WO2010079819A1 - 肥満または糖尿病治療用医薬組成物 - Google Patents
肥満または糖尿病治療用医薬組成物 Download PDFInfo
- Publication number
- WO2010079819A1 WO2010079819A1 PCT/JP2010/050131 JP2010050131W WO2010079819A1 WO 2010079819 A1 WO2010079819 A1 WO 2010079819A1 JP 2010050131 W JP2010050131 W JP 2010050131W WO 2010079819 A1 WO2010079819 A1 WO 2010079819A1
- Authority
- WO
- WIPO (PCT)
- Prior art keywords
- acsl
- sirna
- expression
- diabetes
- obesity
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7088—Compounds having three or more nucleosides or nucleotides
- A61K31/713—Double-stranded nucleic acids or oligonucleotides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
- C12N15/1137—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y602/00—Ligases forming carbon-sulfur bonds (6.2)
- C12Y602/01—Acid-Thiol Ligases (6.2.1)
- C12Y602/01001—Acetate-CoA ligase (6.2.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Obesity (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Child & Adolescent Psychology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
Description
(1)Acsl-1阻害剤を有効成分として含むことを特徴とする肥満症及び/またはII型糖尿病を予防又は治療するための医薬組成物、
(2)前記阻害剤が、Acsl-1の発現を抑制する機能性核酸である上記(1)記載の組成物、
(3)前記機能性核酸が、siRNAである上記(2)記載の組成物、
(4)前記siRNAが、脂肪滴蓄積抑制効果を有するものである上記(3)記載の組成物
(5)前記siRNAが、Acsl-1の遺伝子発現を80%以上抑制できるものである上記(3)の組成物、
(6)前記siRNAが、RNAにおいて配列番号17~49からなる群より選択されるいずれかの配列を有するsiRNAである上記(5)の組成物、
(7)哺乳類に、Acsl-1阻害剤を有効量投与することを特徴とする肥満症またはII型糖尿病の治療方法、
(8)前記阻害剤が、Acsl-1の発現を抑制する機能性核酸である上記(7)記載の治療方法、
(9)前記機能性核酸が、siRNAである上記(8)記載の治療方法、
(10)Acsl-1の発現及び/または作用を阻害することを指標とする肥満症またはII型糖尿病治療薬のスクリーニング方法、
(11)RNAが配列番号17~49からなる群より選択されるいずれかの配列を有するsiRNAもしくはその誘導体、
(12)3'末端のオーバーハングをさらに含む、上記(11)記載のsiRNA、
(13)肥満症及び/またはII型糖尿病を予防又は治療するため医薬組成物を製造するためのAcsl-1阻害剤の使用、
(14)前記阻害剤が、Acsl-1の発現を抑制する機能性核酸である上記(13)の使用、
(15)前記機能性核酸が、siRNAである上記(14)の使用、
(16)前記siRNAが、脂肪滴蓄積抑制効果を有するものである上記(15)の使用
(17)前記siRNAが、Acsl-1の遺伝子発現を80%以上抑制できるものである上記(15)の使用、および
(18)前記siRNAが、RNAにおいて配列番号17~49からなる群より選択されるいずれかの配列を有するsiRNAもしくはその誘導体である上記(17)の使用、
に関する。
(A)本発明の医薬組成物及び治療法
(B)本発明のスクリーニング方法
当該スクリーニングは、被験物質の中から、Acsl-1遺伝子の発現を抑制する作用を有する物質を、Acsl-1 mRNAの発現量を指標として探索し、抗肥満剤等の有効成分として取得する方法である。
(1)被験物質とAcsl-1遺伝子を発現可能な細胞とを接触させる工程、
(2)被験物質を接触させた細胞のAcsl-1遺伝子の発現量を測定する工程、及び
