WO2012011741A2

WO2012011741A2 - 신규한 푸사리세틴 화합물 및 이의 용도

Info

Publication number: WO2012011741A2
Application number: PCT/KR2011/005348
Authority: WO
Inventors: 안종석; 장재혁; 김보연; 장준필; 아사미유키히로; 오현철
Original assignee: Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Current assignee: Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KRIBB
Priority date: 2010-07-20
Filing date: 2011-07-20
Publication date: 2012-01-26
Anticipated expiration: 2013-01-20
Also published as: WO2012011741A9; WO2012011741A3; US8916602B2; KR101308539B1; KR20120010175A; JP2013534216A; JP5728576B2; US20130116297A1; CN103443103B; CN103443103A

Abstract

본 발명은 본 발명은 푸사리움 속 곰팡이(Fusarium sp.) FN080326로부터 분리한 항암활성을 갖는 신규한 푸사리세틴 화합물 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 토양샘플에서 분리한 곰팡이 푸사리움 속(Fusarium sp.) FN080326로부터 분리 정제한 신규한 푸사리세틴 화합물들이 유방암 세포, 간암 세포 또는 골수성 백혈병 세포와 같은 암세포들에 대하여 증식저해 및 전이저해 활성을 가지고 있으므로, 상기 화합물들을 유효성분으로 함유하는 항암용 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

【명세서】

【발명의 명칭】

신규한 푸사리세틴 화합물 및 이의 용도

【기술분야】

<1> 본 발명은 항암활성을 가지는 토양에서 분리한 곰광이, 상기 곰팡이로부터 생산된 암세포 증식저해 및 암세포 전이저해 활성을 갖는 화합물， 상기 화합물올 유효성분으로 포함하는 항암용 조성물， 및 상기 화합물의 분리 방법에 관한 것이 다.

<2>

【배경기술】

<3> 암은 현대사회에서 사망률 1위를 차지하는 주요 질병으로 현재까지 많은 연 구에도 불구하고 획기적인 치료법이 없는 실정이다. 현대 의학의 대표적 암 치료 법에는 외과적 수술요법， 생물요법， 방사선요법， 항암물질 투여에 의한 화학요법 등이 있다. 화학요법은 항암제를 경구나 주사로 투여하여 암세포의 증식을 억제하 는 방법으로 전이된 암을 치료할 수 있다는 것으로 현재 화학요법은 전이성 암 치 료에 표준요법으로 사용되고 있다. 물론 화학요법으로 전이된 암을 완치시킬 수 있는 것은 아니지만 증상을 완화시켜 수명 연장에 있어서 중요한 역할을 한다.

<4>

<5> 천연물 유래의 항암제 중 가장 널리 사용되고 있는 항암제는 택솔 (taxol)로 서 유방암， 난소암의 치료에 사용되고 있다. 그러나 이러한 화학요법제들은 부작 용 및 항암제 내성발현 등의 문제점을 가지고 있으며， 지금까지 암에 대한 많은 연 구가 진행되고 있지만 암 자체의 다양성 및 다양한 발병기작으로 인하여 보다 적은 부작용과 내성을 극복할 수 있는 새로운 항암제 개발이 요구되고 있다.

<6> 천연물의 탐색과 이용에 관한 연구는 바로 유기체의 생합성 능력을 탐색하고 이용하는 것으로서， 지금까지 주로 식물과 미생물이 그 대상의 주종을 이루어 왔 다. 특히 미생물은 종의 다양성과 함께 독특하고 흥미로운 생리활성 물질을 생산 하는 예가 많고 세대기간이 짧으며 대량생산이 용이하고 산업적 이용가능성이 높아 서 매력 있는 생리활성물질의 탐색원이 되어왔다. 미생물로부터 탐색된 많은 생리 활성물질들은 방선균， 곰광이， 세균들로부터 기인하며 그 중 곰광이로부터 약 25% 가 발견되어 항암물질을 비롯한 생리활성물질의 생산균으로서 산업적 또는 의학적 인 측면에서 매우 중요한 미생물 자원으로 알려져 있다. <7>

<8> 이에， 본 발명자들은 항암활성이 우수한 물질에 대해 토양미생물의 대사산물 로부터 탐색하던 중， 토양샘플로부터 항암활성이 우수한 물질을 생산하는 곰팡이 균주 푸사리움

sp.) FN080326를 선별하였고， 이로부터 새로운 구조의 푸사리세틴 (fusarisetin) 화합물을 순수하게 분리 및 정제하였으며, 상기 푸사리세 틴 화합물들이 유방암 세포， 간암 세포, 골수 백혈병 세포들과 같은 암세포에 대하 여 암세포 증식저해 및 암세포 전이 저해 활성을 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

<9>

【발명의 상세한 설명】

【기술적 과제】

<ιο> 본 발명의 목적은 항암활성을 가지는 토양에서 분리한 푸사리움 쏙 U isarium sp.) FN080326 곰광이_ᅤ 상기 곰광이로부터 생산된 암세포 증식저해 및 암세포 전이 저해 활성을 갖는 신규 푸사리세틴 (fusarisetin) 화합물올 제공하는 것이다.

<ιι> 본 발명의 다른 목적은 본 발명에 따른 푸사리세틴 화합물을 생산하는 방법 을 제공하는 것이다.

<12> 본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 푸사리세틴 화합물을 생산하는 신 규 균주를 제공하는 것이다.

<13> 본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 푸사리세틴 화합물을 포함하는 항 암용 조성물을 제공하는 것이다.

<14> 본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따른 푸사리세틴 화합물을 이용한 암 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

<15>

【기술적 해결방법】

<16> 상기 과제를 해결하기 위해， 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또 는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다: <17> [화 1]

<i9> 여기에서， Rl, R2, R3, R4, R5 및 R6는 각각 수소, 메틸， 에틸， 프로필， 이 소프로필， 부틸， 이소부틸， 아세틸， 벤질， 할로겐 원자, 수산기 또는 카르복실기를 가질 수 있으며， 모든 비대칭탄소에서의 이성질체를 포함한다.

