WO2011059263A2 - 뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩타이드 및 이의 용도 - Google Patents
뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩타이드 및 이의 용도 Download PDFInfo
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Definitions
- Peptides targeting the apoptosis of the site of degenerative brain disease through the cerebrovascular barrier and its use more specifically comprising a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 as an active ingredient
- Composition for drug delivery to brain tissue composition for detecting apoptotic cells of degenerative neuropathy disease site and composition for imaging of degenerative neuropathy disease site, peptides and their associated degenerative neurological disease prevention / treatment and therapeutic diagnosis It relates to a composition.
- Apoptosis refers to a phenomenon in which an unnecessary cell or dangerous cell dies by itself to maintain the life of an individual.
- Apoptosis which means "fall off” in Greek, is the name given to the detachment of cell structures as the leaves fall off a flower in the process of cell death, first observed by Kerr et al. In 1972 (Kerr et al. , Br J Cancer, 1972, 26: 239—257).
- Apoptosis plays an important role in physiological phenomena such as cell development, differentiation and immunity (Meier et al., Nature, 2000, 407: 796-801).
- apoptosis is important in various pathological environments and diseases.
- Apoptosis is also common in diseases such as refractory autoimmune diseases, arteriosclerosis, and viral infections after organ transplantation (Thomson, Science, 1995, 267: 1456-). 1462; Kageyama et al., Ann Thorac Surg, 1998, 65: 1604-1609).
- Such apoptosis has a very important meaning in terms of clinical diagnosis and treatment.
- imaging of apoptosis can be performed by early diagnosis of degenerative neurological diseases (such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease) associated with its excessive increase, monitoring of disease progression, and monitoring of disease progression in myocardial infarction and stroke. This can be of great help in monitoring and determining the likelihood of rupture of atherosclerotic plaques in atherosclerosis.
- degenerative neurological diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease
- apoptosis-rich targets could significantly improve the therapeutic effect while reducing side effects.
- phosphatidyl serine Normally, phosphatidylserine is present inside the cell membrane but is exposed to the outside of the cell membrane when the cell receives a death signal or when erythrocytes age (Fadeel, B. et al., Cell Mol Life Sci, 2003, 60: 2575-2585).
- phosphatidylserines are recognized by macrophages through receptors on the cell surface, resulting in phagocytosis of dead cells (Fadok, VA et al., J iun unol 1992, 148: 2207-2216; Fadok, VA et al., Nature 2000, 405: 85-90; Park, SY et. Al., Cell Death Differ, 2008, 15: 192-201).
- many tumor cells exhibit increased expression of phosphatidylserine outside the cell membrane (Utsugi, T. et al., Cancer Res. 1991, 15: 3062-3066; Ran, S. et al., Cancer Res. 2002, 62: 6132-6140; Woehlecke, H.
- the dominant protein used to detect phosphatidylserine on the surface of killer cells is annexin V nnexin V), a 36 kDa molecular weight protein that binds phosphadidylserine as a strong affinity (Vermes). , I. et al., I'unol Methods. 1995, 184: 39-51).
- Annexin V is a very useful target substance or probe in vitro, but due to its large molecular weight, it may be delayed to be removed in vitro and due to problems such as nonspecific binding to normal cells. In vivo use has been reported to be limited (Vermeersch, H., et al. Nucl Med Coun. 2004, 25: 259-263; Belhocine, TZ et al., J Proteome Res. 2004, 3: 345) -349).
- the blood-brain barrier is a structure composed of tight junctions between the endothelial cells of the cerebrovascular and astrocytes that further strengthen the blood vessels. It passes through the brain and makes it easier to come out of the parenchyma. For this reason, many drugs developed for the treatment of brain diseases have a problem that the cerebrovascular barrier does not pass well. In addition, a substance that can detect or target apoptosis has a problem that the cerebrovascular barrier does not pass well.
- Tides with specific amino acid sequences on the other hand, have the ability to pass through cerebrovascular barriers and deliver drugs and siRNAs (Kumar et al., Nature. 2007, 448: 39-43; Teixido and Giralt, Journal of pep ide). science. 2008, 14: 163-173).
- therapeutic diagnosis is a compound word of therapy and diagnostics, which refers to a therapeutic technology that is integrated with diagnostic technology.
- the response to the treatment can be identified and applied to the selection of the treatment, which can greatly contribute to preventing misuse or abuse of the drug and enhancing the therapeutic effect.
- the present inventors have studied to search for a new protein or fragment thereof that effectively crosses the cerebrovascular barrier and specifically and initially targets apoptosis in degenerative neurodegenerative tissues.
- the present invention was completed by confirming that the peptide having a sequence can cross the cerebrovascular barrier and specifically target the dead cells of degenerative neuropathic tissue. It is therefore an object of the present invention to provide a peptide and its use for targeting apoptosis of a site of degenerative neurological disease through a cerebrovascular barrier.
- the present invention provides a composition for drug delivery to brain tissue comprising a peptide having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
- composition for detecting apoptotic cells (apoptotic cell) of the neurodegenerative disease region comprising the peptide of the present invention as an active ingredient.
- the present invention provides a composition for the prevention and treatment of degenerative cranial nerve disease comprising the peptide of the present invention and a therapeutic agent for degenerative brain neuropathy disease bound thereto.
- the present invention provides a composition for the diagnosis of acute neural neuropathy disease comprising a peptide of the present invention, a therapeutic agent for neurodegenerative diseases associated with it and a labeling substance as an active ingredient.
- the present invention provides a composition for imaging of the neurodegenerative disease region comprising the peptide of the present invention as an active ingredient.
- the present invention is a peptide of the present invention And it provides a drug delivery method to the brain tissue comprising administering a drug bound thereto in an effective amount to a subject in need thereof.
- the present invention provides the use of the peptide of the present invention and the drug bound thereto for the preparation of a drug delivery agent to brain tissue.
- the present invention provides a method for the treatment of a degenerative neurological disease site comprising administering an effective amount of a peptide of the present invention to an individual in need thereof and detecting the peptide.
- a method for detecting apoptotic cells is provided.
- the present invention provides a use of the peptide of the present invention for the preparation of an agent for detecting apoptotic cells of the site of degenerative neurological disease.
- the present invention provides a method for preventing neurodegenerative neurodegenerative diseases, comprising administering to a subject in need thereof a therapeutic agent for a neurodegenerative disorder associated with the peptide of the present invention and Provide a method of treatment.
- the present invention provides a peptide of the present invention and the use of a therapeutic agent for the treatment of degenerative cerebral neuropathy in combination with the present invention for the prevention and treatment of neurodegenerative diseases.
- the present invention provides a neurodegenerative neuron comprising administering an effective amount of a peptide of the present invention, a therapeutic agent for neurodegenerative neurological disease and a labeling substance thereof, to a subject in need thereof. It provides a method for diagnosing a disease.
- the present invention provides a peptide of the present invention, a therapeutic agent for the treatment of degenerative brain neuropathy and a label thereof in combination with the present invention for the preparation of a diagnostic agent for the treatment of degenerative neurological disease.
- the present invention provides a neurodegenerative disorder comprising administering the peptide of the present invention to an individual in need thereof in an effective amount, and detecting and imaging the peptide.
- a neurodegenerative disorder comprising administering the peptide of the present invention to an individual in need thereof in an effective amount, and detecting and imaging the peptide.
- the present invention provides a use of the peptide of the present invention for the preparation of an imaging agent for the site of degenerative neurological disease.
- the present invention may be carried out simultaneously with a therapeutic agent or It provides a method of monitoring the effect of a therapeutic agent comprising the step of administering an effective amount of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a labeling substance bound thereto to an individual, and detecting and imaging the peptide.
- the present invention provides a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the preparation of a therapeutic agent for monitoring the effect of a therapeutic agent and the use of a labeling substance bound thereto.
- Drug delivery composition Provides a composition for detecting apoptotic cells of the site of degenerative neurological disease and a composition for imaging of the site of the neurodegenerative neuropathy disease, comprising the peptide and a therapeutic agent for the degenerative neuron disease associated with it It is characterized by providing a composition for the prevention / treatment of diseases and the diagnosis of treatment.
- the peptide of the present invention is a dead cell targeting peptide (amino acid sequence CQRPPR, also known as ApoPep-1), which specifically binds to apoptotic cells in which apoptosis is progressing.
- Peptides of the present invention may have an amino acid sequence of SEQ ID NO: l (CQRPPR), including all kinds of peptides, proteins, peptide replicas, compounds and biologics, activity that can specifically bind to dead cells Say that having.
- Peptides of the invention may be derived from nature, and may be synthesized using known peptide synthesis methods.
- the peptide of the present invention has been selected to specifically bind to apoptotic cells, and binds to the cells by specifically recognizing tumor cells, normal epithelial cells and macrophages in culture during apoptosis.
- the peptide of the present invention can target and kill in vivo tumor cells in vivo (in vivo imaging) and monitoring, it is also possible to deliver the drug to the target disease site.
- the peptide of the present invention passes through a blood-brain barrier (BBB). It can be easily broken into brain tissue, more specifically brain parenchyma, nerve cells or nerve tissue in the brain. Therefore, the peptide of the present invention can specifically bind to apoptotic cells undergoing apoptosis in brain tissue -can deliver drugs to the apoptotic cells.
- BBB blood-brain barrier
- the present invention provides a composition for drug delivery to brain tissue comprising a peptide having an amino acid represented by SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
- the present invention provides a drug delivery method to the brain tissue comprising the step of administering an effective amount of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a drug bound thereto to an individual in need thereof.
- the present invention also provides a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the preparation of a drug delivery agent to brain tissue and the use of a drug bound thereto.
- the peptides of the present invention may be used in the form of covalent or non-covalent bonds with themselves or with other drugs.
- the term 'effective amount' means that the composition or agent of the present invention is to be administered. Refers to an amount that is effective in delivering a drug or preventing or treating apoptotic related diseases in an individual.
- 'subject' may be an animal, preferably a mammal, especially an animal including a human, and may be a cell, tissue, organ or the like derived from the animal.
- the subject may be a patient in need of treatment.
- the present inventors conducted various experiments to confirm the function of the peptide selected as specifically binding to apoptosis cells, the peptide of the present invention can cross the cerebrovascular barrier and degenerative brain neuropathy
- the specific recognition of apoptosis cells in the process of apoptosis in tissue (or region) confirmed that they bind to the cells.
- the peptide of the present invention targets apoptosis cells in degenerative neuropathy tissue and enables in vivo imaging and monitoring thereof. Therefore, the peptide of the present invention can be used to deliver drugs to the site of neurodegenerative neuropathy disease, detect and image dead cells in the neurodegenerative neurodegenerative tissue, image it, diagnose or diagnose therapies, or separate therapeutic agents.
- Alzheimer's disease model mice overexpressing APP / PS1 protein after intravenous injection of a peptide having an amino acid sequence of CQRPPR represented by SEQ ID NO: 1 labeling a near-infrared fluorescent reagent.
