WO2012058835A1 - 一株具有解磷作用的枯草芽孢杆菌及其应用 - Google Patents

一株具有解磷作用的枯草芽孢杆菌及其应用 Download PDF

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WO2012058835A1 PCT/CN2010/079268 CN2010079268W WO2012058835A1 WO 2012058835 A1 WO2012058835 A1 WO 2012058835A1 CN 2010079268 W CN2010079268 W CN 2010079268W WO 2012058835 A1 WO2012058835 A1 WO 2012058835A1
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宋存江
李保宾
王淑芳
李强
耿伟涛
曹名锋
孙秀梅
苏文萍
张伟
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南开大学
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor

Definitions

  • the present invention relates to a new strain of Bacillus subtilis and an application thereof, and particularly to a Bacillus subtilis XF-8 having a phosphate-dissolving action and a method for producing a neutral phytase using the same. Background technique
  • Phosphorus is an essential element in the growth of animals and plants and plays an important role in the life activities. Most of the phosphorus in the soil exists in the form of organic phosphorus such as phytic acid, nucleic acid, and phospholipid. It cannot be directly absorbed and utilized by plants, and the underground storage of phosphate rock as a source of phosphate fertilizer is very limited, which will make phosphorus become a modern constraint. An important factor in the sustainable development of agriculture. On the other hand, in the aquaculture industry, 40 to 70% of the phosphorus in the fish word is also in the form of phytic acid.
  • One of the objects of the present invention is to provide a Bacillus subtilis XF-8 having a phosphate-dissolving action capable of producing a neutral phytase.
  • the Bacillus subtilis XF-8 of the present invention is isolated from the field soil of Jining City, Shandong province, and produces a hydrolyzed circle on the screening plate, the colony edge is erected, the Gram stain is positive, and the 16S rDNA is input into Genbank, using BLAST.
  • the program performed a homology alignment analysis of its 16S rDNA gene and the 16S rDNA sequence of the registered bacteria in GenBank. The results showed that the XF-8 strain was 99% or even 100% similar to Bacillus subtilis and B. amyloliquefaciens.
  • the 16S rDNA nucleotide sequence of 16 strains of bacteria and the 16S rDNA sequence of the strain B XF-8 were selected from GenBank.
  • the phylogenetic tree was established using software Clustal X and MEGA3.0 software, as shown in Figure 1 of the specification, XF- 8 is closely related to Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis. Physiological and biochemical analysis was carried out by the microbial identification system BIOLOG 4.20, and the results are shown in Figure 2 of the specification. XF-8 is closest to Bacillus subtilis BaciU subtUi ⁇ . The SIM value is 0.534, and the SIM values of other bacteria are all 0. Based on the above results, the strain was named Bacillus subtilis XF-S 0. The strain was deposited at the China Center for Type Culture Collection of Wuhan University, China on July 16, 2010. The preservation number is: CCTCC NO: M2010182.
  • a second object of the present invention is to provide a method for producing a neutral phytase using Bacillus subtilis XF-8CCTCC NO: M2010182.
  • the present invention adopts the following technical scheme:
  • the strain is connected to the LB medium, cultured at 30 ° C overnight, and inoculated in an enzyme-producing medium at a dose of 1 to 5%, pH 5.5-7.5, 25 ⁇ Incubate at 37 ° C for 2 to 4 days. 4. C, 5000 rpm, centrifugation for 15 min, the supernatant was taken to obtain a neutral phytase crude enzyme; after 10 times dilution, the enzyme activity of the fermentation broth was measured.
  • the medium for the fermentation of phytase by Bacillus subtilis XF-8 CCTCC NO: M2010182 is wheat bran, the nitrogen source is casein and (N) 2 S0 4 , and the casein is beneficial to induce planting. Production of acid enzymes.
  • the neutral phytase obtained by the invention has good thermal stability, and its pH range is between 6.5 and 7.5, which can effectively compensate for the deficiency of acidic phytase, can be applied to fish feed development, and reduce phosphorus in water. It can also be used to develop biological bacterial fertilizer, effectively use organic phosphorus in soil, reduce the application rate of phosphate fertilizer, improve soil microenvironment, and improve the quality of agricultural products.
