WO2007077911A1 - 組織標本のパラフィン浸透処理方法及びその処理装置 - Google Patents

組織標本のパラフィン浸透処理方法及びその処理装置 Download PDF

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tissue
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molten
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Inventor
Akira Yanagimachi
Original Assignee
Sakura Seiki Co., Ltd
Sakura Finetek Japan Co., Ltd.
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    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
    • G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
    • G01N1/36—Embedding or analogous mounting of samples

Definitions

  • the present invention relates to a paraffin permeation treatment method for a tissue specimen and a processing apparatus therefor, and more specifically, a tissue specimen that has been subjected to dehydration and degreasing treatment is immersed in a paraffin melt, and paraffin is added to the tissue specimen.
  • the present invention relates to a paraffin infiltration processing method and a processing apparatus for a tissue specimen to be infiltrated.
  • the tissue specimen that has been subjected to paraffin permeation treatment is subjected to paraffin embedding treatment in the molten state with the molten paraffin permeated into the tissue.
  • Patent Document 1 JP 2001-133371 A
  • the tissue specimen is sliced into slices when the tissue specimen embedded in the nophine is sliced. It can be sliced smoothly, and the obtained flakes are free from cracks and can be sufficiently used for microscopic observation.
  • tissue specimens such as skin and sciatic nerve may not be able to sufficiently penetrate paraffin into the tissue of the tissue specimen by conventional paraffin infiltration treatment.
  • tissue specimens such as skin and sciatic nerve may not be able to sufficiently penetrate paraffin into the tissue of the tissue specimen by conventional paraffin infiltration treatment.
  • it is difficult to slice the tissue specimen embedded in paraffin, and many cracks are generated in the obtained slice. For this reason, such flakes Is not suitable for microscopic observation.
  • the problem of the present invention is that the conventional paraffin infiltration method is difficult to sufficiently infiltrate paraffin into the tissue of the tissue specimen, and the tissue specimen can be sufficiently infiltrated with paraffin. It is to provide the processing apparatus.
  • the present inventors cooled a tissue specimen that had been immersed in a paraffin melt and infiltrated with molten paraffin, solidified the infiltrated molten paraffin, and then melted the tissue specimen with paraffin.
  • the solidification / remelting process is performed at least once on the tissue specimen infiltrated with the molten paraffin.
  • the present inventors have found that even a tissue specimen that does not sufficiently permeate paraffin can be sufficiently permeated with paraffin.
  • a tissue specimen that has been subjected to dehydration and degreasing treatment is immersed in a paraffin melt, and when the paraffin is infiltrated into the tissue specimen, the tissue specimen is immersed in a paraffin melt. After infiltrating the molten paraffin into the tissue of the tissue specimen, the tissue specimen is cooled to solidify the infiltrated molten paraffin, and then the tissue specimen is re-immersed in the paraffin melt, In the method of paraffin infiltration of a tissue specimen, the solidification paraffin re-melting process is performed at least once on the same tissue specimen.
  • the present invention also relates to a paraffin infiltration processing apparatus for immersing a tissue specimen subjected to dehydration and degreasing treatment in a paraffin melt, and infiltrating the paraffin into the tissue specimen, wherein the tissue specimen is converted into a paraffin melt.
  • An infiltration treatment means for immersing and infiltrating the molten paraffin into the tissue of the tissue specimen; and a cooling and solidification treatment means for cooling and solidifying the molten paraffin infiltrated into the tissue specimen by the infiltration treatment means. Then, the tissue sample is immersed in the paraffin melt and cooled to cool the tissue specimen, and the solidified paraffin that has penetrated into the tissue specimen is solidified.
  • control and said penetration processing unit and the cooling solidification means It is also a paraffin permeation processing apparatus for tissue specimens characterized in that a control unit for controlling is provided.
  • the cooling and solidifying treatment of the molten paraffin permeating into the tissue specimen is performed in a state where the tissue specimen is separated from the paraffin melt, whereby the cooling and solidifying speed of the tissue specimen can be improved.
  • the tissue specimen obtained by paraffin embedding treatment is embedded in paraffin and sliced. It is possible to obtain a thin slice suitable for microscopic observation.
  • a tissue specimen that has completed the norafin infiltration treatment step is embedded in paraffin. It does not include the process of the embedding process that creates the block.
  • tissue specimens processed by the paraffin penetration method of conventional tissue specimens that have been subjected only to the penetration of molten paraffin on tissue specimens were embedded in paraffin and blocked. It was extremely difficult to slice tissue specimens, and the slices obtained by slicing were too powerful for microscopic observation.
  • the tissue sample after paraffin permeation treatment can be sliced after embedding in paraffin, and the obtained slice can be used for microscopic observation. .
  • the detailed reason why the tissue specimen processed by the present invention can be sliced after embedding with paraffin even if it is difficult to slice after embedding of norafine is unknown.
