WO2008059819A1

WO2008059819A1 - Immunostimulant dérivé d'algue et agent anti-inflammatoire dérivé d'algue

Info

Publication number: WO2008059819A1
Application number: PCT/JP2007/071973
Authority: WO
Inventors: Hifumi Ohishi; Takashi Hattori; Hisanori Tani; Shigetaka Horiuchi
Original assignee: Fcc Horiuchi Co., Ltd.
Priority date: 2006-11-13
Filing date: 2007-11-13
Publication date: 2008-05-22
Also published as: JP5147218B2; JP2008120738A

Description

明細書

海藻由来の免疫賦活剤及び抗炎症剤

技術分野

[0001] 本発明は、褐藻類より得られる低分子化合物を有効成分とする、免疫賦活剤及び抗炎症剤に関する。

背景技術

[0002] 褐藻類に含まれるフコィダンについては、多岐に渡る学術的研究が成されている。

フコィダンに関する研究においては、抗炎症作用、基礎免疫賦活化作用、抗癌作用等、フコィダンの構造からは考えられ得ない活性も報告された。しかし、目的の作用

1S 粗精製のフコィダンでは追試'確認できるものの、精製したフコィダンでは確認できなくなるものもあり、当初フコィダンの作用と信じられていた重要な活性の幾つかは、被験試料に混在しているフコィダン以外の成分によるものであることが明らかにされつつある。

[0003] 例えば、抗癌作用に関しては、動物実験や培養細胞系で検討されている癌細胞や腫瘍細胞のアポトーシスを誘導できる成分はフコィダンではなぐフコキサンチンであること力 S証明されている。また、フコィダンは細胞増殖周期の G0→G1期を停止させることにより、癌細胞や腫瘍細胞の増殖を阻害する作用を有すると報告されたが、これもフコィダン以外の成分に起因することが明らかにされている。抗炎症作用に関しては、フコィダンがホスホリパーゼ A2 (PLA2)を阻害することによりァラキドン酸カスケ一ドを停止させ、抗炎症作用を示すことが報告された（特許文献 1)が、これもフコィダン以外の成分に起因することが明らかにされている。

[0004] また、本発明者らは各種の褐藻類に由来する生理学的/薬理学的作用を有する物質を研究してきたが、インスリン抵抗性改善作用を示す成分はフコィダンではなくフコキサンチンであることを明らかにした（特許文献 2)。さらに本発明者らは、モズク由来のフコキサンチンとも異なる低分子画分にアポトーシス誘導効果を見出し（非特許文献 1)、またその画分を精製してマウス肺癌細胞を足掌に移植したマウスに経口投与したところ、肺への転移巣及び原発部の腫瘍の大きさが低下し、かつ末梢血中のナチュラル.キラー細胞（natural killer cell; NK細胞）細胞及びリンホカイン活性化キラー細胞（lymphokine activated killer cell; LAK細胞）の割合が増加しうることを明らかにした（非特許文献 2)。これらの各細胞の活性化にはプロスタグランジン類の濃度が関与してレ、ることが知られて!/、る。

[0005] プロスタグランジン類はァラキドン酸カスケードにより産生される炎症の代表的なメディエーターである。ァラキドン酸カスケードは、細胞外から種々の刺激に反応して、生体膜のリン脂質がホスホリパーゼ A2 (PLA2)によりァラキドン酸に変換されることにより開始する。次いでァラキドン酸は、シクロォキシゲナーゼ（Cyclooxygenase; COX) の作用により、 2種類のプロスタグランジン類 (PGG2、 PGH2)に変換され、さらに各種細胞に存在する特異的な合成酵素により、生理的に重要な 4種類のプロスタグランジン類（PGD2, PGE2, PGF2a， PGI2)とトロンボキサン（thromboxane; TX)A2が合成される。

