CN102977125B - 一类2,7‑萘啶衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一类2，7‑萘啶衍生物及其制备方法和应用，其为结构如式I所示的化合物、其药学上可接受的等价物或盐。本发明的结构如式I所示的化合物对多种激酶活性具有很好的抑制作用，其对c‑Met、KDR、c‑kit等激酶的半数抑制浓度普遍在10‑7mol.L‑1以下。同时，本发明实施例中制备的具有式I结构的化合物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用。

Description

一类2,7-萘啶衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物医药领域，特别涉及一类2，7-萘啶衍生物，本发明还涉及该类化合物的制备方法及其作为酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂中的应用。
背景技术
哺乳动物细胞之间具有相似的分子机制，在整个细胞周期内调节细胞的增殖、分化和死亡。其中，蛋白酪氨酸激酶和蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶在正常细胞的信号转导机制中具有重要作用，它们的异常表达将导致许多疾病的产生，如肿瘤、动脉硬化、牛皮癣和炎症反应等，因而调控这些激酶的活性，恢复生理平衡可以作为一种新的治疗手段。
酪氨酸激酶家族以跨膜受体(受体酪氨酸激酶，RTKs)或胞质形式(非受体酪氨酸激酶，CTKs)广泛地参与细胞信号转导。人体基因组中，蛋白激酶组包括30种酪氨酸激酶家族，共含有90种不同的蛋白酪氨酸激酶，其中58种是受体酪氨酸激酶。
已知的受体酪氨酸激酶涵盖20个家族，并且许多是致癌基因(Blume-Jensen P，Nature，2001，411：355)。许多疾病与这种突变导致的受体酪氨酸激酶持续激活以及PTKs错误表达或过度表达相关。在恶性肿瘤的分子表征过程中发现近一半已知的PTKs，例如c-Met、EGFR、ErbB2、Ret、Kit、Src、Abl、PDGFR、VEGF1/2/3、FGFR1/2/3等，都存在突变或过度表达的情况。同时，临床研究显示酪氨酸激酶的过度表达或失调对肿瘤病人的以及病征的预测具有重要参考价值(Madhusudan S，et al，Clin Biochem，2004，37：618)。由上所述，酪氨酸激酶对生理自体调节十分重要，基因突变/重排会使PTKs异常或过度表达，从而导致疾病的发生，因此可以使用这些酶的激动剂或拮抗剂进行治疗。
非受体酪氨酸激酶(CTKs)：以src基因产物为代表，此外还有Yes、Fyn、Lck、Fgr、Lyn、Fps/Fes及Ab1等。除后两者外，其余非受体型蛋白酪氨酸激酶Src家族分子理约为60kDa的蛋白质，它们之间除了N末端80个氨基酸组成不同外，其他部分都非常相似。非受体酪氨酸激酶(CTKs)的调节机制差异较大，它们通过与跨膜受体(如荷尔蒙、细胞因子和生长因子受体)发生物理性作用，进而参与胞外信号响应。在细胞周 期的特定阶段，当这些受体与细胞外的配体或细胞黏着成分相结合时即被活化。蛋白激酶的突变、信号蛋白的困扰是造成肿瘤的病理原因，同样也会导致其它疾病的发生。在一些免疫缺陷症中，可以观察到非受体酪氨酸的突变性失活，例如JAK3的失活引起严重的联合免疫缺陷(Leonard WJ，NatRev Immunol，2001，1：200；Leonard WJ，Int J Hematol，2001，73：271)。Bruton蛋白酪氨酸激酶(BTK or BPK、ATK)属于Src家族，是B细胞发育成熟所必须的一种酪氨酸激酶，而Btk基因突变会导致先天性无免疫球蛋白血症(Cheng G，et al，Proc Natl Acad Sci USA，1994，91：8152；Maas A，et al，J Immunol，1999，162：6526)。
酪氨酸蛋白激酶在中枢神经系统中也具有重要的生理作用，其失常也会导致相应疾病的发生，例如在阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)患者体内神经元斑与神经调节蛋白-1(neuregulin-1)和ErbB4的免疫反应性相关(Ferguson SS，Trends Neurosci，2003，26：119；Chaudhury AR，et al，J Neuropathol Exp Neurol，2003，62：42)。胰岛素样生长因子(IGFs)及其调节蛋白是由心血管系统分泌而来，这些因子调节异常会导致冠状动脉粥样硬化和再狭窄的发生发展，而IGFs的作用是由特异性膜受体所介导，其中IGF受体I型具有酪氨酸激酶活性，出现于动脉粥样硬化损伤处的平滑肌细胞，炎性细胞及动脉内皮细胞(Bayes-genis A，et al，Circ Res，2000，86：125；Bayes-genis A，et al，Artherio Thromband Vascu Biol，2001，21：335；Che WY，et al，Circ Res，2002，90：1222)。血管内皮生长因子及其受体在类风湿关节炎的多种细胞内表达，并且是类风湿性关节炎病理性血管新生过程中的关键因子(De Bandt M，et al，J Immunol，2003，1712：4853)。Jak2是胞浆非受体酪氨酸激酶，而JAK2基因突变至少引起三种疾病(Spivak JL，Blood，2002，100：4272；ThieleJ，et al，Acta Haematol，2004，111：155)——真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(IMF)、原发性血小板增多症(ET)以及一些其它不典型骨髓增殖性疾病(MPD)。成纤维细胞生长因子受体跨区域突变会导致最常见遗传性侏儒症——骨软骨发育不良(Shiang R，etal，Cell，1994，78：335)。此外，许多疾病与缺乏酪氨酸信号相关，例如非胰岛素依赖性糖尿病和外周神经疾病，而通过增强相应信号的传递可以有效地改善症状(Hunter T，Cell，2000，100：111)。针对其它一些与血管发生相关的疾病，例如某些心血管疾病，刺激血管生成比抑制更为有效。
有关酪氨酸激酶详细的讨论，参见Manning G，Science，2002，298：1912。
丝氨酸-苏氨酸激酶(STKs)是一大类特异性催化蛋白丝氨酸和苏氨酸残基磷酸化的激酶家族，编号：EC 2.7.1.37。与非受体酪氨酸激酶一样，丝氨酸-苏氨酸激酶在细胞内占据主导地位，尽管仅具有几种丝氨酸-苏氨酸型受体激酶。丝氨酸-苏氨酸激酶是最常见的 细胞溶胶激酶，即激酶在细胞质部分而不是在细胞质的细胞器和细胞骨架内发挥它们的功能，进而影响细胞的内部生物化学，经常作为对酪氨酸激酶事件的下行反应。同时丝氨酸-苏氨酸激酶可参与发信号过程，后者引发DNA合成和随后引起细胞增殖的有丝分裂。此外丝氨酸-苏氨酸激酶已涉及多种类型的癌症，如乳腺癌(Cance et al，Int.J.Cancer，1993，55，571)等。
综上，酪氨酸激酶和丝氨酸-苏氨酸激酶均与宿主的病理状况包括癌症有关。与蛋白激酶有关的其它病理状况还包括牛皮癣、肝硬化、糖尿病、血管发生、再狭窄、眼科疾病、类风湿关节炎和其它的炎症疾病、免疫疾病、心血管疾病如动脉硬化和多种肾病。
随着分子生物学的研究深入，在分子水平上针对细胞信号转导，调节生长因子的功能和调控致癌基因是抑制细胞增殖和治疗肿瘤的有效途径。该途径可以减弱非正常信号通道的效应，阻止肿瘤的生长，同时也可促使肿瘤细胞死亡。迄今发现有一半原癌基因在蛋白编码上都具有酪氨酸结构，它们通过磷酸化和去磷酸化参与细胞信号转导，同时在肿瘤发生过程中，变异或过度表达的酪氨酸激酶可以将正常细胞转变为癌细胞，同时促进肿瘤细胞的生长和有丝分裂。由于酪氨酸激酶和丝氨酸-苏氨酸激酶在细胞的致癌性转化过程中具有重要的作用，并与肿瘤的产生和发展有着直接或间接联系，因此将酪氨酸激酶抑制剂或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂应用于肿瘤的治疗尤为合适。
萘啶衍生物具有广泛的生物活性，在医药领域具有重要的应用。近年来，许多萘啶类小分子化合物已被作为蛋白激酶抑制剂，广泛用于治疗多种与异常激酶活性相关的疾病，如肿瘤、牛皮癣、肝硬化、糖尿病、血管发生、眼科疾病、类风湿关节炎和其它的炎症疾病、免疫疾病、心血管疾病如动脉硬化和多种肾病。其中，2，7-萘啶类化合物(WO0192256、WO0242264)、1，5-萘啶类化合物(WO2006106046)、1，6-萘啶类化合物(WO2007060028、WO2010037249、WO2010088177)、2，6-萘啶类化合物(WO2008122614)、杂环稠合萘啶类化合物(WO2009148887、WO2009148916)、2，7-萘啶酮类化合物(WO2008109613、WO2009097287)、1，8-萘啶酮类化合物(WO2010002779)等均用于酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂。但2，7-萘啶-1(2H)-酮类化合物用于治疗酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂还未见报道。
2，7-萘啶-1(2H)-酮，分子式为C8H6N2O，分子量为146.1，具有以下化学结构。
2，7-萘啶-1(2H)-酮是一类重要的杂环结构，因此提供一种2-吡啶酮类化合物及其制备方法，以及该化合物作为酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂的用途，具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是在现有技术的基础上提供一类2，7-萘啶衍生物。
本发明的另一目的是提供上述2，7-萘啶衍生物作为酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂的用途。该类化合物在体外生化水平和细胞水平均对酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶具有显著抑制效果(P＜0.05)，可显著抑制癌细胞增殖(P＜0.05)，并能对动物活体肿瘤的生长有优异的抑制活性。
本发明的目的可以通过以下措施达到：
本发明提供了结构如式I所示的化合物、其药学上可接受的等价物或盐：
式I
其中：
X选自CH或N；
如果X是CH，m为0-4；如果X是N，m为0-3；
B选自-O-、-NR7-、-NR7CH2-、-S-、-SO-、-SO2-、-CR8R9-；
R1、R2、R3、R4和R5相同或不同，各自选自氢、卤素、卤代C1-6烷基、氰基、-NO2、-OR10、-NR7R11、C1-6烷基、C3-6环烷基、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基；或者R1、R2、R3、R4和R5中各个氢原子选择性的被一个或者多个R26取代；
R6选自氢、C1-6烷基、C3-6环烷基、C3-6杂环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6-12芳基、5-12元杂芳基环；或者R6中各个氢原子选择性的被一个或者多个R27取代；
A选自以下基团：
R12、R13、R14、R15、R15’、R16、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R23、R24、R25、R40或R41相同或不同，独立选自氢、卤素、卤代C1-6烷基、氰基、氨基、硝基、-OR10、-NR7R11、-CO2R10、-C(O)NR7R11、-SO2R10、-S(O)2NR7R11、-NR7S(O)2R10、-NR7C(O)R10、-NR7CO2R10、-CO(CH2)rR10、-CONH(CH2)rR10、-SR10、-SOR10、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C3-6环烯基、C2-6炔基、C3-6杂环烷基、C3-6杂环烯基、C6-12芳基、5-12元杂芳基环；r为0-4；或者R12、R13、R14、R15、R15’、R16、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R23、R24、R25、R40或R41中各个氢原子选择性的被一个或者多个R28取代；
R7、R8、R9、R10、R11相同或不同，各自选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷基、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基取代的C1-6烷基；
R26、R27、R28相同或不同，各自选自卤素、卤代C1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧羰基、氰基、-NO2、-OR10、-NR7R11、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基、卤素取代或非取代C6-12芳基或5-12元杂芳基环；
G选自S或NH；D选自N或CH；Z选自N或CH。
发明详述
烷基表示未经取代或经取代的直链或支链饱和烃基。其典型地为C1-20烷基，例如C1-10烷基(如C1-6烷基)。C1-6烷基为支链或支链的。C1-6烷基典型地为C1-4烷基，如甲基、乙基、丙基、2-丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。C1-6烷基为未经取代或经取代的，典型地被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R26取代。
环烷基表示全部为碳的单环或稠合的环。典型地为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、 环己烷、金刚烷、环己二烯、环庚烷和环庚三烯。C3-6环烷基典型地为环丙烷、环丁烷、环戊烷、环己烷。C3-6环烷基为未经取代或经取代的，典型地被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R26取代。
杂环基表示含1个或多个N、O或S的杂原子的单环或稠合的环。典型地为含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基，例如四氢吡喃基、2，2-二甲基-1，3-二氧戊环、哌啶子基、N-甲基哌啶-3-基、哌嗪子基、N-甲基吡咯烷-3-基、吡咯烷基、吗啉代基、硫代吗啉代基、硫代吗啉代-1-氧化物、硫代吗啉代-1，1-二氧化物、4-乙氧羰基哌嗪子基、3-氧代哌嗪子基、2-咪唑啉酮、2-吡咯烷酮、四氢嘧啶-2-酮及其衍生物。优选地，杂环基团可被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R26取代。
