WO2011035500A1

WO2011035500A1 - 椒苯酮胺或其盐在制备预防/治疗脑病的药物中的用途

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Publication number: WO2011035500A1
Application number: PCT/CN2009/074526
Authority: WO
Inventors: 万华印; 李茹冰; 周力践; 刘铁球; 陈阳述; 李永贺
Original assignee: 广州市众为生物技术有限公司
Priority date: 2009-09-24
Filing date: 2009-10-20
Publication date: 2011-03-31
Also published as: EP2481406A1; EP2481406A4; EP2481406B1; US8916607B2; CN102028681B; CN102028681A; US20120184607A1

Description

说明书椒苯酮胺或其盐在制备预防 /治疗脑病的药物中的用途技术领域

本发明涉及椒苯酮胺或其盐在制备预防 /治疗哺乳类动物包括人脑病的药物中的应用，尤其涉及椒苯酮胺及其盐在制备预防 /治疗脑缺血、缺血 /再灌注损伤或脑出血及脑损伤药物中的应用。背景技术

脑病（encephalopathy) 指任何脑器质性损害，系由遗传、先天性脑发育不全、脑外伤、脑肿瘤、脑出血、脑梗阻、感染、化学药物中毒等原因引起的大脑神经组织损伤，进而导致患者智力低下、思维、语言障碍、感觉异常、肢体瘫痪甚至大小便失禁等症状体征的一大类疾病。常见的脑病可以分为三大类：一是遗传、先天发育不良造成的小儿脑瘫，智力低下等；二是外伤造成的急性脑损伤后遗症、脑血管病造成的脑中风后遗症等；三是因中枢神经纤维损伤导致脑神经细胞衰老退化的慢性退行性疾病，包括老年痴呆症、脑萎縮、帕金森病等。

纵观各种脑病，由于神经信息传导通道（脑路）——神经纤维的堵塞，造成神经各种信息的传导不畅，致使脑神经细胞功能缺失，是脑病的病变本质。例如：中风是指由于脑血管堵塞或破裂导致神经纤维传导功能的损伤、堵塞、断裂，进而使神经细胞变性、损伤或死亡，出现偏瘫、失语等感觉、运动功能障碍；胎儿脑神经纤维发育受阻、不能促进神经细胞的分化成熟，新生儿缺血、缺氧，就造成以中枢性运动功能障碍为主的脑性瘫痪；大脑黑质神经元数量减少，合成多巴胺不足，就会导致帕金森病；信息传导通道一神经纤维的衰老与凋亡加剧，导致脑细胞的衰老 (脑组织萎縮），就形成了老年性痴呆。

脑病正在越来越严重地威胁着人类健康，也是当今社会、医学界关注的热点问题之一。据调查，脑梗塞、脑出血、脑萎縮痴呆症、小儿脑瘫、癫痫、帕金森病、脑外伤等脑病、神经损伤性疾病占人类疾病总数的 30%左右。而且脑梗塞、脑出血等还具有高发病率、高死亡率、高致残率、高复发率等四高的特征。我国每年脑病新发病人约 1000万例，其中致死致残率约占 75%，国家和患者家庭花在脑病治疗上的医疗费用达数百亿元。脑血管疾病按动脉损伤分为：脑梗死、脑出血、蛛网膜下腔出血、高血压脑病及其他种类动脉性疾病。按静脉损伤分主要是颅内静脉系统血栓形成，其中最常见的是脑梗死、脑出血。脑出血是指脑动脉、静脉或毛细血管破裂导致脑实质内的出血，约占全部脑血管病的 20%— 30%。

脑卒中（Stoke ) 又称中风或脑血管意外，是由于缺血或出血引起的急性局部、短暂或持久的脑损害，通常包括脑出血、脑梗死、蛛网膜下腔出血在内的一组疾病，是引起人类死亡的前 3位原因和致残的第一位原因。根据卫生部调查，我国每年卒中发病率为 150/10万，病死率 120/10万，现有脑卒中患者人数约 500— 600万，其中约 75 %不同程度丧失劳动能力，重度致残者占 40 %以上。随着人口老龄化，卒中的问题将日益严重，社会和经济将不堪重负。其中缺血性中风占急性脑血管病的 43 — 65 % , 病死率为 15 %— 25 %，是我国医学界亟待攻克的难题。

目前，国内外越来越多的报道指出早期治疗缺血性脑血管疾病的重要性，特别在发病 3〜6小时内。美国 NINDS的 tPA溶栓 (发病后 3小时内）研究结果表明，神经功能恢复正常者较对照组增加 11 %，但治疗组 36小时内颅内出血明显增加（6. 4 % 比 0. 6 由于溶栓治疗尚处于初期研究阶段，早期出血率高，其危险 /疗效比还需明确。抗凝治疗 (包括肝素和口服抗凝剂）长时期用于防止血栓的扩延和进展性脑血管病、短暂性脑缺血发作、椎一基底动脉血栓形成和预防脑栓塞再发，其疗效仍不确定，如使用不当，可增加颅内和全身出血的危险。降纤治疗的大随机、对照、双盲的研究报道不多，仍处于研究阶段，降纤至何种程度，如何减少出血并发症的问题，尚待解决，其疗效也有待进一步评价。

在介入治疗方面，据报道，颈动脉内膜切除术对防治短暂性脑缺血性发作已取得肯定疗效，对颈内动脉闭塞 70 %以上者，疗效相对较好。虽然这些介入性治疗，已引起越来越多的重视，但资料不多，包括颅内外血管经皮腔内血管成形术、血管内支架置入或与溶栓治疗结合，尚处于研究阶段，缺乏成熟经验。

脑保护剂是当今研究的热点，在理论上有一定的依据，但迄今尚未找到经临床研究证明确定有效的制剂。

总之，急性缺血性脑血管病的治疗，迄今尚无重大突破，方法虽多，疗效尚不十分肯定，有些正在研究中。发展有效的，毒副反应小的，化学结构新型的，能治疗脑血管病的新药是目前临床的迫切需要，并有助于加深对脑血管病的病理生理过程的认识。颅脑创伤排全身创伤发生率第二位，但致死率和致残率却位居第一。我国每年大约有 60万颅脑创伤病人，其中死亡约 10万人。颅脑创伤已成为发达国家儿童和青年人伤病致死的首要因素。颅脑创伤病人通常存在意识丧失、运动神经功能障碍、记忆功能障碍和精神功能异常。为了挽救病人的生命，改善他们的生存状态，临床医师常常使用各种脑保护药物，期盼能够促进病人脑功能的恢复。但依据 2008年由中国医师协会神经外科医师分会、中国神经创伤专家委员会首次发布的《中国颅脑创伤病人脑保护药物治疗指南》，目前部分常用药物临床疗效极差，有的甚至有害。

颅脑创伤病人救治除了抢救时间要快之外，更重要的工作是如何合理化、规范化地使用有效的脑保护药物。目前我国医院之间颅脑创伤救治水平差距很大，治疗方法不够规范和合理，认识上亦有差异。长期以来，临床上出现了大量所谓脑保护药物，此类药物的选择使用也存在着很大的盲目性。国外学者已经采用循证医学方法，将 200多种脑保护药物用于治疗急性颅脑创伤病人，但未能发现任何一种临床有特效的药物。而国外一些权威医学杂志，如《柳叶刀》、《新英格兰医学》等刊登的针对此类药物的最新研究结果同样令人失望：如国际多中心通过 10000多例循证医学研究发现超大剂量激素会增加病人死亡率；美国 7个医学中心研究报告显示，硫酸镁对急性颅脑创伤病人不仅无效，甚至有害；白蛋白本是临床治疗急性颅脑创伤脑水肿的常用药物，但不适当长期大剂量使用则可能是有害的； 13个国家 35家医院进行的大样本研究中发现，钙离子拮抗剂一一尼莫地平对外伤性蛛网膜下腔出血无任何治疗作用。

根据上述研究结果，结合我国的基本国情和临床诊治实际情况，《中国颅脑创伤病人脑保护药物治疗指南》对以下 10类药物提出如下意见：对超大剂量激素、镁制剂和超大量白蛋白提出了强烈不推荐使用的意见；而常规剂量按药典使用。对尼莫地平、谷氨酸受体拮抗剂、自由基清除剂、缓激肽拮抗剂和线粒体功能保护剂不推荐使用。因多种肽类脑神经营养药物治疗颅脑创伤病人的疗效缺乏一级临床循证医学证据，建议慎重使用。对经长期临床应用证明无不良反应，且价格便宜，药理作用明确的三磷酸腺苷、辅酶 A、维生素 B6和维生素 C，建议推荐使用。

因此，临床上急需提供新型脑保护药物。发明内容

本发明的目的在于提供椒苯酮胺或其盐在制备预防 /治疗脑病的药物中的应用。所述椒苯酮胺或其药学上可接受的盐在预防 /治疗脑血管疾病及脑损伤的疗效明显、毒副反应小。

椒苯酮胺或其药学上可接受的盐在制备预防 /治疗哺乳动物脑病的药物中的应用。

所述的哺乳动物优选人；所述的药物优选为脑保护药物。

椒苯酮胺或其药学上可接受的盐在制备预防 /治疗人脑病的药物中的应用。上述的脑病包括脑损伤疾病或脑血管疾病。

所述的脑血管疾病是指脑缺血、脑缺血 /再灌注损伤或脑出血。

所述的脑出血包括：高血压脑出血、继发于梗死的脑出血、肿瘤性脑出血或动脉炎引起脑出血等；所述的脑缺血包括：颈动脉系统脑缺血或椎 -基底动脉系统脑缺血等。

椒苯酮胺在制备预防 /治疗脑缺血或缺血 /再灌注损伤药物中的应用。

本发明通过在体动物实验表明椒苯酮胺对脑缺血及缺血 /再灌注损伤引起的脑梗塞有显著治疗作用。

椒苯酮胺或其盐在制备治疗缺血性脑血管疾病药物中的应用，其中的缺血性脑血管疾病是指脑梗塞、脑动脉硬化。本发明通过实验表明椒苯酮胺和药学上可接受的椒苯酮胺盐降低血管通透性，抗脂质过氧化；保护受损脑细胞，从而发挥治疗缺血性脑血管疾病作用。

