WO2012136120A1 - 芳基丙烯酰胺化合物及其用于制备免疫抑制剂的用途 - Google Patents

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acrylamide
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李松
郑志兵
徐岩
钟武
王晓奎
刘洪英
肖军海
谢云德
周辛波
赵国明
李行舟
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中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
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    • A61P37/02—Immunomodulators
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Definitions

  • the present invention relates to an aryl acrylamide compound or a geometric isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof, a process for producing the same, and a pharmaceutical composition containing the compound.
  • the present invention also relates to the use of the compound as an immunosuppressive agent for the preparation of a medicament for combating organ transplant rejection and for treating and/or preventing certain autoimmune diseases such as rheumatoid, psoriasis, multiple sclerosis, systemic lupus erythematosus and the like. the use of. Background technique
  • CD4 plays a very important role in immune rejection and some autoimmune diseases such as rheumatism, rheumatoid, psoriasis, and multiple sclerosis.
  • CD4 is a single-chain transmembrane glycoprotein expressed on Th cells.
  • Human CD4 has a molecular weight of 55 kDa and consists of 435 amino acid residues with 374, 21 and 40 amino acid residues in the extracellular, transmembrane and cytosol, respectively.
  • the extracellular domain is a member of the IgSF, two N-linked glycosylation sites, and a total of four IgSF domains (D1-D4) (Whi te , RAH , 1978 , J. Exp. Med.
  • D1 and D3 are V-like regions, D3 has no disulfide bond, D2 and D4 are C2-like regions, D2 disulfide bonds are formed in ⁇ -sheets, and characteristic hydrophobic transmembrane functional regions and one A short cytoplasmic functional region with a potential serine phosphorylation site.
  • the three serines (Ser408, Ser415, Ser431) in the cytoplasmic region may be PKC substrates, and the cytoplasmic region CxcpJ I motif is a site that binds to P561ck.
  • the CD4 molecule is distributed as a glycoprotein on the surface of C04+ cells along with the distribution of CD4+ T cells, which is different in various organs.
  • CD4+ T cells are helper T cells (Th). , including ThO, Thl and Th2 subgroups.
  • Th helper T cells
  • CD4-positive cells include CD4 single positive cells (Th)
  • CD4 CD8 double positive immature T cells In addition, CD4 is also expressed in certain sputum cells, EBV-transformed sputum cells, and brain cells.
  • CD4+ T cells are involved in different types of rejection (Abbas AK et al, ed.
  • CD4+ T cells are involved in various types of immune rejection. Binding to MHC class II molecules after CD4 dimerization or oligomerization is one of the key conditions for CD4+ T cell activation to participate in immune rejection (Gould DS and Auchincloss H., Immunology Today, 1999 (20) : 77 -82). Thus, inhibition of CD4 dimerization or oligomerization of this active form or blocking of binding of CD4 to MHC class II molecules can prevent or inhibit allogeneic transplant rejection.
  • Autoimmune disease is a disease state caused by the immune response of the body's immune system to its own components (Zhu Y, et al, Exp Neurol 2002 Sep; 177 (1): 314-20), responded by autoantibodies and/or self. Sex T lymphocytes mediated a rabbit plague response to autoantigens. Activation of T cells requires dual signal stimulation. Among them, the formation of TCR and antigen peptide-MHC molecular complex is one of the key signals. The binding of CD4 molecules to MHC class I I molecules is an important condition for their stability during the formation of this complex.
  • CD4 inhibitors can selectively inhibit the formation of active forms of CD4 molecules or block the binding of CD4 to MHC class II molecules, thereby failing to form stable TCR binds to the antigenic peptide white MHC molecule, a key signal in the double-signal stimuli required for T cell activation is incapable, and thus autoantibodies and/or autoreactive T lymphocytes mediate rabbit disease against autoantigens. The response cannot occur, so CD4 inhibitors can be used for the prevention and treatment of autoimmune diseases such as rheumatoid, psoriasis, multiple sclerosis and systemic lupus erythematosus. Since the above link is a common link between the autoantigen and the immune response elicited by the foreign antigen, CD4 inhibitors have an effect on both transplant rejection and autoimmune diseases. Summary of the invention
  • the object of the present invention is to find and develop a compound capable of selectively inhibiting the formation of an active form of CD4 molecules or blocking the binding of a CD4 molecule to an MHC class I class I molecule to achieve immunosuppressive action.
  • the present inventors have found through research that the compound represented by the following formula I can act on the CD4 molecule and thus has an immunosuppressive effect, which can be used for anti-immunological rejection in organ transplantation and for treating and/or preventing certain self-improving diseases such as Rheumatism, psoriasis, multiple sclerosis and systemic lupus erythematosus. Accordingly, one aspect of the invention relates to an aryl acrylamide compound of the formula I or a geometric isomer thereof or a pharmaceutically acceptable drug thereof among them-.
  • n 0, 1 or 2
  • A is a five- or six-membered heteroaryl ring containing a S, 0, and Se atom, including but not limited to pyridyl, pyrrole, pyrazole, sir, oxazole, furan, pyridine, pyrimidine, and the like;
  • R is hydrogen, a hydroxyl group or an alkoxy group having 1-8 carbon atoms;
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent has at least one alkoxy group selected from halogen, hydroxy or 1-8 carbon atoms, and other substituents may be independently selected from The same or different halogen, hydroxyl group, alkoxy group having 1-8 carbon atoms and alkyl group having 1-8 carbon atoms; may also be a substituted or unsubstituted saturated five- or six-membered aliphatic ring, wherein The substituent may be independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, amino, nitro, aryl, alkoxy having 1-8 carbon atoms and alkyl having 1-8 carbon atoms;
  • R is a hydroxyl group or an alkoxy group having 1-8 carbon atoms
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent includes, but is not limited to, a hydrogen atom, a CI-C7 alkyl group, a halogen, a nitro group a carboxyl group, a hydroxyl group or an alkoxy group having 1-8 carbon atoms, an amino group and an amino group mono- or disubstituted by an alkyl group having 1-8 carbon atoms; or a substituted or unsubstituted saturated pentad or A six-membered aliphatic ring wherein the substituents are independently selected from the group consisting of 3 ⁇ 4, hydroxy, amino, nitro, aryl, alkoxy having 1-8 carbon atoms and alkyl having 1-8 carbon atoms.
  • a preferred embodiment of the invention relates to an aryl acrylamide compound of the formula I or
  • n 0, 1 or 2;
  • A is a five- or six-membered N-containing aromatic ring, including but not limited to pyrrole, pyridine, pyrimidine ring, and the like;
  • R is hydrogen, a hydroxyl group or an alkoxy group having 1-8 carbon atoms
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent is at least There is an alkoxy group selected from halogen, hydroxyl or 1-8 carbon atoms, and the other substituents may be independently selected from the same or different halogens, hydroxyl groups, alkoxy groups having 1-8 carbon atoms and 1 An alkyl group of -8 carbon atoms; or a substituted five- or six-membered aliphatic ring, wherein the substituent may be independently selected from the group consisting of halogen, hydroxy, amino, nitro, aryl, 1- An alkoxy group of 8 carbon atoms and an alkyl group having 1-8 carbon atoms;
  • R is a hydroxyl group or an alkoxy group having 1-8 carbon atoms
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent includes, but is not limited to, a hydrogen atom, a CI-C7 alkyl group, a halogen, a nitro group a carboxyl group, a hydroxyl group or an alkoxy group having 1-8 carbon atoms, an amino group and an amino group mono- or disubstituted by an alkyl group having 1-8 carbon atoms; or a substituted or unsubstituted saturated pentad or A six-membered aliphatic ring wherein the substituents are independently selected from the group consisting of 3 ⁇ 4, hydroxy, amino, nitro, aryl, alkoxy having 1-8 carbon atoms and alkyl having 1-8 carbon atoms.
  • Another preferred embodiment of the invention relates to an aryl acrylamide compound of the formula I or
  • n 0 or 1
  • A is a 5- or 6-membered N heteroaryl ring, including but not limited to pyrrole, pyridine ring, etc.; R is hydrogen or methoxy;
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent has at least one alkoxy group selected from halogen, hydroxy or 1-8 carbon atoms, and other substituents may be independently selected from The same or different halogen, hydroxyl group, alkoxy group having 1-8 carbon atoms and alkyl group having 1-8 carbon atoms; may also be a saturated five- or six-membered aliphatic ring;
  • R is a methoxy group: B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent includes, but is not limited to, a hydrogen atom, a C1-C7 alkyl group, a halogen, a nitro group, a carboxyl group, a hydroxyl group or 1-8
  • n 0 or 1
  • A is a pyrrole or a pyrrole ring
  • R is hydrogen or methoxy
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein at least one of the substituents is selected from a halogen, a hydroxyl group or a methoxy group, and the other substituents may be independently selected from the group consisting of 1-8 carbon atoms.
  • R is a methoxy group
  • B is a benzene ring containing a mono- or poly-substituent, wherein the substituent includes, but is not limited to, a hydrogen atom, a C1-C7 alkyl group, a halogen, a nitro group, a methoxy group, an amino group, an ethyl group, etc. It can also be a saturated five- or six-membered aliphatic ring.
  • heteroaryl ring is a heterocyclic aromatic ring group having 5-14, preferably 5-10, more preferably 5 or 6 members having one single ring or multiple fused rings, which has one or A plurality of heteroatoms selected from N, 0 and S.
  • Typical examples of the heteroaryl ring include, but are not limited to, pyridinium, pyridoxine, pyrimidine, chin, imidazole, pyrrole, pyrazole, triazole, sputum, chewing, chewing, chewing, squaring, and stagnation.
  • halogen as used herein means fluoro, chloro, bromo or iodo. Preferred halogens are fluorine, chlorine or bromine, more preferably fluorine or bromine. More preferably, the compound of the formula I according to the invention is selected from the group consisting of, but not limited to, the following compounds or geometric isomers or pharmaceutically acceptable salts or hydrates thereof:
  • Another aspect of the invention relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising at least one compound of formula I or a geometric isomer or pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof and one or more pharmaceutically acceptable carriers or excipients .
