WO2007099237A2 - Dispositif de chromatographie modulaire - Google Patents

Dispositif de chromatographie modulaire Download PDF

Info

Publication number
WO2007099237A2
WO2007099237A2 PCT/FR2007/000376 FR2007000376W WO2007099237A2 WO 2007099237 A2 WO2007099237 A2 WO 2007099237A2 FR 2007000376 W FR2007000376 W FR 2007000376W WO 2007099237 A2 WO2007099237 A2 WO 2007099237A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
column
piston
bed
threaded rod
chromatography
Prior art date
Application number
PCT/FR2007/000376
Other languages
English (en)
Other versions
WO2007099237A3 (fr
Inventor
Alain Lasalle
Thierry Brocki
Stéphane RAOULT
Jean Blehaut
Original Assignee
Novasep
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=37081539&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=WO2007099237(A2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Novasep filed Critical Novasep
Priority to EP07731075A priority Critical patent/EP1994404A2/fr
Priority to US12/280,914 priority patent/US20100163490A1/en
Publication of WO2007099237A2 publication Critical patent/WO2007099237A2/fr
Publication of WO2007099237A3 publication Critical patent/WO2007099237A3/fr

Links

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/60—Construction of the column
    • G01N30/6004—Construction of the column end pieces
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/20—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the conditioning of the sorbent material
    • B01D15/206—Packing or coating
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/56—Packing methods or coating methods
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/10—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features
    • B01D15/22—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by constructional or operational features relating to the construction of the column
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/50—Conditioning of the sorbent material or stationary liquid
    • G01N30/56—Packing methods or coating methods
    • G01N2030/562—Packing methods or coating methods packing
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/60—Construction of the column
    • G01N30/6004—Construction of the column end pieces
    • G01N30/6021—Adjustable pistons

