WO2009139665A1 - Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении тriсhоmоnаs vаginаlis в модельной системе in vitrо - Google Patents

Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении тriсhоmоnаs vаginаlis в модельной системе in vitrо Download PDF

Info

Publication number
WO2009139665A1
WO2009139665A1 PCT/RU2009/000215 RU2009000215W WO2009139665A1 WO 2009139665 A1 WO2009139665 A1 WO 2009139665A1 RU 2009000215 W RU2009000215 W RU 2009000215W WO 2009139665 A1 WO2009139665 A1 WO 2009139665A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
vagipalis
concentration
trichomonas
drug
strains
Prior art date
Application number
PCT/RU2009/000215
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Виктор Иванович РОЩИН
Вагиф Султанович СУЛТАНОВ
Анатолий Борисович ЖЕБРУН
Тамара Валентиновна НИКИТИНА
Лидия Борисовна КУЛЯШОВА
Людмила Александровна БЕРЕЗИНА
Original Assignee
Roschin Viktor Ivanovich
Sultanov Vagif Sultanovich
Zhebrun Anatolii Borisovich
Nikitina Tamara Valentinovna
Kuliashova Lidija Borisovna
Berezina Lludmila Aleksandrovn
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Roschin Viktor Ivanovich, Sultanov Vagif Sultanovich, Zhebrun Anatolii Borisovich, Nikitina Tamara Valentinovna, Kuliashova Lidija Borisovna, Berezina Lludmila Aleksandrovn filed Critical Roschin Viktor Ivanovich
Priority to US12/992,751 priority Critical patent/US9669061B2/en
Priority to EP09746834.2A priority patent/EP2305279B1/en
Priority to AU2009247064A priority patent/AU2009247064B9/en
Publication of WO2009139665A1 publication Critical patent/WO2009139665A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/13—Coniferophyta (gymnosperms)
    • A61K36/15—Pinaceae (Pine family), e.g. pine or cedar
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis

Definitions

  • the invention relates to medicine and can be used to treat various forms of trichomonas infection, both in acute diseases of the urogenital tract and in chronic and latent forms of infection.
  • Trichomoniasis ranks first in terms of prevalence among diseases of the genitourinary tract and holds first place among sexually transmitted diseases. This infection has great medical and socio-economic importance due to the high infection of people, often a chronic course with relapses, damage to various organs and systems.
  • Genitourinary trichomoniasis is transmitted through sexual contact from a sick person or carrier, sometimes there is also a non-sexual route of infection: children from sick mothers during childbirth, a contact transmission path through non-disposable gloves during examination, lining diapers, ships, night pots, toilet seats, general items personal hygiene and others (Isakov BA, Zakharkiv Yu.F., Ermolenko D.K. et al. Diagnostics and treatment of urogenital trichomoniasis, Recommendations for doctors, St. Moscow, Veliky Novgorod, 2006, 49c).
  • trichomonasus The presence of low-symptom forms and trichomonasus is important in the epidemic process, which contributes to the epidemiological spread of the pathogen. Without treatment, these protozoa do not leave the host and are capable of causing all kinds of complications. So, trichomoniasis was diagnosed in 70-80 year old men with the last sexual relationship thirty years ago.
  • Known drugs used to treat trichomonal infections which give a slight decrease in symptoms. These include acrychin, aminarson, dichlorodiphenyl trichloroethane, trichomycin, etc. However, these drugs are ineffective.
  • phytotherapy methods extracts and tinctures obtained from onions, garlic, radish, horseradish, needles of spruce, pine, and juniper.
  • metronidazole synthesized in 1959, is widely used for the treatment of urogenital trichomoniasis.
  • complex treatment methods are widely used, which is expressed in the combined use of oral and intravaginal agents - Klion-D, ginalgin, terzhinan, metrogil, patent RU 2320319 “Vaginal cytoprositropy” )), 2006.11.07).
  • the position that chronic urogenital trichomoniasis proceeding as a mixed invasion is substantiated is an indicator of the high probability of detecting drug-resistant strains of T. vagipalis.
  • New drugs are needed to create shortened as well as integrated treatment methods for urogenital trichomoniasis based on studying pharmacokinetics and determining the sensitivity of different strains of T. vagipalis to the same dose of the drug used.
  • Urogenital trichomonads are a depot for the survival of gonococci, fungi, chlamydia, mycoplasmas, viruses (Thomasop JL Trichopas vagipalis / JX. Thomasop, SM Gelbert // Obstr Ap-Gol36-5. for protozoan enzymes cannot always destroy the microorganisms phagocytosed by them. Subsequently, these pathogens can support the inflammatory process for a long time. Trichomonas is known to interfere with the detection of chlamydia in cell cultures. Inflammation of the mycoplasma and chlamydial etiology clinically occurs with relapse, often with damage to the accessory genital glands.
  • nitroimidazoles are used to treat urogenital trichomoniasis along with metronidazole: tinidazole, ornidazole, secnidazole, nimorazole, carnidazole.
  • the closest reference drug was the drug metronidazole, which, as a rule, is always included as a treatment for trichomoniasis in individual or complex therapy. Disclosure of invention
  • the problem to which the invention is directed is to create a new herbal medicine for the treatment of various forms of Trichomonas infection with minimal side effect.
  • a medicinal product of plant origin was found to have antiprotozoal activity against Trichomes vagipalis in the model vitro system, which is a coniferous chlorophyll-carotene paste (CCP).
  • CCP coniferous chlorophyll-carotene paste
  • HKHP is characterized by the fact that at a concentration of at least 100 mg / ml it exhibits trichomonaddocytic and trichomonadostatic properties, and at a concentration of 300 mg / ml it inhibits the growth of Trichomopas vagipalis.
  • HKHP on the parasitic protozoan Trichopathy vagipalis in the model vitro system and the effect of this drug on various forms of Trichoptosis vagipalis isolated from sick people at the final concentrations of 100, 200, 300 and 500 mg / ml was studied.
  • a herbal remedy is an olive-colored paste with a moisture content of 35-40%, has a smell of needles.
  • Pasta is part of a drug produced under the name
  • Bioeffective-A in which HKHP (substance) is enclosed in capsules.
  • ChCCP includes chlorophyll derivatives, carotenoids, vitamins A, E, K, phytosterols, polyprenols, squalene, sodium salts of fatty and resin acids, natural antibiotics - phytoncides, essential oils and other terpenoids (labdanic alcohols, aldehydes and acids.
  • the causative agent of the infection is the parasitic protozoan Trichopaths vagipalis, isolated from patients, cultured on nutrient media in vitro.
  • Nutrient medium with a volume of 4.5 ml was placed in sterile tubes and poured with a layer of sterile vaseline oil with a thickness of 5 mm to create anaerobic conditions for the cultivation of Trichomonas.
  • Inoculation was carried out with a sterile Pasteur pipette by placing 0.5 - 1.0 ml of the test material at the bottom of the tubes. Samples were incubated at 37 ° C. Accounting for growth was made after 48 and 96 hours after sowing.
  • Trichomonas give bottom growth in the form of a dense whitish precipitate, from which material for microscopic examination is taken with a Pasteur pipette.
  • a drop of a warm isotonic sodium chloride solution or Ringer-Locke solution was applied to a glass slide, with which the test sample was mixed.
  • the suspension was covered with a coverslip and microscopic with an increase in the x40 objective and xl5 eyepiece.
  • a MIKMED-5 brand microscope was used.
  • the number of protozoan cells was counted in a Goryaev’s chamber with recalculation per 1 ml in accordance with the instructions for the chamber.
  • the research results include several stages. The first stage is the isolation and selection of strains of T. vagipalis. A total of 150 people with various inflammatory diseases of the urogenital tract were examined. Information about patients is presented in table 1.
  • strains were isolated to study the antiprotozoal activity of CCPP on the parasitic protozoan Trichomatosis vagipalis in the model vitro system.
  • Trichomonas When studying the selected strain, special attention was paid to the size and shape of Trichomonas, the nature of their movement, the internal contents of the cells. In typical cases, trichomonads were found in the form of pear-shaped, less often oval-shaped, motifs with an average size of 13 to 17 microns. The nature of their movements is jerky. Sometimes the movement of free flagella under a microscope was noticeable. The nuclei of Trichomonas in the study of unpainted preparation are poorly distinguishable. The Trichomonas cytoplasm was usually granular, vacuolated.
  • the sensitivity of Trichomopas vagipalis to the drug metronidazole in vitro was determined using immobilization of Trichomonas as a criterion.
  • tested strains of T. vagipalis should contain at least 90% of motile cells.
  • the sensitivity of T. vagipalis strains to metronidazole was determined using the method of serial dilutions of the drug in a nutrient medium.
  • the medium is filled with 4.0 ml in sterile tubes, then 0.5 ml of a solution containing different concentrations of metronidazole was added to them: from 0.25 ⁇ g / ml to 1000 ⁇ g / ml (1 mg / ml).
  • the sensitivity of trichomonads to metronidazole was assessed by determining the minimum inhibitory concentration (MIC), which causes the immobilization of all T. vagipalis cells.
  • the drug-resistant strains included strains in which immobilization is detected at concentrations of metronidazole in excess of 15 ⁇ g / ml.
  • the CBT culture method was used.
  • HKHP was introduced into the medium in the form of an aqueous solution so that the final concentration corresponded to 100 mg / ml, 200 mg / ml, 300 mg / ml and 500 mg / ml.
  • the control sample contained only a suspension of Trichomonas culture in nutrient medium.
  • Trichomonas were absent in N ° N ° 1-b and N ° 8.
  • the number of pathogen cells in strains ⁇ ⁇ o was 7.9, and 10 was significantly less than in the control.
  • a concentration of 300 mg / ml CXKP test drug destroyed the Trichomonas cells of the ⁇ 1 - 9 strains. In the sample containing strain N ° 10, single Trichomes vagipalis cells were found. The introduction into the culture medium of the drug HKHP in a final concentration
  • the results obtained showed the presence of anti-trichomonas activity in the HHKP preparation at a concentration of 200 mg / ml.
  • Shape dependent Trichomonas vagipalis the presence of previous courses of treatment, the relationship to the action of metronidazole has not been identified.
  • the antibacterial effect of CCPI on the concomitant flora was revealed in patients with dysbacterioses of the urogenital tract that arose after previous courses of antibiotic therapy.
  • the effective concentration for the four observed samples was at least 300 mg / ml.
  • the drug HKHP has antiprotozoal activity against all 10 tested strains of Trichopoda vagipalis isolated from patients with acute and chronic diseases of the urogenital tract;
  • the drug exhibits a trichomonadocidal or trichomonadostatic effect.
  • the HKHP preparation in 30% of cases exerted a trichomonadocidal effect, and in 70% of them it had a trichomonadostatic effect.
  • the drug inhibited the growth of Trichomopas vagipalis;
  • the drug KHKP has a destructive effect on both actively mobile and flagellate forms of Trichomonas; 4.
  • the antibacterial effect of CCPI on the concomitant flora in patients with dysbiosis that arose after previous courses of antibiotic therapy was established, which suggests the effectiveness of the drug in the treatment of concomitant trichomoniasis diseases, such as dysbiosis for the correction of microbiocenosis of the urogenital tract.
  • Example 1 HKHP - 10.0 g bidistilled water - the rest is up to 100g.
  • Double-distilled water - the rest is up to 100g.
  • Example 3 HHKP - 50.0 g
  • Double-distilled water - the rest is up to 100g.
  • emulsions (examples 1-3), the calculated amount of CCPP is loaded into the apparatus with a mixing device, the heating is turned on and the paste is heated with stirring to a temperature of +50 0 C and then the calculated amount of bidistilled water is supplied. Upon reaching a homogeneous mass, the heating is turned off, the resulting emulsion is poured into glass shapes.
  • HKHP with antibacterial properties in antiprotozoal therapy will accelerate the treatment of patients, not only to achieve growth inhibition
  • Trichopaths vagipalis but also suppressing the growth of concomitant pathogenic microflora in urogenital infections, in particular with dysbiosis.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения различных форм трихомонадной инфекции, как при острых заболеваниях урогенитального тракта, так и при хронических и скрытых формах инфекции. Задача, решаемая изобретением, заключается в создании нового лекарственного средства растительного происхождения для лечения различных форм трихомонадной инфекции с минимальным побочным эффектом. Выявлено лекарственное средство растительного происхождения, обладающее противопротозойной активностью в отношении Тriсhоmоnаs vаginаlis в модельной системе in vitrо, которое представляет собой хвойную хлорофилло- каротиновую пасту. ХХКП характеризуется тем, что при концентрации не менее - 100 мг/мл проявляет трихомонаддоцитное и трихомонадостатическое свойства, при концентрации 300 мг/мл - подавляет рост Тriсhоmоnаs vаginаlis, а при концентрации 500 мг/мл приводит к гибели Тriсhоmоnаs vаginаlis.