[0006] COXとしては、 COX-1及び COX-2という 2種類のアイソザィムが知られている。 CO X-1は胃や腸などの消化管、腎臓、血小板等に構成的に発現している酵素であり、胃液分泌、利尿、血小板凝集等の生理的な役割を担っている。他方、 COX-2は、通常ではどの細胞にもほとんど発現していないが、サイト力インや発ガンプロモーター等の刺激により、マクロファージ、線維芽細胞、血管内皮細胞、ガン細胞等で誘導され、炎症反応、血管新生、アポトーシス、発癌に関与する。アスピリンのような非ステロイド性抗炎症剤（nonsteroidal antiinflammatory drug, NSAID)は COX活性を阻害することにより炎症惹起性プロスタグランジン類産生を抑え、抗炎症作用を発揮することが知られている。しかしながら、アスピリンは COXに対する選択性がなぐ COX-1及び C OX-2の両方を阻害するので、主に消化器系への副作用が問題になることがある。

[0007] COX-2により選択性の高い阻害剤が人工的に合成され、抗炎症剤ゃ抗癌剤として使用され始めている力、このような COX-2選択的阻害剤においてもプロスタグランジン類とロイコトリェン類のアンバランスから心臓関係に重篤な副作用が報告されている

〇

特許文献 1：特開平 8-92103号公報

特許文献 2：特願 2006-144854号非特許文献 1 :第 58回日本栄養 ·食糧学会大会（平成 16年 5月 21〜23日開催）講演要旨集、 2J-5p

非特許文献 2 :第 59回日本栄養 ·食糧学会大会（平成 17年 5月 12〜15日開催）講演要旨集、 2I-6a

発明の開示

[0008] より安全性の高い、好ましくは天然物由来の抗炎症剤が求められている。

[0009] 本発明者らは、褐藻類抽出物について検討を進めた結果、ある画分に COX-2に対する阻害活性を見出した。このような活性は、フコィダンやフコキサンチン等の既知の褐藻類由来の成分には認められておらず、新規物質である可能性がある。従って、この物質の特定を試み、本発明を完成した。

[0010] 本発明は、すなわち、以下のものを提供する：

1)褐藻類に属する海藻由来の、マグネシウムを含有する分子量 250〜500のシクロォキシゲナーゼ -2 (COX_2)阻害物質を含む、医薬組成物。

2)褐藻類に属する海藻が、ダービリア属、モズク属、マツモ属、レツソニァ属、カジメ属、マクロシスティス属、ヒバマタ属、又はァスコフイラム属に属する海藻である、上記 1)の医薬組成物。

3)褐藻類に属する海藻が、ダービリア属に属する海藻であり、 COX-2阻害物質が、 COX-2を選択的に阻害するものである、上記 2)の医薬組成物。

4)免疫賦活及び/又は炎症抑制のために用いる、上記；!）〜 3)のいずれかの医薬組成物。

5)大腸ガン、胃ガン、食道ガン、肺ガン、肝ガン、瞵ガン、皮膚ガン、前立腺ガン、乳ガン、子宮ガン、慢性関節リウマチ、変形性関節症、腰痛症、肩関節周囲炎、頸肩腕症候群、炎症性疾患、又は術後疼痛の処置のために用いる、上記 4)の医薬組成物

〇

6)褐藻類に属する海藻由来の、マグネシウムを含有する分子量 250〜500の物質を有効成分とする、 COX-2阻害剤。

7)褐藻類に属する海藻が、ダービリア属に属する海藻であり、 COX-2を選択的に阻害するものである、上記 6)の COX-2阻害剤。 8)褐藻類に属する海藻を原料とすることを特徴とする、 COX-2阻害剤の製造方法。