哌嗪子基指的是具有以下化学结构的基团。
吗啉代基指的是具有以下化学结构的基团。
哌啶子基指的是具有以下化学结构的基团。
吡咯烷基指的是具有以下化学结构的基团。
烯基为未经取代或经取代的，具有1个或多个双键的直链或支链烃基。典型地为C2-8 烯基，例如C2-6烯基，例如烯丙基、丁烯基、丁二烯基、戊烯基或己烯基，所述烯基被取代时，典型地被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R27取代。
炔基为未经取代或经取代的，具有1个或多个三键的直链或支链烃基。典型地为C2-8炔基，例如C2-6炔基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基，所述炔基被取代时，典型地被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R27取代。
芳基表示6至12个碳原子的全碳单环或稠合多环基团，具有完全共轭的π电子系统。典型地为苯基、萘基、蒽基、联苯基、茚基、茚满基、1，2-二氢萘基、1，2，3，4-四氢萘基。芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个，更优选为一个、两个或三个，进而更优选为一个或两个R27取代。
杂芳基表示5至12个环原子的单环或稠合环基团，含有一个、两个、三个或四个选自N、O或S的环杂原子，其余环原子是C，另外具有完全共轭的π电子系统。未取代的杂芳基地非限制性实例有吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、嘧啶、吡啶、喹啉、异喹啉、喹唑啉、噻吩并吡啶、噻吩并嘧啶、吡咯并吡啶、嘌呤、四唑、三嗪和咔唑。杂芳基可以是取代的或未取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个，更为优选为一个、两个或三个，进而更优选为一个或两个R27取代。
环烯基为未经取代或经取代的，具有1个或多个双键的单环或稠合环基团。典型地为C3-6环烯基，例如环丙烯基、环丁烯基、环戊烯基或环己烯基，所述烯基被取代时，典型地被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R28取代。
C1-6烷氧基为支链或支链的。典型地为C1-4烷氧基，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丙氧基、正丁氧基、异丁氧基或叔丁氧基，C1-6烷氧基为未经取代或经取代的，典型地被一或多个，更优选1-3个，最优选1或2个R28取代。
卤素或卤素基团为氟、氯、溴或碘。优选为氟、氯、溴。被卤素取代的C1-6烷基基团表示其中1个或多个氢被卤素置换的烷基，优选含一个、两个或三个卤素基团。此类基团的优选实施例为三氟甲基。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，B选自O、S或NHR7；进一步的优选为O。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，X选自CH。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，m为0或1；n为0或1；p为0或1。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，R1为氢或卤素。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，R2或R3均为氢。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，R4为氢、C1-6烷基或卤素。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，R5选自氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-NR7R11取代的C1-6烷基、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基取代的C1-6烷基。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，A可以选自取代的吡啶或喹啉、喹唑啉、噻吩并吡啶、噻吩并嘧啶、吡唑并吡啶、吡嗪并吡啶；
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，A为氨基吡啶和烷氧基取代的喹唑啉。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，A选自以下基团：
其中的R12、R13、R14、R15、R15’、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R40或R41的定义如上所述，也可以进一步地独立选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、硝基、-CO2R10、-OR10、5-12元杂芳基、C1-6烷基取代的5-12元杂芳基、C3-6杂环烯基、C1-6烷氧羰基取代的C3-6杂环基；其中的R10的定义如上所述，也可以进一步地选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷基、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基取代的C1-6烷基；G为S或NH；D为N或CH；Z为N或CH。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，A可以选自以下基团：
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，R12、R13、R14、R15、R15’、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R40或R41相同或不同，可以独立选自氢、 卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烷氧羰基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷氧基、吗啉基取代的C1-6烷氧基、咪唑基、C1-6烷氧基取代的咪唑基、四氢吡啶基、C1-6烷氧羰基取代的四氢吡啶基。
作为一种优选，本发明提供的结构如式(I)所示的化合物中，R12、R13、R14、R15、R15’、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R40或R41相同或不同，可以独立选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、-COOEt、-OCH3、-O(CH2)2OCH3、
本发明提供的结构如式(I)所示的化合物或其药学上可接受的盐，作为一种优选，结构可以如式(II)所示：
式II
其中：n为0-2；p为0-5；R29选自氢、卤素、C1-C6烷基；并且m、A、B、X、R1、R2、R3、R4、R5和R6如上对式(I)中的定义。
作为一种优选，在式(II)中，A优选自以下基团：
并且其中各基团如上对式(I)中的定义。
作为优选，在式(II)中，X选自CH，B选自O。
作为优选，在式(II)中，m优选为0或1；n优选为0或1；p优选为0或1。
本发明提供的结构如式(II)所示的化合物或其药学上可接受的盐，更典型地，结构可以如式(III)所示：
式III
其中：m为1；n为0或1；p为0或1；R1、R4和R29相同或不同，各自选自氢、卤素；R2、R3选自氢；R5选自氢、甲基、卤代烷基、-CH2NMe2、-CH2NEt2或 A选自以下基团：
R12、R13、R14、R15、R17、R18、R19、R20、R21和R22独立选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、-COOEt、-OCH3、-O(CH2)2OCH3、
G选自S或NH；D选自N或CH；Z选自N或CH；
式(I)、(II)和(III)的萘啶类化合物的具体实例包括下表所列的那些化合物：
作为优选，本发明还提供了一种结构如式(IV)所示的化合物或其药学上可接受的盐，
式IV
其中，
n′为0-1；p′为0-1；
R2′、R3′、R4′和R29′相同或不同，独立选自氢、卤素、C1-6烷基；
R5′选自氢、卤素、C1-6烷基、卤代烷基；或R5′中各个氢原子选择性的被一个或者多个R30′取代；
R30′选自C1-6烷基、-NR7R11′、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环烷基；
R7′或R11′选自氢、C1-6烷基。
作为优选，式(IV)化合物可以作为式(I)化合物的中间体。
作为优选，本发明提供的结构如式IV所示化合物，具体为：
本发明还提供了一种用于治疗有机体中蛋白激酶相关疾病的药用组合物，包括本发明提供的上述各化合物和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
药学上可接受的盐表示保留母体化合物的生物有效性和性质的那些盐。这类盐包括：(1)与酸成盐，通过母体化合物的游离碱与无机酸或有机酸的反应而得，无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、磷酸、偏磷酸、硫酸、亚硫酸和高氯酸等，有机酸包括乙酸、丙酸、丙烯酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、富马酸、马来酸、羟基苯甲酸、γ-羟基丁酸、甲氧基苯甲酸、邻苯二甲酸、甲磺酸、乙磺酸、萘-1-磺酸、萘-2-磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、扁桃酸、琥珀酸或丙二酸等。(2)存在于母体化合物中的酸性质 子被金属离子代替或者与有机碱配位化合所生成的盐，金属例子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子，有机碱例如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨丁三醇、N-甲基葡糖胺等。
药用组合物指的是一种或多种化合物或者它们的药学上可接受的盐和前药与其它的化学成分，包括药学上可接受的载体和赋形剂的混合物。药用组合物的目的是促进化合物对生物体的给药。
药学上可接受的载体指的是对有机体不引起明显的刺激性和不干扰所给予化合物的生物活性和性质的载体或稀释剂。
赋形剂指的是加入到药用组合物中以进一步便利于给予化合物的惰性物质。赋形剂的实例包括(不局限于)碳酸钙、磷酸钙、多种糖类和多种类型的淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
本发明还涉及具有通式(I)的制备方法，其特征在于，包括，
a.碱片段(V)与氯代杂环(VI)在溶剂S1中碱B1、催化剂C1、配体L1存在下在温度T1条件下反应生成化合物(I)。
或
b.碱片段(V)与氯代杂环(VI)在溶剂S2中酸A1存在下在温度T2条件下反应生成化合物(I)。
其中A、B、X、R1、R2、R3、R4、R5、R6和m如上所述。
为了制备本发明通式(I)中所述的化合物，所述的制备方法，其特征在于，在制备过程中，所述的溶剂S1选自醚类溶剂，如1，4-二氧六环、乙二醇二甲醚，优选为1，4-二 氧六环；所述的碱B1选自无机碱，如氢氧化钠、钠氢、叔丁醇钠、叔丁醇钾，优选为叔丁醇钠、叔丁醇钾；所述的催化剂C1可以是醋酸钯、四三苯基磷钯、二氯二三苯基磷钯、三(二亚苄基丙酮)二钯，优选为三(二亚苄基丙酮)二钯；配体L1为膦配体，优选为1，2-双(二苯基膦)丙烷、4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽；温度T1为90-115℃，优选为110℃；溶剂S2选自质子性溶剂，优选为异丙醇、乙醇、甲醇；酸A1为选自无机酸类，包括盐酸、硫酸、磷酸等，有机酸类化合物，包括对甲苯磺酸、乙酸等；温度T2为60-110℃，优选为90℃。
本发明还涉及具有通式(I)的另一种制备方法，其特征在于酚片段(VIII)与卤代杂环(VII)在溶剂S3中酸A2存在下在温度T3条件下反应生成化合物(I)。
其中A、X、R1、R2、R3、R4、R5、R6和m如上所述，B优选为O。
为了制备本发明通式(I)中所述的化合物，所述的制备方法，其特征在于，在制备过程中，所述的溶剂S3选自质子性溶剂，优选为异丙醇、乙醇、甲醇；酸A2为选自无机酸类，包括盐酸、硫酸、磷酸等，有机酸类化合物，包括对甲苯磺酸、乙酸等；温度T3为60-110℃，优选为90℃。
本发明还提供了上述各化合物的异构体、药学上可接受的等价物或药学上可接受的盐。本发明还提供了上述各化合物在作为酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂的应用。
本发明化合物在制备用于治疗有机体中蛋白激酶相关疾病的药物中的用途包括：蛋白激酶相关疾病优选自受体酪氨酸激酶相关的疾病、非受体酪氨酸激酶相关的疾病或丝氨酸-苏氨酸激酶相关的疾病；所述蛋白激酶相关疾病或者优选自血管内皮生长因子受体相关的疾病、表皮生长因子受体相关的疾病、血小板衍生生长因子受体相关的疾病、胰岛素样 生长因子受体相关的疾病或胎肝激酶相关的疾病；所述蛋白激酶相关疾病或者优选自结肠直肠癌、膀胱癌、头和颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、肺癌、胰腺癌、胃肠癌、鼻咽癌、成胶质细胞瘤、鳞状细胞癌、星形细胞癌、卡波济氏肉瘤、黑素瘤、卵巢癌、、神经胶质瘤、泌尿生殖道癌；所述蛋白激酶相关疾病或者优选自糖尿病、过度增殖性疾病、血管发生、炎性疾病、免疫性疾病或心血管疾病；所述有机体为哺乳动物或人；以及一种用于治疗有机体中蛋白激酶相关疾病的药用组合物，它包括本发明化合物或盐和药学上可接受的载体或赋形剂。
本发明还提供了上述各化合物在制备用于治疗哺乳动物或人蛋白激酶相关疾病的药物中的用途，或者在制备治疗增殖性疾病或减轻其严重性药物方面的用途，包括向需要此类治疗的系统或个体施用有效量的本发明任一所定义的化合物或其药物组合物。
发明还提供了上述各化合物在制备治疗c-Met、KDR或c-kit介导的病症药物方面的应用，包括向需要此类治疗的系统或个体施用有效量的本发明中任一所定义的化合物或其药物组合物，从而治疗所述病症。
作为优选，所述蛋白激酶相关疾病选自受体酪氨酸激酶相关的疾病、非受体酪氨酸激酶相关的疾病或丝氨酸-苏氨酸激酶相关的疾病。
作为优选，所述蛋白激酶相关疾病选自肝细胞生长因子、血管内皮生长因子受体相关的疾病、干细胞因子受体相关的疾病、表皮生长因子受体相关的疾病、血小板衍生生长因子受体相关的疾病、胰岛素样生长因子受体相关的疾病或胎肝激酶相关的疾病。