  • a further aspect of the invention relates to a process for the preparation of a compound of formula I or a geometric isomer thereof or a pharmaceutically acceptable salt or hydrate thereof, by means of the following reaction scheme, using a substituted or unsubstituted aromatic acrylic acid with a corresponding substituted amine The reaction is carried out in a solvent.
  • the hydrazine compound is reacted with the compound of the formula I I I in the presence of, for example, thionyl chloride or DCC or EDCI/H0BT at 0-150 for 0.5 to 20 hours.
  • ⁇ , ⁇ and ⁇ in the formula I, I I I are as defined in the formula I.
  • the pharmaceutically acceptable salts of the compounds of the invention include the acid addition salts thereof with inorganic or organic acids or base addition salts with bases.
  • the acid addition salts include, but are not limited to: hydrochloride, hydrobromide, hydroiodide, nitrate, sulfate, hydrogen sulfate, phosphate, hydrogen phosphate, acetate, propionate, butyl Acid salt, trimethylacetate, adipate, alginate, lactate, citrate, tartrate, succinate, maleate, fumarate, picrate, day Aspartate, gluconate, benzoate, methane Acid salt, ethyl ethanesulfonate, phenylbenzenesulfonate, p-toluenebenzenesulfonate and bishydroxynaphthalate;
  • the alkali base plus addition salt salt package includes, but is not limited to,: ammonium ammonium salt, alkali metal salt, such as sodium sodium and potassium
  • composition of the compound of the present invention can be administered in any of the following ways: oral, spray inhalation, rectal administration, nasal administration, buccal administration, vaginal administration, topical administration, parenteral administration such as subcutaneous, intravenous, intramuscular, intraperitoneal Intrathecal, intraventricular, intrasternal, and intracranial injection or input, or by means of an explant reservoir.
  • oral administration, intraperitoneal or intravenous administration and topical administration are preferred.
  • the compounds of the invention may be formulated in any orally acceptable form including, but not limited to, tablets, capsules, aqueous solutions or aqueous suspensions.
  • carriers which are generally used for tablets include lactose and corn starch, and a lubricant such as magnesium stearate may also be added.
  • Diluents commonly used in capsule preparations include lactose and dried corn starch.
  • Aqueous suspension formulations are usually prepared by admixing the active ingredient with a suitable emulsifier or suspension. If desired, some of the above oral preparation forms may also contain sweeteners, flavoring agents or coloring agents.
  • the compounds of the invention When administered rectally, the compounds of the invention will generally be in the form of a suppository prepared by admixing the drug with a suitable non-irritating excipient.
  • a suitable non-irritating excipient exhibited a solid state at room temperature and melted at a rectal temperature to release the drug.
  • excipients include cocoa butter, beeswax and polyethylene glycol.
  • the compounds of the present invention can be formulated into different topical preparations according to different affected faces or organs. Specifically, the following description is as follows:
  • the compound of the present invention can be formulated into a preparation form of a micronized suspension or solution, and the carrier used is an isotonic pH of sterile saline, which may or may not be preserved.
  • An agent such as a benzyl alkoxide is chlorinated.
  • the compound can also be formulated into a cream form such as a vaseline cream.
  • the compounds of the invention When applied topically to the skin, the compounds of the invention may be in the form of a suitable ointment, lotion or cream preparation wherein the active ingredient is suspended or dissolved in one or more carriers.
  • Carriers which may be used herein for ointment preparations include, but are not limited to, mineral oil, liquid petrolatum, white petrolatum, propylene glycol, polyethylene oxide, polypropylene oxide, emulsifying wax and water; and lotions which may be used for lotions or creams include, but are not limited to: Mineral oil, sorbitan monostearate, Tween 60, cetyl esters wax, hexadecene aryl alcohol, 2-octyldodecanol, benzyl alcohol and water.
  • the compound of the present invention can be formulated into a rectal suppository preparation as described above or a suitable enteral preparation, and a topical transdermal patch can also be used.
  • the compounds of the present invention can also be administered in the form of a sterile injectable preparation, including sterile aqueous or oily suspensions, or sterile injection solutions.
  • a sterile injectable preparation including sterile aqueous or oily suspensions, or sterile injection solutions.
  • carriers and solvents which can be used include water, Ringer's solution and isotonic sodium chloride solution.
  • sterile, fixed oils may be employed as a solvent or suspension medium such as a monoglyceride or a diglyceride.
  • the compounds of the invention may be administered with other immunosuppressive drugs, including but not limited to: cyclosporin A, steroid hormones, FK506, RPM, Lef lunomide, DSG, SKF105685MZ, RS61443BQR, etc.
  • immunosuppressive drugs including but not limited to: cyclosporin A, steroid hormones, FK506, RPM, Lef lunomide, DSG, SKF105685MZ, RS61443BQR, etc.
  • the specific dosage and method of use of the compounds of the present invention for different patients depends on a number of factors, including the age, weight, sex, natural health, nutritional status of the compound, the strength of the compound, the time of administration, the rate of metabolism, the condition. The severity of the diagnosis and the subjective judgment of the doctor.
  • a preferred dose is between 0.1 and 300 mg/kg body weight per day.
  • the melting point of the compound was determined by a RY-1 type melting point apparatus, and the thermometer was not corrected.
  • - NMR was measured by an ARX-400 NMR instrument.
  • the quality was measured by a Micromass-ZabSpec MS instrument. All reactions were pretreated with a solvent that was not indicated.
  • 3-indoleformaldehyde (10.00 g, 0.07 leg ol) and malonic acid (21.5 g, 0.21 mol) were dissolved in 110 mL of pyridine, 2 mL of piperidine was added dropwise, and after mixing, it was heated to 40* €. Reaction for 40h. After the reaction, it was cooled to room temperature, and most of the solvent ( ⁇ 40* €) was distilled off under reduced pressure. The reaction solution was poured into 200 mL of distilled water, adjusted to pH 11 with 10% sodium hydroxide solution, and extracted with 4 ⁇ 200 mL of ethyl acetate. , wash away the pyridine.
  • 5-methoxy-3-indene acrylic acid was prepared according to the above method for preparing 3-indene acrylic acid, and the starting material 3-anthracene was replaced by 5-methoxy-3-indolecarboxaldehyde (17.5 g, 0. Olmol). ). The pale yellow solid was obtained as a 5-methoxy-3-indeneacrylic acid 9.30 g, yield 42.9%. Mp 200- 202X (decomposed).
  • a hydrogen chloride clock (13.56 g, 0.242 mol) was dissolved in 70 mL of absolute ethanol and heated to reflux.
  • 1,1,1-Trichloro-3-(quinolin-2-yl)propan-2-ol (13.14 g, 0.045 mol) was dissolved in 150 mL of absolute ethanol and slowly added dropwise to the above solution. Reflux to boiling and react for 2.5 h. After the reaction was allowed to stand, it was cooled, and the insoluble matter in the solution was filtered off. Ethanol was distilled off under reduced pressure, and the remaining solid was dissolved in distilled water. Slowly add water acetic acid to the acidity, and solids are formed. The solid was filtered off and washed with distilled water.
  • Example 5 Synthesis of 1,1,1-trichloro-3-(quinolin-4-yl)propan-2-ol 4-methylquinoline (14.3 g, 13.20 mL, 0.1 mol) and three Chloroacetaldehyde (22. lg, 14.7 mL, 0.15 mol) was dissolved in 50 mL of pyridine and stirred at 80* for 2 h. After the reaction, the reaction solution was poured into 100 mL of distilled water, and the resulting flocculent precipitate was collected. A light ochre solid of 22.14 g was obtained in a yield of 88.2%. Mp 177-178X.
  • N-Methyl-2,4-dinitroaniline (2.04 g, 0. Olmol) was dissolved in 50 mL of methanol and stirred at 50.
  • Sodium sulfide nonahydrate (6.4 Og, 0.027 mol) and sodium hydrogencarbonate (2.24 g, 0.027 mol) were dissolved in 20 mL of distilled water, stirred to dissolve all, and slowly added dropwise to N-methyl-2,4-di
  • the nitroaniline in methanol was stirred at reflux for 85 h at 85 °. After the reaction was allowed to cool, pour into 70 mL of cold water and let stand. Filtration gave a dark red solid 1.39 g. The yield was 80.3%. Mp 177-178.
  • N-Ethyl-2,4-dinitroaniline (2.01 g, 0. Olmol) was dissolved in 50 mL of methanol and stirred at 50.
  • Sodium sulfide nonahydrate (6.40 g, 0.027 mol) and sodium hydrogencarbonate (2.24 g, 0.027 mol) were dissolved in 20 mL of distilled water, stirred to dissolve all, and slowly added dropwise to N-ethyl-2,4-di
  • the nitroaniline in methanol was stirred at reflux for 85 h at 85 °. After the reaction was allowed to cool, pour into 70 mL of cold water and let stand. Filtration gave 1.43 g of a purple solid. The yield was 82.7%. Mp 138-139.
  • N-Phenyl-2,4-dinitroaniline (1.30 g, 0.005 mol) was dissolved in 50 mL of methanol and stirred at 50.
  • Sodium sulfide nonahydrate (3.20 g, 0.013 mol) and sodium hydrogencarbonate (1.12 g, 0.013 mol) were dissolved in 20 mL of distilled water, stirred to dissolve all, and slowly added dropwise to N-phenyl-2,4-di
  • the nitroaniline in methanol was stirred at reflux for 85 h at 85 °. After the reaction was allowed to cool, pour into 70 mL of cold water and let stand. Filtration gave 0.61 g of a purple solid. The yield was 53.0%. Mp 125-127.
  • Example 13 Synthesis of 3-(5-methoxy-indol-3-yl)-N-benzylacrylamide 5-methoxy-3-indene acrylic acid (0.22 g, 0.001 mol) was dissolved in 20 mL of N-methyl-2-pyrrolidone (NMP) and stirred until completely dissolved.