Definitions

  • the present invention relates to a new high performance preparative chromatography device which allows to combine a compression of the chromatographic bed and a use of the chromatography column.
  • a chromatographic separation process the efficiency of the column used is a key parameter.
  • the column is generally filled with a solid product called a stationary phase in the form of very fine grains usually of a size between 5 and 100 ⁇ m for high performance chromatography systems, forming the chromatographic bed.
  • the arrangement of the grains inside the column must be as homogeneous as possible and moreover, it is necessary to avoid empty volumes between the chromatographic bed and the entry of the column.
  • the columns with Dynamic Axial Compression have a piston or other sliding body driven by a jack actuated for example by an independent hydraulic circuit; the sliding body makes it possible to pack the packing in a chamber between this piston and a fixed bottom or removable cover. The sliding body comes into contact with the solid phase to maintain a constant mechanical pressure on the bed.
  • DAC Dynamic Axial Compression
  • French patent application FR-A-2 219 797 discloses a chromatography apparatus in the form of a column intended to contain a bed of adsorbent material.
  • the apparatus consists of a tube comprising a cover and a body sliding in the tube for exerting pressure in the tube.
  • the sliding body is a piston having at its head a porous plate permeable to fluids called frit.
  • a suspension of particles of a material capable of constituting an adsorbent bed is introduced into the tube without its lid or its piston.
  • the lid is fitted to the tube and then pressure is exerted on the suspension by means of the piston or sliding body.
  • the liquid is forced through the porous plates, and said particles are compressed between the piston and the lid.
  • This apparatus makes it possible to achieve, in an exemplary embodiment, the stage of compression of the chosen bed and the compaction of the desired particles when the sliding body has generally traveled between 1/4 and 3/4 of the height of the column, a function of the density of the suspension used to fill the column.
  • this DAC system by using dedicated compression module.
  • These modular systems comprise (i) an axial compression module dedicated to compressing the suspension into a bed, and (ii) a chromatography column equipped with a piston making it possible to ensure homogeneous filling of the column by axial compression at filling, compression which is however not maintained on the bed during the use of the chromatographic column, unlike columns DAC.
  • the Merck Selfpacker system for which the filling protocol is described below.
  • the column must be mounted with the piston via screws on the hydraulic compression system. Once the top flange of the column is removed, a fill tank is attached above the column. The suspension is introduced from the top into the tank and the column, the system is kept open. A vacuum is applied for 5 to 45 minutes on the line collected by the outlet of the lower flange of the column to cause formation of the grain bed by suction of the liquid through the column outlet frit (at the lower level) . The tank is then removed, the column closed by a flanged system which is fastened with screws, solvent is optionally injected, and the bed is then pressurized by moving the piston from bottom to top in the column. . After compression, the column is disconnected from the hydraulic system after locking the piston by a threaded rod. Applying a vacuum is a very time consuming operation.
  • the Modcol system is also known, in which the compression is done this time from top to bottom, but without prior application of vacuum.
  • the column lengths are necessarily larger than in the aforementioned case of Merck, since the columns must contain the suspension before compression.
  • the piston is blocked by a threaded rod.
  • a mechanical spring system can be used to maintain compression on the bed.
  • Modcol technology uses elements that must be screwed together.
  • the Amicon system uses a suspension loading in a system comprising a column and an adjustment unit, this unit serving in particular as a reservoir for loading the suspension of particles. After loading the suspension, an adapter is attached to the body of the column, which adapter contains the piston, and the compression of the bed can be done in a press, down. Then, the pressure is removed, the adapter is removed and the piston held in place by a safety system in the adjustment unit which is not removable and remains secured to the column.
  • the Axxial system uses two opposing pistons that compress the bed in the column at the center of the system.
  • the use of two pistons (without the column can not be recompressed next) is complex.
  • JP 61283278 discloses a method for compressing a filler to obtain a chromatographic bed.
  • Two lower and upper columns are used end to end, a piston being located at the free end of each column.
  • the load is disposed in the lower column and the piston pushes the load towards the upper column; then the lower column is removed and a flange is disposed at the lower end of the upper column.
  • the piston of the lower column does not enter the upper column.
  • the piston of the upper column is actuated to compact the load against the flange.
  • This document has the disadvantage of requiring two pistons, one of the pistons to transfer the load from the lower column to the upper column, the other of the pistons to pack the load in the upper column.
  • the withdrawal of the lower column to place the flange is hazardous; indeed, the lower end of the load is found in the open air time to place the flange. This process is therefore not efficient.
  • JP 63288138 discloses a method for compressing a filler to obtain a chromatographic bed.
  • a piston is actuated to compact a load in a column; a cone between the piston and the column makes it possible to adapt the size of the piston to the diameter of the column, the diameter of the column being smaller than the diameter of the piston. It should be noted that the piston can not enter the column as long as the diameter of the piston is greater than the diameter of the column.
  • the present invention relates to a modular chromatography device.
  • the invention therefore provides a chromatography device comprising:
  • a removable reservoir for a bed suspension a base comprising a jack adapted to a piston, said piston sliding in the removable reservoir and the column for compressing the suspension of solid grains in a chromatographic bed,
  • the columns, reservoir and base are connected from top to bottom.
  • the piston is provided with piston seal friction in the column and in the reservoir.
  • the piston and the jack are connected by a coupling cylinder and possibly a set of anti-rotation washers abutting the piston reversibly.
  • the columns, reservoir and base are secured at the flanges by means of fasteners by clamps.
  • the base comprises two chambers receiving a hydraulic fluid under pressure, disposed on either side of the lower part of the jack.
  • the column further comprises a set threaded rod and threaded flange receiving the threaded rod, said threaded rod adapting to the piston, this assembly replacing the reservoir when using the column as a column chromatography.
  • the invention further relates to a chromatography column comprising a threaded rod and threaded flange assembly receiving the threaded rod, said threaded rod adapting to the piston, this assembly being fixed to the column by a fastening clamp.
  • the invention also relates to a chromatography column comprising a threaded rod and threaded flange assembly receiving the threaded rod, said threaded rod adapting to the piston, this assembly being attached to the column, and wherein the threads of the rod and the tap are covered with an anti-seizing coating.
  • the subject of the invention is also a method for compressing a chromatographic bed in a chromatography column, comprising the following steps:
  • the method further comprises the following step:
  • the method further comprises the following step:
  • the method further comprises the step of recompression by clamping tightening the threaded rod.
  • the invention further relates to a process for separating at least two compounds from a fluid to be chromatographed comprising chromatography of said fluid in the column according to the invention.
  • the invention also relates to a process for separating at least two compounds from a fluid to be chromatographed comprising the bed compression steps according to the invention, and the flow of the fluid to be chromatographed through the bed and its collection. .
  • the threads of the rod and the tap are covered with an anti-seizing coating.
  • the end of the rod can be machined in hexagon to receive a wrench.
  • a spring is present between said threaded rod and the piston.
  • the device comprises a modular system shown in the right part of the figure, while the hydraulic system is shown on the left, a dashed line schematically separating the two sets.
  • the hydraulic system comprises a pressure regulator 1, a hydropneumatic pump 2, a pressure gauge 3 and a reservoir 4 of hydraulic fluid, typically oil.
  • the tank 4 is provided with a vent 5 and a discharge 18 for maintenance of the oil.
  • a manual valve 6 is used to direct the oil to the modular system, as will be indicated below.
  • a safety valve 7 and an emergency stop button 23 complete the hydraulic system.
  • the modular system comprises, during the compression phase of the suspension in a chromatographic bed, the following elements: a column 10 closed on the upper part by a flange 15 held by a clamp 21a, a removable reservoir 9 intended to receive the suspension for chromatographic bed, and a base 8.
  • a jack 14 is disposed in the base. It is adapted to a column piston 11 via a coupling cylinder 19.
  • the coupling cylinder 19 is not integral with the column piston 1 1, but it transmits the pressure of the cylinder 14 to the piston 1 1 which can thus mount in the tank 9 and the column 10 and compress the bed or down to release the pressure on the piston 1 1 according to the position of the valve 6.
  • Two chambers for hydraulic fluid 16 and 17 are disposed on either side of the cylinder 14, the cylinder sliding in the base between the two chambers by a seal 13.
  • the chambers 16 and 17 are defined by the movement of the base 20 of the cylinder 14.
  • the two chambers are kept separate and sealed together by the cylinder 14 and the gasket of the cylinder 13.
  • the hydraulic system is used to pump the hydraulic fluid from one of these chambers and fill the second to move the cylinder up or down depending on the direction of pumping selected using the manual valve 6.
  • the upper flange of the column is removed by removing the tie clip 21a and the column piston 11 is positioned at the base of the reservoir 9, the cylinder 14 being retracted downwardly to obtain a maximum available volume corresponding to the volume of the column 10 and the tank 9 into which the suspension is poured.
  • the piston seals 12 make it possible to seal the walls and to maintain the suspension in the volume corresponding to the reservoir 9 and to the column 10.
  • Variable reservoir lengths make it possible to accommodate variable suspension volumes.
  • the cylinder 14 For the compression of the bed (operation called "packing" of the column), the cylinder 14 is pushed by the hydraulic fluid compressed by the hydropneumatic pump 2.
  • the hydropneumatic pump 2 directs the hydraulic fluid, through a choice of the position of the valve 6, to the chamber 16, which leads to an upward movement of the cylinder 14.
  • the reduced volume of the chamber 17 leads to a drain of the fluid which is returned to the tank 4.
  • the difference in air volume that results in the tank 4 is compensated by the vent 5 which allows the air to escape or enter in order to maintain the atmospheric pressure in the tank 4.