<20> 또한， 본 발명은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<21> 또한， 본 발명은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 암 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

<22> 또한， 본 발명은 상기 화합물을 생산하는 방법을 제공한다.

<23> 또한， 본 발명은 수탁번호 KCTC11985BP로 기탁된， 상기 화합물을 생산하는 푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326균주를 제공한다.

<24> 또한, 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 암에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는， 암 치료방법을 제공 한다.

<25> 또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는， 암 예방방법을 제공한다.

<26> 또한, 본 발명은 암 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한， 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

<27> 또한, 본 발명은 암 예방 및 개선용 건강식품으로 사용하기 위한， 상기 화합 물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

<28>

<29> 이하， 본 발명을 상세히 설명한다.

<30>

<31> 본 발명은 하기 [화학식 1]로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가 능한 염을 제공한다: 【 1]

여기에서, Rl, R2, R3, R4, R5 및 R6는 각각 수소, 메틸, 에틸， 프로필， 이 소프로필， 부틸， 이소부틸, 아세틸， 벤질， 할로겐 원자， 수산기 또는 카르복실기를 가질 수 있으며， 모든 비대칭탄소에서의 이성질체를 포함한다.

상기 [화학식 1]로 표시되는 화합물은, 하기 [화학식 2]으로 표시되는 푸사 리세틴 A 화합물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

【화학식 2]

상기 [화학식 1]로 표시되는 화합물은， 하기 [화학식 3]으로 표시되는 푸사 리세틴 B 화합물인 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다:

【화학식 3]

상기 푸사리세틴 화합물은 곰광이 푸사리움 쏙 Fusariwn sp.) FN080326로부 터 분리되는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. <42> 상기 푸사리세틴 화합물은 유방암 세포， 간암 세포 또는 골수성 백혈병 세포 와 같은 암세포들에 대하여 증식저해 및 전이저해 활성을 가지는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

<43> 상기 암은 유방암， 간암 또는 골수성 백혈병인 것이 바람직하고， 유방암인 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

<44>

<45> 본 발명은 상기 [화학식 1]로 표시되는 푸사리세틴 화합물 또는 이의 약학적 으로 허용되는 염뿐만 아니라， 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물 을 모두 포함한다.

<46> 본 발명의 [화학식 1]의 푸사리세틴 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산 (free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산， 인산， 황산， 브롬화 수소산， 요드화수소산， 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디 카르복실레이트， 페닐-치환된 알카노에이트， 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오 에이트, 방향족 산류， 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트， 바이설페이 트, 설파이트， 바이설파이트, 니트레이트， 포스페이트， 모노하이드로겐 포스페이 트， 디하이드로겐 포스페이트， 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드， 브로 마이드， 아이오다이드, 플루오라이드， 아세테이트， 프로피오네이트, 데카노에이트， 카프릴레이트， 아크릴레이트, 포메이트， 이소부티레이트， 카프레이트， 헵타노에이 트， 프로피올레이트， 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트， 수베레이트， 세바케이 트， 푸마레이트， 말리에이트， 부틴 -1,4-디오에이트， 핵산 -1,6-디오에이트, 벤조에 이트， 클로로벤조에이트， 메틸벤조에이트， 디니트로 벤조에이트， 하이드록시벤조에 이트， 메록시벤조에이트， 프탈레이트， 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트， 를루엔설 포네이트， 클로로벤젠설포네이트， 크실렌설포네이트， 페닐아세테이트， 페닐프로피 오네이트， 페닐부티레이트， 시트레이트， 락테이트， β-하이드록시부티레이트， 글리 콜레이트， 말레이트， 타트레이트， 메탄설포네이트， 프로판설포네이트, 나프탈렌 -1- 설포네이트， 나프탈렌 -2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함한다.

<47> 본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법， 예를 들면， 화학식 1의 푸사리세 틴 화합물을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고ᅳ 이 염을 수흔화성 유기 용매， 예 를 들면 메탄올， 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다. <48> 동량의 [화학식 1]의 푸사리세틴 화합물 및 물 중의 산 또는 알코올을 가열 하고， 이어서 이 흔합물을 증발시켜서 건조시키거나 또는 석출된 염을 홉입 여과시 켜 제조할 수도 있다.

<49> 또한， 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염올 만들 수 있다. 알 칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산 화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과 하고， 여액을 증발， 건조시켜 얻는다. 이때， 금속염으로는 나트륨， 칼륨 또는 칼 슴염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은 염은 알칼리 금 속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염 (예， 질산은)과 반응시켜 얻는다.

<50>

<51> 본 발명에서는 토양시료로부터 균주를 분리한 후， 상기 균주의 서열 분석을 수행하여 얻어진 염기서열의 GenBank 검색한 결과， 푸사리움 옥시스포룸 (/ s /½ oxysporu ) (DQ916150 ) 99%, 푸사리움 인카나툼0 53// incarnat υα)(Ε\}111657) 에 99%의 상동성을 보였다. 이에, 본 균주를 푸사리움 속으로 동정하였고 이를 푸 사리움 ^ ^usarium sp.) FN080362로 명명하였으며， 2011년 7월 18일 한국생명공학 연구원 미생물자원센터 (Korean Collection for Type Culture, KCTC)에 기탁하였다 ( 수탁번호: KCTC11985BP).

<52> 본 발명에서는 푸사리움

sp. ) FN080326 균주의 배양액을 동량의 에틸아세테이트로 추출하여 추출액을 수득한 후， 상기 추출액을 감압증발 방법으로 농축하여 농축액을 수득한 다음， 컬럼크로마토그래피를 이용하여 활성분획을 용출 한 다음， 상기 활성분획을 감압농축한 후， 고속액체크로마토그래피를 이용하여 본 발명의 화합물 1과 2를 각각 분리하였다 (도 1 참조).