  • NMP N-methyl-2-pyrrolidone
  • EDCI (0.26 g, 0.0014 mol
  • HOBt 0.14 g, 0.001 mol
  • Benzylamine (0.21 g, 0.002 mol) was added to the reaction mixture, and the mixture was stirred at room temperature for 48 h. The reaction mixture was combined with ethyl acetate.
  • 5-methoxy-3-indoleacrylic acid (0.11 g'O.0005 mol) was dissolved in 15 mL of NMP and stirred until all dissolved.
  • EDCI (0.19 g, 0.001 mol) was poured into the reaction solution, and stirred until all was dissolved.
  • N-Ethyl 4-nitro-1,2-phenylenediamine (0.14 g, 0.0008 mol) and DMAP (min) were poured into the reaction mixture. Stir the reaction at room temperature 6 Oh.
  • 2-Quinolinic acid (0.10 g, 0.0005 mol) was dissolved in 20 mL of NMP and stirred to dissolve.
  • EDCI (0.13 g, 0.0007 mol)
  • HOBt (0.07 g, 0.0005 mol) were placed in the above reaction solution, and stirred until all were dissolved.
  • O-aminomethyl chlorobenzene (0.14 g, 0.001 mol, 0.12 mL) was added to the reaction mixture, and the reaction was stirred at room temperature for 24 h.
  • Example 25 Synthesis of C3 ⁇ 4-3-(quinolin-2-yl)-N-cyclopentylacrylamide Prepared according to the reaction of Example 24, replacing o-aminomethylchlorobenzene with cyclopentylamine to give the title Compound 0.05 g.
  • Example 28 Synthesis of ( ⁇ )-3-(quinolin-4-yl)-N-cyclopentylacrylamide Prepared according to the reaction of Example 24, replacing o-aminomethylchlorobenzene with cyclopentylamine, 2-Quinolinic acid was replaced with 4-quinolineacrylic acid to give the title compound 0.05 g.
  • the human CD4 gene was transfected into HEK293 cells to obtain a stable transfected 293/CD4 cell line. Inoculate approximately 3 ⁇ 10 5 cells in 35 leg culture subfamily. After 24 hours, add 1 2 ⁇ 10 7 cells/ml RPMI1640 of Raj B cells (the cells express MHC-II), incubate at 37 for one hour, and completely rectify with RPMI1640. After the medium was washed 3-5 times, the formation of rosettes was observed under an inverted microscope. Compared with the empty control (PEGEP-M, stably transfected HEK293 cells), the surface of 293/CD4 cells adhered 3-5 or more. Raj T cells.
  • the compounds of the invention block the rosette (CD4 and MHC-II binding) experiments: 293/CD4 cells were seeded at 2-4 10 4 cells/well in 24-well plates, and after 24 hours of culture, the medium was discarded, and 0.5 ml of MHC-II-positive Raj B cells (1 x 10 7 cells/ml RPMI 1640 culture) were added.
  • the compounds of Examples 13-29 of the present invention, at different concentrations, were incubated for one hour at 37, washed thoroughly for 3-5 times with RPMI 1640 complete medium, and observed under an inverted microscope.

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Description

芳基丙烯酰胺化合物及其用于
制备免疫抑制剂的用途 技术领域
本发明涉及芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构体或可药用盐 或水合物， 它们的制备方法， 含有所述化合物的药物组合物。 本 发明还涉及所述化合物作为免疫抑制剂， 用于制备抗器官移植排 斥反应以及治疗和 /或预防某些自身免疫疾病如类风湿、 牛皮癣、 多发性硬化症、 系统性红斑狼疮等疾病的药物的用途。 背景技术
近来的研究表明， CD4 在免疫排斥反应以及一些自身免疫疾 病如风湿、 类风湿、 牛皮癖、 多发性硬化症中扮演着非常重要的 角色。 CD4为单链跨膜糖蛋白， 表达于 Th细胞之上。 人 CD4分子 量为 55kDa , 由 435个氨基酸残基组成， 胞膜外、 跨膜区、 胞浆 内分别有 374、 21和 40个氨基酸残基。 胞膜外区结构属 IgSF成 员 ， 两个 N-连接糖基化位点， 共有四个 IgSF 结构域 (D1-D4) (Whi te , R. A. H. , 1978 , J. Exp. Med. 148 , 664-673) , 其中 Dl和 D3为 V样区， D3无二硫键， D2和 D4为 C2样区， D2 的二硫键是在 β片层中形成的， 还有特征性疏水穿膜功能区和一 短的伴有潜在丝氨酸磷酸化部位的胞浆功能区。 胞浆区的三个丝 氨酸（Ser408 , Ser415 , Ser431)可能是 PKC底物， 胞浆区 CxcpJ I 基序是与 P561ck结合的位点。 CD4分子作为 C04+细胞表面的糖蛋 白随着 CD4+T细胞的分布而分布， 在各种器官中有所差异， 在外 用血和淋巳器官中， CD4+T细胞为辅助性 T细胞（Th) , 包括 ThO, Thl和 Th2亚群。在胸腺中， CD4阳性细胞包括 CD4单阳性细胞（Th) 以及 CD4 CD8双阳性的不成熟 T细胞。 此外， CD4还表达于某些 Β 细胞、 EBV转化的 Β细胞以及脑细胞等。 在同种异基因移植排斥 反应中， CD4+T细胞参与了不同类型的排斥反应 (Abbas AK et al , ed. Cel lular and Molecular Immunology, 3rd ed. , P362-381 , 1997) ,其在各类排斥反应中的角色也有所不同（Janeway C, et al , P115-162 Immunobiology, 4th ed. )： 在急性体液排斥反应中， 以抗 MHC分子的抗体和抗内皮细胞表面分子抗体结合相应的抗原 激活补体系统导致血管损害为主， 同时在炎症 CD4+T细胞的效应 机制参与下， 导致血管炎； 在急性细胞性排斥反应中， 炎症性 CD4+T细胞 /巨嗜细胞的效应机制的参与导致间质细胞损害； 在慢 性排斥反应中 ,主要是炎症性 CD4+T细胞 /巨嗜细胞相关的慢性炎 症， 导致间质纤维化， 移植物内血管硬化。 可见， 在各种类型的 免疫排斥反应中都有 CD4+T细胞的参与。 而 CD4二聚化或齐聚化 后与 MHC- I I类分子的结合是 CD4+T细胞活化参与免疫排斥反应的 关键条件之一 (Gould DS and Auchincloss H. , Immunology Today, 1999 (20) : 77-82)。 因此， 抑制 CD4二聚化或齐聚化这一活性形 式的形成或阻断 CD4与 MHC- I I类分子的结合可以预防或抑制同种 异基因移植排斥反应。
自身免疫疾病是因机体免疫系统对自身成分发生免疫应答而 导致的疾病状态（Zhu Y， et al , Exp Neurol 2002 Sep; 177 (1) : 314-20) ,由自身抗体和（或）自身应答性 T淋巳细胞介导的对自身 抗原发生兔疫应答引起.而 T细胞的活化需要双信号刺激。 其中， TCR与抗原肽 -MHC分子复合物的形成是关键的信号之一。 在该复 合物的形成过程中， CD4分子与 MHC-I I类分子的结合是其稳定的 一个重要条件。 CD4抑制剂可以选择性地抑制 CD4分子活性形式 的形成或阻断 CD4与 MHC- I I类分子的结合，从而不能形成稳定的 TCR与抗原肽白 MHC分子复合物， 导致 T细胞活化所需要的双信 号剌激中的一个关键信号无能， 因而自身抗体和（或）自身应答性 T淋巴细胞介导的对自身抗原发生兔疫应答不能发生， 故 CD4抑 制剂可以应用于自身免疫疾病如类风湿、 牛皮癖、 多发性硬化症 及系统性红斑狼疮等的预防和治疗。 由于上述环节是自身抗原和 外来抗原引发的免疫反应的一个共同环节， 故 CD4抑制剂对移植 排斥反应和自身性免疫疾病皆有作用。 发明内容
本发明的目的在于寻找并开发能够选择性地抑制 CD4分子活 性形式的形成或阻断 CD4分子与 MHC- I I类分子结合从而实现免疫 抑制作用的化合物。
本发明人经过研究发现， 下列式 I所表示的化合物可作用于 CD4 分子因而具有免疫抑制作用， 其可用于器官移植中的抗免疫 排斥反应以及治疗和 /或预防某些自身允疫疾病如类风湿、 牛皮 癖、 多发性硬化症和系统性红斑狼疮等。 因此， 本发明的一个方面涉及式 I芳基丙烯酰胺化合物或其 几何异构体或可药
Figure imgf000005_0001
其中-.
n为 0、 1或 2，
A为五元或六元含^ S、 0和 Se原子的杂芳环， 包括但不限 于吡 、 吡咯、 塞唑、 塞哈、 噁唑、 呋喃、 吡漆、 嘧 环等； R是氢、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基， 其他取代基 可独立地选自相同或不同的卤素、 羟基、 含 1-8个碳原子的烷氧 基和含 1-8个碳原子的烷基； 也可为取代或未取代的饱和五元或 六元脂族环， 其中取代基可独立地选自卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氛基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳原子的烷基；
当 R为羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基时： B为含单或多取 代基的苯环， 其中取代基包括但不限于氢原子、 CI- C7 烷基、 卤 素、 硝基、 羧基、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基、 氨基及被含 1-8 个碳原子的烷基单取代或双取代的氨基； 也可为取代或未取 代的饱和五元或六元脂族环， 其中取代基可独立地选自 ¾素、 羟 基、 氨基、 硝基、 氛基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳 原子的烷基。 本发明的一个优选实施方式涉及式 I芳基丙烯酰胺化合物或 其几何异构体或可
Figure imgf000006_0001
其中-.