上述的椒苯酮胺或其药学上可接受的盐与药物上可接受的载体和 /或稀释剂混合，组成一种药物组合物。

所述的药物上可接受的载体和 /或稀释剂为本领域技术人员通常所知晓，也就是说，本领域技术人员可以根据实际需要，通过有限次的实验，即可知晓这种所述的药物上可接受的载体和 /或稀释剂。为此，本领域技术人员无需再付出更多的创造性劳动。

所述药物组合物还可与其他药物合用在制备预防 /治疗脑损伤药物的应用。所述药物组合物与其他药物合用在制备预防 /治疗脑血管疾病药物的应用。本发明还从神经生化、神经病理学和行为学三个方面，观察和研究盐酸椒苯酮胺对胶原酶所诱导的大鼠脑出血模型的保护作用。

本发明提供了盐酸椒苯酮胺在脑缺血 /再灌注所致小鼠血管性痴呆保护方面的应用。本发明还通过在体动物实验表明椒苯酮胺单独或联合用药对大鼠脑缺血和脑损伤有显著保护作用。

其中所述的椒苯酮胺盐为药学上可接受的椒苯酮胺盐，包括有机酸盐、无机酸盐、有机碱盐或无机碱盐，其中有机酸包括乙酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖醛酸、三氟乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、酒石酸；无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸；有机碱包括铵、葡甲胺、氨基葡萄糖、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、组氨酸；无机碱盐包括钠、钾、钙、镁、锌、钡、锂盐。

上述的药学上可接受的盐优选盐酸椒苯酮胺。

本发明提供了注射用盐酸椒苯酮胺在脑保护方面的应用。

本发明还提供了一种预防 /治疗哺乳动物脑病的方法，所述的方法包括给予受试者一种包含椒苯酮胺或其药学上可接受的盐的药物。

所述的哺乳动物为人；所述的脑病为脑损伤疾病或脑血管疾病；所述的脑血管疾病是指脑缺血、脑缺血 /再灌注损伤或脑出血；所述的脑出血包括：高血压脑出血、继发于梗死的脑出血、肿瘤性脑出血或动脉炎引起脑出血；所述的脑缺血包括：颈动脉系统脑缺血或椎-基底动脉系统脑缺血。

本发明还提供了一种包含椒苯酮胺或其药学上可接受的盐的药物，所述的药物用于预防 /治疗哺乳动物脑病。

所述的椒苯酮胺用于预防 /治疗脑缺血或缺血 /再灌注损伤。

椒苯酮胺盐酸盐（也称为盐酸椒苯酮胺）的结构如下：

C₂₁H₂₄0₄NC1 =389. 5

使用时，本发明的椒苯酮胺或其药学上可接受的盐可以制成水剂、粉针、片剂或胶囊等，分别采用静脉注射、肌肉注射或口服的方法。根据不同的动物及实验模型，用量为 0. 1— 80mg/kg。剂量随患者的病情、患者的年龄和体重而改变，在静脉注射情况下，剂量通常为成人 1-4 mg/kg/天；在肌肉注射的情况下，剂量通常为成人 2-10 mg/kg/天；在口服给药情况下，剂量通常为成人 20-60 mg/kg/天。

本发明通过药理研究发现，盐酸椒苯酮胺用作制备治疗脑血管疾病药物应用时，对于脑缺血与脑再灌注损伤均有良好的治疗作用。本发明的研究从脑生理功能、神经细胞生化及病理形态学等方面表明椒苯酮胺或其盐是一个治疗效果好、毒副反应低的化合物，疗效优于现有的相关脑血管病药物，有可能发展成为治疗脑血管疾病、对抗脑缺血和再灌注损伤和脑损伤的新药。

此外，本发明的椒苯酮胺或其药学上可接受的盐的合成路线设计合理，合成工艺操作简便，原料易得，各步反应条件稳定，收率较稳定且无严重的三废污染。反应废液多为酸、碱溶液经简单处理即可排放，完全适合工业化生产的要求。具体实施方式

以下为本发明的具体实施，所述的实施例用于描述本发明，而不是限制本发明。实施例 1

椒苯酮胺及盐酸椒苯酮胺对培养脑神经细胞损伤的预防及治疗作用。

1、实验动物：普通级 Sprague Dawley大鼠 18只，体重 250g_280g。多聚赖氨酸为 Sigma公司产品； DMEM培养基为 Gibco公司产品；其余试剂均为分析纯。

2、神经细胞原代培养

怀孕 15d大鼠水合氯醛麻醉， 75 %乙醇消毒胸腹部，在无菌条件下取出胎鼠，剥出，分离两侧皮层组织，用手术刀切成糜状，移入含 0. 125 %胰蛋白酶的磷酸缓冲液中消化 30 min (37°C)后弃去消化液，加入含 10%胎牛血清， 10%马血清， 100U/ml 青霉素， lOOU/ml链霉素的 DMED培养液，用小口径吸管反复吹打分散， 200 目细胞筛过滤后，以 DMEM调整细胞浓度至 10⁵个 /ml ,接种至预先涂有 0. 01 %多聚赖氨酸的培养皿中，每皿 2 ml，置（：0₂培养箱中 37°C孵育，于培养第 3天在培养液中加入细胞分裂抑制剂阿糖胞普储备液以抑制非神经元细胞的过度增殖，作用 48h后换新鲜培养液，以后每周换液 2次，每次更换半量液。

3、 NMDA诱导神经细胞损伤

细胞培养至 14d后，随机分正常对照组， N-甲基 -D-门冬氨酸 (NMDA) 50mmol/L 损伤组， NMDA+椒苯酮胺（JBTA₁ 50mmol/L) NMDA+盐酸椒苯酮胺（JBTA₂ 10、 100mmol/L) 组， NMDA+神经节苷脂（Gangl ioside, GM, 50mmol/L) 对照组。各组换以含不同药物的低血清 DMEM (5 %胎牛血清， 5 %马血清， 30 mmol/L HEPES)继续培养 6h，再加 50mmol/L NMDA, 孵育 12h后观察细胞形态，计数 200个细胞，计算细胞死亡率。

4、结果

4. 1对培养神经细胞形态变化的影响

正常神经细胞培养至 14d 时，生长良好，胞体呈锥形、梭形或三角形，突触粗而长，呈树根状交织成网；当细胞在含 50mmol/L NMDA的培养基中孵育 12h时，细胞出现肿胀、轮廓模糊，神经元突触断裂、消失、甚至细胞崩解；如细胞同时与 10、 lOOmmol/L盐酸椒苯酮胺孵育，则细胞损伤程度明显减轻，细胞形态基本保持完整，但细胞密度有所降低，仍可见突触断裂等现象；表明盐酸椒苯酮胺对 NMDA诱导的大鼠神经细胞损伤有显著的保护作用。 50mmol/L神经节苷脂的保护作用与 10mm_Ol/L盐酸椒苯酮胺相当。

4. 2对培养神经细胞死亡率影响

神经细胞在含 50mmol/L NMDA的培养基中孵育 12h后，台盼蓝染色着色细胞明显增多（NMDA组 55% vs正常对照组 10 %， P〈0. 001)，提示细胞死亡率增加；于培养基中同时加入 10、 100 mmol/L盐酸椒苯酮胺（分别为 38 %、 24 %)可明显降低细胞死亡率，与 NMDA组相比有显著差异。

表 1对培养神经细胞死亡率的影响

分组齐 Ll量 (mmol/L) 死亡率

正常对照 ― 10%

NMDA 50 55%

丽 DA+JBTA 50 30%

丽 DA+JBTA₂ 10 38%

100 24%

NMDA+GM 50 40%

实验例 2

椒苯酮胺及盐酸椒苯酮胺对闭合性脑外伤小鼠的治疗作用。

跳台实验自动记录仪，中国医学科学院药物所仪电室；荧光分光光度计，日本 HITACHI公司；酶标仪。

实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重 20g-22g。

取小鼠 70只，随机分为正常对照组，模型组， 2mg/kg椒苯酮胺（用时以 5%葡萄糖注射液稀释至合适浓度，下同）组、盐酸椒苯酮胺 1 mg/kg组、 2 mg/kg组、 4 mg/kg组及 4mg/kg ATP组，每组 10只。禁食 16小时后造成小鼠闭合性脑外伤模型，各组静脉给药， 24小时后剥取鼠脑，称量湿重， 70°C烘干 24小时，称干重，计算脑含水量；脑含水量高于正常值表示脑部水肿。

结果如表 2所示，闭合性脑外伤造成小鼠脑严重水肿，给予不同剂量的盐酸椒苯酮胺或椒苯酮胺，小鼠脑水肿有不同程度的减轻，且呈剂量依赖性。椒苯酮胺作用优于 ATP。

表 2盐酸椒苯酮胺对闭合性脑外伤小鼠脑水肿的影响 (X士 SD， n=10)

