WO2008069273A1

WO2008069273A1 - 分画大豆蛋白素材の製造法

Info

Publication number: WO2008069273A1
Application number: PCT/JP2007/073598
Authority: WO
Inventors: Masahiko Samoto; Mitsutaka Kohno
Original assignee: Fuji Oil Company, Limited
Priority date: 2006-12-06
Filing date: 2007-12-06
Publication date: 2008-06-12
Also published as: JPWO2008069273A1; JP5353244B2; US7838633B2; US20100022754A1

Abstract

　本発明は、大豆から７Ｓグロブリンのみならず、残りの酸沈殿性蛋白質も効率的かつ高純度に分画し、高純度の分画大豆蛋白素材を提供することを目的とする。　１）総蛋白質あたりの７Ｓグロブリン含量が２０重量％以上かつ１１Ｓグロブリン含量が１０重量％以下である大豆から蛋白質を抽出し、大豆蛋白溶液を得る工程、２）上記大豆蛋白溶液をｐＨ４～５．５に調整し、４０～６５°Cで加温する工程、３）上記加温した大豆蛋白溶液をｐＨ５．３～５．７であって前記加温時のｐＨよりも高いｐＨ領域に調整し、水溶性画分と不溶性画分とに分画する工程、を含むことを特徴とする分画大豆蛋白素材の製造法。

Description

明細書

分画大豆蛋白素材の製造法

技術分野

[0001] 本発明は分画された大豆蛋白素材の製造法に関する。詳しくは、大豆蛋白質に含まれる各々特性のある蛋白質である 7Sグロブリンと脂質親和性蛋白質の分画技術に関する。

背景技術

[0002] 大豆蛋白質は、特有のゲル化力を発揮する性質から、食品の物性改善に幅広く利用されてレ、ると共に、栄養価の高レ、健康食品素材としての利用も増大して!/、る。

[0003] 大豆の貯蔵蛋白質は、 pH4.5付近で沈澱し、比較的簡単に貯蔵蛋白質以外の可溶性成分が主体の酸可溶性蛋白画分と貯蔵蛋白質が主体の酸沈殿性蛋白画分とに分けること力できる。この酸沈殿性蛋白画分を回収したものが分離大豆蛋白であり、現在広く食品工業に利用されている。

[0004] 大豆蛋白質を構成する蛋白質は、また超遠心分析による沈降係数から、 2S, 7S, U S, 15Sの各グロブリンに分類される。このうち、 7Sグロブリンと 11Sグロブリンはグロブリン画分の主要な構成蛋白成分である。なお、免疫学的命名法にいう /3—コンク、リシニンは 7Sグロブリンに、グリシニンは 11Sグロブリンに実質的に相当するものであ

[0005] 大豆蛋白質を構成する蛋白質は、粘性、凝固性、界面活性などの物性や栄養生理機能において異なる性質を有する。

例えば 7Sグロブリンは血中の中性脂肪を低下させることが報告され (非特許文献 1 )ている。また、 11Sグロブリンは、ゲル化力が高ぐ豆腐ゲルの硬さ'食感を支配していると言われている。

[0006] このように、大豆蛋白質をこれらの成分に富む画分へ分画することは、生理機能面や物性機能面における各蛋白質特有の機能を大きく発現させることが可能となり、特長ある素材の創出につながる可能性がある。そしてこれにより食品産業における蛋白利用分野の拡大が期待できる。 [0007] 図 1に 7Sグロブリンと 11Sグロブリンの pHに対する溶解挙動を示すとおり、 7Sグロブリンは pH4. 8付近において、 11Sグロブリンは pH4. 5〜6において溶解度が低いこと力、ら、 pH6付近でまず 11Sグロブリンを沈澱させ、その後に pHをさらに下げて 7S グロブリンを沈澱させればそれぞれの成分を高純度に分画出来るであろうということは予想できる。

しかしながら、実際に豆乳を pH6に調整し、不溶性画分と水溶性画分とに分けて S DS—ポリアクリルアミドゲル電気泳動によるパターンを見ると、どちらの画分にも 7Sグそのため、単純に pHに対する両グロブリンの溶解挙動のみでは高純度に分画することが出来ない問題があった。

[0008] そこで、この問題を克服するため、 7Sグロブリンと 11Sグロブリンを分画する技術がいくつか開示されている（非特許文献 2、特許文献;!〜 7等)。