n为 0、 1或 2;
A为五元或六元含 N杂芳环， 包括但不限于吡咯、 吡啶、 嘧 啶环等；
R是氢、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基， 其他取代基 可独立地选自相同或不同的卤素、 羟基、 含 1-8个碳原子的烷氧 基和含 1-8个碳原子的烷基； 也可为取代或未取代的饱和五元或 六元脂族环， 其中取代基可独立地选自卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氛基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳原子的烷基；
当 R为羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基时： B为含单或多取 代基的苯环， 其中取代基包括但不限于氢原子、 CI- C7 烷基、 卤 素、 硝基、 羧基、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基、 氨基及被含 1-8 个碳原子的烷基单取代或双取代的氨基； 也可为取代或未取 代的饱和五元或六元脂族环， 其中取代基可独立地选自 ¾素、 羟 基、 氨基、 硝基、 氛基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳 原子的烷基。 本发明的另一个优选实施方式涉及式 I芳基丙烯酰胺化合物 或其几何异构体或
Figure imgf000007_0001
其中-.
n为 0或 1;
A为五元或六元含 N杂芳环， 包括但不限于吡咯、 吡啶环等； R是氢或甲氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基， 其他取代基 可独立地选自相同或不同的卤素、 羟基、 含 1-8个碳原子的烷氧 基和含 1-8个碳原子的烷基； 也可为饱和五元或六元脂族环； 当 R为甲氧基时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基 包括但不限于氢原子、 C1-C7 烷基、 卤素、 硝基、 羧基、 羟基或 含 1-8个碳原子的烷氧基、 氨基、 甲氨基及乙氨基等； 也可为饱 和五元或六元脂族环。 本发明的更进一步的优选实施方式涉及式 I芳基丙烯酰胺化 合物或其几何异构
Figure imgf000008_0001
其中-.
n为 0或 1;
A为吡咯或吡 环；
R是氢或甲氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、羟基或甲氧基， 其他取代基可独立地选自含 1-8 个碳原子的烷基等； 也可为饱和五元或六元脂族环；
当 R为甲氧基时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基 包括但不限于氢原子、 C1-C7 烷基、 卤素、 硝基、 甲氧基、 氨基 及乙氨基等， 也可为饱和五元或六元脂族环。 本文所用的术语 "杂芳环" 为具有一个单环或多个稠合环的 5-14 , 优选 5-10， 更优选 5或 6个成员的杂环芳族环基团， 其具 有一个或多个选自 N、 0和 S的杂原子。所述杂芳环的典型实例包 括但不限于吡 、 吡秦、 嘧啶、 秦、 咪唑、 吡咯、 吡唑、 三唑、 曰峻、 嚼峻、 异嚼峻、 嚼二峻、 塞峻、 异塞峻、 塞二峻、 峻、 异喹啉、 吲哚、 异吲哚、 吖啶、 嘌呤、 吡嗪、 喹啉和异喹啉环等。 本文所用的术语 "卤素" 意指氟， 氯， 溴或碘。 优选的卤素 为氟， 氯或溴， 更优选为氟或溴。 更优选地， 本发明式 I化合物选自但不限于以下的化合物或 其几何异构体或可药用盐或水合物：
Figure imgf000009_0001
Figure imgf000010_0001
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本发明的另一方面涉及药物组合物， 所述组合物包含至少一 种式 I化合物或其几何异构体或可药用盐或水合物以及一种或多 种可药用载体或赋形剂。
本发明的再一方面涉及式 I化合物或其几何异构体或可药用 盐或水合物的制备方法， 通过下面的反应路线， 利用取代或未取 代的芳香丙烯酸与相应的取代的胺在合适的溶剂中进行反应。
Figure imgf000011_0002
II III 具体而言， 使式 Π化合物与式 I I I化合物在例如氯化亚砜或 DCC或 EDCI/H0BT存在条件下，于 0-150 进行反应 0. 5-20小时得 到。 其中式 Π、 I I I化合物中 11、 Α、 Β及 η的定义同式 I。
本发明化合物的可药用盐包括其与无机或有机酸形成的酸加 成盐或与碱形成的碱加成盐。 其中酸加成盐包括但不限于： 盐酸 盐， 氢溴酸盐， 氢碘酸盐， 硝酸盐， 硫酸盐， 硫酸氢盐， 磷酸盐， 磷酸氢盐， 乙酸盐， 丙酸盐， 丁酸盐， 三甲基乙酸盐， 己二酸盐， 藻酸盐， 乳酸盐， 拧檬酸盐， 酒石酸盐， 琥珀酸盐， 马来酸盐， 富马酸盐， 苦味酸盐， 天冬氨酸盐， 葡糖酸盐， 苯甲酸盐， 甲磺 酸酸盐盐，， 乙乙磺磺酸酸盐盐，， 苯苯磺磺酸酸盐盐，， 对对甲甲苯苯磺磺酸酸盐盐和和双双羟羟萘萘酸酸盐盐；； 碱碱加加 成成盐盐包包括括但但不不限限于于：： 铵铵盐盐，， 碱碱金金属属盐盐如如钠钠和和钾钾盐盐，， 碱碱土土金金属属盐盐如如 钙钙和和镁镁盐盐，， 有有机机碱碱盐盐如如二二环环己己胺胺和和 NN--甲甲基基-- DD--葡葡糖糖胺胺盐盐，， 以以及及氨氨
Figure imgf000012_0001
。。
本发明化合物的药物组合物可以以下面的任意方式施用： 口 服， 喷雾吸入， 直肠用药， 鼻腔用药， 颊部用药， 阴道用药， 局 部用药， 非肠道用药如皮下、 静脉、 肌内、 腹膜内、 鞘内、 心室 内、 胸骨内和颅内注射或输入， 或借助一种外植储器用药。 其中 优选口服、 腹膜内或静脉内用药和局部用药方式。
当口服用药时， 本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂 形式， 包括但不限于片剂， 胶嚢， 水溶液或水悬浮液。 其中， 片 剂一般使用的载体包括乳糖和玉米淀粉， 另外也可加入润滑剂如 硬脂酸镁。胶嚢制剂一般使用的稀释剂包括乳糖和干燥玉米淀粉。 水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合 使用。 如果需要， 以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂， 芳 香剂或着色剂。
当直肠用药时， 本发明化合物一般可制成栓剂的形式， 其通 过将药物与一种适宜的非刺激性赋形剂混合而制得。 该赋形剂在 室温下呈现固体状态， 而在直肠温度下熔化释出药物。 这类赋形 剂包括可可脂、 蜂蜡和聚乙二醇。
当局部用药时，特别是治疗局部外敷容易达到的患面或器官， 如眼睛、 皮肤或下肠道神经性疾病时， 本发明化合物可根据不同 的患面或器官制成不同的局部用药制剂形式， 具体说明如下： 当眼部局部施用时， 本发明化合物可配制成一种微粉化悬浮 液或溶液的制剂形式， 所使用载体为等渗的一定 pH的无菌盐水， 其中可加入也可不加防腐剂如氯化苄基烷醇盐。 此外对于眼用， 也可将化合物制成膏剂形式如凡士林膏。
当皮肤局部施用时， 本发明化合物可制成适当的软膏、 洗剂 或霜剂制剂形式，其中活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。 这里软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油， 液体凡士林， 白凡士林， 丙二醇， 聚氧化乙烯， 聚氧化丙烯， 乳化蜡和水； 洗 剂或霜剂可使用的载体包括但不限于： 矿物油， 脱水山梨糖醇单 硬脂酸酯， 吐温 60, 十六烷酯蜡， 十六碳烯芳醇， 2-辛基十二烷 醇， 苄醇和水。
当下肠道局部施用时， 本发明化合物可制成如上所述的直肠 栓剂制剂或适宜的濯肠制剂形式， 另外也可使用局部透皮贴剂。
本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药， 包括无菌注射 水或油悬浮液， 或无菌注射溶液。 其中， 可使用的载体和溶剂包 括水， 林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。 另外， 灭菌的非挥发油也 可用作溶剂或悬浮介质， 如单甘油酯或二甘油酯。
除此之外，本发明化合物还可与其它免疫抑制药物一起施用， 这些物质包括但不限于： 环孢菌素 A、 甾体激素、 FK506、 RPM, 来氟洛米（Lef lunomide) , DSG, SKF105685MZ, RS61443BQR等。
另外需要指出， 本发明化合物针对不同患者的特定使用剂量 和使用方法决定于诸多因素， 包括患者的年龄、 体重、 性别、 自 然健康状况、 营养状况、 化合物的活性强度、 服用时间、 代谢速 率、 病症的严重程度以及诊治医师的主观判断。 优选的使用剂量 介于 0. 01-300mg/kg体重 /天。 实施例
下面的实施例是将进一步详细说明本发明， 但对本发明不构 成任何限制。 化合物熔点由 RY-1型熔点仪测定， 温度计未经较正。 - NMR 由 ARX— 400 NMR仪测定。 质傳由 Micromass— ZabSpec MS仪测定。 所有反应用溶剂未注明都经标准化预处理。
实施例 1: 3-吲哚丙烯酸的合成
将 3 -吲哚甲醛（10.00g, 0.07腿 ol)和丙二酸（21.5g, 0.21mol) 溶于 110mL吡啶中， 滴加 2mL哌啶， 混合均匀后， 加热至 40*€。 反应 40h。 反应后冷却至室温， 减压蒸去大部分溶剂（<40*€), 将 反应液倒入 200mL蒸馏水中， 用 10%的氢氧化钠溶液调 pH到 11， 用 4 x 200mL 乙酸乙酯萃取， 洗去吡啶。 水层用活性炭煮沸脱色 5min, 趁热滤去活性炭， 放置变冷。 在 0*€的水浴下， 滴加 6N的 盐酸， 得到淡黄色固体 6.92g, 收率 53.6%。 mp 183-185X 。 'H-NMR (DMS0-i/„ 400MHz)： δ = 6.289-6.329 (d, /= 16, 1H) , 7.163-7.212 (m, /= 0.8, 7=6.4, 2H) , 7.453-7.472 (d, 7=7.6, 1H) , 7.796-7.836 (d, /= 16, 1H) , 7.836-7.857 (d, 7=8.4, 1H) , 7.916-7.923 (d, /= 2), 11.753 (s, 1H) , 11.913(s, 1H)。