作为优选，所述蛋白激酶相关疾病选自糖尿病、过度增殖性疾病、血管发生、炎性疾病、免疫性疾病或心血管疾病。
作为优选，所述蛋白激酶相关疾病(或增殖性疾病)选自结肠直肠癌、膀胱癌、头和颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、肺癌、胰腺癌、胃肠癌、鼻咽癌、成胶质细胞瘤、鳞状细胞癌、星形细胞癌、卡波济氏肉瘤、黑素瘤、卵巢癌、神经胶质瘤、泌尿生殖道癌或骨髓增殖性疾患。
为了检验本发明提供的化合物对于蛋白激酶的作用水平，采用生化水平酶活性测试、细胞水平酶活性测试、抑制肿瘤细胞增殖活性测试来确定本发明的各种化合物对一种或多种PK的活性和作用水平。使用工艺中熟知的方法，对于任何激酶均可按照同样的方式设计类似的实验。
在生化水平酶活性测试中，利用HTRF技术检测酪氨酸激酶的活性，HTRF是一种时间分辨荧光共振能力转移技术，可以按照已知的说明书或文献方法进行，参看Kolb等，“Tyrosine kinase assays adapted to homogenous time-resolved fluorescence”.Drug Discovery Today杂志.3卷：pp 333-342。HTRF(均相时间分辨荧光)是用来检测均相体系中待测物的一种最常用的方法，这种技术结合了荧光共振能量转移(FRET)和时间分辨技术(TR)，已经被广泛应用于基于细胞实验和生化实验的药物研发的不同阶段。根据HTRF法的测定原理，将纯酶Met与生物素化的底物以及ATP一起孵育反应后，加入亲和素标记的XL-665和识别底物磷酸化的Eu标记的抗体，当底物被Met磷酸化后，Eu标记的抗体即可以识别该磷酸化产物，与亲和素标记的XL665形成时间分辨的荧光共振能量转移(FRET)，而未被磷酸化的底物由于不能倍抗体识别而无法形成FRET信号，通过测定665nm和620nm的荧光信号差值测定待测物在不同浓度下对c-Met、Flt-3、VEGFR-2、PDGFR-β、c-Kit等酪氨酸激酶的抑制活性。因而，采用此法可测定本发明化合物对上述酪氨酸激酶的生化水平的活性作用，同时利用本领域熟知的方法，可以对其它蛋白激酶使用相似的测定方法。
在细胞水平酶活性测试中，酶联免疫吸附测定(ELISA)可以用来检验和测定酪氨酸激酶活性的存在。ELISA可以按照已知的方法进行，例如Voller等，1980，“酶联免疫吸附测定”(Enzyme-Linkd Immunosorbent Assay)，见Rose和Friedman编著的《临床免疫学手册》(Manual of Clinical Immunology)，第2版，pp 359-371，美国微生物学会出版，华盛顿特区。c-Met、Flt-3、VEGFR-2、PDGFR-β、c-Kit等酪氨酸激酶催化ATP与生物素标标记的底物肽的磷酸化反应，抑制酶活性将抑制这一反应。根据ELISA法测定原理，将抗Met抗体包被在固相载体上，来抓取细胞裂解液中的Met总蛋白；然后用抗酪氨酸磷酸化抗体标记Met蛋白中发生磷酸化的部分；加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗体，使之与抗酪氨酸磷酸化抗体结合；最后加入HRP的底物TMB显色。通过测定450nM吸收波长处的吸光度而检测细胞中Met受体自磷酸化水平，从而测定待测物在不同浓度下对c-Met、Flt-3、VEGFR-2、PDGFR-β、c-Kit等酪氨酸激酶的抑制活性。因而，采用此法可测定本发明化合物对上述酪氨酸激酶细胞水平的活性作用，同时利用本领域熟知的方法，可以对其它蛋白激酶使用相似的测定方法。
在抑制肿瘤细胞增殖活性测试中，测定按常规采用溴化四氮唑蓝(MTT)法。活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性黄色的溴化3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑(MTT)还原为难溶性的蓝紫色结晶物甲臢(Formazan)，并沉积在细胞中，而死细胞无此功能，二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的紫色结晶物甲臢，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。因而甲臢生成量在通常情况下与活细胞 数成正比，可根据OD值推测出活细胞的数目，了解药物抑制或杀伤细胞的能力。该测定方法可以用于测定不同的本发明化合物对一种或多种癌细胞增殖的抑制能力，利用本领域熟知的方法，可以对任意癌细胞使用相似的测定方法。
本发明制备的结构如式I所示的化合物对多种激酶活性具有很好的抑制作用，其对c-Met、KDR、c-kit等激酶的半数抑制浓度(IC50)普遍在10-7mol.L-1以下。同时，本发明实施例中制备的具有式I结构的化合物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用，其中大部分化合物抑制肿瘤细胞增殖的效果显著，其IC50在10-5mol/L以下。有此推知，本发明具有式I结构的化合物可应用于制备治疗有机体中蛋白激酶相关疾病的药物。
具体实施方式
本发明公开了一种化合物及其制备方法、该化合物的中间体及其制备方法，及其该化合物作为酪氨酸激酶和/或丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂的应用，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：化合物1的制备
2-苄基-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
向反应瓶中加入4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺(50mg，1.0eq)，2-苄基-8-氯-2，7-萘啶-1(2H)-酮(42.9mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(29.2mg，0.2eq)，1，2-双(二苯基膦)丙烷(26mg，0.4eq)，叔丁醇钠(19.8mg，1.3eq)和1，4-二氧六环(10mL)，抽充氮气三次，于106℃反应4小时，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析(PE/EA 6/1 to 3.5/1)得到2-苄基-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(10.8mg)，MS：[M+H]+＝550.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.11(b，1H)，8.57(s，1H)，8.29-8.30(d，1H)，8.24-8.27(d， 1H)，7.87-7.89(d，1H)，7.59(s，1H)，7.48-7.50(d，1H)，7.38-7.41(d，2H)，7.30-7.35(m，4H)，6.96-6.97(d，1H)，6.68-6.69(d，1H)，5.22(s，2H)，4.06(s，6H)ppm。
实施例2：化合物2的制备
2-苄基-8-((3-氟-4-(噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-氧基)苯基)氨基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮制备方法同实施例一中2-苄基-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-(噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-氧基)苯胺，反应时间减少1小时。MS：[M+H]+＝496.0.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.13(b，1H)，8.74(s，1H)，8.50-8.52(d，1H)，8.25-8.31(m，2H)，7.87-7.90(d，1H)，7.70-7.72(d，1H)，7.45-7.50(m，2H)，7.33-7.37(m，4H)，6.96-6.98(d，1H)，6.67-6.70(d，1H)，5.25(s，2H)ppm。
实施例3：化合物3的制备
3，4-二氯-2-氰基吡啶的制备
冰浴下向3，4-二氯吡啶酰胺(300mg，1eq)的乙酸乙酯(18mL)溶液中加入三乙胺(160.9mg，1.5eq)，搅拌5min后向溶液中缓慢加入三氟乙酸酐(333.9mg，1.5eq)，于冰浴下继续反应2小时，点板，原料反应完全，停止反应，向体系中慢慢加入饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，乙酸乙酯(30mL*5)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品硅胶柱层析(PE/EA200/1 to 20/1)得到3，4-二氯-2-氰基吡啶(269mg)。
4-(4-氨基-2-氟苯)-3-氯-2-氰基吡啶的制备
向反应瓶中加入3，4-二氯-2-氰基吡啶(227mg，1.0eq)，碳酸钾(543mg，3eq)，乙腈(65mL)，加热至80℃反应过夜，点板反应完全，停止反应，加水(65mL)淬灭反应，乙酸乙酯(60mL*5)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液浓缩，粗品硅胶柱层析得到4-(4-氨基-2-氟苯)-3-氯-2-氰基吡啶(93mg)。
4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氰基吡啶的制备
向反应瓶中加入4-(4-氨基-2-氟苯)-3-氯-2-氰基吡啶(200mg，1.0eq)，2-苄基-8-氯-2，7-萘啶-1(2H)-酮(205mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(139.6mg，0.2eq)，1，2-双(二苯基膦)丙烷(124.4mg，0.4eq)，叔丁醇钠(95mg，1.3eq)和1，4-二氧六环(75mL)，抽充氮气三次，于106℃反应4小时，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氰基吡啶(159mg)。
4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-酰胺吡啶的制备
向反应瓶中加入4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氰基吡啶(200mg，1eq)，2，2，6，6-四甲基-N-哌啶基-1-醇(316mg，5eq)，甲醇(20mL)，加热回流反应5小时，停止反应，浓缩，粗品硅胶柱层析得到4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-酰胺吡啶(180mg)。
4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氨基吡啶的制备
室温下向4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-酰胺吡啶(100mg，1eq)，乙腈(18mL)，乙酸乙酯(18mL)，水(9mL)，搅拌5min后向反应中加入醋酸碘苯(125mg，2eq)，抽充氮气，氮气保护下反应1小时，点板反应完全，停止反应，加水(20mL)，乙酸乙酯(20mL*5)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氨基吡啶(61.5mg)。MS：[M+H]+＝488.0.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.12(s，1H)，8.26-8.29(m，2H)，7.87-7.88(d，1H)，7.75-7.76(d，1H)，7.45-7.47(m，1H)，7.26-7.37(m，6H)，6.96-6.97(d，1H)，6.67-6.68(d，1H)，6.36(s，2H)，5.94-5.95(d，1H)，5.24(s，2H)ppm。
实施例4：化合物4的制备
8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例1中2-苄基-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将2-苄基-8-氯-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8氯-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝568.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.10(b，1H)，8.57(s，1H)，8.29-8.30(d，1H)，8.24-8.27(dd，1H，J＝2.45Hz)，7.89-7.90(d，1H)，7.59(s，1H)，7.47-7.50(m，1H)，7.39-7.45(m，4H)，7.20-7.21(m，2H)，6.95-6.97(d，1H)，6.67-6.70(d，1H)，5.23(s，2H)，4.00(s，6H)ppm。
实施例5：化合物5的制备
8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例4中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺，反应时间为22小时。MS：[M+H]+＝681.2.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.00(b，1H)，8.62(s，1H)，8.27-8.28(d，1H)，8.21-8.25(m，1H)，7.60(s，1H)，7.47-7.49(m，1H)，7.31-7.34(m，4H)，7.05-7.08(d，2H)，6.69-6.70(d，2H)，6.38-6.40(d，1H)，5.16(s，2H)，4.29-4.31(m，2H)，4.04(s，3H)，3.73(m，2H)，2.14-2.59(m，8H)，1.23-1.26(m，2H)ppm。
实施例6：化合物6的制备
8-((3-氟-4-((6-甲氧基-7-(3-吗啡啉丙氧基)喹啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例4中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-((6-甲氧基-7-(3-吗啡啉丙氧基)喹啉-4-基)氧基)苯胺，反应时间为16.5小时。MS：[M+H]+＝679.9，[M-H]+＝678.0.