[0009] 一方、酸沈殿性大豆蛋白質には、 7Sグロブリンや 11Sグロブリンの他にも、細胞膜をはじめプロテインボディーやオイルボディー等の膜を構成する極性脂質との親和力の高!/、雑多な蛋白質が混在することが近年報告されて!/、る（非特許文献 3)。

かかる報告を受け、本発明者による研究の結果、低変性の脱脂豆乳に対し 1M濃度になるように硫酸ナトリウムを添加し、 pHを塩酸で 4.5に調製すると、酸可溶性画分に 7S及び 11Sグロブリンが移行すること、そして一方で酸沈殿性画分には、他の雑多な蛋白質が移行することがわ力た (非特許文献 4)。

そしてこの酸沈殿性画分の窒素量は脱脂豆乳中の全窒素量のうち約 30%も占め、意外にも多量であることが判明した。

さらにこれらは工業的に生産される分離大豆蛋白の約 35%をも占めていることを報告しており、この一群の蛋白質が従来の豆乳や分離大豆蛋白などの大豆蛋白素材の風味に影響を与えて!/、ることがわかってきた（非特許文献 5)。

[0010] この 7Sグロブリンと 11Sグロブリンの少ない酸沈殿性画分に含まれる蛋白質は、 SD S-ポリアクリルアミド電気泳動による推定分子量において主に 34kDa、 24kDa、 18kDa を示す蛋白質、リポキシゲナーゼ、 γ —コングリシニンや、その他多くの雑多な蛋白質が混在したものである。この一群の蛋白質は極性脂質との親和性を示すため、脂質親和性蛋白質と呼ばれてレ、る。

[0011] 以上の知見によれば、従来の分画技術 (非特許文献 2,特許文献 1〜7)は脂質親和性蛋白質が酸沈殿性大豆蛋白質の相当な割合を占めてレ、ることを何ら考慮していないため、 7Sグロブリンや 1 1 Sグロブリンを高純度に分画することを実質的には成し得て!/、なかったことがわかる。

[0012] 7Sグロブリン、 1 1 Sグロブリンと脂質親和性蛋白質を高純度に分画する方法としては、非特許文献 4の方法が示されている力 S、高いイオン強度にして、多くの還元剤が必要であるため、脱塩や洗浄が必須工程となるため、実験レベルでは有効であるも、工業的プロセスには不向きであった。

[0013] そこで、本出願人は脂質親和性蛋白質の混入率の低い、高純度の大豆 7Sグロブリン蛋白と大豆 1 1 Sグロブリン蛋白に分画する技術を開発した（特許文献 8 , 9)。この方法は、 7Sグロブリンを高純度に分画する点において工業的に優れた方法である。し力、しその一方で、残りの画分である 1 1 Sグロブリンと脂質親和性蛋白質の混合物を各成分に高純度に分画するためには煩雑な操作が必要となるため、これらの成分が有効に利用されにくい状況にあった。

[0014] すなわち、 7Sグロブリンだけを高純度に分画するのではなぐ残りの画分についても簡便な方法で高純度に分画できる方法が望まれる。

[0015] (参考文献）

非特許文献 l : Okita T et al， J.Nutr. Sci.Vitaminol. ,27(4), 379-388， 1981

非特許文献2 : 1¾*11，¥.¾ and Shibasaki，K.， J.Agric.FoodChem. , 24， 117， 1976 非特許文献 3 : Herman, Planta, 172， 336-345， 1987

非特許文献 4 : Samoto M et al.， Biosci. Biotechnol. Biochem. , 58(11)， 2123-2125， 1 994

非特許文献 5 : Samoto M et al.， Biosci Biotechnol Biochem, 62(5)， 935-940， 1998 非特許文献 6 : T. Nagano, et. al.， Relationship between rheological properties and co informational states of 7S globulin from soybeans at acidic H, Food Hydrocolloids: Structures, Properties, and Functions, Plenum Press, New York, 1994