试验组脑含水正常对照 75. 15 ± 6. 29"

模型 89 ± 9. 24

椒苯酮胺 2mg/kg 78. 31 ± 5. 12**

盐酸椒苯酮胺 lmg/kg 82. 05 ± 7. 57*

2mg/kg 78. 67 ± 5. 38"

4mg/kg 75. 43 ± 8. 38"

ATP 4mg/kg 79. 15 ± 6. 83*

与模型组比较， *Ρ〈0· 05， **Ρ〈0. 01 实施例 3

盐酸椒苯酮胺对血管性痴呆小鼠的神经保护治疗作用。

盐酸椒苯酮胺：用时以 5%葡萄糖注射液稀释至合适浓度。跳台实验自动记录仪，中国医学科学院药物所仪电室产品；荧光分光光度计，日本 HITACHI 公司产品；酶标仪。

实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重 20g-22g。

1、盐酸椒苯酮胺对脑缺血再灌注小鼠学习记忆功能障碍的改善作用

动物随机分为假手术组，模型组，盐酸椒苯酮胺 1 mg/kg组、 2 mg/kg组、 4 mg/kg 组，每组 10只。

禁食 16小时后建立小鼠缺血再灌注所致痴呆模型，具体操作如下：小鼠以戊巴比妥钠（60 mg/kg , ip)麻醉后，仰卧位固定。颈正中切口，分离双侧颈总动脉，并穿以零号丝线。双侧颈总动脉阻断血流 10 min, 然后恢复血流 10 min, 如此重复 3 次，缝合皮肤。置小鼠于正常伺养条件。假手术组只分离双侧颈总动脉。

缺血再灌注后 10 min, 尾静脉注射药物，缺血再灌注 24h后，第 2次给药。给药半小时后进行跳台实验。将待测小鼠放入跳台仪中，适应环境 3 min，然后向底部栅板通电，观察小鼠跳上高台时间（反应时间）和 5 min 内小鼠由高台跳下受到电击的次数 (训练期错误次数）。 24 h后，再次给药，然后进行第 2次跳台实验测定记忆获得功能。将小鼠放于实验仪高台上，底部栅板同时通电，记录小鼠跳下高台的时间 (潜伏期)和 5 min内受到电击次数 (重测期错误次数）。

结果如表 3所示，重复脑缺血再灌注可以使小鼠出现明显的学习记忆障碍，反应时间延长，错误次数增加，潜伏期縮短。盐酸椒苯酮胺对缺血再灌注引起的学习记忆障碍有改善作用，减少反应时间，延长潜伏期，减少测试期和重测期错误次数，与模型组比较有显著性差异（*P〈0.05或 **P〈0.01)。

表 3盐酸椒苯酮胺对脑缺血再灌注小鼠学习记忆功能的影响 (X士 SD， n=10) 组别学习成绩记忆成绩

反应时间 s 错误次数潜伏期 s 错误次数假手术组 10.44 ±7.98" 4.21 ±2· 18" 357.86 ±128.5" 0.44 ±1.45 模型组 34.95±22· 19 11.89±5.08 133.69±128· 62 3.63±2· 32 盐酸椒苯酮胺

lmg/kg 16.53±11.75* 5.37±3.63* 249.84±133.55 1.31±0.58*

2mg/kg 13.34±8· 85* 5.08 ±3.34" 308.13 ±97.73" 0.73 ±0.58"

4mg/kg 7· 11±4· 06" 4· 5 ±3· 05" 352.79±141.5" 0.58 ±1.45 与模型组比较 *Ρ〈0.05， **Ρ〈0.01

2、盐酸椒苯酮胺对脑缺血再灌注小鼠脑 SOD活性、 MDA和 GSH含量的影响小鼠缺血再灌注方法和给药方式同上，缺血再灌注完成后，断头处死，于 o°c下取出大脑用磷酸缓冲液制成匀浆，邻苯三酚自氧化法测定 SOD 的活性， TBA法测定 MDA的含量， DTNB法测定 GSH的含量，考马斯亮蓝定量蛋白质。

结果如表 4所示，重复脑缺血再灌注可以使小鼠脑匀浆 SOD活性下降， MDA含量升高， GSH含量降低。给予不同剂量盐酸椒苯酮胺可抑制缺血再灌注小鼠脑组织 MDA的升高，增加 GSH的含量，提高 SOD的活性，与模型组比较有显著性差异 (P〈0.05 或 Ρ〈0· 01)。

表 4盐酸椒苯酮胺对缺血再灌注小鼠脑 S0D、 MDA和 GSH的影响（X士 SD， n=10)

与模型组比较 *P〈0.05， **P〈0.01

实施例 4

本实施例涉及盐酸椒苯酮胺用于预防感染性脑水肿的在体实验。

SD大鼠 30只，体重 210g左右。随机分成 3组：生理盐水对照组 (NS，n=10); 百日咳菌液模型组 (PB， n=10)；盐酸椒苯酮胺预处理百日咳菌液组 (JBTA， n=10)。

大鼠颈正中切口，分离左颈总动脉，颈外动脉，颈内动脉及分支，结扎翼腭动脉和枕动脉。夹闭颈外动脉后，用 lml注射器 4.5^#针头于左颈总动脉穿刺向左颈内动脉注射百日咳菌液 0.2ml/kg (百日咳菌液由北京生物制品研究所提供的灭活菌液，含菌 10.8X107ml)， 15s内注射完毕。 NS组则用同法注射等量的无菌生理盐水。盐酸椒苯酮胺组在注百日咳菌液前 48h每天静脉注射 0.5mg/kg, 连续 2d。各组大鼠注菌或生理盐水 4h后断头处死。

ELISA法与 Griess法分别测脑组织匀浆中 IL-1 β、 TNF- α 和 NO含量。

o

盐酸椒苯酮胺预处理后能显著降低百日咳菌液脑水肿大鼠的脑含水量及钠离子

〇

的含量，增加钾离子含量。表明盐酸椒苯酮胺预处理对大鼠感染性脑水肿有保护作用。结果见表 5。

盐酸椒苯酮胺预处理后脑含水量和钠钾离子变化 (X士 SD， n=10)

分组动物数脑含水量 (％) Na⁺ (nmol/kg) K⁺ (nmol/kg)

NS 10 69.2±0.26 170.9±6· 25 393.1±9· 77

PB 10 72.3±0· 26° 243.8±16.3° 315.3±22· 0¹)

JBTA 10 69.8± 0.44³⁾ 181.1±26· 1³⁾ 436.3 ±43.9¹⁾²⁾

注：与 NS比较 ^υΡ<0.01 与 NS比较 ^¾Ρ<0.05 与 ΡΒ比较 <0.01 盐酸椒苯酮胺预处理组 IL-1 β、 TNFa 及 NO含量显著降低 (P<0.01)，结果见表 6。

表 6盐酸椒苯酮胺预处理对感染性脑水肿大鼠脑组织、 TNF-ct及 NO含量的影响分组 IL-1 β (pg/g) TNF- a (pg/g)

NS 254.1±70· 4 350.7±80.3 76.55±8· 40

PB 403.3 ±39.5° 800.3±89.1° 111·3±14· 4°

JBTA 318.4±43.8²⁾³⁾ 499.7 ± 134.9²⁾³⁾ 86.1±5.9²⁾³⁾

注：与 NS组比较 "Ρ<0.01，与 NS组比较 ^¾Ρ<0.05，与 PB组比较 Ρ<0.01 注菌后 4h大鼠脑含水量、 Na⁺含量增加， K⁺含量降低，表明已成功的建立了大鼠感染性脑水肿模型。同时脑组织中 IL-1 P、 TNF- α 及 NO的含量增加，与相应 NS对照组比较差异有极显著性 (P<0. 01)。提示它们与感染性脑水肿关系密切，上述因子的大量生成可能加重感染性脑损伤。本发明发现将大鼠经盐酸椒苯酮胺预处理后再制成感染性脑水肿模型，与未作预处理的大鼠感染性脑水肿模型比较，预处理后脑组织的 IL-l i TNF- a 及 NO的含量明显下降，同时脑含水量， Na⁺含量降低， K⁺含量增加，与模型组比较，差异有极显著性 (Ρ < 0. 01)。说明盐酸椒苯酮胺可减少 IL-1 β、 TNF- a 及 NO的生成量，对感染性脑水肿大鼠有保护作用。实施例 5

本实施例涉及盐酸椒苯酮胺联合临床常用脑病药物用于预防和治疗感染性脑水肿的在体实验。

感染性脑水肿模型同实施例 4。研究盐酸椒苯酮胺和特异性 L-型钙离子通道阻断剂尼莫地平对感染性脑水肿脑含水量和伊文思蓝（EB) 含量的影响，旨在为临床治疗提供实验和理论依据。

健康 SD大鼠 90只，随机分为 4组， gp (l)生理盐水对照 (NS)组， 20只；（2)百日咳菌液 (PB)组， 30只；（3)尼莫地平治疗 (Mm)组， 20只；（4) 盐酸椒苯酮胺预处理后尼莫地平治疗（JBTA+Nim)组， 20只。各组又分为 30min、 4h和 24h 3个时间组。