实施例 2: 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸的合成
按上述制备 3-吲哚丙烯酸的方法制备 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯 酸， 将原料 3-吲哚甲醛换为 5-甲氧基 -3-吲哚甲醛（17.5g, 0. Olmol)。得到浅黄色固体 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸 9.30g, 收率 42.9%。 mp 200- 202X (分解）。 ^- MR (DMSO-^, 400MHz)： δ = 3.819(s, 3H), 6.227-6.267 (d, /= 16, 1H) , 6.828-6.850 (dd, /= 2.4, /= 8.8, 1H) , 7.254-7.259 (d, /= 2, 1H) , 7.339-7.361 (d, 7=8.8, 1H), 7.783-7.822 (d, 7=15.6, 1H) , 7.866-7.873 (d, 7=2.8, 1H), 11.629 (s, 1H) , 11.845 (s, 1H)。
实施例 3: 1， 1， 1-三氯 -3- (喹啉 -2 -基）丙 -2-醇的合成
将 2-甲基喹啉（7.15g, 6.8mL, 0.05mol)和三氯乙醛（8.85g, 5.86mL, 0.06mol)溶于 25mL吡啶中， 80*C搅拌 3h。 反应毕将反 应液倒入 50mL蒸馏水中， 收集所产生的絮状沉淀。得到浅棕色固 体 13.14g,收率 90.5%。 mp 144-145"C。 NMR (DMS0- ， 400MHz): δ = 3.172-3.207 (dd, /= 9.6, /= 14, 1H) , 3.583-3.620 (dd, J= 2, J= 14, 1H) , 4.679-4.715 (m, 1H) , 6.804-6.821 (d, J = 6.8, 1H) , 7.543-7.564 (d, /= 8.4, 1H) , 7.579-7.582 (m, 1H) ,
7.755-7.759 (m, 1H) , 7.962-7.992 (dd, 7= 7.2, /= 12, 2H) ,
8, 318-8.339 (d, 7= 8.4, 1H)。
实施例 4: 2-喹啉丙烯酸的合成
将氢氧化钟（13.56g, 0.242mol)溶于 70mL无水乙醇中，加热 至回流。 将 1, 1, 1-三氯- 3- (喹啉 -2-基）丙- 2-醇（13.14g, 0.045mol)溶于 150mL无水乙醇中，緩慢滴加至上述溶液中。回流 至沸腾， 反应 2.5h。 反应毕放置变冷， 滤除溶液中的不溶物。 减 压蒸除乙醇， 用蒸馏水溶解剩余固体。 緩慢滴加水醋酸至酸性， 有固体生成。 滤出固体并用蒸馏水洗涤。 得到浅椋色固体 3.89g, 收率 43.2%。 mp 192-194*€。 NMR (DMS0- ， 400MHz)： δ = 6.986-7.025 (d, /= 15.6, 1H) , 7.634-7.657 (m, /= 1· 2, /= 8.4, 1Η) , 7.711-7.751 (d, /= 16, 1H) , 7.775-7.814 (m, 1H) ,
7.938-7.960 (d, 7= 8.8, 1H) , 7.985-8.006 (d, 7= 8.4, 1H) ,
8.029-8.050 (d, 7= 8.4, 1H) , 8.414-8.435 (d, 7= 8.4, 1H) , 12.650(s, 1H)。
实施例 5: 1， 1， 1-三氯 -3- (喹啉 -4 -基）丙 -2-醇的合成 将 4 -甲基喹啉（14.3g, 13.20mL, 0. lmol)和三氯乙醛（22. lg, 14.7mL, 0.15mol)溶于 50mL吡啶中， 80*€搅拌 2h。 反应毕将反 应液倒入 lOOmL蒸馏水中， 收集所产生的絮状沉淀。 得到浅椋色 固体 22.14g, 收率 88.2%。 mp 177-178X 。 ^-NMR (DMSO- , 400MHz) : δ = 3.186-3.246 (dd , /= 10 , /= 14.2 , 1H) , 3.847-3.881 (d , / = 13.6 , 1H) , 4.283-4.321 (m , 1H) ,
6.825-6.842 (d, 7=6.8, 1H) , 7.521-7.532 (d, 7=4.4, 1H) ,
7.683-7.791 (m , 2H) , 8.052-8.073 (d , / = 7.6 , 1H) ,
8.159-8.177 (d, 7=7.6, 1H) , 8.849-8.859 (d, /=4, 1H)。
实施例 6: 4-喹啉丙烯酸的合成
将氢氧化钾（24.70g, 0.44mol)溶于 lOOmL无水乙醇中，加热 至回流。 将 1,1,1-三氯- 3- (喹啉 -4-基）丙- 2-醇（22.14g, 0.076mol)溶于 200mL无水乙醇中，緩慢滴加至上述溶液中。回流 至沸腾， 反应 2.5h。 反应毕放置变冷， 滤除溶液中的不溶物。 减 压蒸除乙醇， 用蒸馏水溶解剩余固体。 緩慢滴加水醋酸至酸性， 有固体生成。 滤出固体并用蒸馏水洗涤。 得到类白色固体 6. Olg, 收率 39.7%。 mp 268-269'Co ^-NMR (DMSO-^, 400MHz)： δ =
6.788-6.827 (d , /= 15.6 , 1Η) , 7.700-7.721 (m， 1H) ,
7.832-7.852 (m , 1Η) , 7.859-7.870 (d , / = 4.4 , 1Η) ,
8.074-8.095 (dd, /= 0.8, /=8, 1Η) , 8.254-8.275 (d, /=8.4, 1H) , 8.307-8.347 (d, /= 16, 1Η) , 8.935-8.947 (d, /=8.4, 1H) , 12.828 (s, 1H)。
实施例 7: N-甲基- 2,4-二硝基苯胺的合成
将 2， 4-二硝基氯苯（5.00g, 0.025mol) , 甲胺盐酸盐（1.69g, 0.025mol)和醋酸钠（4.17g, 0.051mol)溶于 50mL DMF 中， 90*Ό 搅拌加热 2h。 反应毕放置变冷， 倒入 80mL蒸馏水中， 过滤， 得 到黄色固体 4.34g。 收率 89/。。 mp 178-179X。 ^-NMR (DMSO- , 400MHz): δ = 1.574 (s, 1H) , 3.157-3.170 (d, /= 1.2, 3H) , 6.922-6.946 (d, /= 9.6, 1H) , 8.305-8.335 (dd, /= 2.4, /= 9.6, 1H), 8.593 (s, 1H) , 9.160-9.167 (d, 7=2.8, 1H)。 实施例 8: N-甲基 -4-硝基- 1,2-苯二胺的合成
将 N-甲基- 2,4-二硝基苯胺（2.04g, 0. Olmol)溶于 50mL甲醇 中， 在 50 中搅拌。 将九水合硫化钠（6.4 Og, 0.027mol)和碳酸 氢钠（2.24g, 0.027mol)溶于 20mL蒸馏水中，搅拌使之全部溶解， 将其緩慢滴加入 N-甲基- 2,4-二硝基苯胺的甲醇溶液中， 在 85 中回流搅拌 lh。 反应毕放置变凉， 倒入 70mL冷水中， 静置。 过 滤得到深红色固体 1.39g。 收率 80.3%。 mp 177-178 。
'H-NMR (DMS0-i/„ 400ΜΗζ): δ = 2.837-2.849 (d, /= 4.8, 3H) , 5.079 (s, 2H), 6.109-6.120(d, /=4.4, 1H) , 6.413-6.435 (d, /=8.8, 1H), 7.394-7.401 (d, 7=2.8, 1H) , 7.535-7.557 (dd, 7=8.8, 1H)。
实施例 9: N-乙基- 2,4-二硝基苯胺的合成
将 2， 4-二硝基氯苯（5.00g, 0.025mol) , 乙胺盐酸盐（1.69g, 0.025mol)和醋酸钠（4.15g, 0.050mol)溶于 50mL DMF 中， 90*Ό 搅拌加热 2h。 反应毕放置变冷， 倒入 80mL蒸馏水中， 过滤， 得 到黄色固体 4.55g。 收率 87.3%。 mp 113-114*C。 ^-NMR (DMS0- , 400MHz): δ = 1.164-1.200 (t， 7=7.2, 3H) , 3.448-3.516 (m, 2H) , 7.171-7.195 (d, /=9.6, 1H) , 8.204-8.235 (dd, /=2.8, /=9.6, 1H), 8.815-8.822 (d, /=2.8, 1H) , 8.837 (s, 1H)。
实施例 10: N-乙基- 4-硝基- 1,2-苯二胺的合成
将 N-乙基- 2,4-二硝基苯胺（2.01g, 0. Olmol)溶于 50mL甲醇 中， 在 50 中搅拌。 将九水合硫化钠（6.40g, 0.027mol)和碳酸 氢钠（2.24g, 0.027mol)溶于 20mL蒸馏水中，搅拌使之全部溶解， 将其緩慢滴加入 N-乙基- 2,4-二硝基苯胺的甲醇溶液中， 在 85 中回流搅拌 lh。 反应毕放置变凉， 倒入 70mL冷水中， 静置。 过 滤得到紫色固体 1.43g。 收率 82.7%。 mp 138-139 。 'H-NMR m 0-d„ 400MHz): δ = 1.213-1.248 (t, /= 6.8, 3H) , 3.218-3.222 (m , 2H) , 5.157 (s , 1H) , 5.873 (s ， 1H) ,