特許文献 1：特開昭 55— 124457号公報特許文献 2：特開昭 48— 56843号公報

特許文献 3：特開昭 49 31843号公報

特許文献 4：特開昭 58 36345号公報

特許文献 5：特開昭 61— 187755号公報

特許文献 6：国際公開 WO00/58492号公報

特許文献 7：米国特許第 6171640号公報

特許文献 8 :国際公開 WO02/28198号公報

特許文献 9：国際公開 WO2004/43160号公報

発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0016] 上記課題に鑑み、本発明は、大豆から 7Sグロブリンのみならず、残りの酸沈殿性蛋白質も効率的かつ高純度に分画し、高純度の分画大豆蛋白素材を提供することを目白勺とする。

課題を解決するための手段

[0017] 本出願人は、先に、低変性の大豆に脂質親和性蛋白質のみを選択的に変性するような条件で変性処理を施した加工大豆を調製し、これを抽出原料とすることで、 7S グロブリン、 11Sグロブリン、及び脂質親和性蛋白質を簡単な操作で効率よく高純度に分画できる技術を発明した（国際出願番号： PCT/JP2006/310751)。

先の発明は、上記の変性処理によって 11Sグロブリンと脂質親和性蛋白質との分離が特に改善される効果を奏する。そして本発明はこの知見をさらに発展させ、仮に 11 Sグロブリンの含量がもともと低い大豆を使用した場合、上記の変性処理を行うことなぐ簡単な操作で効率良ぐ高純度に 7Sグロブリンと脂質親和性蛋白質とを分画することができるとの知見に到り、着想されたものである。

[0018] すなわち、上記課題を解決するための本発明は、

1. 1)総蛋白質あたりの 7Sグロブリン含量が 20重量％以上かつ 11Sグロブリン含量力 ^0重量％以下である大豆から蛋白質を抽出し、大豆蛋白溶液を得る工程、

2)上記大豆蛋白溶液を pH4〜5. 5に調整し、 40〜65°Cで加温する工程、

3)上記加温した大豆蛋白溶液を pH5. 3〜5. 7であって前記加温時の pHよりも高い pH領域に調整し、水溶性画分と不溶性画分とに分画する工程、を含むことを特徴とする分画大豆蛋白素材の製造法、

2.前記 1.記載の水溶性画分を pH4〜5に調整し、不溶性画分を回収することを特徴とする、大豆 7Sグロブリン蛋白素材の製造法、

3.前記 1.記載の不溶性画分を回収することを特徴とする、非 7S - 11S 酸沈殿性大豆蛋白素材の製造法、である。

発明の効果

[0019] 本発明の効率的かつ簡便な方法により、 7Sグロブリン及び脂質親和性蛋白質をそれぞれ高純度で分画することが可能となる。得られた画分はそれぞれ大豆 7Sグロブリン蛋白素材及び 7S · 11 S 酸沈殿性大豆蛋白素材として提供することができ、それぞれの物性や栄養生理機能を十分に活力、した利用が可能である。

本分画法は、従来法である塩の添加などによる分画方法とは異なり、塩類を加えずに pH調整を主体として行う方法であるため、蛋白質を沈澱物として回収するのに必要な低イオン濃度環境にするための希釈や脱塩の操作が不溶であり、操作の簡便化が図れる優れた方法である。

発明を実施するための最良の形態

[0020] まず、本発明に記載の用語につ!/、て説明する。

[0021] 「7Sグロブリン」は β コングリシニンとも呼ばれ、一般には 3種のサブユニット（ α ' 、 α、 /3 )から構成される糖蛋白質である力何れかのサブユニットが欠損していても良い。これらのサブユニットはランダムに組み合わされ、 3量体を形成している。等電点は ρΗ4. 8付近で分子量は 17万程度である。以下、単に「7S」と略記する場合がある。

[0022] 「大豆 7S蛋白」は 7Sの純度を高めた大豆蛋白素材を!/、う。

[0023] 「11Sグロブリン」はグリシニンとも呼ばれ、酸性サブユニットと塩基性サブユニットがジスルフイド結合によって結合し、それらが 6分子集まった 12量体を形成している。分子量は 36万程度である。以下、単に「11S」と略記することがある。

[0024] 7Sと 11Sはいずれも酸沈殿性大豆蛋白質であり、大豆プロテインボディーに貯蔵される主要な貯蔵蛋白質である。なお、ここにいう「酸沈殿性大豆蛋白質」は、大豆の蛋白質の内、脱脂豆乳などの溶液の pHを酸性側（pH4〜6)に調整することにより沈澱する性質を有する蛋白質である。したがって、例えば分離大豆蛋白に含まれる蛋白質がこれに相当し、分離大豆蛋白製造時に酸沈殿しなレ、ホエー中の蛋白質はこれに含まれな!/、。