  • a coupling cylinder 19 is mounted fixed on the cylinder (for example by screwing) and receives at its upper part the piston 11.
  • the piston originally placed on the coupling cylinder 19 pushes the suspension upwards to form the bed by compression.
  • the piston is slid into the reservoir into the column.
  • the piston 1 1 is not attached to the coupling cylinder 19.
  • the piston 11 comprises seals 12 which prevent leakage of the container from the column and the reservoir downwards. Column lengths and / or variable reservoirs make it possible to accommodate variable bed heights.
  • Clamps 21a, 21b, 21c are used to ensure the connection of the column and the other elements of the modular system. Clamps 21a and 21b make it possible to seal respectively between the upper flange and the column and between the column and the tank by means of O-rings placed between these elements.
  • the speed of the compression of the bed is controlled in particular by the air flow of the regulator 1 supplying the hydropneumatic pump 2.
  • the final pressure exerted on the bed is controlled by the air pressure fixed at the regulator which sets the pressure of the pump 2 and the ratio of the surfaces between the piston 1 1 and the lower part 20 of the cylinder 14.
  • the safety valve 7 limits the pressure exerted on the compressed medium forming the bed. This valve is calibrated at a hydraulic pressure equal to the maximum operating pressure of the medium forming the bed multiplied by the ratio of the surfaces between the piston 1 1 and the lower part 20 of the cylinder 14.
  • the cylinder is retractable, but it is not telescopic. It is not formed of multiple elements sliding into each other to gain space once retracted. Indeed, space saving is not necessary with the jack in the system according to the invention.
  • the hydraulic fluid pressure is therefore applied to the same surface of the jack during the entire compression phase, this which makes it possible to maintain a constant force exerted on the piston and to have only one safety valve calibrated with a single pressure.
  • the flange 15 is disengaged from the column 10 by removing the clamp 21a.
  • the hydropneumatic pump 2 is actuated by an air inlet controlled by the pressure regulator 1 by positioning the valve 6 so that the hydraulic fluid enters the chamber 16, so as to discharge the fluid from the chamber 17 to the reservoir.
  • the seed bed is extruded from the column 10 is recovered from the top of the column, for example in a container positioned at the column outlet.
  • the jack 14 After having compressed the bed in the column 10, the jack 14 is retracted, and thus also the coupling cylinder 19 by turning the valve 6 so that the hydraulic fluid enters this time into the chamber 17, so as to repress the fluid from chamber 16 to the tank.
  • the piston 11 remains in place by the effect of the friction forces exerted on the walls of the column 10.
  • it could also be used a mechanical locking system, if desired.
  • the bed is maintained between the piston and the flange. Due to the piston present in the column, the advantage is that only one piston is used both to place the chromatographic bed and then to adjust the pressure of the bed during a chromatographic separation operation.
  • a spring for example of the Belleville washer type 22 (FIG 2b) can be arranged between the piston 1 1 and the threaded rod 24, so as to compensate for a possible pressure drop with time during the chromatography operations.
  • the use of an intermediate removable reservoir 9 makes it possible to avoid the use of very long columns (as in particular in the case of Modcol). Chromatography columns shorter and therefore lighter are more easily manipulated. Since the reservoir can be available in several lengths, greater flexibility is achieved. Investment costs are also reduced.
  • the intermediate tank 9 which is disconnected when using the column 10 thus allows a shorter column.
  • the column in the invention is unitary, namely it comprises a single cylinder in which the piston slides and in which the chromatographic bed is located; there are no elements mounted successively on each other.
  • the column 10 and the intermediate removable tank 9 are advantageously made of stainless metal, stainless steel and PTFE seals, so that the parts of the device in contact with the solvents or the products are chemically stable and are compatible with the requirements in this respect. especially for pharmacy.
  • the internal diameters can typically vary from 20 to 200 millimeters, for column lengths of 50 to 600 millimeters, and reservoir lengths of 100 to 600 millimeters.
  • the devices according to the invention using columns of larger diameters will incorporate preferably handling assistance means. The preferred use of fastening by clamps is very easy and very fast.
  • the joint use of the anti-rotation assembly makes it possible to limit the drive of the piston by rotation and thus to control the pressure exerted on the compressed bed by the torque to be exerted on the threaded rod.
  • the invention also offers an advantage by controlling the pressure exerted on the bed as a function of the tightening torque by the clamping nut 26 located at the base of the threaded rod 24.
  • the fact of using a coating avoiding the seizing makes it possible to control the pressure exerted by the screw system, advantageously linearly. It is thus possible to manually recompress the column if necessary, by tightening the threaded rod.
  • This technical feature is furthermore independent of the general system of the invention and may apply to any type of column. It is also possible to use an external hexagonal machining at the screw for clamping the piston on the bed. It is also possible to install an anti-rotation washer between the piston and the rod in addition to the jack.
  • the end of the piston rod 24 is machined in the form of clamping nut 26 (previously described in connection with Figure 2a) to receive a key; this key can be used to manually tighten the piston to compensate for the eventual compression loss over time during chromatography operations; in addition, the use of a torque wrench makes it possible to dose the tightening according to the characteristics of the bed.
  • clamping nut 26 previously described in connection with Figure 2a
  • a nut with a flange machined in the form of a clamping nut 27 and inserted between the threaded flange 25 and the chromatography column 10; this nut slides on the base of the threaded flange 25 (the nut is rotatable relative to the flange) and drives the piston during tightening; this nut may be preferably bronze or steel, optionally coated with an anti-seizing material.
  • the advantage of the nut 26 or 27 is that it allows to re-compress the bed at will, and this at any time; in particular, the nut 26, 27 makes it possible to compress the bed again during a separation step by chromatography.
  • a set of washers or an anti-rotation plate 28 can be placed between the piston of the column 11 and the piston rod 24 in order to promote the axial displacement of the bed during the tightening, and also in order to better maintain a quasi-linear relationship between the tightening torque to exert on the clamping nut and the resulting pressure exerted on the compressed bed.
  • the device according to the invention is used as follows. - Once the column 10 and the intermediate removable reservoir 9 in place, the suspension can be poured.
  • the upper end of the column is closed by a flange 15 with a clamping clip 21a;
  • the pressure is applied to the cylinder 14 which transmits it to the piston 11 to compress the chromatographic bed.
  • the piston is moved into the column, the piston being able to slide in the column. Once the compression pressure of the bed reached, release the pressure on the cylinder 14; the piston 1 1 remains in place under the effect of friction in the column or through a mechanical locking system.
  • the column is disconnected from the assembly by opening the fastener by clamp 21b.
  • the threaded rod 24 and the threaded flange 25 are then placed on the column 10 and fixed by means of a clamping clip 21 d (the fasteners 21a, 21b, 21c and 21d being advantageously identical) and the pressure exerted on the bed is controlled as a function of the tightening torque.
  • Column 10 is then ready for use as a chromatography column. When the pressure is removed at the piston, there may be a slight expansion of the bed. Recompression of the bed may be recommended, either before or during chromatography operations.
  • the system according to the invention is rapid: after having poured the homogeneous suspension into the column and the reservoir, the duration to close the device and to put the bed in compression is of the order of one minute, which makes it possible to avoid the sedimentation of the suspension in the column, detrimental to the arrangement of the grain bed during the compression step. This is also particularly advantageous when several columns must be used (SMB, Varicol®), which reduces the preparation time of the separation process. Since the compression process is fast, it is not generally necessary to stir the suspension in the column before compression. In general, it is no longer necessary to re-fluidize the suspension in the tank.
  • the device uses a unitary column, that is to say that does not need to be coupled to adjustment units (unlike, for example, the Amicon system).
  • the device is flexible and can be used in "DAC” mode by keeping the column mounted on the compression module and in "non-DAC” mode according to the operating mode described with different lengths of bed. -
  • the device allows to achieve in "non-DAC” performance that are close to the DAC systems, especially in terms of reproducibility. Investment and operating costs are reduced. -
  • the operating procedures are easy and fast, reducing the risk of mishandling.
  • the volume of the column which is necessary to contain the initial volume of the suspension is no longer linked to the chromatography column but to the removable reservoir.
  • the hydraulic device associated with the base is compact and ready for use once the hydraulic fluid reservoir is filled and the air purged.
  • the design is modular.
  • the intermediate removable tank is placed between the base and the column and is dedicated to the departure suspension; it is then removed from the column. It can be sized according to the volume of suspension needed and be available in different lengths.
  • the clamp fastening system eliminates the need for screwing at the flanges and thus eliminates bad operations and improves assembly speed.
  • An anti-seizing coating on the threaded rod and the tap avoids blockages and makes it possible to control the pressure exerted as a function of the torque exerted on the threaded rod.
  • the invention offers the possibility of adjusting the pressure linearly as a function of the torque exerted on the piston. - All parts of the device in contact with solvents and products to be separated are made of stainless steel or PTFE, which allows compatibility with conventional chromatographic solvents. The process is simple and fast.
  • the method is a simple method for maintaining a satisfactory bed stability over time (and thus a constant column separation power).
  • Column 10 is usable in all systems, especially in an SMB separation process, Simulated Moving Bed (US 2,985,589, US 3,291,726, US 3,268,605 and US 3,266,604 belonging to UOP, US 5,578,215 and US 5,578,216 belonging to IFP and NOVASEP, EP 471,082 and EP 563,388 belonging to DAICEL) or in a process by VARICOL (US 6,136,198). Such methods implement a set of these associated columns loop.
  • Column 10 can also be used in batch chromatographic or CYCLOJET methods (US 6,063,284 and US 5,630,943).
  • the tank is fixed at the bottom of the compression system, and then fixed below the column with a fastening system by clamp.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