6.449-6.471 (d, 7=8.8, 2H) , 7.392-7.398 (d, 7=2.4, 1H) ,
7.507 (s, 1H)。
实施例 11: N-苯基- 2， 4-二硝基苯胺的合成
将 2， 4-二硝基氯苯（5.00g, 0.025mol) , 苯胺盐酸盐（1.69g, 0.025mol)和醋酸钠（4.15g, 0.050mol)溶于 50mL DMF 中， 90*Ό 搅拌加热 2h。 反应毕放置变冷， 倒入 80mL蒸馏水中， 过滤， 得 到黄色固体 2.81g。 收率 43.8%。 mpl57-159X。 ^-NMR (DMS0- , 400MHz): δ = 7.095-7.119 (d, /=9.6, 1H) , 7.370-7.405 (m, 3Η) , 7.501-7.540 (m, 2Η) , 8.215-8.240 (dd, /= 2.8, /= 10, 1Η) , 8.896-8.903 (d, /=2.8, 1H) , 10.154 (s, 1H)。
实施例 12: N-苯基- 4-硝基- 1， 2-苯二胺的合成
将 N-苯基- 2， 4-二硝基苯胺（1.30g, 0.005mol)溶于 50mL甲 醇中， 在 50 中搅拌。 将九水合硫化钠（3.20g, 0.013mol)和碳 酸氢钠（1.12g, 0.013mol)溶于 20mL蒸馏水中， 搅拌使之全部溶 解， 将其緩慢滴加入 N-苯基- 2,4-二硝基苯胺的甲醇溶液中， 在 85 中回流搅拌 lh。 反应毕放置变凉， 倒入 70mL冷水中， 静置。 过滤得到紫色固体 0.61g。 收率 53.0%。 mp 125-127 。 ^-NMR (DMS0- ， 400MHz): δ = 5.447 (s, 2Η) , 6.988-7.025 (t, /=7.2, 1H), 7.053-7.074 (d, /=8.4, 1H) , 7.139-7.163 (dd, /= 0.8, /=8.4, 2H), 7.314-7.354 (m, 2H) , 7.435-7.464 (dd, 7=2.4, 7=8.4, 1H) , 7.563-7.570 (d, 7=2.8, 1H) , 7.807 (s, 1H)。
实施例 13: 3- (5-甲氧基 - 吲哚- 3-基)- N-苄基丙烯酰 胺的合成 将 5-甲氧基 - 3-吲哚丙烯酸（0.22g, 0. OOlmol)溶于 20mL N- 甲基- 2-吡咯烷酮（NMP)， 搅拌至完全溶解。 将 EDCI(0.26g, 0.0014mol)和 HOBt(0.14g, 0. OOlmol)加入上述溶液中， 搅拌至 溶解。 将苄胺（0.21g, 0.002mol)加入反应液中， 室温搅拌反应 48h。 反应液加入乙酸乙酯， 用蒸馏水洗涤三次， 有机层用硅胶色 谱柱纯化（洗脱剂： 乙酸乙酯-石油醚系统），得到白色固体 0.06g。 收率 19.4%。mp 139- 141*C H-NMIUDMSO- , 400MHz) δ = 3.820(s, 3H) , 4.414-4.429 (d, /=6, 2H) , 6.577-6.617 (d, /= 16, 1Η) ,
6.831-6.859 (dd, /=8.8, /= 2.4, 1H) , 7.275-7.353 (m, 7H) ,
7.624-7.664 (d, /= 16, 1H) , 7.705-7.712 (d, /= 2.8, 1H) ,
8.345-8.374 (t, 7=5.6, 1H) , 11.418(s, 1H)。 ESI-MS (m/z)： 307.2 [M+H]+„
实施例 14: 3- (5-甲氧基 -l^吲哚- 3-基)- N- (2-氯苄基） 丙烯酰胺的合成
按照实施例 13的方法进行制备， 将反应中的苄胺用 2-氯苄 胺替换，得到标题化合物 0.06g。收率 19.2%0mp 194-196 0 ^-NMR (DMS0 - , 400MHz) δ = 3.828 (s, 3H) , 4.480-4.495 (d, /=6, 2H) , 6.616-6.656 (d, /= 16, 1Η) , 6.840-6.868 (dd, /=8.8, /=2.4, 1H) , 7.328-7.475 (m, 6Η) , 7.629-7.669 (d, /= 16, 1Η) , 7.716-7.723 (d, /=2.8, 1H) , 8.358-8.386 (t, /=5.6, 1H) , 11.433 (s, 1H)。 FAB— MS (m/z) : 341. l[M+H]+„
实施例 15: 3- (5-甲氧基 -1)9"吲哚- 3-基）- N-环戊基丙烯 酰胺的合成
按照施例 13 的方法进行制备， 将反应中的苄胺用环戊胺替 换， 得到标题化合物 0.05g。 收率 19.1%。 mp 205- 206 X：。 'H-NMR (DMS0-i/6, 400ΜΗζ) δ = 1.427 (m, 2H) , 1.536-1.579 (m, 2H) , 1.678 (m, 2H) , 1.861 (m, 2H) , 3.830 (s, 3H) , 4.111-4.144 (m, 1H) , 6.477-6.517 (d, /= 16, 1H) , 6.846-6.868 (m, 7=8.8, 1H) , 7.337-7.359 (m, 2H) , 7.546-7.586 (d, J= 16, 1H) , 7.675 (s, 1H) , 11.386 (s, 1H)。 ESI-MS(m/z): 285.2 [M+H]+。
实施例 16: ¾- 3- 吲哚- 3-基）- N- (2-氯苄基）丙烯酰胺 的合成
按照实施例 13的方法进行制备， 将反应中的苄胺用 2-氯苄 胺替换， 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸用 3-吲哚丙烯酸替换。 得到标 题化合物 0.07g。 收率 22.2%。 mp 183-184X o ^-NMR (DMS0-i/6, 400MHz) δ = 4.434- 4.449 (d, /= 6, 2H) , 6.681-6.721 (d, J= 16, 1H) , 7.166 (m, 2H) , 7.290-7.423 (m, 5H) , 7.601-7.641 (d, /= 16, 1H), 7.734-7.740 (d, 7=2.4, 1H) , 7.867-7.886 (d, J = 7.6， 1H) , 8.338-8.367 (t, /= 6, 1H) , 11.541 (s , 1H)。
ESI-MS (m/z): 311.2[M+H]+。
实施例 17: 3- 吲哚- 3-基）- N-环戊基丙烯酰胺的合 成
按照实施例 13的方法进行制备，将反应中的苄胺用环戊胺替 换， 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸用 3-吲哚丙烯酸替换， 得到标题化 合物 0.06g。收率 23.2%„ mp 222-223"C。 'H-NMR (DMS0-i/6, 400MHz) δ = 1.408-1.438 (m, 7= 6 , 2H) , 1.535-1.563 (m , 2H) , 1.656-1.684 (m, 2H) , 1.830-1.875 (m, 2H) , 4.102-4.152 (m, 1H) , 6.583-6.623 (d, /= 16, 1H) , 7.127-7.207 (m, 7=6.8, J = 18.4, 2H) , 7.432- 7.452 (d, /= 8, 1H) , 7.547-7.587 (d, J = 16, 1H) , 7.713-7.719 (d, /= 2.4, 1H) , 7.824-7.842 (d, J = 7.2， 1H) , 7.884-7.904 (d, /= 8, 1H) , 11.509 (s, 1H)。
ESI-MS (m/z): 277. l[M+Na]+。 实施例 18: (^)- 3- 吲哚- 3-基）- N- (环己烷甲基）丙烯酰 胺的合成
按照实施例 13的方法进行制备，将反应中的苄胺用氨甲基环 己烷替换， 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸用 3-吲哚丙烯酸替换， 得到 标题化合物 0.10go 收率 34.9%。 mp 179- 180 。 - NMR (DMS0 - ， 400ΜΗζ) δ = 0.902-0.959 (dd, /= 12, 2Η) , 1.165-1.216 (dd, J = 12, 2H) , 1.420-1.437 (m, 1H) , 1.615-1.636 (d, 7=8.4, 1H) , 1.673-1.732 (t, /= 12, 5H) , 3.030-3.047 (d, /= 6.8, 2H) ,
6.641-6.681 (d , / = 16 , 1H) , 7.157-7.222 (m , 2H) ,
7.447-7.466 (d, /= 7.6, 1H) , 7.572-7.612 (d, /= 16, 1H) , 7.739 (s, 1H), 7.902- 7.921 (d, 7=7.6, 1H) , 11.554 (s, 1H)。
ESI-MS (m/z): 283.3 [M+H]+。
实施例 19: ¾- 3- (5-甲氧基 - 1^"吲哚- 3-基)- N- (2,3-二甲 基苯基）丙烯酰胺的合成