- a peptide having an amino acid sequence of CQRPPR represented by SEQ ID NO: 1 labeling a near-infrared fluorescent reagent was identified.
- the control peptide was intravenously injected to Alzheimer's disease mice or the peptide of the present invention was injected to normal mice, it was found that fluorescence was hardly observed. Brain tissues were isolated and fluorescence was observed to confirm similar results.
- frozen sections of the isolated Alzheimer's disease brain tissue were prepared by immunofluorescence staining, and the positions of the peptides of the present invention were examined under a microscope.
- the antibody-stained caspase-3 which is one of apoptosis biomarkers
- the peptide of the present invention are at the same position. That is, it was confirmed that the peptide of the present invention binds to dead cells in brain tissue.
- the peptide of the present invention was located in the brain parenchyma outside the blood vessels. It confirmed that it passed.
- the peptide is targeted to Parkinson's brain tissue, and the imaging is performed in vivo. Check if it can be done. As a result, strong near infrared fluorescence was observed in the brain region of Parkinson's disease mice. On the other hand, when the control peptide was injected intravenously into the Parkinson's disease mouse or the peptide of the present invention was injected into the normal mouse, almost no fluorescence was observed. Brain tissues were isolated and observed for fluorescence to confirm similar results.
- the peptide of the present invention crosses the cerebrovascular barrier and specifically binds to apoptosis cells in brain tissue, thereby recognizing and targeting apoptosis of degenerative neuropathy disease in vivo.
- the peptide of the present invention can be used for identification, tracking, quantification, It may be labeled with a labeling material for imaging. That is, the peptide of the present invention may be provided by being linked (eg covalently bonded or crosslinked) to a detectable label.
- detectable labels include chromases (eg peroxidase, alkaline phosphatase), radioisotopes (eg
- I, P, S chromophores, luminescent or fluorescent materials (e.g. FITC, RITC, fluorescent proteins (Green Fluorescent Protein); Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP), Red Fluorescent Protein (RFP) DsRed (Discosoma sp. Red fluorescent protein); CFP (Cyan Fluorescent Protein), CGFP (Cyan Green Fluorescent Protein), YFP (Yellow Fluorescent Protein), Cy3, Cy5 and Cy7.5), super paramagnetic particles or It may be ultrasuper paramagnetic particles.
- fluorescent proteins Green Fluorescent Protein
- EGFP Enhanced Green Fluorescent Protein
- RFP Red Fluorescent Protein
- DsRed Discosoma sp. Red fluorescent protein
- CFP Cyan Fluorescent Protein
- CGFP Cyan Green Fluorescent Protein
- YFP Yellow Fluorescent Protein
- Cy3, Cy5 and Cy7.5 super paramagnetic particles or It may be ultrasuper paramagnetic particles.
- Detection methods according to labels are well known in the art, but can be performed, for example, by the following method.
- fluorescent material is used as a detectable label
- immunofluorescence staining may be used.
- the peptide of the present invention labeled with a fluorescent material may be reacted with a sample, and unbound or nonspecific binding products may be removed, and then fluorescence by the peptide may be observed under a fluorescence microscope.
- the absorbance may be measured by the color reaction of the substrate through enzyme reaction, and in the case of the radioactive substance, the emission amount may be measured.
- the detected result may be imaged according to a known imaging method according to a detection label.
- the composition for drug delivery of the present invention is Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, which are diseases related to apoptosis in brain or brain tissue. , May be specific to Amyotrophic lateral sclerosis, Nieman-Pick disease, or stroke.
- the neurological diseases of the present invention may be Alzheimer's disease, Parkinson's disease, Huntington's disease, Amyotrophic lateral sclerosis, Nienian—Pick disease or stroke. That is, the composition of the present invention can specifically identify, track, quantify, image, or deliver the bound drug by binding specifically to a neurological disorder site such as Alzheimer's disease or Parkinson's disease.
- the present invention provides a composition for detecting apoptotic cells of a degenerative brain neurological disease site comprising a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
- the present invention provides an apoptotic cell of a degenerative brain neuron disease site comprising administering an effective amount of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to an individual in need thereof and detecting the peptide.
- the present invention also provides the use of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the preparation of an agent for detecting apoptotic cells of the site of degenerative neurological disease.
- the present invention provides a composition for drug delivery for treating degenerative planetary neuropathy disease comprising the peptide of the present invention as an active ingredient.
- the agent is selectively delivered only to dead cells by the peptide of the present invention. This can increase the efficacy of the drug and at the same time significantly reduce the adverse effects on normal cells.
- the present invention provides a composition for the prevention and treatment of neurodegenerative neurodegenerative diseases comprising the peptide of the present invention having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a therapeutic agent for degenerative neurological disease associated with it.
- the present invention provides a method for preventing and treating neurodegenerative neurodegenerative diseases comprising the step of administering to a subject in need thereof a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a therapeutic agent for neurodegenerative diseases associated with it. do.
- the present invention provides a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the preparation of a therapeutic agent for the prevention and treatment of degenerative neurological disease and the use of a therapeutic agent for the degenerative neurological disease in combination with it.
- the present invention provides a peptide comprising an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a degenerative neurodegenerative disease associated with it and a labeling substance as an active ingredient
- a composition for therapeutic diagnosis of planetary neurological diseases provides a therapeutic diagnosis of degenerative brain neuropathy disease comprising the step of administering a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1, a therapeutic agent for the degenerative brain neuron disease associated with it and a labeling substance in an effective amount to an individual in need thereof.
- the present invention provides a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the preparation of a diagnostic agent for the treatment of degenerative planetary neuropathy diseases, the use of a therapeutic agent and a labeling substance combined with it.
- the agent for treating neurodegenerative neurodegenerative diseases which may be linked to the peptide of the present invention may be used without limitation as long as it is conventionally used for the treatment of these diseases.
- NMDA N-methyl-d-aspartate
- acetylcholine esterase inhibitors acetylcholine esterase inhibitors
- anti-amyloid protein agents and the like that are neuroprotective agents, such as donepezil, galantamine, taglin, and meman. Tin, and the like.
- Linking of the agent and the peptide of the present invention may be carried out through methods known in the art, such as covalent bonds and crosslinking.
- the peptides of the present invention can be chemically modified if necessary to the extent that their activity is not lost.
- the amount of the peptide of the present invention included in the composition of the present invention may vary depending on the type and amount of the therapeutic agent bound thereto.
- the composition of the present invention may be a pharmaceutical composition wherein the pharmaceutical composition according to the present invention is suitable in pure form or in a pharmaceutically acceptable carrier of the peptide, drug or medicament, label or combinations thereof.
- a pharmaceutically acceptable carrier of the peptide, drug or medicament, label or combinations thereof.
- Such carriers include all kinds of solvents, dispersion media, oil-in-water or water-in-oil emulsions, aqueous compositions, liposomes, microbeads and microsomes, biodegradable nanoparticles, and the like.
- it may comprise 0.001-99, 999% by weight of the pharmaceutical composition according to the invention and 99.999—0.02% by weight of the pharmaceutically acceptable carrier.
- the composition of the present invention may include the amount of 3 ⁇ 4 tide 0.0000 W to 20 weight 3 ⁇ 4 of the present invention and the pharmaceutically acceptable carrier, that is, 80 to 99.99999% by weight.
- the composition of the present invention is 0.0000W to 20% by weight of the peptide of the present invention, for example, 0.00001% to 20% by weight of a drug such as a therapeutic agent for degenerative cranial neuropathy and a pharmaceutically acceptable carrier balance, that is, 60 to 99.99998% by weight It may include.
- the composition of the present invention may further include a labeling material of 0.00001% to 20% by weight (in this case, the content of the carrier is reduced). All.
- the pharmaceutical composition according to the present invention can be formulated with a suitable carrier depending on the route of administration.
- the route of administration of the pharmaceutical composition according to the present invention is not limited thereto, but may be administered orally or parenterally.
- Parenteral routes of administration include, for example, transdermal, nasal, abdominal, muscle, subcutaneous or intravenous routes.
- the pharmaceutical composition of the present invention may be powder, granule, tablet, pill, dragee, capsule, It may be formulated in the form of liquids, gel syrups, suspensions, wafers and the like.
- suitable carriers include sugars and corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, and the like, including lactose, dextrose, sucrose, sorbetle, manny, xylly, erythritol, malty, and the like.
- Fillers such as cellulose, gelatin, polyvinylpyridone, and the like, including starch, cellulose, methyl cellulose, sodium carboxymethyl 3 ⁇ 4 cellulose, hydroxypropylmethyl- cellulose and the like.
- crosslinked polyvinylpyridone, agar, alginic acid or sodium alginate may be added as a disintegrating agent.
- the pharmaceutical composition may further include an anticoagulant, a lubricant, a humectant, a perfume, an emulsifier, and a preservative.
- compositions of the present invention may be formulated according to methods known in the art in the form of injections, transdermal and nasal inhalants together with suitable parenteral carriers.
- suitable parenteral carriers include, but are not limited to, water, ethanol, poly (e.g., glycerol propylene glycol and liquid polyethylene glycol, etc.), their mixtures and / or solvents comprising vegetable oils, or It may be a dispersion medium.
- suitable carriers include Hanks' solution, Ringer's solution, phosphate buffered saline (PBS) containing triethanol amine or sterile water for injection, 10% ethane, 40% propylene glycol and 5% dextrose. Solutions and the like can be used. In order to protect the injection from microbial contamination, it may further include various antibacterial and antifungal agents such as parabens, chlorobutane, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like. Injectables may also in most cases further comprise isotonic agents, such as sugars or sodium chloride. These two formulations are described in Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edit ion, 1975, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania.
- the compounds used according to the invention may be pressurized packs using suitable propellants, for example dichlorofluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas. Or it can be conveniently delivered in the form of aerosol spray from the nebulizer.
- the dosage unit can be determined by providing a valve to deliver a metered amount.
- gelatin capsules and cartridges for use in inhalers or blowers can be formulated to contain a mixture of the compound and a suitable powder base such as lactose or starch.
- compositions according to the invention may contain one or more buffers (eg saline or PBS), carbohydrates (eg glucose, mannose, sucrose or texran), stabilizers (Sodium bisulfite, sodium sulfite or ascorbic acid) antioxidants, bacteriostatic agents, chelating agents (e.g. EDTA or glutathione), adjuvants (e.g. aluminum hydroxide), suspending agents, thickening agents and / or Preservatives (benzalkonium chloride, methyl- or propyl-paraben and chlorobutanol) may be further included.
- buffers eg saline or PBS
- carbohydrates eg glucose, mannose, sucrose or texran
- stabilizers Sodium bisulfite, sodium sulfite or ascorbic acid
- bacteriostatic agents e.g. EDTA or glutathione
- adjuvants e.g. aluminum hydroxide
- suspending agents e.g. aluminum hydroxide
- compositions of the present invention may be formulated using methods known in the art to provide rapid, sustained or delayed release of the active ingredient after administration to a mammal.