7Sと 11Sは、品種によっても異なると考えられる力 S、 SDS電気泳動においてクマシ一ブリリアントブルー（CBB)染色後、デンシトメトリーによってピーク面積を測定した場合、従来の分離大豆蛋白（SPI)などでは大豆蛋白質全体の約 70%を占める蛋白質である。以下、 7Sと 11Sを併せて「MSP」と略記することがある。

[0025] 「脂質親和性蛋白質」（Lipophilic Proteins)は大豆の酸沈殿性大豆蛋白質の内、 7 Sと 11 S以外のマイナーな酸沈殿性大豆蛋白質群を!/、い、レシチンや糖脂質などの極性脂質を多く随伴するものである。以下、単に「LP」と略記することがある。

この LP中には SDS-ポリアクリルアミド電気泳動による推定分子量において主に 34k Da、 24kDa、 18kDaを示す蛋白質、リポキシゲナーゼ、 γ —コングリシニンや、その他多くの雑多な蛋白質が含まれる（図 2、レーン 3参照）。

図 2の通り、 LPは SDS電気泳動法では 7Sや 11Sに比べて染色されにくい性質を有しており、そのため従来その実態が明確に認識されていな力、つたものである。そのため、従来の文献に 7Sや 11Sの単一のバンドとして掲載されている SDS電気泳動のバンドには、実際には LPがかなりの量混在していることが多い。

「非 7S ' 11S—酸沈殿性大豆蛋白」は LPの純度を高めた大豆蛋白素材をいう。以下、単に「LP— SPI」と略することがある。

[0026] 大豆蛋白質中の 7Sと 11Sの総含量の分析は、下記に示す (方法 1)及び (方法 2) によって行うことが出来る。

また LPは雑多な蛋白質が混在したものであるが故、各々の蛋白質を全て特定することは困難である力 S、下記 (方法 1)と (方法 2)に示す溶解挙動により分画することができる。

[0027] (方法 1)

試料加工大豆 (全脂大豆の場合は予めへキサンにより油分 1. 5%未満となるまで脱脂しておく）を粉砕し、 60メッシュパスの粒度にする。その大豆 1重量部に水 7重量部を加え、可性ソーダで pHを 7. 5に調整し、室温で 30分攪拌する。これを 1000G、 10分の遠心分離により、水溶性画分 Aと不溶性画分 Aに分離する。さらに不溶性画分 Aに水 5重量部を加え、室温で 30分攪拌する。これを 1000G、 10分の遠心分離により、水溶性画分 Bと不溶性画分 Bに分離する。水溶性画分 Aと Bを混合し、水溶性画分とする。また不溶性画分 Aと Bを混合し、不溶性画分とする。加水から分離までの操作温度は、 10°C〜25°Cで行なう。また撹拌はプロペラ（350rpm)で行う。

[0028] (方法 2)

方法 1で得られた水溶性画分に塩酸を加えて PH4.5に調整する。これを 1000G、 10 分の遠心分離により、不溶性画分 Cを回収する。さらにこの不溶性画分 Cに対し、 1M Na2SO4 (20mMメルカプトエタノール含有）溶液を方法 1の試料加工大豆の 5重量倍を添加してよく攪拌し、 10000G、 20分の遠心分離により、水溶性画分 Dと不溶性画分 Dに分離する。この不溶性画分 Dに再度同じ操作を繰り返し、水溶性画分 Eと不溶性画分 Eに分離する。この不溶性画分 Dと Eを合わせたものを LP画分とし、水溶性画分 Dと Eを合わせたものを 7S及び 11S画分（MSP画分）とする。操作温度は、 10°C〜25 °Cで行なう。以上により得られた LP画分と MSP画分の窒素量をそれぞれケルダ一ル法で測定し、両者の比率を測定する。

[0029] 次に大豆蛋白素材中の LP含量の測定方法について説明する。

大豆蛋白素材は最終の製品化工程において一般的に加熱殺菌されるため、 7S、 11 S及び LPはいずれも加熱変性が起こっている。そのため、製品化された大豆蛋白素材から上記方法 1、 2の方法によって LPを 7S, 11Sと分画し、 LP含量を測定することが困難である。