1H-NMR(300M，DMSO-d6)δ12.37(b，1H)，8.35-8.45(m，2H)，7.92-7.94(d，2H)，7.45-7.61(m，5H)，7.19-7.23(m，2H)，7.03-7.07(m，1H)，6.70-6.74(m，1H)，6.30-6.35(d，1H)，6.09-6.14(d，1H)，5.25(s，2H)，3.85-3.91(m，5H)，3.45-3.50(m，3H)，2.22-2.27(m，5H)，1.80-1.1.85(m，2H)，1.20-1.23(m，2H)ppm。
实施例7：化合物7的制备
8-((3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例4中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯胺，反应时间为16.5小时。MS：[M+H]+＝512.8，[M-H]+＝510.9.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.02(b，1H)，8.50-8.51(m，1H)，8.28-8.29(d，1H)，8.21-8.25(m，1H)，7.74-7.75(d，1H)，7.57-7.58(d，1H)，7.45-7.47(m，1H)，7.31-7.34(m，2H)，7.21-7.26(d，2H)，7.04-7.08(m，2H)，6.71-6.72(d，1H)，6.57-6.58(d，1H)，6.40-6.41(d，1H)， 5.16(s，2H)ppm。
实施例8：化合物8的制备
3-氯-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-2-氨基吡啶
制备方法同实施例3中4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氨基吡啶的合成，不同之处在于将2-苄基-8-氯-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8氯-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝506.0.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ12.01(s，1H)，8.27-8.28(d，1H)，8.20-8.23(dd，1H)，7.72-7.73(d，1H)，7.41-7.46(m，1H)，7.30-7.33(m，2H)，7.23-7.26(m，1H)，7.11-7.13(t，1H)，7.04-7.08(m，2H)，6.72-6.73(d，1H)，6.40-6.41(d，1H)，6.13-6.15(d，1H)，5.17(s，2H)，2.09(s，2H)ppm。
实施例9：化合物9的制备
8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例1中2-苄基-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将2-苄基-8-氯-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8- 氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝553.9.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.86(b，1H)，8.64(s，1H)，8.33-8.34(d，1H)，8.24-8.27(d，1H)，7.59(s，1H)，7.40-7.46(m，4H)，7.23-7.29(m，4H)，6.76-6.77(d，1H)，6.47-6.49(d，1H)，4.08(s，6H)ppm。
实施例10：化合物10的制备
8-((3-氟-4-((6-甲氧基-7-(3-吗啡啉丙氧基)喹啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例9中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-((6-甲氧基-7-(3-吗啡啉丙氧基)喹啉-4-基)氧基)苯胺。MS：[M+H]+＝553.9.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ12.13(s，1H)，8.38-8.41(m，2H)，7.51-7.53(m，1H)，7.32-7.47(m，4H)，7.25-7.30(m，4H)，6.86-6.88(d，1H)，6.53-6.54(d，1H)，6.33-6.35(m，2H)，3.98(s，3H)，3.89-3.90(m，2H)，3.62-3.66(m，4H)，2.39-2.41(m，6H)，1.4-1.45(m，2H)ppm。
实施例11：化合物11的制备
8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
向反应瓶中加入3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺(42.8mg，1.0eq)，8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(27.5mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(18.4mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(23.9mg，0.4eq)，叔丁醇钠(12.5mg，1.3eq)和1，4-二氧六环(10mL)，抽充氮气三次，于106℃反应4小时，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析(DCM/MeOH＝20/1)得到8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(20mg)。MS：[M+H]+＝666.8.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.98(b，1H)，8.56(s，1H)，8.35-8.36(d，1H)，7.70-7.72(d，1H)，7.57-7.61(m，3H)，7.47-7.49(m，1H)，7.37-7.43(m，5H)，7.02-7.03(d，1H)，6.70-6.72(d，1H)，4.22-4.24(m，2H)，3.97-4.00(m，3H)，3.56-3.58(m，4H)，2.00-2.51(m，6H)，1.96-1.97(d，2H)ppm。
实施例12：化合物12的制备
8-((3-氟-4-((6-甲氧基-7-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例11中8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺改为3-氟-4-((6-甲氧基-7-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺。MS：[M+H]+＝598.2.
1H-NMR(400M，DMSO-d6)δ12.00(s，1H)，8.57(s，1H)，8.36-8.37(d，1H)，8.25-8.29(dd，1H)，7.72-7.74(m，1H)，7.59-7.63(m，3H)，7.39-7.51(m，5H)，6.73(s，1H)，6.72(s，1H)，4.34-4.36(m，2H)，4.00(s，3H)，3.76-3.79(m，2H)，3.50(s，3H)ppm。
实施例13：化合物13的制备
8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例11中8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧 基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺改为3-氟-4-((7-甲氧基-6-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺，反应时间为6小时。MS：[M+H]+＝597.9.
1H-NMR(400M，DMSO-d6)δ11.99(s，1H)，8.35-8.37(d，1H)，8.25-8.29(m，1H)，8.20-8.22(d，1H)，7.72-7.73(d，1H)，7.59-7.63(m，3H)，7.48-7.51(m，1H)，7.38-7.45(m，4H)，7.02-7.04(d，1H)，6.71-6.73(d，1H)，4.31-4.34(m，2H)，4.01(s，3H)，3.75-3.77(m，2H)，3.50(s，3H)ppm。
实施例14：化合物14的制备
8-((4-((6，7-二(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例11中8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺改为4-(6，7-二(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺，反应时间为6小时。MS：[M+H]+＝642.2.
1H-NMR(400M，DMSO-d6)δ12.00(s，1H)，8.35-8.37(d，1H)，8.25-8.29(m，1H)，7.72-7.74(d，1H)，7.59-7.62(m，3H)，7.48-7.49(m，1H)，7.41-7.45(m，5H)，7.02-7.05(d，1H)，6.71-6.73(d，1H)，4.33-4.38(m，4H)，3.76-3.79(m，4H)，3.70(s，6H)ppm。
实施例15：化合物15的制备
8-((4-((6，7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例9中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2- (4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为4-((6，7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺。MS：[M+H]+＝553.0，[M-H]+＝551.1.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ12.11(s，1H)，8.37-8.40(m，2H)，7.83(s，1H)，7.52-7.53(m，1H)，7.51-7.52(d，1H)，7.39-7.47(m，2H)，7.24-7.31(m，5H)，6.86-6.87(d，1H)，6.53-6.54(m，2H)，4.00(s，3H)，3.73(s，3H)ppm。
实施例16：化合物16的制备
8-((3-氟-4-((7-甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例11中8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮，不同之处在于将3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺改为3-氟-4-((7-甲氧基喹啉-4-基)氧基)苯胺。MS：[M+H]+＝522.9.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.87(b，1H)，8.59-8.60(d，1H)，8.34-8.35(d，1H)，8.29-8.31(d，1H)，8.22-8.35(m，1H)，7.49(s，1H)，7.40-7.46(m，4H)，7.27-7.30(m，1H)，7.16-7.20(m，2H)，6.78-6.79(d，1H)，6.47-6.50(d，2H)，3.98(s，3H)ppm。
实施例17：化合物17的制备
8-((3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例9中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮，不同之处在于将3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺改为3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯胺。反应温度从80℃逐渐升至106℃，反应时间为17.5小时。MS：[M+H]+＝498.8，[M-H]+＝496.8.
1H-NMR(300M，CDCl3)δ11.93(b，1H)，8.57-8.60(d，1H)，8.34-8.36(d，1H)，8.25-8.31(m，1H)，7.38-7.43(m，4H)，7.29-7.32(m，2H)，7.21-7.22(m，2H)，6.80-6.82(d，1H)，6.65-6.70(m，1H)，6.50-6.52(d，2H)ppm。
实施例18：化合物18的制备
乙基7-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)噻吩并[3，2-b]吡啶-2-羧酸
制备方法同实施例17中8-((3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯胺改为乙基7-(4-氨基-2-氟苯)噻吩并[3，2-b]吡啶-2-羧酸。反应时间为4.5小时。MS：[M+H]+＝570.8.