Description

Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении Тriсhоmопаs vаgiпаlis в модельной системе iп vitrо
Область техники
Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для лечения различных форм трихомонадной инфекции, как при острых заболеваниях урогенитального тракта, так и при хронических и скрытых формах инфекции.
Уровень техники
Проблема урогенитального трихомоноза в настоящее время является чрезвычайно актуальной. По данным ВОЗ на рубеже XX и XXI веков, почти половину из выявленных в мире случаев инфекций, передаваемых половым путем, составлял трихомоноз (Grоdstеiп F. Rеlаtiоп оf tubаl iпfеrtilitу tо а histоrу оf sехuаllу trапsmittеd disеаsеs / F. Grоdstеiп, М.В.Gоldmап, D.W.Сrаmеr // Am. J. Ерidеmiоl. -
1993. - Vol.137. - P. 577-584; Vilkki M., Рukkаlа E., Niеmiпеп P. еt аl. Gупесоlоgiсаl iпfесtiопs аs risk dеtеrmiпапts оf subsеquепt сеrviсаl пеорlаsiа// Асtа Oпcol.-2000.- vоl.- P.71-75; Тихомиров А. Л. Урогенитальный трихомоноз. / A.Л. Тихомиров, Ч.Г.
Олейник// Tp. МГМСУ. - M., Б.и., 2003. - С. 1-7).
Трихомоноз занимает первое место по распространенности среди заболеваний мочеполового тракта и держит первенство среди заболеваний, передаваемых половым путем. Эта инфекция имеет большое медицинское и социально- экономическое значение в связи с высокой инфицированностью людей, нередко хроническим течением с рецидивами, поражением различных органов и систем.
Мочеполовой трихомоноз передается при половом контакте от больного человека или носителя, иногда встречается и неполовой путь инфицирования: детей от больных матерей при родах, контактный путь передачи через не одноразовые перчатки при осмотре, подкладные пеленки, судна, ночные горшки, сиденья в туалетах, общие предметы личной гигиены и др. (Исаков B.A., Захаркив Ю.Ф., Ермоленко Д.К. и др. Диагностика и лечение урогенитального трихомоноза, Рекомендации для врачей, Санкт-Петербург, Великий Новгород, 2006, 49с).
Важное значение в эпидемическом процессе имеет наличие малосимптомных форм и трихомонадоносительство, что способствует эпидемиологическому распространению возбудителя. Без лечения эти простейшие не покидают организм хозяина и способны вызывать всевозможные осложнения. Так, трихомоноз был диагностирован у 70-80 летних мужчин с последними половыми связями тридцатилетней давности.
Известны лекарственные средства, использующиеся для лечения трихомональной инфекции, которые дают некоторое уменьшение симптоматики. К ним относятся акрихин, аминарсон, дихлордифенилтрихлорэтан, трихомицин и др. Однако, эти препараты являются малоэффективными.
Для лечения женщин с урогенитальными заболеваниями использовали методы фитотерапии: экстракты и настойки, полученные из лука, чеснока, редьки, хрена, хвои ели, сосны, можжевельника.
В настоящее время для лечения мочеполового трихомоноза широко применяется метронидазол, синтезированный в 1959. Кроме того, широко используют комплексные методы лечения, что выражается в совместном применении пероральных и интравагинальных средств - клион-Д, гиналгин, тержинан, метрогил, патент RU 2320319 «Cyппoзитopии вагинальные)), 2006.11.07).
Однако надежного метода лечения мочеполового трихомоноза к настоящему времени нет.
В последние годы лечение трихомоноза стало более сложным из-за появления штаммов, обладающих полирезистентностью к лекарственным препаратам.
Обосновано положение о том, что хронический урогенитальный трихомоноз, протекающий как смешанная инвазия, служит показателем высокой вероятности обнаружения лекарственно-устойчивых штаммов Т.vаgiпаlis.
Существующие в данное время общепринятые схемы лечения далеко не всегда дают должный эффект из-за того, что не учитывают индивидуальные особенности организма пациента: наличие сопутствующих заболеваний, изменения иммунной системы, а также особенности возбудителя (состояние его биологической активности, резистентность к лекарственным веществам). Определение чувствительности T. vаgiпаlis к антипротозойным препаратам позволяет существенно повысить эффективность лечения больных хроническим урогенитальным трихомонозом.
Известны и другие лекарственные средства, такие как мебендазол, бутоканозол, бензоизотиазолин (Видаль, Лекарственные препараты России, изд.б-е, 2000).
Новые лекарственные средства необходимы для создания укороченных, а также комплексных методик лечения мочеполового трихомоноза на основе изучения фармакокинетики и определения чувствительности разных штаммов T. vаgiпаlis к одной и той же дозе применяемого препарата. (8 Nаrсisi Е.М. In vitrо еffесt оf tmidаzоlе апd furаzоlidопе оп mеtrопidаzоlе-rеsistапt Тriсhоmопаs vаgiпаlis / Е.М. Nаrсisi, W.Е. Sесоr // Апtimiсrоb. Аgепts Сhеmоthеr. - 1996. - Vol.40. - P. 1121— 1125; Захаркив Ю.Ф. Зависимость эффективности этиотропной терапии больных трихомонозом от чувствительности штаммов возбудителя к антипротозойным препаратам. /Захаркив Ю.Ф., Позняк A.Л., Сидорчук C.H., Гудков P.B./ Материалы Российской научно-практической конференции «Узлoвыe вопросы борьбы с инфекцией)), Санкт-Петербург, Военно-Медицинская Академия, 2004, с.192- 193). Традиционная антипротозойная терапия, как правило, приводит к значительному улучшению состояния пациента и этиологическому излечению. Однако клиническое выздоровление не наступает у 64% больных вследствие формирования посттрихомонадного уретрита (ПТУ). При этом пациенты жалуются на неприятные ощущения при мочеиспускании, периодические слизисто-гнойные выделения из уретры (Vilkki M., Рukkаlа E., Nieminen P. еt аl. Gупесоlоgiсаl iпfесtiопs аs risk dеtеrmiпапts оf subsеquепt сеrviсаl пеорlаsiа// Асtа Oncol.-2000.- vоl.- P.71-75). Тщательное лабораторное обследование на трихомоноз дает отрицательные результаты, а дополнительная антипротозойная терапия успеха не имеет. Клинически посттрихомонадные уретриты протекают волнообразно или принимают монотонное течение. При этом пациенты становятся раздражительными, нарушается сон, могут появиться расстройства половой функции. Чаще всего причиной ПТУ являются другие возбудители инфекций, передающиеся половым путем. Урогенитальные трихомонады представляют собой депо для выживания гонококков, грибов, хламидий, микоплазм, вирусов (Тhоmаsоп J. L. Тriсhоmопаs vаgiпаlis / JX. Тhоmаsоп, S. M. Gеlbеrt // Оbstеtriсs апd Gупесоlоgу. - 1989. -Vol.74. - P.536-541), ибо ферменты простейших не всегда могут уничтожить фагоцитированные ими микроорганизмы. Впоследствии эти патогены могут длительно поддерживать воспалительный процесс. Известно, что трихомонады препятствуют выявлению хламидий на клеточных культурах. Воспаления микоплазменной и хламидийной этиологии клинически протекают с рецидивами, нередко с поражением придаточных половых желез. Развитию ПТУ способствует не только сопутствующая мочеполовому трихомонозу микрофлора, но и формирование L-форм микроорганизмов, а также снижение иммунобиологической резистентности организма хозяина, в том числе местного иммунитета органов урогенитального тракта.