L'invention a pour objet un dispositif de chromatographie comprenant: (i) une colonne unitaire (10) destinée à recevoir un lit chromatographique, (ii) un réservoir amovible (9) pour une suspension de lit, et (iii) une embase (8) comprenant un vérin (14) adapté à un piston (11), ledit piston coulissant dans le réservoir amovible (9) et la colonne (10) pour comprimer la suspension de grains solides en lit chromatographique; les colonne (10), réservoir (9) et embase (8) étant connectées en série dans cet ordre, le piston (11) agissant pour comprimer la suspension de grains solides en lit chromatographique dans la colonne (10). L'invention a aussi pour objet une colonne pour l'utilisation dans le dispositif, un procédé de compression de lit chromatographique et un procédé de séparation utilisant le dispositif ou la colonne.

Description

DISPOSITIF DE CHROMATOGRAPHIE MODULAIRE
DOMAINE DE L'INVENTION
La présente invention se rapporte à un nouveau dispositif de chromatographie préparative haute performance qui permet de combiner une compression du lit chromatographique et une utilisation de la colonne de chromatographie. ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE Dans un procédé de séparation par chromatographie, l'efficacité de la colonne utilisée est un paramètre clef. La colonne est généralement remplie avec un produit solide appelé phase stationnaire sous forme de grains très fins habituellement d'une taille comprise entre 5 et 100 μm pour des système de chromatographie haute performance, formant le lit chromatographique. Afin d'obtenir une efficacité élevée, l'arrangement des grains à l'intérieur de la colonne doit être le plus homogène possible et de plus, il faut éviter des volumes vides entre le lit chromatographique et l'entrée de la colonne, des volumes vides au sein du lit ou des passages préférentiels au sein du lit chromatographique formés suite un réarrangement des grains lors de l'élution sur la colonne lié à une mauvaise organisation initiale du lit chromatographique lors du remplissage de la colonne. Il est connu de l'art antérieur de recourir à des colonnes à Compression Axiale Dynamique afin d'assurer l'existence d'un lit compact et homogène, sans volume vide dans le lit. Les solvants utilisés peuvent être à l'état liquide, supercritique ou subcritique.
Les colonnes à Compression Axiale Dynamique (DAC) présentent un piston ou autre corps coulissant mû par un vérin actionné par exemple par un circuit hydraulique indépendant; le corps coulissant permet de tasser le garnissage dans une chambre entre ce piston et un fond fixe ou couvercle amovible. Le corps coulissant rentre en contact avec la phase solide afin de garder une pression mécanique constante sur le lit.
Ainsi, on connaît de la demande de brevet français FR-A-2 219 797 un appareil de chromatographie se présentant sous forme d'une colonne destinée à contenir un lit en matière adsorbante. L'appareil est constitué d'un tube comprenant un couvercle et un corps coulissant dans le tube permettant d'exercer une pression dans le tube. Le corps coulissant est un piston comportant à sa tête une plaque poreuse perméable aux fluides appelé fritte. Pour obtenir le lit destiné à la chromatographie, on introduit dans le tube démuni de son couvercle ou de son piston, une suspension de particules d'une matière susceptible de constituer un lit adsorbant. On adapte le couvercle au tube, puis on exerce une pression sur ladite suspension au moyen du piston ou corps coulissant. Le liquide est refoulé à travers les plaques poreuses, et lesdites particules sont comprimées entre le piston et le couvercle. Cet appareil permet d'atteindre, dans un exemple d'exécution, le stade de compression du lit choisi et le tassement des particules désiré quand le corps coulissant a parcouru généralement entre 1/4 et 3/4 de la hauteur de la colonne, fonction de la densité de la suspension utilisée pour remplir la colonne. II existe des alternatives à ce système DAC par emploi de module de compression dédiée. Ces systèmes modulaires comprennent (i) un module de compression axiale dédiée à la compression de la suspension en un lit, et (ii) une colonne de chromatographie équipée d'un piston permettant d'assurer un remplissage homogène de la colonne par une compression axiale au remplissage, compression qui n'est cependant pas maintenue sur le lit lors de l'utilisation de la colonne chromatographique, contrairement aux colonnes DAC.
Ainsi, on connaît le système Merck Selfpacker pour lequel le protocole de remplissage est décrit ci-après. La colonne doit être montée avec le piston par l'intermédiaire de vis sur le système de compression hydraulique. Une fois la bride supérieure de la colonne enlevée, un réservoir de remplissage est fixé au-dessus de la colonne. La suspension est introduite par le haut dans le réservoir et la colonne, le système est conservé ouvert. Un vide est appliqué pendant 5 à 45 minutes sur la ligne collectée par la sortie de la bride inférieure de la colonne afin de provoquer la formation du lit de grains par aspiration du liquide à travers le fritte de sortie de la colonne (au niveau inférieur). Le réservoir est alors enlevé, la colonne fermée par un système à brides qui est fixé à l'aide de vis, du solvant est éventuellement injecté, et le lit est alors mis sous pression en déplaçant le piston du bas vers le haut dans la colonne. Après compression, la colonne est déconnectée du système hydraulique après blocage du piston par une tige filetée. L'application d'un vide est une opération très consommatrice de temps.
On connaît aussi le système Modcol, dans lequel la compression se fait cette fois du haut vers le bas, mais sans application préalable de vide. Les longueurs de colonne sont nécessairement plus grandes que dans le cas précité de Merck, puisque les colonnes doivent contenir la suspension avant compression. Après compression, le piston est bloqué par une tige filetée. Un système mécanique de ressort peut être utilisé pour maintenir la compression sur le lit. La technologie Modcol utilise des éléments qui doivent être vissés entre eux. Le système Amicon utilise un chargement de la suspension dans un système comprenant une colonne et une unité d'ajustement, cette unité servant notamment de réservoir pour le chargement de la suspension de particules. Après avoir chargé la suspension, un adaptateur est fixé sur le corps de la colonne, adaptateur qui contient cette fois le piston, et la compression du lit peut se faire dans une presse, vers le bas. Ensuite, la pression est supprimée, l'adaptateur est enlevé et le piston maintenu en place par un système de sûreté dans l'unité d'ajustement qui n'est pas amovible et qui reste solidaire de la colonne.
Le système Axxial utilise deux pistons en opposition qui compriment le lit dans la colonne située en centre du système. L'utilisation de deux pistons (sans que la colonne ne puisse être recomprimée ensuite) est complexe.
Le document JP 61283278 décrit un procédé pour compresser une charge pour obtenir un lit chromatographique. Deux colonnes inférieure et supérieure sont utilisées bout à bout, un piston étant situé à l'extrémité libre de chaque colonne. La charge est disposée dans la colonne inférieure et le piston pousse la charge vers la colonne supérieure ; puis la colonne inférieure est retirée et un flasque est disposé à l'extrémité inférieure de la colonne supérieure. On remarquera que le piston de la colonne inférieure ne pénètre pas dans la colonne supérieure. Par la suite, le piston de Ia colonne supérieure est actionné pour tasser la charge contre le flasque. Ce document présente l'inconvénient de nécessiter deux pistons, l'un des pistons pour transférer la charge de la colonne inférieure vers la colonne supérieure, l'autre des pistons pour tasser la charge dans la colonne supérieure. Par ailleurs, le retrait de la colonne inférieure pour placer le flasque est hasardeux ; en effet, l'extrémité inférieure de la charge se retrouve à l'air libre le temps de placer le flasque. Ce procédé n'est donc pas performant.
Le document JP 63288138 décrit un procédé pour compresser une charge pour obtenir un lit chromatographique. Un piston est actionné pour tasser une charge dans une colonne ; un cône entre le piston et la colonne permet l'adaptation de la taille du piston au diamètre de la colonne, le diamètre de la colonne étant inférieur au diamètre du piston. On remarquera que le piston ne peut pas pénétrer dans la colonne dès lors que le diamètre du piston est supérieur au diamètre de la colonne. Une fois la charge tassée dans la colonne pour former le lit, la colonne est retirée.
Ce document présente plusieurs inconvénients. En premier lieu, i] est à noter que le retrait de la colonne est hasardeux ; en effet, l'extrémité supérieure de la charge se retrouve à l'air libre une fois que la colonne est retirée du cône. Par ailleurs, une fois la colonne retirée, ce document ne décrit pas comment le tassement du lit est conservé. Ce procédé n'est donc pas performant. II existe donc un besoin d'un système modulaire de chromatographie qui permet d'éviter les problèmes rencontrés avec les systèmes actuels, et notamment qui permette un chargement et une compression du lit rapides dans des colonnes compactes afin de réduire leur encombrement. RESUME DE L'INVENTION
La présente invention a pour objet un dispositif de chromatographie modulaire.
L'invention fournit donc un dispositif de chromatographie comprenant :
- une colonne unitaire destinée à recevoir un lit chromatographique,
- un réservoir amovible pour une suspension de lit, - une embase comprenant un vérin adapté à un piston, ledit piston coulissant dans le réservoir amovible et la colonne pour comprimer la suspension de grains solides en lit chromatographique,
- les colonne, réservoir et embase étant connectées en série dans cet ordre, le piston agissant pour comprimer la suspension de grains solides en lit chromatographique dans la colonne.
Selon un mode de réalisation, les colonnes, réservoir et embase sont connectés du haut vers le bas.
Selon un mode de réalisation, le piston est muni de joint de piston venant en friction dans la colonne et dans le réservoir. Selon un mode de réalisation, le piston et le vérin sont reliés par un cylindre d'accouplement et éventuellement un ensemble de rondelles anti-rotation venant en appui avec le piston de façon réversible.
Selon un mode de réalisation, les colonnes, réservoir et embase sont solidarisés au niveau de brides à l'aide d'attaches par colliers de serrage. Selon un mode de réalisation, l'embase comprend deux chambres recevant un fluide hydraulique sous pression, disposées de part et d'autre de la partie inférieure du vérin.
Selon un mode de réalisation, la colonne comprend en outre un ensemble tige filetée et bride taraudée recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston, cet ensemble se substituant au réservoir lors de l'utilisation de la colonne en tant que colonne de chromatographie.
L'invention a encore pour objet une colonne de chromatographie comprenant un ensemble tige filetée et bride taraudée recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston, cet ensemble étant fixé à la colonne par une attache par collier de serrage.
