WO2013002522A2 - 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 조성물 - Google Patents

마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 조성물 Download PDF

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aging
masticia
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안경섭
권옥경
오세량
이상우
김두영
김정희
도반하이
박지원
이중구
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한국생명공학연구원
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    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/52—Stabilizers
    • A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers

Definitions

  • Anti-aging composition containing an extract of mastiscia.alboria or fractions thereof as an active ingredient
  • the present invention relates to an anti-aging composition, and more particularly, to an anti-aging cosmetic composition, a pharmaceutical composition, and a health food containing an extract of mastiscia arborea C.B.Clarke) or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Free radicals that cause aging and disease in the human body are formed as biological reactions during normal metabolic processes in the human body, and are known to cause various diseases by causing harmful toxicity to cells and tissues (Folin 0 & Denis W, 1912, J. Biol. Chem. 12: 239-249).
  • the physiological action of inhibiting such harmful free radicals is a superoxide anion with a very similar reaction and destructive ability as it has a role similar to that of a superoxide dismutase (SOD) that provides electrons to oxidative free radicals to inhibit oxidation. It is responsible for converting radicals (super oxide anion radicals) into normal oxygen.
  • SOD superoxide dismutase
  • bioactive ingredients with strong antioxidant effects contribute greatly to the prevention of ulcers and spasms caused by oxidative stress, to control gastric secretion and diarrhea in the gastrointestinal tract, to preventing and reducing diabetes, diabetes, cancer, heart disease and degenerative diseases.
  • Superoxide dismutase an antioxidant, breaks down free radicals, ie superoxide radicals, generated during the respiration of cells into hydrogen peroxide and oxygen. Hydrogen peroxide reacts with metal ions such as iron or copper to generate more powerful free radicals called hydroxy radicals. Antioxidants, catalase and glutathione peroxidase, which remove hydrogen peroxide before it reacts with metal ions, break down hydrogen peroxide into water and carbon dioxide. The antioxidant that removes hydrogen peroxide does not completely remove 5% of hydrogen peroxide, so it reacts with metal ions in the body, turning into hydroxy radicals, aging our bodies and causing them to die.
  • prevention copper there are widely distributed in the equations based, fruit and many pages nolseong compounds in vegetables, flavonoids, tocopherol, vitamin C, antioxidants, such as selenium prevent or delay the rooms oxide support and cancer and cardiovascular disease It also plays an important role in the prevention of aging by delaying the natural antioxidants in the plant kingdom, 3 ⁇ 4 tocopherol and vitamin C. It is widely used in stores, etc.
  • Synthetic antioxidants include Butylated Hydroxy Toluene (BHT), Butylated Hydroxy Anisole (BHA), Propyl Gal late (BHA), etc. Synthetic antioxidants are highly antioxidant and inexpensive. It is widely used in commercial foods, but concerns about stability such as human side effects Log usage is legally regulated. Natural antioxidants, such as tocophere, are safe for the human body but have the ability to block oxidative chain reactions alone, and are expensive. Therefore, in recent years, research has been actively conducted to develop safer and more natural antioxidants.
  • Masticia alboria arborea CBClarke belongs to the Cornaceae family and grows in India and Sri Lanka. It is known that there is an ingredient called loganin in the bark of this plant (Wieffering, JH, 1966, Phytochemistry), but there is no research on the activity of extracts and ingredients of Mastia alboria. .
  • the inventors of the present invention while screening plants with excellent antioxidant effect, the extract of mastia alboria is excellent DPPH (l, l-diphenyl-2—picryl—hydrazyl) free radical. It was confirmed that scavenging activity and ABTS (2,2'-azinobis— (3-ethylbenzothiazoline— 6—sulphonic acid)) showed free radical scavenging activity, and fractions thereof also showed excellent antioxidant effects.
  • the present invention was completed by revealing that the boria extract and its fractions can be usefully used as an active ingredient of the anti-aging composition.
  • the present invention provides an anti-aging cosmetic composition containing an extract of Masticia alboria Ofes / / a arborea CBClarke) or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the present invention provides an anti-aging pharmaceutical composition containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient. .
  • the present invention provides an anti-aging health food containing the mastia alboria extract or its fraction as an active ingredient.
  • the present invention provides a method for inhibiting aging comprising administering to a subject a pharmaceutically effective amount of a masticia alboria extract or a fraction thereof.
  • the present invention provides a mastia alboria extract or fractions thereof for use as an anti-aging cosmetic composition.
  • the present invention also provides a masticia alboria extract or fractions thereof for use as an anti-aging pharmaceutical composition.
  • the present invention provides a mastisia alboria extract or fractions thereof for use as an anti-aging health food composition.
  • the present invention provides an anti-aging cosmetic composition containing a mastia alboria (#asf / / a arborea C.B.Clarke) extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the aging is preferably skin aging but is not limited thereto.
  • the present invention also provides an anti-oxidant cosmetic composition containing a mastia alboria arborea C.B.Clarke) extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the masticia alboria extract is preferably prepared by a manufacturing method comprising the following steps, but not always limited thereto:
  • step 3 Concentrating the filtered extract of step 2) under reduced pressure and drying to prepare an extract of Masticia alvoria.
  • the mastis Alboria ( ⁇ / 3 arborea of step 1) CBClarke) can be used without limitation, such as grown or commercially available.
  • the mastissia alboria is not limited to all available leaves, stems or roots.
  • the extraction solvent of step 1) is preferably water, alcohol or a combination thereof.
  • the alcohol it is preferable to use d to C 2 lower alcohol, and as the lower alcohol, ethanol or methanol is preferably used, and methanol is most preferably used, but not limited thereto.
  • the extraction method it is preferable to use shaking extraction, Soxhlet extraction or reflux extraction, but is not limited thereto.
  • the extraction solvent is preferably extracted by adding 1 to 10 times the amount of dried mastissia alboria, and more preferably by adding 2 to 3 times, but not always limited thereto.
  • the extraction temperature is preferably 20 to 100 ° C, preferably 20 to 40 ° C, but is not limited thereto.
  • the extraction time is preferably 10 to 48 hours, more preferably 15 to 30 hours, but is not limited thereto.
  • the extraction number is preferably 1 to 5 times, more preferably 3 to 4 times repeated extraction is not limited thereto.
  • the decompression concentration in step 3) preferably uses a vacuum decompression concentrator or a vacuum rotary evaporator, but is not limited thereto.
  • the drying is preferably reduced pressure drying, vacuum drying, boiling drying, spray drying or freeze drying, but is not limited thereto.
  • Fractions of the mastissia alboria extract of the present invention is preferably prepared by a manufacturing method of additionally extracting the mastisia alboria extract with an organic solvent, but is not limited thereto. ,
  • the organic solvent is preferably n-nucleic acid, chloroform, ethyl acetate, or a bottom column, but is not limited thereto.
  • n-nucleic acid, chloroform, ethyl acetate, and butane are added in stages, and n-nucleic acid fraction, chloroform fraction, ethyl acetate fraction and butanol fraction obtained by obtaining soluble fraction in each solvent addition step;
  • the butanol fraction may be used in both the water fraction of the concentrated water layer to remove the remaining, but preferably butanol or ethyl acetate fraction.