(3)上記の測定量が、被験物質を接触させない対照細胞のAcsl-1遺伝子の発現量よりも小さい被験物質を選択する工程。
当該スクリーニングは、被験物質の中から、Acsl-1の産生を低下させる作用を有する物質を、Acsl-1の産生量を指標として探索し、抗肥満剤等の有効成分として取得する方法である。
(1’)被験物質とAcsl-1を産生可能な細胞またはこの細胞から調製した細胞画分とを接触させる工程、
(2’)被験物質を接触させた細胞または細胞画分のAcsl-1の産生量を測定する工程、及び
(3’)上記の測定量が、被験物質を接触させない対照細胞(Acsl-1を産生可能な細胞)または被験物質を接触させない細胞画分(Acsl-1を産生可能な細胞から調製)のAcsl-1の産生量よりも小さい被験物質を選択する工程。
当該スクリーニングは、被験物質の中から、Acsl-1の作用を低下させる作用を有する物質を、Acsl-1の作用を指標として探索し、抗肥満剤等の有効成分として取得する方法である。
(1”)被験物質とAcsl-1を産生可能な細胞またはこの細胞から調製した細胞画分を接触させる工程、
(2”)被験物質を接触させた細胞または細胞画分のAcsl-1の作用を検出する工程、及び
(3”)上記の検出した作用が、被験物質を接触させない対照細胞(Acsl-1を産生可能な細胞)または細胞画分(Acsl-1を産生可能な細胞から調製)のAcsl-1の作用よりも低い被験物質を選択する工程。
る方法や条件は、前述する(B-2)のスクリーニング方法にて記載したものを同様に使用することができる。
以下のとおり、マウスAcsl-1 variant 3 ORF(Refseq ID XM_991228)に対してshRNAを設計した。まず、センスターゲット配列として、3’末端側の7塩基のうち4塩基がアデニンまたはチミンであること、およびチミンが連続して4塩基つながっていないことを条件として、上記遺伝子に連続して19塩基が完全一致する配列を27個選択した(図1)。これらの各センスターゲット配列に対する相補配列をアンチセンスターゲット配列とする。次に、センスターゲット配列とアンチセンスターゲット配列間にループ配列(TTCAAGAGAまたはATCAAGAGA)を挿入し、アンチセンスターゲット配列の3’末端側にPol IIIターミネーター配列であるTTTTTT配列を連結させたtop strand oligo DNAを設計した。さらに5’末端側にBamHI制限酵素部位と3’末端側にNotI制限酵素部位を導入しtop strand oligo DNA-BN とした。このtop strand oligo DNA-BNと相補的な配列をbottom strand oligo DNA-NBとした。top strand oligo DNA-BNとbottom strand oligo DNA-NBを100μMとなるようにTE緩衝液〔組成:10mM Tris-HCl、1mM EDTA (pH8.0)〕に溶解し、各10μLずつをマイクロチューブへ入れ、さらに最終濃度0.1MとなるようにNaClを添加した。この混合液が入ったマイクロチューブを100度に設定したヒートブロックへ入れ、4分加熱した後、室温に戻し冷却するまで放置し、二本鎖オリゴDNAを調製した(アニーリング)。
C57BL/6J(日本チャールスリバー)肝臓からRNeasy Mini Kit(QIAGEN)を用いて添付マニュアルに従いDNase I処理した後、全RNAを回収した。続いてSuperScriptIII First Strand Synthesis System (invitrogen) を用いて添付マニュアルに従いcDNA合成を行った。このcDNAを鋳型DNAとしてAcsl-1クローニング用プライマー(配列番号3、4)とPhusion High-Fidelity DNAポリメラーゼ(FINNZYMES)を用いて98℃ 10秒、68℃ 10秒、72℃ 1分を10回繰り返す条件でPCRを行うことにより、5'末端側にNotI制限酵素部位を3'末端側にXhoI制限酵素部位を導入したマウスAcsl-1(variant3)遺伝子の断片を得た。得られた断片をNotIとXhoI処理した後、予めNotI、XhoI処理したpCR3.1(invitrogen)へ連結させて発現ベクター(pCR3.1-Acsl-1)を作製した。
pShuttleベクター(クロンテック)をXbaIとSpeI消化して、CMV promoter領域を除いた後、human U6 promoterを挿入しpShuttle-U6とした。このpShuttle-U6をBamHIとNotIで処理し、実施例1に示す方法で作製した二本鎖オリゴDNAを組み込み、shRNA発現ベクターを作製した。