また、一般的な蛋白質組成の測定方法である SDS—ポリアクリルアミドゲル電気泳動法（SDS-PAGE)では LPが CBB染色されにくいと!/、う性質を有するため、これも正確な測定が困難である。

したがって簡易的に、 7S, 11S, LPの各蛋白質中の主要な蛋白質を選択し、それらの染色比率を求め、これらの比率から LP含量を推定する以下の方法を採用すること力 Sできる。

[0030] 〔LP含量の推定方法〕 (a)各蛋白質中の主要な蛋白質として、 7Sは αサブユニット及びサブユニット（α + α ')、 11Sは酸性サブユニット（AS)、： LPは 34kDa蛋白質及びリポキシゲナーゼ（Ρ3 4 + Lx)を選択し、 SDS— PAGEにより選択された各蛋白質の染色比率を求める。電気泳動は表 1の条件で行うことが出来る。

(b) X (%) = (P34 + Lx) /{ (P34 + Lx) + ( α + α，） +AS} X 100 (%)を求める。

(c)低変性脱脂大豆から調製された分離大豆蛋白の LP含量を加熱殺菌前に上記方法 1 , 2の分画法により測定すると凡そ 38%となることから、 X = 38 (%)となるよう（P34 + Lx)に補正係数 k* = 6を掛ける。

(d)すなわち、以下の式により LP推定含量（Lipophilic Proteins Content Index,以下「LCI」と略する。）を算出する。

(表 1) アプライ量：蛋白質 0. 1 %サンプル溶液を各ゥエルに ΙΟμΙ

ゥエル幅： 5mm

ゥエル容積： 30μ1

染色液：クマシ一ブリリアントブルー（CBB) lg、メタノール 500ml、氷酢酸 70ml (CBBをメタノールに完全に溶解させた後、酢酸と水を加えて 1Lにする。）

染色時間： 15時間

脱色時間： 6時間

デンシトメ一 -夕一： GS-710 Calibrated Imaging Densitometer /

Quantity One Software Ver. Ί.2.3 (Bio ad Japan Co.Ltd) スキャン幅： 5.3mm、感度： 30

[0032] (数 1) k * x(P34 + Lx)

LCI ( % ) =

k * x(P34 + Lx) + ( c¾ + a') + AS k* ：補正係数（6 )

P34： LP主要成分、 34kDa蛋白質

Lx ： LP主要成分、リポキシゲナーゼ

a : 7S主要成分、 αサブユニット

a ' : 7S主要成分、 α 'サブユニット

AS ： 11S主要成分、酸性サブュニット

[0033] 次に本発明の実施形態について詳細に説明する。本発明の大豆蛋白質の分画方法は、 1)総蛋白質あたりの 7Sグロブリン含量が 20 重量％以上かつ 11Sグロブリン含量が 10重量％以下である大豆から蛋白質を抽出し、大豆蛋白溶液を得る工程、 2)上記大豆蛋白溶液を pH4〜5. 5に調整し、 40〜6 5°Cで加温する工程、 3)上記加温した大豆蛋白溶液を pH5. 3〜5. 7であって加温時の pHよりも高!/、pH領域に調整し、水溶性画分と不溶性画分とに分画する工程を含むことを特徴とする。

[0034] 〔原料大豆〕

本発明の分画方法に使用する原料大豆は、総蛋白質あたりの 7Sグロブリン含量が 20重量％以上、好ましくは 30重量％以上であって、かつ 11Sグロブリン含量が 10重量％以下、好ましくは 5重量％以下である大豆を用いる。力、かる大豆は特に育種あるいは遺伝子組換え技術により 11Sグロブリンを欠失させた大豆、すなわち 11 Sグロブリン含量が 0重量％である大豆を用いることができる。例えば US2004/0037905 A1などに記載されるような大豆を使用することができる。

[0035] なお、本発明の各種大豆蛋白素材を調製する場合には、脂質が含まれていると蛋白質の純度に影響するため、脱脂大豆を原料大豆として用いることが好ましい。脱脂大豆は、へキサン等の有機溶剤で脱脂したものや圧搾などで油分を低下させたものを使用すること力できる。

[0036] 原料脱脂大豆の形態は特に問わないが、より好ましくは粉砕している方が良ぐ最大粒子径が 500 m以下、より好ましくは 300 m以下、さらに好ましくは 100 m以下の粉末が適当である。

