, 1H)， 8.47-8.48 (d, 1H), 8.20-8.23 (dd， 1H), 7.50-7.58 (m， 4H)， 7.37-7.46 (m， 4H)， 7.19-7.20 (d, 1H)， 3.99 (s, 6H), 2.23 (s， 3H) ppm。 实施例 41: 化合物 41的制备
Figure imgf000058_0001
Figure imgf000058_0002
1- (4-氟苯基） -4-甲基 -2-氧代 -6- (三氟甲基） -1,2-二氢吡啶 -3-腈的制备
向反应瓶中加入 2-氰基 -N- (4-氟苯基） 乙酰胺 （5.8 g，l eq)和乙醇 （25 mL)， 再向体系中 加入 1，1，1- 三氟戊烷 -2,4-二酮（5.01 g，l eq)， 加热至 78 °C， 固体逐渐溶解， 再向体系中加 入哌啶 （0.56 mL)， 反应 6小时后停止反应， 冷至室温， 有固体析出， 抽滤， 用少量乙醇 洗涤得到 1- (4-氟苯基) -4-甲基 -2-氧代 -6- (三氟甲基) -1,2-二氢吡啶 -3-腈 （5.73 g)。
(E) -4- (2- (二甲氨基) 乙烯基） -1- (4 -氟苯基) -2-氧代 -6- (三氟甲基) -1,2-二氢吡啶 -3-腈的制备
向反应瓶中加入 1- (4-氟苯基) -4-甲基 -2-氧代 -6- (三氟甲基) -1,2-二氢吡啶 -3-腈 (5.73 g， 1 eq)， DMF-DMA (2.3 g， 1 eq)， DMF (30 mL), 加热至 90 °C反应 4小时， 点板反应完全， 旋去溶剂， 过柱得 （E) -4- (2- (二甲氨基） 乙烯基） -1- (4 -氟苯基） -2-氧代 -6- (三氟甲 基） -1,2-二氢吡啶 -3-腈 (3.43 g
2- (4-氟苯基) -3- (三氟甲基) -2,7-萘啶 -1, 8 (2H, 7H ) -二酮的制备
向反应瓶中加入 （E) -4- (2- (二甲氨基） 乙烯基） -1- (4 -氟苯基） -2-氧代 -6- (三氟甲基） -1,2-二氢吡啶 -3-腈（3.43 g， 1 eq)， 再缓慢加入浓硫酸（25 mL)， 反应放热， 滴加完毕以后， 加热至 90 °C反应 3小时， 点板反应完全， 停止反应， 冷却， 用饱和碳酸钾中和， 抽滤， 滤 渣用甲醇溶解， 旋干干法过柱得 2- (4-氟苯基） -3- (三氟甲基） -2,7-萘啶 -1， 8 (2H, 7H) - 二酮 （0.58 g)。
8-氯 -2- (4-氟苯基） -3- (三氟甲基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入 2- (4-氟苯基） -3- (三氟甲基） -2,7-萘啶 -1， 8 (2H, 7H) -二酮（0.58 g， 1 eq)， 三氯氧磷 （25 mL)， 加热至 120 °C反应 2小时， 回收三氯氧磷， 油状物用二氯甲烷溶解， 饱和碳酸氢钠中和调至 pH为 8， 分液， 水相用二氯甲烷萃取， 合并有机相， 无水硫酸钠干 燥， 抽滤， 浓縮， 过柱得 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3- (三氟甲基） -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮 （0.2 g)。 8- ((4- ((6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基)氧基） -3-氟苯基)氨基） -2- (4-氟苯基) -3- (三氟甲 基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应中加入 8-氯 -2- (4-氟苯基） -3- (三氟甲基） -2,7- 萘啶 -1(2H)-酮（30 mg， 1 eq)， 4-(6,7- 二甲氧基喹唑啉 -4-基氧基 )-3-氟苯胺 （27.6 mg， 1 eq)， 三 (二亚苄基丙酮)二钯 （16.2 mg， 0.2 eq)， 4,5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽 （20.4 mg， 0.4 eq)， 叔丁醇钠 ( 10.2 mg， 1.2 eq)， 电 磁搅拌。 抽气并通入氩气， 加入二氧六环（10 mL)， 升温至 110 °C反应 6小时。 停止反应， 过滤， 滤液回收溶剂， 用 DCM-MeOH梯度洗脱， 得 8- ( (4- ( (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基) 氨基） -2- (4-氟苯基) -3- (三氟甲基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （8 mg)。 MS: [M+H]+ = 622.1, [M-H]+ = 620.0.