9)褐藻類に属する海藻が、ダービリア属に属する海藻であり、 COX-2阻害剤が、 CO X-2を選択的に阻害するものである、上記 8)に記載の製造方法。

図面の簡単な説明

[0011] [図 1A]図 1Aは、ダービリアアンタークティカ由来 CCKの LCスペクトルである。

[図 1B]図 1Bは、ダービリアアンタークティカ由来 CCKの MSスペクトルである。

[図 2A]図 2Aは、ダービリアアンタークティカ由来 CCKの FT-IRスペクトルである。

[図 2B]図 2Bは、上から順に、ダービリアアンタークティカ由来 CCK、水酸化マグネシゥム、水、メタノールそれぞれの FT-IRスペクトルである。

発明を実施するための最良の形態

[0012] 本明細書で「褐藻類」というときは、特別な場合を除き、褐藻綱（Phaeophyceae)に分類される藻類をいう。褐藻類には、ナガマツモ目（Chordariales)、コンブ目（Lamina riales)、ウイキヨゥモ目（Dictyosiphonales)、アミジグサ目（Dictyotales)、ヒノマタ目（F ucales)、イソガワラ目（Ralfsiales)、カャモノリ目（Scytosiphonales)、シォミドロ目（Ecto carpales)、クロガシフ目 (Sphacelariales)、ヮノレシグサ目 (Desmarestiales 、ムチモ目 ( Cutieriales)、ケャリ目 (Sporochnalesノ、ウスノ、ゥ目 (Syringodermatalesノに属する藻類が含まれ、またダービリア属、モズク属、マツモ属、レツソニァ属、カジメ属、マク口システィス属、ヒバマタ属、又はァスコフイラム属に属する藻類が含まれる。褐藻類には、具体的には、ダービリア属ではダービリアアンタークティカ（Durvillea antarcti ca)、モズク属ではモズク（Cladoshiphon caredoniae)、マツモ属ではマツモ（Nemacyst is decipiens)、レツソニァ属ではレツソニァニグレツセンス (Lessonia nigrescens)、力ンメ j¾ 、、(ユカシメ (Ecklonia cavaノ、マクロシスアイス j¾で、(ュシャイアントケノレフ。 (Macroc ystis pyrifera)、ヒバマタ属ではヒバマタ（Fucus evanescens)ゃフカスべシキュロサス (Fucus vesiculosus)、ァスコフイラム属ではァスコフィラムノードスム（Ascophyllum n odosum)等を挙げること力 Sでさる。

[0013] 本明細書で「ダービリアアンタークティカ」というときは、特別な場合を除き、主に南極近海（チリ沖）に生息する、コンブに似た海洋植物ダービリアアンタークティカ（Du rvillea antarctica)をいう。ダービリアアンタークティカは、単に「ダービリア」と称されることあある。

[0014] 本明細書で「モズク」というときは、特別な場合を除き、ナガマツモ目のナガマツモ

)に属する褐藻類をいい、これには、イシモズク、フトモズク、クロモ、マツモ、モズク（ emacvstus decipiens Okam) 甬称： ["モスク）、才キナヮモズク (し ladoshrohon oka muranus Tokida) (通称：フトモズク）、ニューカレドニア沂海に生育する Cladoshiohon novae-caledoniae KylinJ及びトン力土国近？母に生肯 ■ iCladosniphon caledoniae y linが含まれる。

[0015] 本発明の医薬組成物及び COX-2阻害剤は、褐藻類に属する海藻由来の COX-2 阻害物質を含む。活性成分は比較的低分子の化合物であり、原料褐藻によって若干の分子量の差異を認めるが、その分子量は約 250〜500である。最も特徴的な性質としてマグネシウムを構造中に結合していることである。活性成分は、水、ェチルアルコール、メチルアルコール、アセトン等には容易に溶ける力酢酸エチルアルコール等には不溶性である。

[0016] 本発明者らの検討によると、特に、ダービリアアンタークティカ由来の本発明の低分子化合物は、 COX-2を選択的に阻害することにより、プロスタグランジン類の産生を抑制し、優れた基礎免疫賦活作用ゃ抗炎症作用を発揮しうるものである。ある化合物が COX-2阻害活性を有するか否力、、及びある化合物が COX-2選択的阻害活性を有するか否かは、当業者であれば適切な手法を用いて評価することができる。例えば、本明細書の実施例に記載されているように、市販のキットを用いて対象物質について COX-1阻害活性及び COX-2阻害活性を評価することができ、 COX-1をほとんど阻害しない（例えば、 COX-1に対する阻害活性力 15%以下、好ましくは 10%以下、より好ましくは 5%以下、さらに好ましくは 0%である）濃度においても、 COX-2を阻害することができる場合に、 COX-2選択的阻害活性を有すると判断することができる。また、対象物質にっレ、て logDC ratio WHMA COX- 1/COX- 2]値を求め（ここで、 WHMA