1H-NMR(300M，CDCl3)δ11.88(s，1H)，8.50-8.51(d，1H)，8.34-8.36(d，1H)，8.21-8.27(m，1H)，7.75-7.77(d，1H)，7.58-7.60(d，1H)，7.21-7.22(m，2H)，6.80-6.82(d，1H)，6.65-6.70(m，1H)，6.50-6.52(d，2H)ppm。
实施例19：化合物19的制备
8-((4-((2-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基)氧基)-3-氟苯基)氨基) -2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例17中8-((3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将3-氟-4-(噻吩并[3，2-b]吡啶-7-氧基)苯胺改为4-((2-(1-乙基-1H-咪唑-4-基)噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基)氧基)-3-氟苯胺。MS：[M+H]+＝592.8，[M-H]+＝590.8.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.89(s，1H)，8.48-8.50(d，1H)，8.34-8.35(d，1H)，8.23-8.26(m，1H)，7.69(s，1H)，7.53(s，1H)，7.38-7.42(m，4H)，7.28-7.30(d，1H)，7.18-7.25(m，3H)，6.79-6.80(d，1H)，6.58-6.59(d，1H)，6.49-6.50(d，1H)，4.21-4.25(m，2H)，1.30-1.34(m，3H)ppm。
实施例20：化合物20的制备
8-((3-氟-4-(噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮。
制备方法同实施例9中8-(4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮，不同之处在于将3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺改为3-氟-4-(噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-氧基)苯胺。反应时间为3小时。MS：[M+H]+＝499.8.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.86(b，1H)，8.72(s，1H)，8.33-8.34(d，1H)，8.22-8.25(m，1H)，7.96-7.97(m，1H)，7.57-7.58(m，1H)，7.39-7.42(m，3H)，7.21-7.29(m，4H)，6.76-6.77(d，1H)，6.47-6.49(d，1H)ppm。
实施例21：化合物21的制备
制备方法包括：
8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
此方法同实施例3中4-(4-((7-苄基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-3-氯-2-氨基吡啶的合成，不同之处在于将2-苄基-8-氯-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮。
或
3-氯-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-2-酰胺吡啶的制备
向反应瓶中加入8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-奈啶-1(2H)-酮(824mg，1eq)，4-(4-氨基-2-氟苯氧基)-3-氯-2-酰胺吡啶(845mg，1eq)，异丙醇(30mL)，浓盐酸(0.1mL)电磁搅拌，设外温90℃反应4小时，有固体析出，过滤，洗涤，滤饼柱层析得3-氯-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-2-酰胺吡啶(669mg)。
8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
室温下向3-氯-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-2-酰胺吡啶(520mg，1eq)，乙腈(100mL)，乙酸乙酯(100mL)，水(20mL)，搅拌5min后向反应中分批加入醋酸碘苯(644mg，2eq)，抽充氮气，氮气保护下反应2小时，点板反应完全，停止反应，加水(100mL)，乙酸乙酯(100mL*5)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(344mg)。MS：[M+H]+＝491.8，[M-H]+＝489.9.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.83(s，1H)，8.32-8.34(d，1H)，8.17-8.20(dd，1H)，7.78(s，1H)，7.37-7.41(m，2H)，7.34-7.36(m，1H)，7.23-7.26(m，4H)，7.07-7.10(t，1H)，6.77-6.78(d，1H)，6.47-6.50(d，1H)，5.04(s，2H)ppm。
实施例22：化合物22的制备
4-氯-3-硝基吡啶-2-氨基的制备
取浓硫酸(40mL)于冰浴下冷却，向体系中缓慢滴加4-氯-吡啶-2-氨基(5g，1eq)，15min以后，向体系中加入硝酸(2.6mL)与硫酸(5mL)的混合物，自然升温至室温下反应3小时，停止反应，反应液倒入冰中，用氨水调节pH＝5左右，过滤出固体，固体用二氯甲烷柱层析分离后得到4-氯-3-硝基吡啶-2-氨基(1.2g)。
N，N-二叔丁基(4-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基甲酸
室温下取4-氯-3-硝基吡啶-2-氨基(1.09g，1eq)，DMAP(140mg，0.2eq)，Boc2O(3.78g，3e)溶于二氯甲烷(50mL)中，氮气保护下反应过夜，点板反应完全，停止反应，用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗，二氯甲烷(50mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤、浓缩，粗品柱层析分离得到N，N-二叔丁基(4-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基甲酸(1.25g)。
4-(4-氨基-2-氟苯)-3-硝基吡啶-2-(N，N-二叔丁基氨基甲酸)的制备
取4-氨基-2-氟苯酚(386mg，1eq)加入DMF(20mL)和叔丁醇钾(375mg，1.1eq)后 在氮气保护下搅拌30min，加入N，N-二叔丁基(4-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基甲酸(1.25g，1.1eq)的DMF(10mL)溶液，慢慢升温至90℃下反应过夜，停止反应，减压除去溶剂，残余物柱层析分离得到N，N-二叔丁基-4-(4-氨基-2-氟苯)-3-硝基吡啶-2-氨基甲酸(750mg)。
8-((4-((2-(N，N-二叔丁基氨基甲酸)-3-硝基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入4-(4-氨基-2-氟苯)-3-硝基吡啶-2-(N，N-二叔丁基氨基甲酸)(700mg，1.0eq)，8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(420mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(350mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(220mg，0.4eq)，叔丁醇钠(240mg，1.4eq)和1，4-二氧六环(50mL)，抽充氮气三次，于106℃反应过夜，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到8-((4-((2-(N，N-二叔丁基氨基甲酸)-3-硝基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(390mg)。
8-((4-((2-氨基-3-硝基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向8-((4-((2-(N，N-二叔丁基氨基甲酸)-3-硝基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(750mg，1eq)中加入三氟乙酸(2mL)和二氯甲烷(10mL)，氮气保护下反应3小时。停止反应，饱和碳酸钾溶液(15mL)洗，二氯甲烷(20mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤、浓缩，粗产品柱层析分离得到8-((4-((2-氨基-3-硝基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(230mg)。
8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入8-((4-((2-氨基-3-硝基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(50mg，1eq)，二水合二氯亚锡(80mg)，盐酸(0.2mL)，乙醇(10mL)，氮气保护下反应2.5小时，停止反应，向溶液中加入饱和碳酸钾溶液(20mL)，二氯甲烷(100mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤、浓缩，粗产品柱层析分离得到8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(43mg)。MS：[M+H]+＝473.1，[M-H]+＝471.1.
1H-NMR(300M，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，8.32-8.34(d，1H)，8.20-8.25(d，1H)，7.69-7.72(d，1H)，7.56-7.60(m，2H)，7.37-7.43(m，3H)，7.20-7.22(d，1H)，7.06-7.13(t，1H)，7.00-7.02(d，1H)，6.69-6.71(d，1H)，5.89-5.91(d，1H)，5.55(s，2H)，4.48(s，2H)ppm。
实施例23：化合物23的制备
8-((3-氟-4-((2-氧代-2，3-二氢-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
向反应瓶中加入8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(30mg，1eq)，二(1H-咪唑-1-基)甲酮(13mg，1.2eq)和四氢呋喃(15mL)，氩气保护下升温回流并反应过夜。点板反应完全，停止反应，减压除去溶剂，干法过柱得到8-((3-氟-4-((2-氧代-2，3-二氢-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(15mg)。MS：[M+H]+＝499.1，[M-H]+＝497.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.98(s，1H)，11.37(s，1H)，11.23(s，1H)，8.34-8.35(d，1H)，8.27-8.30(m，1H)，7.75-7.76(d，1H)，7.70-7.72(d，1H)，7.57-7.60(m，2H)，7.46-7.47(d，1H)，7.39-7.42(t，2H)，7.28-7.32(t，1H)，7.02-7.04(d，1H)，6.70-6.72(d，1H)，6.33-6.34(d，1H)ppm。
实施例24：化合物24的制备
8-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)吡啶并[2，3-B]吡嗪-3(4H)-酮
向反应瓶中加入8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(30mg，1eq)，乙基-2-氧乙酸酯(2.3mL，50％甲苯溶液)和乙醇(30mL)，氩气保护下升温回流并反应过夜。点板反应完全，停止反应，减压除去溶剂，干法过柱得到8-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)吡 啶并[2，3-B]吡嗪-3(4H)-酮(15mg)。MS：[M+H]+＝511.1，[M-H]+＝509.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.98(s，1H)，8.32-8.36(m，1H)，8.23-8.29(m，2H)，7.71-7.72(d，1H)，7.58-7.59(m，2H)，7.39-7.42(m，3H)，7.29-7.31(m，1H)，7.03-7.04(d，1H)，6.71-6.72(m，2H)ppm。
实施例25：化合物25的制备
4-氯-3-甲基吡啶-2-羧酸的制备
向茄形瓶中加入4-氯-吡啶-2-羧酸(1.50g，1eq)，TMEDA(1.0g，1.5eq)，无水THF(20mL)，降温至-78℃，滴入n-BuLi(10mL，2.5M)，再搅拌2小时。滴入碘甲烷(2.0g)，待其自然升至室温。加入饱和氯化铵溶液终止反应，加水，乙酸乙酯萃取。萃取液干燥、浓缩得到4-氯-3-甲基吡啶-2-羧酸(0.53g)。
4-氯-3-甲基吡啶-2-酰胺的制备
向反应瓶中加入4-氯-3-甲基吡啶-2-羧酸(1.70g)，SOCl2(10mL)，于80℃反应1小时后回收SOCl2，加入二氯甲烷(20mL)溶解固体，加入浓氨水2(mL)，有固体析出，过滤，得4-氯-3-甲基吡啶-2-酰胺(1.1g)。
4-(2-氟-4-((7-氟苯基)-8-氧代-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-甲基-2-吡啶甲酰胺的制备
向反应瓶中加入8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.36g，1eq)，4-氯-3-甲基吡啶-2-酰胺(0.17g，1eq)，叔丁醇钾(0.22g，2eq)，DMF(10mL)，电磁搅拌，设外温110℃反应过夜。过滤，回收DMF，粗品柱层析过柱得到4-(2-氟-4-((7-氟苯基)-8-氧代-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-甲基-2-吡啶甲酰胺(0.15g)
8-((4-((2-氨基-3-甲基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入4-(2-氟-4-((7-氟苯基)-8-氧代-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-甲基-2-吡啶甲酰胺(0.40g，1eq)，乙腈(10mL)，水(2mL)，加入醋酸碘苯(052g，2eq)，常温搅拌2小时。停止反应，回收溶剂，粗品柱层析过柱得到8-((4-((2-氨基-3-甲基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.11g)MS：[M+H]+＝472.2.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，8.33-8.34(d，1H)，8.21-8.24(dd，1H)，7.70-7.71(d，2H)，7.65-7.66(d，2H)，7.38-7.42(t，2H)，7.14-7.17(t，1H)，7.01-7.02(d，1H)，6.70-6.71(d，1H)，5.94-5.96(m，1H)，5.72-5.78(m，3H)，5.19-5.22(d，1H)，2.04(s，3H)ppm。
实施例26：化合物26的制备
8-((4-(苄氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入4-(苄氧基)-3-氟苯胺(325.9mg，1.0eq)，8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(412mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(276mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(347mg，0.4eq)，叔丁醇钠(173mg，1.2eq)和1，4-二氧六环(70mL)，抽充氮气三次，于106℃反应19小时，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析(PE/EA＝20/1-6/1)得到8-((4-(苄氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(340mg)。
8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入8-((4-(苄氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(340mg，1eq)，钯碳(102mg)，甲醇(40mL)，抽充氢气，氢气保护下在室温反应3小时，点板原料消失，停止反应，抽滤，浓缩，过柱(PE/EA＝4/1-3/1)得8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(85mg)
4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-碘-2-氰 基吡啶的制备
向微波瓶中加入8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(100mg，1eq)，4-氯-3-碘4-氯-2-氰基吡啶(109mg，1.5eq)，叔丁醇钾(46mg，1.5eq)，DMF(2.5mL)，微波下于150℃反应1.5小时后点板反应未完全，继续反应1.5小时，过滤，浓缩，粗品柱层析过柱(PE/EA＝4/1)得到4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-碘-2-氰基吡啶(91mg)。
4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-碘-2-酰胺吡啶的制备
向反应瓶中加入4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-碘-2-氰基吡啶(91mg，1eq)，2，2，6，6-四甲基-N-哌啶基-1-醇(121mg，5eq)，甲醇(20mL)，加热回流反应24小时，停止反应，浓缩，粗品硅胶柱层析得到4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-碘-2-酰胺吡啶(70mg)。
8-((4-((2-氨基-3-碘吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
室温下向4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-3-碘-2-酰胺吡啶(70mg，1eq)，乙腈(15mL)，水(3mL)，搅拌5min后向反应中加入醋酸碘苯(74mg，2eq)，抽充氮气，氮气保护下反应1.5小时，点板反应完全，停止反应，加水(20mL)，乙酸乙酯(20mL*5)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到8-((4-((2-氨基-3-碘吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(22mg)。MS：[M+H]+＝584.0.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.98(s，1H)，8.32-8.36(d，1H)，8.25-8.29(m，1H)，7.70-7.76(m，2H)，7.57-7.59(m，2H)，7.46-7.47(m，1H)，7.40-7.42(m，2H)，7.22-7.24(m，1H)，7.02-7.04(d，1H)，6.70-6.72(m，1H)，6.17(s，1H)，5.80-5.82(d，1H)ppm。
实施例27：化合物27的制备
叔丁基-4-(4-氨基-2-氟苯)-2-氰基-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸的制备向反应瓶中加入4-(4-氨基-2-氟苯)-3-碘-2-氰基吡啶(355mg，1eq)，叔丁基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼烷-2-基)-5，6-二氢-1(2H)-羧酸(113mg，1.3eq)，四三苯基膦化钯(32.5mg，0.1eq)，在氩气保护下抽真空，氩气保护下搅拌约15分钟，向体系中加入DME(20mL)，再向体系中加入碳酸钠(150mg)的水(2mL)溶液，抽充氩气，氩气保护下慢慢升温至90℃下反应过夜，停止反应，浓缩，过柱得到叔丁基-4-(4-氨基-2-氟苯)-2-氰基-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(130mg)。