1H-NMR (500 M， CDC13) δ 11.55 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.45-8.46 (d， 1H), 8.18-8.21 (dd， 1H) 7.57 (s， 1H), 7.30-7.39 (m， 7H), 7.00 (s， 1H), 6.85-6.86 (s， 1H), 4.07 (s， 6H) ppm。
实施例
Figure imgf000059_0001
8-氯 -3- ((二乙氨基) 甲基） -2- (4 -氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应瓶中， 加入 3- (溴甲基) -8-氯 -2-(4-氟苯基 )-2，7-奈啶 -1(2H)-酮 （ 116.7 mg， 1 eq)， 二乙 胺 （23 mg，0.9 eq)， DCM ( 15 mL)， 室温搅拌过夜。 点板反应完全， 停止反应， 回收溶剂， 过柱， 得 8-氯 -3- ( (二乙氨基) 甲基） -2- (4 -氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （42.7 mg)。
3- ((二乙氨基） 甲基） -8- ((4- ( (6,7-二甲氧基喹唑啉 -4-基）氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮的制备
向反应中加入 8-氯 -3- ( (二乙氨基）甲基） -2- (4-氟苯基）-2，7-萘啶-1(2 -酮（41.7 1¾， 1 eq)，
4- (6，7-二甲氧基喹唑啉 -4-基氧基 )-3-氟苯胺（36.6 mg， 1 eq)，三 (二亚苄基丙酮)二钯（21.4 mg， 0.2 eq), 4,5-双二苯基膦 -9,9-二甲基氧杂蒽 （26.9 mg， 0.4 eq)， 叔丁醇钠 （ 13.4 mg， 1.2 eq)， 抽气并通入氩气， 加入二氧六环 （15 mL)， 升温至 110 °C反应 6小时。 停止反应， 过滤， 滤液回收溶剂， 用 DCM-MeOH梯度洗脱， 得 3- ( (二乙氨基） 甲基） -8- ( (4- ( (6，7-二甲 氧基喹唑啉 -4-基） 氧基） -3-氟苯基） 氨基） -2- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （20 mg)。 MS: [M+H]+ = 639.2, [M-H]+ = 637.2. 1H-NMR (500 M， CDCI3) δ 11.75 (s, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.30-8.31 (d, 1H), 8.23-8.25 (d, 1H) 7.58 (s, 1H)， 7.39-7.40 (d, 1H)， 7.33 (s, 2H), 7.18-7.26 (m， 4H)， 6.73-6.74 (d, 1H)， 6.64 (s, 1H) 3.70 (s， 6H)， 3.07-3.09 (m， 2H), 2.38-2.42 (m， 2H), 0.85-0.88 (m， 6H) ppm。
实施例 43: 化合物 43的制备
Figure imgf000060_0001
3-氯 -4- (4- ( (6- ((二甲基氨基) 甲基） -7- (4-氟苯基） -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶小基） 氨 基） -2-氟苯） -2-酰胺吡啶的制备
向反应瓶中加入 8-氯 -3- ( (二乙氨基） 甲基） -1- (4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （120 mg，l eq)， 4- (4-氨基 -2-氟苯) -3-氯 -2-酰胺吡啶 ( 101.9 mg, 1 eq)，异丙醇 ( 15 mL)，浓盐酸 (0.05 mL) 电磁搅拌， 设外温 90 °C反应 4.5小时， 有固体析出， 过滤， 固体用二氯甲烷和水溶 解， 饱和碳酸氢钠中和， 分液干燥， 旋干得 3-氯 -4- (4- ( (6- ( (二甲基氨基） 甲基） -Ί- (4- 氟苯基） —8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1-基） 氨基） -2-氟苯） -2-酰胺吡啶 （105 mg)。
8- ((4- ((2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基) 氧基） -3-氟苯基) 氨基） -3- ( (二甲基氨基) 甲基） -2-
(4-氟苯基） -2,7-萘啶 -1(2H)-酮
室温下向 3-氯 -4- (4- ( (6- ( (二甲基氨基) 甲基） -7- (4-氟苯基) -8-氧 -7,8-二氢 -2,7-萘啶 -1- 基）氨基） -2-氟苯） -2-酰胺吡啶（40 mg， leq)， 乙腈（4 mL)， 乙酸乙酯（4 mL)，水（2 mL)， 搅拌 5 min后向反应中加入醋酸碘苯 （45 mg，2 eq)， 抽充氮气， 氮气保护下反应 2小时， 点板反应完全， 停止反应， 加水 （20 mL)， 乙酸乙酯 （20 mL*5 )萃取， 合并有机相， 无水 硫酸钠干燥， 抽滤， 浓縮， 粗品硅胶柱层析得到 8- ( (4- ( (2-氨基 -3-氯吡啶 -4-基） 氧基）
-3-氟苯基) 氨基） -3- ( (二甲基氨基) 甲基） -2- (4-氟苯基) -2,7-萘啶 -1(2H)-酮 （20 mg)。
MS: [M+H]+ = 549.1， [M-H]+ = 547.1.
