WO2011003269A1 - 低酰基结冷胶的后提取方法 - Google Patents

低酰基结冷胶的后提取方法 Download PDF

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WO2011003269A1
WO2011003269A1 PCT/CN2010/000782 CN2010000782W WO2011003269A1 WO 2011003269 A1 WO2011003269 A1 WO 2011003269A1 CN 2010000782 W CN2010000782 W CN 2010000782W WO 2011003269 A1 WO2011003269 A1 WO 2011003269A1
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gellan gum
acid
solution
treatment
salt
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杨宝毅
吴炳华
许怀远
朱正学
沈煜斌
王雪刚
杨利强
王佳良
江文慧
包圣强
盛小林
沈孝琴
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浙江帝斯曼中肯生物科技有限公司
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof

Definitions

  • the invention relates to the field of microbial extraction, and the post-extraction method of special acyl gellan gum.
  • Knotted gelatin can be said to be one of the most excellent thickeners and stabilizers at present, and has excellent condensing properties.
  • Gellan gum gel is easy to use, has good flavor release, high thermal stability, easy to melt in the mouth, high transparency, time to earn and controllable, fiber is not easily affected by ⁇ , product is stable, and has various rot Hook characteristics, etc.
  • Gellan gum is a kind of bacteria isolated from the natural screening of M.
  • the molecular basic structure of gellan gum is a main chain composed of repeating tetrasaccharide units.
  • the basic structure of gellan gum molecules is a main chain composed of repeating tetrasaccharide units.
  • the monosaccharides involved are: glucose, 1 glucose ⁇ , 1 glucose and L-rhamnose.
  • the glyceryl group is located at the 2-position of the lignin-bonded 3 ⁇ 43 ⁇ 4, and the B-face is at 6 ⁇ _h.
  • the ruthenium is easily removed from the surface, so that the natural form of gellan gum is obtained in a deacylated form.
  • the natural form of gellan gum can also be referred to as a high acyl product.
  • High acyl gellan gum contains 11-13% glyceryl acyl group and 5% acetyl group, total acyl group content is between 15 ⁇ 18% (percent of dragon); low bismuth gellan gum has less than 1% content of glycerol art And less than 1% of the content of B ⁇ ' is 3 ⁇ 4% or less. «The group has a significant effect on the properties of the gel. High acyl type can produce a soft, elastic and non-brittle spirit, while low concealed cold glue produces a real, non-elastic, but very brittle enamel.
  • Low-knot gelatin gel@4 is widely used in the field of 4k and tissue culture cranes, but detailed reports on the production process of low-cold gelatin glue, especially the low-acyl gellan gum production process used in the above-mentioned fields are rare.
  • the low-acidification type gellan gum product contains a part of protein, the content is about 17% (by weight), so it is opaque, and the low acyl clear type gellan gum product adopts a filtering process to remove most of the insoluble matter.
  • the gel thus formed is clear and transparent and has a very high transparency. Since the application of low acyl clear gellan gum is more common in the food industry and the like, in many common cases, gellan gum refers to a product with a low acyl clear type.
  • the production process of the low acyl clear type gellan gum is inconvenient that it is difficult to completely remove the protein in the colloid, and the product is affected by a certain degree, generally only 80% or more; at the same time, the low «3 ⁇ 4 type gellan gum contained in the product contains Part of the divalent metal cation makes the gellan gum product difficult to dissolve, and the formed condensation is white, which affects the quality of the product.
  • the flocculation stage uses a divalent or multivalent alkali metal salt to flocculate the gellan gum product in a high acyl state, while the high acyl gellan gum is a divalent or polyvalent alkali metal.
  • the sensitivity of the salt is much less than that of the low acyl gellan gum, so the efficiency of flocculation is not high and the product yield is affected.
  • the earning agents in the tissue culture medium are generally deleted agar.
  • impurities in agar and hindrance factors affect plant tissue growth, so low-salt-type gellan gum products are a promising agar substitute.
  • the gellan gum is very high, and the 3 ⁇ 43 ⁇ 4: ⁇ production, the quality of the product is more stable than the agar extracted from seaweed.
  • the gel time is shorter than that of the agar, which saves time; at the same time, the knot is cold! 3 ⁇ 4 is very stable under high temperature conditions, and the legs are combined with thermophilic microorganisms.
  • IDlk's food-grade low-awake cold gel can be used in tissue culture media, but it is made in China compared to the US Gynecco GELZANTMCM model gellan gum and Sigma Phytagel gellan gum. There are still many problems in the application of food-grade gellan gum in the medium. The specific performance is as follows:
  • the food grade low acyl gellan gum has poor solubility, poor dispersibility, easy to clump, and the hydration temperature needs to be above 80 °C.
  • the medium type of the culture medium has good dispersibility of cold gel and hydrates at 60° (about.
  • the food-grade gellan gum should be strictly adhered to the order of dissolving the colloid and then adding the metal ions. If the gellan gum powder and the metal salt are mixed and then dissolved, the solution will often be difficult to produce. A large amount of milky white floc. The foreign medium type gellan gum does not have this problem.
  • the general food grade gellan gum strength is above 900 ⁇ cm 2
  • the foreign medium type gellan gum strength is between 40 (K600 g/cm 2 ; at the same time, the general food grade gellan gum has a transmittance of about 85%.
  • the foreign medium model is more than 90% cold.
  • the object of the present invention is to provide a new method for producing a low acyl gellan gum, and a further object is to produce a new low acyl acid. Knotted gelatin and a new method for the use of low-tangling gellan gum for tissue culture.
  • the method for extracting low acyl clear gellan gum comprises deacylation treatment of a gellan gum fermentation broth, enzymatic treatment, bivalent or polyvalent metal cation flocculation low acyl gellan gum, clarification treatment of gellan gum solution, The step of dehydrating the gellan gum solution, removing the divalent or multivalent cations and decolorizing and drying and pulverizing, preferably, it is also possible to formulate a suitable mass of chelation system before the dry pulverization step to chelate in the gellan gum. Additional divalent cations may be added during the process while maintaining a relatively stable pH.
  • the specific steps are:
  • Adding different enzyme preparations in the surface of the step (1) to remove the insoluble impurities and bacterial fragments in the fertile seed more specifically, adding an enzyme preparation to keep the enzyme hydrolyzed, and then adding another Enzyme incubation, and so on;
  • step (2) after the enzymatic treatment, adding water-soluble flocculation, adjusting the pH to alkaline, and separating the solid and liquid to remove most of the water and the pigment in the fermentation liquid to obtain a concentrated gellan gum;
  • the crude gellan gum obtained in the step (3) is subjected to 3 ⁇ clarification treatment to obtain a clarified low «gellan gum solution;
  • the gellan gum obtained in the step (5) is chopped into fine particles, and the S3! ion «process ⁇ 3 ⁇ 4 ⁇ process removes most of the divalent cations or polyvalent cations in the gellan gum; the gellan gum which is slightly dried and dried Soak with a lower alcohol and » filter to achieve complete bleaching
  • the gellan gum solid material obtained in the step (6) is dried and pulverized to obtain a highly transparent low acyl clear gellan gum product.
  • steps (6) and (7) further comprise the following steps:
  • the gellan gum obtained in the step (6) is formulated with a suitable mass of the chelate compound system to sequester the divalent cation which may be additionally added during the use of the gellan gum while maintaining the pH value relatively stable and stirring uniformly.
  • the cellulase, the vinease and the protease which have been dissolved in a small amount of water and dissolved in different concentrations are added to the faint obtained in the step (1), and maintained at different times.
  • the protease is a neutral protease or an alkaline protease.
  • the material in the step (2) is cooled to below 35 , and the bivalent or polyvalent water-soluble alkali metal salt is added to flocculate the low «cold gel, and the alkali is added to adjust the pH, and the solid-liquid separation is carried out by centrifugation.
  • Dissolve the material prepared in step (3) dissolve it with 1 ( ⁇ 20 times the amount of deionized water, add acid to adjust the pH to neutrality, heat up to 85 0. C, fully earn the face completely dissolved; delete
  • the plate frame is filtered, filtered by high-speed centrifugation or microporous membrane filtration, and the deacylated gellan gum solution obtained in the step (3) is clarified, and the clarification treatment should be above 65 to prevent the solution from forming a gel, and the obtained clarification is obtained.
  • the transmittance of the solution should be above 92%.
  • the metal cation salt of AS as the mass is added, and the formed condensation press is dehydrated to obtain a low acyl clear type gellan gum block or film having a water content of about 80%. .
  • the low acyl gellan gum obtained by the step (5) with a water content of about 80% is chopped into small particles, and is put into a 3 to 5 times mass of Aig added to the water of one price, soaked and high 3 ⁇ 4», to the ion Exchange means to convert the colloid from the divalent cation salt form to the monovalent cation salt form; 3 ⁇ 4 3 ⁇ 4 ⁇ to 3-5 times the mass of water added to the appropriate chelating agent, soaked and stirred at high speed to remove most of the divalent in the colloid Or multivalent cations.
  • the gelatinized lyophilized fox squeezing is lightly immersed in the liquid with a low acidity of 2 times the mass, soaked and quickly earned, and then filtered to completely remove the pigment by 3 l4m.
  • the product obtained in the step (6) is dried at 75 to 80 ° C, and pulverized to make a 95% leg 80 mesh screen, and the obtained low-salt type gellan gum product.
  • steps (6) and (7) further comprise the following steps:
  • the gellan gum obtained in the step (6) is formulated with a suitable mass chelation clock system to sequester the divalent cations which may be additionally added during the use of the gellan gum while maintaining the relative stability of the P H value.