  • Figure 3 shows the standard curve of phytase.
  • strains used in the following examples were all Bacillus subtilis XF-8 CCTCC NO: M2010182.
  • the different media and solutions in the examples were as follows:
  • LB medium 1000 ml water, 10.0 g peptone, 5.0 g yeast dipping powder, 5.0 g NaCl, pH 7.0-7.2.
  • Screening medium 1000 ml water, 20.00 g glucose, 2.00 g CaCl 2 , 5.00 g N0 3 , 0.50 g K, C1, 0.50 g- MgS0 4 -7H 2 0, 0.01 g FeS0 4 -7H 2 0, 0.01 g MnS0 4 , 3.00 g calcium phytate, 15.00 g Qiongyue.
  • Enzyme-producing medium Weigh 100g wheat bran into 900ml H 2 O, shake at 121 °C for 60min, filter with 6 layers of gauze, dilute the filtrate to 1L, add 0.4 g (N3 ⁇ 4 ) 2 S0 4 , 0.2 g MgSO 4 -7H 2 O, 0.5 g KH 2 P0 4 , 0.4 g K 2 HPO 4 , 2.0 g CaCl 2 , lO.O g casein.
  • Enzyme dilution 2 mmol/L CaCl 2 , 50 mmol/L Tris-HCl, H 7.0, 10% glycerol;
  • Substrate solution 2mmol/L sodium phytate (100mmol/L Tris-HCl pH 7.0, 2mmol/L CaCl 2 ) Stop solution: 20% trichloroacetic acid (TCA);
  • a phosphorus standard curve was prepared using solutions 4 and 5. The specific steps are as follows: Add 1 ml of substrate solution to 250 ⁇ of different concentrations of phosphorus standard solution, and add 1.25 ml of stop solution after 37 minutes of water bath at 37 ° C. In the control group, add 1.25 ml of stop solution to 250 ⁇ of double distilled water, 37°. After 30 minutes in the C water bath, 1 ml of the substrate solution was added, and 2.5 ml of the color developing solution was added to the experimental group and the control group to form the phosphomolybdate to measure the OD value at 700 nm. The phytase standard curve is shown in Figure 3 of the specification.
  • the strain was identified as Bacillus subtilis by Gram staining, 16S rDNA gene sequence analysis and BIOLOG identification, and was named as Bacillus subtilis (Bacilhis s btilis) XF-8, and the preservation number was: CCTCC NO: M2010182.
  • the enzyme-producing medium is used, and the specific steps are as follows:
  • the strain is connected to the LB medium, cultured at 30 ° C overnight, and inoculated into the enzyme-producing medium at a rate of 1.0%, and cultured at 25 ° C, pH 5.5, 160 rpm. day.
  • the supernatant was taken to obtain a crude phytase enzyme; after 10 times dilution, the enzyme activity of the fermentation broth was measured.
  • Neutral phytase activity assay produced by Bacillus subtilis XF-8, CCTCC NO: M2010182 Enzyme activity is defined as: The amount of enzyme required to release 1 ⁇ of phosphorus per minute at pH 7.0.
  • n dilution factor of the enzyme solution
  • the neutral phytase activity of Bacillus subtilis BaciUus subtUis X ⁇ -S was calculated to be 0.32 U/ml.
  • Example 3 Bacillus subtilis, X- &, CCTCC NO: M2010182 enzyme-producing culture experiment 2
  • the enzyme-producing medium is used, and the specific steps are as follows:
  • the strain is connected to the LB medium, cultured at 30 ° C overnight, and inoculated into the enzyme-producing medium at a concentration of 2.5%, and cultured at 30 ° C, pH 6.5, 160 rpm for 3 days.
  • the neutral phytase enzyme activity assay method was the same as in Example 2.
  • the neutral phytase activity of Bacilhis subtilis XF-8 was calculated to be 0.51 U/ml based on the equations obtained from the standard curve and the enzyme activity definition.
  • Example 4 Bacillus subtilis XF-8, CCTCC NO: M2010182 enzyme-producing culture experiment 3
  • the enzyme-producing medium was used, and the specific steps were as follows: The strain was incubated in LB medium, shake-cultured at 30 ° C overnight, and inoculated into an enzyme-producing medium at a seeding rate of 5.0 %, and shake cultured for 4 days at YTC, pH 7.5, 160 rpm. 4 ° C, 5000 rpm, centrifugation for 15 min, the supernatant was taken to obtain a neutral phytase crude enzyme; after 10 times dilution, the enzyme activity of the fermentation broth was measured.
  • the neutral phytase enzyme activity assay method was the same as in Example 2.
  • the neutral phytase activity of Bacillus subtilis XF-8 was calculated to be 0.40 U/ml according to the equation obtained by the standard curve and the enzyme activity definition. 1/1