80

とは、 William Harvey Human Modified Whole Blood Assayをいう。 )、そのィ直が 0よりも大きレ、ときは、 COX-2選択的阻害的であると判断することができる。

[0017] 本発明の医薬組成物及び COX-2阻害剤は、 COX-2が関連する疾患又は状態、具体的には、大腸ガン、胃ガン、食道ガン、肺ガン、肝ガン、瞵ガン、皮膚ガン、前立腺ガン、乳ガン及び子宮ガン等のガン、並びに慢性関節リウマチ、変形性関節症、腰痛症、肩関節周囲炎、頸肩腕症候群、炎症性疾患及び術後疼痛等の炎症を伴う疾患又は状態の処置のために有用である。

[0018] 本明細書において疾患又は状態について「処置」というときは、特別な場合を除き、その疾患又は状態について、治療すること、予防すること、進行を遅延又は停止すること、良好な状態を維持することが含まれ、治療には、症状を抑える対処的治療と、根本的な治療とが含まれる。

[0019] 本発明の低分子化合物は腫瘍細胞の増殖を阻害するが（実施例参照）、本発明者らが細胞増殖周期への影響を調べたところによると、本発明の低分子化合物は、細胞周期の GOから G1への移行をブロックして細胞の増殖を阻害していること分かった。したがって、本発明の医薬組成物及び COX-2阻害剤は、上述した大腸ガン、胃ガン、食道ガン、肺ガン、肝ガン、瞵ガン、皮膚ガン、前立腺ガン、乳ガン及び子宮ガン等のガンの治療のためのみならず、予防のためにも用いうるものである。

[0020] 本発明の低分子化合物の急性毒性は経口で約 2g/kg体重以上、腹腔内投与で LD 50が約 200mg/kgであった。また、本発明の低分子化合物は、 121°C、 15分の加熱で安定であり、 pH2.0〜7.5の範囲で安定であった。また、室温、開封条件下であっても、 1年以上酸化に対して安定であった。

[0021] 本発明の低分子化合物は、褐藻類の海藻より抽出 ·精製することにより、得ること力 S できる。

[0022] 原料としては、例えばダービリア属、モズク属、マツモ属、レツソニァ属、カジメ属、マクロシスティス属、ヒバマタ属、ァスコフイラム属に属する海藻を用いることができ、より具体的には、ダービリアアンタークティカ、モズク、マツモ、レツソニァニグレツセンス、カジメ、ジャイアントケルプ、ヒバマタ、フカスベシキュロサス、ァスコフィラムノ一ドスムを用いることができる。特に、 COX-2に対するより高い選択性の観点からは、ダービリア属のダービリアアンタークティカ、並びにヒバマタ属のヒバマタ及びフカスベシキュロサスが好適である。

[0023] 例えば、粗抽出液は細断した全藻を水、酸又は親水性有機溶媒を単独又は組み合わせて得られる溶媒を用いて抽出することができる。

[0024] 褐藻類の海藻からの、フコィダン抽出液又はフコキサンチン抽出液を利用することもできる。例えば、フコィダンの抽出液については、該抽出液の限外ろ過膜透過液を濃縮し、得られた濃縮液を最終濃度が 85%以上のエチルアルコールで分画し、その上清から、本発明の低分子化合物得ることができる。フコキサンチンの抽出液については、該抽出液のアルコールを減圧等の方法で除去した後、酢酸ェチルを用いた液 /液分配法から得られる水層を最終濃度が 85%以上のエチルアルコールで分画し、その上？青カゝら得ること力 Sできる。

[0025] これらの各液にはヒ素も含まれている為、これを除去する目的で、最終濃度 85%以上のアルコールで処理し、その上清を得る。これにより低分子化合物に含まれるヒ素濃度は lppm以下にまで除去される。その後、 ODS等の逆相樹脂を用いて精製する方法等がある。