L'invention a encore pour objet une colonne de chromatographie comprenant un ensemble tige filetée et bride taraudée recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston, cet ensemble étant fixé à la colonne, et dans lequel les filetages de la tige et du taraud sont recouverts d'un revêtement anti-grippage.
L'invention a encore pour objet un procédé de compression de lit chromatographique dans une colonne de chromatographie, comprenant les étapes suivantes:
- fournir un dispositif de chromatographie selon l'invention;
- remplir ce dispositif avec une suspension de lit;
- provoquer la translation du vérin et du piston pour comprimer la suspension en un lit. Selon un mode de réalisation, le procédé comprend en outre l'étape suivante:
- désolidarisation de la colonne du réservoir.
Selon un mode de réalisation, le procédé comprend en outre l'étape suivante:
- association de l'ensemble tige filetée et bride taraudée recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston. Selon un mode de réalisation, le procédé comprend en outre l'étape de recompression par serrage serrant la tige filetée.
L'invention a encore pour objet un procédé de séparation d'au moins deux composés d'un fluide à chromatographier comprenant la chromatographie dudit fluide dans Ia colonne selon l'invention. L'invention a encore pour objet un procédé de séparation d'au moins deux composés d'un fluide à chromatographier comprenant les étapes de compression de lit selon l'invention, et l'écoulement du fluide à chromatographier à travers le lit et sa collecte.
Pour les différents objets ci-dessus, selon un mode de réalisation, les filetages de la tige et du taraud sont recouverts d'un revêtement anti-grippage. L'extrémité de la tige peut être usinée en 6 pans de manière à recevoir une clé de serrage.
Pour les différents objets ci-dessus, selon un mode de réalisation, un ressort est présent entre ladite tige filetée et le piston. BREVE DESCRIPTION DES DESSINS D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront à la lecture de la description détaillée qui suit des modes de réalisation de l'invention, donnés à titre d'exemple uniquement et en références aux dessins qui montrent : figure 1, un dispositif de chromatographie selon l'invention, figures 2a et 2b, une vue agrandie d'une partie du dispositif de chromatographie selon l'invention, figures 3a et 3b, un autre mode de réalisation. DESCRIPTION DETAILLEE DE MODES DE REALISATION DE L'INVENTION Le dispositif décrit par la suite permet d'effectuer la chromatographie d'un fluide liquide, supercritique ou subcritique.
En référence à la figure 1, le dispositif comprend un système modulaire représenté dans la partie droite de la figure, tandis que Ie système hydraulique est représenté à la partie gauche, un trait en pointillés séparant schématiquement les deux ensembles.
Le système hydraulique comprend un régulateur de pression 1, une pompe hydropneumatique 2, un manomètre 3 et un réservoir 4 de fluide hydraulique, typiquement de l'huile. Le réservoir 4 est muni d'un évent 5 et d'une décharge 18 pour maintenance de l'huile. Une vanne manuelle 6 est utilisée pour diriger l'huile vers le système modulaire, comme il sera indiqué ci-dessous. Une soupape de sécurité 7 et un bouton d'arrêt d'urgence 23 complètent le système hydraulique.
Le système modulaire comprend, lors de la phase de compression de la suspension en un lit chromatographique, les éléments suivants: une colonne 10 fermée sur la partie supérieure par une bride 15 maintenue par un collier de serrage 21a, un réservoir amovible 9 destiné à recevoir la suspension pour lit chromatographique, et une embase 8. Un vérin 14 est disposé dans l'embase. Il est adapté à un piston de colonne 11 par l'intermédiaire d'un cylindre d'accouplement 19. Le cylindre d'accouplement 19 n'est pas solidaire du piston de colonne 1 1, mais il transmet la pression du vérin 14 au piston 1 1 qui peut ainsi monter dans le réservoir 9 et la colonne 10 et comprimer le lit ou redescendre pour libérer la pression sur le piston 1 1 selon la position de la vanne 6.
Deux chambres pour fluide hydraulique 16 et 17 sont disposées de part et d'autre du vérin 14, le vérin coulissant dans l'embase entre les deux chambres par un joint 13. Les chambres 16 et 17 sont définies par le mouvement de la base 20 du vérin 14. Les deux chambres sont maintenues séparées et étanches entre elles par le vérin 14 et le joint du vérin 13. Le système hydraulique est utilisé pour pomper le fluide hydraulique d'une de ces chambres et remplir la seconde afin de déplacer le vérin vers le haut ou vers le bas en fonction du sens de pompage choisi à l'aide de la vanne manuelle 6.
Pour charger la suspension, la bride supérieure de la colonne est retirée en enlevant l'attache par collier de serrage 21 a et le piston de colonne 11 est positionné à la base du réservoir 9, le vérin 14 étant rétracté vers le bas afin d'obtenir un volume disponible maximal correspondant au volume de la colonne 10 et du réservoir 9 dans lequel est versée la suspension. Ces deux éléments ont le même diamètre interne. Les joints de piston 12 permettent d'assurer l'étanchéité aux parois et de maintenir la suspension dans le volume correspondant au réservoir 9 et à la colonne 10. Des longueurs de réservoir variables permettent d'accommoder des volumes de suspension variables. Une fois la suspension chargée, l'opération de compression du lit peut commencer comme décrite ci-dessous. Le système hydraulique permet de comprimer un lit dans une colonne et permet aussi de décharger une colonne après utilisation. Pour la compression du lit (opération dite de "packing" de la colonne), le vérin 14 est poussé par le fluide hydraulique comprimé par la pompe hydropneumatique 2. La pompe hydropneumatique 2 dirige le fluide hydraulique, grâce à un choix de la position de la vanne 6, vers la chambre 16, ce qui conduit à un mouvement ascendant du vérin 14. Le volume réduit de la chambre 17 conduit à une vidange du fluide qui est retourné vers le réservoir 4. La différence de volume d'air qui résulte dans le réservoir 4 est compensée par l'évent 5 qui permet à l'air de s'échapper ou d'entrer afin de maintenir la pression atmosphérique dans le réservoir 4.
Un cylindre d'accouplement 19 est monté fixé sur le vérin (par exemple par vissage) et reçoit à sa partie supérieure le piston 11. Le piston posé à l'origine sur le cylindre d'accouplement 19 pousse la suspension vers le haut pour former le lit par compression. Le piston est coulissé dans le réservoir jusque dans la colonne. Le piston 1 1 n'est pas attaché au cylindre d'accouplement 19. Le piston 11 comprend des joints 12 qui empêchent les fuites du contenant de Ia colonne et du réservoir vers le bas. Des longueurs de colonne et/ou de réservoirs variables permettent d'accommoder des hauteurs de lit variables.
Des colliers de serrage 21a, 21b, 21c permettent d'assurer la liaison de la colonne et des autres éléments du système modulaire. Les colliers de serrage 21a et 21b permettent d'assurer l'étanchéité respectivement entre Ia bride supérieure et la colonne et entre la colonne et le réservoir à l'aide de joints toriques placés entre ces éléments.
La vitesse de la compression du lit est contrôlée notamment par le débit d'air du régulateur 1 alimentant Ia pompe hydropneumatique 2. La pression finale exercée sur le lit est contrôlée par la pression d'air fixée au niveau du régulateur qui fixe la pression de la pompe 2 et du rapport des surfaces entre le piston 1 1 et la partie inférieure 20 du vérin 14. Pour plus de détails sur la partie hydraulique, on pourra se référer au document US-P-6001260.
La soupape de sécurité 7 limite la pression exercée sur le milieu comprimé formant le lit. Cette vanne est tarée à une pression hydraulique égale à la pression opératoire maximale du milieu formant le lit multipliée par le rapport des surfaces entre le piston 1 1 et la partie inférieure 20 du vérin 14.
Sur le mode de réalisation de la figure 1 , le vérin est rétractable, mais il n'est pas télescopique. Il n'est pas formé de plusieurs éléments coulissant les uns dans les autres pour gagner de l'espace une fois rétractés. En effet, le gain d'espace n'est pas nécessaire avec le vérin dans le système selon l'invention. La pression de fluide hydraulique est donc appliquée sur la même surface du vérin pendant toute la phase de compression, ce qui permet de conserver une force constante exercée sur le piston et de n'avoir qu'une seule soupape de sécurité tarée avec une seule pression.
Pour décharger la colonne, la bride 15 est désolidarisée de la colonne 10 en enlevant le collier de serrage 21a. La pompe hydropneumatique 2 est actionnée par une arrivée d'air contrôlée par le régulateur de pression 1 en positionnant la vanne 6 pour que le fluide hydraulique pénètre dans la chambre 16, de sorte de refouler le fluide de la chambre 17 vers le réservoir. Le lit de grains est extradé de la colonne 10 est récupéré par le haut de la colonne, par exemple dans un récipient positionné en sortie de colonne.
Après avoir comprimé le lit dans la colonne 10, le vérin 14 est rétracté, et donc aussi le cylindre d'accouplement 19 en tournant la vanne 6 de sorte que le fluide hydraulique pénètre cette fois dans la chambre 17, de sorte à refouler le fluide de la chambre 16 vers le réservoir. Le piston 11 reste en place par l'effet des forces de friction qui s'exercent au niveau des parois de la colonne 10. On pourrait cependant aussi utiliser un système de verrouillage mécanique, si on le souhaite. Une fois le lit chromatographique en place, on peut détacher la colonne pour son utilisation en chromatographie en mode non-DAC ou la conserver sur le système de compression pour une utilisation en DAC. Pour une utilisation non-DAC, on enlève le collier de serrage 21b. La colonne avec le piston bloqué par friction et contenant le lit chromatographique comprimé peut être utilisée telle quelle pour les opérations de chromatographie. En utilisation DAC, dans la colonne, le lit est maintenu entre le piston et la bride. Du fait du piston présent dans la colonne, l'avantage est qu'un seul piston est utilisé à la fois pour placer le lit chromatographique puis pour ajuster la pression du lit lors d'une opération de séparation par chromatographie.
Cependant, on préfère dans l'invention, comme illustré à la figure 2a ou 2b, placer un ensemble tige filetée 24 et bride taraudée 25 recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston 1 1. La bride taraudée reçoit la tige filetée 24, qui vient au contact du piston 1 1. La bride taraudée 25 est solidarisée à la colonne par l'intermédiaire d'une bride de la colonne et d'un collier de serrage 2 Id. Ainsi, selon un mode de réalisation de l'invention, le même système d'attache par des colliers de serrage est utilisé pour toutes les étapes d'utilisation du dispositif selon l'invention. Dans d'autres modes de réalisation, on peut utiliser d'autres systèmes d'attache, comme par exemple l'accouplement par emboîtement, rotation et blocage, etc .. Une clé peut être utilisée pour compenser l'éventuelle chute de pression avec le temps au cours des opérations de chromatographie. L'utilisation d'un levier ou d'une clé dynamométrique permet de doser le serrage en fonction des caractéristiques du lit. Le dispositif anti-rotation permet de réduire l'entraînement par rotation du piston. Un ressort, par exemple du type rondelle Belleville 22 (fig. 2b) peut être disposé entre le piston 1 1 et la tige filetée 24, de sorte à compenser une éventuelle chute de pression avec le temps au cours des opérations de chromatographie.