1H-NMR (500 M， CDCI3) δ 11.74 (s， 1H)， 8.29-8.31 (d, 1H)， 8.15-8.18 (dd， 1H)， 7.75-7.77
(m， 1H)， 7.30-7.34 (d， 2H), 7.22-7.28 (m， 3H), 7.05-7.08 (m， 1H), 6.75-6.76 (d， 1H), 6.56 (s, 1H)，
6.06-6.07 (d, 1H)， 5.03 (s, 2H), 2.95 (s, 2H), 2.12 (s, 6H) ppm。
实施例 44体外生化水平抑制蛋白激酶 （PK) 活性实验
材料与方法： c-Met、 Flt-3、 VEGFR-2、 PDGFR-β禾 B c-Kit激酶， 来源于 Invitrogen; HTRF KinEASE ； TK kit ( Cisbio公司）； 384孔板 （Greiner公司）； ATP ( sigma公司）， MgCl2
( sigma)公司； PHERAstar FS多功能酶标仪（BMG公司）；低速离心机（StaiteXiangyi公司）; 恒温箱 （Binder公司）。 选取的阳性 BMS777607 结构如下：
Figure imgf000061_0001
化合物溶解及保存： 视溶解性用 DMSO将受试化合物配置成 0.5-10 mmol/L的母液， 分 装后 -20°C保存；
化合物工作液的配制： 测试前将分装的化合物从冰箱取出， 用纯 DMSO稀释到 50x所需 浓度； 然后用去离子水将化合物稀释至 4x所需浓度；
1.33 Enzymatic buffer的配制： 将 5xEnzymatic buffer来源于 HTRF kit) 用去离子水稀释 到 1.33x， 并且加入 1.33x终浓度的相应成分： 1.33 mmol/L DTT禾 B 1.33 mmol/L MgC12;
激酶工作液的配制： 用 1.33xEnzymatic buffer将 Met稀释到 2x所需终浓度 0.2 ^ 底物工作液的配制： 用 1.33xEnzymatic buffer将 substrate-biotin (来源于 HTRF kit) 和 ATP ( lO mM) 稀释为 4x所需终浓度的混合液；
检测工作液的配制： 用 HTRF detection buffer将 16.67 μηιοΙ/L的 Streptavidin-XL665稀释 到 4x所需终浓度， 然后与等体积的 Antibody-Cryptate混合 （均来源于 HTRF kit)。
酶反应步骤： 向低体积 384微孔板的每个孔中加入 4 μLμl的激酶工作液， 同时加入 4 μL 的 1.33xEnzymatic buffer作为阴性对照 （Negative); 向孔加入 2 μΐ的化合物工作液， 同时加 入 2 的 8 % DMSO水溶液作为零化合物浓度对照 （即阳性对照， Positive); 于 25 (或 30 °C ) 孵育 5 -lO min; 向孔中加入 2 底物工作液启动酶反应， 于 25 °C (或 30°C )振荡反 应 15-60 min。
HTRF试剂检测步骤： 向孔加入 8 μ 的检测工作液终止反应； 25 °C反应 1 h;
HTRF信号的读取： 采用 PHERAstar FS读数检测信号， 仪器相应设置如下：
Optic module HTRF®
Integration delay (lag time) 50
Integration time 400
Number of flashes 200
对于每孔读出的原始数据， 比值 =665 nm/620 nm;
抑制率的计算： 试验组比值 一 阴性对照组比值
抑制率％ = ) l 00 %
阳性对照组比值 一阴性对照组比值
IC5o值的计算： 以化合物浓度的对数为横坐标， 抑制率为纵坐标， 在 GraphPad Prism 5 中， 拟合非线性曲线： log (inhibitor) vs. response - Variable slope, 求出酶活抑制率为 50 %时 的待测化合物浓度即 IC5o。
实验结果： c-Met激酶活性半数抑制浓度 （IC5QnM)
本发明提供结构如式 I所示化合物对 c-Met激酶活性的半数抑制浓度 （IC5Q)见表 1: 表 1 化合物对 c-Met激酶活性的半数抑制浓度 （IC5())
Figure imgf000062_0001
卜表示 IC50< 500nM; 表示 IC50范围为 500-5000nM; +表示 IC50范围为 5000ηΜ-50μΜ; -表示未
表 2化合物对 KDR激酶活性的半数抑制浓度 aC5o )