注菌后 5min内向静脉内注入尼莫地平 (Mm治疗组， 0. 25mg / kg体重）， 24h尼莫地平治疗组每 8h重复注射 1次相同剂量；盐酸椒苯酮胺预处理后尼莫地平治疗组于实验前 48 h和 24h向静脉内注入盐酸椒苯酮胺（0. 5mg / kg, 共 2次），预处理后再进行尼莫地平治疗。盐水组同菌液组操作一样，在同样时间内注射等体积的生理盐水。注菌或注生理盐水后 lOmin内从舌下静脉注入 2%的伊文思兰（ΕΒ, Ο. 2mL/100g 体重）。各组动物观察至规定时间后断头处死，迅速取脑，去除皮质表面的软脑膜及凝血块，取左侧大脑半球后 1 I 3全层脑组织标本（约 0. 1〜0. 2g,包括灰质和白质），行干湿法测定脑组织水分含量及伊文思兰含量测定、脑组织电镜检查。

各个时间组感染性脑水肿脑组织含水量与 EB含量的均数、标准差、方差分析及其相关分析结果见下表。结果显示，应用尼莫地平治疗后注菌侧脑组织含水量和 EB 含量明显低于百日咳菌液组脑组织含水量和 EB含量 (P<0. 05)，以 4h治疗组疗效最佳。盐酸椒苯酮胺预处理后尼莫地平治疗组脑组织含水量与 EB含量在 30min时间组无明显改变，在 4和 24h组则明显降低 (P<0. 05)，与单独尼莫地平治疗组比较差异有显著性 (P<0.01)。菌液组各时间亚组脑组织含水量与 EB 的含量呈高度正相关 (r 〉0.90， Ρ<0·05)。表 7 不同时间大鼠感染性脑水肿 ΕΒ和脑含水量 (BWC)及其相关系数 (X士 SD)

n BWC (%) ΕΒ ( μ g / g ww) r (Ρ)

30 min NS 5 76. 83 + 0. 39 1. 5±0· 35 0. 87(Ρ<0.05)

PB 5 78. 54 + 0. 50^Δ 3. 01±0· 72^Δ 0. 98 (Ρ<0.01)

Nim 5 77. 26 + 0. 34* 2. 0±0· 18* 0. 95(Ρ<0.01)

JBTA+ Nim 5 76. 47 + 0. 64^Δ 1. 85±0· 53^Δ 0. 97(Ρ<0.01)

4 h NS 8 77. 14±0· 20 1. 87±0· 37 0. 98 (Ρ<0.01)

PB 10 80. 24±1· 70^ΔΔ 5. 35±1· 78^ΔΔ 0. 97(Ρ<0.01)

Nim 8 77. 15±0· 66* 2. 65 ±0· 44* 0. 75(Ρ<0.05)

JBTA+ Nim 6 75. 54 + 0. 44* 1. 98 ±0.70" 0. 96 (Ρ<0.01)

24 h NS 6 76. 84 + 0. 19 1. 68±0· 41 0. 99 (Ρ<0.01)

PB 10 79. 23±1· 04^Δ 3. 1±0· 9^Δ 0. 91(Ρ<0.01)

Nim 7 76. 98 + 0. 50* 2. 00 ±0· 6* 0. 66(Ρ〉0· 05)

JBTA+ Nim 7 73. 99 + 0. 67* 1. 81±0· 77* 0. 54(Ρ〉0· 05)

*Ρ<0.05， **Ρ<0.01， vs PB group; ^ΔΡ<0.05， ^ΔΔΡ<0.01， vs NS group;

BWC = brain water content； EB = Evan blues; PB = Pertussis Bacilli

电镜检查结果表明： 4 h菌液组内皮细胞明显肿胀，脑血管周围间隙增宽，胶质细胞足突明显肿胀；胞浆结构模糊，线粒体水肿，细胞器胀肿。 24 h菌液组除上述改变外，主要表现为神经细胞核浓聚固縮，出现 "暗黑细胞" ，说明 24 h菌液组发生神经元迟发性坏死。

尼莫地平是一种选择性较强的二氢吡啶类有机钙拮抗剂，易于透过血脑屏障 (BBB), 一方面选择性作用于脑血管，对脑血管具有选择性扩张作用，解除脑血管痉挛、改善脑微循环和保护 BBB; 另一方面，尼莫地平特异性阻断神经细胞膜上 L- 型钙离子通道，恢复 Ca²⁺_ATP酶的活性，减轻脑损伤时 Ca²⁺内流，从而减轻脑水肿。本研究发现 4h和 24h 盐酸椒苯酮胺预处理后尼莫地平治疗组脑组织水分含量和 EB 的含量则明显下降，作用优于单用尼莫地平组。说明盐酸椒苯酮胺预处理后尼莫地平治疗组对于迟发性脑水肿有防治作用，即 L-型钙离子通道阻滞剂 (如尼莫地平)与盐酸椒苯酮胺联合应用，可从不同的环节阻断细胞外 Ca²⁺内流，对大鼠百日咳菌液所致的感染性脑水肿有治疗的作用。实施例 6 盐酸椒苯酮胺对局部脑缺血大鼠的治疗保护作用

尼莫地平注射液，山东新华制药股份有限公司产品，规格： 10 mg/50 ml， TUNEL 试剂盒：南京建成生物工程开发公司。

实验动物：普通级 SD大鼠 60只，体重 250g-280g，

1、局部脑缺血模型制作

动物随机分为假手术组，模型组，尼莫地平组 (Nim， 1 mg/kg) , 盐酸椒苯酮胺组（0. 5、 1、 2mg/kg) , 每组 10只。禁食 16小时后，水合氯醛（350 mg/kg, ip)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线 (选用直径 0. 24尼龙线，长度 5. 0cm)由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为 2 cm。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成右侧大脑中动脉局灶性缺血模型（MAC0); 假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离（以上实验均在 23°C〜25°C进行）。各组动物手术完成 30 min后分别给予相应药物。

2、神经行为评分和 TTC染色测定梗死面积

24小时后观察并记录大鼠的行为障碍：（1)提鼠尾观察前肢屈曲情况，如双前肢对称伸向地面，计为 0分，如手术对侧前肢出现腕屈曲计为 1分，肘屈曲计为 2分，肩内旋计为 3分，既有腕屈曲和 /或肘屈曲，又有肩内旋者，计为 4分。（2)将动物置于平地面上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。如双侧阻力对等且有力，计为 0 分，如向手术对侧推动时阻力下降者，根据下降程度不同分为轻、中、重三度，分别计为 1， 2和 3分。（3)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。双前肢肌张力对等且有力者计为 0分。同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为 1， 2 和 3分。（4)动物有不停地向一侧转圈者，计为 1分。根据标准评分，满分为 11分，分数越高，表示动物行为障碍越严重。

行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切成 5片，脑片用红四氮唑 (TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，染色后照相，用中国航空航天大学病理图像分析软件求梗塞面积比。

结果如表 8所示，缺血 24小时后，大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也出现明显的灶状缺血坏死区，达到全脑的 25 %左右；给予不同剂量的盐酸椒苯酮胺 (0. 5、 1、 2mg/kg) , 动物行为障碍有不同程度的减轻，大鼠脑缺血区也有明显縮小。表 8盐酸椒苯酮胺对局部脑缺血大鼠神经行为、脑梗死面积的影响 (X士 SD， n=10) 组别行为障碍（分）缺血面积（mm²)

假手术组 0 0

模型组 10.58±1.27 27.26±3· 22

尼莫地平组 6.21 ±2.88" 21.39±3· 45"

0.5mg/kg 7.59±2· 19* 21.51±7· 94*

盐酸椒苯酮胺 1. Omg/kg 6.79 ±2.65" 18.17±3·9广

2. Omg/kg 4.83 ±2· 53" 13.57 ±3· 68"

与模型组比较 *Ρ〈0.05，病理观察：经 TTC染色后的脑片置 10%福尔马林中固定，经脱水、浸蜡、包埋、切片等步骤后，制成 8 μπι厚的组织切片，甲苯胺蓝染色，在光学显微镜下进行检查，并进行细胞计数。计数的方法：选择每只大鼠视交叉与漏斗柄连线中点处的病理切片，以固定范围的皮层下基底节为观察对象，以细胞核消失、细胞体暗染的坏死神经元为计数对象，用细胞计数器，计算坏死神经元数占总神经元数的百分比。

数据用 X士 SD表示，组内给药前后、组间均以参比差值法 (AN0VA)进行统计学处理。

病理检查结果： MCA0后 24h，模型组的大鼠患侧半球 MCA供血区苍白、无光泽，脑病理切片显示，于 MCA 闭塞侧脑组织有严重损伤的坏死中心区和轻中度损伤的半影区及其以外的外周区，其中半影区对缺血性变化较为敏感，在模型组大鼠表现为大量神经元周围间隙扩大，出现散在的暗染神经元，神经细胞出现不同程度的皱縮。对侧脑组织未见病理改变。给予盐酸椒苯酮胺组动物有不同程度的减轻。我们以相同切面的脑片半影区来进行细胞计数。由表 9可见，盐酸椒苯酮胺治疗组皮层、纹状体神经元坏死百分比明显减少，与模型组比较差异显著 (P〈0.05或 P〈0.01)。

表 9盐酸椒苯酮胺对局部脑缺血大鼠神经元坏死百分比的影响 (X士 SD， n=10) 组别神经元坏死百分比（％)