- compositions formulated in such a manner may be administered in an effective amount via a variety of routes including oral dermal, subcutaneous, intravenous or intramuscular.
- the term 'effective amount' refers to an amount of a compound or extract that enables the tracking of a diagnostic or therapeutic effect when administered to a patient.
- the dosage of the pharmaceutical composition according to the present invention may be appropriately selected depending on the route of administration, the subject to be administered, the target disease and its severity, age, sex weight, individual difference and disease state.
- the pharmaceutical composition comprising the peptide of the present invention may vary the content of the active ingredient according to the extent of the disease, but usually an effective dose of 10 I to 10 m at a single dose based on an adult May be repeated several times a day. ⁇ 96>
- the present invention provides a composition for imaging degenerative neurological disease site comprising a peptide having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.
- the present invention provides a method of imaging a neurodegenerative disease site comprising administering an effective amount of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 to an individual in need thereof and detecting and imaging the peptide. to provide.
- the present invention also provides the use of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 for the preparation of an agent for imaging of a neurodegenerative disease site.
- imaging and diagnosis using neurodegenerative neurodegenerative diseases including but not limited to, the purpose of the initial diagnosis of degenerative neurodegenerative diseases, progress, treatment progress for the treatment of degenerative neurodegenerative diseases, monitoring reactions to therapeutic agents, etc. Can be used comprehensively.
- composition of the present invention can also be used for the purpose of therapeutic diagnosis (theranosis, theragnost ics, theranostics).
- the present invention provides a method of simultaneously or sequentially treating a therapeutic agent with a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a labeling substance bound thereto, and detecting and imaging the template. It provides a method for monitoring the effect of a therapeutic agent comprising. -
- the present invention also provides the use of a peptide having an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 and a labeling substance bound thereto for the preparation of an agent for monitoring the effect of a therapeutic agent.
- the therapeutic agent may be a therapeutic agent for degenerative cranial nerve disease, which may be simultaneously or sequentially with the peptide of the present invention covalently or non-covalently bound to a label. May be administered.
- the sequential administration refers to the administration of the therapeutic agent and the peptide of the present invention and the labeling substance bound thereto at regular intervals, and the order of administration is irrelevant.
- the peptide having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 of the present invention may cross the cerebrovascular barrier, and may specifically bind to apoptosis in degenerative neurological disease tissue. Therefore, the peptides of the present invention can be used for the purpose of detection of apoptosis in neurodegenerative neurodegenerative diseases, furthermore, detection of apoptosis cells (especially death neurons) in tissues of degenerative neurodegenerative diseases, imaging, target drug delivery, and therapeutic diagnosis. Can be used.
- FIG. 2 shows two hours after intravenous injection of a peptide of SEQ ID No. 1 (ApoPep-1) labeled with Cy7.5 near fluorescence in an Alzheimer's disease mouse (5, 7, 9 and 13 month old) model.
- N Near-infrared
- B near-IR image
- FIG 3 shows immunofluorescence staining of brain tissue of Alzheimer's disease mice.
- the antibody was stained (red) with the peptide of SEQ ID NO. 1 labeled with FITC fluorescence (green) and Caspase-3, a biomarker of apoptosis (a).
- antibody staining (red) for ⁇ ⁇ SMA, a blood vessel staining method in brain tissue was performed (b). Arrows indicate where the peptide and each antibody stain match.
- Figure 4 is a two-hour intravenous injection of a Cy7.5 near-infrared fluorescence-labeled peptide of SEQ ID NO: 1 (ApoPep-1) into a Parkinson's disease mouse model (a), each of which photographs near-infrared (A) The brain is isolated and taken near-infrared (b).
- Parkinson's disease mice were injected with the control peptide and the peptide of SEQ ID NO: 1 in normal mice were taken under the same conditions.
- the peptide of SEQ ID NO: 1 was injected and photographed in the same manner as in (a) (c).
- FIG. 5 shows immunohistophotostaining of brain tissue from Parkinson's disease-induced mice treated with MPTP control and TUNEL staining as a biomarker of peptide (green) and apoptosis with SEQ ID No. 1 labeled with FITC fluorescence. Red). Arrows show where the peptide and TUNEL staining match. DAPI staining (blue) represents the cell nucleus.
- Figure 6 is a control group, Parkinson's disease mice induced by MPTP treatment and Parkinson's disease mice administered Parkin's disease treatment agent amantadine (amantadine) injected 3 ⁇ 4 tide of SEQ ID NO: 1 and photographed in the same manner as in FIG. will be.
- amantadine amantadine
- FIG. 7 shows tyrosine hydride, a marker specific for dopaminergic neurons, by immunofluorescence staining of brain tissue of a control group, MPTP-induced Parkinson's disease mice and Parkinson's disease-treated mice treated with Amantadine.
- Antibody staining red color
- tyrosine hydroxylase a
- FITC fluorescence labeled SEQ ID NO: 1 green
- apoptosis biomarker TUNEL staining red color
- d quantified by the numerical value
- * Denotes statistical significance ( ⁇ .01) and n denotes the number of animals. Arrows show where the peptide and TUNEL staining match.
- DAPI staining blue indicates the cell nucleus.
- AM amantadine
- Alzheimer's disease is associated with amyloid precursor protein (APP).
- a transgenic mouse model overexpressing the former and presenilin (PS1) genes was used.
- the model is a model animal characterized by a gradual increase in neuronal death with the extracellular deposition of beta amyloid protein, which is characteristic of Alzheimer's disease, with age.
- mice were studied in 13-month-old mice, which were stages of symptoms, according to the disease progression.
- Apoptosis was confirmed by TUNEL ' n vitro terminal deoxynucleot idyl transferase s mediated dUTP nick-end labeling assay according to the instructions of the manufacturer (Roche).
- This method uses a terminal deoxynucleot idyl transferase enzyme to label biotin-dUTP at the end of a cut piece of DNA that is specific to apoptosis, followed by fluorescence staining with streptavidin-rhodamine (red fluorescent reagent).
- the peptide of the present invention labeled with Cyg 5 near infrared linear light was subjected to isoflurane anesthesia in the Alzheimer's disease mouse (5, 7, 9, 13 months old) model. Two hours after intravenous injection to 50 concentrations, the near-infrared of the head region was photographed, and each brain was isolated and the near-infrared was photographed. In vivo near infrared fluorescence images were taken using an Optix exPlore instrument (ART). In addition, each image was standardized using the software of the device itself.
- Peptides used in the present invention were synthesized according to standard Fmoc method and separated by HPLC instrument. The synthesis of peptides was performed by specialty companies (Peptron and Anygen). Peptides were synthesized in the form of fluorescein isothiacyanate (FITC) bound to the N-terminus, or the Cy7.5 near-infrared fluorescent reagent was coupled to the N-terminus after synthesis.
- FITC fluorescein isothiacyanate
- Example ⁇ 1-1> 4% para-isolated brain tissue was isolated from the mice injected with the peptide of the present invention (13 months old) labeled with FITC fluorescence (green) in Example ⁇ 1-1>. After fixation with formaldehyde solution, the solution was immersed in Sucrose / phosphate complete solution for 24 hours and cryostat was used to prepare 30-thick frozen slices. Immunofluorescence staining for the antibody was performed using a secondary antibody labeled with Alexa 568, a red fluorescent reagent. Each tissue slide was observed by fluorescence microscopy (Zeiss).
- the peptide of the present invention passes through the cerebrovascular brain outside the blood vessels It was observed that the distribution within.
- Parkinson's disease model uses drugs to detect dopaminergic neurons in the cortical areas of the brain. Induced using a specifically disruptive method.
- MPTP (1-methy 1-4-pheny 1 -1, 2,3) was administered at a dose of 15 nig / kg per animal in 21-23 gram C57BL male mice (Cortech Co., Ltd.).
- 6-t et rahydro pyridine hydrochloride (Sigma) was administered.
- MPTP administration was performed by intraperitoneal injection 4 times at 2 hour intervals, and a total of 60 mg / kg MPTP was administered per animal.
- mice were anesthetized immediately and subjected to eye lacsa to obtain brain tissue samples. Euthanized mice immediately removed blood through physiological saline perfusion through the heart and perfusion again with 4% paraformaldehyde solution to perform primary fixation. After the first fixed brains were taken from the mice, they were placed in 30% sucrose / phosphate buffer solution for 1 day and then fixed in 4% paraformaldehyde phosphate buffer solution for 1 day. After fixation, the brain tissues were rapidly cooled with dry ice, and then made into blocks for making ear copper slices.
- amantadine which is used as a treatment for Parkinson's disease
- amantadine was intraperitoneally administered 7 times at a dose of 25 mg / kg / day and 30 days after MPTP administration as described above.
- the peptide of the present invention was labeled with Cy7.5 on the 7th day after the amantadine administration, and imaging and tissue staining were performed in the same manner as described above. Apoptosis was analyzed in the same manner as in Example ⁇ 1-1>.
- each of the brain is isolated and in the near-infrared fluorescence measurement in vitro showed similar results to the biological image.
- the peptide of the present invention (green fluorescence) and apoptosis bio Marker TUNEL staining (red fluorescence) was confirmed to be stained at the same time in the same cells. This indicates that the peptide of the present invention is targeted to dead cells.
- FIG. 7A when amantadine was administered together with MPTP after administration of MPTP, antibody staining for tyrosine hydroxylase (TH), a marker specific for dopaminergic neurons, was increased. It became.
- FIG. 7B is a quantification of the number of TH-stained dopaminergic neurons in FIG. 7A, and shows that the number of neurons increases statistically significantly ( ⁇ .01) as a therapeutic effect by drugs.
- the peptide having the amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 of the present invention can cross the cerebrovascular barrier, but can specifically bind to apoptosis in degenerative neurological disease tissue. Accordingly, the peptides of the present invention can be used for the purpose of detecting apoptosis in neurodegenerative neurodegenerative diseases, furthermore for the detection of apoptosis cells (especially death neurons) in tissues of degenerative brain neuropathy, imaging, target drug delivery, and therapeutic diagnosis. Can be used.
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Abstract
뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌 질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩타이드 및 이의 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 뇌 조직으로의 약물전달용 조성물, 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포(apoptotic cell) 검출용 조성물 및 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화용 조성물 및 상기 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경 질환 예방/치료 및 치료진단용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 서열번호1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드는 뇌혈관 장벽을 통과할 수 있으며, 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포와 특이적으로 결합할 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩타이드는 퇴행성 뇌신경질환에서 아포토시스의 검출, 더 나아가 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포 (특히, 사멸신경세포)의 검출과 영상진단, 표적 약물전달, 치료진단 등의 목적으로 다양하게 사용될 수 있다.
Description
【명세서】
【발명의 명칭】
뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩 타이드 및 이의 용도
【기술분야】
<ι> 본 출원은 2009년 11월 13일 출원된 대한민국 특허출원 제 10-2009-0109946호 를 우선권으로 주장하고， 상기 명세서 전체는 본 발명의 참고문헌이다.