Figure imgf000062_0002
化合物 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 活性嫩 +++ + ++ - ++ ++ ++ +++ - + 化合物 41 42 43 BMS777607
活性嫩 - - - ++
表示 IC50 < 500nM; 表示 IC50范围为 500-5000nM; +表示 IC50范围为 5000ηΜ-50μΜ; -表示未
表 3化合物对 c-Kit激酶活性的半数抑制浓度 （IC5())
Figure imgf000063_0001
表示 IC50 < 500nM; 表示 IC50范围为 500-5000nM; +表示 IC50范围为 5000ηΜ-50μΜ; -表示未 实验结果：本发明部分化合物对 c-Met激酶生化水平的抑制活性与阳性药 BMS777607相 当， 对 VEGR-2激酶和 c-kit激酶的生化水平的抑制活性显著优于阳性药 BMS777607。 实施例 45 体外细胞水平抑制蛋白激酶（PK)活性实验
材料与方法： 人胃腺癌细胞株 MK -45 等均来源于中科院上海细胞库； 1640 培养基 (GIBCO公司）； 胎牛血清（GIBCO公司）； 24孔细胞培养板（Costar公司）； 96孔无色透明 高亲和力酶标板（Costar公司）； HGF (R&D System公司）；细胞裂解液（碧云天公司）； c-Met capture antibody ( R&D System公司)； Anti-phosphotyrosine antibody, clone 4G10( Upstate公司)； HRP labeled goat-anti-mouse antibody (中杉金桥公司 )； TMB (Pierce公司）；酶标检测仪（Tecan 公司， Infinite M200); 多功能洗板机 （Bio-Rad公司） 化合物配置： 阳性药以及各受试化合物用 DMSO配置成 10mM的母液， -20°C保存。
Met抗体包被： 将 c-Met抗体稀释到 2 g/mL， 以每孔 100 μΐ,的量加入酶标板中， 4°C包 被过夜（ 16-18 h) o PBST (PBS I 0.05 % Tween20, pH 7.4)洗涤 3次； 每孔加封闭液（5 % BSA I PBS ) 200 μ1， 37°C封闭 2 h; PBST洗涤 3次；抓取 c-Met蛋白： 24孔细胞培养板中接种 80〜90 %融合度的 MK -45细胞， 8-10 h细胞贴壁后， 更换无血清 1640培养基， 饥饿过夜； 用无血 清 1640培养基梯度稀释的化合物； 吸去 24孔板中培养基， 快速加入 180 μΙ7孔化合物浓度梯 度稀释液， 并将化合物作用的细胞在培养箱孵育 1 h; 用无血清 1640培养基将 HGF配置成 800 ng/mL的溶液， 在 24孔板中每孔加 20 μ1， 轻微混匀后在 37 °C刺激 5-8 rnin; 快速吸去 24 孔板中培养基上清，每孔加 240 μ1 ΜΡΑ裂解液； 在封闭后的酶标板中每孔加 100 μΐ细胞裂解 液， 37°C lOO rpm振摇 2 h; PBST洗涤 3次；
Phosphotyrosine的检测：一抗孵育：每孔力 B 100μ鼠源 Anti-phosphotyrosine antibody, Clone 4G10 (0.5 % BSA/ PBS (W/V) 1 :2000稀释）， 37°C 100 rpm振摇 1-1.5 h; PBST洗涤 3次； 二抗孵育： 每孔加 100 μΐ HRP goat anti mouse IgG (0.5 % BSA/ PBS (W/V) 1 :3000倍稀释）， 37°〇 100 ^^1振摇 1 11； PBST洗涤 6次； TMB底物显色： 每孔加 ΙΟΟμ TMB substrate, 室温 暗室反映 2-10min; 待底物到适当的颜色后， 每孔加入 50 μL2M H2S04; 酶标仪 450 nm吸收 波长处测定吸光值。
实验设两个对照组， 阴性对照组： 加入 10-5mol/L高浓度的 SCR-1 , 不加 HGF刺激； 阳 性对照组： 不加任何药物， 只加 HGF刺激；
计算所有给药组和对照组的平均值， 按以下公式计算抑制率：
化合物 OD值 一 无酶对照孔 OD值
样品酶活的
抑制率 ％ = ( 1— 阴性对照 OD值 一 无酶对照孔 OD ) x l 00 %
值
IC5o值的计算： 以化合物浓度的对数为横坐标， 抑制率为纵坐标， 在 GraphPad Prism 5 中， 拟合非线性曲线： log (inhibitor) vs. response - Variable slope, 求出酶活抑制率为 50 %时 的待测化合物浓度即 IC5Q。