  • tissue specimens such as skin and sciatic nerve
  • the degreasing treatment employed in the paraffin permeation treatment method for normal tissue specimens with high fat content was not enough for degreasing. This is because tissue samples obtained by applying a conventional paraffin infiltration method after thinning a tissue sample such as skin or sciatic nerve for a long time in advance can be sliced.
  • the tissue specimen in which the molten paraffin has been immersed in the nophine melt is cooled and the infiltrated molten paraffin is solidified, and then the tissue specimen is solidified. Is re-immersed in a paraffin melt to penetrate into the tissue specimen and re-melt the solidified paraffin.
  • the paraffin that has penetrated into the tissue specimen is solidified and re-melted at least once on the tissue specimen, so that the paraffin that has penetrated into the cells of the tissue specimen changes from a solidified state to a molten state. Change.
  • the volume of paraffin in the cell changes from the contracted state to the expanded state, the fat remaining in the cell can be discharged out of the cell, and the inside of the cell can be sufficiently substituted with paraffin.
  • the cells of the tissue specimen obtained by the treatment according to the present invention were sufficiently replaced with norafine, and even tissue specimens such as fatty skin and sciatic nerve were embedded with paraffin.
  • the tissue specimen can be sliced, and the obtained flakes are in good condition.
  • the processing efficiency of the tissue specimen can be improved.
  • FIG. 1 is an explanatory diagram for explaining an example of a tissue specimen paraffin permeation treatment apparatus according to the present invention.
  • FIG. 1 An example of a paraffin infiltration processing apparatus according to the present invention is shown in FIG.
  • the paraffin infiltration processing apparatus shown in FIG. 1 is a one-tank processing apparatus provided with one sealed processing tank 10 with a jacket 26 provided on the peripheral surface.
  • a basket 12 in which a tissue specimen is stored is inserted into the powerful processing tank 10.
  • ethanol-xylene for processing tissue specimens stored in the basket 12 inserted into the processing tank 10 is stored in a plurality of chemical tanks 16, 16.
  • the paraffin melt with a freezing point near 60 ° C is stored in chemical tanks 18 and 18 with heaters.
  • the power tank 16, 16, and the chemical tanks 18 and 18 with heaters connected to one end are connected to the selection valve 20. Connected by pipe 24.
  • This selection valve 20 has a plurality of chemical tank ports And a valve plate 20b on which a treatment tank side port is formed. The corresponding other ends of the pipes 22, 22... Are connected to the chemical solution tank side ports of the valve seat 20a.
  • the tank in which the desired chemical solution is stored and the processing tank 10 can be connected by the selection valve 20 and the desired chemical solution can be supplied to the processing tank 10.
  • the processing tank 10 and the tank from which the chemical solution should be discharged are selected by the selection valve 20, and the chemical solution in the processing tank 10 is discharged.
  • the jacket 26 provided on the side surface of the treatment tank 10 can be supplied with refrigerant via the solenoid valve 32a of the pipe 30a, and the refrigerant supplied to the jacket 26 can be supplied via the solenoid valve 32b of the pipe 30b. Can be discharged.
  • the heat medium can be supplied to the jacket 26 of the treatment tank 10 via the solenoid valve 28a of the pipe 26a, and the heat medium supplied to the jacket 26 can be discharged via the solenoid valve 28b of the pipe 26b. .
  • the supply and discharge of the heat medium and refrigerant to the jacket 26 are controlled and processed.
  • the inside of the tank 10 can be controlled to a desired temperature.
  • paraffin infiltration processing is performed on tissue specimens collected from human body force.
  • Ethanol is stored in a plurality of chemical liquid tanks 16, 16... Provided in the paraffin infiltration processing apparatus.
  • a part of the plurality of chemical tanks 16, 16... Storing the ethanol may be an ethanol series in which the water content gradually decreases.
  • the remaining chemical tanks 16, 16 ⁇ of the chemical tanks 16, 16 ⁇ which store ethanol store ethanol with a water content of substantially zero.
  • the xylene is stored in the remaining tanks except for the chemical tanks 16, 16 ... which have stored ethanol.
  • the paraffin melt is stored in the chemical tanks 18, 18, etc. with heaters provided separately from the chemical tanks 16, 16,.
  • the collected tissue specimen is preliminarily immersed and fixed in formalin, then stored in the basket 12, inserted into the treatment tank 10, and subjected to dehydration and degreasing under normal treatment conditions. At this time, the solenoid valves 28a, 28b, 32a, 32b are closed, and neither the heat medium nor the refrigerant is supplied to the jacket. Absent.
  • ethanol is sent from the first chemical tank 16 selected among the chemical tanks 16, 16 After holding and discharging, ethanol is sent from the next selected chemical tank 16 to the treatment tank 10. In this way, the chemical solution tanks 16, 16,..., Which store ethanol are also sent to the treatment tank 10 in the desired order, and the water in the tissue specimen is replaced with ethanol.