<53> 본 발명에서는 상기 곰광이 Fusarium FN080326의 배양액으로부터 분리한 화합물 1과 2를 ESI 질량분석기 (Electrospray Ionization mass spectrometer)를 사 용하여 분자량 및 분자식을 결정하였다. 또한， 핵자기공명 (NMR) 분석을 통하여

NMR, ¹³C NMR, COSY(Correlation Spectroscopy), HMQC(1H-Detected heteronuclear

Multiple—Quantum Coherence) , HMBC(Het eronuc 1 ear Multiple-Bond Coherence) , DEPT(Distort ionless Enhancement by Polarization) , N0ESY(Nuclear Overhauser effect spectroscopy) 스펙트럼을 얻고， 화합물 1과 2의 분자구조를 결정한 결과， 상기 화합물 1과 2는 하기 화학식과 같은 6-6— 5-5-5원 고리가 차례로 연결된 신규 한 골격의 화합물들로 동정하였다 (도 2， 도 3， 도 4 및 도 5). 이에， 상기 화합물 1과 2를 각각 푸사리세틴 (Fusarisetin) A와 B로 명명하였다. 푸사리세틴 A와 B는 HRESIMS 분석과 賺 분석을 통하여， 분자량 389, 분자식 C₂₂H₃₁N0₅임을 확인하였으 며 , 동일한 분자량과 분자식을 가지는 화합물로 NMR의 결합상수값 및 N0ESY 결과 로부터 화합물 1과 2는 5번 탄소의 입체 배위가 다른 이성질체임을 확인하였다. <54> 본 발명에서는 푸사리세틴 A와 B가 암세포 증식저해 활성이 있는지 알아보기 위해， 인간 유방암 세포주 (MDA-MB-231 세포)， 쥐 섬유아 세포주 (3Y1 세포)， 인간 간암 세포주 (Hep3B), 인간 만성골수성 백혈병 세포주 (K562 세포) 및 인간 전골수성 백혈병 세포주 (HL-60 세포)를 푸사리세틴 A와 B를 다양한 농도로 첨가한 배지에 배 양한 후， 상기 세포들의 생존율을 측정하였다. 그 결과， 본 발명의 푸사리세틴 A 와 B는 각각 MDA-MB-231 세포， 3Y1 세포, Hep3B 세포， K562 세포 및 HL-60 세포주 들 모두에 대해 50% 증식저해 농도인 IC₅₀ 값을 농도 의존적으로 감소시켰다 (도 7 및 도 8 참조). 따라서， 본 발명의 푸사리세틴 A와 B는 우수한 암 세포 증식 활성 을 갖는 것을 알 수 있다.

<55> 본 발명에서는 푸사리세틴 A와 B의 암세포 전이저해 활성이 있는지 알아보기 위해， 인간 유방암 세포 (MDA-MB-231 세포)를 푸사리세틴 A와 B를 다양한 농도로 첨 가한 배지에 배양한 후， 트랜스웰챔버를 이용하여 상기 세포의 전이 정도를 측정하 였다. 그 결과， 본 발명의 푸사리세틴 A와 B는 각각 MDA-MB-231 세포에 대해 100% 전이 저해 농도를 나타내는 ED₁₀₀을 현저히 감소시켰다. 따라서， 본 발명의 푸사리 세틴 A와 B는 암세포에 대한 암 전이 억제 활성을 갖는 것을 알 수 있다. 이런 결 과를 통해 푸사리세틴 A와 B는 10% 농도의 소 태아혈청 (FBS)으로 유도되어진 세포 의 전이를 저해하는 것으로 보아， 암세포 전이에 관여하는 인자군， 예를 들어 인테 그린 (Integrin), 메트릭스 메탈로포로테아제 (Metrix metal loproteinases; MNPs), 헤파란나제 (Heparanase), 섬유세포증식인자 (Fibroblast Growth Factor; FGF) 등을 저해하는 것임을 알 수 있다.

<56>

<57> 또한， 본 발명은 수탁번호 KCTC11985BP로 기탁된， 상기 푸사리세틴 A또는 B 화합물을 생산하는 푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326 균주를 제공한다.

<58> 또한, 본 발명은 본 발명의 푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326 균주로부터 푸사리세틴 A또는 B 화합물을 분리하는 방법을 제공한다.

<59> 구체적으로，

<60> 1) 푸사리움 쏙 ( isariwn sp.) FN080326 균주를 배양하는 단계; 및

<6i> 2) 상기 1) 단계에서 얻어진 균주 배양물에서 푸사리세틴 화합물을 분리하는 단계를 포함하는， 본 발명에 따른 푸사리세틴 화합물의 분리 방법을 제공한다. <62> 본 발명의 실시예에서는.

<63> 1) 푸사리움 속 (Fusarium sp. ) FN080326 균주를 배양하는 단계;

<64> 2) 상기 1) 단계에서 얻어진 균주 배양물을 에틸아세테이트로 추출하는 단 계; 및

<65> 3) 상기 2) 단계에서 얻어진 에틸아세테이트 추출물을 컬럼 크로마토그래피 로 분리하는 단계를 포함하는， 분라방법을 수행하였다.

<66> 상기 방법에 있어서， 단계 1)은 곰팡이 푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326 균주를 배양하는 단계로서, 상기 균주는 수탁번호 KCTC11985BP로 기탁된 푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326 균주인 것이 바람직하다.

<67> 균주 배양은 통상의 미생물이 사용할 수 있는 영양원을 함유하는 배지에서 배양할 수 있다. 영양원으로는 종래 곰광이의 배양에 이용되고 있는 공지의 영양 원을 사용할 수 있다. 예를 들어， 탄소원으로는 글루코오스， 물엿， 텍스트린， 전 분， 당밀， 동물유, 식물유 등을 사용할 수 있으며, 질소원으로는 밀기울, 대두박， 소맥， 맥아, 면실박， 어박， 콘스팁리커, 육즙, 효모 추출물， 황산암모늄， 질산소 다， 요소 등을 사용할 수 있다. 필요에 따라， 식염， 칼륨， 마그네슴， 코발트， 염 소， 인산， 황산 및 기타 이온생성을 촉진하는 무기염류를 첨가하면 매우 효과적이 다. 배양방법으로는 호기적 조건에서는 진탕 배양 또는 정치배양이 바람직하나 이 에 한정되지 않는다.