实验结果： 本发明部分化合物对 c-Met激酶细胞水平活性与阳性药 BMS777607相当， 部 分化合物的半数抑制浓度范围 （IC5Q) 见表 2，
表 2化合物对 c-Met激酶细胞水平活性的半数抑制浓度范围 （IC5Q)
Figure imgf000064_0001
化合物 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 活性嫩 +++ +++ +++ +++ ++ ++ ++ + ++ +++ 化合物 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 活性嫩 +++ +++ +++ ++ + +++ - +++ +++ +++ 化合物 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 活性嫩 +++ ++ +++ +++ - - - +++ ++ + 化合物 41 42 43 BMS777607
活性嫩 + ++ - +++
-表示 IC50< ΙμΜ; 表示 IC50范围为 1-10μΜ; +表示 IC50范围为 10μΜ-100μΜ; -¾ ^未测试 实施例 46本发明提供的化合物抑制肿瘤细胞增殖的测定方法（ΜΤΤ法）
试剂和仪器：
RPMI 1640培养基 （RPMI 1640+12%小牛血清 +HEPES 3.5g/L +NaHC03 2.2g/L +青霉素 0.13g/L +链霉素 0.15g/L);
RPMI 1640培养基 （RPMI 1640+12%胎牛血清 +HEPES 3.5g/L +NaHCOa3 2.2g/L +青霉素 0.13g/L+链霉素 0.15g/L);
高糖 DMEM培养基 (DMEM +10%小牛血清 +HEPES 3.5g/L +NaHC03 2.2g/L+青霉素 0.13g/L+链霉素 0.15g/L);
高糖 DMEM培养基 （DMEM +12%胎牛血清 +HEPES 3.5g/L +NaHC03 2.2g/L +青霉素 0.13g/L +链霉素 0.15g/L);
MC COYS 5-A培养基 （DMEM +12%胎牛血清 +HEPES 3.5g/L +NaHC03 2.2g/L +青霉素 0.13g/L+链霉素 0.15g/L);
胰蛋白酶； MTT (美国 Amresco公司产品）； 酶标仪 （ TEC AN infinite M200 )
人胃腺癌细胞株 （BGC ); 人非小细胞肺癌 （A549); 人白血病细胞株 （K562) ; 人胰腺 癌细胞株（PANC-1 ); 人小细胞肺癌（NCI-H446); 所列癌细胞株用含 12%小牛血清的 RPMI 1640培养基， 于 37°C， 5%C02的培养箱中培养；
人胰腺癌细胞株 （BXPC-3 ); 人膀胱癌细胞株 （T24); 所列癌细胞株用 12%胎牛血清的 RPMI 1640培养基， 于 37°C， 5%C02的培养箱中培养；
人肝癌细胞株 （HEPG2 ); 人乳腺癌细胞株 （MCF-7); 所列癌细胞株用 12%小牛血清的 高糖 DMEM培养基， 于 37°C， 5%C02的培养箱中培养； 人结肠腺癌细胞株（CACO-2),用 12%胎牛血清的高糖 DMEM培养基，于 37°C， 5%C02 的培养箱中培养；
人结肠癌细胞株 （HT29); 人结肠癌细胞株 （HCT116); 人卵巢癌细胞株 （SK-OV-3 ); 所列癌细胞株用 12%胎牛血清的 MC COYS 5-A培养基， 于 37°C， 5%C02的培养箱中培养。
接种： 取处于指数生长期， 状态良好的细胞一瓶， 加入适量胰蛋白酶消化液， 消化使贴 壁细胞脱落， 用含 12%小牛血清的 RPMI1640 (或 DMEM或 5A) 培养液配成细胞悬液， 计 数， 并将细胞密度调整稀释至 1.67x l04 /mL取细胞悬液接种于 96孔板上， 180μΙ7孔（含肿瘤 细胞 3000/孔）。
培养： 将培养板转入恒温 C02培养箱中， 在 37°C， 5%C02及饱和湿度条件下培养 24小 时。
初筛： 待测化合物先用 DMSO配制成 0.1M浓度， 再作 3个稀释度， 用于初筛， 浓度依 次为 10—5 mol/L、 10—6 mol/L禾 B 10—7 mol/L。 加入待测化合物， 20 μΙ7孔， 培养 72小时。 每组 设 3个平行孔， 并重复 3次， 测定 96孔板每孔吸光值， 记录结果计算细胞生长抑制率， 取三 次平均值。