L'utilisation d'un réservoir amovible intermédiaire 9 permet d'éviter le recours à des colonnes très longues (comme notamment dans le cas Modcol). Des colonnes de chromatographies plus courtes et donc moins lourdes sont plus facilement manipulables. Le réservoir pouvant être disponible en plusieurs longueurs, on obtient une plus grande flexibilité. Les coûts d'investissement sont aussi réduits. Le réservoir intermédiaire 9 qui est déconnecté lors de l'utilisation de la colonne 10 permet donc une colonne plus courte. La colonne dans l'invention est unitaire, à savoir elle comprend un cylindre unique dans lequel coulisse le piston et dans lequel se trouve le lit chromatographique; il n'y a pas d'éléments montés successivement les uns sur les autres.
La colonne 10 et le réservoir amovible intermédiaire 9 sont avantageusement en métal inoxydable, acier inox et les joints en PTFE, de sorte que les parties du dispositif en contact avec les solvants ou les produits sont stables chimiquement et sont bien compatibles avec les exigences en matière réglementaire notamment pour la pharmacie. Par ailleurs, les diamètres internes peuvent typiquement varier de 20 à 200 millimètres, pour des longueurs de colonne de 50 à 600 millimètres, et des longueurs de réservoir de 100 à 600 millimètres Les dispositifs selon l'invention utilisant des colonnes de plus grands diamètres intégreront de préférence des moyens d'assistance à la manutention. L'utilisation préférée d'attache par colliers de serrage est très aisée et très rapide.
En outre, les risques associés à un vissage dans les brides de l'art antérieur (Merck ou Modcol) sont évités.
L'utilisation d'un traitement de surface permettant d'éviter le grippage au niveau de la tige filetée et du taraud et évite les risques de blocage. L'utilisation conjointe de l'ensemble anti-rotation permet de limiter l'entraînement du piston par rotation et donc de contrôler la pression exercée sur le lit compressé par le couple à exercer sur la tige filetée.
On peut bien entendu utiliser d'autres systèmes de compression que ceux décrits ci-dessus à titre non-limitatif. On peut par exemple utiliser une pompe électrique au lieu de Ia pompe hydropneumatique 2. De même, on peut utiliser un vérin non pas hydraulique mais électrique dans l'embase 8. Les variantes mécaniques sont accessibles à l'homme du métier.
L'invention offre par ailleurs un avantage par le contrôle de la pression exercée sur le lit en fonction du couple de serrage par l'écrou de serrage 26 situé à la base de la tige filetée 24. Le fait d'utiliser un revêtement évitant le grippage permet de maîtriser la pression exercée par le système de vis, avantageusement de façon linéaire. On peut ainsi recomprimer manuellement la colonne si besoin, en serrant la tige filetée. Cette caractéristique technique est en outre indépendante du système général de l'invention et trouvera à s'appliquer, éventuellement, à tout type de colonne. On peut également utiliser un usinage externe en 6 pans au niveau de la vis pour le serrage du piston sur le lit. On peut également installer une rondelle anti-rotation entre le piston et la tige en complément du vérin. Selon un mode de réalisation (figure 3a), l'extrémité de la tige filetée de piston 24 est usinée en forme d'écrou de serrage 26 (préalablement décrit en relation avec la figure 2a) de manière à recevoir une clé ; cette clé peut être utilisée pour resserrer manuellement le piston afin de compenser l'éventuelle chute de compression avec le temps au cours des opérations de chromatographie ; en outre, l'utilisation d'une clé dynamométrique permet de doser le serrage en fonction des caractéristiques du lit. On peut préférer à ce mode de réalisation (figure 3b) un écrou fou à collerette, usiné en forme d'écrou de serrage 27 et inséré entre la bride taraudée 25 et la colonne de chromatographie 10 ; cet écrou glisse sur la base de la bride taraudée 25 (l'écrou est mobile en rotation par rapport à la bride) et entraîne le piston lors du resserrage ; cet écrou peut être préférablement en bronze ou en acier, éventuellement revêtu d'un matériau anti-grippage.
L'avantage de l'écrou 26 ou 27 est qu'il permet de comprimer à nouveau le lit à volonté, et ceci à tout moment ; en particulier, l'écrou 26, 27 permet de comprimer à nouveau le lit lors d'une étape de séparation par chromatographie.
Selon un mode de réalisation, un ensemble de rondelles ou un plateau anti- rotation 28 peut être placé entre le piston de la colonne 11 et la tige filetée de piston 24 afin de favoriser le déplacement axial du lit lors du resserrage, et également afin de mieux conserver une relation quasi-linéaire entre le couple de serrage à exercer sur l'écrou de serrage et la pression résultante exercée sur le lit comprimé. Globalement, le dispositif selon l'invention s'utilise comme suit. - Une fois la colonne 10 et le réservoir amovible intermédiaire 9 en place, la suspension peut être versée.
L'extrémité supérieure de la colonne est fermée par une bride 15 avec une attache par collier de serrage 21a;
La pression est appliquée au vérin 14 qui la transmet au piston 11 pour comprimer le lit chromatographique. Le piston est déplacé jusque dans la colonne, le piston étant en mesure de coulisser dans la colonne. Une fois la pression de compression du lit atteinte, on relâche la pression sur le vérin 14; le piston 1 1 reste en place sous l'effet de la friction dans la colonne ou grâce à un système de verrouillage mécanique. - La colonne est déconnectée de l'ensemble en ouvrant l'attache par collier de serrage 21b.
La tige filetée 24 et la bride taraudée 25 sont alors placées sur le colonne 10 et fixées par l'intermédiaire d'une attache par collier de serrage 21 d (les attaches 21a, 21b, 21c et 21d étant avantageusement identiques) et la pression exercée sur le lit est contrôlée en fonction du couple de serrage. - La colonne 10 est alors prête pour un usage comme colonne de chromatographie. Quand on enlève la pression au niveau du piston, il peut se produire une légère expansion du lit. Une recompression du lit peut être recommandée, soit avant soit pendant les opérations de chromatographie. Il est possible de (re)comprimer le lit, notamment pour éliminer les vides et canaux pouvant se former dans le lit et/ou conserver l'efficacité de la colonne (efficacité, asymétrie, nombre de plateaux théoriques, symétrie des pics): soit par l'utilisation d'un ressort de type rondelle Belleville 22, comme indiqué supra en référence à la figure 2b; soit en utilisant la tige filetée 24 et en appliquant un couple à l'aide d'une clé qui peut s'adapter sur la tige filetée qui se termine par exemple en forme d'écrou 26; soit en replaçant la colonne sur l'embase et en recommençant un cycle de compression du lit.
Le système selon l'invention est rapide: après avoir versé la suspension homogène dans la colonne et le réservoir, la durée pour fermer le dispositif et mettre le lit en compression est de l'ordre de la minute, ce qui permet d'éviter la sédimentation de la suspension dans la colonne, néfaste à l'agencement du lit de grains lors de l'étape de compression. Ceci est également particulièrement avantageux lorsque plusieurs colonnes doivent être utilisées (SMB, Varicol®), ce qui réduit le temps de préparation du procédé de séparation. Puisque le procédé de compression est rapide, il n'est en général pas nécessaire d'agiter la suspension dans la colonne avant compression. En général il n'est plus besoin non plus de re-fluidiser la suspension dans le réservoir.
L'invention offre donc un ou plusieurs des avantages suivants:
Le dispositif utilise une colonne unitaire, c'est-à-dire qui ne nécessite pas d'être accouplée à des unités d'ajustement (à la différence donc par exemple du système Amicon).
Le dispositif est flexible et peut être utilisé en mode "DAC" en conservant la colonne montée sur le module de compression et en mode "non-DAC" selon le mode de fonctionnement décrit avec différentes longueurs de lit. - Le dispositif permet d'atteindre en mode "non-DAC" des performances qui sont proches des systèmes DAC, notamment en terme de reproductibilité. L'investissement et les coûts d'exploitation sont réduits. - Les procédures opératoires sont faciles et rapides, réduisant ainsi les risques de mauvaise manipulation.
Le volume de la colonne qui est nécessaire pour contenir le volume initial de la suspension n'est plus lié à la colonne de chromatographie mais au réservoir amovible.
Il n'y a pas besoin de monter le dispositif de compression: le dispositif hydraulique associé à l'embase est compact et prêt à l'emploi une fois que le réservoir de fluide hydraulique est rempli et l'air purgé. Le design est modulaire. Le réservoir amovible intermédiaire est placé entre l'embase et la colonne et est dédié à la suspension de départ; il est ensuite retiré de la colonne. Il peut être dimensionné en fonction du volume de suspension nécessaire et être disponible en différentes longueurs. Le système d'attache par collier de serrage élimine le besoin de vissage au niveau des brides et donc élimine les mauvaises opérations et améliore la vitesse d'assemblage.
Un revêtement anti-grippage sur la tige filetée et le taraud évite les blocages et permet de contrôler la pression exercée en fonction du couple exercée sur la tige filetée. L'invention offre la possibilité de régler Ia pression de façon linéaire en fonction du couple exercé sur le piston. - Toutes les parties du dispositif en contact avec les solvants et les produits à séparer sont en acier inox ou en PTFE, ce qui permet une compatibilité avec les solvants de chromatographie classiques. Le procédé est simple et rapide.
- Le procédé est un procédé simple pour maintenir une stabilité de lit satisfaisant au cours du temps (et donc un pouvoir de séparation de la colonne constant).
La colonne 10 est utilisable dans tous les systèmes, notamment dans un procédé de séparation par SMB, Simulated Moving Bed (US 2,985,589, US 3,291,726, US 3,268,605 et US 3,266,604 appartenant à UOP, US 5,578,215 et US 5,578,216 appartenant à IFP et NOVASEP, EP 471 082 et EP 563 388 appartenant à DAICEL) ou dans un procédé par VARICOL (US 6,136,198). De tels procédés mettent en œuvre un ensemble de ces colonnes associées en boucle. La colonne 10 peut également être utilisée dans les procédés chromatographiques batch ou CYCLOJET (US 6,063,284 et US 5,630,943). Bien que le mode de réalisation décrit soit en référence à un sens du bas vers le haut, l'invention s'applique aussi avec un sens de compression du haut vers le bas. Les éléments sont alors inversés, on fixe le réservoir en bas du système de compression, puis on fixe en dessous la colonne avec un système d'attache par collier de serrage. On remplit ensuite le réservoir et la colonne avec Ia suspension de particules et on comprime le lit. Après cette opération, on désolidarise la colonne du réservoir et on prépare la colonne comme précédemment décrit.