[0037] また原料脱脂大豆中の蛋白質の変性が本発明の加工処理前に極度に進んでいないものが望ましぐ蛋白質抽出率を示す PDIは 60以上であることが好ましい。この大豆の水分は 2〜15%が好ましぐ 5〜10%がより好ましい。

[0038] 本発明は上記原料脱脂大豆から蛋白質を抽出し、大豆蛋白溶液を得る工程を含む。すなわち、原料大豆を水やアルカリ水溶液などの水系溶媒に分散させて蛋白質を抽出し、遠心分離により抽出液から不溶性画分であるオカラを除去して、可溶性画分を回収することにより大豆蛋白溶液を得る。

[0039] 水系溶媒の添加量は原料大豆に対し、 6〜； 15重量倍が好ましぐ 7〜； 12重量倍がより好ましい。水系溶媒の添加量が少なすぎると粘度が高くなり、多すぎると希薄溶液となって回収効率が悪くなる。

抽出時の温度は、 4〜50°C程度が好ましぐ 10〜30°C程度がより好ましい。温度が高すぎるとたん白質が変性を受けて分画しにくい状態となり、逆に温度が低すぎると抽出効率が悪くなつてしまう。

得られた抽出液から中性付近 pH6〜9において不溶物であるオカラを遠心分離等により除去する。得られたオカラに対しさらに水を 4〜6重量倍加え、さらに抽出し豆乳の回収量を上げる操作を繰り返しても良い。

[0040] 力、かる工程により得られた大豆蛋白溶液は、一般的な脱脂大豆から抽出した場合とは異なり極めて特徴的な組成を有しており、 11Sグロブリン含量が極めて低ぐ総蛋白質あたり 15重量％以下、好ましくは 7%以下である。

[0041] 次に、上記の大豆蛋白溶液を pH4〜5. 5、好ましくは pH4. 8〜5. 2に調整し、 40 〜65°Cで加温する。次に、加温された大豆蛋白溶液を pH5. 3〜5. 7であって加温時の pHよりも高!/、pH領域に調整する。

力、かる工程を経ることにより、 7Sは可溶な状態を保持しつつ、 LPを選択的に不溶化すること力 Sできる。そして、 7S主体の水溶性画分と不溶化した LPが主体の不溶性画分とを固液分離により分画することができる。

[0042] 固液分離後の水溶性画分についてはホエー成分が抽出前に予め洗浄除去されて殆ど含まれない場合にはそのまま噴霧乾燥し、大豆 7Sグロブリン蛋白素材を得ること力 Sできる。またホエー成分が含まれる場合には、その分 7Sの純度が低下するため、水溶性画分をさらに pH4〜5、好ましくは 4. 3〜4. 8に調整し、生成する沈殿を回収することにより、高純度の大豆 7Sグロブリン蛋白素材を得ることができる。

該素材の 7Sの純度は少なくとも 80%以上の高純度となるため、 7S特有の特性を活力、した利用が可能である。例えば血中中性脂肪低減剤や体脂肪低減剤などの栄養機能剤や高粘性素材などに利用できる。また該素材の LCI値は 30%以下であり、より好ましくは 25%以下、さらに好ましくは 20%以下であり、 LP含量が極めて少なぐ風味に優れるものである。

[0043] 一方、固液分離後の不溶性画分を回収し、必要により可性ソーダで中和して中和液を調製し、殺菌加熱、乾燥することにより LPを高純度に含む非 7S ' 11S—酸沈殿性大豆蛋白素材 (LP— SPI)を得ることができる。得られた LP— SPIは少なくとも LCI が 60重量％以上の高純度品として提供することができる。

LPは従来の大豆蛋白素材の風味劣化の一因となる成分と考えられていたものである力これを高純度に分画し、 LP— SPIとすることにより、 LP固有の特性を活力、した用途への使用が可能となる。

[0044] 以上のように分画された LPは脂質に対して強い親和性を有するため、大豆蛋白素材が本発明の LP— SPIに相当するか否かの判定は、当該蛋白中のクロ口ホルム：メタノールが 2 : 1の溶媒で抽出される油分（以下、「クロメタ油分」と記載する。）が 7重量 %以上、好ましくは 8〜； 15重量％、より好ましくは 9〜； 15重量％であるか否かで行うことが可能である。ただし、 LP— SPIのエーテル抽出油分が 2%以上含まれる場合には、上記数値からエーテル抽出油分を差し引かなければならない。抽出される極性脂質はレシチンや糖脂質が主成分である。