  • the antioxidant effect of the mastissia alboria extract In order to confirm the effect, DPPH free radical scavenging activity was measured by 1,1-diphenyl-2-2-picryl-hydrazyl (1,1-diphenyl-2-pi cry 1-hydrazyl, DPPH, Sigma) method. As a result, it was confirmed that the mastia alboria extract exhibits scavenging activity of DPPH free radicals in a concentration-dependent manner (see FIG. 4).
  • the solvent fraction of the mastisia alboria was confirmed to have excellent DPPH and ABTS free radical scavenging effect. (See Table 1).
  • the antioxidant effect of the mastia alboria extract in order to confirm the antioxidant effect of the mastia alboria extract, as a result of measuring the ABTS free radical scavenging activity according to various concentrations of the mastia alboria extract, It was confirmed that the boria extract showed the scavenging activity of ABTS free radicals in a concentration-dependent manner (see FIG. 5).
  • the masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention exhibit DPPH free radical scavenging activity and ABTS free radical scavenging activity in a concentration-dependent manner, and thus have an excellent antioxidant effect. It can be seen that it can be usefully used as an active ingredient.
  • the cosmetic composition may be, for example, an emulsion obtained by dispersing an oil phase in a solution, a gel, a solid or pasty anhydrous product, an aqueous phase, a suspension, a microemulsion, a microcapsule, a microgranule or an ionic form (liposomes), a nonionic vesicle.
  • It may be provided in the form of a dispersant, cream, skin, lotion, powder, ointment, spray or cone stick. It may also be prepared in the form of a foam or in the form of an aerosol composition further containing a compressed propellant. '
  • the cosmetic composition is a fatty substance, organic solvent solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, emollients, foaming agents in addition to the masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention , Fragrances, surfactants, water, ionic or nonionic emulsifiers, fillers, metal ion sequestrants and chelating agents, preservatives, vitamins, blockers, wetting agents, essential oils, dyes, pigments, hydrophilic or lipophilic active agents, lipid vesicles Or adjuvants conventionally used in the cosmetic field, such as any other ingredient conventionally used in cosmetics.
  • the extract of the present invention is usually added to the cosmetic composition.
  • the masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof is used as an external preparation for skin, it is further added to fatty substances, organic solvents, solubilizers, thickeners and gelling agents, emollients, antioxidants, suspending agents, stabilizers, foaming agents (foaming).
  • fragrances such as lipid vesicles or any other ingredients conventionally used in external preparations for skin.
  • ionic or nonionic emulsifiers such as glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerin, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, glycerol, g
  • the present invention also provides an anti-aging pharmaceutical composition containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient. '
  • the aging is preferably skin aging but is not limited thereto.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for antioxidants containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • the masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention exhibit DPPH free radical scavenging activity and ABTS free radical scavenging activity in a concentration-dependent manner, and thus have an excellent antioxidant effect. It can be seen that it can be usefully used in minutes.
  • the composition containing the masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof may further contain one or more active ingredients exhibiting the same or similar functions in addition to the above components.
  • composition of the present invention may further comprise a pharmaceutically acceptable additive, wherein the pharmaceutically acceptable additives are starch, gelatinized starch, microcrystalline cells, loose, lactose, povidone, colloidal silicon dioxide, phosphoric acid Calcium Hydrogen, Lactose, Manni, Peel, Arabian Rubber, Pregelatinized Starch, Corn Starch, Powder Cellulose, Hydroxypropyl Cell Loose, opadry, sodium starch glycolate, lead carnauba, synthetic aluminum silicate, stearic acid, magnesium stearate, aluminum stearate, calarate stearate, white sugar, dextrose, sorbide and talc can be used.
  • the pharmaceutically acceptable additive according to the present invention is preferably included 0.1 to 90 parts by weight based on the composition, but is not limited thereto.
  • composition of the present invention can be administered in various oral and parenteral dosage forms during actual clinical administration, and when formulated, diluents such as layering agents, extenders, binders, wetting agents, disintegrating agents, surfactants, etc. that are commonly used Or excipients.
  • Solid preparations for oral administration include tablets, pills, tablets, granules, capsules, and the like, and these solid preparations include at least one excipient such as starch, calcium carbonate, in the extract of mastia alboria. It may be prepared by mixing sucrose, lactose or gelatin.
  • lubricants such as magnesium styrate talc may also be used.
  • Liquid preparations for oral use include suspensions, solutions, emulsions and emulsions . Syrups and the like may be used, in addition to the commonly used simple diluents water and liquid paraffin may include a variety of excipients, for example, wetting agents, sweeteners, fragrances, preservatives.
  • Formulations for parenteral administration may include sterile aqueous solutions, non-aqueous solvents 3 ⁇ 4 , suspensions, emulsions, lyophilized preparations, suppositories.
  • non-aqueous solvent and suspension propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable esters such as ethyl acrylate may be used.
  • As a suppository base witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurige, and glycerogelatin may be used.
  • composition of the present invention can be administered orally or parenterally according to the desired method, the external or intraperitoneal injection, rectal injection, subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection, intramuscular injection or intramuscular injection during parenteral administration It is desirable to choose a method. Dosage can vary depending on the patient's weight, age, sex, health condition, diet, time of administration, method of administration, rate of excretion and severity of disease.
  • the dosage of the composition of the present invention varies depending on the patient's weight, age, sex, health status, diet, time of administration, administration method, excretion rate and severity of the disease, the daily dosage is mastia alboria It is 0,000 to 100 mg / kg, preferably 0.001 to 10 mg / kg, based on the amount of the extract may be administered 1 to 6 times a day.
  • the composition of the present invention can be used alone or in combination with methods using surgery, radiation therapy, hormone therapy, chemotherapy and biological response modifiers.
  • the present invention provides an anti-aging health food containing an active ingredient of mastia alboria extract or fractions thereof.
  • the aging is preferably skin aging but is not limited thereto.
  • the present invention provides a health food for antioxidant containing a mastia alboria extract or a fraction thereof as an active ingredient.
  • Mastisia alboria extract or fractions thereof of the present invention is concentration-dependent
  • the mastisia alboria extract S may be added as its fraction as it is or used with other food or food ingredients, and may be appropriately used according to a conventional method.
  • the kind of the health food There is no particular limitation on the kind of the health food.
  • the food to which the mastissia alboria extract or fractions thereof may be added include dairy products including meat, sausage, bread, chocolate, candy, snacks, confectionary, pizza, ramen, other noodles, gums, and ice cream.
  • Various soups, beverages, tea, drinks, alcoholic beverages and vitamin complexes, etc. and includes all of the health food in the usual sense.
  • the health beverage composition of the present invention may contain various flavors or natural carbohydrates, etc. as additional components, as in the general beverage.
  • the above-mentioned natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, and polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, xylly, sorbitol, and erythritol. It is a sugar alcohol.
  • natural sweeteners such as tautin, stevia extract, synthetic sweeteners such as saccharin, aspartame and the like can be used.
  • the ratio of the natural carbohydrate is generally about 0.01 to 0.04 g, preferably about 0.02 to 0.03 g per 100 ⁇ of the composition of the present invention.
  • the health food of the present invention includes various nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and salts thereof, alginic acid and salts thereof, organic acids, protective colloid thickeners, pH regulators, stabilizers, preservatives, glycerin, Alcohol may contain the carbonation agent etc. which are used for carbonated drinks. In addition it may contain flesh for the production of natural fruit juices, fruit juice drinks and vegetable drinks. These components can be used independently or in combination.