  • the water in the cold glue « is about 80%, and the mixture is evenly mixed with the gellan gum.
  • the agent and the acid may be mixed first and then added, or may be added in order.
  • the antioxidant added in the step 1 may be, but not limited to, one or more of ascorbic acid, iso VC sodium, pyrosulfide, potassium pyrosulfite, potassium hydrogen sulfate, and cysteine.
  • the concentration of the added antioxidant is preferably from 100 to 300 ppm, more preferably 15 (250 ppm).
  • the ⁇ for adjusting the pH added in the step 1 is not limited to one or more of NaOH, OH, N3 ⁇ 4C0 3 , K 2 C0 3 , preferably NaOH, KOH, and more preferably NaOH.
  • step 1 pH is adjusted to within the range of 9.5 to 11, and a better pH is around 10.
  • the base for adjusting the pH should be first formulated into a solution having a concentration of 10%.
  • step 1 maintain between 85 °C, and better between 8 88 °C.
  • step 1 keep the time 1 (5 m, better «time is around 10).
  • the acid which adjusts the pH may be an inorganic acid or an organic acid.
  • the inorganic acid includes, but is not limited to, one or more of hydrochloric acid, sulfuric acid and phosphoric acid; and the organic acid may be, but not limited to, formic acid, acetic acid, citric acid, malic acid or tartaric acid.
  • the acid preferably used is a mineral acid, more preferably hydrochloric acid. The amount of acid used is such that the pH of the fermentation broth system can be adjusted to about 7.
  • step 1 adjust the pH of the solution with 10% of the first female.
  • the enzymatic conditions in the step 2 are respectively: the cellulase concentration is preferably 50 (2000 ppm, more preferably 1000 to 1500 ppm; the enzymatic hydrolysis time is preferably 4 to 8 hours, more preferably 5 to 6 hours).
  • the enzyme 3 ⁇ 4® is preferably 40 to 50 ° C, more preferably 43 5 ° C.
  • the lysozyme concentration is preferably 5 (K500 ppm, more preferably 10 (200 ppm ; preferably the enzymatic hydrolysis time is 2 to 4 hours, more preferably 2.5 to 3.5 hours; the enzyme is preferably 3 (0 ° C, more preferably 35 to 37 ° C.
  • the protease concentration is preferably 100 to 1000 ppm, more preferably 300 to 500 ppm (for tedious); the enzymatic hydrolysis time is preferably from 1 to 5 hours, more preferably from 2 to 3 hours; the enzyme «3 ⁇ 4 is preferably 3 (M0'C, more preferably 3 (35°) C. wherein the protease is a neutral protease or an alkaline protease.
  • the water-soluble salts used in the step 3 include, but are not limited to, magnesium, calcium, barium, zinc, and water-soluble.
  • the amount of the water-soluble alkali to be used in the step 3 preferably accounts for 0.1% by weight of the hair, more preferably 0.3% to 0.4%.
  • the base used in the step 3 includes, but is not limited to, one or more of KOH, NaOH, Na 2 C0 3 , NaHC0 3 , ⁇ & 3 ⁇ 0 4 .
  • the solid-liquid separation equipment used in step 3 can be selected but not limited to the box type polypropylene plate frame filter press. Bag press, polypropylene plate is a dragon.
  • the length of the gellan gum fiber after the breakage in step 4 is not /Mil 10 j , and the water volume in the township is about 80%.
  • Step 4 The dispersed gellan gum is dissolved in 10 to 20 times the amount of deionized water, more preferably 15 to 20 times as deionized water.
  • the solution is heated to a temperature of 80 to 95 t, more preferably 85 to 90 °C.
  • the clarification equipment can be used, but not limited to, plate frame J E filter, high speed centrifugation or microporous filter ' filter, crane frame shed Stffi filter.
  • step 4 clarify the m3 ⁇ 43 ⁇ 43 ⁇ 4 65 °C or more during the treatment to prevent the formation of the solution, and the better temperature is about 75 °C.
  • the metal salt added when forming the gel includes, but is not limited to, a soluble monovalent alkali metal salt (one or more of potassium chloride, sodium chloride, potassium sulfate, sodium sulfate), a divalent alkali metal salt.
  • a soluble monovalent alkali metal salt one or more of potassium chloride, sodium chloride, potassium sulfate, sodium sulfate
  • a divalent alkali metal salt a soluble monovalent alkali metal salt
  • Combinations of (calcium chloride, magnesium chloride) and polyvalent (ferric chloride) salts, female monovalent and bivalent are considered factors, and can be more erected.
  • the monovalent alkali salt added when the gel is formed is 0.8.2% by weight of the clear gum, and the divalent metal salt added is 0.05 ⁇ 0.1% by weight of the clear gum.
  • step 5 a soluble 'genus that is added at the time of earning is formed into a 30% concentration solution.
  • the solid-liquid separation equipment used in step 5 can be selected but not limited to the box type polypropylene plate frame filter press, 13 ⁇ 4M polypropylene plate ship.
  • step 6 the glue cutter is cut, and the low-occlusion cold glue is chopped into small columnar particles, the particle diameter is less than 3 3 ⁇ 4, and the length is less than 12 mm.
  • the monovalent metal cation used in the step 6 includes, but is not limited to, a soluble monovalent alkali metal salt (one or more of potassium chloride, sodium chloride, potassium sulfate, and sodium sulfate), and the amount is preferably in a solution.
  • the concentration reaches 500 (10,000 ppm, more preferably 600 (8000 ppm o)
  • the agent used in the step ⁇ may be, but not limited to, one or more of sodium citrate, tripotassium citrate, sodium hexametaphosphate, potassium hexametaphosphate, sodium pyrophosphate, and potassium polyphosphate.
  • the preferred chelating agents are sodium citrate and sodium hexametaphosphate, more preferably sodium citrate.
  • the amount of chelating agent added is preferably the concentration in the solution.
  • the press equipment in step 6 is made of cloth «pressing machine.
  • the lower alcohol used in the step 6 may be one or more of ethanol, isopropanol and n-butanol, preferably ethanol and isopropanol, more preferably isopropanol.
  • the amount used is preferably 2 times the weight of the gellan gum wet particles, more preferably 2.5-3.5 times.
  • the chelating agent in step 6' includes, but is not limited to, one or more of 1 «, tripotassium monoxide, hexametaphosphate, potassium hexametaphosphate, sodium pyrophosphate, and potassium polyphosphate.
  • the preferred chelating agent is a phosphate salt, more preferably hexameta.
  • the acid used in the step 6' may be an inorganic acid or an organic acid.
  • the inorganic acid may be, but not limited to, one or more of hydrochloric acid, sulfuric acid or phosphoric acid; the organic acid may not be limited to one or more of formic acid, acetic acid, montanic acid, malic acid or wine.
  • the acid preferably used is an organic acid, more preferably citric acid.
  • the amount of chelating agent used in step 6' is 9-10% (mass%) in the final dry product, and the acid used is 0.5-1% (mass%) in the final dried product.
  • the drying equipment used in step 7 may be, but not limited to, vacuum drying and boiling drying, the temperature is controlled between 75 and 80 ° C, and the time is controlled between 1 and 1.5 hours.
  • Example 1 Fascia entanglement treatment
  • the filter cake obtained from C was first broken up into short fibers by a dispersing machine, deionized water was added in an amount of 15 times by weight, and the solution was heated to raise it by i3 ⁇ 4 90 °C.
  • the photometer measures the transmittance greater than 92%. After clarification, the solution is connected to the tank.
  • the clarified gellan gum solution obtained from D was maintained at a temperature of 65 Torr or more to prevent gel formation, and then a solution of 400% of a potassium chloride solution of 30% was added to the solution, and the temperature was slowed down to 5 and then forced to drop lj'50.
  • a solution of 400% of a potassium chloride solution of 30% was added to the solution, and the temperature was slowed down to 5 and then forced to drop lj'50.
  • the colloid of the more brittle gel is pressed with a box-type polypropylene plate frame filter press to obtain a gel-free film or a 500 kg of gelatinous film with a moisture content of about 80%.
  • the gellan gum block or film obtained from E is chopped into small columnar particles by a rubber cutter with a particle diameter of less than 3 mm and a length of less than 12 3 ⁇ 4.
  • Add cold gelatin small particles SA to 3 times the mass of deionized water, add potassium hexametaphosphate to make the degree reach 5000ppm, slowly »solution 10 and filter with filter cloth; slag residue and then soak with 2.5 times ethanol solution and quickly Stir for 30 minutes; remove the ethanol solution with a bag press to obtain 495 kg of wet gellan gum loam.
  • the 10m 3 gellan gum fermentation liquid is heated to 90 ° C, and the iso-VC sodium is added to the concentration of 200 ppm under stirring; then the 10% concentration of NaOH is added to adjust the pH to 10.0, at 90 ° C ⁇ cattle Stir slowly under 10 and then add 10% acetic acid, adjust the pH to 7.0, and obtain the next step.
  • the filter cake obtained from C was first broken up into short fibers by a dispersing machine, deionized water was added in an amount of 15 times by weight, and the solution was heated to raise it by 90 °C.
  • the gellan gum solution was circulated and filtered by a microporous membrane to obtain a clarified gellanine gel fractionation spectrophotometer with a luminosity of more than 92%. After clarification, the solution was connected to the fiber tank.
  • the clarified gellan gum solution obtained from D is maintained at 65 ⁇ or more to prevent the formation of the formation, and then a solution of 400% of a 30% sodium chloride solution is added to the solution, and the temperature is slowly lowered by 5 to 1 501 501.
  • the colloidal gel of the brittle gel is pressed with a box-shaped polypropylene plate frame to obtain a gellan film or a block of 500 kg having a water content of about 80%.
  • the product obtained from F was dried at 75 ° C and pulverized to a 95% Mil 80 mesh screen.
  • the obtained low-grade clear gelatin glue product is 100kg.
  • the filter cake obtained from C was first broken up into short fibers by a dispersing machine, deionized water was added in an amount of 15 times by weight, and the solution was heated to raise the temperature to 90 °C. Add appropriate amount of diatomaceous earth to the solution, stir evenly, and control the temperature at 85 °C. Use the pre-coated diatomaceous earth filter aid to form a propylene cycle to filter the gellan gum solution, and obtain the clarified gellan gum. ⁇ 3 ⁇ 4 photometer measures the transmittance greater than 92%, after clarification, the solution is connected to the tank.
  • the clarified gellan gum solution obtained from D is maintained at a temperature above 65 °C to prevent gel formation. Then add 30% chlorination to the solution! 3 ⁇ 4 solution 25L, slow down 1S» 5 ⁇ and then force down 3 ⁇ 4 50 Below °C.
  • the shape of the j «g brittle gel is pressed by the box-shaped polypropylene plate.
  • the squeezing method is to obtain a gel-free film or gel 500kg with a water content of about 80%.
  • the gellan gum block or film obtained by E is chopped into small columnar particles by a rubber cutter, and the particle diameter is less than 3 mm. The length is less than 12 mm.
  • the product obtained from F was passed through a fluent dryer, dried at 75, and pulverized to a 95% ⁇ 80 mesh screen.
  • the obtained low acyl clear gellan gum product was 100 kg.
  • the quality of the products has been greatly improved and reached the advanced level in foreign countries.
  • the product has a good view, high transparency, and high product gel strength. Specifically, the chromaticity is greater than 83%, the transmittance is above 85%, and the gel strength is greater than 1000 g/cm 2 .
  • the 10m 3 gellan gum fermentation liquid is heated to 90 ° C, and the ascorbic acid is added to the concentration of 150 ppm in the stirring state; the pH is adjusted to 10.0 by adding 10% concentration of KOH, at 90 ° C. Slow mixing 10 Minutes; add 10% hydrochloric acid, adjust the pH to 7.0, and obtain the next step.
  • the filter cake obtained from C was first broken into short fibers by a dispersing machine, deionized water was added in an amount of 15 times by weight, and the solution was heated to raise it by 90. Add AiS amount of silicon to the solution, and evenly control it at 85 °C. Circulating and filtering the gellan gum solution with a pre-coated diatomaceous earth filter aid box-type polypropylene 3 ⁇ 4 plate filter press, 3 obtained clarified gellan gum The dissolution is determined by the photometer to be greater than 92%, and after clarification, the solution is connected to the tank.
  • the temperature of the clarified gellan gum solution obtained from D should be maintained above 65 °C to prevent the formation of gel. Then add 400L of 30% potassium chloride solution to the solution, and slowly drop to >50° ⁇ after »5. . Shape ⁇ More brittle «The colloid is pressed with a box of polypropylene frame to obtain a cold water of about 80% of the moisture «Piece 500kg.
  • the gellan gum-cutting machine obtained by E cuts off small particles with a particle diameter of less than 3 and a length of less than 12 3 ⁇ 4.
  • the product obtained from G was passed through an il STP dryer and dried at 75 and pulverized to pass 95% through an 80 mesh screen.
  • the obtained low-clear clear gellan gum product is 110kg.
  • the 10m 3 gellan gum is heated to 90 ° C, and the iso-VC sodium is added to the concentration of 200 ppm under stirring; then the 10% concentration of NaOH is added to adjust the pH to 10.0, and slowly under 90 ⁇ ⁇ Stir for 10 minutes; add 10% strength acetic acid, adjust the pH to 7.0, and the resulting solution goes to the next step.
  • the temperature of the clarified gellan gum solution obtained from D should be maintained above 65'C to prevent gel formation. Then add 30L of 30% sodium chloride solution to the solution, and slowly drop to >50° ⁇ after »5. . Shape / 3 ⁇ 4 ⁇ More brittle gel colloids are pressed with a box-shaped polypropylene plate frame filter to obtain 500kg of gellan film or glue with a moisture content of about 80%.
  • the gellan gum block or film obtained from E is chopped into small columnar particles by a rubber cutter with a particle diameter of less than 3 mm and a length of less than 12 3 ⁇ 4*.
  • G. fiAS is the quality of the "Q" system
  • the product obtained from G was boiled in a dryer, dried at 75 ° C, and pulverized, and passed 95% through an 80 mesh screen.
  • the obtained low ⁇ 3 ⁇ 4 type gellan gum product is 110kg.
  • the 10m 3 gellan gum fermentation liquid is heated to 90 ° C, and the potassium metabisulfite is added to the stirring state.
  • the concentration was 250 ppm; 10% concentration of KOH was added to adjust the pH to 10.0, and the mixture was slowly stirred at 90 ° C for 10 minutes; 10% strength of citric acid was added to adjust the pH to 7.0, and the resulting solution was passed to the next step.
  • the filter cake obtained from C is first broken down into short fibers by a blow, and the deionized water is poured into the mouth 15 times of the dragon, and the hot solution is heated to 90 °C.
  • Add appropriate amount of diatomaceous earth to the solution stir evenly, control at 85 °C, circulate and filter the gellan gum solution with a box-type polypropylene plate filter press precoated with diatomaceous earth filter aid, 3 ⁇ 4 to obtain clear and cold
  • the peptance photometer measures the transmittance greater than 92%, and after clarification, the solution is connected to the tank.
  • the temperature of the clarified gellan gum solution obtained from D was maintained above 65 °C to prevent gel formation, and then 25 L of a 30% calcium chloride solution was added to the solution, and the temperature was slowly lowered to 5 °C and below 50 °C.
  • the gel of the more brittle gel is pressed with a box-type polypropylene plate frame filter fLEE to obtain a gel-free film or gel 500 kg with a water content of about 80%.
  • the gellan gum block or film obtained by E is chopped into small columnar particles by a rubber cutter, and the particle diameter is less than 3 mm. The length is less than 12 «*.
  • Add cold gelatin granules & mash to 3 times the mass of deionized water, add sulfur to achieve SOOOppm, slow »solution 10 and filter with filter cloth; filter residue and then soak with 2.5 times of B earn and 'win 30 Use a cloth squeezer to remove the B earning liquid, and get 495kg of wet gelatinized pine.
  • the product obtained from G was dried by a vacuum dryer at 75 ° C and pulverized, and passed 95% through an 80 mesh screen.
  • the obtained low acyl clear gellan gum product was 108 kg.
  • the gellan gum has good dispersibility, and the hydration is about 6CTC. It dissolves at a lower level and prepares a gel with extremely high transparency.
  • the quality of the product has been greatly improved.
  • the product is good, and the product is high.
  • the chromaticity is greater than 83%, the transmittance is above 90%, and the gel strength is between 40 (650 g/cm 2 ).

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Description

低 β结冷胶的后提取方法 领域
本发明涉及微生物提取领域， 特别 氏酰基结冷胶的后提取方法。
背景¾^
结冷胶可以说是目前性能最为优异的增稠剂、稳定剂之一，并具有优良的凝 寺性。 结冷胶凝胶易于使用、有良好的风味释放性、较高的热稳定性、在口中易融化、透明度 高、赚的时间及 可调控、纖不易受 ρΗ影响、产品稳定、具有多样的腐勾特性 等。
结冷胶是一种从自然界中 M 泛筛选分离的细菌一少动糊旨单胞菌
(Sphingomomspaucimobilis 发酵生产而来的亲水†«体， 具有多种有用的特性。
结冷胶的分子基本结构是一条主链， 由重复的四糖单元构成，结冷胶分子的基本结 构是一条主链， 由重复的四糖单元构成。参与形成的单糖有! 葡萄糖、 1 葡萄糖 β、 1 葡萄糖及 L-鼠李糖。在这种多糖的天然形式中，每单位约有 1.5个 0— 团，其 中每单位有 1个 0—甘油酰取代基， 每隔一个单位有 1个 0—乙酰取代基。 甘油酰基 位于 3—连接成键的葡纏 ¾¾的 2位， 乙麵则在 6 ^_h。瞧很容易被麵除， 从 而由天然形式的结冷胶得到脱酰基形式的产品，与此相对，天然形式的结冷胶也可称为 高酰基产品。
高酰基结冷胶含有 11~13%的甘油酰基及 5%的乙酰基， 总体酰基含量在 15~18% 之间（龍百分比)； 低瞧的结冷胶 有少于 1%含量的甘油藝及少于 1%含量的乙 β' 总体 ¾含量 ¾2%以下。 «基团对凝胶的性质有很显著的影响，高酰基型可以产生柔软、富有弹性和不具 有脆性的靈， 而低隱结冷胶产生的 实、 不具有弹性， 但是很脆的繊。 - 低瞧结冷胶 @前广泛用 4k和组织培养鶴领域，但针对低隨结冷胶生 产工艺尤其是用于上述领域的低酰基结冷胶生产工艺的详细报道并不多见。
低酰^ ^清型的结冷胶产品中含有部分蛋白质， 含量在 17%左右（重量百分比)， 因此不透明，而低酰基清型的结冷胶产品采用过滤工艺， 除去了大部分不溶性物质， 因 此形成的凝胶澄清透明，具有极高的透光度。由于低酰基清型结冷胶在食品工业等领域 上的应用更常见， 所以在许多普通场合下， 结冷胶即指低酰基清型的产品。
目前低酰基清型结冷胶生产工艺不足之处在于彻底祛除胶体中的蛋白比较困难，产 品的透«受到一定的影响，一般只 80%以上；同时 出来的低«¾型结冷 胶中含有部分二价金属阳离子，使得结冷胶产品溶解困难、形成的凝« ^发白，影响 产品的质量。同时传统低酰基结冷胶生产工艺中发 絮凝阶段使用二价或多价碱金属 盐絮凝还处于高酰 «态下的结冷胶产品，而高酰基结冷胶对二价或多价碱金属盐的敏 感程度远小于低酰基结冷胶， 因此絮凝的效率不高， 产品产率受到影响。
目前，组织培养基中的赚剂一般都删琼脂。但是，琼脂中的杂质以及阻碍因素 (包括硫元素）会影响植物组织的生长，因此低薩清型结冷胶产品是一种很有前途的 琼脂替 品。因为结冷胶嫉很高，而且¾¾：瞧生产，相对于从海藻中提取的 琼脂来说，产品品质要更加稳定。结冷胶配成溶液后凝胶时间相对琼脂要短，这样能节 省时间； 同时， 结冷! ¾高温状态下非常稳定， 腿合嗜热微生物的赚。在某些植物 组织的培 «中发现， 删了结冷胶的培养基可以加藤织的生长。另外，结冷胶的 使用量只是琼脂的 1/3， 同时还可以抗霉菌的污染， 在移植过程中很容易清洗。 另外， 由于结冷胶形成的凝胶具有极高的透光度，使用结冷胶还可以方便的观察到根系以及组 织生长的情况。 因此， 低酰基结冷胶在组织培养基中同样具有广阔的应用前景。
目前， IDlk生产的食品级低醒结冷胶虽然可以用在组织培养基产品中，但相对于 美国斯比凯可公司 GELZAN™CM型号结冷胶和 Sigma公司的 Phytagel号型结冷胶， 国 产食品级结冷胶在培养基中的应用还存在很多问题， 具体表现如下：
1. 食品级低酰基结冷胶溶解性能比较差， 分散性不好， 容易抱团， 水合温度需在 80°C以上。 而国夕卜的培养基型号结冷胶分散性好， 水合 在60°(左右。
2. 一般食品级结冷胶在具体使用过程中需要严格遵守先溶解胶体再加入金属离子 的)顿序，如果将结冷胶粉末和金属盐混合后再溶解则会导致溶網常困难同时产生大量 乳白色絮状物。 而国外培养基型号的结冷胶则不存在这种问题。
3. 一般食品级结冷胶强度在 900 ^cm2以上， 而国外培养基型号结冷胶强度在 40(K600 g/cm2之间； 同时一般食品级结冷胶透光度在 85%左右， 而国外培养基型号结 冷顧舰大于 90%。
发明内容
鉴于上面所述有 氏酰基结冷胶生产工艺方面存在的各种不足之处， 本发明的目的 在于提供新的生产低酰基结冷胶的方法，进一步的目的是 一种新的生产低酰基清型 结冷胶以及一种新的肖 用于组织培养基的低纏清型结冷胶的方法。
本发明涉及的低酰基清型结冷胶提取方法都包括结冷胶发酵液的脱酰基处理、 酶处 理、二价或多价金属阳离子絮凝低酰 态结冷胶、结冷胶溶液澄清处理、结冷胶溶液 脱水处理、祛除二价或多价阳离子并脱色以及干燥粉碎的步骤， 作为优选， 还可以在干 燥粉碎步骤前配入适当质量的螯合齐«体系以螯合在结冷胶使用过程中可能额外加入 的二价阳离子同时保持 pH值的相对稳定。 其具体步骤为：
( 1 ) 发赚的脱赚处理 将发赚 升至 80^0°C， 力口入抗氧化剂， 同时加入碱调节 ρΗ «έ«;
(2) 发酵液的酶处理；
在步骤（1 ) 发麵中加入不同酶制剂， 以尽可育哋除去发赚中不溶性的杂质和 菌体碎片；更具体地为，加入一种酶制剂保温酶解后，再加入另一种酶保温酶解， 依此类推；
(3) 发 β的絮凝；
在步骤 (2)酶处理后的发赚中， 加入水溶性 属絮凝， 再调节 ρΗ翻碱性， 固液分离， 以除去发酵液中大部分水以及色素， 得到浓缩的结冷胶粗品；
(4) 结冷胶澄清处理
将步骤 (3)得到的结冷胶粗品通 3±澄清处理， 得到澄清的低 «结冷胶溶液；
(5) 脱醒结冷胶溶藝处理
在步骤（4)得到的结冷胶脱睡澄清溶液中， iiil加入 ¾ ^属离子形成謙，压榨 »;
(6)祛除二价或多价阳离子及脱色处理
将步骤 (5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， S3!离子 «工艺^ ¾ ^工艺将结 冷胶中的二价阳离子或多价阳离子大部分祛除;稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 »、过滤以达到彻底脱色
(7)千燥粉碎；
将步骤 (6) 中获得的结冷胶固体物料干燥并粉碎， 得到高透明度低酰基清型结冷 胶产品。
作为优选， 其中步骤 (6)与（7)之间还包括下述步骤：
(6') 当质量的^齐 I 体系 在步骤 (6)得到的结冷胶中配入适当质量的螯合齐«体系以螯合在结冷胶使用过 程中可能额外加入的二价阳离子同时保持 pH值的相对稳定， 搅拌均匀。
更具体地为：
1.发赚脱腿处理
将发酵液 iSJS升至 85~90°C之间， 在发酵液中加入适量抗氧化剂， 同时加入碱， 调 节 pH值在 9.5~11范围之内， , 时间 1( 5 ， 以脱除结冷 的甘油 «及乙酰基。 然后加入酸， 调节 pH值至中性， 降温 40Ό以下。
2.发瞧酶处理
依此向步骤 ( 1 )得到的发隱中分另咖入不同浓度已翻少量水溶解分散的的纤 维素酶、藤酶及蛋白酶，分别维持不同时间。其中蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶。
3.发赚絮凝处理
将步骤（2)中的物料降温至 35Ό以下， 加入二价或多价水溶性碱金属盐絮凝出低 «结冷胶， 再加入碱调节 pH， 謝离心躯搾法固液分离。
4.结冷胶澄清处理
将步骤（3 )中制得的物料， 打散后用 1(^20倍量的去离子水溶解，加入酸回调 pH 涯中性， 升温到 85 0。C,充分賺以顔完全溶解； 删板框 ϊζΕ滤， 高速离 心或微孔滤膜过滤， 将步骤 (3 )中得到的脱酰基结冷胶溶液澄清处理， 澄清处理时的 应该在 65 以上， 以防止溶液形成凝胶， 得到的澄清溶液透光度应在 92%以上。
5.脱藝结冷胶溶、励处理
向步骤 (4)得到的脱醒澄清结冷胶溶液中加 A S当质量的金属阳离子盐类， 形 成的凝 压搾脱水， 得到含水量 80%左右的低酰基清型结冷胶胶块或胶片。
6.祛除二价或多价阳离子及脱色处理 将步骤 (5 )得到的含水量 80%左右的低酰基结冷胶切碎为小颗粒， 投入到 3~5倍 质量的加 Aig当一价 属 理的水中，浸泡并高¾»， 以离子交换的方式将胶体 由二价阳离子盐形式转化成为一价阳离子盐形式; ¾ ¾Λ到 3-5倍质量的加入适当螯 合剂处理的水中，浸泡并高速搅拌， 以祛除胶体中的大部分二价或多价阳离子。处理后 的结冷胶溶狐搾 ，酸輕 2倍质量的低级隨液中，浸泡并高速賺，之后再 过滤以 »lj彻底祛除色素的 ¾m。
7.干燥粉碎；
将步骤 (6)中制得的产物于 75~80°C下进行千燥， 并粉碎， 使其 95%腿80目筛 网， 得到的低薩清型结冷胶产品。
作为优选， 其中步骤 (6)与（7)之间还包括下述步骤：
6'. SdAiS当质量的„ 体系
在步骤（6)得到的结冷胶中配入适当质量的螯合齐鍾体系以螯合在结冷胶使用过 程中可能额外加入的二价阳离子同时保持 PH值的相对稳定，此时结冷胶中的水份 « 在 80%左右， 齐幡与结冷胶混合搅拌均匀。 齐赚体系中， 剂和酸可以先 混合后加入， 也可以依次加入。
本发明各步骤的具体工艺 牛是：
步骤 1 中加入的抗氧化剂可以是但不只限于抗坏血酸、异 VC钠、焦亚硫隱、焦 亚硫酸钾、 硫酸氢钾、 半胱氨酸中的一种或多种。 加入的抗氧化剂浓度佳地为 100~300ppm, 更佳的的为 15( 250ppm (以发 计）。
步骤 1 中加入的用于调整 pH的 β用但不只限于 NaOH， OH, N¾C03， K2C03 中的一种或多种， 较佳的删 NaOH， KOH, 更佳的删 NaOH。
步骤 1中， « pH值调节到 9.5~11范围之内， 更佳的 pH值为 10左右。 步骤 1中， 调整 pH的碱应先配成浓度为 10%的溶液。
步骤 1中， 保持 85 0°C之间， 更佳的保持 在8 88°C之间。
步骤 1中， 保持时间 1( 5 m, 更佳的 «时间在 10 左右。
步骤 1中， 调整 pH的酸可以是无机酸， 也可以是有机酸。其中无机酸包括但不限 于盐酸、硫酸及磷酸中的一种或多种； 有机酸可以是但不限于甲酸、醋酸、柠檬酸、苹 果酸或酒石酸。实际生产中， 较佳使用的酸为无机酸， 更佳的为盐酸。酸的用量为能将 发酵液体系 pH调节到 7左右。
步骤 1中， 调整 pH的随先配雌度为 10%的溶液。
步骤 2中的酶解条件分别为： 纤维素酶浓度较佳地为 50( 2000ppm， 更佳的为 1000~1500ppm; 酶解时间较佳的为 4到 8小时， 更佳的为 5到 6小时； 酶^ ¾®较佳 的为 40~50°C， 更佳的为 43 5°C。 溶菌酶浓度较佳的为 5(K500ppm， 更佳的为 10( 200ppm; 酶解时间较佳的为 2到 4小时， 更佳的为 2.5到 3.5小时； 酶 较佳 的为 3( 0°C， 更佳的为 35〜37°C。 蛋白酶浓度较佳为 100~1000ppm， 更佳的为 300~500ppm (以发謹计)； 酶解时间较佳的为 1到 5小时， 更佳的为 2到 3小时； 酶 «¾较佳的为 3(M0'C，更佳的为 3( 35°C。其中蛋白酶为中性蛋白酶或碱性蛋白酶。
步骤 3中所用的水溶性 属盐包括但不只限于： 镁、钙、钡、锌、招的水溶' 麟且合。
步骤 3中所用的水溶性碱 属加入量较佳地占发 量的 0.1% .5%，更佳地占 0.3%~0.4
步骤 3中所用的碱包括但不只限于： KOH、 NaOH、 Na2C03、 NaHC03, Ν&3Ρ04中 的一种或多种。
步骤 3 中使用的固液分离的设备可以选用但不只限于厢式聚丙烯板框压滤 袋压搾机， 式聚丙烯板概龍。
步骤 4中打散后的结冷胶纤维长度不 /Mil 10 j ,乡 隹中水 量在 80%左右。 步骤 4打散的结冷胶纤维用 10到 20倍量的去离子水溶解， 更佳的为 15~20倍去 离子水。 加热溶液使之升温至 80~95t， 更佳的为 85^90°C。
步骤 4中，澄清设备可以采用但不限于板框 J E滤，高速离心或微孔滤酣滤' 鶴板框棚 Stffi滤。
步骤 4中， 澄清处理时的 m¾¾¾ 65°C以上， 以防止溶液形成赚， 更佳的温 度为 75°C左右。
步骤 5中， 形成凝胶时加入的金属盐包括但不限于可溶性一价碱金属盐（氯化钾、 氯化钠、硫酸钾、 硫酸钠中的一种或多种)、 二价碱金属盐（氯化钙、 氯化镁）及多价 (氯化铁）盐等 组合， 雌一价和二价 属 考虑到 因素， 可以 更鶴二价 属厳。
步骤 5中，形成凝胶时加入的一价碱 属盐为澄清胶液的 0.8 .2% (重量百分比)， 加入的二价金属盐为澄清胶液的 0.05^0.1% (重量百分比)。
步骤 5中， 形成赚时加入的可溶 ' 属 先配成 30%浓度的溶液。
步骤 5 中使用的固液分离的设备可以选用但不只限于厢式聚丙烯板框压滤 観搾机， 1¾M式聚丙烯板麵舰。
步骤 6中删切胶机， 将低隱结冷胶切碎为柱状小颗粒， 颗粒直径小于 3 ¾， 长度小于 12毫米。
步骤 6中所用的一价金属阳离子包括但不限于可溶性一价碱金属盐（氯化钾、氯化 钠、硫酸钾、硫酸钠中的一种或多种)，用量较佳的为在溶液中浓度达到 500( 10000ppm， 更佳的为 600( 8000ppmo 步骤 ό中所用的¾^剂可以是但不只限于柠檬酸钠、柠檬酸三钾、六偏磷酸钠、六 偏磷酸钾、焦磷酸钠、聚磷酸钾中的一种或多种。较佳使用的螯合剂为柠檬酸钠和六偏 磷酸钠， 更佳的为柠檬酸钠。 所加入的螯合剂用量较佳的为在溶液中浓度
1000-lOOOOppm, 更佳的为 500O^8000ppm。
步骤 6中 的 压搾设备选用布 «搾机。
步骤 6中使用的低级醇可以是乙醇、异丙醇和正丁醇中的一种或多种，较佳的为乙 醇和异丙醇， 更佳的为异丙醇。 用量较佳的为结冷胶湿颗粒重量的 2 倍， 更佳的为 2.5-3.5倍。
步骤 6'中■的螯合剂包括但不只限于 1« 、 蒙酸三钾、六偏磷,、六偏 磷酸钾、焦磷酸钠、聚磷酸钾中的一种或多种。实际生产中，较佳使用的螯合剂为磷酸 盐¾ ^剂， 更佳的为六偏磷«。
步骤 6'中使用的酸可以为无机酸或有机酸。无机酸可以是但不限于盐酸、硫酸或磷 酸中的一种或多种； 有机酸可以 旦不限于甲酸、醋酸、桝蒙酸、苹果酸或酒碰中的 一种或多种。 实际生产中， 较佳使用的酸为有机酸， 更佳的为柠檬酸。
步骤 6'中使用的螯合剂用量在最终千燥产品中占 9~10% (质量百分比)， 使用的酸 在最终干燥产品中占 0.5~1% (质量百分比)。
步骤 7 中使用的干燥设备可以是但不限于真空干燥和沸腾干燥， 温度控制在 75〜80°C之间， 时间控制在 1到 1.5小时之间。
结合以下实施例来具体说明， 以更好地理解本发明， 但这些实施例为非限制性的， 仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
(一）低瞻凊型结冷胶的提取
实施例 1 A.发薩脱纏处理
在絮 «中， 将 10m3结冷胶 »¾升^ 90 ， »^态下加入抗坏血 度为 150ppm; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0,在 90Ό条件下缓慢搅拌 10分 钟； 再加入 10%浓度的盐酸， 回调 pH至 7.0， 得到的溶 »Λ下一步骤。
Β.发酵液的酶处理
搅拌下加入 15kg纤维素酶， 缓慢爵 5.5小时；，之后再加入 2kg溶菌 酶， 35°C，缓† 拌 3小时； 之后再加入 4kg中性蛋白酶， 缓慢爵 2.5小时。
C.发 的絮凝
向上述料液中缓慢加入氯化镁 30kg， 搅拌维持 20min， 再加入氢氧化钠 20kg， 搅 拌维持 10min， 将料通过泵打入厢式板框压«13*[ 滤， 废水处理站， 得到 950kg湿的滤饼待用。
D.结冷胶澄清处理
由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维， 按重量的 15倍量加入去离子水， 加热 溶液使之升 i¾ 90°C。 在溶液中加 Aig量硅 «：, 爵均匀， 控制在 85°C， 用预 涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙烯板框压滤机循环过滤结冷胶溶液， 得到的澄清结冷胶 溶' 光度计测定透光度大于 92%， 澄清后溶液接 Λ»罐。
E.脱藝结冷胶溶騰处理
由 D得到的澄清结冷胶溶液温 ¾维持在 65Ό以上以防止凝胶形成， 再向溶液中 加入 30%浓度的氯化钾溶液 400L, 缓慢 » 5 后强制降 lj'50。C以下。形 »更 脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压滤机压搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶 块 500kg。 F. 及脱色处理
由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米， 长度小于 12 ¾。 将结冷胶小颗粒 SA到 3倍质量的去离子水中， 同时加入六偏磷酸 钾使 »度达到 5000ppm， 缓慢 »溶液 10 后用滤布过滤； 溏渣再用 2.5倍 的乙醇溶液浸泡并快速搅拌 30分钟； 用布袋压搾机脱去乙醇溶液， 得到湿的结冷胶松 麵粒 495kg。 -
G. 干燥粉碎 ，
由 F得到的产物励弗軒燥机， 于 75°C下进行千燥， 并粉碎， 使其 95%腿 80 目筛网.。得到的低瞧清型结冷胶产品 lOOkgo 实施例 2
A.发麵兑纏处理
在絮凝罐中，将 10m3结冷胶发酵液升温至 90°C，搅拌状态下加入异 VC钠至其浓 度为 200ppm; 再加入 10%浓度的 NaOH调整 pH至 10.0， 在 90'C ^牛下缓慢搅拌 10 再加入 10%浓度的醋酸， 回调 pH至 7.0， 得到的溶 «Λ下一步骤。
B.发薩的酶处理
搅拌下加入 15kg纤维素酶， ¾ 43°C,缓慢爵 5小时；之后再加入 2kg藤酶， 温度 33°C， 缓慢搅拌 3小时； 之后再加入 4kg碱性蛋白酶， 温度 35°C， 缓慢搅拌 3小 时。
C.发酵液的絮凝
向±¾料液中缓慢加入氯化钙 35kg， »维持 20min， 再加入 化钾 20kg， 搅 拌维持 10min， 将料通过泵打入厢式板框压滤 « 滤， «ΪΛ废水处理站， 得到 950kg湿的滤饼待用。
D.结冷胶澄清处理
由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维， 按重量的 15倍量加入去离子水， 加热 溶液使之升 90°C。采用微孔滤膜循环过滤结冷胶溶液， 得到的澄清结冷胶溶 删分光光度计测 光度大于 92%， 澄清后溶液接入纖罐。
E.脱睡结冷胶溶 K处理
由 D得到的澄清结冷胶溶液 维持在 65Ό以上以防止赚形成， 再向溶液中 加入 30%浓度的氯化钠溶液 400L， 缓慢 » 5 后强制降 1」'501：以下。形 脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压 搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶 块 500kg。
F. 及脱色处理
由 E得至啲结冷赚块碰片耐切胶机切碎雌状小颗粒，颗粒直径小于 3絲， 长度小于 12 *^。 将结冷胶小颗粒 ^到 3倍质量的去离子水中， 同时加入機隱 使»度达到 5000ppm， 缓慢 »溶液 10 后用滤布过滤； 滤渣再用 2.5倍 的 异丙醇溶液浸泡并快速搅拌 30分钟； 用布袋压梓机脱去乙醇溶液， 得到湿的结冷胶松 麵粒 495kg。
G. 千燥粉碎
由 F得到的产物通 弗^燥机， 于 75°C下进行干燥， 并粉碎， 使其 95%Mil80 目筛网.。 得到的低藝清型结冷胶产品 100kg。
实施例 3
A.发麵兌藝处理
在絮繊中， 将 10m3结冷胶发赚升 ΐ¾ 90° »b态下加入焦亚硫隨至其 浓度为 250ppm; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0， 在 90°C条件下缓慢搅拌 10 分钟； 再加入 10%浓度的柠檬酸， 回调 pH至 7.0， 得到的溶 «Λ下一步骤。
B.发酵液的酶处理
爵下加入 15kg纤维素酶， ί¾¾ 43Ό,缓慢賺 5小时；之后再加入 2kg溶菌酶， 33°C， 缓慢爵 3小时； 之后再加入 4kg碱性蛋白酶， i¾¾ 35°C， 缓慢爵 3小 时。
C.发酵液的絮凝
向 ±ϋί料液中缓慢加入氯化锌 35kg， 爵维持 20min， 再加入碳薩 20kg， 爵 维持 10min， 将料通过泵打入厢式板框压滤 «行过滤， 滤 ΜΛ废水处理站， 得到 950kg湿的滤饼待用。
D.结冷胶澄清处理
由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维， 按重量的 15倍量加入去离子水， 加热 溶液使之升温至 90'C。 在溶液中加入适量硅藻土， 搅拌均匀， 温度控制在 85°C， 用预 涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙烯板框压 WI循环过滤结冷胶溶液， 得到的澄清结冷胶 溶删^ ¾光度计测定透光度大于 92%， 澄清后溶液接 Λ»罐。
E.脱«结冷胶溶¾«处理 '
由 D得到的澄清结冷胶溶液温 j¾¾维持在 65°C以上以防止凝胶形成， 再向溶液中 加入 30%浓度的氯化! ¾溶液 25L， 缓 1S» 5 ^中后强制降 ¾ 50°C以下。 形 j«g 脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压 «ΙΙΐ搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶 块 500kg。
R ¾ ^及脱色处理
由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米， 长度小于 12毫米。将结冷胶小颗粒投入到 3倍质量的去离子水中， 同时加入聚磷酸钾 使»度¾|1」 5000ppm， 缓' K 拌溶液 10 后用滤布过滤； 滤渣再用 2.5倍 M:的 乙赚液浸泡并快 30 中； 用布 搾纖去乙赚液， 得到湿的结冷胶松散 颗粒 495kg。
G. 千燥粉碎
由 F得到的产物通 弗腾亍燥机， 于 75 下进行 f燥， 并粉碎， 使其 95% ϋ80 目筛网.。 得到的低酰基清型结冷胶产品 100kg。
采用±¾1：艺相对于现有的低 结冷胶的后提取方法， 优势之处在于：
1. 由于发赚利用高温灭菌时的 进行脱 «处理， 在简化了工艺的同时使得 本发明的整体工艺相比原有工艺^ ½有所 氏。
2. 由于产品在絮凝前就脱醒处理， 使得采用二价或多价金属阳离 凝低睡 结冷胶的效率更高， 提升了产率。
3.产品质量大为改善， 达到国外先进水平。 产品夕卜观好、 透光度高、'产品凝胶强 度高。 具体表现在色度大于 83%， 透光度在 85%以上， 同时凝胶强度大于 1000g/cm2。
4.通过后期的螯合工艺除去绝大部分二价金属阳离子， 使得形成的凝胶略微发白 消失， 提升了产品的质量。
(二）适用于组织培养基的低藝清型结冷胶的提取
实施例 4
A.发麵兑腿处理
在絮凝罐中， 将 10m3结冷胶发酵液升温至 90°C， 搅# ^态下加入抗坏血酸至其 浓度为 150ppm; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0， 在 90°C条件下缓慢搅拌 10 分钟； 再加入 10%浓度的盐酸， 回调 pH至 7.0， 得到的溶 «Λ下一步骤。
B.发赚的酶处理
爵下加入 15kg纤维素酶， 缓' g» 5.5小时； 之后再加入 2kg藤 酶， 35'C， 缓 '隨拌 3小时； 之后再加入 4kg中性蛋白酶， ¾ 33°C , 缓慢霧 2.5小时。
C.发 的絮凝 '
向上述料液中缓慢加入氯化镁 30kg， 搅拌维持 20min， 再加入氢氧化钠 20kg， 搅 拌维持 iomin， 将料耐泵打入厢式板栖 ¾ιβ観滤， Aj& , 得到
950kg湿的滤饼待用。
D.结冷胶澄清处理
由 C得到的滤饼先用打散机打散为短纤维， 按重量的 15倍量加入去离子水， 加热 溶液使之升 90 。 在溶液中加 AiS量硅^ ±, 爵均匀， 控制在 85°C， 用预 涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙 ¾板框压滤机循环过滤结冷胶溶液， 3得到的澄清结冷胶 溶删^ ¾光度计测定透光度大于 92%, 澄清后溶液接 Λ»罐。
E.脱醒结冷胶溶藝处理
由 D得到的澄清结冷胶溶液温度应维持在 65°C以上以防止凝胶形成， 再向溶液中 加入 30%浓度的氯化钾溶液 400L， 缓慢 » 5 后强制降 1」50°〇以下。形^更 脆性 «的胶体用厢式聚丙烯板框压 搾，得到含水量 80%左右的结冷 «片 块 500kg。
F.离子交 脱色处理
由 E得到的结冷胶胶块 片舰切胶机切碎離状小颗粒，颗粒直径小于 3就， 长度小于 12 ¾。将结冷胶小颗粒 到 3倍质量的去离子水中， 同时加入氯化钾溶 液»度达到 5000ppm， 缓慢搅拌溶液 10 后用滤布过滤； 渣再用 2.5倍 的 乙赚液浸泡并快 30 ； 用布袋压搾繊去乙瞧液， 得到湿的结冷胶松散 颗粒 495kg。
G. 酉 £Λϋ当质量的^ >齐«体系
在由 F得到的结冷胶中加入六偏磷酸钠 10公斤， 再加入柠檬酸 1公斤， 均匀混合。 R千燥粉碎
由 G得到的产物通 il STP燥机， 于 75 下进行千燥， 并粉碎， 使其 95%通过 80 目筛网.。 得到的低隱清型结冷胶产品 110kg。
实施例 5
A.发 M 醒处理
在絮凝罐中， 将 10m3结冷胶发 升温至 90°C， 搅拌状态下加入异 VC钠至其浓 度为 200ppm; 再加入 10%浓度的 NaOH调整 pH至 10.0， 在 90Ό^ί牛下缓慢搅拌 10 分钟； 再加入 10%浓度的醋酸， 回调 pH至 7.0， 得到的溶液进入下一步骤。
Β.发赚的酶处理
搅拌下加入 15kg纤维素酶， 43°C，缓慢賺 5小时；之后再加入 2kg藤酶， 缓慢勝 3小时； 之后再加入 4kg碱性蛋白酶， ¾ 35°C, 缓慢爵 3小 时。
C.发酵液的絮凝
向 料液中缓 入氯化鈣 35kg， 搅拌维持 20min， 再加入氢氧化钾 20kg， 搅 拌维持 10min， 将料 Sil泵打入厢式板 行过滤，
Figure imgf000018_0001
得到 950kg湿的滤饼待用。
D.结冷胶澄清处理 由 C得到的滤饼先用打龍打散为短纤维， 按 的 15倍動 π入去离子水， 力口热 溶液使之升温至 90°C。 采用微孔滤膜循环过滤结冷胶溶液， 直至得到的澄清结冷胶溶 删分光光度计测錢光度大于 92%， 澄清后溶液接入碰罐。
E.脱醒结冷胶溶藝 K处理
由 D得到的澄清结冷胶溶液温度应维持在 65'C以上以防止凝胶形成， 再向溶液中 加入 30%浓度的氯化钠溶液 400L， 缓慢 » 5 后强制降 1」50°〇以下。形/ ¾ ί更 脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压滤枳压搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶 块 500kg。
F.离子交 m&脱色处理
由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米， 长度小于 12 ¾*。 将结冷胶小颗; 到 3倍质量的去离子水中， 同时加入氯化钠使 »度达到 7000ppm， 缓慢 »溶液 10 后用滤布过滤； 渣再用 2.5倍 MS的异 丙麵液浸泡并快¾» 30 ； 用布瓶搾繊去异丙赚液， 得到湿的结冷胶松 譲粒 495kg。
G. fiAS当质量的 ^"齐 «体系
在由 F得到的结冷胶中加入柠檬酸钠 10.5公斤， 再加入苹果酸 1公斤，均匀混合。
H. 干燥粉碎
由 G得到的产物通 j±沸腾于燥机， 于 75'C下进行千燥， 并粉碎， 使其 95%通过 80 目筛网.。得到的低 β¾型结冷胶产品 110kg。
实施例 6
A.发麵兑睡处理
在絮凝罐中， 将 10m3结冷胶发酵液升温至 90°C， 搅拌状态下加入焦亚硫酸钾至其 浓度为 250ppm; 再加入 10%浓度的 KOH调整 pH至 10.0， 在 90°C条件下缓慢搅拌 10 分钟； 再加入 10%浓度的柠檬酸， 回调 pH至 7.0， 得到的溶液进入下一步骤。
B.发赚的酶处理
勝下加入 15kg纤维素酶，' 43Ό，缓慢灘 5小时；之后再加入 2kg藤酶， m. 33 , 缓慢爵 3小时； 之后再加入 4kg碱性蛋白酶， 35°C， 缓慢勝 3小 时。
C.发酵液的絮凝
向±¾料液中缓慢加入氯化锌 35kg， 搅拌维持 20min， 再加入碳■ 20kg， » 维持 10min， 将料通过泵打入厢式板框压滤 «行过滤， 滤液 ¾Λ废水处理站， 得到 950kg湿的滤饼待用。
D.结冷胶澄清处理 '
由 C得到的滤饼先用打讓打散为短纤维， 按龍的 15倍動口入去离子水， 力口热 溶液使之升温至 90°C。 在溶液中加入适量硅藻土， 搅拌均匀， 温^控制在 85°C， 用预 涂硅藻土助滤剂的厢式聚丙烯板框压滤机循环过滤结冷胶溶液， ¾ 得到的澄清结冷胶 溶 光度计测定透光度大于 92%， 澄清后溶液接 Λ«罐。
Ε.脱隨结冷胶溶藝处理
由 D得到的澄清结冷胶溶液温 维持在 65°C以上以防止凝胶形成， 再向溶液中 加入 30%浓度的氯化钙溶液 25L， 缓慢 » 5 后强制降 lj 50°C以下。 形 更 脆性凝胶的胶体用厢式聚丙烯板框压滤fLEE搾，得到含水量 80%左右的结冷胶胶片或胶 块 500kg。
F.离子交^ ¾脱色处理
由 E得到的结冷胶胶块或胶片通过切胶机切碎成柱状小颗粒，颗粒直径小于 3毫米, 长度小于 12 «*。 将结冷胶小颗粒 &Λ到 3倍质量的去离子水中， 同时加入硫瞻使 »度达到 SOOOppm, 缓慢»溶液 10 后用滤布过滤； 滤渣再用 2.5倍 的乙 赚液浸泡并' 勝 30 ； 用布颗搾机脱去乙赚液， 得到湿的结冷胶松画 粒 495kg。
G. ΚΛϋ当质量的¾^?«体系
在由 F得到的结冷胶中加入六偏磷瞻 9.5公斤， 再加入苹果酸 0.8公斤， 均匀混 合。
Η. 千燥粉碎
由 G得到的产物通过真空干燥机， 于 75°C下进行干燥， 并粉碎， 使其 95%通过 80 目筛网.。 得到的低酰基清型结冷胶产品 108kg。
采用上述工艺生产出来的适用于组织培养基的低酰基结冷胶相对于现有的食品级 低睡结冷胶的后提取方法， 优势之处在于：
1.结冷胶分散性好， 水合激在 6CTC左右， 在较低的 下即可溶解， 配制出透 光度极高的凝胶。
2.可以如果将结冷胶粉末和金属盐混合后再溶解，不会出现溶 常困难同时产生 大量乳白色絮状物的 ί！^。
3.产品质量大为改善， 啯夕卜先 平。产品夕卜观好、透«高、产品赚搬 高。 具体表现在色度大于 83%， 透光度在 90%以上， 同时凝胶强度在 40( 650g/cm2之间。

Claims

权 利 要 求 书
1、 一种低 «结冷胶的后提取方法， 其包 »骤：
( 1 )发赚的脱隱处理：
将发 升至 8O^0°C， 加入抗氧化剂， 同时加入碱调节 ρΗ «έ§¾;
(2)发酵液的酶处理：
在步骤 ( 1 ) 发隱中加入不同酶制剂， 以尽可 除去发赚中不溶性的杂质 和菌体碎片；
(3)发酵液的絮凝：
在步骤（2)酶处理后的发酵液中，加入水溶性碱金属絮凝，再调节 pH值至碱性, 固液分离， 以除去发酵液中大部分水以及色素， 得到结冷胶粗品；
(4) 结冷胶澄清处理：
将步骤 (3)得到的结冷胶粗品通过澄清处理， 得到澄清的低酰基结冷胶溶液；
(5) 脱瞧结冷胶溶藝处理：
在步骤 (4)得到的结冷胶脱«澄清溶液中， 通过加入碱金属离子形成凝胶， 固 液分离;
(6)祛除二价或多价阳离子及脱色处理
将步骤（5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， Mil离子交换工艺或者 工艺将结 冷胶中的二价阳离子或多价阳离子大部分祛除;稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 搅拌、 过滤以达到彻舰色¾¾
(7)千燥粉碎：
将步骤 (6)中获得的结冷胶固体物料干燥并粉碎，得到高透明度低酰基清型结冷 胶产品。 ' 2、 权利要求 1所述的低酰基结冷胶的后提取方法， 其中步骤（6)与（7)之间还包括 下述步骤：
(60 RA S当质量的 体系：
在步骤 (6)得到的结冷胶中配入适当质量的螯合 «体系以螯合在结冷胶使用过 程中可能额卜加入的二价阳离子同时保持 ρΗ值的相 定， 爵均匀。
3、 一种低 «清型结冷胶的后提取方法， 其包括步骤：
( 1 )发 的脱 «处理：
将发酵液温度升至 8O^0°C， 加入抗氧化剂， 同时加入碱调节 ρΗ ϋ兑酰基；
(2)发酵液的酶处理：
在步骤 ( 1 )发酵液中加入不同酶制剂， 以尽可能除去发酵液中不溶性的杂质和菌 体碎片；
(3) 发酵液的絮凝：
在步骤（2)酶处理后的发酵液中，加入水溶性碱金属絮凝，再调节 pH {IS碱性， 固液分离， 以除去发酵液中大部分水以及色素， 得到结冷胶粗品；
(4) 结冷胶澄清处理：
将步骤（3)得到的结冷胶粗品通过澄清处理， 得到澄清的低酰基结冷胶溶液；
(5) 脱纖结冷胶溶藝处理
在步骤（4)得到的结冷胶脱 β澄清溶液中， 通过加入碱金属离子形成凝胶， 固 液分离；
(6) 观色处理：
将步骤 (5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， 螯合工艺将结冷胶中的二价或多 价阳离子大部分祛除；稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 »、过滤以达到彻底脱 色效果；
(7)干燥粉碎：
将步骤 (6)中获得的结冷胶压干， 固体物料干燥并粉碎， 得到高透明度低酰 « 型结冷胶产品。，
4、 一种适用于组织培养基的低 «结冷胶的后提取方法， 其包 ¾ ^骤：
( 1 )发 的脱 Kt¾处理：
将发赚 升至 8O^90°C， 加入抗氧化剂， 同时加入碱调节 pH麵藝；
(2)发 @ ¾的酶处理：
在步骤（1 ) 发赚中加入不同酶制剂， 以尽可 也除去发赚中不溶性的杂质 和菌体碎片；
(3)发酵液的絮凝：
在步骤（2)酶处理后的发赚中，加入水溶性 ¾½属絮凝，再调节 pH itS碱性， 固液分离， 以除去发酵液中大部分水以及色素， 得到结冷胶粗品；
(4) 结冷胶澄清处理：
将步骤 (3)得到的结冷胶 品 M:澄清处理， 得到澄清的低 ¾结冷胶溶液；
(5) 脱隨结冷胶溶删餘处理：
在步骤（4)得到的结冷胶脱酰基澄清溶液中， 通过加入碱金属离子形成凝胶， 固 液分离；
(6)离子交换及脱色处理：
将步骤 (5)得到的结冷胶切碎成细小颗粒， ffiil离子交换工艺将结冷胶中的二价 阳离子大部分祛除；稍微压干后的结冷胶再用低级醇浸泡并 »、过滤以达到彻底脱色 (60 ¾AiS当质量的齢謹体系：
在步骤 (6)得到的结冷胶中加入适当质量的螯合齐 0/酸体系以螯合在结冷胶使用 过程中可能驗卜加入的二价阳离子同时保持 pH值的相 «定， 勝均匀。
(7)干燥粉碎：
将步骤 (6')中获得的结冷胶固体物料干燥并粉碎， 得到高透明度低酰基清型结 冷胶产品。
5、权利要求 14中任一项的方法，其中步骤 ( 1 )脱酰基后加入酸， 调节 pH值至中性， 降温 40°C以下。
6、前述任一权利要求的方法，其中步骤 ( 1 )中加入的抗氧化剂为抗坏血酸、异 VC钠、 焦亚硫酸钠、焦亚硫酸钾、硫酸氢钾、半胱氨酸中的一种或多种，浓度为 10( 300ppm。
7、 权利要求 ό的方法， 其中抗氧化剂的浓度为 15( 250ppm。
8、前述任一权利要求的方法，其中步骤 ( 1 )加入的用于调整 pH的碱为 NaOH、 KOH、 Na2C03、 K2C03中的一种或多种。
9、权利要求 8的方法， 其中步骤 (1 )加入的用于调整 pH的碱为 NaOH, KOH中的一 种或多种。
10、 权利要求 8或 9的方法， 其中步骤 (1 )加入的用于调整 pH的碱为 NaOH。
11、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 ( 1 )中使用繊每 pH值调节到 9.5〜11范围之 内。
12、权利要求 11的方法， 其中步骤 (1 )中删藝 pH值调节到 10左右。
13、前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (1 )中， 调整 pH的碱应先配成浓度为 10% 的溶液。
14、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤（1 )中， 保持温度在 85^0°C之间。
15、权利要求 13的方法， 其中步骤 (1)中， 保持温度在 8 ~88°C之间。 .
16、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤（1)中， 调整 pH的酸为无机酸或有机酸。
17、权利要求 16的方法， 其中步骤 (1)中， 调整 pH的酸为无机酸。
18、权禾腰求 16或 17的方法， 其中无机酸为盐酸、硫酸、 磷酸中的一种或多种。
19、权利要求 18的方法， 其中无机酸为盐酸。
20、权利要求 16的方法， 其中有机酸为甲酸、 醋酸、 m,苹果酸、 酒 中的一 种或多种。
21、前述任一权利要求的方法， 其中步骤（1)中， 调整 pH的酸的用量能将发酵液体 系 pH调节到 7左右。
22、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤（1)中， 调整 pH的酸先配成浓度为 10%的 溶液。
23、前述任一权禾崾求的方法， 其中步骤（2)为做向步骤（1):得到的发赚中分别 加入纤维素酶、 溶菌酶及蛋白酶。
24、权利要求 23 的方法， 其中步骤（2)中加入的酶及餅分别为： 纤维素酶浓度为 50O-2000ppm, 时间为 4到 8小时， 温度为 40~50°C; 溶菌酶浓度为 5( 300ppm， 时间 为 2到 4小时，温度为 3(M0°C; 中性蛋白酶或碱性蛋白酶浓度为 10( 000ppm， 时间 为 1到 5小时， 温度为 3(M0°C。
25、权利要求 24的方法，其中纤维素酶浓度为 100( 500ppm， 时间为 5到 6小时，温 度为 4345°C; 藤酶浓度为 10( 200ppm， 时间为 2.5到 3.5小时； 继为 35~37°C; 中性蛋白酶或碱性蛋白酶浓度为 30( 00ppm， 时间为 2到 3小时， 雕为 3( 5°C。
26、前述任一权利要求的方法， 其中步骤（3)为将步骤 (2)中的物料降温至 35Ό以 下， 加入二价或多价水溶性碱金属盐絮凝出低酰基结冷胶， 再加入碱调节 pH， 通过离 心躯搾法固液分离。
27、权利要求 26的方法，其中步骤 (3)中所用的水溶性 属盐包繊、'钙、钡、锌、 铝的水溶 组合。
28、权利要求 26或 27的方法， 其中步骤 (3)中所用的水溶性碱金属加入量占发酵液 质量的 0.10/ .5%。
29、权利要求 28的方法， 其中步骤 (3)中所用的水溶性碱金属加入量占发酵«量的 0.3ο/(Μ).4%。
30、权利要求 26的方法，其中步骤 (3)中所用的碱包括 KOH、NaOH、Na2C03、NaHC03, Na3P04TO组合。 '
31、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (3 )中棚的固液分离的设备为厢式聚丙烯 板框压龍赫慨搾机。
32、权利要求 31的方法， 其中步骤 (3)中删的固液分离的设备为厢式聚丙烯板概
Figure imgf000027_0001
33、前述任一权利要求的方法， 其中步骤（4)中将步骤 (3)制得的物料打散， 打散后 的结冷胶纤维长度不 Mil 10 纤维中水伤^量在 80%左右。
34、权利要求 33的方法， 其中步骤 (4)中打散的结冷胶纤维用 10到 20倍量的去离子 水溶解， 加热溶液使之升 8( ^5°C。
35、权利要求 34的方法，其中步骤 (4)中打散的结冷胶纤维用 15〜20倍量的去离子水 溶解， 加热溶液使之升 i¾ 85^90°C。
36、 前述任一权禾崾求的方法， 其中步骤（4)中澄清采用板框應 滤， 高速离心 或微孔滤膜过滤。
37、 权利要求 36的方法， 其中步骤（4)步骤澄清 板框 滤。
38、前述任一权利要求的方法， 其中步骤（4)中澄清处理时的温度在 65Ό以上。
39、权利要求 38的方法， 其中处理温度为 75°C左右。
40、前述任一权禾腰求的方法， 其中步骤 (5) 中形成赚时加入的金属 包括可溶性 一价 属盐、 二价 属盐、多价 ¾ ^属盐 组合。
41、权利要求 40的方法， 其中形成凝胶时加入的一价碱金属盐为澄清胶液的 0.8~1.2% (MS百分比)， 力口入的二价 ^盐为澄清胶液的 0.05^0.1% (MM百分比)。
42、权利要求 40或 41的方法， 其中步骤 (5)中形成繊时加人的金属盐为一价和二 价驗属盐。
43、权利要求 42的方法， 其中步骤 (5)中形成赚时加入的金属盐为二价驗属盐。
44、权利要求 4042任一的方法，其中戶舰一价 属 自氯化钾、氯化钠、硫隨、 硫隱之—或其组合。
45、权利要求 4043任一的方法， 其中戶 M二价 属 自氯化钙、氯化镁之一或其 组合。
46、权利要求 40的方法， 其中舰多价艦属为氯化铁。
47、前述任一权利要求的方法， 其中步骤（5) 中， 形成赚时加入的可溶 ' 属盐先 配成 30%浓度的溶液。
48、前述任一权利要求的方法， 其中步骤（5) 中使用的固液分离的设备为厢式聚丙烯 板框压龍 纏榨机。
49、权利要求 48的方法， 其中固液分离的设备为厢式聚丙烯板概藏。
50、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (5 )中固液分离后得到含水量 80%左右的低 清型结冷! ¾块 片。
51、权利要求 50的方法， 其中步骤 (6)为将步骤（5 )得到的含水量 80%左右的低酰 基结冷胶切碎为小颗粒， *^到3~5倍质量的加 AiS当一价 盐处理的水中，浸泡 并高速搅拌， 以离子交换的方式将胶体由二价阳离子盐形式转化成为一价阳离子盐形 式； 处理后的结冷胶溶菌搾 I ， 再浸輕低级赚液中，浸泡并高速擬， 之后再 过滤以綱切底祛除色素的效果。 '
52、 权利要求 50的方法， 其中步骤 (6)为将步骤（5 )得到的含水量 80%左右的低酰 基结冷胶切碎为小颗粒， SA到 3〜5倍质量的加 Λ¾当 剂处理的水中，浸泡并高速 搅拌， 以祛除胶体中的大部分二价或多价阳离子； 处理后的结冷胶溶液压搾脱水，再浸 輕 2倍质量的低级 液中，浸泡并高速勝，之后再过滤以^到彻底祛除色素的效 果。
53、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6) 中使用切胶机， 将低酰基结冷胶切碎为 柱状小颗粒， 颗粒直径小于 3 ¾|t， 长度小于 12 。
54、权利要求 51的方法， 其中步骤 (6)中所用的一价金属阳离子是可溶性一价碱^
55、 权利要求 54的方法， 其中所述可溶性一价 ¾ ^属盐为氯化钾、 氯化钠、硫酸钾或 硫隱。
56、权利要求 53-55任一的方法， 其中步骤 6中所用的一价金属阳离子在溶液中浓度达 到 500( 10000ppm。
57、权利要求 56的方法， 其中所述浓度为 600( 8000ppm。
58、权利要求 52的方法， 其中步骤 (6)中所用的螯合剂是柠檬酸钠、柠檬酸三钾、六 偏磷 、 六偏磷,、 焦磷 »3、 聚磷,或多种。
59、权利要求 58的方法， 其中腿的 剂是 隱 偏磷隱。
60、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤（6 ) 中所用的螯合剂量为在溶液中浓度 100( 10000ppmo
61、 权利要求 60的方法， 其中所述螯合剂量为 500( 8000ppm。
62、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6)中删的«压搾设备为布纏搾机。
63、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6)中棚的低级醇是乙醇、 异丙醇、 正丁 醇中的一种或多种。
64、 权利要求 63的方法， 其中所述低级醇为乙醇或异丙醇。
65、 权利要求 63或 64的方法， 其中所述低级醇为异丙醇。
66、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6)中使用的低级醇的量刃 股 粒重 量的 2^4倍。
67、权利要求的方法， 其中所述的用量为结冷胶湿颗粒重量的 2.5~3.5倍。
68、前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6 中删的 剂为 蒙翻、 m≡ 钾、六偏磷酸钠、 六偏磷酸钾、 焦磷酸钠、 聚磷酸钾中的一种或多种。
69、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤（6') 中删的齡剂为磷 齢剂。
70、权利要求 68或 69的方法， 其中所述螯合剂为六偏磷酸钠。
71、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6 中删的酸为无机酸或有机酸。
72、权利要求 71的方法， 其中所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸中的一种或多种。
73、 权利要求 71的方法， 其中難有机酸为甲酸、 醋酸、 w , 苹果酸、 酒碰中 的一种或多种。.
74、权利要求 72的方法， 其中所用酸为有机酸。
75、权利要求 74的方法， 其中所述有机酸为柠檬酸。
76、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (6')中使用的螯合剂用量在最终千燥产品中 占 9~10% (质量百分比）。
28
更正页 （细则第 91条)
77、前述 权利要求的方法，其中步骤 (6 中删的酸在最终千燥产品中占 0.5~1% (质量百分比)。
78、前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (7)为将步骤 (6)或（6')中制得的产物于 75〜80°C下进行干燥， 并粉碎， 使其 95%Mil 80目筛网。
79、 前述任一权利要求的方法， 其中步骤 (7)中干燥设备是真空干燥或沸腾千燥， 时 间为 1到 1.5小时之间。
80、 前述任一权利要求的方法制得的低 «结冷胶。
29
更正页 （细则第 91条)
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