[0026] 本発明の医薬組成物の用量、投与経路、剤形は、当業者であれば適宜設計すること力 Sできる。

[0027] 用量は、例えば、成人一日当たり、好ましくは 0.3〜15，000mg、より好ましくは 3〜150 0mg、さらに好ましくは 30〜150mgとすることができる。予防、維持の目的では、より少ない量で効果的な場合もありうる。投与は一日分の量を、単回で投与してもよぐ複数回（例えば、一日 2回又は 3回）に分割して投与してもよい。

[0028] 本発明の医薬組成物は、経口的に投与することができ、また腹腔内、皮下、静脈内に投与することができる。本発明の医薬組成物は、当業者であれば、投与経路に応じた種々の製剤形態とすることができる。例えば、本発明の低分子化合物は溶液又は凍結乾燥や噴霧乾燥等により乾燥粉末物としたり、ペースト状に調製してもよい。より具体的には、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤、丸剤、液剤、注射剤とすることができる。経口投与製剤は、好ましい例の一つである。

[0029] 本発明の医薬組成物は、医薬として許容される添加剤、例えば、賦形剤、結合剤、安定剤、保存剤、崩壊剤、滑沢剤、コーティング剤、溶解剤、緩衝剤を用いることができる。また、本発明の低分子化合物又は本発明の医薬組成物は、目的とする疾患又は状態の処置のために有効な他の成分と組み合わせて用いることができる。実施例

[0030] 次に、試験例、実施例等により本発明を具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。

[0031] [低分子化合物の抽出、精製]

海藻からの低分子化合物の抽出、精製は谷らの方法 (前掲非特許文献 2)に準じて行った。 adoshiphon caledoneae)について行った例を以下に示す。

[0033] 1) ダービリアアンタークティカ乾燥藻体（チリ産、株式会社エフ'シーシ一堀内 ) 100gを細断し、 20倍量の脱イオン水を加え、撹拌しながら 85°C、 20分間加熱抽出した。遠心分離により抽出液を得、排除限界分子量 1,000の限外濾過モジュールを用いて限外濾過を行った。透過液を集め、減圧下にて濃縮後、エチルアルコールを加え、その最終濃度を 85% (v/v)以上にした。遠心分離により上清を得、減圧下にて濃縮乾固した。これを 50% (v/v)エチルアルコールに溶解し、 50% (v/v)ェチルアルコールで平衡化しているゲル濾過カラム（トーソー HW40S)に負荷し、精製した。収量 180 mg、収率 0· 18%。

[0034] 2) ダービリアアンタークティカ冷凍藻体（チリ産、株式会社エフ'シーシ一堀内 ) 100gを細断し、等量の 99.5%エチルアルコールを加え、室温下で 48時間抽出した。遠心分離により抽出液を得、減圧下にてエチルアルコールを除去した。これに酢酸ェチルを加え、分液ロートに入れ、激しく撹拌した。水層を集め減圧下にて濃縮乾固し、以下 1 )の方法に準じて精製した。収量 68mg、収率 0.068%。

[0035] 3) クラドシフォンカレドニア冷凍藻体（トンガ王国産、タンダルウッド株式会社） 100 gに等量の 99.5%エチルアルコールを加え、室温下で 48時間抽出した。遠心分離により抽出液を得、減圧下にてエチルアルコールを除去した。これに酢酸ェチルを加え、分液ロートに入れ、激しく撹拌した。水層を集め減圧下にて濃縮乾固し、以下 1)の方法に準じて精製した。収量 4mg、収率 0.004%。

[0036] [物質の同定]

各海藻からの精製された低分子化合物（以下、 CCKと称する。）の特徴を、次の表にまとめて示した。

[0037] [表溶分 1性]