  • the present invention provides a method for inhibiting aging comprising administering to a subject a pharmaceutical composition containing a pharmaceutically effective amount of an extract of mastiscia alboria or a fraction thereof as an active ingredient. .
  • the aging is preferably skin aging but is not limited thereto.
  • the pharmaceutically effective amount is 0.00001 to 10 mg / kg, preferably 0.0001 to 1 mg / kg but is not limited thereto. Dosages may vary depending on the specific patient's weight, age, gender health status, diet, duration of administration, method of administration, clearance, severity of the disease, and the like.
  • the subject is a vertebrate and preferably a mammal, more preferably j is an experimental animal such as a rat, rabbit, guinea peak, hamster, dog, cat, etc. Preferred apes, such as chimpanzees and gorillas to be.
  • the administration method is preferably oral or parenteral, and skin application is most preferred.
  • Mastasia alboria (as ⁇ / a arborea CBClarke) extract of the present invention showed a DPPH free radical production inhibitory effect, ABTS free radical production inhibitory effect in a concentration-dependent manner, its fractions also have an excellent antioxidant effect By doing so, it can be usefully used as an active ingredient of anti-aging cosmetic composition, pharmaceutical composition and health food.
  • Figure 1 is a drawing showing the manufacturing process of the extract and fraction ' ⁇ austria alboria (s / / ⁇ 3 arborea CBClarke).
  • Figure 2 is a fraction and mastissia alboria arborea CBClarke extract
  • FIG. 1 shows the Thin Layer Chromatography (TLC) of water
  • T masticia alboria extract
  • Figure 4 is a mastia alboria (as / a arborea C.B.Clarke) extract
  • Figure 5 is ABTS of the mastia alboria arborea C.B.Clarke extract
  • the content of the invention is not limited to the following examples, experimental examples and production examples.
  • the mastissia alboria extract of the present invention is a biological material of Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology. Purchased from Overseas Plant Extract Bank of Herb Center
  • the mastissia alboria extract and fractions obtained in ⁇ Example 1> and ⁇ Example 2> were dissolved in methanol at a concentration of lOmg / ml, and silica gel thin layer chromatography (TLC Silica gel 60 F 254 , Merck) was performed. .
  • TLC Silica gel 60 F 254 silica gel thin layer chromatography
  • As a developing solvent it was set as the mixed solvent whose ratio of n-nucleic acid: acetone is 2: 1.
  • silica gel reverse phase chromatography TLC Silica gel 60 RP-18 F 254 S, Merck
  • the developing solvent was 90% methanol (Fig. 2).
  • UPLC analysis of the masticia alboria extract and fractions Dissolve the masticia alboria extract and fractions obtained in ⁇ Example 1> and ⁇ Example 2> at 10 mg / ml in methanol and then Filtration with a membrane filter.
  • Ultra Performance Liquid Chromatography UPLC
  • CAD Charge Aerosol Detector
  • free radical scavenging activity was measured by placing 90 mL of 0.15 mM DPPH solution dissolved in ethanol in a 96 well plate, and dispensing the methanol extract at concentrations of 2.5, 5, 10, 20, 40 and 80/111 £, respectively. After 20 minutes at room temperature, the absorbance was measured at 517 ran with an ELISA reader. Free radical scavenging activity (%) was calculated by the following equation (1). At this time, the group treated with DMS0 was used as the negative control group, and the group treated with the synthetic antioxidant BHA and the natural antioxidant alpha-tocope were used as the positive control group. -
  • a A absorbance of the negative control group not treated with the mastissia alboria extract of the present invention.
  • ABTS free radical scavenging activity was mixed with ABTS and potassium persulfate to a final concentration of 7 mM and 2.45 mM, respectively, and left in the dark for 12 hours to form ABTS radicals. It is diluted with distilled water to have an absorbance of 0.7 at 734 nm, and then dispensed into a 96 well plate, and the sample is divided into 2.5, 5, 10, 20, 40 or 80 / zg / n ⁇ , and then, at room temperature. The reaction was carried out for 7 minutes in the dark. Absorbance was measured using a microplate meter at 734 nm. At this time, the group treated with DMS0 was used as a negative control group, and the group treated with synthetic antioxidants BHA and torque phenol was used as a positive control group.
  • ABTS showed free radical scavenging activity depending on the treatment concentration of the masticia alboria extract, and showed excellent ABTS radical scavenging activity compared to the positive control group BHA and alpha-tocope. (FIG. 5).
  • DPPH and ABTS free radical scavenging ability of n-nucleic acid, chloroform, ethyl acetate, and butane for each solvent fractionated in ⁇ Example 1> were measured in the same manner as in ⁇ Experimental Example 1> and ⁇ Experimental Example 2>. .
  • Each fraction was aliquoted at a concentration of 40 ⁇ , reacted at room temperature, and the absorbance was measured with a microplate absorber.
  • the group treated with DMS0 was negative control group, natural antioxidants a-tocopher and ascorb Acid treated group or synthetic antioxidant BHA was used as a positive control.
  • the nutrition cream containing the mastissia alboria extract of ⁇ Example 2> or a fraction thereof as an active ingredient was prepared as shown in the following [Table 3].
  • tablets were prepared by compression, according to the manufacturing method of the conventional purification.
  • the capsules were prepared by filling in gelatin capsules according to a conventional method for preparing capsules.
  • masticia alboria extract or fractions thereof of the present invention was added to the flour, and bread, cake, cookies, crackers and noodles were prepared using this mixture.
  • 0.1-5.0 parts by weight of the mastisia alboria extract or fractions thereof of the present invention was added to soups and broths to prepare meat products for health promotion , soups of noodles and broths.
  • Health weight ground beef was prepared by adding 10 parts by weight of the mastissia alboria extract or fractions thereof to the ground beef.
  • Mastisia alboria extract or fractions thereof of the present invention 5-10 parts by weight was added to milk, and various milk products such as butter and ice cream were prepared using the milk.
  • Brown rice, barley, rice, and jujube were alphanized by a known method, and then dried and roasted to prepare a powder having a particle size of 60 mesh.
  • Black beans, black sesame seeds, and sesame seeds were also steamed and dried by a known method, and then ground to a powder having a particle size of 60 mesh.
  • the mastissia alboria extract or fractions thereof of the present invention were concentrated under reduced pressure in a vacuum concentrator, dried by spraying and drying with a hot air dryer, and then the particle size was 60 with a grinder. Grinding to a mesh to obtain a dry powder.
  • Cereals (30 parts by weight brown rice, 15 parts by weight brittle, 20 parts by weight of barley) ,
  • Seeds (7 parts by weight perilla, 8 parts by weight black beans, 7 parts by weight black sesame seeds),
  • Masticia alboria extract of the present invention (3 parts by weight) ,
  • Vegetable juice was prepared by adding 5 g of the mastissia alboria extract of the present invention or a fraction thereof to 1,000 m of tomato or carrot juice.
  • a fruit juice was prepared by adding 1 g of the masticia alboria extract of the present invention or a fraction thereof to 1,000 mi of apple or grape juice.

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Abstract

본 발명은 마스티시아 알보리아(Mastixia arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 농도의존적으로 DPPH 자유라디칼 소거 활성 및 ABTS 자유라디칼 소거 활성을 나타내어 탁월한 항산화 효과를 가짐으로써, 노화방지용 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】
[발명의 명칭】
마스티시아.알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노 화방지용 조성물
【기술분야】
본 발명은 노화방지용 조성물에 관한 것으로, 구체적으로 마스티시아 알보 리아 arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유 하는 노화방지용 화장료 조성물， 약학적 조성물 및 건강식품에 관한 것이다.