<2>
<3> 뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌 질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩타이 드 및 이의 용도에 관한 것으로， 보다 상세하게는 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 뇌 조직으로의 약물전달용 조성 물, 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 조성물 및 퇴행 성 뇌신경질환 부위의 영상화용 조성물 및 상기 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경 질환 예방 /치료 및 치료진단용 조성물에 관한 것이다.
【배경기술】
<4> 아포토시스란 개체의 생명 유지를 위해서 불필요한 세포 혹은 위험한 세포를 스스로 죽게 하도록 하는 현상을 말한다. 아포토시스는 그리스어로 "떨어져 나간 다" 를 뜻하며 세포가 죽어 가는 과정에서 마치 꽃에서 잎들이 떨어지듯이 세포의 구조물들이 떨어져 나가는 것을 표현하여 붙여진 이름으로, 1972년 Kerr 등에 의해 처음으로 관찰되었다 (Kerr et al., Br J Cancer , 1972, 26:239—257). 아포토시스는 세포의 발생， 분화， 면역 등의 생리학적 현상에 증요한 역할을 한다 (Meier et al., Nature, 2000, 407:796-801). 한편， 여러 가지 병리학적 환경 및 질환에서도 아포 토시스는 증요하다. 예를 들어, 알츠하이머 병 및 파킨슨 병 등 퇴행성 뇌신경질환 에서 베타 아밀로이드 등의 축적으로 신경세포가 손상을 받아 아포토시스 발생이 증가한다 (Thomson, Science, 1995). 또 다른 예로， 항암제로 성공적 치료를 하는 경우 다량의 아포토시스가 종양조직 내 발생한다 (Thomson, Science, 1995, 267:1456-1462). 반면， 종양의 발생에는 아포토시스의 감소가 원인으로 관여한다. 또한 뇌졸중 및 심근경색에서 뇌 및 심장으로 가는 혈액 공급의 부족으로 뇌세포 및 심근세포가 각각 손상을 받아 아포토시스가 발생한다 (Du et al, J Cereb Blood Flow Metab, 1996, 16:195—201; Narula et al. , New Engl J Med, 1996, 335:1182- 1189). 또한 장기 이식 후 거부반웅 자가면역질환, 동맥경화 및 바이러스 감염 등 의 질환에서도 아포토시스가 흔히 발생한다 (Thomson, Science, 1995, 267 :1456-
1462； Kageyama et al., Ann Thorac Surg, 1998, 65:1604—1609).
<5>
<6> 이러한 아포토시스는 임상적으로 진단 및 치료적 측면에서 매우 증요한 의미 를 가진다. 즉 , 아포토시스의 영상화는 이의 과도한 증가와 연관된 퇴행성 뇌신경 질환 (알츠하이머 병 및 파킨슨 병 등)의 조기 진단 및 병의 진행 정도 모니터링， 심근경색 및 뇌졸중에서 병의 진행 정도 모니터링 항암제 처리에 의한 암 치료효 과 모니터링, 동맥경화에서 동맥경화반의 파열 가능성 판단 등의 경우에 매우 큰 도움이 될 것이다. 또한 아포토시스가 왕성한 부위에 이를 표적으로 치료제나 세포 를 보호하는 제제를 선택적으로 전달하게 되면 부작용을 줄이면서 치료효과를 훨씬 높일 수 있을 것이다.
<7>
<8> 사멸세포에서 일어나는 초기 사건의 하나는 세포막을 구성하는 인지질
(phospholipid)의 분포 변화이다. 이 중 가장 특징적인 것으로 포스파티딜세린 (phosphatidyl serine)의 세포막 바깥쪽으로의 노출이다. 정상적으로 포스파티딜세 린은 세포막의 내부에 존재하나 세포가 사멸신호를 받거나 적혈구가 노화되면 세포 막의 외부로 노출된다 (Fadeel, B. et al., Cell Mol Life Sci, 2003, 60:2575- 2585) . 이러한 포스파티딜세린을 대식세포가 세포표면의 수용체를 통해서 인식하여 사멸세포에 대한 탐식작용을 일으킨다 (Fadok, V.A. et al., J i隱 unol 1992， 148:2207-2216; Fadok, V. A. et al . , Nature 2000， 405:85-90; Park, S.Y. et . al. , Cell Death Differ, 2008, 15:192-201). 특히， 많은 종양세포들이 세포막의 외부로 포스파티딜세린의 발현 증가를 나타낸다 (Utsugi, T. et al. , Cancer Res. 1991， 15:3062-3066; Ran, S. et al., Cancer Res. 2002, 62:6132-6140; Woehlecke, H. et al., Biochem J. 2003, 376:489-495). 또한 종양조직 내 소혈관 의 혈관내피세포는 포스파티딜세린을 세포막의 외부로 노출하고 있다 (Ran, S. et al., Cancer Res. 2002， 62:6132-6140; Zwaal, R.F.A. et al. , Blood. 1997， 89:1121-1132). 따라서, 이러한 포스파티딜세린의 역할들로 인해 특히 종양을 비롯 한 여러 상황에서 포스파티딜세린은 진단 치료, 및 치료추적을 위한 표적 물질로 제시되고 있다.
<9>
<10> 현재 사멸세포 표면의 포스파티딜세린을 검출하는데 주로 사용되는 것은 아 넥신 V nnexin V) 단백질이다, 이는 분자량 36 kDa 짜리 단백질로서 포스파디딜세 린과 강한 친화도 (affinity)로서 결합한다 (Vermes, I. et al., I画 unol Methods.
1995, 184:39-51). 한편, 아넥신 V는 시험관 (in vitro) 내에서는 아주 유용한 표적 물질 또는 프로브 (probe)이나， 큰 분자량 때문에 체외로의 제거가 늦게 되는 문제 및 정상세포에 대한 비특이적 결합 등의 문제로 인해 생체 (in vivo) 내 사용은 제 한적이라 보고되었다 (Vermeersch, H. , et al.ᅳ Nucl Med Co隱 un. 2004, 25 :259- 263； Belhocine, T.Z. et al., J Proteome Res. 2004， 3:345-349).
<11>
<12> 한편， 알츠하이머 병의 경우 현재 PIB(Pittsburgh Compound B, N-methyl 2-
( 1 -me t hy 1 am i nopheny 1 -6-hydr oxybenz a t h i a zo 1 e ) 물질이 알츠하이머 병 조직 내 베타 아밀로이드 단백질과 결합하는 성질을 이용하여, 이를 방사성 동위원소인
[uc]를 표지하여 핵의학적 영상용 또는 진단용으로 사용되고 있다. 그러나 아밀로 이드의 축적이 신경손상 또는 세포사멸 및 환자의 임상 증상을 정확하게 반영하는 지에 대해서는 아직도 논쟁이 되고 있고 분명치 않다. 더구나， [UC]-PIB는 알츠하 이머 병에 대한 특이적인 영상 프로브가 아니라 베타 아밀로이드 관련된 뇌 아밀 로이드증 (beta amyloid-related cerebral amyloidosis)에 대한 비특이적 영상 프로 브라는 보고도 있다 (Lockhart et al. , Brain. 2007, 130:2607-2615). 이러 측면을 고려할 때， 알츠하이머 병과 같은 퇴행성 뇌신경질환에서 세포사멸을 직접적으로 검출하거나 진단함으로써 정확한 병의 진행 정도를 파악하는 기술이 요구된다.
<13>
<14> 뇌혈관 장벽 (blood-brain barrier, BBB)은 뇌혈관의 내피세포 간의 조밀한 연결 (tight junction) 및 이를 더욱 강화하는 성상세포 (astrocyte)로 이루어진 구 조물로서， 혈관 내부의 물질이 혈관벽을 통과하여 뇌 실질 내로 쉽게 나오지 않게 해주는 기능을 한다. 이런 이유로 뇌질환 치료제로 개발된 상당수의 약이 뇌혈관 장벽의 통과가 잘 이루어지지 않는 문제점을 갖고 있다. 또한 아포토시스를 검출하 거나 표적할 수 있는 물질 증에도 뇌혈관 장벽 통과가 잘 이루어지지 않는 문제점 을 갖고 있다. 현재 뇌혈관 장벽을 통과하여 약물 등을 전달해 줄 수 있는 전달체 (carrier)에 대한 개발이 활발하게 진행 중이다. 한편， 특정한 아미노산 서열을 갖 는 타이드는 뇌혈관 장벽 통과하며 약물이나 siRNA 등을 전달하는 기능을 갖고 있다 (Kumar et al., Nature. 2007, 448： 39-43； Teixido 및 Giralt, Journal of pep ide science. 2008， 14:163-173).
<15>
<i6> 한편， 치료진단 (theranosis)은 치료 (therapy)와 진단 (diagnosis, diagnostics)의 합성어로 진단기술과 융합된 치료기술을 나타내는 것이다. 그 경
우， 각각의 환자에 있어서 치료제에 있어서의 반응을 확인하여 이를 치료법의 선정 에 적용할 수 있으므로 약물의 오용이나 남용을 막고， 치료효과를 높이는 데에 크 게 기여할 수 있다. (Frederic P et al . , Crit Care Med, 2009, Vol. 37, No. 1 ( Sup 1. ) S50-S58; Hag lund E et al.. Annals of Biomedical Engineering, Vol . 37, No. 10， 2009, pp. 2048.2063； Ozdemir V et al., Nature Biotechnology, Vol . 24, No. 8, 2006, 942-946)
【발명의 상세한 설명】
【기술적 과제】
이에 본 발명자들은 뇌혈관 장벽을 효과적으로 통과하고 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포를 특이적으로 그리고 초기에 생체 내 표적화 할 수 있는 새로운 단백질 또는 그 단편을 탐색하고자 연구한 결과, 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드가 뇌혈관 장벽을 통과하고 퇴행성 뇌신경질환 조직의 사멸 세포를 특이적으로 표적할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. 따라서 본 발명의 목적은 뇌혈관 장벽을 통과하여 퇴행성 뇌신경질환 부위의 세포사멸을 표적하는 펩타이드 및 이의 용도를 제공하는 것이다.
【기술적 해결방법】
상기와 같은 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아 미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 뇌 조직으로의 약물전달 용 조성물을 제공한다.
본 발명의 다른 목적을 달성하기 위하여 , 본 발명의 펩타이드를 유효성분으 로 포함하는 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 조성물 을 제공한다.
본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여 , 본 발명은 본 발명의 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌신경 질환 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하예 본 발명은 본 발명의 펩타이드， 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제 및 표지물질을 유효성분으로 포함하는 뢰행 성 뇌신경질환의 치료진단용 조성물을 제공한다.
본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화용 조성물을 제공한다. 본 발명의 또다론 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명의 펩타이드
및 이와 결합된 약물을 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하는 뇌 조직으로의 약물전달 방법을 제공한다.
<26> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 뇌 조직으로의 약물전 달제제의 제조를 위한 본 발명의 펩타이드 및 이와 결합된 약물의 용도를 제공한 다.
<27> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하 는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출 방법을 제공한다.
<2S> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여 , 본 발명은 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 제제의 제조를 위한 본 발명의 펩타이드 의 용도를 제공한다.
<29> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여 , 본 발명은 본 발명의 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으 로 투여하는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 예방 및 치료 방법을 제공한다.
<30> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 퇴행성 뇌신경질환 예 방 및 치료제 제조를 위한 본 발명의 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제의 용도를 제공한다.
<31> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 본 발명의 펩타이드， 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제 및 표지물질을 이를 필요로 하는 개체에 유 효한 양으로 투여하는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환의 치료진단 방법을 제공 한다.
<32> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 퇴행성 뇌신경질환의 치료진단용 제제의 제조를 위한 본 발명의 펩타이드, 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질 환 치료제 및 표지물질의 용도를 제공한다 .
<33> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여， 본 발명은 본 발명의 펩타이드를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하 여 영상화하는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화 방법을 제공한 다. '
<34> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 퇴행성 뇌신경질환 부 위의 영상화용 제제의 제조를 위한 본 발명의 펩타이드의 용도를 제공한다.
<35> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 치료제와 동시에 또는
순차적으로 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합 된 표지물질을 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하여 영상화하는 단계를 포함하는 치료제 효과의 모니터링 방법을 제공한다.
<36> 본 발명의 또다른 목적을 달성하기 위하여 , 본 발명은 치료제 효과의 모니터 링용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 표지물질의 용도를 제공한다 .
<37>
<38> 이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
<39>
<40> 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산을 가지는 펩타이드가 뇌혈관 장 벽을 통과한다는 점에 착안하예 서열번호 1로 표시되는 아미노산올 가지는 펩타이 드를 유효성분으로 포함하는 뇌 조직으로의 약물전달용 조성물 퇴행성 뇌신경 질 환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 조성물 및 퇴행성 뇌신경 질환 부위 의 영상화용 조성물을 제공하고， 상기 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 예방 /치료 및 치료진단용 조성 물을 제공하는 것을 특징으로 한다.
<41>
<42> 본 발명의 펩타이드는 사멸세포 표적용 펩타이드 (아미노산 서열 CQRPPR, 일 명 ApoPep-1)로서, 아포토시스가 진행되고 있는 사멸세포에 특이적으로 결합한다. 본 발명의 펩타이드는 서열번호 l(CQRPPR)의 아미노산 서열을 가질 수 있으며， 모 든 종류의 펩타이드, 단백질, 펩타이드 모조물, 화합물 및 생물제제를 포함하며, 사멸세포에 특이적으로 결합할 수 있는 활성을 갖는 것을 말한다. 본 발명의 펩타 이드는 천연으로부터 유래될 수도 있으며, 공지의 펩타이드 합성 방법을 이용하여 합성될 수 있다.
<43>
<44> 본 발명의 펩타이드는 사멸세포에 특이적으로 결합하는 것으로 선별되었으 며， 아포토시스 과정에 있는 배양상태의 종양세포, 정상상피세포 및 마크로파지를 특이적으로 인식함으로써 상기 세포에 결합한다 . 또한 본 발명의 펩타이드는 종양 조직 내 사멸세포를 표적하여 이에 대한 생체 내 영상 (in vivo imaging) 및 모니터 링이 가능하고, 약물을 대상질환 부위에 전달하는 것도 가능하다.
<45>
<46> 아울러， 본 발명의 펩타이드는 뇌혈관 장벽 (blood-brain barrier, BBB)을 통
과하여 뇌 조직， 보다 구체적으로는 뇌실질， 뇌의 신경세포 또는 신경조직 내로 쉽 게 나을 수 있다. 따라서， 본 발명의 펩타이드는 뇌 조직에서 아포토시스가 진행되 고 있는 사멸세포에 특이적으로 결합할 수 있어 -사멸세포에 약물을 전달할 수 있 다.
<47>
<48> 따라서， 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산을 가지는 펩타이드를 유 효성분으로 포함하는 뇌 조직으로의 약물전달용 조성물을 제공한다. 아울러， 본 발 명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 약 물을 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하는 뇌 조직으 로의 약물전달 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 뇌 조직으로의 약물전달제제의 제 조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합 된 약물의 용도를 제공한다.
<49>
<50> 본 발명의 펩타이드는 그 자체 또는 다른 약물과 공유결합 또는 비공유결합 의 형태로 결합된 상태로 이용될 수 있으며， 본 발명에서 '유효한 양'이라 함은 본 발명의 조성물 또는 제제가 투여 대상인 개체 내에서 약물이 전달되거나 아포토시 스 관련 질환의 예방 또는 치료하는 효과를 나타내는 양을 말하며 , 상기 '개체
(subject)'란 동물, 바람직하게는 포유동물, 특히 인간을 포함하는 동물일 수 있으 며， 동물에서 유래한 세포, 조직, 기관 등일 수도 있다. 상기 개체는 치료가 필요 한 환자 (patient)일 수 있다.
<51>
<52> 본 발명자들은 사멸세포에 특이적으로 결합하는 것으로 선별된 상기 펩타이 드의 기능을 확인하고자 다양한 실험을 수행한 결과， 본 발명의 펩타이드가 뇌혈관 장벽을 통과할 수 있으며ᅳ 퇴행성 뇌신경질환 조직 (또는 부위 ) 내 아포토시스 과정 에 있는 사멸세포를 특이적으로 인식함으로써 상기 세포에 결합한다는 사실을 확인 하였다. 또한 본 발명의 펩타이드가 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포를 표적 하여 이에 대한 생체 내 영상 (in vivo imaging) 및 모니터링이 가능함을 알 수 있 었다. 따라서， 본 발명의 펩타이드를 퇴행성 뇌신경질환 부위로 약물을 전달하는 데에이용할 수 있고, 퇴행성 뇌신경질환 조직 내에 사멸세포를 검출하고, 이를 영 상화하며， 진단 또는 치료추적용 제제, 또는 별도의 치료용 제제와 더불어 퇴행성 뇌신경질환 조직의 질환 예방 및 치료 치료진단의 용도로 사용할 수 있음을 알 수 있었다.
<53>
<54> 보다 구체적으로 본 발명의 일 실시예에서는 근적외선 형광시약을 표지한 서 열번호 1로 표시되는 CQRPPR의 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 정맥 주사한 후 ， APP/PS1 단백질을 과발현 하는 알츠하이머 병 모델 마우스에서 알츠하이머 뇌조 직에 펩 이드가 표적되고， 이를 생체 영상화할 수 있는지 확인하였다. 그 결과, 연령이 증가함에 따른 병의 진행 정도가 증가함에 따라 근적외선 형광이 더 강해지 는 것을 알 수 있었다. 반면， 알츠하이머 병 마우스에 대조군 펩타이드를 정맥 주 사하거나, 정상 마우스에 본 발명의 펩타이드를 주사한 경우는 형광이 거의 관찰되 지 않음을 알 수 있었다. 뇌조직을 격리하여 형광을 관찰하여 유사한 결과를 확인 하였다.
<55>
<56> 본 발명의 다른 실시예에서는 격리된 알츠하이머 병 뇌조직을 동결절편을 제 작하여 면역형광염색법을 시행하여 본 발명의 펩타이드의 조직 내 위치를 현미경으 로 조사 하였다. 그 결과， 아포토시스의 바이오마커의 하나인 카스파제 -3 (caspase-3)를 항체 염색한 것과 본 발명의 펩타이드가 동일한 위치에 있음을 알 수 있었다. 즉, 뇌조직 내 사멸세포에 본 발명의 펩타이드가 결합하는 .것을 확인하 였다. 또한 혈관의 바이오마커의 하나인 알파-평활근 액틴 (alpha-smooth muscle actin)을 항체 염색하였을 때， 혈관 바깥의 뇌실질에 본 발명의 펩타이드가 위치함 을 알 수 있었다ᅳ 즉, 펩타이드가 뇌혈관 장벽을 통과하는 것을 확인하였다.
<57>
<58> 본 발명의 또 다른 실시예에서는 약물 주사로 유도된 파킨스 병 모델 마우스 에 근적외선 형광시약을 표지한 본 발명의 펩타이드를 정맥 주사한 후， 파킨슨 뇌 조직에 펩타이드가 표적되고, 이를 생체 영상화할 수 있는지 확인하였다. 그 결과ᅳ 파킨슨 병 마우스의 뇌 부위에서 강한 근적외선 형광을 관찰 할 수 있었다. 반면, 파킨슨 병 마우스에 대조군 펩타이드를 정맥 주사하거나, 정상 마우스에 본 발명의 펩타이드를 주사한 경우는 형광이 거의 관찰되지 않음을 알 수 있었다. 뇌조직을 격리하여 형광을 관찰하여 유사한 결과를 확인하였다.
<59>
<60> 결론적으로， 본 발명의 펩타이드가 뇌혈관 장벽을 통과하며 뇌조직 내 사멸 세포와 특이적으로 결합하여 생체 내에서 퇴행성 뇌신경질환의 아포토시스를 인식 및 표적 할 수 있음을 알 수 있었다.
<61> 본 발명의 펩타이드는 펩타이드 및 이와 결합된 약물의 확인， 추적， 정량,
영상화 등을 위하여 표지물질로 표지될 수 있다. 즉， 본 발명의 펩타이드는 검출가 능한 표지에 링크 (예: 공유 결합 또는 가교)되어 제공될 수 있다. 상기 검출가능한 표지는 발색효소 (예: 퍼옥시다제, 알칼라인 포스파타제), 방사성 동위원소 (예:
125 32 35
I, P, S), H로모포어 (chromophore), 발광물질 또는 형광물질 (예: FITC, RITC, 형광단백질 (GFP(Green Fluorescent Protein)； EGFP( Enhanced Green Fluorescent Protein) , RFP(Red Fluorescent Protein)； DsRed(Discosoma sp. red fluorescent protein)； CFP(Cyan Fluorescent Protein) , CGFP(Cyan Green Fluorescent Protein), YFP(Yellow Fluorescent Protein), Cy3, Cy5 및 Cy7.5), 상자성입자 (super paramagnetic particles) 또는 초상자성입자 (ultrasuper paramagnetic particles)일 수 있다.
<62>
<63> 표지에 따른 검출 방법은 당업계에 널리 알려져 있으나， 예를 들어 다음과 같은 방법에 의해 수행될 수 있다. 만약 검출가능한 표지로 형광물질을 이용하는 경우에는 면역형광염색법을 이용할 수 있다. 예컨대， 형광물질로 표지된 본 발명의 펩타이드를 시료와 반웅시키고 미결합 또는 비특이적인 결합 산물을 제거한 다음 형광현미경 하에서 펩타이드에 의한 형광을 관찰할 수 있다. 또한 검출가능한 표지 로 효소를 이용하는 경우에는 효소반웅을 통한 기질의 발색반웅에 의해 흡광도를 측정하고， 방사산 물질인 경우에는 방사선 방출량을 측정함으로써 수행할 수 있다. 아울러， 검출된 결과는 검출표지에 따른 공지된 영상화 방법에 따라 영상화될 수도 있다.
<64>
<65> 본 발명의 펩타이드는 뇌 조직의 사멸세포에 특이적으로 결합하므로 본 발명 의 약물전달용 조성물은 뇌 또는 뇌신경조직에 있어서 아포토시스와 관련된 질환인 알츠하이머 병， 파킨슨 병， 헌팅턴 병 (Huntington's disease), 루게릭 병 (Amyotrophic lateral sclerosis) , 니만一픽 병 (Nieman—Pick disease) 또는 뇌졸중 (stroke)에 특이적일 수 있다. 또한 본 발명의 뇌신경질환은 알츠하이머 병, 파킨 슨 병， 헌팅턴 병 (Huntington's disease) , 루게릭 병 (Amyotrophic lateral sclerosis), 니만-픽 병 (Nienian— Pick disease) 또는 뇌졸증 (stroke)일 수 있다. 즉 본 발명의 조성물은 알츠하이머 병 또는 파킨슨 병 등의 뇌신경질환 부위에 특이적 으로 결합함으로써 그 부위를 확인, 추적， 정량， 영상화하거나, 결합된 약물을 전 달할 수 있다.
<66>
<67> 한편, 본 발명의 펩타이드는 사멸세포에 특이적으로 결합하므로 이의 위치를 확인하는 경우 사멸세포의 존재를 검출할 수 있다. 따라서， 본 발명은 서열번호 1 로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌 신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 조성물을 제공한다. 아울러， 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하는 단계를 포 함하는 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출 방법을 제공한 다. 또한 본 발명은 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드의 용 도를 제공한다.
<68>
<69> 또한 본 발명의 펩타이드는 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포와 특이적으 로 결합할 수 있으므로 약물을 상기 세포에 선택적으로 전달하는 지능형 약물 전달 체로서 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는 퇴 행성 뇌신경질환 치료를 위한 약물 전달용 조성물을 제공한다.
<70>
<71> 본 발명의 약물 전달용 조성물에 포함되는 본 발명의 펩타이드를 종래 신경 세포 보호 제제 또는 뇌신경 질환 치료제와 연결하여 치료에 이용한다면 본 발명의 펩타이드에 의해 상기 제제가 사멸세포에만 선택적으로 전달되기 때문에 약의 효력 을 증가시킬 수 있고 동시에 정상세포에 미치는 부작용을 현저히 줄일 수 있다.
<72>
<73> 한편 , 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 본 발명의 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제를 유효성분으로 포함하는 퇴행 성 뇌신경질환 예방 및 치료용 조성물을 제공한다. 아울러， 본 발명은 서열번호 1 로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하는 퇴행 성 뇌신경질환 예방 및 치료 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 퇴행성 뇌신경질환 예방 및 치료제 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타 이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제의 용도를 제공한다.
<74>
<75> 또한 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드， 이와 결합된 퇴행성 뇌신경 질환 치료제 및 표지물질을 유효성분으로 포함하는 퇴
행성 뇌신경질환의 치료진단 (theranosis)용 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 서 열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드， 이와 결합된 퇴행성 뇌신 경질환 치료제 및 표지물질을 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단 계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환의 치료진단 방법을 제공한다. 또한 본 발명은 퇴 행성 뇌신경질환의 치료진단용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노 산 서열을 가지는 펩타이드， 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제 및 표지물질의 용도를 제공한다.
<76> 본 발명의 펩타이드에 연결될 수 있는 퇴행성 뇌신경질환 치료제는 종래 이 들 질환의 치료에 사용되는 것이라면 제한 없이 사용될 수 있다. 예¾대, 뇌신경세 포 보호제인 NMDA (N-methyl-d-aspartate) 수용체 억제제 , 아세틸콜린 에스테라제 억제제， 항 아밀로이드 단백질제 등으로, 예를 들어 , 도네페질 , 갈란타민 , 타그린， 메만틴 등일 수 있다. 상기 제제와 본 발명의 펩타이드의 연결은 당업계에 공지된 방법, 예컨대 공유 결합， 가교 둥을 통해 수행될 수 있다. 이를 위해 본 발명의 펩타이드는 필요하다면 그 활성이 소실되지 않는 범위에서 화학적으로 수식 (modification)될 수 있다. 본 발명의 조성물에 포함되는 본 발명의 펩타이드의 양 은 결합되는 상기 치료제의 종류 및 양에 따라 달라질 수 있다.
<78> 본 발명의 조성물은 약학적 조성물일 수 있으몌 본 발명에 따른 약학적 조 성물은 상기 펩타이드, 약물 또는 약제 , 표지물질 또는 이들의 조합의 순수한 형태 또는 약학적으로 허용되는 담체와 함께 적합한 형태로 제형화함으로써 제공될 수 있다. '약학적으로 허용되는'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때， 통 상적으로 위장 장애， 현기증 등과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반웅을 일 으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다. 상기 담체로는 모든 종류의 용매， 분산매 질, 수중유 또는 유중수 에멀견, 수성 조성물, 리포좀, 마이크로비드 및 마이크로 좀， 생분해성 나노입자 등이 포함된다. 바람직하게는 본 발명에 따른 약학적 조성 물 0.001-99, 999중량 % 및 약학적으로 허용되는 담체 99.999— 0.0이중량 %를 포함할 수 있다.
<80> 또한 본 발명의 조성물은 본 발명의 ¾타이드 0.0000W ~ 20중량 ¾ 및 약학적 으로 허용가능한 담체를 잔량， 즉 80 ~ 99.99999 증량 %를 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 본 발명의 펩타이드 0.0000W ~ 20중량 %, 예를 들어， 퇴행성 뇌신 경질환 치료제와 같은 약물 0.00001% ~ 20중량 % 및 약학적으로 허용가능한 담체를 잔량, 즉 60 ~ 99.99998 증량 %를 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 표지물 질을 0.00001% ~ 20중량 %로 추가로 포함 (이 경우 담체의 함량이 감소한다)할 수 있
다.
<81> 한편 , 본 발명에 따른 약학적 조성물은 투여 경로에 따라 적합한 담체와 함 께 제형화될 수 있다. 상기 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여 경로로는 이에 한정되지는 않으나 경구적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 비경구적 투여 경로 로는 예를 들면, 경피， 비강, 복강, 근육， 피하 또는 정맥 등의 여러 경로가 포함 된다.
<83> 본 발명의 약학적 조성물을 경구 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 경구 투여용 담체와 함께 당 업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립， 정제, 환제, 당의정게， 캡슐제, 액제, 겔제 시럽제, 현탁액， 웨이퍼 등의 형태로 제형화 될 수 있다. 적합한 담체의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비틀， 만니 를, 자일리를， 에리스리틀 및 말티를 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분， 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류， 셀를로즈, 메틸 셀롤로즈, 나트륨 카 르복시메 ¾셀를로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀를로즈 등을 포함하는 셀를로즈 류, 젤라틴， 플리비닐피를리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한， 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피를리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해 제로 첨가할 수 있다. 나아가, 상기 약학적 조성물은 항웅집제, 윤활제， 습윤제, 향료， 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
<85> 또한, 비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 비경 구용 담체와 함께 주사제， 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다 . 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나， 물, 에탄올, 폴리을 (예를 들어， 글 리세롤ᅳ 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등)， 이들의 흔합물 및 /또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는， 적합한 담 체로는 행크스 용액, 링거 용액， 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수， 10% 에탄을, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱 스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로 부터 보호하기 위해서는 파라벤， 클로로부탄을, 페놀， 소르빈산, 티메로살 등과 같 은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한 상기 주사제는 대 부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있 다. 이둘 제형은 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문한 (Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edit ion, 1975， Mack Publishing Company , Easton,
Pennsylvania)에 기술되어 있다.
<S6> 흡입 투여제의 경우， 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예 를 들면 디클로로플루오로메탄， 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로 에탄， 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면， 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물, 및 락토즈 또는 전분 과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다.
<89> 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다 (Remington' s Pharmaceutical Sciences, 19th ed. , Mack Publ ishing Company, Easton, PA, 1995) .
<90>
<9i> 또한, 본 발명에 따른 약학적 조성물은 하나 이상의 완충제 (예를 들어, 식염 수 또는 PBS), 카보하이트레이트 (예를 들어， 글루코스， 만노즈, 슈크로즈 또는 텍 스트란), 안정화제 (아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산) 항산화제 , 정균제， 킬레이트화제 (예를 들어， EDTA 또는 글루타치온), 아쥬반트 (예를 들어， 알 루미늄 하이드록사이드)， 현탁제， 농후제 및 /또는 보존제 (벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올)를 추가로 포함할 수 있다.
<92>
<93> 또한, 본 발명의 약학적 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속， 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형 화될 수 있다.
<94>
<95> 상기와 같은 방법으로 제형화된 약학적 조성물은 유효량으로 경구 경피， 피 하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 상기에서 '유효 량 ' 이란 환자에게 투여하였을 때， 진단 또는 치료 효과의 추적을 가능하게 하는 화합물 또는 추출물의 양을 말한다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여량은 투 여 경로, 투여 대상, 대상 질환 및 이의 중증정도， 연령, 성별 체중, 개인차 및 질 병 상태에 따라 적절히 선택할 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 펩타이드를 포함 하는 약학적 조성물은 질환의 정도에 따라 유효성분의 함량을 달리할 수 있으나, 통상적으로 성인을 기준으로 할 때 1회 투여시 10 I 내지 10 m의 유효용량으로 하루에 수 차례 반복 투여될 수 있다.
<96>
<97> 아울러, 본 발명의 펩타이드는 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포와 특이 적으로 결합하므로 이들 질환의 발병 부위의 영상화 및 진단에도 유용하게 사용될 수 있다. 따라서， 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타 이드를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화용 조성물을 제공 한다 . 아울러 , 본 발명은 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검 출하여 영상화하는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화 방법을 제공 한다. 또한 본 발명은 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화용 제제의 제조를 위한 서 열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드의 용도를 제공한다.
<98>
<99> 이 때ᅳ 퇴행성 뇌신경질환의 영상화 및 이를 이용한 진단은， 이에 한정되지 는 않으나, 퇴행성 뇌신경질환의 초진 목적 뿐만아니라, 진행 경과, 퇴행성 뇌신경 질환 치료에 대한 치료 경과, 치료제에 대한 반웅 모니터링 등을 포괄하여 사용할 수 있다.
<100>
<ιοι> 따라서， 본 발명의 조성물은 치료진단 (theranosis, theragnost ics , theranostics)의 용도로도 이용할 수 있다.
<102>
<103> 본 발명은 치료제와 동시에 또는 순차적으로 서열번호 1로 표시되는 아미노 산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 표지물질을 개체에 유효한 양으로 투여 하는 단계 및 상기 템타이드를 검출하여 영상화하는 단계를 포함하는 치료제 효과 의 모니터링 방법을 제공한다. -
<104> 또한 본 발명은 치료제 효과의 모니터링용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 표지물질의 용도를 제 공한다.
