WO2009031920A1 - Médicament hypoglycémique et procédé de fabrication - Google Patents

Médicament hypoglycémique et procédé de fabrication Download PDF

Info

Publication number
WO2009031920A1
WO2009031920A1 PCT/RU2008/000251 RU2008000251W WO2009031920A1 WO 2009031920 A1 WO2009031920 A1 WO 2009031920A1 RU 2008000251 W RU2008000251 W RU 2008000251W WO 2009031920 A1 WO2009031920 A1 WO 2009031920A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
proinsulin
water
soluble polymer
polyethylene oxide
polymer
Prior art date
Application number
PCT/RU2008/000251
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Andrey Vladimirovich Artamonov
Petr Ivanovich Rodionov
Alexey Vyacheslavovich Stepanov
Evgeniy Ivanovich Vereshchagin
Original Assignee
Company Limited 'concern O3'
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Company Limited 'concern O3' filed Critical Company Limited 'concern O3'
Publication of WO2009031920A1 publication Critical patent/WO2009031920A1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/10—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person
    • A61K41/17—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person by ultraviolet [UV] or infrared [IR] light, X-rays or gamma rays
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/61—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule the organic macromolecular compound being a polysaccharide or a derivative thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics

Definitions

  • the invention relates to pharmacology and medicine, in particular, to endocrinology, and can be used to obtain a hypoglycemic preparation based on proinsulin for oral and parenteral use.
  • Proinsulin is a precursor to the hormone insulin and has a molecular weight of about 9000 Da (Dalt). Proinsulin has an effect on all types of metabolism in the body: it increases the penetration of glucose into the body tissues and its use by them, reduces the glycogen content in the liver and increases its amount in the muscles, increases the intensity of protein synthesis, etc. Proinsulin is formed in islet beta cells of the pancreas and is released into the blood as insulin and C-peptide .. Peptide C, which is part of proinsulin, has been shown to be a biologically active substance. In particular, the C-peptide prevents the development of diabetes complications. In addition, the C-peptide has an immunomodulating effect, and is involved in the development of insulin and proinsulin tolerance. It was found that the modification of the C-peptide is accompanied by the development of autoimmune diabetes in some mice. Therefore, proinsulin is most suitable for the treatment of patients with diabetes mellitus (DM) of the first type (type 1).
  • DM diabetes mellitus
  • proinsulin is unstable, easy collapses in the gastrointestinal tract (GIT), in connection with which, attempts to use it enterally for the induction of immunological tolerance to insulin and proinsulin in humans ended in vain (A. Nappipep, L. C. Narrisop “Mucosal Tolepto Ture 1 Diabetes: Sap t Canal Outcom Be Impr GmbHv Canald Numaps R Rev Diabetes Stud. 2004; 1 (3): 113-121).
  • proinsulin in association with an acceptable carrier, which is prescribed in association with a divalent zinc ion or in association with a protamine salt, taken in a specific weight ratio.
  • an acceptable carrier which is prescribed in association with a divalent zinc ion or in association with a protamine salt, taken in a specific weight ratio.
  • these agents are intended solely for parenteral administration intramuscularly or intravenously and are not suitable for oral use.
  • hypoglycemic agents containing proinsulin and intended for oral use.
  • the technical task of the invention is the creation of a proinsulin preparation suitable for both oral and parenteral use, as well as increasing its therapeutic effectiveness and reducing immunogenicity.
  • hypoglycemic agent containing proinsulin which, according to the invention, contains proinsulin covalently immobilized on a water-soluble polymer.
  • the proposed tool as a water-soluble polymer contains a polymer of a molecular weight of not more than 20,000 Da, preferably from 400 to 20,000 Da, and most preferably a molecular weight of from 400 to 4000 Da, for example, polyethylene oxide or polyvinylpyrrolidone, or isoprenol, or dextran.
  • the tool as a water-soluble polymer preferably contains polyethylene oxide, molecular weight from 400 to 4000 Da.
  • the agent may contain the following ratio of components, in wt.%: Proinsulin - 0.002-50, Water-soluble polymer - 50-99.998.
  • the agent may be a lyophilized form or an aqueous solution containing a proinsulin in a therapeutically effective amount.
  • the agent may contain 200 Units. proinsulin, and the aqueous solution may contain at least 20 units. proinsulin per 1 ml of solution.
  • the agent may further comprise a pharmaceutically acceptable solvent, for example, saline or water.
  • the agent may further comprise a pharmaceutically acceptable preservative, for example trehalose, mannitol, nipogen or dextran.
  • a pharmaceutically acceptable preservative for example trehalose, mannitol, nipogen or dextran.
  • the agent may further comprise a pharmaceutically acceptable excipient, for example, dextran, starch or microcrystalline cellulose.
  • a pharmaceutically acceptable excipient for example, dextran, starch or microcrystalline cellulose.
  • the agent is suitable for oral and / or parenteral and / or inhalation use, for example, intranasally.
  • the problem is also solved by the fact that a method for producing a hypoglycemic agent in the form of proinsulin immobilized on a water-soluble polymer is proposed, which means that proinsulin is covalently immobilized on a water-soluble polymer using high-energy ionizing radiation in a dose that ensures free radical reactions.
  • the immobilization process is carried out in an aqueous medium by mixing proinsulin with an aqueous polymer solution pretreated with high-energy ionizing radiation.
  • As ionizing radiation mainly gamma radiation or a stream of accelerated electrons in a dose of 1.0 to 5.0 Mrad is used.