В последнее время многие врачи стали сталкиваться с неэффективным лечением мочеполового трихомоноза метронидазолом. Эти неудачи могут быть связаны с низким содержанием цинка в крови (Dеbbiа Е.А. In vitrо асtivitу оf mеtrопidаzоlе alone and in combination with сlоtrimаzоlе аgаiпst сliпiсаl isоlаtеs оf Тriсhоmопаs vаgiпаlis. / Е.А. Dеbbiа, U. Саmроrа, S. Маssаrо еt аl. // J. Сhеmоthеr. - 1996. Vol.8, N2. - P. 96-101; Тага Меri LT. Rеsistапсе оf Тriсhоmопаs vаgiпаlis tо Меtrопidаzоlе: Rероrt оf thе First Тhrее Саsеs frоm Fiпlапd апd Орtimizаtiоп оf In Vitrо Susсерtibilitу Теstiпg uпdеr Vаriоus Охуgеп Сопсепtrаtiопs / LT. Таги Меri, Sаkаri Jоkirапtа, I. Lаиri Sиhопеп еt аl.// Jоиmаl оf Сliпiсаl Мiсrоbiоlоgу. - 2000. - Vol.38. -N°2. - P.763-767), НИЗКОЙ абсорбцией препарата (Du Воuсhеt L. Мultiсепtеr соmраrisоп оf сlоtrimаzоlе vаgiпаl tаblеts, оrаl mеtrопidаzоlе, апd vаgiпаl suрроsitоriеs сопtаiпiпg sulfапilаmidе, аmiпасriпе hуdrосhlоridе, апd аllапtоiп iп thе trеаtmепt оf sуmрtоmаtiс triсhоmопiаsis / L. Du Воuсhеt, М.R. Sрепсе, М.F. Rеiп еt аl. //Sех. Тrапsm. Dis. - 1997. - NЗ. - P. 156-60Hoпigberg В.М. Struсturе оf Тriсhоmопаs vаgiпаlis Dоrше / В.М. Нопigbеrg, V.М. Кiпg // J. Раrаsitоl. - 1964. - VoI. 50. - P. 345- 364; Lапd K.M., Dеlggаdillо-Соrеа M.G., Тасhеzу G. еt аl/. Таrgеd gепе rерlасеmепt оf fеrrеdохiп gепе iп T. vаgiпаlis dоеs rеsistапсе// Моl.Мiсrоbiоl.- 2004.- vol.5L- P.115- 120), неэффективной доставкой препарата во влагалище или инактивацией препарата под воздействием флоры влагалища (Воrсhаrdt К.А. А соmраrisоп оf thе sепsitivitу оf thе In Pouch TV, Diаmопd's апd Тriсhоsеl mеdiа fоr dеtесtiоп оf Тriсhоmопаs vаgiпаlis./ Воrсhаrdt K.A., Zhапg M.Z., еt аl/ // J. Gепitоuriп Меd. - 1997. - VoIA - P. 297-298). Другие исследователи считают, что причиной неэффективности терапии могут быть неоднократные неудачные попытки лечения (Nаrсisi Е.М. In vitrо еffесt оf tiпidаzоlе апd mrаzоlidопе оп mеtrопidаzоlе-rеsistапt Тriсhоmопаs vаgiпаlis / Е.М. Nаrсisi, W.E. Sесоr // Апtimiсrоb. Аgепts Сhеmоthеr. - 1996. - Vol.40. - P. 1121- 1125). К решению этой проблемы подходят разными путями: повышение дозы метронидазола, сочетание различных противотрихомонадных средств, а так же применение этих средств в сочетании с неспецифической терапией (Nаrсisi Е.М. In vitrо еffесt оf tiпidаzоlе апd furаzоlidопе оп mеtrопidаzоlе-rеsistапt Тriсhоmопаs vаgiпаlis / Е.М. Nаrсisi, W.Е. Sесоr // Апtimiсrоb. Аgепts Сhеmоthеr. - 1996. - Vol.40. - P. 1121-1125).
В настоящее время для лечения мочеполового трихомоноза наряду с метронидазолом применяют другие нитроимидазолы: тинидазол, орнидазол, секнидазол, ниморазол, карнидазол.
Тем не менее, наиболее близким препаратом сравнения выбрано лекарственное средство — метронидазол, который, как правило, всегда входит в качестве препарата лечения трихомоноза в индивидуальной или комплексной терапии. Раскрытие изобретения
Задача, на решение которой направлено изобретение, заключается в создании нового лекарственного средства растительного происхождения для лечения различных форм трихомонадной инфекции с минимальным побочным эффектом.
Поставленная задача решена следующим образом. Выявлено лекарственное средство растительного происхождения, обладающее противопротозойной активностью в отношении Тriсhоmопаs vаgiпаlis в модельной системе iп vitrо, которое представляет собой хвойную хлорофшшо-каротиновую пасту (ХХКП).
ХХКП характеризуется тем, что при концентрации не менее - 100 мг/мл проявляет трихомонаддоцитное и трихомонадостатическое свойства, а при концентрации 300 мг/мл - подавляет рост Тriсhоmопаs vаgiпаlis.
Авторами была изучена антипротозойная активность растительного средства -
ХХКП на паразитического простейшего Тriсhоmопаs vаgiпаlis в модельной системе iп vitrо и было исследовано действие этого лекарственного средства на различные формы Тriсhоmопаs vаgiпаlis, выделенные от больных людей, в конечных концентрациях 100, 200, 300 и 500 мг/мл.
Полученные результаты сравнивали с чувствительностью данных штаммов Тriсhоmопаs vаgiпаlis к традиционному препарату - метронидазолу.
Растительное средство (препарат) представляет собой - пасту оливкового цвета с содержанием влаги 35-40%, обладает запахом хвои. Паста входит в состав препарата, произведенного под названием
«Биoэффeктив-A», в котором ХХКП (субстанция) заключена в капсулы.
В ХХКП входят производные хлорофилла, каротиноиды, витамины A, E, К, фитостерины, полипренолы, сквален, натриевые соли жирных и смоляных кислот, природные антибиотики- фитонциды, эфирные масла и другие терпеноиды (лабдановые спирты, альдегиды и кислоты.