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Description

一株具有解磯作用的枯草芽孢杆菌及其应用 技术领域
本发明涉及枯草芽孢杆菌新菌株及其应用， 特别是涉及一株具有解磷作用的枯草芽孢 杆菌（ Bacillus subtilis ) XF-8及应用此菌产生中性植酸酶的方法。 背景技术
磷是动植物生长的必需元素， 在生命活动过程中发挥着重要的作用。 土壤中的磷大部 分以植酸态、 核酸、 磷脂态等有机磷形式存在， 不能被植物直接吸收利用， 并且作为磷肥 原料来源的磷矿石地下储存量非常有限， 这将使磷成为制约现代农业可持续发展的一个重 要因素。 另一方面， 水产养殖业中， 鱼类词料中 40~70%的磷也以植酸态形式存在， 因鱼 类消化道内缺乏水解植酸磷的酶类， 磷大部分随粪便排出， 不但不能充分利用词料中的磷 源， 而且造成严重的水体磷污染。 因此， 急需解磷菌产生出酶类物质将有机磷转化成生物 体易于吸收的磷。植酸酶就可以催化植酸及植酸盐水解成低磷酸化的肌醇衍生物和磷酸 (或 磷酸盐)， 提高磷和其它微量元素的生物利用率。 但目前大多植酸酶都属酸性植酸酶 （pH 2.5-5.5 )。因此，研究开发新的菌株，使其能产生中性植酸酶，有效 pH作用范围在 6.5~7.5 之间， 能够提高中性条件下的解磷效果， 应用于磷细菌肥料和鱼类 （消化道呈中性） 词料 的开发， 提高土壤或词料中磷的利用率， 改善土壤及水体生态环境， 具有重要意义。 发明内容
本发明的目的之一是提供一株能产生中性植酸酶的具有解磷作用的枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis ) XF-8。
本发明的枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ) XF-8分离自山东省济宁市田间土壤，在筛选 平板上产生水解圈， 菌落边缘整起， 革兰氏染色呈阳性， 将 16S rDNA输入 Genbank, 使 用 BLAST程序对其 16S rDNA基因和 GenBank中已登录细菌的 16S rDNA序列作同源性 比对分析。 结果显示 XF-8 菌株与枯草芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌相似性达到 99%甚至 100%。 从 GenBank中选取 16株细菌的 16S rDNA核苷酸序列， 禾 B XF-8菌种的 16S rDNA 序列， 使用软件 Clustal X和 MEGA3.0软件建立进化树， 如说明书附图 1所示， XF-8和枯 草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌亲缘关系都很近。通过微生物鉴定系统 BIOLOG 4.20进行生理 生化分析， 结果如说明书附图 2显示， XF-8与枯草芽孢杆菌 BaciU subtUi^最为接近， SIM值为 0.534， 其他菌的 SIM值均为 0。 综合上述结果， 将该菌株命名为枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis) XF-S 0 该菌已于 2010年 7月 16日保藏在中国武汉大学的中国典型培养 物保藏中心， 保藏编号为： CCTCC NO: M2010182。
本发明的第二个目的是提供利用枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ) XF-8CCTCC NO: M2010182产生中性植酸酶的方法。
为实现这一目的， 本发明采取以下技术方案： 菌种接至 LB培养基， 30°C 振荡培养过 夜， 以 1~5%接种量接种于产酶培养基中， pH 5.5-7.5 , 25~37°C振荡培养 2~4天。 4。C， 5000rpm， 离心 15min， 取上清， 得到中性植酸酶粗酶； 稀释 10倍后， 测定发酵液的酶活。
利用枯草芽孢杆菌 （ Bacillus subtilis ) XF-8 CCTCC NO: M2010182发酵产生植酸酶的 培养基碳源为麦麸， 氮源为酪蛋白胨和 （N ) 2S04， 其中的酪蛋白胨有利于诱导植酸酶 的产生。