<68> 배양온도는 상기의 각 조건들에서 배양할 경우 조건에 따라 약간씩 상이하기 는 하나， 보통 20 ~ 37^°C에서 배양하는 것이 바람직하고， 25 ~ 30^°C에서 배양하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

<69> 상기 방법에 있어서， 단계 2)는 상기 단계 1)에서 얻어진 균주 배양물을 에 틸아세테이트로 추출하는 단계로서， 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B 화합물은 균주 의 배양액뿐만 아니라 균사체 부분에도 존재할 수 있다. 따라서， 균주의 배양액 및 균사체에 에틸아세테이트 등의 유기용매를 가하여 배양액 및 균사체로부터 유효 성분을 추출한 후 수득된 추출액을 감압증발 방법으로 농축하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

<70> 상기 방법에 있어서， 단계 3)은 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B 화합물을 분 리하는 단계로， 상기 단계 2)에서 얻은 에틸아세테이트 농축액을 메탄을 ： 물 흔합 용매를 이용하여 플래쉬 컬럼 크로마토그래피를 실시한 후， 고속액체크로마토그래 피로 정제하여 분리할 수 있다. <71>

<72> 또한 , 본 발명은 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B 화합물을 유효성분으로 함 유하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

<73> 본 발명의 푸사리세틴 A또는 B화합물은 유방암 세포， 간암 세포 또는 골수 성 백혈병 세포와 같은 암세포들에 대하여 증식저해 및 전이저해 활성을 가지고 있 으므로， 상기 푸사리세틴 A또는 B 화합물을 항암제의 유효성분으로 유용하게 사용 될 수 있음을 알 수 있다.

<74> 본 발명에 따른 푸사리세틴 A 또는 B, 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 을 유효성분으로 함유하는 조성물은 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있 다.

<75> 즉, 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B는 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구 의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있다. 또한， 제제화할 경우에는 유효성분인 푸 사리세틴 A또는 B 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함 하여 제조할 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 담체는 식염수， 멸균수, 링거액， 완층 식염수, 덱스트로즈 용액， 말토 덱스트린 용액， 글리세를， 에탄올 및 이들 성 분 중 1 성분 이상을 흔합하여 사용할 수 있으며， 필요에 따라 항산화제， 완층액， 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다.

<76> 경구투여를 위한 고형 제제로는 정제, 환제， 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포 함될 수 있으며， 이러한 고형 제제는 푸사리세틴 A 또는 B에 적어도 하나 이상의 부형제 , 예를 들면 , 전분， 칼슘카보네이트 (Calcium carbonate) , 수크로스 (Sucrose) 또는 락토오스 (Lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한， 단순한 부형제 이외 에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

<77> 또한， 경구투여를 위한 액상 제제로는 현탁제， 내용액제， 유제， 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순회석제인 물， 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형 제, 예를 들면， 습윤제， 감미제, 방향제， 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투 여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제， 현탁제， 유제， 동결건조제， 좌제 가 포함된다. 비수성용제， 현탁용제로는 프로필렌글리콜 (Propylene glycol), 폴리 에틸렌 글리콜， 을리브 오일과 같은 식물성 기름， 에틸올레이트와 같은 주사 가능 한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트원 (tween) 61, 카카오지， 라우린지， 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

<78> 나아가， 본 발명의 약학적 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며， 비경구 투 여는 피하주사， 정맥주사 또는 근육내 주사에 의한다. 비경구 투여용 제형으로 제 제화하기 위해서는 상기 푸사리세틴 A또는 B를 안정제 또는 완층제와 함께 물에서 흔합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 ¾플 또는 바이알의 단위 투여형으 로 제제한다.

<79> 본 발명에 따른 푸사리세틴 A 또는 B는 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 50 중량 %로 포함되는 것이 바람직하다. 그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정 되는 것은 아니고， 환자의 상태， 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

<80> 본 발명에 따른 푸사리세틴 A 또는 B의 바람직한 투여량은 환자의 상태 및 체중， 질병의 정도， 약물형태， 투여경로 및 기간에 따라 다르지만， 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위해서， 1일 0.01 mg/kg 내지 10 g/k_g으로， 바람직하게는 1 mg/kg 내지 1 g/kg으로 투여하는 것이 좋다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수 있다. 따라서， 상기 투여 량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

<81>

<82> 또한 , 본 발명은 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B 화합물을 유효성분으로 함 유하는 암 예방 및 개선용 건강식품을 제공한다.

<83> 본 발명의 푸사리세틴 A또는 B화합물은 유방암 세포, 간암 세포 또는 골수 성 백혈병 세포와 같은 암세포들에 대하여 증식저해 및 전이저해 활성을 가지고 있 으므로， 상기 푸사리세틴 A또는 B 화합물을 항암용 건강식품의 유효성분으로 유용 하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

<84> 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식 품의 예로는 음료， 껌， 비타민 복합제 또는 건강보조식품 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

<85> 본 발명의 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당， 과당과 같은 모노사카라이드， 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드， 및 텍스트 린， 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드， 자일리를, 소르비를， 에리트리를 등 의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴， 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나， 사카린， 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화 물의 비율은 본 발명의 조성물 100 m당 일반적으로 약 0.01~0.04 g, 바람직하게는 약 0.02-0.03 g 이다.

<86> 그 외， 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제， 비타민， 전해질， 풍미제, 착색 제， 펙트산 및 그의 염， 알긴산 및 그의 염, 유기산， 보호성 콜로이드 증점제， pH 조절제， 안정화제， 방부제， 글리세린， 알콜， 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스， 과일쥬스 음료 및 야 채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명 의 조성물 100 중량부 당 0.01 ~ 0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이 다.

