WO2008078526A1 - Procédé de détection d'une interaction entre un adn et une protéine de liaison à l'adn à l'aide d'un transfert d'énergie par résonance de fluorescence - Google Patents

Procédé de détection d'une interaction entre un adn et une protéine de liaison à l'adn à l'aide d'un transfert d'énergie par résonance de fluorescence Download PDF

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Abstract

L'invention concerne un procédé de détection de l'interaction entre un ADN et une protéine de liaison à l'ADN par la mesure d'un changement de la vitesse du mouvement brownien de l'ADN marqué par fluorescence de l'invention. Ce procédé comprend les étapes consistant à : mélanger un ADN double brin marqué par au moins deux types de colorants fluorescents provoquant un transfert d'énergie par résonance de fluorescence avec un échantillon de test ; mesurer l'intensité de fluorescence d'une solution d'échantillon pour la mesure par excitation de la solution d'échantillon à mesurer à l'aide d'une lumière d'excitation ayant une longueur d'onde d'absorption d'un colorant donneur de transfert d'énergie par résonance de fluorescence et mesurer la lumière avec une longueur d'onde d'émission d'un colorant accepteur de transfert d'énergie de résonance de fluorescence ; et déterminer si la vitesse du mouvement de l'ADN double brin dans la solution de test à mesurer est, ou non, diminuée par comparaison avec le cas où un ADN ayant la même longueur que celle de l'ADN double brin se déplace seul sur la base d'un changement de l'intensité de fluorescence au fil du temps. Par la mesure de l'émission de fluorescence à travers un transfert d'énergie par résonance de fluorescence dans l'ADN double brin, on peut obtenir un résultat de mesure qui n'est pas affecté par un résidu d'ADN simple brin marqué par fluorescence ou une substance qui émet une autofluorescence dans un échantillon.
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