由本发明所得到的中性植酸酶具有良好的热稳定性， 其 pH作用范围在 6.5~7.5之间， 可以有效弥补酸性植酸酶的不足， 能够应用于鱼类饲料开发， 降低水体中磷的污染； 还能 用于研制生物菌肥， 有效利用土壤中有机磷， 减少磷肥施用量， 改善土壤微环境， 提高农 产品的品质。 附图说明
图 1 XF-8菌株 16S rDNA进化树；
图 2 XF-8菌株 BIOLOG图谱；
图 3植酸酶标准曲线。 具体实施方式
在下面的实施例中所用菌种均为枯草芽孢杆菌 （ Bacillus subtilis ) XF-8 CCTCC NO: M2010182 , 实施例中不同培养基及溶液配方如下：
1. LB培养基： 1000 ml水， 10.0 g蛋白胨， 5.0 g酵母浸粉， 5.0 g NaCl, pH 7.0-7.2。
2. 筛选培养基： 1000 ml水， 20.00 g葡萄糖， 2.00 g CaCl2, 5.00 g職 N03， 0.50 g K,C1, 0.50 g- MgS04-7H20, 0.01 g FeS04-7H20, 0.01 g MnS04, 3.00 g植酸钙， 15.00 g琼月旨。
3. 产酶培养基： 称取 100g麦麸加入 900ml H2O中， 121 °C下 60min， 6层纱布过滤， 滤液 定容至 1L， 加入 0.4 g (N¾ ) 2S04, 0.2 g MgSO4-7H2O, 0.5 g KH2P04, 0.4 g K2HPO4， 2.0 g CaCl2， lO.O g酪蛋白胨。
2
更正页 (细则第 91条） 4. 酶活测定溶液：
酶稀释液： 2 mmol/L CaCl2, 50mmol/L Tris-HCl， H 7.0, 10%甘油；
底物溶液： 2mmol/L植酸钠 （ 100mmol/L Tris-HCl pH 7.0， 2mmol/L CaC l2) 终止液： 20%三氯乙酸 (TCA);
硫酸亚铁 '硫酸铵显色液： [(1.5%钼酸铵 :5.5%硫酸) :(2.7%硫酸亚铁) =4: 1 ,V/V]
1.5g钼酸铵溶于水，加入 98%浓硫酸 5.6mL，定容至 lOOmL; 0.68g硫酸亚铁溶于 25mL 水， 两部分混勾， 存放于 4°C。
5. 磷标准液 (用于计算直线回归方程)：
A、 50 mM磷酸盐母液： 1.3609 g KH2P04(干燥)溶于 200ml重蒸水中 （定容） 。
B、 磷标准液： 将母液按一定比例， 分别稀释成 0.2mM， 0.4mM， 0.8mM， 1.6mM，
3.2mM的工作液。
采用溶液 4、 5制作磷标准曲线。 具体步骤如下： 用不同浓度的磷标准溶液 250 μΐ加 入 1 ml底物溶液， 37°C水浴 30 min后， 加入 1.25 ml终止液； 对照组为 250 μΐ双蒸水中 加入 1.25 ml终止液， 37°C水浴 30 min后，加入 1 ml底物溶液，实验组和对照组均加入 2.5 ml显色液， 生成磷钼酸盐在 700 nm下测定 OD值。植酸酶标准曲线如说明书附图 3所示。 实施例 1、 分离鉴定枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis ^ X - &， CCTCC NO: M2010182 实验材料来自山东省济宁市田间土壤。
具体实施步骤如下： 在无菌操作下， 称取 1.0 g土样溶于 9ml无菌生理盐水中， 充分 振荡后， 置于 85 °C水浴锅中 15min， 并梯度稀释后， 涂布于已制好的筛选平板上。 倒放于 28~30°C恒温箱中培养 2~3天， 用接种针挑起有透明圈的菌落， 进一步分离、 纯化。 再将 菌株接于产酶培养基中， 进行复筛， 以确定产植酸酶的菌株。 经过革兰氏染色、 16S rDNA 基因序列分析及 BIOLOG鉴定确定该菌株为枯草芽孢杆菌，命名为枯草芽孢杆菌 （ Bacilhis s btilis ) XF-8 , 经保藏编号为： CCTCC NO: M2010182。