<87> 또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 암에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는， 암 치료방법을 제공 한다.

<88> 또한， 본 발명은 약학적으로 유효한 양의 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는， 암 예방방법을 제공한다.

<89> 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B 화합물은 유방암 세포, 간암 세포 또는 골수 성 백혈병 세포와 같은 암세포들에 대하여 증식저해 및 전이저해 활성을 가지고 있 으므로, 상기 푸사리세틴 A 또는 B 화합물은 암 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

<90>

<91> 또한, 본 발명은 암 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한， 상기 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

<92> 또한， 본 발명은 암 예방 및 개선용 건강식품으로 사용하기 위한, 상기 화합 물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다.

<93> 본 발명의 푸사리세틴 A 또는 B 화합물은 유방암 세포， 간암 세포 또는 골수 성 백혈병 세포와 같은 암세포들에 대하여 증식저해 및 전이저해 활성을 가지고 있 으므로， 상기 푸사리세틴 A 또는 B 화합물을 항암제 제조에 유효성분으로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다.

<94> 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식 품의 예로는 음료, 껌, 비타민 복합제 또는 건강보조식품 등이 있으며， 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

<95>

【유리한 효과】

<96> 본 발명의 신규 푸사리세틴 화합물은 다양한 암세포에 대한 우수한 증식저해 및 암세포 전이 저해 활성을 나타냄으로써， 상기 푸사리세틴 화합물을 항암제로서 유용하게 이용될 수 있다. <97>

【도면의 간단한 설명】

<98> 도 i은 본 발명에서 분리한 화합물 1과 2(푸사리세틴 A와 B)의 HPLC 크로마 토그램을 보여주는 그림이다.

<99> 도 2는 본 발명에서 분리한 화합물 1(푸사리세틴 A)의 NMR 스펙트럼

(400MHz, Acetone-i )을 보여주는 그림이다.

<ιοο> 도 3은 본 발명에서 분리한 화합물 1(푸사리세틴 A)의 ¹³C NMR 스펙트럼

(100MHz, Acetone-i )을 보여주는 그림이다.

<ιοι> 도 4는 본 발명에서 분리한 화합물 2(푸사리세틴 B)의 NMR 스펙트럼

(400MHz, Acetone-i )을 보여주는 그림이다.

<102> 도 5는 본 발명에서 분리한 화합물 2(푸사리세틴 B)의 ¹³C NMR 스펙트럼

(100MHz, Acetone-o9을 보여주는 그림이다.

<103> 도 6은 본 발명에서 분리한 푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326의 현미경 사진을 보여주는 그림이다.

<104> 도 7은 본 발명에서 분리한 화합물 1(푸사리세틴 A)의 암세포 증식억제능을 보여주는 그림이다.

<105> 도 8은 본 발명에서 분리한 화합물 2(푸사리세틴 B)의 암세포 증식억제능을 보여주는 그림이다.

<106> 도 9는 본 발명에서 분리한 화합물 1과 2(푸사리세틴 A와 B)의 암세포 전이 저해능을 보여주는 그림이다.

<107>

【발명의 실시를 위한 최선의 형태】

<108> 이하， 본 발명을 실시예， 실험예 및 제조예에 의해 상세히 설명한다.

<109> 단 하기 실시예， 실험예 및 제조예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명 의 내용이 하기 실시예， 실험예 및 제조예에 한정되는 것은 아니다.

<110>

<ιιι> <실시예 1>푸사리움 속 (Fusarium sp.) FN080326 균주의 분리

<ιΐ2> 본 균주는 2008년 3월 대전 인근의 토양시료로부터 분리하였다. 채집한 토 양시료는 채집 즉시 멸균된 플라스틱 백에 넣어, 실험에 사용하기까지 냉동보관하 였다. 토양시료는 멸균된 증류수를 이용하여 10배 회석하였다. 회석액 1 ml를 포 테이토 덱스트로스 아가 (potato dextrose agar) 배지에 도말하여 28^°C에서 5일간 배양하여 나타난 집락을 순수분리하였다.

<113>

<114> <실시예 2>균주의 동정 및 명명

<115> 본 균주의 표자에 대한 현미경 관찰 (도 6)과 rRNA서열 분석을 수행하였다.

상기 서열 분석 결과， 균주의 ITS, 26S 및 18S rRNA서열은 다음과 같이 나타났다:

<116> ITS (506 bp)

<117>

AACTTCTGAATGnGACCTCGGATCAGGTAGGAATACCCGCTGAAOTAA (서열번호 1 )

<118>

<119> 26S (563 bp)

<120> AMCCMCAGGGATTGCCCTAGTMCG( GAGTGMGCGGCMCAGCTCAMm

<121> GAGCCCCGTCTGG^GGATACCA TCTCTGTA GCTCOTCGACGAGTCGAGTAGmGGGAATGCTGC

CTGCAAGGATGCTGGCGTAATGGTCATCAACGAC (서열번호 2 )

<122>

<123> 18S (1675 bp)

<124>

CCCAGAGAGGTGG( MCTACCACTCAG n:GGA GCTCTC (서열번호 3 )

<125>

<i26> 상기 서열분석을 통하여 얻어진 염기서열의 GenBank 검색 결과, 푸사리움 옥 시스포룸 0 sar/iw oxysporum) ( DQ916150 ) 99%, 푸사리움 인카나툼 0 s /½?

99%의 상동성을 보였다. 이에 본 균주를 푸사리움 속으 로 동정하였고 이를 푸사리움 쏙 isarium sp.) FN080362로 명명하였으며, 2011년 7월 18일 한국생명공학연구원 미생물자원센터 (KCTC)에 기탁하였다 (수탁번호: KCTC11985BP).

<127>

<128> <실시예 3> 푸사리움 쏙 iFusariwn sp.) FN080326 균주의 배양

<129> 본 곰광이 균주를 배양하기 위하여， 통상적으로 미생물이 이용하는 영양원올 함유하는 배지를 준비하였다. 곰팡이 균주의 조배지 및 생산 배지로서 포테이토 덱스트로스 배지를 사용하였다.