  • a polymer of molecular weight not exceeding 20,000 Da, preferably from 400 to 20,000 Da, is taken, for example, polyethylene oxide or polyvinylpyrrolidone or isoprenol or dextran.
  • a polyethylene oxide of molecular weight from 400 to 4000 Da is taken as a water-soluble polymer.
  • Immobilization is carried out at a ratio of proinsulin: water-soluble polymer 1: 1-500.
  • a 1-50% aqueous solution of polyethylene oxide with a molecular weight of 400 to 4000 Da is prepared.
  • the solution is irradiated with high-energy ionizing radiation, mainly gamma radiation or a stream of accelerated electrons in doses, providing the course of free-radical reactions, mainly 1.0 - 5.0 Mrad.
  • proinsulin is introduced into a solution of radiation-activated polyethylene oxide to a final concentration (for protein) of 1-10 mg / ml (or for proinsulin activity of 10-100 IU / ml, respectively), in the ratio polyethylene enoxide: proinsulin equal to (l-500) : l, the mixture is stirred for 10-30 minutes until a homogeneous transparent or slightly opalescent solution is obtained.
  • highly active carbonyl groups are formed in the water-soluble polymer.
  • the polymer activated in this way forms a water-soluble complex with proinsulin, which effectively reduces the level of glucose when administered orally.
  • the proposed agent obtained by the proposed method allows not only to preserve the specific hypoglycemic activity of proinsulin, but also provides the most physiological mechanism of its action due to the fact that a water-soluble polymer - a polymer carrier chemically forms with proinsulin activated by high-energy ionizing radiation labile bonds and in the body acts as a transporting carrier of proinsulin to liver cells, where the release of native insulin and C-peptide occurs.
  • the most preferred option of immobilization is the impact on the polymer carrier with a directed flow of accelerated electrons.
  • the polymer carrier was irradiated with bremsstrahlung generated by the ILU-6 or ILU-10 accelerator with an electron energy of 2.5 MeB, the absorbed dose from 2 to 10 Gyy, dose rate l, 65 kGp / h.
  • polyethylene oxide polyvinylpyrrolidone, isoprenols, dextrans.
  • Figure 1 shows the IR spectrum of proinsulin immobilized on 1.5 kDa polyethylene oxide as described in Example 1.
  • Figure 2 shows the IR spectrum of free (non-immobilized) proinsulin.
  • Fig 3 IR spectrum of polyethylene oxide with a mol. Mass of 1.5 kDa.
  • a 10% aqueous solution of polyethylene oxide (polyethylene glycol - PEG) with a molecular weight of 1500 Da (PEG-1500) is irradiated with a stream of accelerated electrons in a dose of 2.0 Mrad.
  • Proinsulin is added to the irradiated solution to a final concentration of 10 mg in 1 ml (the ratio of polyethylene oxide: proinsulin is 10: 1).
  • the mixture is stirred for 10 minutes and get the preparation of proinsulin in the form of a slightly opalescent solution.
  • the yield of the finished product is 98%.
  • a 50.0% aqueous solution of polyethylene oxide with a molecular weight of 400 Da is irradiated with inhibitory gamma radiation at a dose of 1.0 Mrad.
  • Proinsulin is added to the irradiated solution to a final concentration of 1 mg in 1 ml (the ratio of polyethylene oxide: insulin is 500: 1).
  • the mixture is stirred for 30 minutes to obtain a proinsulin preparation in the form of a clear solution.
  • the yield of the finished product is 97%.
  • Example 4 The study of the effect of intragastric administration of immobilized proinsulin, obtained as described in Example 1, on blood glucose in rats. The experiments were performed on 20 Wistar male rats weighing
  • the initial glucose content in the control and experimental groups was 4.7 ⁇ 0, l mmol / l and 5.0 ⁇ 0.2 mmol / l, respectively, which falls within the physiological norm for this type of laboratory animals (table. 2).
  • rats that received proinsulin intragastrically immobilized on PEG -1500 from 1 to 3 hours inclusive, the blood glucose level did not differ statistically significantly from the values in the control group.
  • the glucose content in the blood of animals was 4.6 ⁇ 0, l mmol / l and was significantly lower (by 8%) compared with the control.
  • proinsulin immobilized on PEG - 1500 exhibits a hypoglycemic effect upon intragastric administration to rats.
  • Example 5 The study of the immunogenicity of the proposed tool in the form of proinsulin, immobilized on polyethylene oxide 1500, obtained as described in Example 1. The study of the immunogenic properties of immobilized on polyethylene oxide proinsulin was carried out according to the "Guidelines for assessing the allergenic properties of pharmacological substances" [Guide to experimental (preclinical) study new pharmacological substances. - M., 2005. - 827 s]. Assessment of anaphylactogenic activity:
  • the reaction of general anaphylaxis was carried out on 30 guinea pigs weighing 250-300 g (3 groups of 10 animals - 2 doses of the proposed drug in the form of proinsulin immobilized on PEG-1500 (therapeutic - 1 mg and 10 therapeutic doses) and control (unimmobilized proinsulin); the drug was administered subcutaneously and 2 times intramuscularly, allowing injection - intravenously; observation period - 3 weeks;
  • the immobilization of proinsulin on dextran with a molecular weight of 30-40 kDa was carried out in two stages.
  • dextran is activated on the particle accelerator.
  • active aldehyde groups are formed, due to which proinsulin is immobilized.
  • proinsulin is added to a dextran solution in a ratio of 1: 10, covalent crosslinking of proinsulin and dextran occurs. In this case, 100% of proinsulin form a complex with dextran.
  • the examples of specific performance clearly confirm the possibility of obtaining the proposed tool using the proposed method.
  • the proposed tool can be used not only parenterally, but also orally and in the form of inhalations.
  • the drug is not immunogenic, allergenic, highly stable, and therefore can be used to induce immunological tolerance to insulin and proinsulin in patients with type 1 diabetes.

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

ГИПОГЛИКЕМИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО И СПОСОБ ЕГО
ПОЛУЧЕНИЯ
Область техники
Изобретение относится к фармакологии и медицине, в частности, к эндокринологии, и может быть использовано для получения гипогликемического препарата на основе проинсулина для перорального и парэнтерального применения.
Предшествующий уровень техники
Проинсулин является предшественником гормона инсулина и имеет молекулярную массу около 9000 Да (Далт). Проинсулин оказывает влияние на все виды обмена веществ в организме: повышает проникновение глюкозы в ткани организма и ее использование ими, снижает содержание гликогена в печени и повышает его количество в мышцах, повышает интенсивность синтеза белка и т.д. Образуется проинсулин в островковых бета-клетках поджелудочной железы, выделяется в кровь в виде инсулина и С-пептида.. Входящий в состав проинсулина пептид С, как было показано, является биологически активным веществом. В частности, С-пептид предотвращает развитие осложнений диабета. Кроме того, С-пептид обладает иимуномодулирующим эффектом, и участвует в развитии толерантности к инсулину и проинсулину. Установлено, что модификация С-пептида сопровождается развитием аутоиммунного диабета у части мышей. Поэтому проинсулин наиболее подходит для лечения больных сахарным диабетом (СД) первого типа (1 типа).
Действительно, использование интраназально проинсулина для индукции энтеральной (оrаl tоlеrапсе) толерантности у лабораторных животных показало более высокую эффективность, по сравнению с энтеральным инсулином. Однако проинсулин нестоек, легко разрушается в желудочно- кишечном тракте (ЖКТ), в связи с чем, попытки его использования энтерально для индукции иммунологической толерантности к инсулину и проинсулину у людей закончились безрезультатно (А. Наппiпеп, L. С. Наrrisоп «Mucosal Тоlеrапсе tо Рrеvепt Туре 1 Diаbеtеs: Сап thе Оutсоmе Be Imрrоvеd iп Нumапs? Rеv Diаbеt Stud. 2004; 1(3): 113-121).
Кроме того, при парэнтеральном введении обычного проинсулина отмечается быстрое появление антител к проинсулину в связи с его высокой иммуногенностью. Основным путем введения как инсулина так и проинсулина в организм человека являются подкожные или внутримышечные инъекции препарата. Попытки введения инсулина наиболее физиологическим и удобным для больных пероральным (через рот) путем оказались безуспешными, поскольку инсулин легко гидролизуется пищеварительными ферментами с потерей активности. Вместе с тем, существует теоретическая возможность улучшить фармакокинетику и устойчивость проинсулина путем конъюгации его с водорастворимыми полимерами (Каtrе N..V. Thе сопjugаtiоп оf рrоtеiпs with роlуеthуlепе glусоl апd оthеr роlуmеrs. Аdv. Drug. Dеlivеrу Rеs..- 1993.- v.- 91-114; Наrгis J.M., Маrtiп N.E., Моdi M. Pegilation:a поvеl рrосеss fоr mоdifуiпg рhаrmасоkiпеtiсs. CHn Рhаrmасоkiпеt. 2001; v 40.- 539-531).
Преимущества перорального проинсулина очевидны, поскольку длительные ежедневные инъекции могут вызывать различные серьезные осложнения: сопровождаются болевыми синдромами; приводят к развитию липодистрофии, представляющей не только косметический дефект, но и вызывающей потребность в увеличении доз гормона; травмируют психику, особенно у детей; вызывают стрессовые состояния, приводящие к еще более выраженной гипергликемии, что, в свою очередь, увеличивает потребность в гормоне и т.. д. В то же время, энтеральный способ введения проинсулина способствует развитию энтеральной толерантности к инсулину и проинсулину, и стиханию аутоиммунного процесса. Известно гипогликемическое средство (патенты US 4,652,548,
4,652,547 опубликованные 24 марта 1987г), содержащее проинсулин и представляющее собой смесь инсулина, проинсулина и С-пептида, взятых в определенном весовом соотношении, и в ассоциации с фармацевтически приемлемым носителем. Известно также другое гипогликемическое средство (патент US
4,654,324, опубликованный 31 марта 1987г), содержащее проинсулин в ассоциации с приемлемым носителем, который назначают в ассоциации с двухвалентным ионом цинка или в ассоциации с солью протамина, взятых в определенном весовом соотношении. Однако эти средства предназначены исключительно для парентерального введения внутримышечно или внутривенно и непригодны для перорального применения.
В настоящее время нам неизвестно гипогликемических средств, содержащих проинсулин и предназначенных для перорального применения.
Раскрытие изобретения
Технической задачей предлагаемого изобретения является создание препарата проинсулина, пригодного как для перорального, так и парэнтерального применения, а также повышение его терапевтической эффективности и снижения иммуногенности.
Решение поставленной задачи достигается тем, что предложено гипогликемическое средство, содержащее проинсулин, которое, согласно изобретения, содержит проинсулин, ковалентно иммобилизованный на водорастворимом полимере.
При этом предлагаемое средство в качестве водорастворимого полимера содержит полимер молекулярной массы не более 20000Дa, предпочтительно от 400 до 20000Дa, и наиболее предпочтительно молекулярной массы от 400 до 4000Дa, например, полиэтиленоксид, или поливинилпирролидон, или изопренол, или декстран.
В частном случае реализации средство в качестве водорастворимого полимера содержит предпочтительно полиэтиленоксид, молекулярной массы от 400 дo 4000Дa.
В частном случае реализации средство может содержать следующее соотношение компонентов, в мac.%: Проинсулин - 0,002-50, Водорастворимый полимер - 50-99,998. Средство может представлять собой лиофилизированную форму или водный раствор с содержанием проинсулина в терапевтически эффективном количестве.
В частности на Ir лиофилизированной массы средство может содержать 200 Ед. проинсулина, а водный раствор может содержать по меньшей мере 20 Ед. проинсулина на 1 мл раствора.
Средство может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый растворитель, например, физиологический раствор или воду.
Средство может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый консервант, например, трегалозу, манитол, нипоген или декстран.
Средство может дополнительно содержать фармацевтически приемлемый наполнитель, например, декстран, крахмал или микрокристаллическую целлюлозу. Средство пригодно для перорального и/или парэнтерального и/или ингаляционного применения, например интраназально.
Поставленная задача решается также тем, что предложен способ получения гипогликемического средства в виде имобилизованного на водорастворимом полимере проинсулина, заключающийся в том, что проинсулин ковалентно иммобилизуют на водорастворимом полимере при помощи высокоэнергетического ионизирующего излучения в дозе, обеспечивающей протекание свободно-радикальных реакций. Преимущественно процесс иммобилизации проводят в водной среде путем смешивания проинсулина с водным раствором полимера, предварительного обработанного высокоэнергетическим ионизирующим излучением.
В качестве ионизирующего излучения используют, преимущественно, гамма-излучение или поток ускоренных электронов в дозе 1,0 - 5,0 Мрад.
В качестве водорастворимого полимера берут полимер молекулярной массы не более 20000Дa, предпочтительно от 400 до 20000 Да.., например, полиэтиленоксид, или поливинилпирролидон, или изопренол, или декстран.
В частном случае осуществления способа в качестве водорастворимого полимера берут полиэтиленоксид молекулярной массы от 400 до 4000Дa.
Иммобилизацию проводят при соотношении проинсулин : водорастворимый полимер 1 : 1- 500. В частном случае реализации способа готовят 1-50% водный раствор полиэтиленоксида с молекулярной массой от 400 до 4000 Да. Затем раствор облучают высокоэнергетическим ионизирующим излучением, преимущественно гамма-излучением или потоком ускоренных электронов в дозах, обеспечивающих протекание свободно-радикальных реакций, преимущественно 1,0 - 5,0 Мрад. Далее в раствор радиационно- активированного полиэтиленоксида вводят проинсулин до конечной концентрации (по белку) от 1 - 10 мг/мл (или по активности проинсулина 10 - 100 МЕ/мл соответственно), в соотношении полиэтил еноксид : проинсулин, равном (l-500):l, смесь перемешивают в течение 10-30 минут до получения однородного прозрачного или слегка опалесцирующего раствора.. При облучении в ходе радиационно- химического окисления в водорастворимом полимере образуются высокоактивные карбонильные группы. Активированный таким способом полимер образует с проинсулином водорастворимый комплекс, который эффективно снижает уровень глюкозы при пероральном введении. Вследствие высокой растворимости в водных растворах, комплекс проинсулина с полиэтиленоксидом полностью всасывается в кровь без диффузионных ограничений.. Полученный технический результат не является очевидным из известных научно- технических данных о свойствах полиэтиленоксида и проинсулина, так как в результате иммобилизации проинсулина на радиационно- активированном водорастворимом полимере могла бы произойти полная потеря специфической гипогликемической активности препарата за счет изменения его конформации и взаимодействия с инсулиновым рецептором клеток.
Однако, экспериментальным путем установлено, что предлагаемое средство, полученное предлагаемым способом, позволяет не только сохранить специфическую гипогликемическую активность проинсулина, но и обеспечивает максимально физиологический механизм его действия за счет того, что активированный высокоэнергетическим ионизирующим излучением водорастворимый полимер - полимерный носитель образует с проинсулином химически лабильные связи и в организме выполняет функции транспортирующего носителя проинсулина в клетки печени, где и происходит высвобождение нативного инсулина и С-пептида.
В качестве источника ионизирующего излучения можно использовать электронное излучение (направленный поток ускоренных электронов), гамма излучение, рентгеновское излучение, лазерное излучение и ультрафиолетовое излучение. Необходимая аппаратура и методики ионизации описаны в следующих публикациях (Gопсhаr A.. M. and Auslender V.. L. 1996; Gопсhаr A..M. апd Аuslепdеr V.. L. , 1998, Vеrеsсhаgiп E.Л., еt аl., 2001) .
Наиболее предпочтительным вариантом иммобилизации предлагается воздействие на полимерный носитель направленным потоком ускоренных электронов. В конкретном случае осуществления способа облучение полимерного носителя проводили тормозным излучением, генерируемым ускорителем ИЛУ-6 или ИЛУ- 10 с энергией электронов 2,5MэB, поглощённая доза от 2 до ЮкГр, скорость набора дозы l,65кГp/чac.
В качестве водорастворимого полимера можно использовать полиэтиленоксид, поливинилпирролидон, изопренолы, декстраны. Наиболее предпочтительно в качестве водорастворимого полимера использовать полимеры молекулярной массы не более 20000Дa, предпочтительно от 400 до 20000 Да, наиболее предпочтительно использовать полиэтиленоксид молекулярной массы от 400 до 4000Дa.
Краткое описание иллюстраций.
Для подтверждения наличия ковалентной связи между проинсулином и полиэтиленоксидом были проведены исследования препаратов методом инфракрасной (Ик) спектрофотометриии. На фиг 1 показан Ик-спектр проинсулина, иммобилизованного на полиэтиленоксиде 1,5 кДа как описано в примере 1.
На фиг 2 показан Ик-спектр свободного (неиммобилизованного) проинсулина. На фиг 3 - Ик-спектр полиэтиленоксида с мол.. Массой 1,5 кДа.
Исследование препарата проинсулина методом ИК-спектроскопии..
Как известно, определенным типам связей соответствуют вполне определенные полосы инфракрасного поглощения. Следовательно, в спектрах сложных молекул можно наблюдать полосы, складывающиеся из валентных колебаний C-N или C=O и др. групп. По изменению максимума поглощения каждой группы, которая меняется в той или иной степени в зависимости от конформации и типов возникающих связей можно судить о взаимодействиях между веществами.
При исследовании Ик-спектров иммобизованного проинсулина (фиг. 1), субстанции неиммобилизованного проинсулина (фиг.2) и полиэтиленоксида (фиг.З) отмечена разность ИК-спектров между иммобилизованным проинсулином и неиммобилизованным проинсулином, которая проявлялась в исчезновении величин поглощения в спектре разности полос (полос, наиболее интенсивных для поглощения азотистых групп белков) на уровне 1610 см"1 и 1504 см"1 .
Кроме того, сопоставление спектров до 4000 см"1 показало, что при сравнении спектра препарата иммобилизированного на полиэтиленоксиде проинсулина, и значений спектра активированного полиэтиленоксида, полученное значение не совпадало с ИК-спектром полиэтиленоксида в области 2890 см"1 и происходило смещение полосы внутримолекулярной водородной связи из области 2889 см"1 (в полиэтиленоксиде) к 2962 см"1 в иммобилизованном проинсулине. Таким образом, приведенные результаты исследований свидетельствуют о появлении ковалентной связи карбонильными группами полиэтиленоксида и аминогруппами аминокислот проинсулина (возможно лизина и/или имидазола гистидина) в иммобилизованном на полиэтиленоксиде проинсулине.
Исследование препаратов методом Кругового дихроизма.
При исследовании кругового дихроизма были выявлены изменения пространственной структуры взаимодействующих компонентов иммобилизованного на полиэтиленоксиде проинсулина. Наличие перестройки пространственной структуры взаимодействующих компонентов свидетельствует о появлении прочных контактов (например, ковалентной связи), которая, как правило, влечет перестройку пространственной структуры взаимодействующих компонентов. Предлагаемое изобретение иллюстрируется следующими примерами конкретного получения предлагаемого средства. Пример 1
10% водный раствор полиэтиленоксида (полиэтиленгликоля - ПЭГ) с молекулярной массой 1500 Да (ПЭГ- 1500) облучают потоком ускоренных электронов в дозе 2,0 Мрад. В облученный раствор вносят проинсулин до конечной концентрации 10 мг в 1 мл (соотношение полиэтиленоксид: проинсулин равно 10 : 1). Смесь перемешивают 10 минут и получают препарат проинсулина в виде слегка опалесцирующего раствора. Выход готового продукта составляет 98%. Пример 2
50,0% водный раствор полиэтиленоксида с молекулярной массой 400 Да облучают тормозным гамма-излучением в дозе 1,0 Мрад. В облученный раствор вносят проинсулин до конечной концентрации 1 мг в 1 мл (соотношение полиэтиленоксид: инсулин равно 500 : 1). Смесь перемешивают 30 минут и получают препарат проинсулина в виде прозрачного раствора. Выход готового продукта составляет 97%.
Пример 3.
Влияние подкожного введения иммобилизованного на ПЭГ - 1500 проинсулина на содержание глюкозы в крови у крыс.
Материалы и методы исследования Эксперименты проведены на 12 крысах-самцах Вистар массой
300-350 г. Животных содержали на стандартном пищевом рационе вивария, при свободном доступе к воде и пище, в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Кровь для исследования забирали из надрезов на хвосте. Содержание глюкозы в крови определяли на приборе "SmаrtSсап" ("Jоhпsоп & Jоhпsоп соmрапу", USA). Иммобилизованный проинсулин, полученный, как описано в Примере 1, вводили однократно подкожно в дозе 0,5 мг/кг. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество изотонического раствора NaCl. Содержание глюкозы определяли до введения предлагаемого средства (в период с 9 до 10 часов утра) и через 30 мин, 1 ч, 2 ч, 3 ч после его введения. Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета статистических программ "Stаtistiса fоr Wiпdоws 5.0". Исходное содержание глюкозы в крови животных составило
4,8±0,l ммоль/л в контрольной группе и 4,8±0,3 ммоль/л в опытной группе и укладывалось в пределы физиологической нормы для данного вида лабораторных животных (см. нижеприведенную Таблицу). Через 30 мин после подкожного введения предлагаемого средства в виде иммобилизованного проинсулина уровень глюкозы в крови крыс составил 4,l±0,l ммоль/л, что достоверно ниже, чем в контрольной группе. В дальнейшем, у крыс, получивших иммобилизованный проинсулин, концентрация глюкозы оставалась на сниженном уровне и была достоверно меньше по сравнению со значениями у крыс контрольной группы через lч, 2 ч и 3 ч на 39%, 42% и 28% соответственно.
Таким образом, введение иммобилизованного на ПЭГ- 1500 проинсулина при подкожном введении крысам проявляет выраженное и стойкое гипогликемическое действие.
Таблица
Влияние подкожного введения иммобилизованного на ПЭГ- 1500 проинсулина (однократно в дозе 0,5 мг/кг) на изменение концентрации глюкозы в крови (ммоль/л) у крыс.
Figure imgf000013_0001
Примечание: * - p<0,05 в сравнении с контролем
Пример 4. Исследование влияния внутрижелудочного введения иммобилизованного проинсулина, полученного как описано в Примере 1 , на содержание глюкозы в крови у крыс. Эксперименты проведены на 20 крысах-самцах Вистар массой
300-350 г. Животных содержали на стандартном пищевом рационе вивария, при свободном доступе к воде и пище, в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей. Кровь для исследования забирали из надрезов на хвосте. Содержание глюкозы в крови определяли на приборе "SmаrtSсап" ("Jоhпsоп & Jоhпsоп соmрапу", USA). Иммобилизованный на ПЭГ 1500 проинсулин вводили однократно внутрижелудочно в дозе 20 мг/кг. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество воды. Содержание глюкозы определяли до введения препарата (в период с 9 до 10 часов утра) и через 1 ч, 2 ч, 3 ч, 5 ч, 7 ч и 10 ч после введения. Статистическую обработку результатов проводили с использованием пакета статистических программ "Stаtistiса fоr Wiпdоws 5.0". Рассчитывали средние значения показателей и стандартную ошибку среднего значения. Межгрупповые различия оценивали с использованием Т-критерия Стьюдента.
Исходное содержание глюкозы в контрольной и опытной группах составило 4,7±0,l ммоль/л и 5,0±0,2 ммоль/л соответственно, что укладывается в пределы физиологической нормы для данного вида лабораторных животных (табл. 2). У крыс, получивших внутрижелудочно иммобилизованный на ПЭГ -1500 проинсулин, в период с 1-го до 3-го часа включительно уровень глюкозы в крови статистически значимо от значений в контрольной группе не отличался. Через 5 ч после введения препарата содержание глюкозы в крови животных составило 4,6±0,l ммоль/л и было достоверно ниже (на 8%) по сравнению с контролем. Данные различия сохранялись и к 7 ч после введения Иммобилизованный на ПЭГ -1500 проинсулин. Однако к 10 ч концентрации глюкозы в крови животных опытной и контрольных групп выравнивалась. Не иммобилизованный на ПЭГ - 1500 проинсулин влияния на уровень глюкозы крови не оказывал.
Таким образом, иммобилизованный на ПЭГ - 1500 проинсулин при внутрижелудочном введении крысам проявляет гипогликемическое действие. Пример 5. Исследование иммуногенности предлагаемого средства в виде проинсулина, иммобилизованного на полиэтиленоксиде 1500, полученного как описано в Примере 1. Изучение иммуногенных свойств иммобилизованного на полиэтиленоксиде проинсулина проводилась согласно «Meтoдичecким указаниям по оценке аллергизирующих свойств фармакологических вeщecтв» [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ.- M., 2005. - 827 с]. Оценка анафилактогенной активности:
Реакцию общей анафилаксии (анафилактический шок) проводили на 30 морских свинках массой 250-300 г (3 группы по 10 животных - 2 дозы предлагаемого средства в виде иммобилизованного на ПЭГ- 1500 проинсулина (терапевтическая - 1 мг и 10 терапевтических доз) и контроль (неиммобилизованный проинсулин); препарат вводили подкожно и 2 раза внутримышечно, разрешающую инъекцию - внутривенно; срок наблюдения - 3 недели;
В контрольной группе отмечен анафилактический шок со смертельным исходом у 4 из 10 животных, анафилактический шок без смертельного исхода у 2 животных. В группах, где животным вводился иммобилизованный проинсулин анафилактического шока не наблюдали ни в одном из случаев.
Изучение активной кожной анафилаксии проводили на 30 мышах линии ВАLВ/с (3 группы по 10 животных - 2 дозы (терапевтическая и 10 терапевтических доз иммобилизованного проинсулина) и контроль (вводили неиммобилизованный проинсулин в терапевтической дозе), препарат вводили подкожно. В качестве адъюванта использовали адъювант Фрейнда. Разрешающую дозу вводили подкожно. В контрольной группе отмечали выраженную гиперемию и образование папул у 5 животных; выраженную гиперемию и отек у 4 животных. При использовании иммобилизованного проинсулина у двух животных отмечали гиперемию и отек в группе с использованием высоких (10 терапевтических) доз.
Пример 6.
Иммобилизация проинсулина на декстране
Иммобилизация проинсулина на декстране молекулярной массой 30-40 кДа была проведена два этапа. На первом этапе происходит активация декстрана на ускорителе элементарных частиц. При воздействии на раствор декстрана пучком свободных электронов дозой 2 Мрад образуются активные альдегидные группы, за счет которых и происходит иммобилизация проинсулина. На втором этапе, при добавлении проинсулина к раствору декстрана в соотношении 1 : 10 происходит ковалентная сшивка проинсулина и декстрана. При этом 100% проинсулина образуют комплекс с декстраном.
Таким образом, приведенные примеры конкретного выполнения наглядно подтверждают возможность получения предлагаемого средства с помощью предлагаемого способа. По сравнению с существующими в настоящее время гипогликемическими средствами на основе проинсулина, предлагаемое средство может применяться не только парентерально, но и перорально, и в виде ингаляций. Кроме того, препарат не обладает иммуногенностью, аллергогенностью, высокостабилен, и вследствие этого может использоваться для индукции иммунологической толерантности к инсулину и проинсулину у больных сахарным диабетом 1 типа.

Claims

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Гипогликемическое средство, содержащее проинсулин, отличающееся тем, что оно содержит проинсулин, ковалентно иммобилизованный на водорастворимом полимере.
2. Средство по п. 1, отличающееся тем, что проинсулин иммобилизован на водорастворимом полимере с помощью ионизирующего излучения.
3. Средство по п. 1, отличающееся тем, что в качестве водорастворимого полимера оно содержит полимер предпочтительно молекулярной массы не более 20000Дa, более предпочтительно от 400 до 20000Дa
4. Средство по п. 3, отличающееся тем, что в качестве водорастворимого полимера оно содержит предпочтительно, по меньшей мере, один компонент, выбранный из группы, включающей полиэтиленоксид, поливинилпирролидон, изопренол, декстран.
5. Средство по п. 1, отличающееся тем, что в качестве водорастворимого полимера оно содержит предпочтительно полиэтиленоксид, молекулярной массы от 400 до 4000 Да.
6. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно содержит следующее соотношение компонентов, в мac.%: Проинсулин - 0,002-50, Водорастворимый полимер - 50-99,998.
7. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно представляет собой лиофилизированную форму с содержанием по меньшей мере 200 Ед. проинсулина на Ir сухой массы.
8. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно представляет собой водный раствор с содержанием по меньшей мере 20 Ед. проинсулина на 1 мл раствора.
9. Средство по п. 1, отличающееся тем, что оно пригодно для перорального и/или парэнтерального и/или ингаляционного применения, например интраназально.
10. Способ получения гипогликемического средства по п.l, заключающийся в том, что проинсулин ковалентно иммобилизуют на водорастворимом полимере при помощи высокоэнергетического ионизирующего излучения в дозах, обеспечивающих протекание свободно-радикальных реакций
11. Способ по п.10, отличающийся тем, что процесс иммобилизации проводят в водной среде.
12. Способ по п.l l, отличающийся тем, что процесс иммобилизации проводят путем смешивания проинсулина с водным раствором полимера, предварительного обработанного высокоэнергетическим ионизирующим излучением.
13. Способ по п.10, отличающийся тем, что в качестве ионизирующего излучения используют, преимущественно, гамма- излучение или поток ускоренных электронов.
14. Способ по п.10, отличающийся тем, что используют ионизирующее излучение, преимущественно в дозе 1,0 — 5,0 Мрад.
15. Способ по п.10, отличающийся тем, что в качестве водорастворимого полимера берут полимер предпочтительно молекулярной массы не более 20000Дa, более предпочтительно от 400 до 20000Дa
16. Способ по п.15, отличающийся тем, что в качестве водорастворимого полимера берут, предпочтительно, полиэтиленоксид, поливинилпирролидон, изопренол, декстран.
17. Способ по п.16, отличающийся тем, что в качестве водорастворимого полимера берут, предпочтительно, полиэтиленоксид, молекулярной массы от 400 до 4000Дa.
18. Способ по п.10, отличающийся тем, что иммобилизацию проводят при соотношении проинсулин : водорастворимый полимер 1 : 1- 500.
PCT/RU2008/000251 2007-08-22 2008-04-22 Médicament hypoglycémique et procédé de fabrication WO2009031920A1 (fr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2007131782 2007-08-22
RU2007131782/15A RU2007131782A (ru) 2007-08-22 2007-08-22 Гипогликемическое средство и способ его получения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2009031920A1 true WO2009031920A1 (fr) 2009-03-12

Family

ID=40429095

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/RU2008/000251 WO2009031920A1 (fr) 2007-08-22 2008-04-22 Médicament hypoglycémique et procédé de fabrication

Country Status (2)

Country Link
RU (1) RU2007131782A (ru)
WO (1) WO2009031920A1 (ru)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU654620A1 (ru) * 1976-12-06 1979-03-30 Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова Способ получени иммобилизованных ферментов
RU94006023A (ru) * 1993-02-25 1996-04-20 Стерлинг Уинтроп Инк. (US) Физиологически активная композиция на основе лиофилизированных модифицированных полиалкилен оксидом комплексов белка и полипептида с циклодекстрином и способ ее получения
RU2213557C2 (ru) * 2001-12-26 2003-10-10 Закрытое акционерное общество "Аксис" Фармацевтическая композиция, обладающая тромболитическими, противовоспалительными и цитопротективными свойствами
WO2004083234A2 (en) * 2003-03-14 2004-09-30 Nobex Corporation Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SU654620A1 (ru) * 1976-12-06 1979-03-30 Московский Ордена Ленина И Ордена Трудового Красного Знамени Государственный Университет Им. М.В.Ломоносова Способ получени иммобилизованных ферментов
RU94006023A (ru) * 1993-02-25 1996-04-20 Стерлинг Уинтроп Инк. (US) Физиологически активная композиция на основе лиофилизированных модифицированных полиалкилен оксидом комплексов белка и полипептида с циклодекстрином и способ ее получения
RU2213557C2 (ru) * 2001-12-26 2003-10-10 Закрытое акционерное общество "Аксис" Фармацевтическая композиция, обладающая тромболитическими, противовоспалительными и цитопротективными свойствами
WO2004083234A2 (en) * 2003-03-14 2004-09-30 Nobex Corporation Insulin polypeptide-oligomer conjugates, proinsulin polypeptide-oligomer conjugates and methods of synthesizing same

Also Published As

Publication number Publication date
RU2007131782A (ru) 2009-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2012296951B2 (en) Protein carrier-linked prodrugs
US6190699B1 (en) Method of incorporating proteins or peptides into a matrix and administration thereof through mucosa
AU2002220002B2 (en) Methods and compositions for enhanced delivery of bioactive molecules
US6811788B2 (en) Combinations and methods for treating neoplasms
EP3081233B1 (en) Glycopolysialylation of proteins other than blood coagulation proteins
EP3099293B1 (en) Nanoencapsulation of hydrophilic active compounds
US20220193200A1 (en) Tannic acid/fe (iii) nanoparticles and methods of drug delivery
US7927612B2 (en) Combinations and methods for treating neoplasms
CN1126441A (zh) 使用聚合物放大维生素b12吸收系统
JP2022058911A (ja) 非血液凝固タンパク質の糖ポリシアル酸化
JPH0276821A (ja) Ｖｉｐまたはその活性フラグメントと疎水性部分とのコンジュゲート及び男性のインポテンツのための局所投与用組成物
CN113456809A (zh) 一种量子点改性蛋白疫苗及其制备方法和应用
JPH09235235A (ja) 光線力学的治療用フラーレン−水溶性高分子結合体光増感剤
WO2010021570A1 (ru) Способ иммобилизации биологически активных веществ на полимерных носителях (варианты) и конъюгаты, полученные данным способом
EP3453390B1 (en) Polymerized drug-containing pharmaceutical composition
WO2009031920A1 (fr) Médicament hypoglycémique et procédé de fabrication
RU2316339C1 (ru) Способ получения препарата инсулина для перорального применения
WO2009045122A1 (fr) Médicament destiné au traitement et à la prévention des complications liées au diabète sucré
RU2395296C1 (ru) Способ получения препарата проинсулина для перорального применения
RU2413531C2 (ru) Способ получения препарата с-пептида проинсулина для перорального применения
JP3167763B2 (ja) 創傷治癒促進剤
WO2006072613A2 (fr) Préparation contenant des microparticules d&#39;une résine polysaccharidique insoluble portant un principe actif biopolymérique, ainsi que son procédé de fabrication
RU2401112C2 (ru) Фармацевтическая композиция для лечения аутоиммунных заболеваний, связанных с повышенным образованием антител к нуклеиновым кислотам
JPH09124512A (ja) 肝臓ターゲティングのための水溶性の薬物−プルラン結合体製剤
US20130338072A1 (en) Methods for treating organs

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 08753925

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 08753925

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1