叔丁基二氰基-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸的制备
向反应瓶中加入叔丁基-4-(4-氨基-2-氟苯)-2-氰基-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(200mg，1.0eq)，8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基-8，8a-二氢-2，7-萘啶-1(2H)-酮(160mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(90mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(56mg，0.4eq)，叔丁醇钠(70mg，1.5eq)和1，4-二氧六环(50mL)，抽充氮气三次，于106℃反应5小时，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到叔丁基二氰基-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(160mg)。
叔丁基二甲酰-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸的制备
向反应瓶中加入叔丁基二氰基-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(180mg，1eq)，2，2，6，6-四甲基-N-哌啶基-1-醇(1.8g)，二氯甲烷(36mL)，加热回流反应过夜，停止反应，浓缩，粗品硅胶柱层析得到叔丁基二甲酰-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8- 二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(142mg)。叔丁基二氨基-4-(2-氟-4-((4-(4-氟苯基)-6甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸的制备
室温下向叔丁基二甲酰-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(30mg，1eq)，乙腈(4mL)，乙酸乙酯(4mL)，水(2mL)，搅拌5min后向反应中加入三氟醋酸碘苯(37.9mg，2eq)，抽充氮气，氮气保护下反应8小时，点板反应完全，停止反应，加水(20mL)，饱和碳酸氢钠(20mL)洗涤，二氯甲烷(50mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到叔丁基二氨基-4-(2-氟-4-((4-(4-氟苯基)-6甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-5′，6′-二氢-[3，4′-联吡啶]-1′(2′H)-羧酸(6mg)。MS：[M+H]+＝653.2，[M-H]+＝651.2
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.86(s，1H)，8.28-8.29(d，1H)，8.19-8.21(d，1H)，7.71-7.72(d，1H)，7.46-7.49(m，2H)，7.36-7.42(m，3H)，7.11-7.15(t，1H)，6.89-6.90(d，1H)，6.64(s，1H)，5.86-5.87(d，1H)，4.30-4.32(t，1H)，3.94(s，2H)，3.52-3.55(m，2H)，2.25(s，2H)，1.99(s，3H)，1.40(s，9H)ppm。
实施例28：化合物28的制备
8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
向反应瓶中加入4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺(100mg，1.0eq)，8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基-8，8a-二氢-2，7-萘啶-1(2H)-酮(92.2mg，1.0eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(58.4mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(52mg，0.4eq)，叔丁醇钠(39.6mg，1.3eq)和1，4-二氧六环(20mL)，抽充氮气三次，于110℃反应4小时，点板反应完全，冷至室温，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析(DCM/MeOH＝20/1)得到8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(54.0mg)，MS：[M+H]+＝568.1，[M-H]+＝566.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.56(s，1H)，8.30-8.31(d，1H)，8.23-8.27(dd，1H)，7.58(s，1H)，7.47-7.51(m，3H)，7.36-7.43(m，4H)，6.90-6.92(d，1H)，6.66(s，1H)，3.99(s，6H)，1.99(s，3H)ppm。
实施例29：化合物29的制备
8-((3-氟-4-((7-甲氧基-6-(3-吗啡啉丙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例28中8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-((6-甲氧基-7-(3-吗啡啉丙氧基)喹啉-4-基)氧基)苯胺。MS：[M+H]+＝681.2，[M-H]+＝679.1.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.72(b，1H)，8.60(s，1H)，8.27-8.30(d，1H)，8.22-8.25(dd，1H)，7.59(s，1H)，7.38-7.41(m，2H)，7.18-7.29(m，4H)，6.67-6.67(d，1H)，6.35(s，1H)，4.27-4.30(m，2H)，4.03(s，3H)，3.70-3.73(m，4H)，2.50-2.59(m，5H)，2.03-2.04(m，2H)，1.84(s，3H)，1.23-1.26(m，2H)ppm.
实施例30：化合物30的制备
8-((3-氟-4-((6-甲氧基-7-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例28中8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为3-氟-4-((6-甲氧基-7-(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)苯胺。MS：[M+H]+＝612.2.
1H-NMR(400M，DMSO-d6)δ12.00(s，1H)，8.57(s，1H)，8.26-8.32(m，2H)，7.39-7.59(m，8H)，6.92-6.93(d，2H)，4.35(s，2H)，4.00(s，3H)，3.78(s，2H)，3.50(s，3H)，2.00(s，3H)ppm.
实施例31：化合物31的制备
8-((4-((6，7-二(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例28中8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为4-((6，7-二(2-甲氧乙氧基)喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺。MS：[M+H]+＝656.2.
1H-NMR(400M，DMSO-d6)δ11.93(s，1H)，8.57(s，1H)，8.25-8.32(m，1H)，7.62(s，1H)，7.37-7.55(m，8H)，6.92-6.93(d，1H)，6.67(s，1H)，4.33-4.38(m，4H)，3.76-3.79(m，4H)，3.37(s，6H)，2.00(s，3H)ppm.
实施例32：化合物32的制备
8-((4-((6，7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例28中8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苄基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺改为4-((6，7-二甲氧基喹啉-4-基)氧基)-3-氟苯胺。MS：[M+H]+＝567.1，[M-H]+＝565.1.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.01(s，1H)，8.37-8.40(m，1H)，8.33-8.34(d，1H)，7.82(s，1H)，7.48-7.51(m，2H)，7.24-7.31(m，5H)，6.78-6.79(d，1H)，6.41-6.42(m，2H)，6.35(s，1H)， 4.00(s，3H)，3.73(s，3H)，2.06(s，3H)ppm。
实施例33：化合物33的制备
8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例21中8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝506.1，[M-H]+＝504.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.25-8.30(m，2H)，7.74-7.75(d，1H)，7.40-7.50(m，3H)，7.25-7.27(t，2H)，6.91-6.92(m，1H)，6.35(s，2H)，5.92-5.93(d，2H)，3.27(s，3H)ppm。
实施例34：化合物34的制备
8-((4-((3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
向微波瓶中加入3-氯-4-(2-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)-2-氰基吡啶(11.5mg)，PPA(1mL)，于微波下140℃反应1小时，加冰，加水(25mL)，乙酸乙酯(30mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，过柱得8-((4-((3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(12mg)。MS：[M+H]+＝491.0，[M-H]+＝489.0.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.94(s，1H)，8.65(s，1H)，8.36-8.37(d，1H)，8.30-8.34(m，2H)，7.47-7.52(m，3H)，7.40-7.43(t，2H)，7.33-7.37(t，1H)，6.92-6.93(d，1H)，6.78-6.80(d，1H)，6.66(s，1H)，1.99(s，3H)ppm。
实施例35：化合物35的制备
8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例22中8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝487.1，[M-H]+＝485.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.83(s，1H)，8.27-8.28(d，1H)，8.20-8.23(dd，1H)，7.46-7.49(m，2H)，7.35-7.43(m，3H)，7.20-7.22(d，1H)，7.06-7.10(t，1H)，6.87-6.89(d，1H)，6.63(s，1H)，5.90-5.91(d，1H)，5.55(s，2H)，4.47(s，2H)，1.98(s，3H)ppm。
实施例36：化合物36的制备
8-((3-氟-4-((2-甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
向反应瓶中加入8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(35mg)，PPA(1.5mL)，乙酸(0.3mL)，混合后在氩气保护下升至140℃反应6小时，停止反应，向体系中加入饱和碳酸钾(15mL)，二氯甲烷(50 mL*3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，过柱得8-((3-氟-4-((2-甲基-3H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(15mg)。MS：[M+H]+＝511.1，[M-H]+＝509.1.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.28-8.30(m，2H)，8.07-8.08(d，1H)，7.48-7.50(m，3H)，7.40-7.43(m，2H)，7.30-7.31(t，1H)，6.90-6.92(d，1H)，6.65(s，1H)，6.44-6.45(d，1H)，3.50(s，3H)，1.99(s，3H)ppm。
实施例37：化合物37的制备
8-((3-氟-4-((2-氧代-2，3-二氢-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例23中8-((3-氟-4-((2-氧代-2，3-二氢-1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-7-基)氧基)苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7萘啶-1(2H)-酮改为8-((4-((2，3-二氨基吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝513.1，[M-H]+＝511.1.
1H-NMR(300M，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，11.39(s，1H)，11.26(s，1H)，8.26-8.30(m，2H)，7.74-7.76(d，1H)，7.26-7.39(m，6H)，6.91-6.93(d，1H)，6.67(s，1H)，6.32-6.34(d，1H)，1.99(s，3H)ppm。
实施例38：化合物38的制备
8-((4-((2-氨基-3-碘吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮
制备方法同实施例26中8-((4-((2-氨基-3-碘吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的合成，不同之处在于将8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮改为8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基--2，7-萘啶-1(2H)-酮。MS：[M+H]+＝598.0.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.90(s，1H)，8.24-8.30(m，2H)，7.72-7.73(d，1H)，7.40-7.50(m，5H)，7.20-7.24(t，1H)，6.90-6.91(d，1H)，6.65(s，1H)，6.16(s，2H)，5.79-5.80(d，1H)，2.00(s，3H)ppm。
实施例39：化合物39的制备
3-(溴甲基)-8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入3-甲基-8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-奈啶-1(2H)-酮(2.88g，1eq)，NBS(1.99g)，AIBN(0.5g)，四氯化碳(30mL)，电磁搅拌，设外温50℃，光照使CCl4回流。3小时后停止反应，回收溶剂，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得3-(溴甲基)-8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.74g)
8-氯-2-(4-氟苯基)-3-(吗啡啉甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中，加入3-(溴甲基)-8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-奈啶-1(2H)-酮(0.35g，1eq)，DCM(20mL)，电磁搅拌，冰水浴冷却。加入吗啉(0.3g)，电磁搅拌1小时。回收DCM，上柱，用DCM-MeOH洗脱，得8-氯-2-(4-氟苯基)-3-(吗啡啉甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.12g)
8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(吗啡啉甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应中加入8-氯-2-(4-氟苯基)-3-(吗啡啉甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.37g，1eq)，4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基氧基)-3-氟苯胺(0.32g，1eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.18g，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(0.23g，0.4eq)，叔丁醇钠(0.12g，1.3eq)， 电磁搅拌。抽气并通入氩气，加入二氧六环(30mL)，升温至110度反应4小时。停止反应，过滤，滤液回收溶剂，用DCM-MeOH梯度洗脱，得8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(吗啡啉甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(60mg)。MS：[M+H]+＝653.2.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ11.91(s，1H)，8.56(s，1H)，8.33-8.34(d，1H)，8.22-8.25(dd，1H)，7.57(s，1H)，7.48-7.51(m，3H)，7.36-7.40(m，4H)，7.00-7.01(d，1H)，6.76(s，1H)，3.99(s，6H)，3.48-3.57(m，6H)，2.18-2.20(m，4H)ppm。
实施例40：化合物40的制备
4-溴-8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入3-甲基-8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-奈啶-1(2H)-酮(2.88g，1eq)，NBS(1.99g)，AIBN(0.5g)，四氯化碳(30mL)，电磁搅拌，设外温50℃，光照使CCl4回流。3小时后停止反应，回收溶剂，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，得4-溴-8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.8g)。
4-溴-8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备向反应瓶中加入4-溴-8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-奈啶-1(2H)-酮(3.6g，1eq)，4-氨基-2氟苯酚(1.2g，1eq)，异丙醇(30mL)，浓盐酸(0.1mL)电磁搅拌，设外温90℃反应4小时，有固体析出，过滤，洗涤得4-溴-8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(2.7g)。
4-溴-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入4-溴-8-((3-氟-4-羟基苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.45g，1eq)，4-氯-6，7-二甲氧基喹唑啉(0.32g，1eq)，碳酸钾(0.28g，2eq)，DMF(20mL)，电磁搅拌，设外温110℃反应过夜，过滤，回收DMF，过柱，用DCM-MeOH 洗脱，得4-溴-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2，7-萘啶-1(2H)-酮(130mg)。MS：[M+H]+＝646.0，[M-H]+＝644.0.