实施例 2、 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis、X - &， CCTCC NO: M2010182的产酶培养实 验 1
采用产酶培养基， 具体步骤如下： 菌种接至 LB培养基， 30°C振荡培养过夜， 以 1.0 % 接种量接种于产酶培养基中， 25 °C， pH 5.5, 160 rpm振荡培养 2天。 4°C， 5000 rpm, 离心 15 min, 取上清， 得到中性植酸酶粗酶； 稀释 10倍后， 测定发酵液的酶活。
枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ) XF-8, CCTCC NO: M2010182产生的中性植酸酶酶活测 定 酶活定义为： 在 pH 7.0时， 每分钟释放 1 μΜ 磷所需的酶的量。
将样品用缓冲液做适当稀释后， 取 250 μΐ酶液加入 1 ml底物溶液， 37°C水浴 30 min 后，加入 1.25 ml终止液，终止酶反应；对照组 250 μΐ酶液加入 1.25 ml终止液终止酶反应， 37°C水浴 30 min后， 加入 l ml底物溶液， 实验组和对照组均加入 2.5 ml显色液， 生成磷 钼酸盐在 700 nm下测定 OD值。 根据标准曲线所得方程及酶活定义代入酶活计算公式： 酶活性 (U/ml) = (1.8149 x - 0.0166) x 4 x n/t
x: OD700的值；
4： 250 μ 1稀释酶液中的酶活换算成 1 ml酶液的酶活；
n: 酶液稀释倍数；
t: 反应时间
计算枯草芽孢杆菌 BaciUus subtUis X¥-S的中性植酸酶酶活为 0.32U/ml。
实施例 3、 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis、X - &， CCTCC NO: M2010182的产酶培养实 验 2
采用产酶培养基， 具体步骤如下： 菌种接至 LB培养基， 30°C振荡培养过夜， 以 2.5% 接种量接种于产酶培养基中， 30°C， pH 6.5， 160rpm振荡培养 3天， 4°C， 5000rpm, 离心 15min, 取上清， 得到中性植酸酶粗酶； 稀释 10倍后， 测定发酵液的酶活。
中性植酸酶酶活测定方法同实施例 2。
根据标准曲线所得方程及酶活定义计算枯草芽孢杆菌 （ Bacilhis subtilis ) XF-8的中性 植酸酶酶活为 0.51 U/ml。
实施例 4、 枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ) XF-8, CCTCC NO: M2010182的产酶培养实 验 3
采用产酶培养基， 具体步骤如下： 菌种接至 LB培养基， 30°C振荡培养过夜， 以 5.0 % 接种量接种于产酶培养基中， YTC , pH 7.5, 160rpm振荡培养 4天。 4°C， 5000rpm, 离心 15min, 取上清， 得到中性植酸酶粗酶； 稀释 10倍后， 测定发酵液的酶活。
中性植酸酶酶活测定方法同实施例 2。
根据标准曲线所得方程及酶活定义计算枯草芽孢杆菌 （ Bacilhis subtilis ) XF-8的中性 植酸酶酶活为 0.40U/ml。 1/1
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1 下面的说明与本申请说明书中此处提到的
保藏的微生物或其他生物材料相关：
1-1 页码 2
1-2 行号： 1 -3
1-3 保藏事项
1-3-1 保藏单位名称 CCTCC 中国典型培养物保藏中心
1-3-2 保藏单位地址 中国湖北省武汉市武汉大学， 邮政编码: 430072， Hube i
(GN)。
1-3-3 保藏日期 2010年 7月 23日 (23. 07. 2010)
1-3-4 保藏号 CCTCC M2010182
1-5 本说明是对下列指定国
所有指定国
由受理局填写
0-4 本表格与国际申请一起收到：
(是或否）
0-4-1 受权官员 由国际局填写
0-5 国际局收到本表格日期：
0-5-1 受权官员