Claims

REVENDICATIONS
1. Dispositif de chromatographie comprenant :
- une colonne unitaire (10) destinée à recevoir un lit chromatographique, - un réservoir amovible (9) pour une suspension de lit,
- une embase (8) comprenant un vérin (14) adapté à un piston (11), ledit piston coulissant dans le réservoir amovible (9) et la colonne (10) pour comprimer la suspension de grains solides en lit chromatographique,
- les colonne (10), réservoir (9) et embase (8) étant connectées en série dans cet ordre, le piston (11) agissant pour comprimer la suspension de grains solides en lit chromatographique dans la colonne (10).
2. Dispositif selon la revendication 1, dans lequel les colonne (10), réservoir (9) et embase (8) sont connectés du haut vers le bas.
3. Dispositif selon la revendication 1 ou 2, dans lequel le piston est muni de joint de piston (12) venant en friction dans la colonne (10) et dans le réservoir (9).
4. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 3, dans lequel le piston (11) et le vérin (14) sont reliés par un cylindre d'accouplement (19) venant en appui avec le piston (1 1) de façon réversible.
5. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 4, dans lequel les colonne (10), réservoir (9) et embase (8) sont solidarisés au niveau de brides à l'aide d'attaches par colliers de serrage (21a, 21b, 21c).
6. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 5, dans lequel l'embase comprend deux chambres (16, 17) recevant un fluide hydraulique sous pression, disposées de part et d'autre de la partie inférieure (20) du vérin (14).
7. Dispositif selon l'une des revendications 1 à 6, dans lequel la colonne comprend en outre un ensemble tige filetée (24) et bride taraudée (25) recevant la tige filetée, ladite tige filetée (24) s'adaptant au piston (U), cet ensemble se substituant au réservoir (9) lors de l'utilisation de la colonne en tant que colonne de chromatographie.
8. Dispositif selon la revendication 1, dans lequel, dans l'ensemble, la tige filetée (24) est munie d'un écrou de serrage (26, 27) pour l'ajustement de la pression de compression du lit.
9. Dispositif selon la revendication 7 ou 8, dans lequel les filetages de la tige (24) et du taraud (25) sont recouverts d'un revêtement anti-grippage.
10. Dispositif selon l'une des revendications 7 à 9, dans lequel une rondelle anti-rotation (28) est placée entre le piston (11) et la tige (24).
11. Dispositif selon l'une des revendications 7 à 9, dans lequel un ressort est présent entre ladite tige filetée (24) et le piston (11).
12. Colonne (10) de chromatographie comprenant un ensemble tige filetée (24) et bride taraudée (25) recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston (1 1), cet ensemble étant fixé à la colonne par une attache par collier de serrage (2Id).
13. Colonne (10) de chromatographie selon la revendication 12, dans laquelle les filetages de la tige (24) et du taraud (25) sont recouverts d'un revêtement anti-grippage.
14. Colonne (10) de chromatographie selon la revendication 12 ou 13, dans laquelle un ressort est présent entre ladite tige filetée (24) et le piston (1 1).
15. Colonne (10) de chromatographie comprenant un ensemble tige filetée (24) et bride taraudée (25) recevant la tige filetée, ladite tige filetée s'adaptant au piston (11), cet ensemble étant fixé à la colonne, et dans lequel les filetages de la tige (24) et du taraud (25) sont recouverts d'un revêtement anti-grippage.
16. Colonne selon la revendication 15, dans laquelle un ressort est présent entre ladite tige filetée (24) et le piston (1 1).
17. Colonne selon l'une des revendications 12 à 16, dans l'ensemble, la tige est munie d'un écrou de serrage (26, 27).
18. Procédé de compression de lit chromatographique dans une colonne (10) de chromatographie, comprenant les étapes suivantes:
- fournir un dispositif selon l'une des revendications 1 à 6; - remplir ce dispositif avec une suspension de lit;
- provoquer la translation du vérin (14) et du piston (1 1) pour comprimer la suspension en un lit.
19. Procédé selon la revendication 18, comprenant en outre l'étape suivante:
- désolidarisation de la colonne (10) du réservoir (9).
20. Procédé selon la revendication 19, comprenant en outre l'étape suivante:
- association de l'ensemble tige filetée (24) et bride taraudée (25) recevant la tige filetée, ladite tige filetée (24) s'adaptant au piston (11).
21. Procédé selon la revendication 20, dans lequel, dans l'ensemble, les filetages de la tige (24) et du taraud (25) sont recouverts d'un revêtement anti-grippage.
22. Procédé selon la revendication 21, dans lequel, dans l'ensemble, la tige est munie d'un écrou de serrage (26, 27).
23. Procédé selon l'une des revendications 20 à 22, dans lequel, dans l'ensemble, un ressort est présent entre ladite tige filetée (24) et le piston (1 1).
24. Procédé selon l'une des revendications 19 à 23, comprenant en outre l'étape de recompression par serrage serrant la tige filetée (24).
25. Procédé selon la revendication 24, dans lequel la pression exercée sur le lit comprimé est contrôlée par le couple de serrage appliqué sur l'écrou.
26. Procédé de séparation d'au moins deux composés d'un fluide à chromatographier comprenant la chromatographie dudit fluide dans la colonne selon l'une des revendications 12 à 17.
27. Procédé de séparation d'au moins deux composés d'un fluide à chromatographier comprenant les étapes de compression de lit selon l'une des revendications 18 à 25, et l'écoulement du fluide à chromatographier à travers le lit et sa collecte.
PCT/FR2007/000376 2006-03-03 2007-03-02 Dispositif de chromatographie modulaire WO2007099237A2 (fr)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP07731075A EP1994404A2 (fr) 2006-03-03 2007-03-02 Dispositif de chromatographie modulaire
US12/280,914 US20100163490A1 (en) 2006-03-03 2007-03-02 Modular chromatography device

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR0601907 2006-03-03
FR0601907A FR2898064A1 (fr) 2006-03-03 2006-03-03 Dispositif de chromatographie modulaire

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2007099237A2 true WO2007099237A2 (fr) 2007-09-07
WO2007099237A3 WO2007099237A3 (fr) 2008-02-21

Family

ID=37081539

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/FR2007/000376 WO2007099237A2 (fr) 2006-03-03 2007-03-02 Dispositif de chromatographie modulaire

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20100163490A1 (fr)
EP (1) EP1994404A2 (fr)
CN (1) CN101395468A (fr)
FR (1) FR2898064A1 (fr)
WO (1) WO2007099237A2 (fr)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2529215A1 (fr) * 2010-01-28 2012-12-05 GE Healthcare Bio-Sciences AB Colonne pour chromatographie en phase liquide
US11841350B2 (en) 2021-03-16 2023-12-12 Bio-Rad Laboratories, Inc. Dynamic axial compression for preparative columns using external compression