<130> 상기 종배지 150 ml가 담긴 500 ml 용량의 삼각플라스크 두 개를 121^°C에서

20분간 멸균한 후, 푸사리움 ^U^usari sp.) FN080326 균주의 보관 플레이트로부 터 백금이 접종하여 3일간 진탕배양하여 종배양으로 하였다. 본배양을 위하여， 14 L 용량의 발효조 두 개에 각각 생산배지 8 L를 넣어 멸균한 후， 각각의 발효조에 종배양액 150 ml씩을 접종하여 28^°C, 교반속도 165 rpm, 공기주입량 10 L/min의 조 건으로 6일간 배양하였다.

<131>

<132> <실시예 4>푸사리움 속 FN080326 균주로부터 화합물의 분리 및 정제

<133> 상기 [실시예 3]에서 배양한 푸사리움 쏙 Fusariun] sp. ) FN080326 균주의 배 양액 (16 L)을 동량의 에틸아세테이트로 세 번 추출하고， 수득된 추출액을 감압건조 기를 이용하여 감압증발 방법으로 농축하였다. 이 농축액을 오디에스 알피 18에 흡착시켜 오디에스 알피 18 플래쉬 컬럼크로마토그래피 (ODS RP-18 flash column chromatography)를 실시하였으며， 이때 메탄올 /물 (1:9-10/0， v/v)을 흔합용매로 하 여 단계적으로 메탄을 농도를 증가시키면서 용출하였다. 이때 화합물 1과 2를 함 유한 활성분획은 80% 메탄올에서 용출하였다. 이런 활성분획을 감압농축한 후， 화 합물 1과 2를 함유한 분획을 고속액체크로마토그래피 (칼럼: RS tech Optima Pak C18, 길이 250画， 직경 10 mm)를 이용하여 용매로 48% 아세토나이트릴， 용출 유속 3 ml/min 조건으로 용출하여 203 및 254 nm의 UV 흡수 피크로 검출된 화합물 1(머 무름 시간 42분)과 화합물 2(머무름 시간 45분)를 각각 분리하였다 (도 1).

<134>

<135> <실시예 5> 푸사리움 속 FN080326 균주로부터 화합물의 구조 분석

<136> 상기 곰팡이 Fusarium sp. FN080326의 배양액으로부터 분리한 화합물 1과 2 는 ESI 질량분석기 (Electrospray Ionization mass spectrometer)를 사용하여 분자 량 및 분자식을 결정하였다. 또한， 핵자기공명 (NMR) 분석을 통하여 NMR, ¹³C NMR, COSYCCorrelat ion Spectroscopy) , HMQC(1H-Detected heteronuclear Multiple— Quantum Coherence) , HMBC(Het eronuc 1 ear Multiple— Bond Coherence) , DEPT(Distort ionless Enhancement by Polarization) , NOESY(Nuclear Overhauser effect spectroscopy) 스펙트럼을 얻고， 화합물의 분자구조를 결정하였다 (도 2， 도 3， 도 4 및 도 5).

<137> 상기 측정 결과， 도 2 내지 도 5에서 보는 바와 같이， 상기 푸사리움 속

{Fusarium sp.) FN080326 균주의 배양액으로부터 분리한 물질들은， 하기 화학식과 같은 6-6-5-5-5원 고리가 차례로 연결된 신규한 골격의 화합물들로 동정하였으며 각각 푸사리세틴 (Fusarisetin) A와 B (화합물 1， 2)로 명명하였다.

<138> 푸사리세틴 A와 B는 HRESIMS 분석과 NMR 분석을 통하여 , 분자량 389， 분자식 C₂₂H₃₁N0₅ 임을 확인하였으며， 동일한 분자량과 분자식을 가지는 화합물로 H 證의 결합상수값 및 N0ESY 결과로부터 화합물 1과 2는 5번 탄소의 입체 배위가 다른 이 성질체임을 확인하였다.

<139>

<140> [화학식 1]

<141> 푸사리세틴 Fusarisetin A) (화합물 1): 흰색 분말; [ a ]_D +84.6 (c 0.2，

MeOH)； UV(MeOH) A_max (log ε ) 208 (2.34), 282(2.36)； IR (neat) _max 3325,

2925， 1734， 1666, 1451， 1402， 1376, 1172, 1075 cm—¹; H, ¾ NMR 데이타는 하기 표 1에 나타내었음; HRESIMS mlz 412.2085 [M+Na]⁺ (calcd for C₂₂H₃₁N05Na, 412.2100).

<142>

<143> [화학식 2]

<i44> 푸사리세틴 B(Fusarisetin B) (화합물 2): 흰색 분말; [ a ]_D +84.9 (c 0.2，

MeOH); UV(MeOH) A_raax (log ε ) 208 (2.34), 281(3.18)； IR (neat) v_max 3325,

2925， 1734, 1666, 1451, 1402, 1376, 1172, 1075 cm^"1; H, ：¾ NMR 데이타는 하기 표 1에 나타내었음; HRESIMS mlz 412.2094 [M+Na]⁺ (calcd for C₂₂H₃₁N05Na, 412.2100)

<145>

<146> 【표 1】

<i47> 화합물 1과 2의 과 ¹³C NMR 데이터 (Acetone-i 중 측정)

<i48> 100MHz에서 측정 . 400MHz에서 측정 .

<149>

<150> <실험예 1> 본 발명의 푸사리세틴 화합물들의 암세포 증식저해 활성 측정

<i5i> 본 발명에서 도출한 화합물 1과 2의 암세포 증식저해 활성을 알아보기 위해, 다음과 같이 수행하였다.