染色： 将 ΜΤΤ加入 96孔板 （贴壁细胞） 中， 20 μΙ7孔， 置于培养箱中孵育 4小时， 吸 弃孔内上清液， 加入 DMSO 100 μΙ7孔， 置平板摇床上震荡 5分钟。 将 ΜΤΤ加入 96孔板中 (悬浮细胞）， 20 μΙ7孔， 置于培养箱中孵育 4小时， 再加入 20%SDS 50 L/孔， 置于培养箱 中过夜。
测定： 酶标仪设定波长为 570nm， 参考波长为 630nm， 测定 96孔板每孔吸光值， 记录结 果并计算细胞生长抑制率， 以判断受试药物的抗肿瘤活性。
复筛：在初筛浓度为 10—5 mol/L时， 3次细胞抑制率≥50%的化合物用于复筛，将 0.1 mol/L 再作 10个稀释度，浓度依次为 10 mol/L 0.5 X 10—5 mol/L 10— 6 mol/L、 0.8x 10— 6 mol/L 0.6x 10— 6 mol/L 0.4x 10— 6 mol/L、 0.2x 10— 6 mol/L、 10— 7 mol/L、 0.8x 10— 7 mol/L和 0.4x 10— 7 mol/L。 加入受 试化合物， 20 μΙ7孔， 培养 48小时。 同样每组设 3个平行孔， 并重复 3次， 并按照初筛方法， 测定 96孔板每孔吸光值， 记录结果并计算细胞生长抑制率。 细胞生长抑制率以及 IC5Q的计算： 对照组平均 OD值 -给药组平均 OD值
生长抑制率 = l 00%
对照组平均 OD值
同时根据各浓度的生长抑制率， 采用以化合物浓度的对数同 Logit线性回归， 求出抑制 生长率为 50%时的待测化合物浓度即 IC5Q， 取三次平均值。
试验结果： 本发明实施例 1至 43中制备的具有式 （I) 结构的化合物对多种肿瘤细胞的 增殖具有抑制作用， 经统计分析， 效果显著 （P<0.05 )， 其 IC5Q均在 10—5 mol/L以下。
以上所述仅是本发明的优选实施方式， 应当指出， 对于本技术领域的普通技术人员来 说， 在不脱离本发明原理的前提下， 还可以做出若干改进和润饰， 这些改进和润饰也应视 为本发明的保护范围。

Claims

权利要求书
1、 结构如式 （I) 所示的化合物或其药学上可接受的盐:
Figure imgf000068_0001
式 （I)
其巾：
X选自 C或 N;
如果 X是 C， m选自 0-4; 如果 X是 N， m选自 0-3;
B选自 -0-、 -NR7-、 -NR7CH2-、 -S -、 -SO-、 -S02- 或 -CR8R9-;
R R2、 R3、 R4和 R5相同或不同， 各自选自氢、 卤素、 卤代 -6烷基、 -6烷基、 C3-6 环烷基、 含 1个或多个1^、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 -OR1()、 -NR7Rn; 或者 I 1、 R2、 R3、 R4和 R5中各个氢原子选择性的被一个或者多个 R28取代；
R6选自氢、 -6烷基、 C3-6环烷基、 C3-6杂环烷基、 C2-6烯基、 C2-6块基、 C6— 1()芳基、 5 至 10元杂芳基； 或者 R6中各个氢原子选择性的被一个或者多个 R29取代;
Figure imgf000068_0002
R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R16、 R17、 R17'、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22'、 R23、 R24、 R25、 R26或 R27相同或不同，独立选自氢、卤素、氨基、 -0R1Q、 -NR7RU、 -C02R1Q、 -C(0)NR7Rn -S02R10、 -S(0)2NR7Rn、 -NR7S(0)2R10、 -NR7C(0)R10、 -NR7C02R10、 -CO(CH2)r R10、 -CONH(CH2)rR10, -SR1Q、 -SOR1Q、 Cr6烷基、 C3-6杂环烯基、 C3-6环烯基、 C2-6烯基、 C2-6 块基、 C6— 1Q芳基、 5至 10元杂芳基; r为 0-4; 或者 R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R16、 R17、 R17'、 R18、 R19、 R2Q、 R21、 R22、 R22'、 R23、 R24、 R25、 R26或 R27中各个氢原子选择性的被一个或者 多个 R3Q取代；
R7、 R8、 R9、 R10、 R11相同或不同， 各自选自氢、 -6烷基、 d-6烷氧基取代的 -6烷基、 含 1个或多个 N、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基取代的 -6烷基；