実施例2で作製したマウスAcsl-1発現ベクター(pCR3.1-Acsl-1)と実施例3で作製したshRNA発現ベクターまたはネガティブコントロールとしてpShuttle-U6をHEK293細胞へco-transfectionし、Acsl-1の mRNA量を測定することでshRNA配列によるAcsl-1発現抑制率を比較した。10%FCS(ウシ胎仔血清)を含有するDMEMを用い、5%CO2、37℃の条件下でHEK293細胞を培養した。トランスフェクション前日にHEK293細胞を12ウェルプレートに播種し、24時間培養後、FuGene(ロシュ)を用いてshRNA発現ベクター400 ngとAcsl-1発現ベクターまたはpShuttle-U6 600 ngと内部コントロールレポーターとして分泌型アルカリフォスファターゼを発現するベクター100 ngを添付マニュアルに従い、co-transfectionした。トランスフェクションから4日後に、培地を回収してBD GreatEscApe SEAP Chemiluminescence Detection Kit(Clontech)を用いて添付マニュアルに従いSEAP活性を測定した。続いて細胞からRNeasy Mini Kit(QIAGEN)を用いて添付マニュアルに従いDNase I処理した後、全RNAを回収し、SuperScriptIII First Strand Synthesis System (invitrogen) を用いて添付マニュアルに従いcDNA合成を行った。合成したcDNAを鋳型としてSYBR Green Iによるリアルタイム定量PCRを行ない、Acsl-1 mRNA量を定量した。リアルタイム定量PCRは反応試薬としてSYBR Green PCR Master Mix (ABI)を用い、Applied Biosystems 7500リアルタイムPCRシステム(ABI)を用いて測定を実施した。このとき使用したリアルタイム定量PCR用プライマーの配列を配列番号5、6に示す。
pC4HSUベクター(Microbix Biosystems Inc.)をAscI処理し、PI-SceI、I-CeuI制限酵素部位を含むリンカーを導入してpC4HSU-PISceI-ICeuIを作製した。pShuttle-U6、図1の12番目に示す塩基配列を基に作製したpShuttle-U6-Acsl1-I12、および図1の16番目に示す塩基配列を基に作製したpShuttle-U6-Acsl1I16をPI-SceI、I-CeuI処理し、U6プロモーターとshRNA配列を含む領域を切り出し、予めPI-SceI、I-CeuI処理したpC4HSU-PISceI-ICeuIベクターへ組み、pC4HSU-U6、pC4HSU-U6-Acsl1-I12、およびpC4HSU-U6-Acsl1-I16を作製した。このベクターを用いて添付マニュアルに従いHD-Ad-ベクターを調製した。HD-Ad-U6-Acsl1-I12は、肝臓内でUGCCUUGCAAUUAUGUAAA(配列番号7)の塩基配列を有する二本鎖RNAを含むsiRNAを発現することができる。一方、HD-Ad-U6-Acsl1-I16については肝臓内でAUGGCACCUUGAAGAUUAU(配列番号8)の塩基配列を有する二本鎖RNAを含むsiRNAを発現することができる。
C57BL/6J(日本チャールスリバー)7週齢・雄へ高脂肪食(60%kcal脂肪:TestDiet社製)を7週間以上与えることで食餌誘導性肥満(DIO)マウスを作製した。HD-Ad投与前のデータとしてDIOマウス(14週齢:高脂肪食負荷7週)の体重、1日あたりの摂餌量、血糖値(6時間絶食時)を測定し、血漿成分(6時間絶食時)を回収した。血糖値の測定はグルコカードダイアメーター(アークレイ)を用いて添付マニュアルに従い測定した。血漿成分は、全血50μLへ0.5M ETDAを2μL添加して9000rpm、1分遠心分離して上清を回収することで得た。続いて、投与前データをとったDIOマウス(15週齢:高脂肪食負荷8週)へHD-Ad 9X1011 vpずつマウス尾静脈内注射して投与した。投与後4週間、体重と摂餌量の測定を行った。HD-Ad投与から4週間後、6時間絶食させたDIOマウス尾静脈から採血して血糖値を測定した。その直後、心採血により血漿成分を回収し、続いて肝臓組織を回収した。肝臓からのRNA回収、Acsl-1 mRNA発現定量は実施例4の細胞からの回収・定量と同様に行った。肝臓のAcsl-1蛋白質発現はウエスタンブロットにより解析した。ウエスタンブロットにはAcsl-1抗体(SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY:sc-49008)とHRP-Rabbit Anti-Goat IgG (H+L) conjugate(ZYMED Laboratories)を用いた。以上の実験をAcsl-1-shRNAごとに独立して2回に分けて行った。
ウイルス投与による肝炎への影響を調べるために、血漿成分のGOTを測定した。GOTはトランスアミナーゼCII―テストワコー(和光純薬)を用いて添付マニュアルに従って測定した。測定結果より、コントロール群、Acsl-1発現抑制群(Acsl1I12・I16投与群)全群でウイルス投与前よりGOTの上昇が若干見られたが体重へ影響を及ぼす数値ではなく、各群でGOT値に差はなかった。従って、ウイルス投与ならびにAcsl-1発現抑制によって肝炎は生じておらず、体重増加抑制の原因が肝炎ではないことが確認できた(図7)。
レビスインスリン-マウス(シバヤギ)を用いて添付マニュアルに従い定量した。定量結果を図8に示す。HD-Ad投与4週間後のデータが示すように、Acsl-1発現抑制によってコントロール群と比較して血中インスリン値が低下し、インスリン抵抗性が改善された(実験1 p<0.005、実験2 p<0.001)。
Folch法を基に行った。肝臓0.5gをホモジナイズしマイクロチューブへ入れ、0.1M KClを加えて1.4mLにメスアップし、よく攪拌して15mLファルコンチューブへ移す。次に、CHCl3とMeOH混合液(2:1)6mLを入れ、室温で1時間攪拌する。2mLの滅菌水を加えてよく攪拌し、5分間放置する。3000rpm、10分間遠心分離し、下層(有機層)を720μL回収する。20分間エバポレーションを行って有機溶媒を除去すると黄透明な脂質成分が得られる。
トリグリセリドはトリグリセライド E-テストワコー(GPO・DAOS法:和光純薬)を用いて添付マニュアルに従い測定した。コレステロールはコレステロール E-テストワコー(コレステロールオキシダーゼ・DAOS法:和光純薬) を用いて添付マニュアルに従い測定した。遊離脂肪酸はNEFA C-テストワコー(ACS・ACOD法:和光純薬)を用いて添付マニュアルに従い測定した。血漿総コレステロール定量結果を図9、肝臓トリグリセライド測定結果を図10、肝臓遊離コレステロール測定結果を図11、肝臓遊離脂肪酸測定結果を図12に示す。測定結果より、コントロール群と比較してAcsl-1発現抑制によって肝臓トリグリセライドの低下(実験1 p<0.001,実験2 p<0.05)、肝臓遊離脂肪酸の低下(実験1 p<0.005,実験2 p<0.005)、肝臓遊離コレステロールが低下し(実験1 p<0.05,実験2 p<0.001)、脂肪肝の改善が見られた。さらに、Acsl-1発現抑制によってコントロール群に比べ血中総コレステロールの低下(実験1 p<0.005)も見られた。以上より、Acsl-1発現抑制によってメタボリックシンドローム改善効果が確認された。
方法
ヒトAcsl-1に対するsiRNAであるHs_ACSL1_4_HP siRNA(SI00291228)とHs_ACSL1_5_HP siRNA(SI04244982)をQIAGENより購入した。また、本実験のポジティブコントロールとして中性脂肪合成酵素であるジアシルグリセロール アシルトランスフェラーゼ(DGAT)を用いるため、ヒトDGAT1に対するsiRNAであるHs_DGAT1_8_HP siRNA(SI03246754)、ヒトDGAT2に対するsiRNAであるHs_DGAT2_1_HP siRNA(SI00363097)をQIAGENより購入した。ネガティブコントロール(NC)siRNAはSAMCHULLYより購入した。10%FCS(ウシ胎仔血清)を含有するDMEMを用い、5%CO2、37℃の条件下でヒト肝臓由来細胞株であるHepG2細胞を培養した。トランスフェクション直前にHepG2細胞を6ウェルプレートに播種し、Lipofectamine RNAiMAX試薬(invitrogen)を用いてsiRNA(最終濃度50μM)を添付マニュアルに従いリバーストランスフェクションした。このとき使用したsiRNAはHs_ACSL1_4_HP siRNA、NC siRNA、Hs_DGAT1_8_HP siRNAとHs_DGAT2_1_HP siRNAを混合したものであった。オレイン酸とBSA(ウシ血清アルブミン)をモル比5:1で混合したコンジュゲートを調製し、siRNAをトランスフェクションした翌日に細胞へ添加した(オレイン酸最終濃度0.2 mM)。siRNAトランスフェクション3日後(オレイン酸添加2日後)、HepG2に蓄積した脂肪滴をトリグリセライド蓄積測定試薬であるAdipo Red(三光純薬)を用いて添付マニュアルに従い染色した。染色後、HepG2を培養dishから剥離して2等分し、一方はAdipo Redで染色した細胞内脂肪滴をFACS(BD)により定量し、もう一方はRNAを回収してリアルタイム定量PCRによりAcsl-1、DGAT1および2のmRNA量を定量した。このとき使用したAcsl-1とDGAT1およびに2対するリアルタイム定量PCR用プライマーの配列を配列番号11~16に示す(細胞からのRNA回収やmRNA定量方法は実施例4を参照)。
ヒトAcsl-1 mRNA(NM_001995、配列番号9)とマウスAcsl-1 mRNA(NM_007981、配列番号10)において共通の連続して19塩基完全一致した配列を選択して(図13~17)以下の試験を行った。選択した配列のセンス鎖3’オーバーハングはチミン2塩基(dTdT)、アンチセンス鎖3’オーバーハングはAcsl-1 DNA配列と一致する2塩基としてsiRNAを合成した。siRNA合成はシグマアルドリッチジャパンに委託した。ネガティブコントロールとしてAllStar Negative Control siRNAをQIAGENより購入した。
10%FCS(ウシ胎仔血清)を含有するDMEMを用い、5%CO2、37℃の条件下でヒト肝臓由来細胞株であるHepG2細胞を培養した。トランスフェクション直前にHepG2細胞を96ウェルプレートに播種し、Lipofectamine RNAiMAX試薬(invitrogen)を用いて実施例12で合成したsiRNA、AllStar Negative Control siRNA、ポジティブコントロールとして実施例11で使用したHs_ACSL1_4_HP siRNAを添付マニュアルに従いリバーストランスフェクションした(siRNA最終濃度50μM)。siRNAトランスフェクション3日後、FastLane Cell SYBR Green Kit(QIGEN)とリアルタイム定量PCRを用いて添付マニュアルに従ってHepG2細胞のAcsl―1 mRNA量を定量し、各siRNAのAcsl-1遺伝子発現抑制効率を算出した。その結果の一部を図18に示した。この中でHs_ACSL1_4_HP siRNAと同等以上の抑制効率を示したもの(例えば、図13~17のNo.41、53、56、64、202、207に示す配列をもとにして作製したsiRNA)は、Acsl-1発現抑制効率に優れ、脂肪滴蓄積を抑制できると考えられる。また、これらAcsl-1発現抑制効率に優れたsiRNAを含む医薬組成物は抗肥満および高血糖治療薬として期待できると考えられる。同様にして、種々の配列のsiRNAについて抑制効果を調べた結果、以下に示す配列をRNA部分のセンス鎖に有するsiRNAは、その効果が優れていることがわかった。
No.41、AUUUGUUUCACAAGUGGAA (配列番号17)
No.53、AGUGGAACUACAGGCAACC(配列番号18)
No.56、GGAACUACAGGCAACCCCA(配列番号19)
No.64、AGGCAACCCCAAAGGAGCA(配列番号20)
No.81、GCCUCUCGCCCAUAUGUUU(配列番号21)
No.98、GUAAUGCUGUGUCAUGGAG(配列番号22)
No.100、AAUGCUGUGUCAUGGAGCU(配列番号23)
No.101、AUGCUGUGUCAUGGAGCUA(配列番号24)
No.102、UGCUGUGUCAUGGAGCUAA(配列番号25)
No.111、CCAAGGAGAUAUCAGGCUG(配列番号26)
No.112、CAAGGAGAUAUCAGGCUGC(配列番号27)
No.117、GAAACAACAGCCUGUGGGA(配列番号28)
No.118、GAUGUGGAAGAAAUGAAUU(配列番号29)
No.119、AUGUGGAAGAAAUGAAUUA(配列番号30)
No.121、GAAAAGAUUGAAAAUAUCU(配列番号31)
No.125、AGGUGUUUGUCCACGGAGA(配列番号32)
No.126、GGUGUUUGUCCACGGAGAA(配列番号33)
No.137、GAACUAUUUCAGGUCGCAG(配列番号34)
No.138、AACUAUUUCAGGUCGCAGA(配列番号35)
No.139、ACUAUUUCAGGUCGCAGAU(配列番号36)
No.150、UCUCCAUGCAGUCAGUGGA(配列番号37)
No.153、AAGUUAAUUUGGGAAAUUA(配列番号38)
No.161、GGGGUUUUGAAUGUUUGCU(配列番号39)
No.163、GGUUUUGAAUGUUUGCUUU(配列番号40)
No.164、AGUGUUGGCUAUUUCUAUG(配列番号41)
No.165、GUGUUGGCUAUUUCUAUGU(配列番号42)
No.166、UGUUGGCUAUUUCUAUGUU(配列番号43)
No.178、CUAUGUUUUAUAAACCAAA(配列番号44)
No.190、AAAACAAUGAAGGAAACCA(配列番号45)
No.195、AAUGAAGGAAACCAAAAUA(配列番号46)
No.201、GGAAACCAAAAUAAAUAUU(配列番号47)
No.202、GAAACCAAAAUAAAUAUUU(配列番号48)
No.207、CAAAAUAAAUAUUUCUGCA(配列番号49)
Claims (12)
- Acsl-1阻害剤を有効成分として含むことを特徴とする肥満症またはII型糖尿病を予防及び/又は治療するための医薬組成物。
- 前記阻害剤が、Acsl-1の発現を抑制する機能性核酸である請求項1の組成物。
- 前記機能性核酸が、siRNAである請求項2の組成物。
- 前記siRNAが、脂肪滴蓄積抑制効果を有するものである請求項3の組成物。
- 前記siRNAが、Acsl-1の遺伝子発現を80%以上抑制できるものである請求項3の組成物。
- 前記siRNAが、RNAにおいて配列番号17~49からなる群より選択されるいずれかの配列を有するsiRNAである請求項5の組成物。
- 哺乳類に、Acsl-1阻害剤を有効量投与することを特徴とする肥満症及び/またはII型糖尿病の治療方法。
- 前記阻害剤が、Acsl-1の発現を抑制する機能性核酸である請求項7の治療方法。
- 前記機能性核酸が、siRNAである請求項8の治療方法。
- Acsl-1の発現及び/または作用を阻害することを指標とする肥満症またはII型糖尿病治療薬のスクリーニング方法。
- RNAが配列番号17~49からなる群より選択されるいずれかの配列を有するsiRNAもしくはその誘導体。
- 3'末端のオーバーハングをさらに含む、請求項11記載のsiRNA。
Priority Applications (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US13/143,730 US20120035242A1 (en) | 2009-01-08 | 2010-01-08 | Pharmaceutical composition for treating obesity or diabetes |
JP2010545787A JPWO2010079819A1 (ja) | 2009-01-08 | 2010-01-08 | 肥満または糖尿病治療用医薬組成物 |
EP10729239.3A EP2382992A4 (en) | 2009-01-08 | 2010-01-08 | PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF ADIPOSITAS OR DIABETES |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009-002275 | 2009-01-08 | ||
JP2009002275 | 2009-01-08 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
WO2010079819A1 true WO2010079819A1 (ja) | 2010-07-15 |
Family
ID=42316584
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
PCT/JP2010/050131 WO2010079819A1 (ja) | 2009-01-08 | 2010-01-08 | 肥満または糖尿病治療用医薬組成物 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20120035242A1 (ja) |
EP (1) | EP2382992A4 (ja) |
JP (1) | JPWO2010079819A1 (ja) |
WO (1) | WO2010079819A1 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013118857A1 (ja) * | 2012-02-10 | 2013-08-15 | 国立大学法人大阪大学 | Acsl1に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
WO2015020194A1 (ja) * | 2013-08-09 | 2015-02-12 | 国立大学法人大阪大学 | Acsl1に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20210244689A1 (en) * | 2020-02-06 | 2021-08-12 | Dasman Diabetes Institute | Method of treating postprandial inflammation |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006506976A (ja) * | 2002-08-14 | 2006-03-02 | ファルマシア・コーポレーション | アシル−CoAシンテターゼ1発現のアンチセンス調節 |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2314691A3 (en) * | 2002-11-14 | 2012-01-18 | Dharmacon, Inc. | Fuctional and hyperfunctional siRNA |
EP1752536A4 (en) * | 2004-05-11 | 2008-04-16 | Alphagen Co Ltd | POLYNUCLEOTIDE CAUSING RNA INTERFERENCE AND METHOD OF REGULATING GENE EXPRESSION WITH THE USE OF THE SAME |
GB0619860D0 (en) * | 2006-10-06 | 2006-11-15 | Birkeland Innovasjon As | Treatment of insulin resistance and disorders associated therewith |
-
2010
- 2010-01-08 EP EP10729239.3A patent/EP2382992A4/en not_active Withdrawn
- 2010-01-08 JP JP2010545787A patent/JPWO2010079819A1/ja active Pending
- 2010-01-08 US US13/143,730 patent/US20120035242A1/en not_active Abandoned
- 2010-01-08 WO PCT/JP2010/050131 patent/WO2010079819A1/ja active Application Filing
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006506976A (ja) * | 2002-08-14 | 2006-03-02 | ファルマシア・コーポレーション | アシル−CoAシンテターゼ1発現のアンチセンス調節 |
Non-Patent Citations (8)
Title |
---|
ELBASHIR, S.M. ET AL.: "Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells", NATURE, vol. 411, no. 6836, 24 May 2001 (2001-05-24), pages 494 - 498, XP002529540 * |
ELBASHIR, S.M. ET AL.: "RNA interference is mediated by 21- and 22-nucleotide RNAs", GENES DEV., vol. 15, no. 2, 15 January 2001 (2001-01-15), pages 188 - 200, XP002206453 * |
HIROYUKI SUZUKI ET AL.: "Himan no Seiin to Shibo Chikuseki no Bunshi Seibutsugaku", JAPANESE JOURNAL OF CLINICAL MEDICINE, vol. 53, 1995, pages 569 - 573, XP008164340 * |
NAOKI INAGAKI: "Sosetsu -Saikin no Allergy Kenkyu no Shinpo", FOLIA PHARMACOLOGICA JAPONICA, vol. 131, no. 1, 2008, pages 22 - 27, XP008167696 * |
See also references of EP2382992A4 * |
SHIMOMURA, I. ET AL.: "Marked enhancement of acyl-CoA synthetase activity and mRNA, paralleled to lipoprotein lipase mRNA, in adipose tissue of Zucker obese rats (fa/fa)", BIOCHIM. BIOPHYS. ACTA, vol. 1124, no. 2, 4 March 1992 (1992-03-04), pages 112 - 118, XP023366446 * |
WANG, Y. ET AL.: "Acyl coenzyme A synthetase regulation: Putative role in long-chain acyl coenzyme A partitioning", OBES. RES., vol. 12, no. 11, 2004, pages 1781 - 1788, XP055104291 * |
YAO, H. ET AL.: "Long chain acyl-CoA synthetase 3-mediated phosphatidylcholine synthesis is required for assembly of very low density lipoproteins in human hepatoma Huh7 Cells", J. BIOL. CHEM., vol. 283, no. 2, 11 January 2008 (2008-01-11), pages 849 - 854, XP008159705 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013118857A1 (ja) * | 2012-02-10 | 2013-08-15 | 国立大学法人大阪大学 | Acsl1に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
WO2015020194A1 (ja) * | 2013-08-09 | 2015-02-12 | 国立大学法人大阪大学 | Acsl1に対するアンチセンスオリゴヌクレオチド |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2382992A1 (en) | 2011-11-02 |
US20120035242A1 (en) | 2012-02-09 |
JPWO2010079819A1 (ja) | 2012-06-28 |
EP2382992A4 (en) | 2013-12-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5825754B2 (ja) | Apobの発現を調節するための化合物および方法 | |
WO2011019074A1 (ja) | 細胞または臓器の線維化を制御する核酸 | |
WO2010079819A1 (ja) | 肥満または糖尿病治療用医薬組成物 | |
EP1924294A2 (en) | Compositions and their uses directed to ptpru | |
US20130109849A1 (en) | Compositions and their uses directed to aceytl-coa carboxylases | |
JP2024515344A (ja) | 補体成分3の発現を阻害するための組成物及び方法 | |
WO2022025827A1 (en) | Method of stimulating proliferation of a cell | |
JPWO2005010185A1 (ja) | Klf5遺伝子の発現を抑制するrna | |
WO2011074652A1 (ja) | HIF-2αの発現を抑制する核酸 | |
EP3072969A1 (en) | Oligonucleotide sequences targeting transcription factor TSC22D4 for the treatment of insulin resistance | |
JP5860038B2 (ja) | 抗メタボリックシンドローム効果を持つ核酸 | |
KR20240023630A (ko) | 신규 rna 치료제 및 그의 용도 | |
JP2010163391A (ja) | 糖尿病又は高脂血症治療用医薬組成物 | |
EP2527442A2 (en) | Compounds and methods for modulating gene expression | |
WO2013077228A1 (ja) | microRNAを有効成分とするIMPDH阻害剤 | |
JP2011190176A (ja) | 肥満細胞の脱顆粒抑制剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
121 | Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application |
Ref document number: 10729239 Country of ref document: EP Kind code of ref document: A1 |
|
DPE1 | Request for preliminary examination filed after expiration of 19th month from priority date (pct application filed from 20040101) | ||
ENP | Entry into the national phase |
Ref document number: 2010545787 Country of ref document: JP Kind code of ref document: A |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 13143730 Country of ref document: US |
|
NENP | Non-entry into the national phase |
Ref country code: DE |
|
WWE | Wipo information: entry into national phase |
Ref document number: 2010729239 Country of ref document: EP |