Возбудитель инфекции - паразитическое простейшее Тriсhоmопаs vаgiпаlis, выделенное от больных культивировали на питательных средах iп vitrо. Питательную среду объемом 4,5 мл помещали в стерильные пробирки и заливали слоем стерильного вазелинового масла толщиной 5 мм для создания анаэробных условий культивирования трихомонад. Посев производили стерильной пастеровской пипеткой путем помещения 0,5 — 1,0 мл исследуемого материала на дно пробирок. Пробы инкубировали при температуре 37°C. Учет роста производили через 48 и 96 часов после посева. При положительных результатах трихомонады дают придонный рост в виде плотного беловатого осадка, из которого пастеровской пипеткой берется материал для микроскопического исследования. Для приготовления препарата для микроскопии, на предметное стекло наносили каплю теплого изотонического раствора хлорида натрия или раствора Рингера-Локка, с которой смешивали исследуемую пробу. Взвесь накрывали покровным стеклом и микроскопировали при увеличении объектива x40 и окуляра xl5. Для анализа использовали микроскоп марки MИKMEД-5. Количество клеток простейших подсчитывали в камере Горяева с пересчетом на 1 мл в соответствии с инструкцией к камере Результаты исследований включают несколько этапов. Первый этап - выделение и отбор штаммов Т.vаgiпаlis. Всего было обследовано 150 человек с различными воспалительными заболеваниями урогенитального тракта. Информация о пациентах представлена в таблице 1.
Таблица l. Демографические и клинические данные о пациентах, обследованных на наличие T. vаgiпаlis
Figure imgf000008_0001
Затем были выделены штаммы для изучения противопротозойной активности препарата ХХКП на паразитического простейшего Тriсhоmопаs vаgiпаlis в модельной системе iп vitrо.
При изучении выделенного штамма особое внимание было обращено на размеры и форму трихомонад, характер их движения, внутреннее содержимое клеток. В типичных случаях трихомонады обнаруживали в виде подвижных образований грушевидной, реже овальной формы размером в среднем от 13 до 17 мкм. Характер их движений толчкообразный. Иногда было заметно движение свободных жгутиков под микроскопом. Ядра трихомонад при изучении неокрашенного препарата плохо различимы. Цитоплазма трихомонад обычно была зернистой, вакуолизированной.
Затем было произведено определение чувствительности Тriсhоmопаs vаgiпаlis к лекарственному препарату метронидазолу iп vitrо с использованием в качестве критерия иммобилизацию трихомонад. При использовании данного критерия оценки чувствительности, тестируемые штаммы Т.vаgiпаlis должны содержать не менее 90% подвижных клеток. Согласно этому методу, чувствительность штаммов Т.vаgiпаlis к метронидазолу определялась с помощью метода серийных разведений препарата в питательной среде. Среда заливается по 4,0 мл в стерильные пробирки, затем в них вносили 0,5 мл раствора, содержащего разные концентрации метронидазола: от 0,25 мкг/мл до 1000 мкг/мл (1 мг/мл).
После этого в пробирки вносили 0,5 мл культуры возбудителя с заранее определенной концентрацией возбудителя (кл./мл). Контролем служила среда без препарата. Затем для создания анаэробных условий, необходимых для культивирования T. vаgiпаlis, на поверхность среды наносили вазелиновое масло (толщина слоя - 0,5 мм). Пробирки с исследуемым материалом инкубировали в термостате при t = 370C. Учет результатов производили через 48 и 96 часов после посева.
Чувствительность трихомонад к метронидазолу оценивали путем определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК), вызывающей иммобилизацию всех клеток T. vаgiпаlis. К лекарственно-устойчивым относили штаммы, у которых иммобилизация обнаруживается при концентрациях метронидазола, превышающих 15 мкг/мл.
При наличии атипичных, амастиготных форм Тriсhоmопаs vаgiпаlis, описанный метод применить невозможно. Поэтому использовали известный метод определения чувствительности к антипротозойным препаратам iп vitrо, выбирая в качестве критерия лизис трихомонад при терапевтически эффективной концентрации лекарственного вещества. Воздействие препарата считается оптимальным при лизисе всех клеток трихомонад, контроль - суспензия возбудителя в питательной среде без метронидазола. При проведении исследований были выбраны концентрации метронидазола 10, 15, 25 и 50 мкг/мл. Устойчивыми к метронидазолу считали штаммы, лизирующиеся при концентрации препарата более 25 мкг/мл.
Для определения чувствительности клинических штаммов Тriсhоmопаs vаgiпаlis к действию ХХКП использовали метод культивирования на среде CBT. При этом в среду вносили ХХКП в виде водного раствора таким образом, чтобы конечная концентрация соответствовала 100 мг/мл, 200 мг/мл, 300 мг/мл и 500 мг/мл. Контрольная проба содержала только взвесь культуры трихомонад в питательной среде.
У обследованных 150 человек, (80 мужчин и 70 женщин в возрасте от 17 до 45 лет с различными заболеваниями урогенитального тракта) (смотри таблицу 1) было выделено 30 штаммов Тriсhimопаs vаgiпаlis. Частота выделения трихомонад у обследованных пациентов, представлена в таблице 2.
Таблица 2.
Частота выделения Тriсhimопаs vаgiпаlis при различных заболеваниях репродуктивной сферы
Figure imgf000010_0001
Из 30 выделенных штаммов Тriсhоmопаs vаgiпаlis для дальнейшей работы были выбраны 3 активно подвижных и 7 амастиготных вариантов. Критериями отбора явилась концентрация возбудителя не менее 104 кл/мл и способность размножаться на искусственных питательных средах.
Характеристика штаммов трихомонад и краткое описание клинических и анамнестических данных пациентов - хозяев этих простейших, представлены в таблице 3.
Как видно из таблицы, все активно подвижные штаммы выявлены при первичной инфекции. Люди, от которых были выделены амастиготные формы, имеют различный стаж болезни и, как правило, лечились антипротозойными препаратами.
Таблица 3.
Демографические и клинические данные о пациентах и характеристика штаммов Т.vаgiпаlis, участвующих в изучении противо трихомонадной активности препарата ХХКП iп vitrо
Figure imgf000012_0001
Таблица 3. (продолжение)
tо
Figure imgf000013_0001
Таблица 3. (продолжение)
UJ
Figure imgf000014_0001
Далее проводилось определение чувствительности клинических штаммов Тriсhоmопаs vаgiпаlis к ХХКП и метронидазолу. Десять штаммов трихомонад, отобранных в соответствии с необходимыми для получения достоверных результатов параметрами: достаточным количеством и способностью размножаться на питательной среде CTB, рассеяли в пробирки, содержащие определенное количество метронидазола или ХХКП в соответствии с методикой, описанной выше. Каждый опыт был повторен 3 раза. Для каждого штамма был поставлен контроль — питательная среда CBT.
Полученные результаты представлены в таблице 4.
Таблица 4
Действие фармакологического препарата ХХКП на клинические штаммы
Тriсhоmопаs vаgiпаlis
Figure imgf000016_0001