将 5 -甲氧基- 3-吲哚丙烯酸（0.20g, 0. OOlmol)和 DCC(0.28g, 0.0014mol)溶于 30mL无水 THF, 室温搅拌至全溶。将 2， 3-二甲基 苯胺（0.22g, 0.22mL, 0.0018mol)滴加入反应液。 室温搅拌 40h。 反应毕， 滤去不溶物 DCU, 减压蒸去 THF, 用少量溶剂溶解， 将产 生的白色不溶粉末状晶体滤除。用硅胶色谱柱纯化（洗脱剂： 乙酸 乙酯-石油醚系统）两遍。用丙酮-石油醚重结晶純化。得到标题化 合物 0.03g。收率 10.2%„ mp 180-181X o NMR (DMS0- ， 400MHz) δ =2.139(s, 3Η) , 2.272 (s, 3Η) , 3.855 (s, 3Η) , 6.793-6.833 (d, /= 16, 1Η) , 6.871-6.899 (dd, /= 2.4, /= 9, 1H) , 6.995-7.013 (d, 7=7.5, 1H), 7.054-7.092 (t, 7=7.5, 1H) , 7.313-7.332 (d, /= 7.5, 1H) , 7.360-7.382 (d, /= 8.8, 1H) , 7.449 (s, 1H) , 7.710-7.749 (d, /= 16, 1H) , 7.765-7.771 (d, /= 2.4, 1H) , 9.363 (s, 1H), 11.496 (s, 1H)。 FAB-MS (m/z)： 321.1 [M+H]+。 实施例 20: 3- (5-甲氧基 - 吲哚- 3-基)- N- (2-甲基苯 基）丙烯酰胺的合成
按照实施例 19的方法进行制备， 将反应中的 2， 3-二甲基苯 胺用 2-甲基苯胺替换。 得到标题化合物 0.01g。 收率 3.5%。 mp 138-139 o ^-NMR (DMSO-^, 400MHz) δ = 2.280 (s, 3H) , 3.856 (s, 3H) , 6.818- 6.858 (d, /= 15.2, 1H) , 6.882-6.910 (dd, f=2, 7=8.8, 1H), 7.055- 7.092 (t, /= 7.2, 1H) , 7.171-7.190 (d, 7=7.6, 1H), 7.210-7.246 (t, 7=7.2, 1H) , 7.369-7.391 (d, 7=8.8, 1H), 7.459 (s, 1H) , 7.627-7.646 (d, /= 7.6, 1H) , 7.738 (s, 1H), 7.777-7.782 (d, /= 1.6, 1H) , 11.514(s, 1H)。
ESI- MS (m/z): 307.2 [M+H]+。
实施例 21: 3- (l^吲哚- 3-基)- N- (2-甲基- 3-氯苯基）丙 烯酰胺的合成
按照实施例 19的方法进行制备， 将反应中的 2， 3-二甲基苯 胺用 2-甲基 3-氯苯胺替换， 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸用 3-吲哚丙 烯酸替换。 得到标题化合物 0.07g。 收率 22.2%。 mp 202- 204 。
^-NMR (DMS0-i/6, 400MHz) δ = 2.309 (s, 3H) , 6.906-6.945 (d, J = 15.6, 1H) , 7.200- 7.271 (m, 4H) , 7.469-7.490 (dd, 7=1.6, 7=6.4, 1H) , 7.584-7.600 (dd, 7=6.4, 1H) , 7.766-7.805 (d, /= 15.6, 1H) , 7.833-7.839 (d, 7=2.4, 1H) , 7.988-8.007 (d, 7=7.6, 1H) , 9.484 (s, 1H) , 11.645 (s, 1H)。 ESI- MS (m/z): 311.2[M+H]+ 0
实施例 22: 3- (l^吲哚- 3-基) -N- (2-甲氧基苯基）丙烯 酰胺的合成
按照实施例 19的方法进行制备， 将反应中的 2， 3-二甲基苯 胺用 2-甲氧基苯胺替换， 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸用 3-吲哚丙烯 酸替换。 得到标题化合物 0.06go 收率 20.2%。 mp 168- 170X 。
^-NMR (DMS0-i/6, 400MHz) δ = 3.895 (s, 3H) , 6.916-6.943 (m, 1H) , 7.047-7.055 (d, /= 3.2, 2H) , 7.108-7.147 (d, 7=15.6, 1H) , 7.186-7.240 (m, /= 1.6, /= 6, 2H) , 7.453-7.472 (d, J = 7.6, 1H) , 7.731-7.770(d, 7=15.6, 1H) , 7.804-7.811 (d, 7=2.8, 1H), 8.122-8.141 (d, 7=7.6, 1H) , 8.235-8.254 (d, 7=7.6, 1H) , 9.264 (s, 1H) , 11.603 (s, 1H)。 ESI-MS (m/z)： 293. l[M+H]+ 0
实施例 23: ¾- 3- (5-甲氧基 - 1^"吲哚- 3-基）- N- (2-乙氨基 -4 -硝基苯基）丙烯酰胺的合成
将 5-甲氧基 -3-吲哚丙烯酸（0. llg'O.0005mol)溶于 15mL NMP 中， 搅拌至全部溶解。 将 EDCI(0.19g， 0. OOlmol)倒入反应溶液 中， 搅拌至全部溶解。 将 N-乙基- 4-硝基- 1,2-苯二胺（0.14g, 0.0008mol)和 DMAP (微量）倒入反应液中。 室温搅拌反应 6 Oh。 反 应毕加入 30mL乙酸乙酯， 用蒸馏水洗去 NMP, 有机层用硅胶色谱 柱纯化（洗脱剂： 乙酸乙酯-石油醚系统）。 用 THF-石油醚重结晶 纯化。 得到黄色固体， 即为标题化合物， 0.04g。 收率 20.7%。 mp 230-231"€。 - NMR (DMS0- ， 400ΜΗζ) δ = 1.215-1.251 (t, J= 7.2, 3H) , 3.296-3.325 (m, 2H) , 3.855 (s, 3H) , 6.551(s, 1H) , 6.742-6.781 (d, /= 15.6, 1H) , 6.758-6.781 (d, /= 9.2, 1H) , 6.885-6.913 (dd, /= 2.4, 7=8.8, 1H) , 7.372-7.395 (d, /= 9.2, 1H) , 7.442 (s, 1H) , 7.767-7.807 (d, /= 16, 1H) , 7.807-7.815 (d, /= 3.2, 1H) , 7.955-7.985 (dd, /= 2.8, /= 8.8, 1H) , 8.323-8.329 (d, 7=2.4, 1H) , 9.314(s, 1H) , 11.537 (s, 1H)。
ESI-MS (m/z): 403.0 [M+Na]+。 实施例 24: ( ) -3- (喹啉 -2-基） - N- (2-氯苄基）丙烯酰胺的合 成
将 2-喹啉丙烯酸（0.10g, 0.0005mol)溶于 20mLNMP中， 搅拌 使之溶解。将 EDCI (0.13g, 0.0007mol)和 HOBt (0.07g, 0.0005mol) 放入上述反应液中，搅拌直到全部溶解。将邻氨甲基氯苯（0.14g, 0. OOlmol, 0.12mL)加入反应液中， 室温搅拌反应 24h。 反应毕加 入 30mL乙酸乙酯， 用蒸馏水洗去 NMP, 有机层上硅胶色谱柱纯化 (洗脱剂： 乙酸乙酯-石油醚系统）。 得到标题化合物 0.03g。 收率 18.5%。 'H-NMR (DMS0-i/6, 400ΜΗζ) δ = 4.502-4.516 (d, /= 5.6, 2Η) , 7.321-7.360 (m, 3Η) , 7.397-7.473 (m, 1Η) , 7.483 (dd, 1H) , 7.610-7.630 (d, /=8, 1H) , 7.648-7.688 (d, /= 16, 1H) ,
7.779-7.781 (t, /= 8, 2H) , 7.988-8.027 (t , /= 8, 2H) ,
8.424-8.446 (d, 7=8.8, 1H) , 8.941-8.971 (t, 7=6.4, 1H)。
ESI-MS (m/z): 323. l[M+H]+。
实施例 25: C¾ -3- (喹啉 -2-基）- N-环戊基丙烯酰胺的合成 按照实施例 24的反应进行制备，将邻氨甲基氯苯用环戊胺替 换，得到标题化合物 0.05g。收率 37.4%0 NMR(DMS0- ， 400MHz) δ = 1.431-1.493 (m, 2H) , 1.529-1.568 (m, 2Η) , 1.665-1.691 (m, 2Η) , 1.847-1.890(m, 2Η) , 4.125-4.158 (m, /= 7.2, 1Η) , 7.195-7.234 (d, /=15.6, 1H) , 7.559-7.598 (d, /= 15.6, 1H) , 7.615(d, 1H) , 7.757 (d, 7=8.8, 1H) , 7.803 (d, 1H) , 7.985 (m, 2H) , 8.345 (d, 1H) , 8.409 (d, /= 8.8, 1H)。 ESI-MS (m/z)： 267.1 [M+H] +„
实施例 26: (^)-3- (喹啉 -2-基） -N- (环己烷甲基）丙烯酰胺的 合成
按照实施例 24的反应进行制备，将邻氨甲基氯苯用氨甲基环 己烷替换， 得到标题化合物 0.05g。 收率 33.9%。 - NMR(DMS0 - ， 400MHz) δ = 0.906-0.935 (m, 2H) , 1.165-1.216 (m, 3Η) , 1.460 (m, IH) , 1.634 (d, IH) , 1.673-1.729 (t, /= 12, 4H) , 3.050-3.081 (t, 7=6.4, 2H), 7.236-7.275 (d, 7=15.6, IH) , 7.573-7.612 (d, /= 15.6 , IH) , 7.603— 7.641 (m, /= 1.2 , /= 7.8 , IH) , 7.766-7.788 (d, /= 8.8, IH) , 7.772-7.815 (m, 7=1.2, 7=7.6, IH) , 7.981-8.015 (t, /= 7.2, 2H) , 8.373-8.387 (d, /= 5.6, IH) , 8.408-8.429 (d, 7=8.4, IH)。 ESI-MS (m/z)： 295.2 [M+H]+„ 实施例 27: (B) -3- (喹啉 -4-基） - N- (2-氯苄基）丙烯酰胺的合 成
按照实施例 24的反应进行制备， 将 2-喹啉丙烯酸用 4-喹啉 丙烯酸替换，得到标题化合物 0.05g。收率 30.