§：^解子色味

性量ζ，

特徴

水、アルコール類、クロロフオルム、エーテル類に易—溶性で、醉酸ェチルに不溶

310〜320 (LC-MS分析値）

モル比で 1 : 1の結合

淡黄 ·&~赤色

オイリーな液状

Mgの特徴的な苦味

[0038] また、 CCKを LC-MS及び FT-IRにより分析した。

[0039] HPLCは、 NANOSPACESI-2 (資生堂社）、マススぺクトロメーターは、 LCQ DEC X P (サーモエレクトロン社）を用いた。 HPLCでは、 Superdex Peptide PE7.5/300 (フアルマシア社）をカラムとして使用し、移動相は 50% (v/v)エチルアルコール、流速 0.5ml/ min、カラム温度は 40°Cとした。マススぺクトロメーターは、 SIM法により、測定モードはポジティブとした。キヤビラリ一温度、 ESIスプレー電圧及びマルチプライヤー電圧は、それぞれ 250°C、 4.5kv及び 1，100Vとした。そしてシースガスとして窒素（75psi)を用いた。

[0040] LC-MSの解析から、 Mgの存在の可能性が示唆されたため、 Finnigan社（アメリカ合衆国）製の LCQ DecaXP MAX Revision 1.4 softwareを用いて詳細に解析した（データー示さず）後、 CCKの Mg量をマグネシウム B-テストヮコー（和光純薬社）で測定した。 CCKの濃度（分子量を LC-MS分析値である 313として算出） 1.58 mole/ml当たり M gの濃度が 1.36 mole/mlであったことから、 Mgは等モル比で CCKに結合していると判断した。

[0041] FT-IRは、 CCKを KBr錠剤にて調製後、 Magna 860 (Nicolet社）（分解能 4cm— により透過法で測定した。

[0042] ダービリアアンタークティカ乾燥藻体由来の CCK (以下、単に「ダービリアアンタークティカ由来 CCK」というときはこれを指す。 ) について得られた LC-MSのスぺタトルを図 1A及び Bに示した。

[0043] また、同 CCKの FT-IRのスペクトルを図 2A及び Bに示した。

[0044] なお、 HPLC及び LC-MSの結果から、精製物には CCK以外の成分は実質的に含まれないことが分かった。

[0045] [シクロォキシゲナーゼ阻害活性]

ダービリアアンタークティカ由来 CCKとクラドシフォンカレドニア由来 CCKとについ飞、 colorimetricし OX (ovineノ inhibitor screening assayキッ卜 (cayman个土、ノメリ； y合衆国）を用い、 COX-1又は COX-2に対する阻害活性を測定した。測定は、同社の分析操作法に基づいて行った。すなわち、 COX-1と COX-2の阻害剤として CCKを所定の緩衝液に溶解し、系に指定の量添加して反応後、 590nmの吸光度をプレートリーダ一で測定した。結果を下表に示した。

[0046] [表 2]

表 2. ダ一ピリアアンタークティカ由来 CCKのシク口才キシゲナ一ゼ阻害活性

[0047] [表 3]

表 3 . クラドシフォンカレドニア由来 CCKのシクロォキシゲナ一ゼ阻害活性

[0048] いずれも COX-2阻害活性を有した。特に、ダービリアアンタークティカ由来 CCK は COX-1にはほとんど作用せず、 COX-2選択的であった。ダービリアアンタークテイカ由来 CCKの COX-2に対する IC は、約 12 /^ (38.7 nM (CCKの分子量を 310として算出））であった。

[0049] なお、いずれにも PLA2阻害活性は認められなかった（データ示さず。）。

[0050] [ナチュラルキラー細胞の活性化]

マウス（C57BL/6、 c?、 5週令、日本クレア社）を 5匹を 1群としステンレス製ケージに入れ、 1週間予備飼育にて馴化した。 1 X 10⁵個の培養マウスルーイス肺癌細胞（2LL) をマウス右足掌に移植し、 1週間飼育した後、本発明のダービリアアンタークティカ由来 CCKを投与した。投与量は 0〜80 g/kg体重になるように滅菌水道水に溶解し、自由摂取させた。ダービリアアンタークティカ由来 CCKの投与量 0を対照とした。さらに 1ヶ月間、同一条件下で飼育した後、末梢静脈血のナチュラルキラー（NK)細胞とインターロイキン 2誘導性キラー（LAK)細胞の割合をフローサイトメーターで測定した。 4週間目における各々の結果を表ナチュラルキラー細胞の活性化に示す。