Обозначения: 0- отсутствие трихомонад в среде. Как видно из таблицы, штаммы ШШ 4, 6, 9 и 10 характеризовались устойчивостью к метронидазолу: МИК превышала 25 мкг/мл. Препарат ХХКП в концентрации 100 мг/мл полностью лизировал трихомонады в трех случаях (NUNS 2, 6, 8), в остальных пробах количество простейших существенно снижалось по сравнению с контролем.
В пробах, содержащих ХХКП в концентрации 200 мг/мл трихомонады отсутствовали в N°N° 1- б и N°8. Количество клеток возбудителя в штаммах Ш}ξo 7,9, и 10 было существенно меньше, чем в контроле.
Концентрация испытуемого препарата ХХКП 300 мг/мл разрушала клетки трихомонад штаммов ШШ 1 - 9. В пробе, содержащей штамм N°10 обнаруживали единичные клетки Тriсhоmопаs vаgiпаlis. Внесение в питательную среду препарата ХХКП в конечной концентрации
500 мг/мл приводило к гибели простейших во всех десяти пробах.
Результаты исследований показали, что испытуемый препарат ХХКП, обладает антипротозойной активностью в отношении всех 10 испытанных штаммов Тriсhоmопаs vаgiпаlis. При этом минимальная концентрация 100 мг/мл в 3 случаях (30%) оказывала трихомонад оцидное, а в 70% случаев - трихомонадостатическое действие. Концентрация 200 мг/мл разрушала возбудитель в 7 пробах (70%) и снижала его количество в 3 cлyчaяx.(30%).
Внесение ХХКП в концентрации 300 мг/мл разрушало 9 штаммов (90%). Большее содержание лекарственного препарата коррелировало с полным отсутствием возбудителя во всех пробах. Препарат ХХКП оказывал разрушающее действие и на активно подвижные, и на безжгутиковые формы трихомонад. Корреляции между чувствительностью к метронидазолу и чувствительностью к испытуемому лекарственному препарату ХХКП не установлено. Из 10 штаммов трихомонад, метранидазол действовал только на 2 штамма активно-подвижных трихомонад в концентрации 15 мкг/мл, остальные штаммы были устойчивы к метронидазолу.
Следует отметить, увеличение концентрации препарата ХХКП в ростовой среде соответственно снижало количество питательных веществ, необходимых для трихомонад. В контрольных пробах штаммов NsNo 4,5,8,9 отмечали обильный рост сопутствующей бактериальной флоры. В образцах этих же культур, содержащих препарат ХХКП в концентрации 300 мг/мл и выше роста микробной флоры не наблюдали.
Полученные результаты, показали наличие противотрихомонадной активности у препарата ХХКП в концентрации 200 мг/мл. Зависимости от формы Trichomonas vаgiпаlis, наличия предьщущих курсов лечения, отношения к действию метронидазола не выявлено. Кроме того, было выявлено антибактериальное действие ХХКП на сопутствующую флору у пациентов с дисбактериозами урогенитального тракта, которые возникли после предыдущих курсов антибиотикотерапии. Эффективная концентрация для четырех наблюдаемых проб была не менее 300 мг/мл. Клинические и литературные данные свидетельствуют, что большая часть заболеваний, обусловленных Тriсhоmопаs vаgiпаlis носит хронический характер, плохо лечатся существующими на сегодняшний день лекарственными препаратами - метронидазолом и производными 5-нитpoимидaзoлa пролонгированного типа действия (тинидазол, ниморазол, орнидазол, секнидазолу, а также производными 4-aминoxинoлинa (хлорохин) и нитрофурана. Кроме того, использование в терапии заболеваний урогенитального тракта антибиотиков широкого спектра действия, приводит к формированию различных нарушений в микробиоценозе урогенитального тракта. Это состояние ухудшает работу местного неспецифического иммунитета и является причиной жалоб на зуд, жжение, раздражение, выделения с неприятным запахом. Подобные состояния трудно поддаются терапии, поэтому установленное в данной работе бактерицидное действие исследуемого лекарственного средства растительного происхождения поможет предотвратить формирование дисбактериозов.
Проведенные исследования показали перспективность использования ХХКП для лечения различных форм трихомонадной инфекции:
1. Препарат ХХКП обладает антипротозойной активностью в отношении всех 10 испытанных штаммов Тriсhоmопаs vаgiпаlis, выделенных от больных с острыми и хроническими заболеваниями урогенитального тракта;
2. В зависимости от концентрации препарата, он проявляет трихомонадоцидное или трихомонадостатическое действие. При минимальной концентрации ЮОмг/мл, препарат ХХКП в 30% случаях оказывал трихомонадоцидное действие, а в 70% - трихомонадостатическое. При концентрации 300 мг/мл в 90% случаях препарат подавлял рост Тriсhоmопаs vаgiпаlis;
3. Препарат ХХКП оказывает разрушающее действие и на активно подвижные и на безжгутиковые формы трихомонад; 4. Установлено антибактериальное действие ХХКП на сопутствующую флору у пациентов с дисбактериозами, которые возникли после предыдущих курсов антибиотикотерапии, что позволяет говорить об эффективности препарата при терапии сопутствующих трихомонозу заболеваний, таких как дисбактериоз для коррекции микробиоценоза урогенитального тракта.
Примеры предпочтительного выполнения изобретения Ниже приведены примеры эмульсии лекарственного средства. Пример 1. ХХКП - 10,0 г Бидистиллированная вода - остальное до 100г.
Пример 2. ХХКП - 30,0 г
Бидистиллированная вода — остальное до 100г. Пример 3. ХХКП - 50,0 г
Бидистиллированная вода - остальное до 100г.
Для приготовления эмульсий (примеры 1-3) в аппарат с перемешивающим устройством загружают расчетное количество ХХКП, включают нагрев и разогревают пасту при перемешивании до температуры +500C и затем подают расчетное количество бидистиллированной воды. По достижении однородной массы нагрев выключают, полученную эмульсию разливают в стеклянные фасоны.
Промышленная применимость
Полученные результаты исследования показали перспективность использования препарата ХХКП для лечения различных форм трихомонадной инфекции, как при острых заболеваниях урогенитального тракта, так и при хронических и скрытых формах инфекции. Включение растительного препарата
ХХКП с антибактериальными свойствами в антипротозойную терапию позволит ускорить процесс лечения больных, добиться не только подавление роста
Тriсhоmопаs vаgiпаlis, но и подавление роста сопутствующей патогенной микрофлоры при урогенитальных инфекциях, в частности при дисбактериозе.

Claims

Формула изобретения
Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении Тriсhоmопаs vаgiпаlis в модельной системе iп vitrо, представляющее собой хвойную хлорофилло-каротиновую пасту и характеризующееся тем, что при концентрации не менее - 100 мг/мл проявляет трихомонадоцитное и трихомонадостатическое свойства, при концентрации 300 мг/мл - подавляет рост Тriсhоmопаs vаgiпаlis, а при концентрации 500 мг/мл приводит к гибели Тriсhоmопаs vаgiпаlis.
PCT/RU2009/000215 2008-05-14 2009-05-05 Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении тriсhоmоnаs vаginаlis в модельной системе in vitrо WO2009139665A1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US12/992,751 US9669061B2 (en) 2008-05-14 2009-05-05 Medicinal agent exhibiting antiprotozoal activity to Trichomonas vaginalis in an in-vitro model system
EP09746834.2A EP2305279B1 (en) 2008-05-14 2009-05-05 Conifer green needle complex for use in treating a trichomoniasis infection of the urogenital tract.
AU2009247064A AU2009247064B9 (en) 2008-05-14 2009-05-05 Medicinal agent exhibiting antiprotozoal activity to Trichomonas vaginalis in an in-vitro model system

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2008119139/15A RU2366442C1 (ru) 2008-05-14 2008-05-14 Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении trichomonas vaginalis в модельной системе in vitro
RU2008119139 2008-05-14

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009139665A1 true WO2009139665A1 (ru) 2009-11-19

Family

ID=41166438

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2009/000215 WO2009139665A1 (ru) 2008-05-14 2009-05-05 Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении тriсhоmоnаs vаginаlis в модельной системе in vitrо

Country Status (6)

Country Link
US (1) US9669061B2 (ru)
EP (1) EP2305279B1 (ru)
AU (1) AU2009247064B9 (ru)
MY (1) MY180493A (ru)
RU (1) RU2366442C1 (ru)
WO (1) WO2009139665A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2678965C1 (ru) * 2017-11-30 2019-02-05 Вагиф Султанович Султанов Лекарственное средство, фармацевтическая композиция, способ лечения урогенитальных заболеваний организма человека, вызванных микроорганизмами вида Mycoplasma hominis

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2208950C2 (ru) * 2001-08-07 2003-07-27 Некрасова Валерия Борисовна Биологически активная добавка к пище
RU2272626C1 (ru) * 2004-09-06 2006-03-27 Открытое акционерное общество "Щелковский витаминный завод" Антипротозойное средство на основе метронидазола
RU2320319C1 (ru) 2006-11-07 2008-03-27 Вадим Владимирович Абрамов Суппозитории вагинальные

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU1375226A1 (ru) * 1984-12-28 1988-02-23 Сибирский технологический институт Способ получени продуктов из древесной зелени пихты
RU2021803C1 (ru) 1991-01-11 1994-10-30 Государственная научно-производственная фирма "Алата" Крем для кожи рук
EP0565313B1 (en) * 1992-04-02 1997-07-30 Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo Method to improve taste preference of pine extract, and orally administrable product obtained thereby
RU2040266C1 (ru) * 1992-12-29 1995-07-25 Товарищество с ограниченной ответственностью "Фитолон" Способ получения биологически активного средства из хвои
RU2041646C1 (ru) * 1992-12-30 1995-08-20 Красноярская государственная технологическая академия Способ получения продуктов из хвойной древесной зелени
CN1102100A (zh) * 1993-10-29 1995-05-03 中国林业科学研究院林产化学工业研究所 针叶叶绿素-胡萝卜素软膏制备方法
WO2004087203A2 (en) * 2003-04-02 2004-10-14 Coley Pharmaceutical Group, Ltd. Immunostimulatory nucleic acid oil-in-water formulations for topical application
US20060051384A1 (en) * 2004-09-07 2006-03-09 3M Innovative Properties Company Antiseptic compositions and methods of use
WO2006099359A2 (en) * 2005-03-10 2006-09-21 3M Innovative Properties Company Methods of reducing microbial contamination
US20080253976A1 (en) * 2007-04-16 2008-10-16 Douglas Craig Scott Personal Care Compositions Comprising An Antimicrobial Blend of Essential Oils or Constituents Thereof
RU2367458C1 (ru) 2007-12-26 2009-09-20 Вагиф Султанович Султанов Лекарственное средство, фармацевтическая композиция, ингибитор роста helicobacter pylori и способ проведения антихеликобактерной терапии

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2208950C2 (ru) * 2001-08-07 2003-07-27 Некрасова Валерия Борисовна Биологически активная добавка к пище
RU2272626C1 (ru) * 2004-09-06 2006-03-27 Открытое акционерное общество "Щелковский витаминный завод" Антипротозойное средство на основе метронидазола
RU2320319C1 (ru) 2006-11-07 2008-03-27 Вадим Владимирович Абрамов Суппозитории вагинальные

Non-Patent Citations (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Khlorofillo-karotinovaya pasta (khvoinaya)", 2004, pages 1, XP008141349, Retrieved from the Internet <URL:http://www.sumtech.ru/bank/medicine/archive/pasta.htm> [retrieved on 20090907] *
B.M. HONIGBERG; V.M. KING II, J. PARASITOL., vol. 50, 1964, pages 345 - 364
BORCHARDT K.A.; ZHANG M.Z., J. GENITOURIN MED., vol. 4, 1997, pages 297 - 298
E.A. DEBBIA; U. CAMPORA; S. MASSARO ET AL., J. CHEMOTHER, vol. 8, no. 2, 1996, pages 96 - 101
E.M. NARCISI; W.E. SECOR II, ANTIMICROB. AGENTS CHEMOTHER, vol. 40, 1996, pages 1121 - 1125
E.M. NARCISI; W.E. SECOR, ANTIMICROB. AGENTS CHEMOTHER, vol. 40, 1996, pages 1121 - 1125
EM. NARCISI; W.E. SECOR II, ANTIMICROB. AGENTS CHEMOTHER, vol. 40, 1996, pages 1121 - 1125
F.GRODSTEIN; M.B.GOLDMAN; D.W.CRAMER, AM. J. EPIDEMIOL., vol. 137, 1993, pages 577 - 584
I.T. TARU MERI; SAKARI JOKIRANTA; I. LAURI SUHONEN, JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY, vol. 38, no. 2, 2000, pages 763 - 767
ISAKOV B.A.; ZAKHARKIV YU.F.; ERMOLENKO D.K. ET AL., DIAGNOSTICS AND TREATMENT OF UROGENITAL TRICHOMONIASIS. RECOMMENDATIONS FOR PHYSICIANS, 2006, pages 46
J.L. THOMASON; S.M. GELBERT, OBSTETRICS AND GYNAECOLOGY, vol. 74, 1989, pages 536 - 541
L. DU BOUCHET; M.R. SPENCE; M.F. REIN ET AL., IISEX. TRANSM. DIS., no. 3, 1997, pages 156 - 60
LAND K.M.; DELGGADILLO-COREA M.G.; TACHEZY G.: "Targeted gene replacement of ferredoxin gene in T. vaginalis does resistancell", MOL. MICROBIOL., vol. 51, 2004, pages 115 - 120
See also references of EP2305279A4
TIKHOMIROV A.L.; OLEINIK CH.G. II, WORKS OF MGMSU, 2003, pages 1 - 7
VIDAL: "Therapeutic substances in Russia 6th edition", 2000
VILKKI M.; PUKKALA E.; NIEMINEN P. ET AL.: "Gynaecological infections as risk determinants of subsequent cervical neoplasiall", ACTA ONCOL., 2000, pages 71 - 75
VILKKI M.; PUKKALA E.; NIEMINEN P. ET AL.: "Gynecological infections as risk determinants of subsequent cervical neoplasiall", ACTA ONCOL., 2000, pages 71 - 75
ZAKHARKIV YU.F.; POZNYAK A.L.; SIDORCHUK S.N.; GUDKOV P.B.: "Materials of the Russian Scientific Conference", 2004, MILITARY MEDICAL ACADEMY, article "Key issues in fighting infection", pages: 192 - 193

Also Published As

Publication number Publication date
MY180493A (en) 2020-11-30
US9669061B2 (en) 2017-06-06
AU2009247064B2 (en) 2015-07-30
AU2009247064B9 (en) 2015-11-19
EP2305279B1 (en) 2016-04-20
EP2305279A1 (en) 2011-04-06
RU2366442C1 (ru) 2009-09-10
US20110189321A1 (en) 2011-08-04
EP2305279A4 (en) 2012-10-24
AU2009247064A1 (en) 2009-11-19
AU2009247064A2 (en) 2011-01-06
AU2009247064A9 (en) 2015-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
La Vignera et al. Microbiological investigation in male infertility: a practical overview
Narcisi et al. In vitro effect of tinidazole and furazolidone on metronidazole-resistant Trichomonas vaginalis
GREAVES et al. Clindamycin versus metronidazole in the treatment of bacterial vaginosis
Darvishi et al. The Comparison of vaginal cream of mixing yogurt, honey and clotrimazole on symptoms of vaginal candidiasis
CN105232526B (zh) 含儿茶素的药物在制备抑菌药物中的用途
Núñez et al. Low-dose secnidazole in the treatment of bacterial vaginosis
Hafner et al. Primary cutaneous cryptococcosis and secondary antigenemia in a patient with long-term corticosteroid therapy
Mondal et al. Bacterial vaginosis: a state of microbial dysbiosis
WO2009139665A1 (ru) Лекарственное средство, обладающее противопротозойной активностью в отношении тriсhоmоnаs vаginаlis в модельной системе in vitrо
Haltalin et al. Failure of furazolidone therapy in shigellosis
Regidor et al. Treatment and prevention of trichomoniasis, bacterial vaginosis and candidiasis with a new 7-day regime containing metronidazole and miconazole in a single vaginal pessary
Olawuyi P3-S7. 03 The prevalence of Bacterial Vaginosis among young women in urban areas in Nigeria and its major risk factors
Alwan et al. Comparing the effect of some plant extracts and commercial washes against some isolated microorganisms from vagina of pregnant women
Lodhia et al. Management of recurrent urinary tract infections in adults
Oladele et al. Survey of trichomoniasis in Osogbo South-western Nigeria
Meares Jr Prostatitis and related diseases
Seifinadergoli et al. Comparison of the efficacy of honey gel and clotrimazole cream in the treatment of vaginal candidiasis signs: A randomized clinical trial
Cudmore et al. Inducing Immune Protection against Trichomonas vaginalis: A novel vaccine approach to prevent HIV transmission
Nayagam et al. Comparison of ofloxacin and metronidazole for the treatment of bacterial vaginosis
Yuldasheva Features and algorithm of treatment of bacterial vaginitis
Yadav et al. Trichomoniasis
Kumar Development Of Biopolymeric Suppositories For The Treatment Of Bacterial Vaginosis
Onakhinor et al. Molecular detection and risk factors associated with Trichomonas vaginalis infection among pregnant women in Osogbo and Ede, Southwest Nigeria
Mabaso The effect of antimicrobials used for genital discharge disease on trichomonas vaginalis.
Salih et al. An in vitro study of zinc effect on Trichomonas vaginalis isolated from infected women

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 09746834

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2009247064

Country of ref document: AU

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 7316/CHENP/2010

Country of ref document: IN

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2009746834

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2009247064

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20090505

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12992751

Country of ref document: US