<152> 인간 유방암 세포주 (MDA-MB-231 세포， 5.0xi0³ _Cells per well), 쥐 섬유아 세포주 (3Y1 세포， 5.0X10 cells per well), 인간 간암 세포주 (Hep3B, 5.0X10 eel Is per well)를 DMEM 배지 (Dulbeccos modification of Eagles medium, 10% 소 태아혈청 함유)에서 각각 배양하였다. 또한, 인간 만성골수성 백혈병 세포주 (K562 세포， 3.0xi0⁴ cells per well)와 인간 전골수성 백혈병 세포주 (HL— 60 세포, 1.0X

10⁵ cells per well)를 RPMI 1640(Roswell Park Memorial Institute 1640 배지 , 10% 소 태아혈청 함유)에서 각각 배양하였다. 각각 배양된 세포주들에 화합물 1과 2를 100 //g/ml , 30 /zg/ml, 10 /g/ml , 3

, 1 ig/ml의 농도로 각각 첨가하여 37^°C， 48시간, 5% C0₂ 배양기에서 배양한 후, 고감도 수용성 포르마잔 (formazan)을 생성하 는 WST-8시약 ( 2- ( 2-me t hoxy-4-η i t r opheny l)-3-(4-nitr opheny 1 ) -5- ( 2， 4- disul fophenyl )-2H-tetrazol ium, monosodium salt)을 첨가하여 24시간 동안 배양한 후， 450 nm의 흡광도로 측정하여 세포 생존율을 산출하였다.

<153> 그 결과， 도 7 및 도 8에서 보는 바와 같이， 본 발명에서 도출한 화합물 1의

MDA-MB-231 세포, 3Y1 세포， Hep3B 세포, K562 세포 및 HL-60 세포주들에 대한 50¾ 증식저해 농도인 IC₅₀ 값은 각각 69.5 μg/m\ , 67.5 g/ml, 34.7 /g/ml , 61.3 //g/ml 및 57.7 /g/ml의 농도로 나타났다. 또한， 화합물 2는 각각의 세포주에 대해 76.5 /g/ml , 62.2 /g/ml , 27.2 μg/m\ , 49.3 g/ml 및 29.4 //g/ml의 농도를 나타냈다 (도 7 및 도 8). 따라서， 본 발명의 화합물 1 및 2는 암 세포 증식 활성을 갖는 것을 알 수 있다.

<154>

<155> <실험예 2> 본 발명의 푸사리세틴 화합물들의 암세포 전이저해 활성 측정

<156> 암세포 전이 저해활성 실험은 트랜스웰챔버 (BioCoat™ Matrigel™ Invasion

Chamber , 유공 사이즈 8 μηι' BD Biosciences, Bedford, MA)를 이용하여 실시하였 다. 인간 유방암 세포 (MDA-MB-231 세포)는 챔버 상단에 1.0X10⁵ cells per well의 농도로 도포하였다. 사용한 배지는 DMEM 배지 (Dulbeccos modification of Eagles medium, 무혈청)를 사용하였으며 세포를 도포하고 30분 후에 챔버 상단에 화합물 1 과 2를 30 /zg/ml , 10 //g/ml , 3 //g/ml의 농도로 각각 첨가하였다. 30분 경과 후， 챔버 하단에 10% 농도로 소 태아혈청 (FBS)을 첨가하여 37^°C, 24시간 동안 5% C0₂ 배 양기에서 배양하였다. 24시간 경과된 시점에서 챔버 하단부의 10% 농도 소 태아혈 청으로 유도되어 다공막을 통해 전이된 세포를 100% MeOH로 고정한 후， 라이트 염 색시약 (Wright stain)으로 염색을 하였다. 염색 후 현미경을 이용하여 전이된 세 포수를 계산하였다.

<157> 그 결과, 도 9에서 인간 유방암 세포주 (MDA-MB-231 세포)의 100% 전이 저해 농도를 나타내는 ED₁₀₀은 각각 10 //g/ml의 농도로 나타났다 (도 9). 이 결과를 통해 화합물 1과 2는 10% 농도의 소 태아혈청 (FBS)으로 유도되어진 세포의 전이를 저해 하는 것으로 보아， 암세포 전이에 관여하는 인자군， 예를 들어 인테그린

(Integrin), 메트릭스 메탈로포로테아제 (Metrix metal loproteinases; MNPs), 헤파 란나제 (Heparanase), 섬유세포증식인자 (Fibroblast Growth Factor; FGF) 등을 저해 하는 것으로 예측되어 진다. 따라서, 본 발명의 화합물 1 및 2는 암세포에 대한 암 전이 억제 활성올 갖는 것을 알 수 있다.

<158>

<159> <제제예 1>산제의 제조

<160> 푸사리세틴 A 20 mg

<i6i> 유당 100 mg

<162> 탈크 10 mg

<163> 상기의 성분들을 흔합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다 .

<164>

<165> <제제예 2>정제의 제조

<166> 푸사리세틴 A 10 mg

<167> 옥수수전분 100 mg

<168> -π-¾- 100 mg

<169> 스테아린산 마그네슘 2 mg

<170> 상기의 성분들을 흔합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제 를 제조한다.

<171>

<172> 제제예 3>캡슐제의 제조

<173> 푸사리세틴 A 10 mg

<174> 결정성 셀를로오스 3 mg

<175> 락토오스 14.8 mg

<176> 마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

<177> 통상의 캡술제 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합하고 젤라틴 캡슐에 층전 하여 ¾슐제를 제조한다.

<178> <179> <제제예 4>주사제의 제조

<180> 푸사리세틴 B 10 mg

<181> 만니를 180 mg

<182> 주사용 멸균 증류수 2974 mg

<183> Na₂HP0₄.12H₂0 26 mg

<184> 통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당 상기의 성분 함량으로 제조 한다.

<185>

<186> <제제예 5> 액제의 제조

<187> 푸사리세틴 B 20 mg

<188> 이성화당 10 g

<189> 만니를 5 g

<190> 정제수 적량

<191> 통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 흔합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제 e

丁^" 가하여 전체 1001 로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜

다.