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8066876B2 (en) 2009-11-23 2011-11-29 Agilent Technologies, Inc. Apparatus and methods for packing chromatography columns
PE20130491A1 (es) 2009-12-30 2013-05-02 Basf Pharma Callanish Ltd Proceso simulado de separacion cromatografica de lecho movil para la purificacion de acidos grasos poliinsaturados
AU2011296528B2 (en) * 2010-07-07 2015-08-06 Ironstone Separations, Inc. Chromatography methods
JP6031098B2 (ja) * 2011-06-17 2016-11-24 ウオーターズ・テクノロジーズ・コーポレイシヨン 超臨界流体クロマトグラフィー用の開放型常圧回収のための方法および装置
GB201111591D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd Further new process
GB201111601D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New process
GB201111589D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New modified process
GB201111595D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd Improved process
GB201111594D0 (en) 2011-07-06 2011-08-24 Equateq Ltd New improved process
GB201300354D0 (en) 2013-01-09 2013-02-20 Basf Pharma Callanish Ltd Multi-step separation process
US8802880B1 (en) 2013-05-07 2014-08-12 Group Novasep Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids
US9428711B2 (en) 2013-05-07 2016-08-30 Groupe Novasep Chromatographic process for the production of highly purified polyunsaturated fatty acids
EP2883860B1 (fr) 2013-12-11 2016-08-24 Novasep Process Procédé chromatographique de production d'acides gras polyinsaturés
US10975031B2 (en) 2014-01-07 2021-04-13 Novasep Process Method for purifying aromatic amino acids
CN105353060B (zh) * 2015-12-16 2017-08-04 常州东曦自动化科技有限公司 全自动液相色谱装柱机
US10935524B2 (en) 2017-07-27 2021-03-02 CEM Corporation, Lucidity Division Gas chromatograph device with inductively heated column and method of use thereof
DE202018001788U1 (de) * 2018-04-09 2018-05-18 Dr. Albin Maisch High Performance LC GmbH LC - Säule mit Dynamisch- Axialer- Kompression (DAC)
US11745119B2 (en) 2018-04-16 2023-09-05 Asahi Kasei Bioprocess America, Inc. Chromatography and synthesis column apparatus and method of assembly

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2219797A1 (fr) * 1973-03-01 1974-09-27 Roussel Uclaf
US4195517A (en) * 1978-12-18 1980-04-01 The Foxboro Company Ultrasonic flowmeter
EP0255049A2 (fr) * 1986-07-25 1988-02-03 Tosoh Corporation Equipement de filtration du type de remplissage à haute densité
FR2710716A1 (fr) * 1993-09-28 1995-04-07 Framatome Sa Collier de serrage de deux pièces tubulaires ayant un dispositif de blocage de sécurité et utilisation.
US6001260A (en) * 1996-02-29 1999-12-14 Varian Associates, Inc. Collapsible apparatus for compressing packing material in liquid chromatography columns and methods of use
FR2823134A1 (fr) * 2001-04-10 2002-10-11 Novasep Dispositif de protection du lit chromatographique dans les colonnes chromatographiques a compression axiale dynamique
US20020174912A1 (en) * 2001-04-18 2002-11-28 Barry Wixey Portable Power Planer
US20040256236A1 (en) * 2003-04-11 2004-12-23 Zoran Minevski Compositions and coatings including quasicrystals

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0736011B2 (ja) * 1986-11-27 1995-04-19 昭和電工株式会社 液体クロマトグラフ用カラムの製造方法
JPS63135856A (ja) * 1986-11-28 1988-06-08 Kurita Water Ind Ltd クロマトグラフイ−装置
JPH01197651A (ja) * 1988-02-03 1989-08-09 Kurita Water Ind Ltd 排液路付ピストンを有するクロマトグラフィー装置
JPH02134562A (ja) * 1988-11-15 1990-05-23 Showa Denko Kk 液体クロマトグラフ用分離カラムの製造方法

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2219797A1 (fr) * 1973-03-01 1974-09-27 Roussel Uclaf
US4195517A (en) * 1978-12-18 1980-04-01 The Foxboro Company Ultrasonic flowmeter
EP0255049A2 (fr) * 1986-07-25 1988-02-03 Tosoh Corporation Equipement de filtration du type de remplissage à haute densité
FR2710716A1 (fr) * 1993-09-28 1995-04-07 Framatome Sa Collier de serrage de deux pièces tubulaires ayant un dispositif de blocage de sécurité et utilisation.
US6001260A (en) * 1996-02-29 1999-12-14 Varian Associates, Inc. Collapsible apparatus for compressing packing material in liquid chromatography columns and methods of use
FR2823134A1 (fr) * 2001-04-10 2002-10-11 Novasep Dispositif de protection du lit chromatographique dans les colonnes chromatographiques a compression axiale dynamique
US20020174912A1 (en) * 2001-04-18 2002-11-28 Barry Wixey Portable Power Planer
US20040256236A1 (en) * 2003-04-11 2004-12-23 Zoran Minevski Compositions and coatings including quasicrystals

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE WPI Week 198828 Derwent Publications Ltd., London, GB; AN 1988-195634 XP002462106 & JP 63 134952 A (SHOWA DENKO KK) 7 juin 1988 (1988-06-07) *
DATABASE WPI Week 198829 Derwent Publications Ltd., London, GB; AN 1988-200249 XP002445507 -& JP 63 135856 A (KURITA WATER IND LTD) 8 juin 1988 (1988-06-08) *
DATABASE WPI Week 1989 Derwent Publications Ltd., London, GB; AN 1989-273487 XP002403554 KANAMORI S; KITAZAWA A: "Chromatography appts. having piston with liq. discharge passage - has ring-shaped seals around piston and liq. discharge passage between seals" -& JP 01 197651 A (KURITA WATER) 9 août 1989 (1989-08-09) *
DATABASE WPI Week 199027 Derwent Publications Ltd., London, GB; AN 1990-204516 XP002403553 -& JP 02 134562 A (SHOWA DENKO KK) 23 mai 1990 (1990-05-23) *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2529215A1 (fr) * 2010-01-28 2012-12-05 GE Healthcare Bio-Sciences AB Colonne pour chromatographie en phase liquide
EP2529215A4 (fr) * 2010-01-28 2014-04-02 Ge Healthcare Bio Sciences Ab Colonne pour chromatographie en phase liquide
US11841350B2 (en) 2021-03-16 2023-12-12 Bio-Rad Laboratories, Inc. Dynamic axial compression for preparative columns using external compression

Also Published As

Publication number Publication date
FR2898064A1 (fr) 2007-09-07
CN101395468A (zh) 2009-03-25
EP1994404A2 (fr) 2008-11-26
US20100163490A1 (en) 2010-07-01
WO2007099237A3 (fr) 2008-02-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2007099237A2 (fr) Dispositif de chromatographie modulaire
EP0106746B1 (fr) Dispositif de remplissage de colonnes chromatographiques
EP0145578B1 (fr) Perfectionnements aux appareils de chromatographie
EP1625093B1 (fr) Procede de vidange d'un conteneur souple renfermant un produit visqueux
US20180078877A1 (en) Hplc column
EP0271378B1 (fr) Appareil de chromatographie en phase liquide
FR2680115A1 (fr) Appareil et procede de chargement et de dechargement d'un lit de colonne de chromatographie.
EP1379867A1 (fr) Dispositif de protection du lit chromatographique dans les colonnes chromatographique a compression axiale dynamique
WO2012059691A1 (fr) Tête de distribution de produit fluide et distributeur comprenant une telle tète de distribution
FR2754307A1 (fr) Procede et dispositif de prelevement et de stockage d'un echantillon d'hydrocarbure
WO2020099732A1 (fr) Plateforme adaptative amovible de fabrication additive pour un équipement de fabrication additive métallique par fusion laser
FR2851241A1 (fr) Procede de vidange d'un conteneur souple renfermant un produit visqueux
FR2949221A1 (fr) Support basculant pour reservoir
WO2009133253A1 (fr) Dispositif perfectionne de separation en lit mobile simule
WO2005089587A1 (fr) Procede de conditionnement d'un produit liquide et plus plarticulierement d’un produit cosmetique
FR2822394A1 (fr) Ensemble de filtrage pourvu de moyens facilitant le remplacement de la cartouche de filtration
FR2741293A1 (fr) Egouttoir-pressoir a chambres multiples et a axes de pressage decales angulairement
FR2573532A2 (fr) Perfectionnements aux appareils de chromatographie.
WO2013038069A1 (fr) Dispositif de réduction du frottement entre des plaques d'étanchéité d'unités de filtration et son utilisation dans un procède de filtration
EP4448189A1 (fr) Procédé et système de recharge en liquide d'un flacon
FR3027529A1 (fr) Dispositif de filtration d'huile de laminage
FR3048036B1 (fr) Compacteur a verin hydraulique et procede de reduction du volume des dechets
EP3122464A1 (fr) Machine centrifugeuse a système d'evacuation perfectionne
BE402908A (fr)
WO2023218141A1 (fr) Distributeur de produit fluide

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 2007731075

Country of ref document: EP

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 12280914

Country of ref document: US

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 200780007679.5

Country of ref document: CN

Ref document number: 1896/MUMNP/2008

Country of ref document: IN

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE