WO2010041703A1 - 抗sarsコロナウイルス剤及び抗sarsコロナウイルス剤含有製品 - Google Patents

抗sarsコロナウイルス剤及び抗sarsコロナウイルス剤含有製品 Download PDF

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sars
guava
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coronavirus agent
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修一 福本
崇輝 後藤
誠治 林
由之 吉仲
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株式会社 ポッカコーポレーション
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    • A61P43/00Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Definitions

  • the present invention relates to an anti-SARS coronavirus agent and a product containing an anti-SARS coronavirus agent.
  • SARS severe Acute Respiratory Syndrome
  • Major symptoms include respiratory symptoms such as fever above 38 ° C., cough, shortness of breath, and difficulty breathing. Symptoms such as diarrhea, headache, chills, loss of appetite, general malaise, and consciousness may be observed. At present, an effective curative treatment for SARS has not been established, and symptomatic treatment is the center.
  • the present invention is based on the finding that the combination of guava extract and ascorbic acid has an excellent anti-SARS coronavirus action as a result of intensive studies by the present inventors.
  • An object of the present invention is to provide an anti-SARS coronavirus agent having a SARS coronavirus action and a product containing an anti-SARS coronavirus agent.
  • a guava extract extracted from guava using an extraction solvent mainly containing at least one of water and a hydrophilic organic solvent, and ascorbic acids are used.
  • An anti-SARS coronavirus agent containing as an active ingredient is provided.
  • an anti-SARS coronavirus agent-containing product containing the anti-SARS coronavirus agent is provided.
  • an anti-SARS coronavirus agent having an excellent anti-SARS coronavirus action and an anti-SARS coronavirus agent-containing product are provided.
  • the anti-SARS coronavirus agent according to this embodiment contains a guava extract extracted from guava (Psidium Guajava Linn) using a specific extraction solvent and ascorbic acids as active ingredients.
  • Guava is an evergreen small tree that is also known as bunjiro or banzakuro in Japan and is native to the tropics belonging to the genus Banjiro.
  • guava grows naturally on the Caribbean coast, Central America, northern South America, and Southeast Asia, and is cultivated in warm regions such as Okinawa in Japan.
  • the production area of the guava used is not particularly limited.
  • any organ of guava or components of each organ can be used.
  • the extraction raw material a single organ of guava or a component thereof may be used, or two or more types of organs of guava or components thereof may be mixed and used.
  • the extraction raw material preferably contains at least guava leaves or stems.
  • Extracted raw material is as-collected, crushed, crushed or ground after collection, or dried after collection, or crushed, crushed or ground after collection and drying, or crushed after collection Then, it is subjected to an extraction operation in a state of being crushed or ground and dried. In order to perform extraction efficiently, it is preferable that the extraction raw material is crushed. Moreover, in order to obtain a guava extract excellent in anti-SARS coronavirus action, the raw material for extraction is preferably fresh leaves.
  • the extraction solvent used when extracting the guava extract from the extraction raw material contains at least one of water and a hydrophilic organic solvent as a main component. That is, at least one of water and the hydrophilic organic solvent has the highest abundance ratio (volume%) in the elution solvent.
  • the content of water or hydrophilic organic solvent in the extraction solvent is preferably 50% by volume or more.
  • the total of the water content and the hydrophilic organic solvent content is preferably 50% by volume or more.
  • hydrophilic organic solvent contained in the extraction solvent examples include lower alcohols such as methanol and ethanol, acetone, and ethyl acetate.
  • the extraction solvent may contain one kind of hydrophilic organic solvent alone or may contain a plurality of kinds of hydrophilic organic solvents.
  • the extraction solvent may contain a small amount of a solvent other than water and a hydrophilic organic solvent, and additives such as organic salts, inorganic salts, buffers, and emulsifiers may be dissolved therein.
  • Extraction of the guava extract is performed by immersing the extraction raw material in the extraction solvent for a predetermined time.
  • the amount of the extraction solvent used is preferably 2 to 100 L, more preferably 5 to 50 L, and still more preferably 20 to 40 L per 1 kg of the extraction raw material.
  • the extraction solvent may be stirred, heated or pressurized as necessary.
  • the time required for extraction is shortened. For example, an extraction that takes 10 days at a normal temperature under a pressure of 1 to 2 atmospheres may take 1 to 200 minutes, 3 to 60 minutes, or 5 to 30 minutes at a temperature of 50 to 130 ° C.
  • the extraction conditions can be appropriately changed according to the state of the extraction raw material and the type of extraction solvent.
  • the guava extract extracted from the extraction raw material is subjected to solid-liquid separation in order to separate the residue of the extraction raw material.
  • Solid-liquid separation is performed by a known method such as filtration or centrifugation.
  • the guava extract after the solid content is removed by solid-liquid separation may be concentrated and dried as necessary.
  • Ascorbic acids contained in the anti-SARS coronavirus agent of this embodiment are, for example, ascorbic acid, ascorbate or ascorbate.
  • ascorbate include sodium ascorbate, potassium ascorbate, and calcium ascorbate.
  • ascorbic acid esters include ascorbic acid phosphate and ascorbic acid stearate.
  • the amount of ascorbic acids contained in the anti-SARS coronavirus agent is preferably 0.05 to 5 times, more preferably 0.1 to 2 times the dry mass of the guava extract in the anti-SARS coronavirus agent. is there.
  • the anti-SARS coronavirus agent further contains an extract derived from a plant different from the guava extract.
  • plants other than guava from which this extract is derived include berries such as blueberries, cranberries and elderberries, cassis, grapes, grapes, tea leaves, turmeric, perilla, plantain, hops and propolis.
  • the cocoon-derived extract is particularly preferable for greatly improving the anti-SARS coronavirus action of the anti-SARS coronavirus agent.
  • An extract derived from a plant other than the guava extract can also be obtained in the same manner as the guava extract.
  • the pH of the anti-SARS coronavirus agent is preferably 5.4 or less, more preferably 4.5 or less, in order to exhibit a more excellent anti-SARS coronavirus action.
  • the lower limit of the pH of the anti-SARS coronavirus agent is not particularly limited, but is preferably 2.0 or more because adjustment is easy.
  • the pH is adjusted, for example, by adding an organic acid to the anti-SARS coronavirus agent.
  • the organic acid that can be used include citric acid, malic acid, tartaric acid, and acetic acid.
  • Fruit juice for example, fruit juice derived from citrus fruits, plums, berries, apples and grapes
  • vinegar eg grain vinegar and fruit vinegar
  • the anti-SARS coronavirus agent can be used by being applied to a product intended to exert an anti-SARS coronavirus action.
  • anti-SARS coronavirus-containing products include medical agents (including drugs), cleaning agents, cosmetics, medical equipment, hygiene materials, hygiene products, and food and drink.
  • medical agent include pharmaceuticals.
  • cleaning agent include laundry softeners, laundry bleaches, soaps, bathing agents, detergents, shampoos, and toothpastes.
  • the cosmetics include face washing soaps, hand soaps, hand creams, perfumes, lotions, milky lotions, cosmetic liquids, cosmetic creams, lipsticks, lip balms, and funny.
  • Examples of the medical device include a mask, bandage, gauze, glove, adhesive bandage, cotton ball, diagnostic mechanical device, surgical mechanical device, therapeutic mechanical device, hospital mechanical device, dental mechanical device, and medical device. Auxiliary appliances and orthodontic appliances are listed.
  • Examples of the sanitary material include gauze, absorbent cotton, nonwoven fabric, and cotton swab.
  • Examples of the sanitary product include a humidifier, an air conditioner, and an air purifier.
  • Examples of the food and drink include health drinks and health foods.
  • the medical agent and the cosmetics include quasi-drugs such as gargles, throat cakes, throat sprays, medicated soaps, and disinfecting liquids.
  • the administration method of a pharmaceutical or quasi drug containing an anti-SARS coronavirus agent can be any method such as oral administration, intravascular administration, and transdermal administration.
  • the dosage forms of pharmaceuticals and quasi drugs are not particularly limited, and may be, for example, powders, powders, granules, tablets, capsules, pills, suppositories, liquids, injections, and coatings. Good.
  • additives such as excipients, bases, emulsifiers, solvents, stabilizers and the like may be blended with the pharmaceuticals and quasi-drugs as long as the object of the present invention is not impaired.
  • a food or drink containing an anti-SARS coronavirus agent is produced by adding an anti-SARS coronavirus agent to any food material or beverage material.
  • the food and drink can be processed into a powder, tablet, granule, liquid (drink, etc.), capsule, syrup, or candy form and used as a health food preparation or dietary supplement.
  • food and drink include sports drinks, tea beverages extracted from tea leaves and herbs, dairy products such as milk and yogurt, foods containing gelling agents such as pectin and carrageenan, hard candy and soft candy, gummi Candy, chewing gum, sugars such as glucose, sucrose, fructose, lactose, dextrin, flavorings, sweeteners such as stevia, aspartame, sugar alcohols, beverages and foods containing fats such as vegetable oils and animal fats Goods.
  • Additives such as base materials, excipients, additives, auxiliary materials, and bulking agents may be blended in the food and drink as long as the object of the present invention is not impaired.
  • the anti-SARS coronavirus agent of this embodiment has an excellent anti-SARS coronavirus action. Therefore, the anti-SARS coronavirus agent can be used for the prevention of SARS coronavirus infection and the treatment of SARS. That is, the anti-SARS coronavirus agent is useful as a preventive or therapeutic agent for SARS.
  • the anti-SARS coronavirus agent further contains an extract derived from a plant different from the guava extract, the anti-SARS coronavirus action of the anti-SARS coronavirus agent is further improved.
  • the anti-SARS coronavirus action of the anti-SARS coronavirus agent is further improved.
  • the guava extract contained in the anti-SARS coronavirus agent is highly safe because it is derived from guava, which is a natural plant.
  • An anti-SARS coronavirus agent may be used for non-human animals such as horses and cows.
  • the present invention will be described more specifically with reference to examples.
  • Samples 1 to 6 The SARS treatment effect of Samples 1 to 6 was examined as follows. First, a stock solution (10 8 PFU / mL) of SARS-CoV (human isolated Frankfurt FFM-1 strain) was added with 1% BSA-containing phosphate buffer (containing no Mg 2+ and Ca 2+ : PBS ( ⁇ ), pH 7. 0 3) to prepare a virus solution of 10 3 PFU / mL. Next, Vero cells (derived from African green monkey kidney cells) were cultured in a 6-well culture plate using MEM-10% FBS medium. When Vero cells formed a monolayer of 70-80%, 200 ⁇ L of virus solution was added to each cell, and SARS-CoV was inoculated into Vero cells. After holding at 22 ° C.
  • each cell was overlaid with 0.9% methylcellulose-containing D-MEM medium (non-immobilized 5% FBS, 100 U / mL penicillin, 100 ⁇ g / mL streptomycin). After culturing at 37 ° C. for 6 to 7 days, the overlaid medium was removed and each cell was washed with PBS.
  • methylcellulose-containing D-MEM medium non-immobilized 5% FBS, 100 U / mL penicillin, 100 ⁇ g / mL streptomycin.
  • each cell was washed with PBS ( ⁇ ), and each cell was irradiated with UV, and the number of plaques formed in each cell was measured. Based on the results of this measurement, the concentration IC 50 (50% inhibitory concentration) for reducing the number of plaques by 50% was calculated for each of samples 1 to 6. Furthermore, from the values of yield and IC 50 of guava extract, the amount of extracted material needed to create a diluted sample solution 1L showing the IC 50, i.e. to calculate the feed conversion value. The calculated IC 50 values and raw material converted values are shown in Table 1 below.
  • Example 1 The pH was adjusted by appropriately adding anhydrous citric acid and sodium bicarbonate.
  • the obtained anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 7 were sterilized by heating to 95 ° C. and then used in the following tests.
  • the anti-SARS coronavirus agent of Comparative Example 1 consisting only of guava extract was also prepared.
  • SARS therapeutic effects of the anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 7 and Comparative Example 1 were examined as follows. First, a stock solution (10 8 PFU / mL) of SARS-CoV (human isolated Frankfurt FFM-1 strain) was added with 1% BSA-containing phosphate buffer (containing no Mg 2+ and Ca 2+ : PBS ( ⁇ ), pH 7. 0) to prepare a virus solution of 2 ⁇ 10 3 PFU / mL. Next, Vero cells were cultured in 6-well culture plates using MEM-10% FBS medium. When Vero cells formed a monolayer of 70-80%, 200 ⁇ L of virus solution was added to each cell, and SARS-CoV was inoculated into Vero cells.
  • BSA-containing phosphate buffer containing no Mg 2+ and Ca 2+ : PBS ( ⁇ ), pH 7. 0
  • Vero cells were cultured in 6-well culture plates using MEM-10% FBS medium. When Vero cells formed a monolayer of 70-80%, 200 ⁇ L
  • each cell was overlaid with 0.9% methylcellulose-containing D-MEM medium (non-immobilized 5% FBS, 100 U / mL penicillin, 100 ⁇ g / mL streptomycin). After culturing at 37 ° C. for 6 to 7 days, the overlaid medium was removed and each cell was washed with PBS.
  • each cell was washed with PBS ( ⁇ ), and each cell was irradiated with UV, and the number of plaques formed in each cell was measured. Based on the results of this measurement, for each of the anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 7 and Comparative Example 1, the concentration IC 50 (50% inhibitory concentration) that reduces the number of plaques by 50% was calculated. The calculated IC 50 values are shown in Table 2 below.
  • SARS preventive effects of the anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 7 and Comparative Example 1 were examined as follows. First, a stock solution (10 8 PFU / mL) of SARS-CoV (human isolated Frankfurt FFM-1 strain) was added with 1% BSA-containing phosphate buffer (containing no Mg 2+ and Ca 2+ : PBS ( ⁇ ), pH 7. 0) to prepare a virus solution of 2 ⁇ 10 3 PFU / mL. Next, Vero cells were cultured in 6-well culture plates using MEM-10% FBS medium.
  • diluted sample solutions obtained by diluting each of the anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 6 and Comparative Example 1 to 2 ⁇ n times are mixed with the same amount of virus solution.
  • the resulting mixed solution was placed on ice for 1 hour.
  • 200 ⁇ L of each mixed solution was added to each cell, and SARS-CoV was inoculated into Vero cells.
  • each cell was overlaid with 0.9% methylcellulose-containing D-MEM medium (non-immobilized 5% FBS, 100 U / mL penicillin, 100 ⁇ g / mL streptomycin).
  • each cell was washed with PBS.
  • Vero cells in each cell were fixed and stained with 2.5% crystal violet solution (containing 30% ethanol and 1% ammonium oxalate). Thereafter, each cell was washed with PBS ( ⁇ ), and each cell was irradiated with UV, and the number of plaques formed in each cell was measured. Based on the results of this measurement, for each of the anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 6 and Comparative Example 1, a concentration IC 100 (100% inhibitory concentration) that reduces the number of plaques by 100% was calculated. The calculated IC 100 values are shown in Table 2 below.
  • the anti-SARS coronavirus agent of Examples 1 to 6 containing guava extract and ascorbic acid was 3 in comparison with the anti-SARS coronavirus agent of Comparative Example 1 consisting only of guava extract.
  • the SARS therapeutic effect and SARS preventive effect more than doubled were shown.
  • ascorbic acid alone does not exhibit anti-SARS coronavirus activity. Therefore, the high SARS treatment effect and SARS prevention effect of the anti-SARS coronavirus agents of Examples 1 to 6 are considered to be a result of the anti-SARS coronavirus action of the guava extract being enhanced by ascorbic acid.
  • the ascorbic acid concentration when the anti-SARS coronavirus agent of Example 1 was diluted 15-fold was 150 ⁇ M, but even a 300 ⁇ M ascorbic acid solution having a higher ascorbic acid concentration than that does not contain guava extract. SARS coronavirus action was not shown.
  • the anti-SARS coronavirus agent of Example 7 containing the cocoon extract in addition to the guava extract and ascorbic acid is the anti-SARS of Example 1 containing no cocoon extract. It showed higher SARS therapeutic effect and SARS preventive effect than the coronavirus agent. Although no data is listed in this specification, the soot extract alone with the blending amount of Example 7 does not exhibit anti-SARS coronavirus action. Therefore, the high SARS therapeutic effect and SARS preventive effect of the anti-SARS coronavirus agent of Example 7 is considered to be a result of further enhancing the anti-SARS coronavirus action of the guava extract by the sputum extract.
  • the anti-SARS coronavirus agent containing guava extract and ascorbic acid has an excellent anti-SARS coronavirus action.

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Abstract

 抗SARSコロナウイルス剤は、水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種を主成分とする抽出溶媒を用いてグァバから抽出されるグァバ抽出物、並びにアスコルビン酸類を有効成分として含有する。抗SARSコロナウイルス剤は、水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種を主成分とする抽出溶媒を用いて柿から抽出される柿抽出物をさらに含有することが好ましい。抗SARSコロナウイルス剤含有製品は、抗SARSコロナウイルス剤を含有する。

Description

抗SARSコロナウイルス剤及び抗SARSコロナウイルス剤含有製品
 本発明は、抗SARSコロナウイルス剤及び抗SARSコロナウイルス剤含有製品に関する。
 SARS(Severe Acute Respiratory Syndrome:重症急性呼吸器症候群)は、近年に新規のコロナウイルスとして発見されたSARSウイルスにより引き起こされる感染症である。主な症状としては、38℃以上の発熱、咳、息切れ、呼吸困難などの呼吸器症状が挙げられる。また、下痢症状、頭痛、悪寒戦慄、食欲不振、全身倦怠感、意識混濁等の症状が見られることもある。現在、SARSに対する有効な根治的治療法は確立されておらず、対症療法が中心となっている。
 抗ウイルス剤であるリバビリンとステロイド剤の併用療法や、インターフェロンα,β,γ、又はグリチルリチンがSARSの治療に効果が期待できるとの報告がある。また、ブドウやクランベリー等の天然物由来のプロアントシアニジンやカテキンが抗SARSコロナウイルス作用を有するとの報告もある(特許文献1参照)。しかしながら、いまだSARSの有効な治療法は確立されていない。
特開2005-314316号公報
 本発明は、本発明者らによる鋭意研究の結果、グァバ抽出物とアスコルビン酸類の組み合わせが優れた抗SARSコロナウイルス作用を有するのを見出したことに基づくものであり、その目的は、優れた抗SARSコロナウイルス作用を有する抗SARSコロナウイルス剤及び抗SARSコロナウイルス剤含有製品を提供することにある。
 上記の目的を達成するために、本発明の一態様では、水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種を主成分とする抽出溶媒を用いてグァバから抽出されるグァバ抽出物、並びにアスコルビン酸類を有効成分として含有する抗SARSコロナウイルス剤が提供される。
 本発明の別の態様では、上記の抗SARSコロナウイルス剤を含有する抗SARSコロナウイルス剤含有製品が提供される。
 本発明によれば、優れた抗SARSコロナウイルス作用を有する抗SARSコロナウイルス剤及び抗SARSコロナウイルス剤含有製品が提供される。
 以下、本発明の一実施形態を詳細に説明する。
 本実施形態に係る抗SARSコロナウイルス剤は、特定の抽出溶媒を用いてグァバ(Psidium Guajava Linn)から抽出されるグァバ抽出物とアスコルビン酸類を有効成分として含有する。
 グァバは、日本においてバンジロウ又はバンザクロとも呼ばれ、フトモモ科バンジロウ属に属する熱帯地方原産の常緑小高木である。グァバは、例えば、カリブ海沿岸、中央アメリカ、南アメリカ北部、東南アジアに自生し、日本においては沖縄等の暖地で栽培されている。使用されるグァバは産地が特に限定されるものではない。
 グァバ抽出物の抽出に供される抽出原料として、グァバのあらゆる器官又は各器官の構成要素を用いることができる。抽出原料には、グァバの単独の器官又はその構成要素が用いられてもよいし、グァバの二種以上の器官又はその構成要素が混合して用いられてもよい。ただし、抗SARSコロナウイルス作用に優れたグァバ抽出物を得るためには、抽出原料は少なくともグァバの葉又は茎を含むことが好ましい。
 抽出原料は、採取したままの状態で、又は採取後に破砕、粉砕若しくはすり潰した状態で、又は採取後に乾燥させた状態で、又は採取及び乾燥後に破砕、粉砕若しくはすり潰した状態で、又は採取後に破砕、粉砕若しくはすり潰して乾燥させた状態で、抽出操作に供される。抽出を効率的に行うためには、抽出原料は破砕されていることが好ましい。また、抗SARSコロナウイルス作用に優れたグァバ抽出物を得るためには、抽出原料は生葉であることが好ましい。
 抽出原料からグァバ抽出物を抽出するに際して使用される抽出溶媒は、水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種を主成分とする。つまり、水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種は、溶出溶媒中で存在割合(容量%)が最も高い。抽出溶媒中の水又は親水性有機溶媒の含有量は50容量%以上であることが好ましい。抽出溶媒が水と親水性有機溶媒の両方を含有する場合には、水の含有量と親水性有機溶媒の含有量の合計は50容量%以上であることが好ましい。
 抽出溶媒中に含まれる親水性有機溶媒の例としては、メタノールやエタノール等の低級アルコール、アセトン、酢酸エチルが挙げられる。抽出溶媒は、一種類の親水性有機溶媒を単独で含有してもよいし、複数種類の親水性有機溶媒を含有していてもよい。また、抽出溶媒には、水及び親水性有機溶媒以外の溶媒が少量含有されていてもよいし、有機塩、無機塩、緩衝剤、乳化剤等の添加剤が溶解されていてもよい。
 グァバ抽出物の抽出は、抽出溶媒中に抽出原料を所定時間浸漬させることにより行なわれる。抽出溶媒の使用量は、抽出原料1kg当たり好ましくは2~100L、より好ましくは5~50L、さらに好ましくは20~40Lである。グァバ抽出物の抽出中に抽出溶媒は、必要に応じて、攪拌、加温又は加圧されてもよい。一般に抽出温度を高くすると、抽出に要する時間は短くなる。例えば、1~2気圧の圧力の下、常温であれば10日かかる抽出も、50~130℃の温度であれば1~200分間、あるいは3~60分間、あるいは5~30分間で済む。抽出条件は、抽出原料の状態や抽出溶媒の種類に応じて適宜に変更が可能である。
 抽出原料から抽出されたグァバ抽出物は、抽出原料の残渣を分離するべく固液分離に供される。固液分離は、ろ過や遠心分離のような公知の方法で行われる。固液分離により固形分が除去された後のグァバ抽出物は、必要に応じて濃縮及び乾固されてもよい。
 本実施形態の抗SARSコロナウイルス剤に含有されているアスコルビン酸類は、例えば、アスコルビン酸、アスコルビン酸塩又はアスコルビン酸エステルである。アスコルビン酸塩としては、例えば、アスコルビン酸ナトリウム塩、アスコルビン酸カリウム塩、アスコルビン酸カルシウム塩が挙げられる。アスコルビン酸エステルとしては、例えば、アスコルビン酸リン酸エステル、アスコルビン酸ステアリン酸エステルが挙げられる。抗SARSコロナウイルス剤に含まれるアスコルビン酸類の量は、抗SARSコロナウイルス剤中のグァバ抽出物の乾燥質量の0.05~5倍であることが好ましく、より好ましくは0.1~2倍である。
 抗SARSコロナウイルス剤は、グァバ抽出物とは別の植物由来の抽出物をさらに含有していることが好ましい。この抽出物が由来するグァバとは別の植物としては、例えば、ブルーベリー、クランベリー、エルダーベリー等のベリー類、カシス、ブドウ、柿、茶葉、ウコン、シソ、オオバギ、ホップ、プロポリスが挙げられる。柿由来の抽出物は、抗SARSコロナウイルス剤の抗SARSコロナウイルス作用を大きく向上させるために特に好ましい。グァバ抽出物とは別の植物由来の抽出物は、グァバ抽出物と同様の方法で得ることもできる。
 抗SARSコロナウイルス剤のpHは、より優れた抗SARSコロナウイルス作用を発揮するためには5.4以下であることが好ましく、より好ましくは4.5以下である。抗SARSコロナウイルス剤のpHは下限については特に限定されないが、調整が容易であることから2.0以上であることが好ましい。pHの調整は、例えば、抗SARSコロナウイルス剤に有機酸を添加することにより行なわれる。使用可能な有機酸としては、例えば、クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、酢酸が挙げられる。これらの有機酸の少なくとも1つを含有する果汁(例えば、柑橘類、梅類、ベリー類、リンゴ及びブドウ由来の果汁)や食酢(例えば、穀物酢及び果実酢)が使用されてもよい。
 抗SARSコロナウイルス剤は、抗SARSコロナウイルス作用の発揮を目的とする製品に適用して使用することができる。こうした抗SARSコロナウイルス剤含有製品としては、例えば、医療用剤(薬剤を含む)、洗浄剤、化粧品、医療用機器、衛生材料、衛生用の製品及び飲食品が挙げられる。上記医療用剤としては、例えば、医薬品が挙げられる。上記洗浄剤としては、例えば、洗濯用柔軟剤、洗濯用漂白剤、石鹸、入浴剤、洗剤、シャンプー、歯磨き粉が挙げられる。上記化粧品としては、例えば、洗顔石鹸、ハンドソープ、ハンドクリーム、香水、化粧水、乳液、美容液、美容クリーム、口紅、リップクリーム、おしろいが挙げられる。上記医療用機器としては、例えば、マスク、包帯、ガーゼ、手袋、絆創膏、綿球、診断用機械器具、手術用機械器具、治療用機械器具、病院用機械器具、歯科用機械器具、医療用の補助器具、矯正器具が挙げられる。上記衛生材料としては、例えば、ガーゼ、脱脂綿、不織布、綿棒が挙げられる。上記衛生用の製品としては、例えば、加湿器、エアコン、空気清浄機が挙げられる。上記飲食品としては、例えば、健康飲料、健康食品が挙げられる。また、上記医療用剤および上記化粧品には、うがい薬やのど飴、のどスプレー、薬用石鹸、消毒液等の医薬部外品も含まれる。
 抗SARSコロナウイルス剤を含有した医薬品又は医薬部外品の投与法は、経口投与、血管内投与、経皮投与等のあらゆる方法が可能である。医薬品及び医薬部外品の剤形は、特に限定されるものでなく、例えば、散剤、粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、丸剤、坐剤、液剤、注射剤、塗布剤であってもよい。また、医薬品及び医薬部外品には、本発明の目的を損なわない範囲において、賦形剤、基剤、乳化剤、溶剤、安定剤等の添加剤が配合されてもよい。
 抗SARSコロナウイルス剤を含有した飲食品は、任意の食品素材又は飲料品素材に抗SARSコロナウイルス剤を添加することによって製造される。飲食品は、例えば、粉末状、錠剤状、顆粒状、液状(ドリンク剤等)、カプセル状、シロップ、キャンディーの形態に加工されて健康食品製剤や栄養補助食品として使用することができる。飲食品の具体例としては、スポーツドリンク、茶葉やハーブなどから抽出した茶類飲料、牛乳やヨーグルト等の乳製品、ペクチンやカラギーナン等のゲル化剤を含有した食品、ハードキャンディやソフトキャンディ、グミ等のキャンディー、チューイングガム、グルコースやショ糖、果糖、乳糖、デキストリン等の糖類、香料、ステビアやアスパルテーム、糖アルコール等の甘味料、植物性油脂及び動物性油脂等の油脂を含有する飲料品や食料品が挙げられる。飲食品には、本発明の目的を損なわない範囲において、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤等の添加剤が配合されてもよい。
 本実施形態によれば、次の効果が得られる。
 本実施形態の抗SARSコロナウイルス剤は、優れた抗SARSコロナウイルス作用を有している。そのため、抗SARSコロナウイルス剤は、SARSコロナウイルス感染の予防及びSARSの治療に利用することができる。すなわち、抗SARSコロナウイルス剤は、SARSの予防剤又は治療剤として有用である。
 抗SARSコロナウイルス剤がグァバ抽出物とは別の植物由来の抽出物をさらに含有している場合には、抗SARSコロナウイルス剤の抗SARSコロナウイルス作用はより一層向上する。
 抗SARSコロナウイルス剤のpHが5.4以下である場合には、抗SARSコロナウイルス剤の抗SARSコロナウイルス作用はより一層向上する。
 抗SARSコロナウイルス剤に含有されているグァバ抽出物は、天然の植物であるグァバ由来であるために安全性が高い。
 前記実施形態は、次のように変更されてもよい。
 抗SARSコロナウイルス剤を馬、牛等のヒト以外の動物に使用してもよい。
 次に、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。
 <抽出原料に関する試験>
 予備試験としてグァバの部位ごとの抗SARSコロナウイルス作用を以下のようにして調べた。
 (グァバ抽出物のサンプル1~6の調製)
 生のグァバの果実、種子、根、茎及び葉並びに乾燥したグァバの葉(茶葉)をそれぞれ100gずつ用意し、1L、3L又は4Lの90%メタノール水溶液中にそれぞれ室温下で10日間浸漬した。その後、これを濾過して得られる濾液を濃縮及び乾固して粉末状のグァバ抽出物を得た。得られたグァバ抽出物をそれぞれPBS(-)に溶解してサンプル1~6を調製した。サンプル1~6に含まれるグァバ抽出物が由来する抽出原料、同グァバ抽出物の抽出条件、及び同グァバ抽出物の収量を下記の表1に示す。
 (治療効果に関する試験)
 サンプル1~6のSARS治療効果を以下のようにして調べた。まず、SARS-CoV(ヒト分離フランクフルトFFM-1株)のストック液(10PFU/mL)を1%BSA含有リン酸緩衝液(Mg2+及びCa2+を非含有:PBS(-)、pH7.0)で希釈して、10PFU/mLのウイルス液を調製した。次に、MEM-10%FBS培地を用いてVero細胞(アフリカミドリザル腎細胞由来)を6穴培養プレートで培養した。Vero細胞が70~80%単層形成したところで、ウイルス液200μLを各セルに添加してSARS-CoVをVero細胞に接種した。22℃で1時間保持した後、サンプル1~6のそれぞれを所定の濃度(目的とする終濃度の2倍)に希釈して得られる希釈サンプル液200μLを各セルに添加した。その後、さらに22℃で1時間保持した。続いて、各セルに0.9%メチルセルロース含有D-MEM培地(非動化5%FBS、100U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン)を重層した。37℃で6~7日間の培養後、重層した培地を取り除き、PBSで各セルを洗浄した。次に、2.5%クリスタルバイオレット液(30%エタノール及び1%シュウ酸アンモニウムを含有)を用いて各セルのVero細胞を固定及び染色した。その後、PBS(-)で各セルを洗浄してから各セルにUVを照射し、各セル中に形成されたプラーク数を測定した。この測定の結果に基づいて、サンプル1~6のそれぞれについて、プラーク数を50%減少させる濃度IC50(50%阻害濃度)を算出した。また、グァバ抽出物の収量及びIC50の値から、IC50を示す希釈サンプル液1Lを作成するために必要な抽出原料の量、すなわち原料換算値を算出した。算出されたIC50の値及び原料換算値を下記の表1に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
 表1に示すIC50の値及び原料換算値から、抗SARSコロナウイルス作用を有する成分をグァバから効率よく得るためには、抽出原料として葉を使用することが最も好ましく、その次が茎、その次が種子、その次が根と果実であること、また、抽出原料は生のままの方が好ましいことが確認された。なお、データを示してはいないが、熱水を使ってグァバ抽出物の抽出を行った場合には、IC50の値が減少、すなわちSARSコロナウイルスに対する治療効果が増大した。
 <抗SARSコロナウイルス作用に関する試験>
 (抗SARSコロナウイルス剤の調製)
 乾燥したグァバの葉を1kg当たり30Lの熱水(95℃)中に8分間浸漬した。その後、これを濾過して得られる濾液を液状のグァバ抽出物として回収した。また、乾燥した柿の葉を1kg当たり30Lの熱水(95℃)中に8分間浸漬した。その後、これを濾過して得られる濾液を液状の柿抽出物として回収した。こうして得られたグァバ抽出物及び柿抽出物を下記の表2に示す割合でアスコルビン酸と混合し、さらにその混合物のpHを所定の値に調整して実施例1~7の抗SARSコロナウイルス剤を調製した。pHの調整は、無水クエン酸及び重曹を適宜加えることにより行なった。得られた実施例1~7の抗SARSコロナウイルス剤は、95℃に加熱して殺菌してから以下の試験で使用した。また、グァバ抽出物のみからなる比較例1の抗SARSコロナウイルス剤も用意した。
 (治療効果に関する試験)
 実施例1~7及び比較例1の抗SARSコロナウイルス剤のSARS治療効果を以下のようにして調べた。まず、SARS-CoV(ヒト分離フランクフルトFFM-1株)のストック液(10PFU/mL)を1%BSA含有リン酸緩衝液(Mg2+及びCa2+を非含有:PBS(-)、pH7.0)で希釈して、2×10PFU/mLのウイルス液を調製した。次に、MEM-10%FBS培地を用いてVero細胞を6穴培養プレートで培養した。Vero細胞が70~80%単層形成したところで、ウイルス液200μLを各セルに添加してSARS-CoVをVero細胞に接種した。22℃で1時間保持した後、実施例1~7及び比較例1の抗SARSコロナウイルス剤のそれぞれを2×n倍(nは目的とする希釈倍率)に希釈して得られる希釈サンプル液200μLを各セルに添加した。その後、さらに22℃で1時間保持した。続いて、各セルに0.9%メチルセルロース含有D-MEM培地(非動化5%FBS、100U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン)を重層した。37℃で6~7日間の培養後、重層した培地を取り除き、PBSで各セルを洗浄した。次に、2.5%クリスタルバイオレット液(30%エタノール及び1%シュウ酸アンモニウムを含有)を用いて各セルのVero細胞を固定及び染色した。その後、PBS(-)で各セルを洗浄してから各セルにUVを照射し、各セル中に形成されたプラーク数を測定した。この測定の結果に基づいて、実施例1~7及び比較例1の抗SARSコロナウイルス剤のそれぞれについて、プラーク数を50%減少させる濃度IC50(50%阻害濃度)を算出した。算出されたIC50の値を下記の表2に示す。
 (予防効果に関する試験)
 実施例1~7及び比較例1の抗SARSコロナウイルス剤のSARS予防効果を以下のようにして調べた。まず、SARS-CoV(ヒト分離フランクフルトFFM-1株)のストック液(10PFU/mL)を1%BSA含有リン酸緩衝液(Mg2+及びCa2+を非含有:PBS(-)、pH7.0)で希釈して、2×10PFU/mLのウイルス液を調製した。次に、MEM-10%FBS培地を用いてVero細胞を6穴培養プレートで培養した。また、実施例1~6及び比較例1の抗SARSコロナウイルス剤のそれぞれを2×n倍(nは目的とする希釈倍率)に希釈して得られる希釈サンプル液を同量のウイルス液と混合し、得られた混合溶液を氷上で1時間置いた。その後、Vero細胞が70~80%単層形成したところで、各混合溶液200μLを各セルに添加してSARS-CoVをVero細胞に接種した。22℃で1時間保持した後、各セルに0.9%メチルセルロース含有D-MEM培地(非動化5%FBS、100U/mLペニシリン、100μg/mLストレプトマイシン)を重層した。37℃で6~7日間の培養の後、重層した培地を取り除き、PBSで各セルを洗浄した。続いて、2.5%クリスタルバイオレット液(30%エタノール及び1%シュウ酸アンモニウムを含有)を用いて各セルのVero細胞を固定及び染色した。その後、PBS(-)で各セルを洗浄してから各セルにUVを照射し、各セル中に形成されたプラーク数を測定した。この測定の結果に基づいて、実施例1~6及び比較例1の抗SARSコロナウイルス剤のそれぞれについて、プラーク数を100%減少させる濃度IC100(100%阻害濃度)を算出した。算出されたIC100の値を下記表2に示す。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
 表2から明らかなように、グァバ抽出物及びアスコルビン酸を含有する実施例1~6の抗SARSコロナウイルス剤は、グァバ抽出物のみからなる比較例1の抗SARSコロナウイルス剤と比較して3倍以上の高いSARS治療効果及びSARS予防効果を示した。本明細書中にデータを載せてはいないが、アスコルビン酸単独では抗SARSコロナウイルス作用を示さない。従って、実施例1~6の抗SARSコロナウイルス剤の高いSARS治療効果及びSARS予防効果は、グァバ抽出物の抗SARSコロナウイルス作用がアスコルビン酸によって亢進された結果と考えられる。なお、実施例1の抗SARSコロナウイルス剤を15倍希釈したときのアスコルビン酸濃度は150μMであるが、それよりもアスコルビン酸濃度の高い300μMのアスコルビン酸溶液でさえグァバ抽出物を含有しない限り抗SARSコロナウイルス作用は示されなかった。
 また、表2からこれも明らかなように、グァバ抽出物及びアスコルビン酸に加えて柿抽出物を含有する実施例7の抗SARSコロナウイルス剤は、柿抽出物を含有しない実施例1の抗SARSコロナウイルス剤よりも高いSARS治療効果及びSARS予防効果を示した。本明細書中にデータを載せてはいないが、実施例7の配合量の柿抽出物単独では抗SARSコロナウイルス作用を示さない。従って、実施例7の抗SARSコロナウイルス剤の高いSARS治療効果及びSARS予防効果は、グァバ抽出物の抗SARSコロナウイルス作用が柿抽出物によってさらに亢進された結果と考えられる。
 さらに、実施例1~6の結果からは、グァバ抽出物及びアスコルビン酸の濃度に依存して抗SARSコロナウイルス剤のSARS治療効果及びSARS予防効果が変化することが確認された。実施例1,5,6の結果からは、pHが低くなるにつれて抗SARSコロナウイルス剤のSARS治療効果及びSARS予防効果が向上することが確認された。
 以上のことから、グァバ抽出物及びアスコルビン酸を含有する抗SARSコロナウイルス剤が優れた抗SARSコロナウイルス作用を有することは明白であろう。

Claims (6)

  1.  水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種を主成分とする抽出溶媒を用いてグァバから抽出されるグァバ抽出物、並びにアスコルビン酸類を有効成分として含有することを特徴とする抗SARSコロナウイルス剤。
  2.  前記グァバ抽出物はグァバの葉又は茎由来である、請求項1に記載の抗SARSコロナウイルス剤。
  3.  5.4以下のpHを有する、請求項1又2に記載の抗SARSコロナウイルス剤。
  4.  水及び親水性有機溶媒のうちの少なくとも一種を主成分とする抽出溶媒を用いて柿から抽出される柿抽出物をさらに含有する、請求項1~3のいずれか一項に記載の抗SARSコロナウイルス剤。
  5.  前記グァバ抽出物は、50℃以上に加熱した抽出溶媒を用いてグァバの生葉から抽出されたものである、請求項1~4のいずれか一項に記載の抗SARSコロナウイルス剤。
  6.  請求項1~5のいずれか一項に記載の抗SARSコロナウイルス剤を含有することを特徴とする抗SARSコロナウイルス剤含有製品。
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