1H-NMR(500M，DMSO-d6)δ12.02(s，1H)，8.56(s，1H)，8.47-8.48(d，1H)，8.20-8.23(dd，1H)，7.50-7.58(m，4H)，7.37-7.46(m，4H)，7.19-7.20(d，1H)，3.99(s，6H)，2.23(s，3H)ppm。
实施例41：化合物41的制备
1-(4-氟苯基)-4-甲基-2-氧代-6-(三氟甲基)-1，2-二氢-3-腈的制备
向反应瓶中加入2-氰基-N-(4-氟苯基)乙酰胺(5.8g，1eq)和乙醇(25mL)，再向体系中加入1，1，1-三氟戊烷-2，4-二酮(5.01g，1eq)，加热至96℃，固体逐渐溶解，再向体系中加入哌啶(0.56mL)，反应4小时后停止反应，冷至室温，有固体析出，抽滤，用少量乙醇洗涤得到1-(4-氟苯基)-4-甲基-2-氧代-6-(三氟甲基)-1，2-二氢-3-腈(5.73g)。
(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-6-(三氟甲基)-1，2-二氢-3-腈的制备
向反应瓶中加入1-(4-氟苯基)-4-甲基-2-氧代-6-(三氟甲基)-1，2-二氢-3-腈(5.73g，1eq)，DMF.DMA(2.3g，1eq)，DMF(30mL)，加热至110℃反应1.5小时，点板反应完全，旋去溶剂，过柱得(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-6-(三氟甲基)-1，2-二氢-3-腈(3.43g)。
2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘-1，8(2H，7H)-二酮的制备
向反应瓶中加入(E)-4-(2-(二甲氨基)乙烯基)-1-(4-氟苯基)-2-氧代-6-(三氟甲基)-1，2-二氢-3-腈(3.43g，1eq)，再缓慢加入浓硫酸(25mL)，反应放热，滴加完毕以后，加热至110℃反应2小时，点板反应完全，停止反应，冷却，用饱和碳酸钾中和，抽滤，滤渣用甲醇溶解，旋干干法过柱得2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘-1，8(2H， 7H)-二酮(0.58g)。
8-氯-2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中加入2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘-1，8(2H，7H)-二酮(0.58g，1eq)，三氯氧磷(25mL)，加热至110℃反应3小时，回收三氯氧磷，油状物用二氯甲烷溶解，饱和碳酸氢钠中和调至pH为8，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，过柱得8-氯-2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(0.2g)。
8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应中加入8-氯-2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(30mg，1eq)，4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基氧基)-3-氟苯胺(27.6mg，1eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(16.2mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(20.4mg，0.4eq)，叔丁醇钠(10.2mg，1.2eq)，电磁搅拌。抽气并通入氩气，加入二氧六环(10mL)，升温至110℃反应6小时。停止反应，过滤，滤液回收溶剂，用DCM-MeOH梯度洗脱，得8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-3-(三氟甲基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(8mg)。MS：[M+H]+＝622.1，[M-H]+＝620.0.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.55(s，1H)，8.62(s，1H)，8.45-8.46(d，1H)，8.18-8.21(dd，1H)，7.57(s，1H)，7.30-7.39(m，7H)，7.00(s，1H)，6.85-6.86(s，1H)，4.07(s，6H)ppm。
实施例42：化合物42的制备
8-氯-3-((二乙氨基)甲基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应瓶中，加入3-(溴甲基)-8-氯-2-(4-氟苯基)-2，7-奈啶-1(2H)-酮(116.7mg，1eq)，二乙胺(23mg，0.9eq)，DCM(15mL)，室温搅拌过夜。点板反应完全，停止反应，回收溶剂，过柱，得8-氯-3-((二乙氨基)甲基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(42.7mg)。
3-((二乙氨基)甲基)-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基) -2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮的制备
向反应中加入8-氯-3-((二乙氨基)甲基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(41.7mg，1eq)，4-(6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基氧基)-3-氟苯胺(36.6mg，1eq)，三(二亚苄基丙酮)二钯(21.4mg，0.2eq)，4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(26.9mg，0.4eq)，叔丁醇钠(13.4mg，1.2eq)，抽气并通入氩气，加入二氧六环(15mL)，升温至110度反应6小时。停止反应，过滤，滤液回收溶剂，用DCM-MeOH梯度洗脱，得3-((二乙氨基)甲基)-8-((4-((6，7-二甲氧基喹唑啉-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(20mg)。MS：[M+H]+＝639.2，[M-H]+＝637.2.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.75(s，1H)，8.62(s，1H)，8.30-8.31(d，1H)，8.23-8.25(d，1H)，7.58(s，1H)，7.39-7.40(d，1H)，7.33(s，2H)，7.18-7.26(m，4H)，6.73-6.74(d，1H)，6.64(s，1H)，3.70(s，6H)，3.07-3.09(m，2H)，2.38-2.42(m，2H)，0.85-0.88(m，6H)ppm。
实施例43：化合物43的制备
3-氯-4-(4-((6-((二甲基氨基)甲基)-7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-2-酰胺吡啶的制备
向反应瓶中加入8-氯-3-((二乙氨基)甲基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(120mg，1eq)，4-(4-氨基-2-氟苯)-3-氯-2-酰胺吡啶(101.9mg，1eq)，异丙醇(15mL)，浓盐酸(0.05mL)电磁搅拌，设外温90℃反应4.5小时，有固体析出，过滤，固体用二氯甲烷和水溶解，饱和碳酸氢钠中和，分液干燥，旋干得3-氯-4-(4-((6-((二甲基氨基)甲基)-7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-2-酰胺吡啶(105mg)。
8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-3-((二甲基氨基)甲基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮
室温下向3-氯-4-(4-((6-((二甲基氨基)甲基)-7-(4-氟苯基)-8-氧-7，8-二氢-2，7-萘啶-1-基)氨基)-2-氟苯)-2-酰胺吡啶(40mg，1eq)，乙腈(4mL)，乙酸乙酯(4mL)，水(2mL)，搅拌5min后向反应中加入醋酸碘苯(45mg，2eq)，抽充氮气，氮气保护下反 应2小时，点板反应完全，停止反应，加水(20mL)，乙酸乙酯(20mL*5)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，抽滤，浓缩，粗品硅胶柱层析得到8-((4-((2-氨基-3-氯吡啶-4-基)氧基)-3-氟苯基)氨基)-3-((二甲基氨基)甲基)-2-(4-氟苯基)-2，7-萘啶-1(2H)-酮(20mg)。MS：[M+H]+＝549.1，[M-H]+＝547.1.
1H-NMR(500M，CDCl3)δ11.74(s，1H)，8.29-8.31(d，1H)，8.15-8.18(dd，1H)，7.75-7.77(m，1H)，7.30-7.34(d，2H)，7.22-7.28(m，3H)，7.05-7.08(m，1H)，6.75-6.76(d，1H)，6.56(s，1H)，6.06-6.07(d，1H)，5.03(s，2H)，2.95(s，2H)，2.12(s，6H)ppm。
实施例44体外生化水平抑制蛋白激酶(PK)活性实验
材料与方法：c-Met、Flt-3、VEGFR-2、PDGFR-β和c-Kit激酶，来源于Invitrogen；HTRF KinEASE；TK Kit(Cisbio公司)；384孔板(Greiner公司)；ATP(sigma公司)，MgCl2(sigma)公司；PHERAstar FS多功能酶标仪(BMG公司)；低速离心机(StaiteXiangyi公司)；恒温箱(Binder公司)。选取的阳性药为BMS777607，结构如下：
化合物溶解及保存：视溶解性用DMSO将受试化合物配置成0.5-10mmol/L的母液，分装后-20℃保存；
化合物工作液的配制：测试前将分装的化合物从冰箱取出，用纯DMSO稀释到50×所需浓度；然后用去离子水将化合物稀释至4×所需浓度；
1.33×Enzymatic buffer的配制：将5×Enzymatic buffer来源于HTRF kit)用去离子水稀释到1.33×，并且加入1.33×终浓度的相应成分：1.33mmol/L DTT和1.33mmol/LMgCl2；
激酶工作液的配制：用1.33×Enzymatic buffer将Met稀释到2×所需终浓度0.2ng/μL；
底物工作液的配制：用1.33×Enzymatic buffer将substrate-biotin(来源于HTRFkit)和ATP(10mM)稀释为4×所需终浓度的混合液；
检测工作液的配制：用HTRF detection buffer将16.67μmol/L的Streptavidin-XL665稀释到4×所需终浓度，然后与等体积的Antibody-Cryptate混合(均 来源于HTRFkit)。
酶反应步骤：向低体积384微孔板的每个孔中加入4μLμl的激酶工作液，同时加入4μL的1.33×Enzymatic buffer作为阴性对照(Negative)；向孔加入2μl的化合物工作液，同时加入2μL的8％DMSO水溶液作为零化合物浓度对照(即阳性对照，Positive)；于25℃(或30℃)孵育5-10min；向孔中加入2μL底物工作液启动酶反应，于25℃(或30℃)振荡反应15-60min。
HTRF试剂检测步骤：向孔加入8μL的检测工作液终止反应；25℃反应1h；
HTRF信号的读取：采用PHERAstar FS读数检测信号，仪器相应设置如下：
Optic module
Integration delay(lag time)50μs
Integration time 400μs
Number of flashes 200
对于每孔读出的原始数据，比值＝665nm/620nm；
抑制率的计算：
IC50值的计算：以化合物浓度的对数为横坐标，抑制率为纵坐标，在GraphPadPrism5中，拟合非线性曲线：log(inhibitor)vs.response--Variable slope，求出酶活抑制率为50％时的待测化合物浓度即IC50。
实验结果：c-Met激酶活性半数抑制浓度(IC50nM)
本发明提供结构如式I所示化合物对c-Met激酶活性的半数抑制浓度(IC50)见表1：
表1化合物对c-Met激酶活性的半数抑制浓度(IC50)
化合物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
活性强度 +++ ++ +++ +++ ++ + +++ +++ +++ +
化合物 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
活性强度 +++ +++ +++ +++ ++ +++ +++ ++ +++ +++
化合物 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
活性强度 +++ +++ +++ + +++ +++ ++ +++ +++ +++
化合物 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
活性强度 +++ ++ +++ +++ +++ ++ ++ +++ +++ ++
化合物 41 42 43 BMS777607
活性强度 +++ +++ +++ +++
+++表示IC50＜500nM；++表示IC50范围为500-5000nM；+表示IC50范围为5000nM-50μM；-表示未测试
表2化合物对KDR激酶活性的半数抑制浓度(IC50)
化合物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
活性强度 - - - - - - - ++ ++ -
化合物 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
活性强度 ++ ++ ++ +++ - ++ + - +++ ++
化合物 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
活性强度 ++ ++ +++ - - +++ + ++ ++ +++
化合物 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
活性强度 +++ + ++ - ++ ++ ++ +++ - +
化合物 41 42 43 BMS777607
活性强度 - - - ++
+++表示IC50＜500nM；++表示IC50范围为500-5000nM；+表示IC50范围为5000nM-50μM；-表示未测试