皮层神经元纹状体神经元

假手术组 0 0

模型组 37.4±11· 05 27.2±5· 1

尼莫地平组 24.65±4· 25^a ^! 17.85±4.25*

盐酸椒苯酮胺 0.5mg/kg 25.5 ±3· 4* 18.7 ±3· 4*

1. Omg/kg 14.45 ±2.55^a '* 12· 75 ±2· 55**

2. Omg/kg 11.05 ±1.7" 9.35 ±1.7" 与模型组比较 *Ρ〈0.05，实施例 Ί

本实施例涉及盐酸椒苯酮胺用于预防脑缺血再灌注损伤疾病的动物实验。

采用小鼠线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型，缺血 2h，再灌 24h，证明盐酸椒苯酮胺对缺血再灌注损伤脑的保护作用。

将小鼠用 10 %水合氯醛（350 mg/kg)腹腔注射麻醉，静注给予 lmg/kg， 5mg/kg盐酸椒苯酮胺或 20Vkg的辅酶 A，（C0A)，按实施例 6所述方法制作大脑中动脉缺血。术后 2h将尼龙线从颈内动脉中拔出，直至头端达颈总动脉分叉处。再灌注 24h。假手术组除不插线外，其余步骤同上。再灌注 24h后存活的小鼠断头取脑，迅速置 -20 °〇冷冻箱中 5 min后取出，在操作台上迅速由前向后行厚 2. 0mm的冠状切片，将切片立即置于 1 %的 TTC磷酸盐缓冲液中，避光常温孵育 30 mino 每隔 10 min翻动脑片使均匀接触到染色液，扫描观察染色结果。

脑梗死体积观察：由于 TTC是脂溶性光敏感复合物，是呼吸链中吡啶-核苷结构酶系统的质子受体，与正常组织中的脱氢酶反应而呈红色，而缺血组织内脱氢酶活性下降，不能反应，故不会产生变化呈苍白。因此，假手术组 (A)脑组织无梗塞，手术组 (B)缺血侧脑组织有明显梗塞现象，脑片梗塞区占整个冠面的百分比为 26. 7士 2. 2 ( ) o 盐酸椒苯酮胺治疗组 (C)可显著縮小缺血侧脑组织梗塞面积，与手术组相比有非常显著差异 (P〈0. 01)， 5mg/kg盐酸椒苯酮胺组效果优于 CoA组。

JBTA对脑缺血模型小鼠脑梗死面积的影响（X士 SD)

组别 n 梗塞面积占整个冠面百分比（％) 假手术组 (A) 8 0

缺血-再灌组（B) 8 26. 70 ± 2. 21

药物组（C) lmg/kg 8 19. 78 ± 2. 6广

5mg/kg 8 16. 55 ± 2. 32"

CoA组（D) 20U/kg 8 20. 53 ± 4· 82*

与手术组比较： **Ρ〈0. 01

结果显示盐酸椒苯酮胺对小鼠脑缺血 /再灌注损伤引起的脑梗塞有显著保护作用。

实施例 8

盐酸椒苯酮胺对大鼠脑出血的预防保护作用。

实验动物： Wistar大鼠，雌雄各半，体重 180— 250g，术前 12h禁食，自由饮水。

1、实验动物分组动物随机分成五个组：假手术（sham) 24h 组；脑出血（ Intracerebral Haemorrhage , ICH) +生理盐水组（模型）; ICH +盐酸椒苯酮胺（JBTA, 2mg/kg)组，称为高剂量组（h) ; ICH+盐酸椒苯酮胺（JBTA，0. 5mg/kg)组，称为低剂量组（1) ; ICH+ 尼莫地平 (Nim, 0. 5mg/kg)组。后四个组又分为 4h， 8h， 12h， 24h四个时间点亚组。生理盐水、盐酸椒苯酮胺和尼莫地平于 ICH造模前 30min经大鼠尾静脉给药，每日一次。缓慢注射，药液总量控制在 1 ml/200g体重：生理盐水也按 1 ml/200g体重给予。每组 Wistar大鼠 7只。

2、大鼠 ICH模型的建立

本文参照 Rosenberg等报道的方法。本发明选用的鼠脑出血模型是胶原酶诱导模型，此模型是目前国内外最为常用的脑出血模型之一。该模型中采用的胶原酶是一种金属蛋白酶，可降解间质和基底膜胶原，将其注入脑内后，能降解血管壁的胶原，从而造成出血。此模型在某些方面的病理如脑水肿、组织学和行为学等与临床很接近，而且该模型注入脑内的液体量较少，几乎没有药液本身的压迫占位效应。

具体操作步骤如下：实验鼠经水合氯醛 (350mg/kg)腹腔麻醉后，仰卧位固定于立体定位仪上，并按照包新民等报道的定位方法使大鼠前図和后図在同一平面。用碘酒局部消毒，头皮正中切口，剪开骨膜，暴露前囟，于前囟后 lmm，中线向左旁开 3mm用五号针头钻一直径大约为 1 mm的小孔，深达硬脑膜。用固定于立体定位仪上的微量注射器沿钻孔进针，进针深度为 5. 8mm (即尾状核位置），缓慢注射胶原酶 VI 0. 511。注射时间为 3min，注射完后留针 5min再退针，然后缝合皮肤，回笼伺养。假手术组只插针，不注射药物，其余操作一样。

统计学处理：各组测定值用均数士标准差 (X士 SD)表示，用 SPSS统计软件作单因素方差分析（one-way AN0VA)，显著性水平 P〈0. 05。

3、观察指标及结果

3. 1 ICH大鼠神经病学评分

动物苏醒后，各组均按照 Bedersog等的神经缺损分级评分标准 (稍加改进)立即进行神经功能缺失评分。 ICH模型大鼠神经病学评分标准

分级 «

0 无任何症状或仅有同侧眼裂縮小 0

1 提尾时对侧肢体屈曲内收 1

II 抗侧方推力减弱并伴有 I级症状 2

III 爬行时向对侧画圈并伴有 II级症状 3

IV 意识丧失不能行走

3 分及以上动物入选本实验，术后动物分笼伺养，正常进食进水。室温控制在 20— 25°C, 以后于造模后 4h、 8h、 12h、 24h进行评分。

结果：假手术组各时间点神经功能缺损评分均为 0分；模型组动物麻醉清醒后立即评分均为 3分或 4分，一方面说明 ICH大鼠造模成功，另一方面说明 ICH造成了极为明显的大鼠神经功能缺损。同时我们观察到随着时间的推移，各组 ICH大鼠神经功能评分逐渐下降，而给药组评分的下降快于模型组。在 ICH后 12h、 24h大剂量盐酸椒苯酮胺给药组与模型组、小剂量盐酸椒苯酮胺组相应时点的神经缺损评分比有显著性差异 (P〈0.05)。 ICH后 12h、 24h时点，尼莫地平组与模型组相应时点的神经缺损评分比有显著性差异 (P〈0.05)。上述观察提示盐酸椒苯酮胺 2 mg/kg静脉给药能够改善 ICH后神经缺损评分，其作用优于 0.5mg/kg的尼莫地平产生的作用。表 12盐酸椒苯酮胺对大鼠脑出血后 4h、 8h、 12h、 24h神经病学评分的影响（χ士 SD， n=7)

试验组神经病学评分

4h 8h 12h 24h

Sham 0 0 0 0

ICH 4.71±1.04 129±1.04 4.07±1.43 3.44±1.14

ICH+JBTA(2mg/kg) 4.07±0.74 3.86±1.19 2.36±0.8 1.71±0.57*

(0.5mg/kg) 4.5±0.87 4.29±1.02 3.65±1.19 3.21±1.61 ICH+Nim (0.5mg/kg) 4.5±0.87 4.07±1.14 2.57±1.14 1.94±0.74" 注： *P<0.05， "P<0.01VS模型； ^Δρ〈0· 05 VS Nim

3.2脑含水量(8¥0测定

观察盐酸椒苯酮胺对大鼠脑出血后 4h、 8h、 12h、 24h脑含水量的影响，各组动物在预定的时间点，经水合氯醛麻醉后，迅速断头取脑，将取出的脑组织放在已经用生理盐水湿润过的滤纸上，以防止水分蒸发。去除软脑膜和血迹，以进针孔为中心，切取前半部分脑组织，精密称重 (精确到 0. lmg)。取脑到称完重量时间控制在 5min内。然后置于 95°C恒温烘箱 24h，再称取干重。按 Blliot公式计算脑含水量： BWC= (湿重一干重） /湿重 X100%。

结果：分析表 13可以发现，大鼠脑出血后其脑含水量在 4h、 8h、 12h、 24h时点与假手术组比明显上升，并具有显著性差异 (P〈0.05)，而且脑含水量随着时间的进程不断增加，并在脑出血后 24小时达到一个高峰。治疗组 ICH大鼠脑含水量与模型组比，各个时点均不同程度降低。这些结果表明，盐酸椒苯酮胺 2mg / kg给药能够降低 ICH后大鼠脑水肿的严重程度，其治疗效果与 0.5mg/kg的尼莫地平的作用相似。

表 13盐酸椒苯酮胺对大鼠脑出血后 4h、 8h、 12h、 24h脑含水量的影响（x士 SD， n=6) 试验组脑含水量（％) _

4 h 8 h 12 h 24 h

Sham 70.74 + 0.47 71.85±0.58 73.28±0.66

ICH 80.17±0.53^A 81.60±0.54^A 83.39±0.73

ICH+JBTA (2mg/kg) 79.29 ±0.69 79.73±0.53' 80.75±0.19^Λ

(0.5mg/kg) 79.90 ±0.84 81.19±0.78 82.70±0.76

ICH+Nim(0.5mg/kg) 79.31±0.76 79.95±0.36' 81.35±0.71^Λ

注： *Ρ〈0·05 ， **Ρ〈0· 01VS模型； ^ΔΡ〈0·05， ^ΔΔΡ〈0· 01 VS sham.