R28、 R29、 R3Q相同或不同， 各自选自卤素、 卤代 d-6烷基、 d-6烷基、 d-6烷氧羰基、 -N02、 -OR10 -NR7RU、 含 1个或多个1^、 0或 S的杂原子的 3至 9元杂环基、 卤素取代或 非取代 C6—10芳基或 5至 10元杂芳基；
G选自 S或 NH; D选自 N或 CH; Z选自 N或 CH。
2、 根据权利要求 1所 其具有下式 （II) 的结构：
Figure imgf000069_0001
式 （II)
其巾 :
n选自 0-2; p选自 0-5 ; R31选自氢、 卤素或 d-6烷基。
3、根据权利要求 1或 2所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中 X选自 C; B选自 -0-； m选自 0或 1 ; n选自 0或 1 ; p选自 0或 1 ; R1选自氢或卤素； R2或 R3均选自氢； R4选自 氢、 d-6烷基或卤素。
4、 根据权利要求 1或 2所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其中 R5选自氢、 -6烷 基、 卤代 Cr6烷基、 -NR7RU取代的 d-6烷基、 含 1个或多个 N、 0或 S的杂原子的 3至 9 元杂环基取代的 -6烷基。
5、 根据权利要求 4所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其中 R5选自氢、 甲基、 卤代
C 烷基、 -CH2NMe2、 -CH2NEt2或
Figure imgf000069_0002
。
6、 根据权利要求 1或 2所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其中 A选自以下基团:
Figure imgf000070_0001
R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R17、 R17'、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22'、 R26或 R27相同或 不同， 独立选自氢、 卤素、 氨基、 d-6烷基、 -C02R1Q、 -OR10, 5至 10元杂芳基、 -6烷基 取代的 5至 10元杂芳基、 C3-6杂环烯基、 -6烷氧羰基取代的 C3-6杂环烯基；
R1Q选自氢、 d-6烷基、 d-6烷氧基取代的 d-6烷基、 含 1个或多个1^、 0或 S的杂原子 的 3至 9元杂环基取代的 -6烷基；
G为 S或 NH; D为 N或 CH; Z为 N或 CH。
7、 根据权利要求 6所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其中 A选自以下基团：
Figure imgf000070_0002
8、根据权利要求 6所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其中 R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R17、 R17'、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22'、 R26或 R27相同或不同， 独立选自氢、 卤素、 氨基、 羟基、 d— 6烷基、 C2— 6烷氧羰基、 6烷氧基、 d— 6烷氧基取代的 -6烷氧基、 吗啉基取代的 d-6烷氧基、咪唑基、 — 6烷基取代的咪唑基、 四氢吡啶基、 — 6烷氧羰基取代的四氢吡啶基。
9、根据权利要求 6所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其中 R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R17、 R17'、 R18、 R19、 R20、 R21、 R22、 R22'、 R26或 R27相同或不同， 独立选自氢、 、 氨基、
羟基、 — 6烷基、 -COOEt 、 -OCH3、 -0(CH2)2OCH3、
Figure imgf000070_0003
10、 根据权利要求 1或 2所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其具有下式 （III) 的结 构：
Figure imgf000071_0001
式 (III)
其巾：
m选自 1 ; n选自 0或 1 ; p选自 0或 1 ;