<192>

<193> <제제예 6> 건강 식품의 제조

<194> 푸사리세틴 A 1000 mg

<195> 비타민 흔합물 적량

<196> 비타민 A 아세테이트 70 β

<197> 비타민 E 1.0 rag

<198> 비타민 B1 0.13 rag

<199> 비타민 B2 0.15 mg

<200> 비타민 B6 0.5 mg

<201> 비타민 B12 0.2 /ig

<202> 비타민 C 10 mg

<203> 비오틴 10 iig

<204> 니코틴산아미드 1.7 mg

<205> 엽산 50 fig

<206> 판토텐산 칼슘 0.5 rag <207> 무기질 흔합물 적량

<208> 황산제 1철 1.75 rag

<209> 산화아연 0.82 rag

<210> 탄산마그네슴 25.3 mg

<211> 제 1인산칼륨 15 mg

<212> 제 2인산칼슘 55 rag

<213> 구연산칼륨 90 rag

<214> 탄산칼슘 100 rag

<215> 염화마그네슘 24.8 mg

<216> 상기의 비타민 및 미네랄 흔합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분 을 바람직한 실시예로 흔합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무 방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 과립을 제 조하고， 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

<217>

<218> <제제예 7> 건강 음료의 제조

<219> 푸사리세틴 B 1000 rag

<220> 구연산 1000 mg

<221> 을리고당 100 g

<222> 매실농축액 2 g

<223> 타우린 1 g

<224> 정제수 전체 900 1

<225> 통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 흔합한 다음， 약 1시간 동 안 85^°C에서 교반 가열한 후， 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2£ 용기에 취득하 여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

<226> 상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 흔합 조 성하였지만， 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적， 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

<227>

【산업상 이용가능성】

<228> 상기에서 보는 바와 같이 본 발명을 통해 푸사리움 속 (Fusarium sp. )

FN080326 균주를 이용하여 본 발명의 신규 푸사리세틴 화합물을 대량 생산할 수 있 으며， 본 발명의 신규 푸사리세틴 화합물을 이용하여 항암제 또는 항암용 건강식품 을 개발하는데 사용될 수 있다.

<229>

국쾌 *원번호

Pcr/KRaon/ooKwa 기빡된 미생물 a는 기타 ^물학적 물¾의 표시사항

(목히협력조약 규칙 제 13¾의2)

하기의 S시사항은 명세서 3 쪽, 11 *에 기계된 기락된 미생물 또는 기타 생 fi "학적 *질에 관한 ¾¾.

B. 기탁물의 쫙« 이의의 추가적 기탁물은 다움 별도회 봬이지에 기채 기학기 *의 명칭

한국생명 Ϋ학연구 Λ 유전자은행 (KCTC)

기빡기판꾀 주 i (우편번호 ¾ 국뼁 포함)

대한민국 0&«») 대전시 유성구 과학로 ¾국¾명 *학연구 «(KRIBB)

기팍일자 20XL07,W

c 추가꽥 «서사항 (기재사항이 ¾으¾ ^한으로 제출) 별도외 추가 째이지 계속

α 표시사 ¾이 지정하고 ¾는 지 ¾국<표시사항이 모 지정국율 위한 사항이 아년 정우)

Ε. »시사 *의 쁼도 제출 (기재사항이 fi으면 공¾으모 계출)

하기의 표시사향 * 후에 국제 에 제출될 것¾ (표시사항의 일반적 성질 * 록정 ¾· ¾)

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국제 서석 규칙 7.1에의 * 원기탁에 대한수탁중

TO： 안종석

대««국,대전시,유 과학 a 125, 305-806, 한국생명공학연구원

BP/4 식 (KCTC제 17형식)

Claims

【청구의 범위】

【청구항 11

하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염: [화학 1]

여기에서， Rl, R2, R3, R4, R5 및 R6는 각각 수소， 메틸, 에틸， 프로필， 이 소프로필, 부틸， 이소부틸, 아세틸， 벤질， 할로겐 원자， 수산기 또는 카르복실기를 가질 수 있으며， 모든 비대칭탄소에서의 이성질체를 포함한다.

【청구항 2]

제 1항에 있어서， 하기 화학식 2로 표시되는 푸사리세틴 (fusarisetin) A 화 합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염 :

[화학식 2]

【청구항 3]

제 1항에 있어서， 하기 화학식 3으로 표시되는 푸사리세틴 (fusarisetin) B 화합물 또는 약학적으로 허용 가능한 염: [화학식 3]

【청구항 4】

제 1항에 있어서， 상기 푸사리세틴 화합물은 곰팡이 푸사리움 속 Uusarium sp.) FN080326로부터 분리된 것을 특징으로 하는 화합물.

【청구항 5]

제 1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유 하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물.

【청구항 6】

제 5항에 있어서， 상기 암은 유방암， 간암 또는 골수성 백혈병인 것을 특징 으로 하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물.

【청구항 7】

제 1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 함유 하는 암 예방 및 개선용 건강식품.

【청구항 8】

제 7항에 있어서， 상기 암은 유방암, 간암 또는 골수성 백혈병인 것을 특징 으로 하는 암 예방 및 개선용 건강식품.

【청구항 9]

1) 푸사리움 쏙 {Fusarium sp.) FN080326 균주를 배양하는 단계; 및

2) 상기 1) 단계에서 얻어진 균주 배양물에서 푸사리세틴 화합물을 분리하는 단계를 포함하는， 제 1항의 푸사리세틴 화합물의 생산 방법.

【청구항 10】

수탁번호 KCTC11985BP로 기탁된， 제 1항의 화합물을 생산하는 푸사리움 속 {Fusarium sp.) FN080326 균주.

【청구항 111

약학적으로 유효한 양의 제 1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 암에 걸린 개체에 투여하는 단계를 포함하는， 암 치료방법.

【청구항 12]

약학적으로 유효한 양의 제 1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 암 예방방법.

【청구항 13]

암 예방 및 치료용 약학적 조성물로 사용하기 위한， 제 1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 .

【청구항 14]

암 예방 및 개선용 건강식품으로 사용하기 위한, 제 1항의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 .