3.3组织病理学观察

观察盐酸椒苯酮胺对大鼠脑出血病理形态的影响。随机选取各组动物，于预定的时间点以水合氯醛深度麻醉，迅速断头取脑，切取含血肿的脑组织片（约 5mm)，立即放入 10%甲醛液中，固定 24h后经乙醇梯度脱水，二甲苯透明，浸蜡，包埋，切片（5 m)， HE染色，封片。光镜观察病变区及附近脑组织病理改变。

结果：脑出血后大鼠脑组织出现明显的病理改变，第 4、 8、 12小时的切片可见到明显的出血灶，病灶周围组织疏松水肿，伴有少许炎症细胞浸润；第 24小时的切片可见到病灶周围组织仍然疏松水肿，炎症细胞浸润更为严重。预先给予大剂量盐酸椒苯酮胺治疗 ICH大鼠能够明显减轻脑出血后组织水肿和炎症细胞浸润；而预先给予小剂量盐酸椒苯酮胺或尼莫地平也能不同程度减轻上述病变。

3.4对脑组织中 NE的影响

各组大鼠经水合氯醛麻醉后，快速断头取脑，切取针孔周围脑组织，精密称重后，用生理盐水作为匀浆介质，在冰浴环境中以玻璃匀浆器制成 10%的组织匀浆。取上清液 ELISA法测定 NE活性。

结果：与假手术组相比，大鼠脑出血后脑组织 NE活性明显增加 (P〈0.01); 盐酸椒苯酮胺高、低剂量均能显著降低大鼠脑出血后脑组织的 NE活性 (P〈0.01) (见表 14)。表 14 盐酸椒苯酮胺对 ICH大鼠脑组织 NE含量的影响 (X士 SD)

试验组 n (样本数） NE (ng 1 ml)

Sham 6 0. 106 ±0· 026^Δ

ICH (24小时） 6 2. 08 ±0· 062

ICH+JBTA-2mg/kg 6 1. 61 ±0· 044^a

ICH+Nim-0. 5mg/kg 6 1. 88 ±0. 035^a

注： ^ΛΡ〈0. 01， ^aP〈0. 01 vs模型

3. 5对大脑组织中 NO的影响

各组大鼠经水合氯醛麻醉后，快速断头取脑，切取针孔周围脑组织，精密称重后，用生理盐水作为匀浆介质，在冰浴环境中以玻璃匀浆器制成 10%的组织匀浆，取上清液以硝酸还原酶法测定 NO含量。

结果：与假手术组相比，大鼠脑出血后脑组织 NO含量明显增加 (P〈0. 01)，盐酸椒苯酮胺高、低剂量均能降低大鼠脑出血后脑组织 NO的含量 (P〈0. 01)。

表 15 盐酸椒苯酮胺对 ICH大鼠脑组织 N0含量的影响 (X士 SD)

试验组 n (样本数） Ν0 (μ mol/g pro)

Sham 6 1. 61 ±0. 07^Δ

ICH 6 2. 46 ±0. 04

ICH+JBTA (2mg/kg) 6 1. 65 ±0· 03^Δ

ICH+Nim (0. 5mg/kg) 6 2. 40±0· 05^Δ

注： ^ΔΡ〈0. 01 vs模型

本发明选用通过胶原酶诱导产生的大鼠脑内出血模型为研究对象，以目前临床治疗脑出血常用药尼莫地平为对比参照，研究了盐酸椒苯酮胺对脑出血的保护作用。通过对比观察给药后 ICH大鼠行为学变化、病理学、脑含水量改变，证明了盐酸椒苯酮胺对脑出血具有保护作用。

本发明另外的动物试验结果也表明盐酸椒苯酮胺 (2mg/kg)能降低胶原酶所引起的 ICH大鼠出血侧脑 BBB通透性的增加程度；可以阻止胶原酶所引起的 ICH大鼠出血侧脑内 S0D含量的降低和 MDA含量的升高；能降低胶原酶所引起的 ICH大鼠出血侧脑内 TNF-Q表达和 MP0含量的增加。表明盐酸椒苯酮胺可能通过保护 ICH后大鼠 BBB、提高组织清除自由基的能力以及抗多形核粒细胞的聚集、释放炎症介质等机制实现对胶原酶引起的大鼠 ICH具有保护作用。

实施例 9

盐酸椒苯酮胺联合其他药物用于治疗脑缺血。

模型制备、给药方法及指标检测同实施例 6。盐酸椒苯酮胺（JBTA) 联合 NGF、 Vit B6治疗脑缺血。 JBTA剂量 lmg/kg iv,大鼠脑损伤后即刻肌肉注射 NGF 250U, Vit B6剂量 0· 2mg/kg iv。

结果如下：

表 16 JBTA联合用药对局部脑缺血大鼠的影响（x士 SD， n=10)

组别行为障碍缺血面积（mm²)

假手术 0 0

缺血模型 12.43±3· 55 32.58±5· 42

Nim 8.31 ±1.98* 25.68 ±5.99^!

JBTA 7.25±2· 83* 20.64 ±4.85^!

JBTA+NGF+ Vit Β6 5.14±L 86*^Α 15.27±3.11*

~~与模型组比较 *Ρ〈0.01,与 JBTA组比较 ^ΑΡ〈0.01

上述结果提示盐酸椒苯酮胺与其他药物合用效果更佳。

实施例 10

柠檬酸椒苯酮胺对小鼠闭合性脑外伤的治疗保护作用

柠檬酸椒苯酮胺：用时以 5%葡萄糖注射液稀释。跳台实验自动记录仪，中国医学科学院药物所仪电室；荧光分光光度计，日本 HITACHI 公司；酶标仪，美国 Molectlla。

实验动物：清洁级昆明种小鼠，体重 20g-22g。

分组、给药方法及模型制备参见实施例 2，结果如表 17所示，闭合性脑外伤造成小鼠脑严重水肿，给予不同剂量的柠檬酸椒苯酮胺，小鼠脑水肿有不同程度的减轻，且呈剂量依赖性。表 17 柠檬酸椒苯酮胺对闭合性脑外伤小鼠脑水肿的影响 (X士 SD， n=10)

组别脑含水量（％)

正常对照组 74.92 ±6.36

模型组 89 ±8.56

柠檬酸椒苯酮胺 2mg/kg 80.32 ±7.72*

4mg/kg 78.84 ±9.48

8mg/kg 75.28 ±6.48

与模型组比较， *Ρ〈0· 05， "Ρ<0.01 实施例 11

本实施例涉及柠檬酸椒苯酮胺用于治疗缺血再灌注性脑血管疾病的在体动物实验。采用小鼠线栓法制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型，证明柠檬酸椒苯酮胺对实验性动物脑缺血的保护作用。

模型制作方法同实施例 7，结果显示柠檬酸椒苯酮胺治疗组 (C)可显著缩小缺血侧脑组织梗塞面积，与手术组相比有非常显著差异 (P<0.01)，如表 18。

表 18柠檬酸椒苯酮胺对小鼠脑缺血梗死面积的影响 (x±SD)

组别 n 梗塞面积占整个冠面百分比（％)

假手术组 (A) 8 0

缺血-再灌注组（B) 8 25. 35 ± 2. 1*

药物组 (0 8 16. 88 ± 2. 48*" ^Δ

与手术组比较， T 0. 01 ; 与缺血-再灌组比较， ^{Α Α}Ρ〈0. 01

结果显示柠檬酸椒苯酮胺对脑缺血 /再灌注损伤引起的脑梗塞小鼠有显著保护作用。

实施例 12

马来酸椒苯酮胺对大鼠脑出血保护作用，预防性给药。

1、实验动物分组

动物随机分成五个组即：假手术（sham) 24h组； ICH +生理盐水组（模型）； ICH + 马来酸椒苯酮胺 (4mg/k_g)组，称为高剂量组 (h)； ICH+马来酸椒苯酮胺（2 mg/kg)组，称为低剂量组（1) ; ICH+尼莫地平（0. 5mg/kg)组。后四个组又分为 4h， 8h， 12h， 24h 四个时间点亚组。生理盐水、马来酸椒苯酮胺和尼莫地平于 ICH造模前 30min经大鼠尾静脉给药，每日一次。缓慢注射，药液总量控制在 1 ml/200g体重：生理盐水也按 1 ml/200g体重给予。每组 7只 Wistar大鼠。

2、大鼠 ICH模型的建立

本文参照 Rosenberg等报道的方法。具体操作同前所述。

3、观察指标

(1)马来酸椒苯酮胺对 ICH大鼠神经病学评分的影响

神经功能缺失评分标准同实施例 9。

结果：假手术组各时间点神经功能缺损评分均为 0分；模型组动物麻醉清醒后立即评分均为 3分或 4分，一方面说明 ICH大鼠造模成功，另一方面说明 ICH造成了极为明显的大鼠神经功能缺损。同时我们观察到随着时间的推移，各组 ICH大鼠神经功能评分逐渐下降，而给药组评分的下降快于模型组。在 ICH后 12h、 24h大剂量马来酸椒苯酮胺给药组与模型组、小剂量马来酸椒苯酮胺组相应时点的神经缺损评分比有显著性差异 (P〈0.05)， ICH后 12h、 24h时点，尼莫地平组与模型组相应时点的神经缺损评分比有显著性差异 (P〈0.05)。上述观察提示马来酸椒苯酮胺 4 mg/kg 静脉给药能够改善 ICH后神经缺损评分，其作用优于 0.5mg/kg的尼莫地平。