Claims

1. 一株具有解磷作用的枯草芽孢杆菌（ Bacillus subtilis ) XF-8 , CCTCC NO: M2010182。
2. 利用枯草芽孢杆菌 (； Bacillus subtilis )XF-8 , CCTCC NO: M2010182产生中性植酸酶的 方法， 其特征在于包括如下步骤： 菌种接至 LB培养基， 30°C 振荡培养过夜， 以 1~5%接 种量接种于产酶培养基中， pH 5.5~7.5， 25~37°C振荡培养 2~4天； 4°C， 5000rpm,离心 15min， 取上清， 得到中性植酸酶粗酶； 稀释 10倍后， 测定发酵液的酶活； 其中产酶培养基的碳 源为麦麸， 氮源为酪蛋白胨和 （NH4 ) 2S04。
PCT/CN2010/079268 2010-11-05 2010-11-30 一株具有解磷作用的枯草芽孢杆菌及其应用 WO2012058835A1 (zh)

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Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102250786B (zh) * 2011-05-21 2013-03-20 福建农林大学 一株能提高桉树叶绿素含量的无机解磷菌
CN102399713B (zh) * 2011-09-22 2013-01-30 华南农业大学 枯草芽孢杆菌hl-1及其在土壤解磷方面的应用
CN103461653A (zh) * 2013-09-26 2013-12-25 卞佳林 一种酵母生物饲料及其制备方法
CN103773709B (zh) * 2013-10-12 2015-05-20 河北农业大学 一种具有高效解磷作用的枯草芽孢杆菌及其应用
CN103797955B (zh) * 2014-01-28 2015-09-09 广西喷施宝股份有限公司 一种降低蔬菜中有机磷农药残留的方法
CN108383560A (zh) * 2018-04-28 2018-08-10 黑龙江省科学院微生物研究所 一种玉米微生物复合肥
CN115074281B (zh) * 2022-06-27 2023-10-10 华中农业大学 一株高产有机酸的人参芽孢杆菌及其在微生态制剂中的应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1358845A (zh) * 2000-12-12 2002-07-17 中国农业科学院饲料研究所 一种中性植酸酶、编码该酶的基因以及含有该酶的饲料
US20090047707A1 (en) * 2007-08-17 2009-02-19 Issar Pharmaceuticals Pvt Ltd Bacterial recombinant phytase
CN101724596A (zh) * 2010-01-11 2010-06-09 北京联合大学 一株有机磷农药降解菌的培养方法
CN101787354A (zh) * 2010-02-11 2010-07-28 黑龙江省科学院微生物研究所 一种具有营养、抑病及降解有机磷农药的枯草芽孢杆菌

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1358845A (zh) * 2000-12-12 2002-07-17 中国农业科学院饲料研究所 一种中性植酸酶、编码该酶的基因以及含有该酶的饲料
US20090047707A1 (en) * 2007-08-17 2009-02-19 Issar Pharmaceuticals Pvt Ltd Bacterial recombinant phytase
CN101724596A (zh) * 2010-01-11 2010-06-09 北京联合大学 一株有机磷农药降解菌的培养方法
CN101787354A (zh) * 2010-02-11 2010-07-28 黑龙江省科学院微生物研究所 一种具有营养、抑病及降解有机磷农药的枯草芽孢杆菌

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FAN, JI-YING ET AL.: "Brief review of secreted phytases from Bacillus subtilis.", JOURNAL OF YUNNAN AGRICULTURAL UNIVERSITY, vol. 21, no. 6, 30 December 2006 (2006-12-30), pages 715 - 720 *
JORQUERA, MILKO ET AL.: "Current and future biotechnological applications of bacterial phytases and phytase-producing bacteria.", MICROBES ENVIRON, vol. 23, no. 3, 30 December 2008 (2008-12-30), pages 182 - 191 *

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