ちなみに分画されていない従来の分離大豆蛋白のクロメタ油分は 4〜5重量％程度で、高純度の大豆 7S蛋白や大豆 11S蛋白も 3%以下に過ぎな!/、。

[0045] LP— SPIの特に重要な機能は国際出願 PCT/JP2006/310751号明細書に記載の通り、血中コレステロール低下作用であり、これを用いた剤や食品などの血中コレステロール低下用組成物を提供できる。

血中コレステロール低下用組成物中に添加する LP— SPIの含有量は、組成物の形態 ·量によっても異なり、適宜設定することができる。通常は 1日あたりの有効成分の摂取量を摂取できるように、 1日あたりの組成物の摂取量を考慮し、組成物中の含有量を当業者が設定すればよい。例えば、 1日あたりの LP— SPIの摂取量を 4. 5gと設定した場合、 1日あたりの組成物の摂取量が 10gである場合は、組成物中の有効成分の含有量を 45重量％とすれば良い。本発明の LP— SPI1日あたりの摂取量は特に限定されないが、 4〜10gとすることができる。

[0046] 本発明の血中コレステロール低下用組成物には、 LP— SPIを使用する以外に、血中コレステロール低下作用のあるといわれる材料を併用することも可能である。例えば、イソフラボン、豆乳、分離大豆蛋白、濃縮大豆蛋白、レシチン、乳酸菌、ポリフエノール類、多糖類等を併用できる。

[0047] 血中コレステロールを低下剤として提供する場合は、種々の投与形態の製剤とすること力 Sできる。すなわち、経口的投与の場合に、錠剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、粒剤もしくは丸剤等の固形製剤や、溶液、ェマルジヨンもしくはサスペンジョンなどの液剤の形態等で投与することができる。また、非経口的投与の場合に、注射溶液や坐剤などの形態で投与される。これらの製剤の調製にあたっては製剤化のために許容される添加剤、例えば賦形剤、安定剤、防腐剤、湿潤剤、乳化剤、滑沢剤、甘味料、着色料、香料、張度調製剤、緩衝剤、酸化防止剤、 pH調整剤等を併用して製斉 IJィ匕すること力 Sでさる。

血中コレステロールを低下用食品として提供する場合は、一般的な食品の形態である清涼飲料、乳製品、豆乳、発酵豆乳、大豆蛋白飲料、豆腐、納豆、油揚げ、厚揚げ、がんもどき、ハンバーグ、ミートボール、唐揚げ、ナゲット、各種総菜、焼き菓子、栄養バー、シリアル、飴、ガム、ゼリー等の菓子類、タブレット、パン類、米飯類など、様々な食品に配合することができる。さらに、食品の場合には食品の包装やパンフレット等の宣伝媒体等に LP— SPIが有効成分として含まれる旨、そしてこれにより食品が血中コレステロールの低下作用を有する旨を直接的又は間接的に記載した、日本の特定保健用食品などの健康食品にもすることができる。

[0048] 以下に本発明を実施するための具体的な調製例を記載する。

[0049] (調製例 1) 一高純度大豆 7Sグロブリン蛋白素材の調製方法

総蛋白質あたりの 7Sグロブリン含量が 20重量％以上であり、力、つ 11Sグロブリン含量が 10重量％以下である大豆を使用し、これから上述の（方法 1)に従って蛋白質を抽出し、オカラを分離して大豆蛋白溶液を得る。

次に、該大豆蛋白溶液を塩酸にて pHを 5.0に調整し、 60°Cで 15分間加熱後、苛性ソーダで pHを 5.5にして30分間プロぺラ攪拌（300〜350卬01)後、不溶性画分 Aを 100 0G、 10分の遠心分離にて分離し、水溶性画分を回収する。これを塩酸にて pHを 4.5 に調整し、生じた不溶性画分 Bを 1000G、 10分の遠心分離にて回収し、噴霧乾燥して大豆 7Sグロブリン蛋白素材を得る。