Figure imgf000025_0001
QMSO-de, 400ΜΗζ) δ = 4.524-4.538 (d, /= 5.6, 2Η) , 6.973-7.013 (d, J = 16, IH) , 7.331-7.385 (m, /= 2, /= 4.8, 2H) , 7.428-7.455 (dd, /= 1.6, /= 8, 2H) , 7.470-7.495 (dd, /= 2, /= 8, 2H) ,
7.696- 7.717 (m， 2H) , 7.809-7.844 (m, /= 7.2, 7=1.6, IH) ,
8.071-8.090 (d, /= 7.6, IH) , 8.194-8.233 (d, /= 16, IH) , 8.264-8.284 (d, /= 8, IH) , 8.881-8.909 (t, /= 5.6, IH) , 8.940-8.951 (d, 7=4.4, IH)。 ESI-MS (m/z): 323. l[M+H]+。
实施例 28: (^)-3- (喹啉 -4-基）- N-环戊基丙烯酰胺的合成 按照实施例 24的反应进行制备，将邻氨甲基氯苯用环戊胺替 换， 并将 2-喹啉丙烯酸用 4-喹啉丙烯酸替换， 得到标题化合物 0.05g。收率 37.4%„ ^-NMR (OMS0-d6, 400ΜΗζ) δ = 1.452-1.480(m, 2Η) , 1.552-1.580 (m, 2Η) , 1.667-1.694 (m， 2Η) , 1.867-1.912 (m, 2Η) , 4.139-4.189 (m, /=6.4, IH) , 7.677-7.698 (m, /= 1.6, /= 8.4 , IH) , 7.804-7.829 (m， /= 1.6 , /= 8.4 , 1Η) , 8.065-8.084 (d, /= 7.6, 1H) , 8.104-8.144 (d, /= 16, 1H) , 8.241-8.260 (d, 7=7.6, 1H) , 8, 361-8.379 (d, /= 7.6, 1H) , 8.929-8.940 (d, 7=4.4, 1H)。 ESI-MS (m/z)： 267. l[M+H]+。
实施例 29: C¾ -3- (喹啉 -4-基） -N- (环己烷甲基）丙烯酰胺的 合成
按照实施例 24的反应进行制备，将邻氨甲基氯苯用氨甲基环 己烷替换，并将 2-喹啉丙烯酸用 4-喹啉丙烯酸替换，得到标题化 合物 0.05g。 收率 33.7%。 - NMR (DMS0- ， 400ΜΗζ) δ = 0.882-0.974 (m, /= 12, 2H) , 1.125-1.251 (m, /= 12, 3Η) , 1.455-1.483 (m , 1Η) , 1.619-1.640(d , / = 8.4 , 1Η) , 1.680-1.741 (t, /= 12.4, 4Η) , 3.069-3.102 (t, /= 6.4, 2Η) ,
6.895-6.935 (d, /= 16, 1Η) , 7.680-7.692 (d, /= 4.8, 1Η) ,
7.770 (m, /= 1.2, /= 6.8, 1Η) , 7.810-7.845 (m, /= 1.2, J= 6.8, 1Η), 8.069-8.088 (d, J = 7.6, 1H) , 8.119-8.159 (d, /= 16, 1H), 8.248-8.268 (d, /=8, 1H) , 8.363-8.392 (t, /= 5.6, 1H) , 8.933-8.945 (d, 7=4.8, 1H)。 ESI-MS (m/z): 295.2 [M+H] +„ 实施例 30: 本发明化合物免疫抑制作用测定
玫瑰花环实验：
将人 CD4基因转染 HEK293 细胞， 得到稳定的转染 293/CD4 细胞株。 接种大约 3χ105个细胞于 35腿培养亚中， 24小时后， 加入 1- 2 χ 107细胞 /ml RPMI1640 的 Raj B 细胞（该细胞表达 MHC-II), 在 37 孵育一小时， 利用 RPMI1640完全培养基充分清 洗 3-5次后， 于倒置显微镜下观察玫瑰花环的形成， 与空载对照 (PEGEP-M, 稳定转染的 HEK293细胞）相比， 293/CD4细胞表面黏 附有 3-5以上的 Raj T细胞。
本发明化合物阻断玫瑰花环（CD4与 MHC- II结合）实验： 以 2-4 104细胞 /孔接种 293/CD4细胞于 24孔板中，培养 24 小时后， 弃培养基， 加入 0.5ml MHC- II分子阳性的 Raj B细胞（1 xlO7细胞 /ml RPMI1640培养基）， 以及不同浓度的本发明实施例 13-29的化合物，在 37 孵育一小时，利用 RPMI1640完全培养基 充分清洗 3-5次后， 于倒置显微镜下观察。
实验结果显示本发明实施例 13-29的化合物均具有阻断玫瑰 花环形成的作用， 从而能够实现免疫抑制作用。

Claims

权利要求
1. 式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构体或可药用盐或水 合物：
Figure imgf000028_0001
其中-.
n为 0、 1或 2，
A为五元或六元含选自 N、 S、 0和 Se的杂原子的杂芳环， 包 括但不限于吡 、 吡咯、 塞唑、 塞哈、 噁唑、 呋喃、 吡漆、 嘧 环；
R是氢、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基， 其他取代基 可独立地选自相同或不同的卤素、 羟基、 含 1-8个碳原子的烷氧 基和含 1-8个碳原子的烷基； 也可为取代或未取代的饱和五元或 六元脂族环， 其中取代基可独立地选自卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氰基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳原子的烷基；
当 R为羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基时： B为含单或多取 代基的苯环， 其中取代基包括但不限于氢原子、 CI- C7 烷基、 卤 素、 硝基、 羧基、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基、 氨基及被含 1-8 个碳原子的烷基单取代或双取代的氨基； 也可为取代或未取 代的饱和五元或六元脂族环， 其中取代基可独立地选自 ¾素、 羟 基、 氨基、 硝基、 氰基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳 原子的烷基。
2. 权利要求 1的式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构体或 可药用盐或水合物， 其中：
n为 0、 1或 2;
A为五元或六元含 N杂芳环， 包括但不限于吡咯、 吡啶、 嘧 啶环；
R是氢、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基， 其他取代基 可独立地选自相同或不同的卤素、 羟基、 含 1-8个碳原子的烷氧 基和含 1-8个碳原子的烷基； 也可为取代或未取代的饱和五元或 六元脂族环， 其中取代基可独立地选自卤素、 羟基、 氨基、 硝基、 氛基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳原子的烷基；
当 R为羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基时： B为含单或多取 代基的苯环， 其中取代基包括但不限于氢原子、 CI- C7 烷基、 卤 素、 硝基、 羧基、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基、 氨基及被含 1-8 个碳原子的烷基单取代或双取代的氨基； 也可为取代或未取 代的饱和五元或六元脂族环， 其中取代基可独立地选自 ¾素、 羟 基、 氨基、 硝基、 氛基、 含 1-8个碳原子的烷氧基和含 1-8个碳 原子的烷基。
3. 权利要求 1或 2的式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构 体或可药用盐或水合物， 其中：
n为 0或 1;
A为五元或六元含 N杂芳环， 包括但不限于吡咯、 吡啶环； R是氢或甲氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、 羟基或含 1-8个碳原子的烷氧基， 其他取代基 可独立地选自相同或不同的卤素和含 1-8个碳原子的烷基； 也可 为饱和五元或六元脂族环；
当 R为甲氧基时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基 包括但不限于氢原子、 CI- C7 烷基、 卤素、 硝基、 甲氨基及乙氨 基； 也可为饱和五元或六元脂族环。
4. 权利要求 1或 2的式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构 体或可药用盐或水合物， 其中：
n为 0或 1;
A为吡咯或吡咬环；
R是氢或甲氧基；
当 R为氢时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基至少 有一个选自卤素、羟基或甲氧基， 其他取代基可独立地选自含 1-8 个碳原子的烷基等； 也可为饱和五元或六元脂族环；
当 R为甲氧基时： B为含单或多取代基的苯环， 其中取代基 包括但不限于氢原子、 C1-C7 烷基、 卤素、 硝基及乙氨基， 也可 为饱和五元或六元脂族环。
5. 权利要求 1或 2的式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构 体或可药用盐或水合物， 其中所述芳基丙烯酰胺化合物选自：
( ) -3- (5-甲氧基 -1H-吲哚- 3-基) -N-苄基丙烯酰胺，
(£) -3- (5-甲氧基 -1H-吲哚- 3-基) - N- (2-氯苄基）丙烯酰胺， ( ) -3- (5-甲氧基 -1H-吲哚- 3-基） -N-环戊基丙烯酰胺，
½) -3- (5-甲氧基 - 1H-吲哚- 3-基) - N- (2， 3-二甲基苯基）丙烯 酰胺， ( ) -3- (5-甲氧基- 1Η-吲哚- 3-基） -N- (2-甲基苯基）丙烯酰
1Η -吲哚 - 3-基) - Ν- (2-甲基- 3-氯苯基）丙烯酰胺，
1H -吲哚 - 3-基） -Ν- (2-氯苄基）丙烯酰胺，
1H -吲哚 - 3-基） -Ν-环戊基丙烯酰胺，
1H -吲哚 - 3-基) - Ν- (2-甲氧基苯基）丙烯酰胺，
1H -吲哚 - 3-基） -Ν- (环己烷甲基）丙烯酰胺，
5-甲氧基 - 1H-吲哚- 3-基) - Ν- (2-乙氨基 -4-硝基苯基) 丙烯酰胺，
ω-3- 喹啉 -2-基) -Ν- (2-氯苄基）丙烯酰胺，
喹啉 -2-基） -Ν-环戊基丙烯酰胺，
喹啉- 2-基) -Ν- (环己烷甲基）丙烯酰胺， 喹啉 -4-基) -Ν- (2-氯苄基）丙烯酰胺，
喹啉 -4-基）- Ν-环戊基丙烯酰胺， 和
喹啉- 4-基) -Ν- (环己烷甲基）丙烯酰胺。
6. 药物组合物， 所述组合物包含至少一种权利要求 1-5任何 一项的式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构体或可药用盐或水 合物和一种或多种可药用载体或赋形剂。
7. 权利要求 1-5任何一项的式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几 何异构体或可药用盐或水合物或权利要求 6的药物组合物用于制 备治疗或预防器官移植中的排斥反应和 /或自身免疫疾病的药物 的用途。
8. 权利要求 7的用途， 其中所述自身免疫疾病包括但不限于 多发性硬化、 系统性红斑狼疮、 牛皮癣或类风湿。
9. 治疗或预防器官移植中的排斥反应和 /或自身免疫疾病的 方法， 所述方法包括给予患者至少一种权利要求 1-5任何一项的 式 I芳基丙烯酰胺化合物或其几何异构体或可药用盐或水合物。
10. 权利要求 9 的方法， 其中所述自身免疫疾病包括但不限 于多发性硬化、 系统性红斑狼疮、 牛皮癣或类风湿。
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