表 19马来酸椒苯酮胺对大鼠脑出血后 4h、 8h、 12h、 24h神经病学评分的影响（x士 SD， n=7)

试验组神经病学评分

4 h 8 h 12 h 24 h

Sham 0 0 0

3.77±0.83 103.2±0.83 3.25±1.14 2.75±0.91 马来酸椒苯酮胺 (4mg/kg) 3.25±0.59 3.08±0.95 1.88±0.64" 1.37±0.46" 马来酸椒苯酮胺 (2mg/kg) 3.61±0.7 3.43±0.82 2.92±0.95 2.57±1.28 尼莫地平 3.65±0.8 3.25±0.91 2.05±0.91' 1.55±0.59 注： *Ρ〈0·05， "Ρ<0.01 VS模型; ^ΔΡ〈0.05， ^ΔΔΡ〈0· 01 VS 尼莫地平

(2)脑含水量 (BWC)测定

结果：分析表 20可以发现，大鼠脑出血后其脑含水量在 4h、 8h、 12h、 24h时点与假手术组比明显上升，并具有显著性差异 (P〈0.05)，而且脑含水量随着时间的进程不断增加，并在脑出血后 24小时达到一个高峰。治疗组 ICH大鼠脑含水量与模型组比，各个时点均不同程度降低。其中，大剂量马来酸椒苯酮胺给药组与模型组在四个相应时点比较其脑含水量降低程度差异有显著性 (P〈0.05)，与尼莫地平组比在四个相应时点其脑含水量降低程度虽然要大一些但还不具有显著性 (P〉0.05)。尼莫地平组在四个相应时点其脑含水量降低程度与模型组比也有显著性差异 (P〈0.05)。这些结果表明，马来酸椒苯酮胺 4mg I kg给药能够降低 ICH后大鼠脑水肿的严重程度，其治疗效果与 0.5mg/kg的尼莫地平的作用相似。

表 20马来酸椒苯酮胺对大鼠脑出血后 4h、 8h、 12h、 24h脑含水量的影响（x士 SD， n=6) 试验组脑含水 j

4 h 8 h 12 h 24 h

Sham 62.01 ±0.36 62.99±0.42 63.22±0.58

64±0.42^AA 65.41 ±0.49 66.36 ±0.67 马来酸椒苯酮胺 (4mg/kg) 62.53±0.42' 63.38±0.15 64.62±0.58' 马来酸椒苯酮胺 (2mg/kg) 63.88±0.55 64.86±0.59 66.33±0.5^A 尼莫地平 0.5mg/kg 62.70±0.25 63.8±0.56^A 65.02±0.54⁴ 注： *P〈0.05， **P〈0.01VS模型； AP〈0.05 , ΔΔΡ<0.01 VS sham.

(3)组织病理学观察结果：脑出血后大鼠脑组织出现明显的病理改变，第 4、 8、 12小时的切片可见到明显的出血灶，病灶周围组织疏松水肿，伴有少许炎症细胞浸润；第 24小时的切片可见到病灶周围组织仍然疏松水肿，炎症细胞浸润更为严重。预先给予大剂量马来酸椒苯酮胺治疗 ICH大鼠能够明显减轻脑出血后组织水肿和炎症细胞浸润；而预先给予小剂量马来酸椒苯酮胺或尼莫地平也能不同程度减轻上述病变。

(4)对脑组织中 NE的影响

结果：与假手术组相比，大鼠脑出血后脑组织 NE活性明显增加 (P〈0. 01) ; 马来酸椒苯酮胺高、低剂量均能显著降低大鼠脑出血后脑组织的 NE活性 (P〈0. 01) (见表 21)。

表 21马来酸椒苯酮胺对 ICH大鼠脑组织 NE含量的影响 (X士 SD)

试验组 n (样本数） NE (ng 1 ml)

sham 6 0. 16 ±0. 04^ΔΔ

模型 (24小时） 6 3. 07 ±0. 09

马来酸椒苯酮胺一 h 6 2. 37 ±0· 07^ΔΔ

马来酸椒苯酮胺一 1 6 2. 78 ±0· 05^ΔΔ

注： ^ΔΔΡ〈0. 01 VS模型

(5)对大脑组织中 NO的影响

结果：与假手术组相比，大鼠脑出血后脑组织 NO含量明显增加 (P〈0. 01)，马来酸椒苯酮胺高、低剂量均能降低大鼠脑出血后脑组织 NO的含量 (P〈0. 01)。

表 22 马来酸椒苯酮胺对 ICH大鼠脑组织 NO含量的影响 (X士 SD)

试验组 n (样本数） Ν0 (μ mol/g pro)

Sham 6 1. 44±0· 06 ^Δ

模型 6 2. 21 ±0· 04

马来酸椒苯酮胺（4mg/kg) 6 1. 48 ±0· 03^Δ

马来酸椒苯酮胺（2mg/kg) 6 2. 16 ±0. 05^Δ

注： ^ΔΡ〈0. 01 VS模型

马来酸椒苯酮胺 (4mg/kg)能促进胶原酶引起的 ICH大鼠行为学改变的恢复进程; 减轻脑水肿的发生并呈剂量依赖性；减少脑组织 NE的活性和 N0的含量，同时马来酸椒苯酮胺能减轻 ICH大鼠出血侧脑细胞的病理损伤。表明马来酸椒苯酮胺对胶原酶所引起的大鼠 ICH具有保护作用。

实施例 13

本实施例涉及马来酸椒苯酮胺用于治疗脑出血的在体实验。

成年雄性 SD大鼠随机分为生理盐水组、脑出血组和马来酸椒苯酮胺组。以 50 μ 1 自体血注入大鼠尾状核方法建立脑出血模型，根据 "大鼠脑立体定位图谱" 确定尾状核的位置：前囟前 0.2隱，矢状缝向右 3.0隱，深 6.3隱为注射点。应用干-湿重法观察脑水肿变化，前肢放置实验观察行为学。脑出血组只进针不注药，治疗时间点为出血后 3h，水肿测量时间点为出血后 1、 2、 3、 7、 14天，行为学观察时相为出血后 1、 2、 3、 7、 14、 28天，每组每时相点各 6只大鼠。

研究表明，出血后脑水肿与神经功能缺损评分有密切的时间相关性：出血组大鼠神经功能缺损以术后 2〜3 天最严重，随着时间的进展，缺损逐渐有所恢复（出血后 28d〉50%)，这种变化与术后 2〜3天脑水肿达高峰致脑损伤严重有关。脑出血组和马来酸椒苯酮胺组脑含水量与生理盐水组在 24h、 48h、 72h比较 P〈0.05， 7天时各组间无明显差异（P〉0.05); 脑出血组大鼠前肢放置实验结果与生理盐水组比较 (P〈0.05)，马来酸椒苯酮胺组与脑出血组比较 P〈0.05。脑出血后 24〜48h水肿达高峰；马来酸椒苯酮胺可明显减轻脑水肿，同时可以改善脑出血后的神经功能缺损。超早期（出血后 3h) 出血灶局部应用马来酸椒苯酮胺与同时相脑出血组相比较，马来酸椒苯酮胺通过保护生物膜系统的作用，可显著减轻早期的脑水肿，并可长期（1〜 28天）改善神经功能缺损，明显降低出血后致残率，改善预后。

实施例 14

本实施例涉及乙酸椒苯酮胺用于治疗感染性脑水肿的在体实验。

SD大鼠 30只，体重 210g左右。随机分成 3组：生理盐水对照组 (NS，n=10); 百日咳菌液模型组 (PB， n=10)；乙酸椒苯酮胺预处理百日咳菌液模型组 (JBTA-H, n=8)。

模型制备同实施例 4。乙酸椒苯酮胺组在注百日咳菌液前 48h 每天腹腔注射 0.5mg/kg, 连续 2d。各组大鼠注菌或生理盐水 4h后断头处死。 ELISA法与 Griess 法分别测大鼠感染性脑水肿模型脑组织匀浆中 IL-1P、 TNFa 和 NO含量。

乙酸椒苯酮胺预处理后能显著降低百日咳菌液脑水肿大鼠的脑含水量及钠离子的含量，增加钾离子含量。表明乙酸椒苯酮胺预处理对大鼠感染性脑水肿有保护作用。

乙酸椒苯酮胺预处理后脑含水量和钠钾离子变化 (X士 SD)

分组动物数脑含水量 (％) Na⁺ (nmol/kg) K⁺ (nmol/kg)

NS 10 62.88±0.24 155.4±5· 68 357.3±8.88

PB 10 65.76±0.24¹ ^J 221·6±14·8^υ 286.7 ±20.0¹'

JBTA-H 10 63.44 ±0· 4³⁾ 164.7±23.7³⁾ 396.6 ±39.9³⁾²⁾

注：与 NS比较: ^υΡ<0.01,²⁾Ρ<0.05；与 PB比较： ^!)P<0.01.

乙酸椒苯酮胺预处理组 IL-1 β、 TNFa 及 NO含量显著降低 (Ρ<0.01)，结果见表 24 乙酸椒苯酮胺预处理后大鼠脑组织 IL-1 β、 TNF- α及 NO含量 (x士 SD) 分组 IL-1 β (pg/g) TNF- a (pg/g)

NS 157.3±43.6 217.1±49· 7 47.39±5· 2

ΡΒ 249.6 ±24.5° 495.4±55.1^ι> 68·9±8· 97°

JBTA-H 197.1±27· 1^{2) 3)} 309.3±83.5^{2) 3)} 53.3±3· 71²⁾³⁾

注： 1)与 NS组比较 1)Ρ<0.01 2)与 NS组比较 Ρ<0.05, 3)与 ΡΒ组比较 Ρ<0.01

本发明发现将大鼠经乙酸椒苯酮胺预处理后再制成感染性脑水肿模型，与未作预处理的大鼠感染性脑水肿模型比较，脑组织的 IL-1P、 TNF-α 及 NO的含量明显下降，同时脑含水量， Na⁺含量降低， K⁺含量增加，与模型组比较，差异有极显著性 (Ρ<0.01)。说明乙酸椒苯酮胺可减少 IL-1 β、 TNF- a 及 NO的生成量。对大鼠感染性脑水肿有保护作用。

实施例 15

本实施例涉及乙酸椒苯酮胺用于治疗缺血再灌注性脑血管疾病的在体动物实验。 ο

采用小鼠线栓法制作局灶性脑缺血模型，验证乙酸椒〇苯酮胺对实验性脑缺血动物的保护作用。表 25 实验各组脑缺血模型小鼠的梗死面积比较 (X士 SD)

组别 n 梗塞面积占整个冠面百分比（％) 假手术组 (A) 8 0

手术组 (B) 8 27.04±2· 24

药物组（C) 4mg/kg 8 18.12±2· 64^ΔΔ

Ρ〈0· 01 VS Β

结果显示乙酸椒苯酮胺对小鼠脑缺血 /再灌注损伤引起的脑梗塞有显著保护作用。

实施例 16

本实施例涉及注射用盐酸椒苯酮胺用于治疗缺血再灌注性脑血管疾病的在体动物实验。

本实施例注射用盐酸椒苯酮胺冻干制剂处方及工艺如下：

处方 (5ml/瓶 X 1000瓶）：

盐酸椒苯酮胺原料药 10.0g

甘露醇 100.0g

加以 HC1调制的 pH3注射用水至 5000ml 将配制、分装好的盐酸椒苯酮胺制剂放入冻干箱样品室内→-30°C预冻→-15°C 升华干燥→25°C再干燥→自动压塞→盖铝盖→压盖→质检。

成品按注射用盐酸椒苯酮胺质量标准检验，应符合规定。

模型制备及给药方法同实施例 7，结果见下表：

表 26 实验各组脑缺血模型小鼠的梗死面积比较 (X士 SD)

组别 n 梗塞面积占整个冠面百分比（％) 假手术组 (A) 8 0

缺血-再灌组（B) 8 26. 70 ± 2. 21

PPTA (C) lmg/kg 8 19. 78 ± 2. 6广

5mg/kg 8 16. 55 ± 2. 32"

ATP组（D) 5mg/kg 8 20. 53 ± 4· 82*

依达拉奉注射液（E) 3mg/kg 8 18. 43 ± 3. 56"

*Ρ〈0· 05， **Ρ〈0. 01 VS B

结果显示盐酸椒苯酮胺对小鼠脑缺血 /再灌注损伤引起的脑梗塞有显著保护作用，且作用优于 ATP及依达拉奉。

实施例 17

本实施例涉及注射用盐酸椒苯酮胺用于治疗人脑卒中的临床疗效。

本实施例注射用盐酸椒苯酮胺制备见实施例 16。

将上述质量合格的注射用盐酸椒苯酮胺用于临床，对急性缺血性脑卒中的治疗结果如下：

80例急性脑梗死患者均为发病后 72h就诊，符合全国第四届脑血管病学术会议修订，急诊头颅 CT排除脑出血， 18 80岁，性别不限，无全身严重并发症，肝、肾功正常。

80例患者分为治疗组 40例、对照组 40例，患者的年龄、性别、梗死面积及评分等方面的比较差异无统计学意义 P〉0. 05。

治疗组给予注射用盐酸椒苯酮胺 60mg ( lmg/kg,批号 20080221 ) , 加入 5%葡萄糖注射液 250ml，静脉滴注， 2h内滴注完毕，每日 2次， 14d为一个疗程。

对照组不用注射用盐酸椒苯酮胺，其余治疗均与治疗组相同。为保证数据有效性，不予使用甘露醇、尼莫地平、大剂量、胞二磷胆碱、脑复康等药物。

疗效评定：于用药前、用药 1周、用药 2周，采取神经功能缺损评分（ESS ) 评定，以增分率来判断疗效.

增分率 = [ (治疗后分数一治疗前分数) /治疗前分数] *100%，将增分率分为 5级来判断疗效：

增分率为 80%-100%为基本痊愈，增分率为 60%-80%为显著进步，增分率为

40%-60%为进步，增分率小于 40%为无效，有效率以基本痊愈和显著进步合计。

疗效进行组间比较，用 X²检验进行显著性检验，以 P〈0. 05为差异具有统计学意义。

两组均于治疗前，治疗 7d，治疗 14d 对患者采用评分，结果见表 27。

两组患者治疗前后临床疗效比较

组间比较用检验，总有效率为 75%，显著优于对照组的 50%，二者比较，差异具有统计学意义 Ρ=0. 001，因此可以认为注射用盐酸椒苯酮胺治疗组疗效明显优于对照组疗效，具有临床意义。

另外，对椒苯酮胺或盐酸椒苯酮胺在治疗人脑其他疾病进行研究，结果表明，其具有明显的疗效，具有临床意义；同时对其他的药学上可接受的椒苯酮胺的盐在治疗人脑疾病进行研究，结果表明具有明显的疗效。

Claims

权利要求书

1、椒苯酮胺或其药学上可接受的盐在制备预防 /治疗哺乳动物脑病的药物的应用。

2、根据权利要求 1所述的应用，其特征在于，所述的哺乳动物为人。

3、根据权利要求 1或 2所述的应用，其特征在于，所述的药物为脑保护药物。

4、根据权利要求 1-3任一项所述的应用，其特征在于，所述的脑病为脑损伤疾病或脑血管疾病。

5、根据权利要求 4所述的应用，其特征在于，所述的脑血管疾病是指脑缺血、脑缺血 /再灌注损伤或脑出血。

6、根据权利要求 5所述的应用，其特征在于，所述的脑出血包括：高血压脑出血、继发于梗死的脑出血、肿瘤性脑出血或动脉炎引起脑出血；所述的脑缺血包括：颈动脉系统脑缺血或椎-基底动脉系统脑缺血。

7、根据权利要求 5所述的应用，其特征在于，椒苯酮胺在制备预防 /治疗脑缺血或缺血 /再灌注损伤药物中的应用。

8、根据权利要求 1-7任一项所述的应用，其特征在于，所述的椒苯酮胺盐为药学上可接受的椒苯酮胺盐，包括有机酸盐、无机酸盐、有机碱盐或无机碱盐，其中有机酸包括乙酸、柠檬酸、乳酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、葡萄糖醛酸、三氟乙酸、甲磺酸、甲苯磺酸、酒石酸；无机酸包括盐酸、氢溴酸、硝酸、硫酸、磷酸；有机碱包括铵、葡甲胺、氨基葡萄糖、精氨酸、赖氨酸、鸟氨酸、组氨酸；无机碱盐包括钠、钾、钙、镁、锌、钡、锂盐；其优选所述的椒苯酮胺盐为盐酸椒苯酮胺。

9、根据权利要求 1-8任何一项所述的应用，其特征在于，所述的椒苯酮胺或其药学上可接受的盐与药物上可接受的载体和 /或稀释剂混合，组成一种药物组合物。

10、根据权利要求 1所述的应用，其特征在于，所述的椒苯酮胺或其药学上可接受的盐与其他药物合用在制备预防 /治疗脑损伤或脑血管疾病药物中的应用。

11、一种预防 /治疗哺乳动物脑病的方法，其特征在于，所述的方法包括给予受试者一种包含椒苯酮胺或其药学上可接受的盐的药物。

12、根据权利要求 11所述的方法，其特征在于，所述的哺乳动物为人；所述的脑病为脑损伤疾病或脑血管疾病；所述的脑血管疾病是指脑缺血、脑缺血 /再灌注损伤或脑出血；所述的脑出血包括：高血压脑出血、继发于梗死的脑出血、肿瘤性脑出血或动脉炎引起脑出血；所述的脑缺血包括：颈动脉系统脑缺血或椎 -基底动脉系统脑缺血。

13、一种包含椒苯酮胺或其药学上可接受的盐的药物，其特征在于，所述的药物用于预防 /治疗哺乳动物脑病。

14、根据权利要求 13所述的药物，其特征在于，所述的哺乳动物为人；所述的脑病为脑损伤疾病或脑血管疾病；所述的脑血管疾病是指脑缺血、脑缺血 /再灌注损伤或脑出血；所述的脑出血包括：高血压脑出血、继发于梗死的脑出血、肿瘤性脑出血或动脉炎引起脑出血；所述的脑缺血包括：颈动脉系统脑缺血或椎 -基底动脉系统脑缺血。

15、根据权利要求 13所述的药物，其特征在于，所述的椒苯酮胺用于预防 /治疗脑缺血或缺血 /再灌注损伤。