<105> 상기에서 치료제는 퇴행성 뇌신경질환의 치료제일 수 있으며, 이는 표지물질 과 공유 또는 비공유로 결합된 본 발명의 펩타이드와 동시에 또는 순차적으로 개체 . 에 투여될 수 있다. 상기에서 순차적 투여란 치료제와 본 발명의 펩타이드 및 이와 결합된 표지물질을 일정한 간격을 두고 투여하는 것을 말하며， 투여 순서는 무관하 다.
<106> 치료제 효과의 모니터링을 통해 진행 경과， 치료 경과, 치료제에 대한 반응
모니터링 등의 치료진단의 효과를 가질 수 있다.
<107>
<108> 참고로, 본 발명에서 언급한 뉴클레오타이드 및 단백질 작업에는 다음의 문 헌을 참조할 수 있다 (Maniatis et al . , Molecular Cloning: A Laboratory Manual , Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor , N.Y. (1982)； Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual , 2d Ed. , Cold Spring Harbor Laboratory Press( 1989)； Deutscher , M. , Guide to Protein Purification Methods Enzyniology, vol . 182. Academic Press. Inc., San Diego, CA(1990)).
【유리한 효과】
<109> 이상 살펴본 바와 같이 , 본 발명의 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드는 뇌혈관 장벽을 통과할 수 있으며, 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포와 특이적으로 결합할 수 있다. 따라서， 본 발명의 펩타이드는 퇴행성 뇌 신경질환에서 아포토시스의 검출， 더 나아가 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사열세포 (특히, 사멸신경세포)의 검출과 영상진단, 표적 약물전달, 치료진단 등의 목적으로 다양하게 사용될 수 있다.
【도면의 간단한 설명】
<πο> 도 1은 알츠하이머 질환의 초기 단계인 5개월령 마우스에서 중증 단계인 13 개월령 마우스까지 연령이 증가함에 따라 알츠하이머 질환의 특징인 베타 아밀로이 드단백의 세포 외 침착과 함께 TUNEL 염색으로 관찰한 세포의 사멸이 점차적으로 증가하는 것을 나타낸 것이다. 알츠하이머 질환 마우스의 대조군은 같은 배에서 태 어난 정상 마우스이다.
<ni> 도 2는 알츠하이머 질환 마우스 (5, 7, 9, 13 개월 수령) 모델에 Cy7.5근적 외선형광이 표지된 서열번호 1의 펩타이드 (ApoPep— 1)를 정맥 주사한 2시간 후， 머 리 부위의 근적외선을 촬영하고 (a), 각각의 뇌를 격리하여 근적외선을 촬영한 것 이다 (b). 또한 알츠하이머 질환 마우스 (8개월령)에 대조군 펩타이드 및 정상 (wild type) 마우스 (8개월령)에 서열번호 1의 펩타이드를 주사한 후 같은 조건으 로 촬영한 것이다.
<112> 도 3은 알츠하이머 질환 마우스의 뇌조직을 면역형광염색법을 실시하여
FITC 형광이 표지된 서열번호 1의 펩타이드 (녹색)와 세포사멸의 바이오마커인 Caspase-3에 대한 항체 염색 (붉은 색)을 한 것이다 (a). 이와 함께 뇌조직 내의 혈 관염색법인 αᅳ SMA에 대한 항체 염색 (붉은 색)을 한 것이다 (b). 화살표는 펩타이 드와 각 항체 염색이 일치하는 곳을 나타낸 것이다.
<ii3> 도 4는 파킨슨 병 마우스 모델에 Cy7.5 근적외선 형광이 표지된 서열번호 1 의 펩타이드 (ApoPep-1)를 정맥 주사한 2시간 후， 머리 부위의 근적외선을 촬영하고 (a), 각각의 뇌를 격리하여 근적외선을 촬영한 것이다 (b). 또한 파킨슨 병 마우스 에 대조군 펩타이드 및 정상 마우스에 서열번호 1의 펩타이드를 주사한 후 같은 조 건으로 촬영한 것이다. 또한 파킨스 병을 유도하고 1주, 2주 및 3주 후 서열번호 1 의 펩타이드를 주입하고 (a)와 같은 방법으로 촬영한 것이다 (c).
<Π4> 도 5는 대조군 및 MPTP 처리로 유도된 파킨슨 병 마우스의 뇌조직을 면역형 광염색법을 실시하여 FITC 형광이 표지된 서열번호 1의 펩타이드 (녹색)와 세포사멸 의 바이오마커인 TUNEL 염색 (붉은 색)을 한 것이다. 화살표는 펩타이드와 TUNEL 염 색이 일치하는 곳을 나타낸 것이다. DAPI 염색 (푸른 색)은 세포 핵을 나타낸다.
<Π5> 도 6은 대조군, MPTP 처리로 유도된 파킨슨 병 마우스 및 파킨스 병 치료제 인 아만타딘 (amantadine)을 투여한 파킨슨 병 마우스에 서열번호 1의 ¾타이드를 주입하고 도 5와 같은 방법으로 촬영한 것이다.
<116> 도 7은 대조군， MPTP 처리로 유도된 파킨슨 병 마우스 및 파킨스 병 치료제 인 아만타딘을 투여한 파킨슨 병 마우스의 뇌조직을 면역형광염색법을 실시하여 도 파민성 뉴론에 특이적인 마커인 티로신 하이드록실라아제 (tyrosine hydroxylase)에 대한 항체 염색 (붉은 색)을 하고 (a), 이를 수치로 정량화 한 것이다 (b). 또한 FITC 형광이 표지된 서열번호 1의 펩타이드 (녹색)와 세포사멸의 바이오마커인 TUNEL 염색 (붉은 색)을 하고 (c), 이를 수치로 정량화 한 것이다 (d). *는 통계적 유의성 (ρθ.01)을 나타내고， n은 동물의 마리수를 나타낸다. 화살표는 펩타이드와 TUNEL 염색이 일치하는 곳을 나타낸 것이다. DAPI 염색 (푸른 색)은 세포 핵을 나타 낸다. (AM: amantadine)
【발명의 실시를 위한 형태】
<117> 이하， 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.
<118> 단， 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐， 본 발명의 내용이 하기 실 시예에 한정되는 것은 아니다.
<119>
<120> <실시예 1>
<121> 본발명의 펩타이드를 이용한 알츠하이머 병의 생체 영상
<122>
<123> <1-1>본 발명의 펩타이드를 이용한 알츠하이머 병의 생체 영상
<124> 알츠하이머 질환은 아밀로이드 단백질 (Amyloid precursor protein, APP) 유
전자와 프레세닐린 (Presenilin 1， PS1) 유전자가 과발현된 형질전환 마우스 모델 을 이용하였다. 상기 모델은 연령이 증가함에 따라 알츠하이머 질환의 특징인 베타 아밀로이드단백의 세포 외 침착과 함께 신경세포의 사멸이 점차적으로 증가 하는 특징을 지닌 모델 동물이다. 알츠하이머 질환의 초기 단계인 5개월령 마우스에서 증증 단계인 13개월령 마우스를 대상으로 질병의 진행 정도에 따라 실험을 진행하 였다. 아포토시스는 제조회사 (Roche사)의 지침에 따라 TUNEL 'n vitro terminal deoxynucleot idyl transferase一 mediated dUTP nick-end labeling) 분석법으로 확인 하였다. 이 방법은 terminal deoxynucleot idyl transferase 효소를 이용하여 biotin-dUTP를 아토토시스에서 특이적으로 나타나는 잘려진 DNA 조각의 끝에 표지 한 다음， streptavidin-rhodamine (붉은색 형광시약)을 이용하여 형광 염색을 하는 것이다.
<125>
<126> 그 결과， 도 1에서 보듯이， 9개월령 마우스에 비해 13개월령 마우스에서
TUNEL 염색된 세포의 증가 즉, 세포의 아포토시스가 증가함을 확인하였다 (도 la). 반면, 대조군 마우스는 11개월령에도 TUNEL 염색된 세포가 거의 없었다. 알츠하이 머 질환 마우스의 대조군은 같은 배에서 태어난 정상 마우스이다. 또한 5， 7， 9， 11, 13 개월 수령 마우스를 대상으로 질병 진행에 따른 TUNEL 염색된 세포 수를 분 석한 결과, 질병 진행 정도에 비례적으로 아포토시스가 증가함을 확인하였다 (도 lb).
<127>
<128> 상기 알츠하이머 질환 마우스 (5, 7, 9, 13 개월 수령) 모델에 Cy그 5 근적외 선형광이 표지된 본 발명의 펩타이드 (ApoPep-1)를 이소플루란 마취 (isoflurane anesthesia) 하에서 최종 50 농도가 되게 정맥 주사한 2시간 후, 머리 부위의 근적 외선을 촬영하고， 각각의 뇌를 격리하여 근적외선을 촬영하였다. 생체 근적외선 형 광영상은 Optix exPlore 기기 (ART사)를 사용하여 촬영하였다. 또한 기기 자체의 소 프트웨어를 사용하여 각 영상을 표준화하였다.
<129>
<130> 본 발명에서 사용된 펩타이드는 표준 Fmoc 방법에 따라 합성한 후 HPLC 기기 로 분리하였다. 펩타이드의 합성은 전문회사 (Peptron사 및 Anygen사)에 의뢰하여 시행하였다. 펩타이드는 N-말단에 fluorescein isothiacyanate(FITC)이 결합된 형 태로서 합성하거나, 합성 후 N-말단에 Cy7.5 근적외선형광시약을 결합시켰다.
<131>
<i32> 그 결과， 도 2a에서 보듯이， 알츠하이머 질환이 증증으로 진행 (신경세포 사 멸이 증가)됨에 따라 근적외선 형광의 강도 역시 증가함을 관찰하였다. 한편 알츠 하이머 질환 마우스 (8개월령)에 대조군 펩타이드 (아미노산 서열, NSSSVDK)를 사용 하였을 때는 근적외선 형광이 거의 관찰되지 않았다. 또한 정상 (wild type) 마우스 (8개월령)에 본 발명의 펩타이드를 주사한 후 관찰하였을 때， 비슷한 시기 (7개월 및 9개월령)의 알츠하이머 질환 마우스의 뇌 부위에서 정상 마우스에 비해 훨씬 강 한 근적외선 형광이 관찰되었다.
<133>
<134> 또한 도 2b에서 보듯이， 각각의 뇌를 격리하여 체외에서 형광을 측정한 경우 에도 상기 생체 영상과 유사한 결과를 나타내었다 .