この蛋白素材の純度検定は 3.7 gを試料として SDS-ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、 SDS-PAGEにより展開し、クマシ一ブリリアントブルーで染色後、デンシトメ一ターに供し、全蛋白質のバンドの濃さに対する 7Sと 11 Sに相当するバンドの濃さが占める割合を算出する方法により行う。また、これらのサンプルの LCI値も求める。上記検定法によれば本法に従って調製される 7Sの純度は 80%以上の高純度となり、また、このときの LCI値は、 30%以下となって LPが非常に低減化されたものとなる。

[0050] (調製例 2) — LP— SPIの調製方法

調製例 1と同様にして得られる不溶性画分 Aを回収し、噴霧乾燥することによって、 LP— SPIを得る。この蛋白の固形分中に含まれる油分は、エーテルで抽出される油分は 2%未満であり、クロ口ホルム：メタノールの比が 2 : 1の混合溶媒で抽出される油分が 7%以上であり、極性脂質に親和性を示す LPが多く含まれる。このときの LCI値は少なくとも 60%以上の高純度となる。

[0051] (比較例 1)

市販の IOM大豆（アメリカ産）（総蛋白質中、 7Sグロブリン含量 18%、 11Sグロブリン含量 36%)を使用し、（方法 1)に従って蛋白質を抽出し、オカラを分離して大豆蛋白溶液を得る。

次に、実施例 1と同様の方法で水溶性画分と不溶性画分 Aに分画する。水溶性画分を塩酸にて PH4.5に調整し、生じた不溶性画分 Bを遠心分離にて回収し、噴霧乾燥して蛋白素材を得る。得られた蛋白素材の 7S純度は 75%以下となる。

[0052] (比較例 2、 3)

調製例 1と同様にして得る大豆蛋白溶液を pH3. 5 (比較例 2)および pH6 (比較例 3)に調整して 60°Cで加熱する以外はそれぞれ同様にして分画を行った場合、得られる水溶性画分はいずれも純度が高いものが得られず、 80%に満たない。不溶性画分 Aの回収量が低下し、 LPとして回収されるべき画分が可溶化する量が多くなると考えられる。

[0053] (比較例 4, 5)

実施例 1と同様にして得る大豆蛋白溶液を pH5. 0に調整し、 35°C (比較例 4)および 70°C (比較例 5)で加熱する以外はそれぞれ同様にして分画を行った場合、得られる水溶性画分は 35°Cでは 7Sの純度は上がらない。一方、 70°Cでは 7Sの純度は上がるが、極端に収量が低くなる。不溶性画分 Aは 70°Cでは 7Sのコンタミが多くなり、比較例 4, 5のいずれも高純度に分画することができない。

[0054] (比較例 6, 7)

実施例 1と同様にして得る大豆蛋白溶液を pH5. 0に調整して 60°Cで 15分間加熱後、苛性ソーダで ρΗ5· 2 (比較例 6)および ρΗ6· 0に調整する以外は、それぞれ同様にして分画を行う。得られる水溶性画分は ρΗ5. 2では極端に収量が少なくなる。また ρΗ6. 0では 7Sの純度が上がらない。したがって比較例 2, 3のいずれも高純度に分画することができない。

図面の簡単な説明

[0055] [図 1]7Sグロブリンと 11Sグロブリンの各 ρΗにおける溶解挙動を示すグラフである。

[図 2]7Sグロブリン画分、 11 Sグロブリン画分、脂質親和性蛋白質画分の SDS—ポリアクリルアミドゲル電気泳動による泳動パターンを示した図面代用写真である。

Claims

請求の範囲

[1] 1)総蛋白質あたりの 7Sグロブリン含量が 20重量％以上かつ 11Sグロブリン含量が 1 0重量％以下である大豆から蛋白質を抽出し、大豆蛋白溶液を得る工程、

3)上記加温した大豆蛋白溶液を pH5. 3〜5. 7であって前記加温時の pHよりも高い pH領域に調整し、水溶性画分と不溶性画分とに分画する工程、を含むことを特徴とする分画大豆蛋白素材の製造法。

[2] 請求項 1記載の水溶性画分を pH4〜5に調整し、不溶性画分を回収することを特徴とする、大豆 7Sグロブリン蛋白素材の製造法。

[3] 請求項 1記載の不溶性画分を回収することを特徴とする、非 7S ' 11S—酸沈殿性大豆蛋白素材の製造法。