[배경기술】
인체의 노화와 질병을 유발하는 자유 라디칼은 인체 내에서 정상적인 대사 과정 중 생물학적 반웅으로 형성되며， 세포와 조직에 해로운 독성을 일으켜 여러 가지 질병을 유발하는 것으로 알려져 있다 (Folin 0 & Denis W, 1912, J. Biol. Chem. 12： 239-249). 이러한 유해 자유라디칼을 억제하는 생리작용으로는 산화성 자유라디칼에 전자를 공여하여 산화를 억제하는 전자공여능과 수퍼옥사이드 디스뮤 타제 (superoxide dismutase; SOD)와 유사한 역할로서 반웅성과 파괴성이 매우 큰 수퍼옥사이드 음이온 라디칼 (super oxide anion radical)을 정상상태의 산소로 전환 시켜주는 역할이 있다. 강력한 항산화 효과를 가지는 여러 가지 생리활성 성분들은 산화적 스트레스에 의해 발생되는 궤양과 경련의 예방， 위장관의 위액 분비조절과 설사예방, 당뇨예방， 암, 심장병 및 퇴행성 질병들의 예방과 감소에 크게 기여한다 고 보고되고 있다 (Azuma K et al. , 1999， J. Agric. Food. Chem. 47: 3963-3966, Ham SS et al. , 1997, J. Food. Sci. Nutr. 2:155—161). 그리고， 최근 건강에 대한 관심이 높아지면서 다양한 식물자원에서 항암， 항알러지， 항비만， 항산화 및 항균 등의 효과가 있는 기능성 물질을 다량 함유하는 자원을 선발하여， 약으로， 식품첨 가제로， 또는 화장품의 원료로 개발하려는 연구가 전 세계적으로 진행되고 있다 (Shin DB, et al. , 2006, Food. Sci. Biotechnol . , 15： 357-362, Park et al. , 2004, Korean J. Nutr. , 37： 364-372, Kim et al. , 2006, Kor. J. Food Sci. Techno 1. 38： 799-804, Ali KA et al. , 2005, Food Chem. , 89： 27-36). 항산화제인 수퍼옥사이드 디스뮤타제는 세포의 호흡과정에서 발생한 활성산 소 즉， 수퍼옥사이드 라디칼을 과산화수소와 산소로 분해시킨다. 과산화수소는 철 이나 동과 같은 금속이온과 결합하여 반웅을 하게 되면 하이드록시 라디칼이라는 보다 강력한 활성산소가 발생하게 된다. 과산화수소가 금속이온과 반응하기 전에 이를 제거해주는 항산화제인 카탈라아제와 글루타치온 퍼옥시다제가 과산화수소를 물과 이산화탄소로 분해시킨다. 과산화수소를 제거해주는 항산화제가 5 %의 과산화 수소를 완벽하게 제거를 못 한 나머지 이것이 체내의 금속이온에 반응하여 하이드 록시 라디칼로 변해 우리의 몸을 노화시키고 병들어 죽게 하는 것이다. 방사선이나 자외선의 찾은 노출은 과산화수소를 하이드록시 라디칼로 변하게 하여 노화를 촉진 시키는데， 이를 지연시키는 방법으로는 항산화제의 복용이 있다. 수퍼옥사이드 라 디칼 (Superoxide radical, 02") 자체는 반웅성이 비교적 약하지만， 쉽게 ¾02로 변 환되어 결국， 반웅성이 강한 하이드록실 라디칼을 생성하거나， 나이트릭 옥사이드 (nitric oxide, NO)와 반응하여 반옹성이 강한 퍼옥시나이트라이트 (peroxy nitrite 0N00)를 생성하여 SH—그룹의 산화， 단백질 티로신의 질산화 (nitration), 지질과산 화， DNA손상 등을 일으키는 원인이 된다. 항산화 물질은 '동， 식들계에 널리 분포되어 있는데， 과일과 채소에 많은 페 놀성 화합물 , 플라보노이드， 토코페롤， 비타민 C, 셀레늄과 같은 항산화 물질은 지 방의 산화를 지연시키거나 방지하며 암 및 심장혈관계 질환 등을 예방， 지연시킴으 로써 노화방지에도 중요한 역할을 한다. 식물계에 존재하는 천연 항산화 물질 ¾ 토 코페를과 비타민 C는 식품， 의약훔 및 화장품 등에 널리 이용되고 있다. 유지 또는 유지함유 식품의 산패는 주로 공기 중의 산소와 결합에 의해 일어나는데, 이를 방 지하기 위하여 많은 합성 또는 천연 항산화 물질이 개발되어 왔으나, 그 효과와 경 제성 때문에 실제로 많이 사용되고 있는 것은 합성 항산화제이다. 합성 항산화제로 는 BHT(Butylated Hydroxy Toluene), BHA(Butylated Hydroxy Anisole), 프로필갈레 이트 (Propyl Gal late) 등이 있다. 합성 항산화제는 항산화력이 뛰어나고 가격이 저 렴하여 상업용 식품에 많이 사용되고 있으나, 인체 부작용 등 안정성에 대한 우려 로 그 사용량이 법적으로 규제되어 있다. 토코페를과 같은 천연 항산화제는 인체에 대하여 안전하기는 하나 단독으로는 산화 연쇄반웅 저지 능력이 있고， 가격이 비싼 단점이 있다. 따라서 , 최근에는 보다 안전하고 항산화 효과가 뛰어난 천연 항산화 제를 개발하기 위한 연구가 활발히 이루어지고 있다. 한편， 마스티시아 알보리아 arborea C.B.Clarke)는 Cornaceae과에 속하며 인도와 스리랑카에서 자생한다. 이 식물의 나무껍질에서 로가닌 (loganin)이 라는 성분이 있음이 알려졌으나 (Wieffering, J. H., 1966， Phytochemistry) , 마스 티시아 알보리아의 추출물 및 성분의 활성에 대한 연구는 아직 알려진 바가 없다.
'
이에， 본 발명자들은 항산화 효과가 우수한 식물을 스크리닝하던 중， 마스 티시아 알보리아의 추출물이 우수한 DPPH(l,l-diphenyl-2— picryl— hydrazyl) 자유라 디칼 . 소거 활성과 ABTS(2,2'-azinobis— (3-ethylbenzothiazoline— 6— sulphonic acid)) 자유라디칼 소거 활성을 나타낸다는 것을 확인하였으며, 이의 분획물 또한 탁월한 항산화 효과를 가지고 있음을 확인함으로써， 마스티시아 알보리아 추출물 및 이의 분획물이 노화방지용 조성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 밝힘으로써 본 발명을 완성하였다.
【발명의 상세한 설명】 ' 【기술적 과제】
본 발명의 목적은 마스티시아 알보리아 ( fes /r/a arborea C.B.Clarke) 추출
\
물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강식품을 제공하는 것이다.
【기술적 해결방법】 상기 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 마스티시아 알보리아 Ofes / /a arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다. 또한， 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 약학적 조성물을 제공한다. .
또한， 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 ᅵ분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 건강식품을 제공한다.
또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 노화억제 방법을 제공한다.
또한， 본 발명은 노화방지용 화장료 조성물로 사용하기 위한 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
또한, 본 발명은 노화방지용 약학적 조성물로 사용하기 위한 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
또한, 본 발명은 노화방지용 건강식품용 조성물로 사용하기 위한 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 제공한다.
이하， 본 발명을 상세히 설명한다. 본 발명은 마스티시아 알보리아 (#asf / /a arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 노화는 피부노화인 것인 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 발명은 마스티시아 알보리아 arborea C.B.Clarke) 추출 물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 항산화용 화장료 조성물을 제공한다. 상기 마스티시아 알보리아 추출물은 하기의 단계들을 포함하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:
1) 마스티시아 알보리아 (yfes / /3 arborea C.B.Clarke)에 추출용매를 가하 여 추출하는 단계 ;
2) 단계 1)의 추출물을 여과하는 단계 ; 및
3) 단계 2)의 여과한 추출물을 감압 농축한 후 건조하여 마스티시아 알보리 아의 추출물을 제조하는 단계 .
상기 방법에 있어서， 단계 1)의 마스티시아 알보리아( ^ /3 arborea C.B.Clarke)는 재배한 것 또는 시판되는 것 등 제한 없이 사용할 수 있다. 상기 마 스티시아 알보리아는 잎， 줄기 또는 뿌리가 모두 이용가능하나 이에 한정하지 않는 다.
상기 방법에 있어서, 상기 단계 1)의 추출용매는 물， 알코올 또는 이들의 흔합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올로는 d 내지 C2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며 , 저급 알코올로는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하고， 메탄올을 이용하는 것이 가장 바람직하나， 이에 한정하지 않는다. 추 출방법으로는 진탕추출， Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 건조된 마스티시아 알보리아 분량에 1 내 지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 2 내지 3배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하나， 이에 한정하지 않는다. 추출온도는 20 내지 100 °C인 것이 바람직 하고， 20 내지 40°C인 것이 바람직하나， 이에 한정하지 않는다. 또한， 추출시간은 10 내지 48시간인 것이 바람직하며， 15 내지 30시간인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 아울러， 추출 회수는 1 내지 5회인 것이 바람직하며， 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
상기 방법에 있어서, 단계 3)의 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전 증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한， 건조는 감압건조, 진공건조， 비등건조， 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물의 분획물은 상기 마스티시아 알보리 아 추출물을 추가적으로 유기용매로 추출하는 제조방법에 의해 제조되는 것이 바람 직하나 이에 한정되지 않는다. ,
상기 유기용매로는 n-핵산, 클로로포름， 에틸아세테이트， 또는 부탑을인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 분획물로는 n-핵산， 클로로포름, 에 틸아세테이트， 및 부탄을을 단계적으로 첨가한 후， 각 용매 첨가 단계에서 가용성 분획을 획득한 n-핵산 분획물， 클로로포름 분획물, 에틸아세테이트 분획물 및 부 탄올 분획물， 및 상기 부탄올 분획물을 제거하고 남은 물층을 농축한 물 분획물이 모두 사용가능하나， 바람직하게는 부탄올 또는 에틸아세테이트 분획물이다. 본 발명의 구체적인 실시예에서， 마스티시아 알보리아 추출물의 항산화 효 과를 확인하기 위하여， DPPH 자유라디칼 소거 활성을 1,1-디페닐—2-피클릴-히드라 질 (1,1-di phenyl -2-pi cry 1-hydrazyl, DPPH, Sigma) 방법으로 측정한 결과, 마스티 시아 알보리아 추출물이 농도의존적으로 DPPH 자유라디칼의 소거 활성을 나타내는 것을 확인하였다 (도 4 참조).
또한， 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서， 마스티시아 알보리아 용매 분획물의 DPPH 및 ABTS자유라디칼 소거능을 확인한 결과， 마스티시아 알보리아 용 매 분획물은 DPPH 및 ABTS자유라디칼 소거 효과가 뛰어남을 확인하였다 (표 1참조). 또한, 본 발명의 또 다른 구체적인 실시예에서， 마스티시아 알보리아 추출 물의 항산화 효과를 확인하기 위하여， 마스티시아 알보리아 추출물의 다양한 농도 에 따른 ABTS 자유라디칼 소거 활성을 측정한 결과， 마스티시아 알보리아 추출물이 농도의존적으로 ABTS자유라디칼의 소거 활성을 나타내는 것을 확인하였다 (도 5 참 조 )·
따라서， 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 농도의 존적으로 DPPH자유라디칼 소거 활성 및 ABTS 자유라디칼 소거 활성을 나타내어 탁 월한 항산화 효과를 가지므로 노화방지용 화장료 조성물 또는 항산화용 화장료 조 성물의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다. 상기 화장료 조성물은, 예를 들면 용액， 겔， 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액， 마이크로에멀젼， 마이크로캡슐， 미 세과립구 또는 이온형 (리포좀)， 비이온형의 소낭 분산제와 형태， 크림， 스킨, 로션， 파우더， 연고， 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한， 포말 (foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조 될 수 있다. '
또한， 상기 화장료 조성물은 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물에 추가로 지방 물질， 유기 용매 용해제, 농축제 및 겔화제， 연화제 , 항산화제, 현탁화제, 솬정화제, 발포제 (foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제， 충전제， 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제， 비타민， 차단제， 습윤화제， 필수 오일， 염료, 안료， 친수성 또는 친유성 활성제， 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분 야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 화장 료 조성물에 있어서， 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 본 발명의 추출물이
0.1 내지 50 중량 %， 바람직하게는 1 내지 10 중량 ¾)의 양으로 첨가될 수 있다.
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 피부 외용제로 사용하는 경우, 추가로 지방 물질， 유기 용매， 용해제， 농축제 및 겔화제， 연화제， 항산화제, 현탁화제， 안정화제， 발포제 (foaming agent), 방향제， 계면활성제, 물， 이온형 또는 비이온형 유화제， 충전제 , 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제， 보존제 , 비타민， 차단제， 습윤화제， 필수 오일， 염료， 안료, 친수성 또는 친유성 활성제， 지질 소낭 또는 피부용 외용제에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 피 부 과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 또한， 상기 성분 들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.
- 또한, 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분 으로 함유하는 노화방지용 약학적 조성물을 제공한다. '
상기 노화는 피부노화인 것인 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 '발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분 으로 함유하는 항산화용 약학적 조성물을 제공한다. 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 농도의존적으로 DPPH 자유라디칼 소거 활성 및 ABTS 자유라디칼 소거 활성을 나타내어 탁월한 항산 화 효과를 가지므로 노화방지용 약학적 조성물 또는 항산화용 약학적 조성물의 유 효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.. 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 함유하는 조성 물은 상기 성분에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 첨가제를 더 포함할 수 있으 며， 이때.약제학적으로 허용 가능한 첨가제로는 전분， 젤라틴화 전분, 미결정셀를 로오스， 유당, 포비돈， 콜로이달실리콘디옥사이드， 인산수소칼슘, 락토스， 만니를， 엿， 아라비아고무， 전호화전분, 옥수수전분， 분말셀롤로오스， 히드록시프로필셀를 로오스, 오파드라이， 전분글리콜산나트륨， 카르나우바 납， 합성규산알루미늄， 스테 아린산， 스테아린산마그네슘， 스테아린산알루미늄， 스테아린산칼슴， 백당， 덱스트 로스, 소르비를 및 탈크 등이 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 약제학적으로 허용 가능한 첨가제는 상기 조성물에 대해 0.1 - 90 중량부 포함되는 것이 바람직하나 이에 한정되는 것은 아니다.
즉， 본 발명의 조성물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데， 제제화할 경우에는 보통 사용하는 층진제， 증량제, 결 합제， 습윤제, 붕해제， 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제， 제, 과립제， 캡슐제 등이 포함 되며 , 이러한 고형제제는 마스티시아 알보리아 추출물에 적어도 하나 이상의 부형 제 예를 들면， 전분， 칼슘카보네이트 (Calcium carbonate), 수크로스 (Sucrose)， 락 토오스 (Lactose) 또는 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한 단순한 부형제 이외 에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제， 내용액제， 유제 및 .시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제， 예를 들면 습윤제， 감미제， 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액， 비수성용제 ¾， 현탁제, 유제， 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현 탁용제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜， 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸을레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있 다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트원 (tween) 61, 카카오지， 라 우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명의 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여할 수 있으며， 비경구 투여시 피부 외용 또는 복강내주사， 직장내주사， 피하주사, 정 맥주사， 근육내 주사 또는 흉부내 주사 주입방식을 선택하는 것이 바람직하다. 투 여량은 환자의 체중， 연령, 성별， 건강상태， 식이， 투여시간， 투여방법， 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다.
본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중， 연령, 성별， 건강상태， 식이， 투여시간， 투여방법， 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며， 일일 투여량은 마스티시아 알보리아 추출물의 양을 기준으로 0,0001 내지 100 mg/kg이고， 바람직하게는 0.001 내지 10 mg/kg이며, 하루 1 ~ 6 회 투여될 수 있다. 본 발명의 조성물은 단독으로， 또는 수술， 방사선 치료， 호르몬 치료， 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다. 또한， 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분 으로 함유하는 노화방지용 건강식품을 제공한다.
상기 노화는 피부노화인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한， 본 발명은 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분 으로 함유하는 항산화용 건강식품을 제공한다. 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물은 농도의존적으로
DPPH 자유라디칼 소거 활성 및 ABTS자유라디칼 소거 활성을 나타내어 탁월한 항산 화 효과를 가지므로 노화방지용 건강식품 또는 항산화용 건강식품의 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다. 본 발명의 건강식품은 마스티시아 알보리아 추출물 S는 이의 분획물을 그 대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법 에 따라 적절하게 사용될 수 있다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지， 빵, 초콜 릿， 캔디류， 스넥류， 과자류, 피자， 라면， 기타 면류， 껌류， 아이스크림류를 포함 한 낙농제품， 각종 스프， 음료수, 차, 드링크제， 알코올음료 및 비타민 복합제 등 이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.
본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포 도당, 과당과 같은 모노사카라이드， 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드， 및 덱 스트린， 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드， 자일리를， 소르비틀， 에리트리 를 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴， 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제 나， 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 .감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수 화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ^당 일반적으로 약 0.01 ~ 0.04 g, 바람직하 게는 약 0.02 - 0.03 g 이다. 상기 외에 본 발명의 건강식품은 여러 가지 영양제， 비타민， 전해질, 풍미 제， 착색제， 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염， 유기산， 보호성 콜로이드 증 점제, pH조절제， 안정화제, 방부제， 글리세린， 알코을, 탄산음료에 사용되는 탄산 화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 천연 과일주스， 과일주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 흔합하여 사 용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다. 또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포 함하는 노화억제 방법을 제공한다. .
상기 노화는 피부노화인 것인 바람직하나 이에 한정하지 않는다. ; 상기 약학적으로 유효한 양이란 0.00001 내지 10 mg/kg이고， 바람직하게는 0.0001 내지 1 mg/kg이나 이에 한정하지 않는다. 투여량은 특정 환자의 체중， 연령 , 성별 건강상태， 식이， 투여기간， 투여방법， 제거율, 질환의 중증도 등에 따라 변 화될 수 있다. ： 상기 개체는 척추동물이고 바람직하게는 포유동물이며， 그보다 바람직하게 j 는 쥐， 토끼， 기니아피크， 햄스터， 개， 고양이와 같은 실험동물이고， 가징 ί바람직 하게는 침팬지， 고릴라와 같은 유인원류 동물이다.
상기 투여 방법은 경구 또는 비경구가 바람직하며， 피부 도포가 가장 바람 직하다.
【유리한 효과】
본 발명의 마스티시아 알보리아 ( as^ /a arborea C.B.Clarke) 추출물은 농 도의존적으로 DPPH 자유라디칼 생성 억제 효과, ABTS 자유라디칼 생성 억제 효과를 나타내었으며， 이의 분획물 또한 우수한 항산화 효과를 가지고 있음을 확인함으로 써 , 노화방지용 화장료 조성물, 약학적 조성물 및 건강식품의 유효성분으로 유용하 게 사용될 수 있다. 【도면의 간단한 설명】
도 1은 마스티시아 알보리아 ( s / /<3 arborea C.B.Clarke) 추출물과 분획 ' ¬¬물 제조과정을 나타낸 그림이다. 도 2은 마스티시아 알보리아 arborea C.B.Clarke) 추출물과 분획
물의 TLC(Thin Layer Chromatography)를 나타낸 그림이다;
T: 마스티시아 알보리아 추출물;
H: 마스티시아 알보리아 n-핵산 분획물;
C: 마스티시아 알보리아 클로로포름 분획물; 1
E: 마스티시아 알보리아 에틸아세테이트 분획물;
B: 마스티시아 알보리아 부탄올 분획물； 및
W: 마스티시아 알보리아 물 분획물. 도 3은 마스티시아 알보리아 arborea C.B.Clarke) 추출물과 분획
물의 CAD (Charge Aerosol Detector)를 나타낸 그림이다. 도 4은 마스티시아 알보리아 ( as /a arborea C.B.Clarke) 추출물의
DPPH 자유라디칼 소거 활성을 나타낸 그래프이다. 도 5는 마스티시아 알보리아 arborea C.B.Clarke) 추출물의 ABTS
소거활성을 나타낸 그래프이다.
【발명의 실시를 위한 최선의 형태 ]■
이하， 본 발명을실시예，. 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예， 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본
발명의 내용이 하기 실시예， 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1>마스티시아 알보리아추출물의 제조
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물은 한국생명공학연구원 해외생물소재 허브센터의 해외식물추출물은행에서 구입하였으며 한국생명공학연구원 식물표본관
(KRIB, Herbarium of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology)에 증거표본 (KRIB 0019270)이 보관되어 있다. 추출과정을 살펴보면, 마스티시아 알보리아 (잎， 어린가지 )를 건조한 후， 분쇄된 분말시료 67 g에 메탄올 1 를 가한 후 초음파추출기 (SDN-900H, SD-ULTRAS0NIC CO., LTD)를 이용하여 상온 에서 30회 (40KHz, 15분 추출 -120분 정지 ) 반복추출하였다. 그런 다음 여과하여 감 압농축한 후， 마스티시아 알보리아 메탄올 추출물 4.13 g을 수득하였다 (이하 마스 티시아 알보리아 추출물이라 명함). <실시예 2>마스티시아 알보리아의 용매 분획물 제조
상기 <실시예 1>에서 얻어진 마스티시아 알보리아 추출물 중 430 mg 에 증 류수를 첨가하여 현탁시키고， 동량의 n—핵산을 가하여 흔합 후 n-핵산가용성 분획 부와 물가용성 분획부를 분리하였으며， 이를 3회 실시하여 여과， 감압농축하여 n- 핵산 분획물 93.4 mg을 수득하였다. 그런 다음， 상기 n-핵산 분획물을 제거하고 남 은 물층에 클로로포름을 늪량 가하여 같은 방법으로 클로로포름 분획물 69.6 mg 수 득하였고, 다시 남은 물층에 에틸아세테이트를 동량 가하여 같은 방법으로 에틸아 세테이트 분획물 84.4 mg을 수득하였으며， 또 다시 남은 물층에 부탄올을 동량 가 하여 동일한 방법으로 부탄을 분획물 72.6 mg을 수득하였으며 , 남은 물층을 농축하 여 물 분획물 78.1 mg을 수득하였다 (도 1).
<실시예 3>마스티시아 알보리아추출물 및 분획물의 TLC조사
상기 <실시예 1>과 <실시예 2>에서 얻어진 마스티시아 알보리아 추출물과 분획물을 lOmg/ml의 농도로 메탄올에 녹인 후 실리카겔 박층 크로마토그래피 (TLC Silica gel 60 F254, Merck)를 실시하였다. 전개용매로는 n-핵산 ： 아세톤의 비율이 2 ： 1 인 흔합용매로 하였다. 또한 실리카겔 역상 크로마토그래피 (TLC Silica gel 60 RP-18 F254S, Merck)를 실시하였고, 전개용매는 메탄올 90%로 하였다 (도 2).
<실시예 4>마스티시아 알보리아추출물 및 분획물의 UPLC분석 상기 <실시예 1>과 <실시예 2>에서 얻어진 마스티시아 알보리아 추출물과 분획물을 10mg/ml로 메탄올에 녹인 후 0.2 簡의 membrane filter로 여과하였다. 초고성능 액체 크로마토그래피 (UPLC, Ultra Performance Liquid Chromatography)는
Waters Acquity UPLC 사스템을 이용하였으며， 컬럼은 ACQUITY UPLCTMBEHCi8(10腿 X
2.1 隱， i.d. , 1.7um, waters, USA)을 35°C에서 사용하였으며， 이동상 A는 물과 formic acid (100:0.1, v/v)로 이동상 B는 acetonitril과 formic acid
(100:0.1,v/v)로 하여 초기에 이동상 B를 5%로 1분동안 유지시킨 후， 7분까지
60%로 증가,' 7.5분까지 100%로 이동상 B를 증가시켜 분석 한 후, 이동상 B를
100%로 9분까지 유지시키고, 9.5분까지 이동상 B를 5¾로 낮추고 11분까지 5)로 안정화시켜 분석에 사용하였다. 이동상의 유속량은 0.4 ml/min 그리고 시료 주입량은 3μ1로 하였다.
CAD( Charge Aerosol Detector)는 UPLC로부터 분리되어진 물질들에 전하
(Charge)를 붙여주어 그 전하를 측정하는 detector로써 크로마토그래피 형식으로 물질의 상대적 함량과 분리도를 확인해 볼 수 있다 (도 3). '
<실험예 1>마스티시아 알보리아추출물의 DPPH자유라디칼소거 활성 확인
. 상기 <실시예 1>의 마스티시아 알보리아 추출물에 대하여 자유라디칼 소거 활성을 1，1-디페닐 -2-피크릴-히드라질 (1,1-dipheny卜 2-picryl— hydrazyl, , DPPH, Sigma) 방법으로 측정하였다.
구체적으로， 자유라디칼 소거 활성 측정에는 에탄올에 잘 녹인 0.15 mM의 DPPH 용액 90 을 96 웰 플레이트에 넣고， 상기 메탄올 추출물을 2.5， 5， 10， 20, 40 및 80 /111£의 농도로 각각 분주하여， 상온에서 20분간 방치한 후， ELISA 리더 (reader)로 517 ran에서 흡광도를 측정하였다. 자유라디칼 소거 활성 (%)은 하기의 수학식 1로 산출하였다. 이때， DMS0를 처리한 군을 음성대조군으로， 합성 항산화제 인 BHA와 천연항산화제인 알파 -토코페를을 처리한 군을 양성대조군으로 사용하였 다. -
【수학식 1】 자유라디칼소거활성 (%)= 100-프 ΐοο
A A: 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물을 처리하지 않은 음성대조군의 흡광도; 및 .
B: 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물을 처리한 실험군의 흡광도. ■ 그 결과， 마스티시아 알보리아 추출물의 처리 농도에 의존적으로 DPPH 자유 라디칼 소거 활성을 나타냄을 확인하였고， 양성대조군인 BHA와 알파 -토코페를과 비교하여 우수한 DPPH자유라디칼 소거활성을 나타내는 것을 확인하였다 (도 4).
<실험예 2>마스티시아 알보리아 추출물의 ABTS자유라디칼소거 활성 확인 상기 <실시예 1>의 마스티시아 알보리아 추출물을 이용하여 ABTS 자유라디 칼 소거 활성을 확인하였다.
구체적으로， ABTS 자유라디칼 소거 활성은 ABTS와 포타슘 퍼설페이트 (potassium persulfate)를 각각 7 mM과 2.45 mM의 최종농도가 되도록 흔합한 후, 암소에서 12시간 방치하여 ABTS 라디칼을 형성시켰다. 이를 734 nm에서 흡광도가 0.7이 되도록 증류수로 희석한 후 96 웰 플레이트에 분주하고, 여기에 시료를 2.5， 5, 10, 20, 40 또는 80 /zg/n ^의 농도로 분주한 후， 상온의 암소에서 7분간 반응시 켰다. 흡광도는 734 nm에서 마이크로플레이트 측정기를 이용하여 측정하였다. 이때ᅳ DMS0를 처리한 군을 음성대조군으로， 합성 항산화제인 BHA와토크페놀을 처리한 군 을 양성대조군으로 사용하였다.
그 결과, 마스티시아 알보리아 추출물의 처리 농도에 의존적으로 ABTS 자유 리디칼 소거 활성올 나타냄을 확인하였고， 양성대조군인 BHA와 알파 -토코페를과 비교하여 우수한 ABTS 라디칼 소거활성을 나타내는 것을 확인하였다 (도 5).
<실험예 3> 마스티시아 알보리아 용매 분획물의 DPPH 및 ABTS자유라디칼 소 거능
상기 <실시예 1>에서 분획한 용매별 n-핵산， 클로로포름， 에틸아세테이트, 부탄을 물 분획물에 대해 <실험예 1> 및 <실험예 2〉와 동일한 방법으로 DPPH 및 ABTS 자유라디칼 소거능을 측정하였다. 각 분획물은 40 Λι 의 농도로 각각 분주 하여， 상온에서 반웅시킨 후， 마이크로플레이트 흡광기로 흡광도를 측정하였다. 이 때 DMS0를 처리한 군을 음성대조군으로， 천연항산화제인 a-토코페를과 아스코르브 산을 처리한 군 또는 합성항산화제인 BHA를 양성대조군으로 사용하였다. 그 결과， 표 1에서 나타난 바와 같이， 마스티시아 알보리아 용매 분획물은 DPPH 및 ABTS자유라디칼 소거 효과가 뛰어남을 확인하였고, 특히 마스티시아 알보 리아 에틸아세테이트， 부탄올 분획물은 DPPH 자유라디칼 소거 효과가 현저히 높고 ABTS 자유라디칼의 경우 전 분획물에 걸쳐 소거 효과가 우수함을 확인하였다. 또한， 천연물 유래의 양성대조군인 -토코페를과 아스코르브산을 처리한 군과 비교하였 을 때도 월등히 우수한 활성을 나타냄을 확인하였다 (표 1).
【표 1]
시료 (40/ig/me) . DPPH라디칼소거능 (%) ABTS라디칼소거능 (%) 마스티시아 알보리아 추출물 80.53 士 0.66 99.93 土 0.05 마스티시아 알보리아 핵산 분획물 14.53 士 0.70 31.61 土 0.68 마스티시아 알보리아 클로로포름 분획물 10.40 士 0.64 30.81 士 0.34 마스티시아 알보리이- 에틸아세테이트 분획
94.19 土 0.11 99.96 士 0.09 百 마스티시아 알보리아 부탄올 분획물 93.33 士 0.36 99.73 士 0.13 마스티시아 알보리아 물 분획물 62.58 土 1.27 98.10 '土 1.28
-토코페롤 . 55.89 士 0.69 83.85 士 5.17 아스코르브산 50.26 士 0.74 33.49 士 0.69
BHA(10//g/m£) 44.94 土 0.62 99.73 .± 0.07
<제조예 1> 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 화장료의 제조
<1-1>유연 화장수의 제조 . 상기 <실시예 1>의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성 분으로 함유하는 유연 화장수는 하기 [표 2]와 같이 제조하였다.
【표 2】
Figure imgf000018_0001
<1-2> 영양크림의 제조
상기 <실시예 2>의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성 분으로 함유한 영양크림은 하기 [표 3]의 조성과 같이 제조하였다.
【표 3]
Figure imgf000018_0002
Figure imgf000019_0002
<제조예 2> 마스티시아 알보리아 추출물을 유효성분으로 함유하는
Figure imgf000019_0001
제제의 제조
<2-1>산제의 제조
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 2 g
유당 1 g
상기의 성분을 흔합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다. <2-2> 정제의 제조
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 100 mg
옥수수전분 100 mg
유 당 100 mg ^ 스테아린산 마그네 2 nig
상기의 성분을 흔합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정'하여 정제 를 제조하였다.
<2-3> 캡슐제의 제조
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 100 mg
옥수수전분 100 rag · '
유 당 100 mg
스테아린산 마그네슘 2 mg
상기와성분을 흔합한 후， 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐 에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<2-4>환의 제조
마스티시아 알보리아추출물 또는 이의 분획물 1 g
유당 1.5 g
글리세린 1 g
자일리를 0.5 g
상기의 성분을 흔합한 후， 통상의 방법에 따라 1환 당 4 g이 되도록 제조하 였다.
<2-5>과립의 제조
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 150 mg
대두추출물 50 mg
포도당 200 mg .
전분 600 mg
상기의 성분을 흔합한 후， 30% 에탄올 100 mg을 첨가하여 섭씨 60 °C에서 건조하여 과립을 형성한 후 포에 충진하였다.
<제조예 3> 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 건강식품의 제조
<3-1> 밀가루 식품의 제조
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 0.5~5.0 증량부를 밀가루에 첨가하고， 이 흔합물을 이용하여 빵， 케이크， 쿠키， 크래커 및 면류를 제 조하였다.
<3-2>스프 및 육즙 (gravies)의 제조
： 본 발명의 마스티시아 알보리아.추출물 또는 이의 분획물 0.1~5.0 중량부를 스프 ,및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하 였다.
<3-3> 그라운드 비프 (ground beef)의 제조
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 10 중량부를 그라 운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.
<3-4>유제품 (dairy products)의 제조
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물.5~10 중량부를 우 유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
<3-5>선식의 제조
현미， 보리， 참쌀， 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전 한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩， 검정깨， 들깨도 공지의 방법으로 찌서 건조시킨 것을 배전한 후 분 쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 진공 농축기에 서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류 종실류 및 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다:
곡물류 (현미 30 중량부, 율무 15 중량부， 보리 20 중량부)，
종실류 (들깨 7 중량부， 검정콩 8 중량부， 검정깨 7 중량부)，
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 (3 중량부)，
영지 (0.5 중량부)，
지황 (0.5 중량부). <제조예 4〉 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용음료의 제조
<4-1> 건강음료의 제조
액상과당 (0.5%)， 올리고당 (2%)， 설탕 (2 ， 식염 (0.5%)， 물 (75%)과 같은 부 재료와 본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 5 g을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병， 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조 하였다.
<4-2> 야채 주스의 제조
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 5 g을 토마토 또 는 당근 주스 1,000 m에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
<4-3>과일 주스의 제조
본 발명의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물 1 g을 사과 또는 포도 주스 1,000 mi 에 가하여 과일 주스를 제조하였다.

Claims

【청구의 범위】
[청구항 1】
마스티시아 알보리아 arborea C.B.Clarke) 추출물 또는 이의 분획 물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 화장료 조성물.
[청구항 2】
제 1항에 있어서, 상기 마스티시아 알보리아 추출물은 물， ~ (：2의 저급 알코을 또는 이들의 흔합물을 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 노화 방지용 화장료 조성물.
【청구항 3】
제 2항에 있어서， 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄을인 것을 특징으로 하는 노화방지용 화장료 조성물.
【청구항 4】
제 1항에 있어서， 상기 분획물은 상기 마스티시아 알보리아 추출물에 핵산， 클로로포름， 에틸아세테이트 또는 부탄을을 가하여 추출한 분획물인 것을 특징으로 하는 노화방지용 화장료 조성물. .
【청구항 5】
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노 화방지용 약학적 조성물.
【청구항 6] 제 5항에 '있어서， 상기 마스티시아 알보리아 추출물은 물, d ~ C2의 저급 알코올 또는 이들의 흔합물을 용쩨로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 노화 방지용 약학적 조성물.
【청구항 7】
제 6항에 있어서， 상기 저급 알코올은 에탄올 또는 메탄올인 것을 특징으로 하는 노화방지용 약학적 조성물.
【청구항 8】
제 5항에 있어서， 상기 분획물은 상기 마스티시아 알보리아 추출물에 핵산， 클로로포름, 에틸아세테이트 또는 부탄올을 가하여 추출한 분획물인 것을 특징으로 하는 노화방지용 약학적 조성물.
【청구항 9】
마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 함유하는 노 화방지용 건강식품.
【청구항 10]
제 9항에 있어서， 상기 마스티시아 알보리아 추출물은 물， 메탄올 또는 이 들의 흔합물을 용매로 사용하여 추출하는 것을 특징으로 하는 노화방지용 건강식품.
【청구항 11]
제 9항에 있어세 상기 분획물은 상기 마스티시아 알보리아 추출물에 핵산 클로로포름，' 에틸아세테이트 또는 부탄올을 가하여 추출한 분획물인 것을 특징으로 하는 노화방지용 건강식품.
[청구항 12】 약학적으로 유효한 양의 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 노화억제 방법.
[청구항 13】
노화방지용 화장료 조성물로 사용하기 위한 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물.
【청구항 14]
노화방자용 약학적 조성물로 사용하기 위한 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물.
【청구항 15】
노화방지용 건강식품용 조성물로 사용하기. 위한 마스티시아 알보리아 추출물 또는 이의 분획물.
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