<135>
<136> <1-2>본발명의 펩타이드를주입한 알츠하이머 병 뇌조직의 면역형광분석
<137> 조직학적 조사를 위해, 상기 실시예 <1-1>에서 FITC 형광 (녹색)이 표지된 본 발명의 펩타이드를 주입한 마우스 (13 개월령)에서 생체 영상 후 분리한 뇌조직을 4% 파라포름알데히드 액으로 후고정 한 후, Sucrose/인산완층액에 24시간 침적하여 cryostat를 이용하여 30 두께의 냉동 절편 제작하였다. 항체에 대한 면역형광 염색은 붉은 색 형광시약인 알렉사 568로 표지된 2차 항체를 이용하여 실시하였다. 각 조직 슬라이드는 형광현미경 (fluorescence microscopy, Zeiss사)으로 관찰하였 다.
<138>
<139> 그 결과, 도 3에서 보듯이 , 본 발명의 펩타이드 (녹색 형광)와 세포사멸의 바 이오마커인 Caspase-3에 대한 항체 (붉은색 형광)가 동시에 동일한 세포에서 염색됨 을 확인하였다 (도 3a). 이는 본 발명의 펩타이드가 사멸세포에 표적 하는 것임을 나타낸다.
<140> 또한 도 3b에서 보듯이， 뇌조직 내의 혈관염색법인 alpha-smooth muscle actin( a-SMA) 대한 항체 염색 (붉은색 형광)을 통해 본 발명의 펩타이드가 뇌혈 관을 통과하여 혈관 바깥의 뇌실질 내에 분포함을 관찰하였다.
<141>
<142> <실시예 2>
<143> 본발명의 펩타이드를 이용한파킨슨 병의 생체 영상
<144>
<145> 파킨슨병 모델은 약물을 이용하여 뇌의 혹질부에 존재하는 도파민성 신경을
특이적으로 파괴하는 방법을 사용하여 유도하였다. 이를 위해 몸무게 21 - 23 그램 의 C57BL 수컷 마우스 (코아텍 (주) )를 대상으로 1마리 당 1회에 15nig/kg의 용량의 MPTP( 1-methy 1 -4-pheny 1 -1 ,2,3, 6-t et rahydro pyridine hydrochloride) (Sigma사)투 여하였다. MPTP 투여는 2시간 간격으로 4회 반복하여 복강 주사하는 방법을 사용하 였고, 1 마리 당 총 60mg/kg의 MPTP를 투여하였다.
<i46> MPTP를 투여한 날을 실험 0일로 계산하여 7일, 14일 및 21일이 되는 날짜에
Cy7.5가 표지된 본 발명의 펩타이드를 주입하였다. 펩타이드를 이소플루란 마취하 에서 꼬리 정맥을 통해 최종 50 μΜ 농도로 정맥 주사한 후 2 시간 동안 순환시키 고 생체 근적외선 형광영상을 촬영하였다. 실험이 완료된 생쥐는 즉시 마취시켜 안 락사를 시켜서 뇌조직 샘플을 채취하였다. 안락사한 생쥐를 즉시 심장을 통한 생리 식염수 관류를 통해 혈액을 제거하고 4% 파라포름알데하이드 용액으로 다시 관류하 여 1차 고정을 실시하였다. 1차 고정이 된 뇌를 마우스에서 채취한 뒤에 1일 동안 30% sucrose/인산완층액에 넣은 뒤 다시 1일 동안 4% 파라포름알데하이드 인산버퍼 용액에 넣어 후고정시켰다. 고정이 완료된 뇌조직은 드라이아이스로 급속 냉각시킨 뒤에 넁동절편을 만들기 위한 블록으로 만들어 보관하였고 필요한 시기에 넁동절편 으로 제작하여 각종 염색법에 이용하였다.
<147> 또한 약물의 치료효과 모니터링을 위해， 파킨슨 병 치료제로 사용되는 아만 타딘을 상기와 같이 MPTP를 투여한 30 분 후에 1 마리 당 25mg/kg의 용량 및 하루 간격으로 총 7 회 복막 투여하였다. 아만타딘 투여를 마치고 7일이 되는 날짜에 Cy7.5가 표지된 본 발명의 펩타이드를 주입하였으며， 상기와 같은 방법으로 영상 촬영 및 조직 염색을 시행하였다. 아포토시스는 실시예 <1-1>에서와 같은 방법으로 분석하였다.
<148>
<149> 그 결과, 도 4a에서 보듯이， 파킨슨 병 마우스에 본 발명의 펩타이드를 주입 한 경우 강한 근적외선 형광이 뇌 부위에서 확인되었다. 반면 대조군 펩타이드는 근적외선 형광이 거의 관찰되지 않았다. 또한 정상 (wild type) 마우스에 본 발명의 펩타이드를 주사한 경우에도 근적외선 형광이 거의 관찰되지 않았다.
<150> 또한 도 4b에서 보듯이， 각각의 뇌를 격리하여 체외에서 근적외선 형광올 측 정한 경우에도 상기 생체 영상과 유사한 결과를 나타내었다.
<]51> 또한 도 4c에서 보듯이, MPTP를 투여하고 1주， 2주 및 3주 후로 진행 되면서 뇌 부위의 근적외선 형광이 점점 더 강해지는 것이 관찰되었다.
<152> 또한 도 5에서 보듯이, 본 발명의 펩타이드 (녹색 형광)와 세포사멸의 바이오
마커인 TUNEL 염색 (붉은색 형광)이 동시에 동일한 세포에서 염색됨을 확인하였다. 이는 본 발명의 펩타이드가 사멸세포에 표적 하는 것임을 나타낸다.
<153> 또한 도 6에서 보듯이, MPTP 투여한 마우스와 비교해 MPTP 투여 후 아만타딘 을 함께 투여한 경우， 근적외선 형광이 더 약해지는 것이 관찰되었다. 이는 약물에 의한 치료효과를 본 발명의 펩타이드를 이용하여 모니터링 할 수 있음을 나타낸다.
<154> 또한 도 7a에서 보듯이， MPTP 투여한 마우스와 비교해 MPTP 투여 후 아만타 딘을 함께 투여한 경우, 도파민성 뉴론에 특이적인 마커인 tyrosine hydroxylase(TH)에 대한 항체 염색이 증가되는 것이 관찰되었다. 도 7b는 도 7a에 서 TH 염색된 도파민성 뉴론의 수를 정량화 한 것으로， 약물에 의한 치료효과로 뉴 론의 수가 통계적으로 유의하게 (ρθ.01) 증가하는 것을 보여준다.
<155> 또한 도 7c에서 보듯이, MPTP 투여한 마우스와 비교해 MPTP 투여 후 아만타 딘을 함께 투여한 경우， 세포사멸의 바이오마커인 TUNEL 염색 (붉은색 형광)이 감소 되는 것이 관찰되었다. 또한 본 발명의 펩타이드 (녹색 형광)와 TUNEL 염색이 동일 한 세포에서 염색되는 것이 확인되었다. 도 7d는 도 7c에서 TUNEL 염색된 사멸세포 의 수를 정량황 한 것으로， 약물에 의한 치료효과로 뉴론의 세포사멸이 줄어드는 것을 잘 보여준다.
【산업상 이용가능성】
<156> 이상 살펴본 바와 같이， 본 발명의 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드는 뇌혈관 장벽을 통과할 수 있으몌 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포와 특이적으로 결합할 수 있다. 따라서， 본 발명의 펩타이드는 퇴행성 뇌 신경질환에서 아포토시스의 검출, 더 나아가 퇴행성 뇌신경질환 조직 내 사멸세포 (특히, 사멸신경세포)의 검출과 영상진단， 표적 약물전달， 치료진단 등의 목적으로 다양하게 사용될 수 있다.
Claims
【청구의 범위】
【청구항 11
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포 함하는 뇌 조직으로의 약물전달용 조성물.
【청구항 2】
제 1항에 있어서， 상기 펩타이드는 발색효소 방사성동위원소， 크로모포어 (chromophore) , 발광물질， 형광물질 (f luorescer) , 상자성입자 (super paramagnetic particles) 및 초상자성입자 (ultrasuper paramagnetic particles)로 이루어진 군에 서 선택되는 하나로 표지된 것을 특징으로 하는 조성물.
【청구항 3】
제 1항에 있어서， 상기 조성물은 알츠하이머 병， 파킨슨 병， 헌팅턴 병 (Huntington's disease) , 루게릭 병 (Amyotrophic lateral sclerosis) , 니만一픽 병 (Nieman-Pick disease) 및 뇌졸중 (stroke)으로 이루어진 군에서 선택된 질환에 특 이적인 것임을 특징으로 하는 조성물.
【청구항 4]
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포 함하는 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotk cell) 검출용 조성물.
【청구항 5]
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 퇴 행성 뇌신경질환 치료제를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 예방 및 치료 용 조성물.
【청구항 6】
제 5항에 있어서， 상기 퇴행성 뇌신경질환은 알츠하이머 병， 파킨슨 병， 헌팅 턴 ^Huntington's disease) , 루게릭 병 (Amyotrophic lateral sclerosis) , 니만一 픽 병 (Nieman-Pick disease) 및 뇌졸중 (stroke)인 것을 특징으로 하는 조성물.
【청구항 7]
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드， 이와 결합된 퇴행 성 뇌신경질환 치료제 및 표지물질을 유효성분으로 포함하는 퇴행성 뇌신경질환의 치료진단용 조성물.
【청구항 8】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 유효성분으로 포 함하는 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화용 조성물.
【청구항 9】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 약 물을 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계를 포함하는 뇌 조직으 로의 약물전달 방법 .
【청구항 10】
뇌 조직으로의 약물전달제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 '약물의 용도.
【청구항 11】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 이를 필요로 하 는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하는 단계를 포함 하는 퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출 방법.
【청구항 12]
퇴행성 뇌신경 질환 부위의 사멸 세포 (apoptotic cell) 검출용 제제의 제조 를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드의 용도.
【청구항 13】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 퇴 행성 뇌신경질환 치료제를 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 예방 및 치료 방법.
【청구항 14]
퇴행성 뇌신경질환 예방 및 치료제 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미 노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제의 용도.
【청구항 15】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드， 이와 결합된 퇴행 성 뇌신경질환 치료제 및 표지물질을 이를 필요로 하는 개체에 유효한 양으로 투여 하는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환의 치료진단 방법.
【청구항 16】
퇴행성 뇌신경질환의 치료진단용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드, 이와 결합된 퇴행성 뇌신경질환 치료제 및 표지 물질의 용도.
【청구항 17】
서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드를 이를 필요로 하 는 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하여 영상화하는 단계를 포함하는 퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화 방법.
【청구항 18】
퇴행성 뇌신경질환 부위의 영상화용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시 되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드의 용도.
【청구항 19】
치료제와 동시에 또는 순차적으로 서열번호 1로 표시되는 아미노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 표지물질을 개체에 유효한 양으로 투여하는 단계 및 상기 펩타이드를 검출하여 영상화하는 단계를 포함하는 치료제 효과의 모니터링 방법.
【청구항 20]
치료제 효과의 모니터링용 제제의 제조를 위한 서열번호 1로 표시되는 아미 노산 서열을 가지는 펩타이드 및 이와 결합된 표지물질의 용도.
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2012
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