[0051] [表 4]

表 4 . ナチュラルキラ—細胞の活性化

[0052] [腫瘍細胞の増殖抑制]

マウスルーイス肺癌細胞（2LL)を培養し、 1.0 X 10⁶個細胞/ mlに調製した細胞を 96 穴マイクロプレートに 100 入れ、培養液中にダービリアアンタークティカ由来 CCK を 0〜15 g/mlになるように添加して、 37°C、 5%CO雰囲気下で 0〜48時間培養した。各細胞の増殖割合を MTTアツセィ法（渡邊正己、富永英之、脱アイソタイプ実験プロトコール (2)キット簡単編、秀潤社、 302、（1994) )で測定した。結果を下表に示した

〇

[0053] [表 5] 表 5 . CCKの腫瘍細胞増殖に及ぼす影響

腫瘍細胞の増殖は本発明の CCKの濃度上昇と逆相関し、阻害が顕著に認められた。 48時間後の腫瘍細胞の増殖率は 7.5 μ g/mlの添加では、 0 g/ml (対照）に比して、約 50%抑制されており、 15 μ g/mlでのそれは約 90%も抑制されていた。この時の細胞の状態をフローサイトメーターにて調べたところ、 90%以上の細胞が生細胞であったので、種々の状態での細胞死を誘導しているのではなぐ細胞の増殖を阻害していると考えられた。そこで、細胞増殖周期への影響をフローサイトメーターにて調べた（データは示さず)。

[0055] その結果、本発明の CCKは細胞周期の GOから G1への移行をブロックして細胞の増殖を阻害していた。

[0056] [考察]

以上のように、本発明の免疫賦活剤及び抗炎症剤はダービリア属、モズク属共にシクロォキシゲナーゼ活性を顕著に阻害する作用を有しており、特にダービリア属のそれはシクロォキシゲナーゼ -2に高!/、選択性を示した。この様なマグネシウムを構造中に持つシクロォキシゲナーゼ -2選択性阻害剤は従来知られておらず、全く新規の物質である。さらにこれらを経口的に投与するのみで NKや LAK等の基礎免疫担当細胞を活性化/賦活化できることも明らかにした。

Claims

請求の範囲

[1] 褐藻類に属する海藻由来の、マグネシウムを含有する分子量 250〜500のシクロォキシゲナーゼ -2 (COX_2)阻害物質を含む、医薬組成物。

[2] 褐藻類に属する海藻が、ダービリア属、モズク属、マツモ属、レツソニァ属、カジメ属

、マクロシスティス属、ヒバマタ属、又はァスコフイラム属に属する海藻である、請求項

1に記載の医薬組成物。

[3] 褐藻類に属する海藻が、ダービリア属に属する海藻であり、 COX-2阻害物質力 C

OX-2を選択的に阻害するものである、請求項 2に記載の医薬組成物。

[4] 免疫賦活及び/又は炎症抑制のために用いる、請求項;!〜 3のいずれか 1項に記載の医薬組成物。

[5] 大腸ガン、胃ガン、食道ガン、肺ガン、肝ガン、瞵ガン、皮膚ガン、前立腺ガン、乳ガン、子宮ガン、慢性関節リウマチ、変形性関節症、腰痛症、肩関節周囲炎、頸肩腕症候群、炎症性疾患、又は術後疼痛の処置のために用いる、請求項 4に記載の医薬組成物。

[6] 褐藻類に属する海藻由来の、マグネシウムを含有する分子量 250〜500の物質を有効成分とする、 COX-2阻害剤。

[7] 褐藻類に属する海藻が、ダービリア属に属する海藻であり、 COX-2を選択的に阻害するものである、請求項 6に記載の COX-2阻害剤。

[8] 褐藻類に属する海藻を原料とすることを特徴とする、 COX-2阻害剤の製造方法。

[9] 褐藻類に属する海藻が、ダービリア属に属する海藻であり、 COX-2阻害剤が、 CO

X-2を選択的に阻害するものである、請求項 8に記載の製造方法。