表3化合物对c-Kit激酶活性的半数抑制浓度(IC50)
化合物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
活性强度 - - - - - - - - ++ -
化合物 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
活性强度 +++ +++ + +++ - ++ - - +++ -
化合物 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
活性强度 ++ - - - - +++ ++ +++ - +++
化合物 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
活性强度 +++ ++ +++ - +++ - - +++ - -
化合物 41 42 43
活性强度 - - - ++
+++表示IC50＜500nM；++表示IC50范围为500-5000nM；+表示IC50范围为5000nM-50μM；-表示未测试
实验结果：本发明部分化合物对c-Met激酶生化水平的抑制活性与阳性药BMS777607相当，对VEGR-2激酶和c-kit激酶的生化水平的抑制活性显著优于阳性药BMS777607。
实施例45体外细胞水平抑制蛋白激酶(PK)活性实验
材料与方法：人胃腺癌细胞株MKN-45等均来源于中科院上海细胞库；1640培养基(GIBCO公司)；胎牛血清(GIBCO公司)；24孔细胞培养板(Costar公司)；96孔无色透明高亲和力酶标板(Costar公司)；HGF(R&D System公司)；细胞裂解液(碧云天公司)；c-Met captureantibody(R&D System公司)；Anti-phosphotyrosine antibody，clone4G10(Upstate公司)；HRP labeled goat-anti-mouse antibody(中杉金桥公司)；TMB(Pierce公司)；酶标检测仪(Tecan公司，Infinite M200)；多功能洗板机(Bio-Rad公司)
化合物配置：阳性药以及各受试化合物用DMSO配置成10mM的母液，-20℃保存。
Met抗体包被：将c-Met抗体稀释到2μg/mL，以每孔100μL的量加入酶标板中，4℃包被过夜(16-18h)。PBST(PBS/0.05％Tween20，pH 7.4)洗涤3次；每孔加封闭液(5％BSA/PBS)200μl，37℃封闭2h；PBST洗涤3次；抓取c-Met蛋白：24孔细胞培养板中接种80～90％融合度的MKN-45细胞，8-10h细胞贴壁后，更换无血清1640培养基，饥饿过夜；用无血清1640培养基梯度稀释的化合物；吸去24孔板中培养基，快速加入180μL/孔化合物浓度梯度稀释液，并将化合物作用的细胞在培养箱孵育1h；用无血清1640培养基将HGF配置成800ng/mL的溶液，在24孔板中每孔加20μl，轻微混匀后在37℃刺激5-8min；快速吸去24孔板中培养基上清，每孔加240μl RIPA裂解液；在封闭后的酶标板中每孔加100μl细胞裂解液，37℃100rpm振摇2h；PBST洗涤3次；
Phosphotyrosine的检测：一抗孵育：每孔加100μ鼠源Anti-phosphotyrosineantibody，Clone 4610(0.5％BSA/PBS(W/V)1∶2000稀释)，37℃100rpm振摇1-1.5h；PBST洗涤3次；二抗孵育：每孔加100μl HRP goat anti mouse IgG(0.5％BSA/PBS(W/V)1∶3000倍稀释)，37℃100rpm振摇1h；PBST洗涤6次；TMB底物显色：每孔加100μLTMB substrate，室温暗室反映2-10min；待底物到适当的颜色后，每孔加入50μL2M H2SO4；酶标仪450nm吸收波长处测定吸光值。
实验设两个对照组，阴性对照组：加入10-5mol/L高浓度的SCR-1，不加HGF刺激；阳性对照组：不加任何药物，只加HGF刺激；
计算所有给药组和对照组的平均值，按以下公式计算抑制率：
IC50值的计算：以化合物浓度的对数为横坐标，抑制率为纵坐标，在GraphPadPrism5中，拟合非线性曲线：log(inhibitor)vs.response--Variable slope，求出酶活抑制率为50％时的待测化合物浓度即IC50。
实验结果：本发明部分化合物对c-Met激酶细胞水平活性与阳性药BMS777607相当，部分化合物的半数抑制浓度范围(IC50)见表2，
表2化合物对c-Met激酶细胞水平活性的半数抑制浓度范围(IC50)
化合物 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
活性强度 ++ - ++ ++ ++ - + ++ +++ -
化合物 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
活性强度 +++ +++ +++ +++ ++ ++ ++ + ++ +++
化合物 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
活性强度 +++ +++ +++ ++ + +++ +++ +++ +++
化合物 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
活性强度 +++ ++ +++ +++ - - - +++ ++ +
化合物 41 42 43 BMS777607
活性强度 + ++ - +++
+++表示IC50＜1μM；++表示IC50范围为1-10μM；+表示IC50范围为10μM-100μM；-表示未测试
实施例46本发明提供的化合物抑制肿瘤细胞增殖的测定方法(MTT法)
试剂和仪器：
RPMI 1640培养基(RPMI 1640+12％小牛血清+HEPES 3.5g/L+NaHCO3 2.2g/L+青霉素0.13g/L+链霉素0.15g/L)；
RPMI 1640培养基(RPMI 1640+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/L+NaHCO3 2.2g/L+青霉素0.13g/L+链霉素0.15g/L)；
高糖DMEM培养基(DMEM+10％小牛血清+HEPES 3.5g/L+NaHCO3 2.2g/L+青霉素0.13g/L+链霉素0.15g/L)；
高糖DMEM培养基(DMEM+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/L+NaHCO3 2.2g/L+青霉素0.13g/L+链霉素0.15g/L)；
MC COYS 5-A培养基(DMEM+12％胎牛血清+HEPES 3.5g/L+NaHCO3 2.2g/L+青霉素0.13g/L+链霉素0.15g/L)；
胰蛋白酶；MTT(美国Amresco公司产品)；酶标仪(TECAN infinite M200)
人胃腺癌细胞株(BGC)；人非小细胞肺癌(A549)；人白血病细胞株(K562)；人胰腺癌细胞株(PANC-1)；人小细胞肺癌(NCI-H446)；所列癌细胞株用含12％小牛血清的RPMI1640培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
人胰腺癌细胞株(BXPC-3)；人膀胱癌细胞株(T24)；所列癌细胞株用12％胎牛血清的RPMI 1640培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
人肝癌细胞株(HEPG2)；人乳腺癌细胞株(MCF-7)；所列癌细胞株用12％小牛血清的高糖DMEM培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
人结肠腺癌细胞株(CACO-2)，用12％胎牛血清的高糖DMEM培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养；
人结肠癌细胞株(HT29)；人结肠癌细胞株(HCT116)；人卵巢癌细胞株(SK-OV-3)；所列癌细胞株用12％胎牛血清的MC COYS 5-A培养基，于37℃，5％CO2的培养箱中培养。
接种：取处于指数生长期，状态良好的细胞一瓶，加入适量胰蛋白酶消化液，消化使贴壁细胞脱落，用含12％小牛血清的RPMI1640(或DMEM或5A)培养液配成细胞悬液，计数，并将细胞密度调整稀释至1.67×104/mL取细胞悬液接种于96孔板上，180μL/孔(含肿瘤细胞3000/孔)。
培养：将培养板转入恒温CO2培养箱中，在37℃，5％CO2及饱和湿度条件下培养24小时。
初筛：待测化合物先用DMSO配制成0.1M浓度，再作3个稀释度，用于初筛，浓度依次为10-5mol/L、10-6mol/L和10-7mol/L。加入待测化合物，20μL/孔，培养72小时。每组设3个平行孔，并重复3次，测定96孔板每孔吸光值，记录结果计算细胞生长抑制率，取三次平均值。
染色：将MTT加入96孔板(贴壁细胞)中，20μL/孔，置于培养箱中孵育4小时，吸弃孔内上清液，加入DMSO 100μL/孔，置平板摇床上震荡5分钟。将MTT加入96孔板中(悬浮细胞)，20μL/孔，置于培养箱中孵育4小时，再加入20％SDS 50μL/孔， 置于培养箱中过夜。
测定：酶标仪设定波长为570nm，参考波长为630nm，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞生长抑制率，以判断受试药物的抗肿瘤活性。
复筛：在初筛浓度为10-5mol/L时，3次细胞抑制率≥50％的化合物用于复筛，将0.1mol/L再作10个稀释度，浓度依次为10-5mol/L、0.5×10-5mol/L、10-6mol/L、0.8×10- 6mol/L、0.6×10-6mol/L、0.4×10-6mol/L、0.2×10-6mol/L、10-7mol/L、0.8×10-7mol/L和0.4×10-7mol/L。加入受试化合物，20μL/孔，培养48小时。同样每组设3个平行孔，并重复3次，并按照初筛方法，测定96孔板每孔吸光值，记录结果并计算细胞生长抑制率。
细胞生长抑制率以及IC50的计算：
同时根据各浓度的生长抑制率，采用以化合物浓度的对数同Logit线性回归，求出抑制生长率为50％时的待测化合物浓度即IC50，取三次平均值。
试验结果：本发明实施例1至43中制备的具有式I结构的化合物对多种肿瘤细胞的增殖具有抑制作用，经统计分析，效果显著(P＜0.05)，其IC50均在10-5mol/L以下。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (12)

1.结构如式(II)所示的化合物、其药学上可接受的盐：
其中：
X选自CH；m为0-4；
B选自-O-；
R1为氢或卤素；
R2或R3均为氢；
R4为氢或卤素；
R5选自氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、-NR7R11取代的C1-6烷基、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基取代的C1-6烷基；
A选自以下基团：
R12、R13、R14、R15、R15’、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R40或R41相同或不同，独立选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、硝基、-CO2R10、-OR10、5-12元杂芳基、C1-6烷基取代的5-12元杂芳基、C3-6杂环烯基、C1-6烷氧羰基取代的C3-6杂环基；
R10选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷基、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环基取代的C1-6烷基；
G为S或NH；D为N或CH；Z为N或CH；
R7、R11相同或不同，各自选自氢、C1-6烷基；
n为0-2；p为0-5；R29选自氢、卤素、C1-C6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中A选自以下基团：
3.根据权利要求2所述的化合物，其中R12、R13、R14、R15、R15’、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R40或R41相同或不同，独立选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、C2-6烷氧羰基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基取代的C1-6烷氧基、吗啉基取代的C1-6烷氧基、咪唑基、C1-6烷氧基取代的咪唑基、四氢吡啶基、C1-6烷氧羰基取代的四氢吡啶基。
4.根据权利要求3所述的化合物，其中R12、R13、R14、R15、R15’、R17、R17’、R18、R19、R20、R21、R22、R22’、R40或R41相同或不同，独立选自氢、卤素、氨基、氰基、羟基、C1-6烷基、-COOEt、-OCH3、-O(CH2)2OCH3、
5.根据权利要求1所述的化合物，其中m为0或1；n为0或1；p为0或1。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R5选自氢、甲基、卤代C1-6烷基、-CH2NMe2、-CH2NEt2或
7.化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物选自：
8.一种结构如式IV所示的化合物、其药学上可接受的盐
其特征在于，
n'为0-1；p'为0-1；
R2'或R3'均为氢；
R4'和R29'相同或不同，独立选自氢、卤素、C1-6烷基；
R5'选自氢、C1-6烷基、卤代C1-6烷基；或R5'中各个氢原子选择性的被一个或者多个R30'取代；
R30'选自C1-6烷基、-NR7'R11'、含1个或多个N、O或S的杂原子的3-9元杂环烷基；
R7'或R11'选自氢、C1-6烷基。
9.根据权利要求8所述的化合物，所述化合物选自：
10.一种药物组合物，其包含药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂，以及作为活性成分的权利要求1或7中任一项所定义的化合物。
11.权利要求1或7所述的化合物在制备治疗增殖性疾病或减轻其严重性药物方面的应用，其中所述增殖性疾病是结肠直肠癌、膀胱癌、头和颈癌、前列腺癌、乳腺癌、肝癌、肾癌、肺癌、胰腺癌、胃肠癌、鼻咽癌、成胶质细胞瘤、鳞状细胞癌、星形细胞癌、卡波济氏肉瘤、黑素瘤、卵巢癌、神经胶质瘤、泌尿生殖道癌或骨髓增殖性疾患。
12.根据权利要求1或7所述的化合物在制备治疗c-Met、KDR或c-kit介导的病症药物方面的应用。
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