I 1、 R4和 R31相同或不同， 各自选自氢或卤素;
R2、 R3选自氢；
R5选自氢、 甲基、 卤代烷基、 -CH2NMe2、 -CH2NEt2或A
Figure imgf000071_0002
20 21
R12、 R13、 R14、 R15、 R15'、 R17、 R17'、 R18、 R19、 R R R22、 R22、 R26或 R27相同或 不同， 独立选自氢、 卤素、 氨基、 羟基、 d— 6烷基、 -COOEt 、 -OCH3、 -0(CH2)2OCH:
Boc
,Ν、
Figure imgf000071_0003
11、 化合物或其药学上可接受的盐， 所述化合物选自:
Figure imgf000072_0001
Figure imgf000072_0002
Figure imgf000072_0003
Figure imgf000072_0004
Figure imgf000072_0005
70
Figure imgf000073_0001
Figure imgf000074_0001
12、 一种结构如式 （IV) 所示的化合物或其药学上可接受的盐
Figure imgf000074_0002
式 （IV)
其特征在于，
n'选自 0或 1 ; p'选自 0或 1 :
R4' 和 R31'相同或不同， 独立选自氢、 卤素或 -6垸基；
R5'选自氢、 d-6烷基、 卤代 d-6烷基、 -NR7'RU'取代的 d-6烷基、 含 1个或多 或 S的杂原子的 3至 9元杂环基取代的 -6烷基。
R7'或 R11'相同或不同， 独立选自氢或 -6烷基。
13、 根据权利要求 12所述的化合物或其药学上可接受的盐， 所述化合物选自：
Figure imgf000075_0001
Figure imgf000075_0002
Figure imgf000075_0003
(1) 2-氧代 -1,2-二氢吡啶类化合物 a与化合物 e反应得到化合物 b， 化合物 e中 X'选自氯、 溴 或碘；
(2) 化合物 b与 DMF-DMA反应得到化合物 c;
(3) 化合物 c在酸作用下关环得到萘啶二酮类化合物 d;
(4) 化合物 d 在氯化试剂作用下得到式 (IV)化合物， 所述氯化试剂为三氯氧磷或二氯亚 砜；
其巾：
n'选自 0或 1 ; p'选自 0或 1 ;
R4'选自氢；
R5'选自氢、 d-6烷基或卤代 -6烷基；
R31'选自氢或卤素。 15、 根据权利要求 14所述的合成方法， 其中，
步骤 (1)选自
方法 A: 反应溶剂为 1,4-二氧六环或乙二醇二甲醚， 反应体系中含有碘化亚铜、 N1-二 甲基乙二胺、 磷酸钾， 反应温度为 90~120 °C， 反应时间为 3~12小时或
方法 B: 反应溶剂为 DMF， 在无机碱氢化钠作用下， 反应温度为 0 ~30 °C， 反应时间为 2-10小时；
步骤 (2)中反应溶剂为 DMF或甲苯， 反应温度为 90~120 °C， 反应时间为 1~4小时； 步骤 (3)中所述酸选自浓硫酸、 醋酸或盐酸， 反应温度为 90~120 °C， 反应时间为 1~3小 时；
步骤 (4)中所述氯化试剂为三氯氧磷， 反应温度为 90~120 °C， 反应时间为 2~6小时。
16、 根据权利要求 15所述的合成方法， 其中，
步骤 (1)方法 A中反应溶剂为 1,4-二氧六环；
步骤 (2)中反应溶剂为 DMF;
步骤 (3)中所述酸为浓硫酸；
步骤 (4)中反应温度为 110~120 °C， 反应时间为 2~4小时。
17、 一种药物组合物， 其包含药学上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂， 以及作为活性成分的 权利要求 1至 11中任一项所定义的化合物或其药学上可接受的盐。
18、 一种化合物在制备治疗经蛋白激酶中介的疾病药物方面的应用， 所述化合物为给予病人 治疗有效剂量的权利要求 1至 11中任何一项的化合物或其药学上可接受的盐权利要求 17中 的药物组合物。
19、 根据权利要求 18所述的应用， 其特征在于所述蛋白激酶有关的疾病选自与 c-Met、 KDR 或 c-kit相关的疾病。
20、根据权利要求 19所述的应用，其特征在于所述疾病选自结肠直肠癌、膀胱癌、头和颈癌、 前列腺癌、 乳腺癌、 肝癌、 肾癌、 肺癌、 胰腺癌、 胃肠癌、 鼻咽癌、 成胶质细胞瘤、 鳞状细 胞癌、 星形细胞癌、 卡波济氏肉瘤、 黑素瘤、 卵巢癌、 神经胶质瘤、 泌尿生殖道癌或骨髓增 殖性疾患。
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