  • the tissue sample in the treatment tank 10 after the ethanol treatment is completed the first selected one of the chemical tanks 16, 16 ′ in which xylene is stored by the signal to the selection valve 20 from the control unit.
  • xylene is fed from the chemical tank 16 to the treatment tank 10, held for a predetermined time and discharged, xylene is fed from the next selected chemical tank 16 to the treatment tank 10.
  • xylene is fed from the chemical tanks 16, 16... Storing xylene to the treatment tank 10 in a desired order, and ethanol in the tissue specimen is replaced with xylene.
  • the tissue specimen in the treatment tank 10 that has been treated with xylene is selected from the heated chemical liquid tanks 18 and 18 in which the norafin melt is stored by a signal to the selection valve 20 from the control unit.
  • the paraffin melt is supplied from the first heated chemical tank 18 to the processing tank 10 and held and discharged for a predetermined time, the paraffin melt is sent from the next selected chemical tank 18 with heater to the processing tank 10. Replace xylene in the tissue specimen with paraffin melt.
  • the inside of the processing tank 10 is maintained at a temperature equal to or higher than the solidification temperature of paraffin. For this reason, the solenoid valves 28a and 28b may be opened by a signal from the control unit to supply the heat medium to the jacket.
  • the tissue specimen in the processing tank 10 is replaced with molten paraffin, and the solenoid valve 28a, 28b is closed by a signal from the control unit in the jacket 26 of the processing tank 10 from which the norafin melt is discharged.
  • the solenoid valves 32a and 32b are opened to supply the refrigerant, and the treatment tank 10 is cooled. By vigorous cooling of the treatment tank 10, the molten paraffin in the tissue specimen solidifies.
  • the solenoid valve 32a, 32b is applied to the jacket 26 of the treatment tank 10 by a signal from the control unit. Is closed and the solenoid valves 28a and 28b are opened to supply the heat medium to heat the treatment tank 10 and the last selected chemical tank with heater from among the paraffin melts stored in the chemical tanks 18 and 18 with heater. Resend the paraffin melt from 18 to the treatment tank 10 and remelt the paraffin solidified in the tissue specimen.
  • the tissue specimen that has completed the paraffin infiltration process can be easily embedded by paraffin embedding by solidifying and remelting the paraffin that has penetrated the tissue specimen at least once by cooling the powerful processing tank 10 and supplying molten paraffin.
  • the resulting flakes are also good for microscopic observation.
  • tissue specimens such as strong skin and sciatic nerve, it is difficult to obtain good flakes even if sliced tissue specimens obtained by applying norafin permeation treatment.
  • paraffin-treated tissue specimens can be easily sliced by solidifying and re-melting paraffin that has penetrated tissue specimens as in the present invention is that paraffin has a volume when solidified. Shrinks and melts to expand its volume. For this reason, by solidifying molten paraffin that has penetrated into the cell and then re-melting it, fat remaining in the cell can be discharged out of the cell, and the inside of the cell can be sufficiently substituted with paraffin. It is thought that it is from.
  • the molten paraffin that has penetrated into the tissue specimen is cooled and solidified in a state where the tissue specimen is immersed in the paraffin melt, but the tissue specimen is separated and separated from the paraffin melt.
  • the cooling and solidification speed of the can be improved.
  • cooling and solidification is further performed at an ambient temperature of room temperature or lower, particularly 0 ° C or lower (particularly preferably 0 to 15 ° C), thereby further promoting nophine penetration.
  • room temperature or lower particularly 0 ° C or lower (particularly preferably 0 to 15 ° C)
  • the tissue specimen can be sliced easily, and a good slice suitable for microscopic observation can be obtained.
  • the solid re-melting of paraffin that has penetrated into the tissue specimen may be performed once, but it is preferable to repeat it twice or more for the same tissue specimen when the paraffin is difficult to penetrate.
  • the permeation effect of paraffin increases, but the effect that can be achieved reaches saturation. For this reason, it is preferable to experimentally obtain in advance the number of repetitions of solidification / remelting of paraffin permeating the tissue specimen, which is performed on the tissue specimen used for microscopic observation.
  • a tissue specimen that has been infiltrated with norafin is taken out of the treatment tank 10, embedded in paraffin, and then sliced with a microtome to obtain a slice for microscopic observation.
  • the processing temperature and the processing pressure that accelerate the processing speed may be changed, or liquid agitation may be performed.
  • the paraffin infiltration processing method using a single tank processing apparatus has been described.
  • a plurality of chemical liquid tanks and a heated chemical liquid tank are arranged, and a basket containing a tissue specimen is stored in the chemical liquid tank and the heated chemical liquid solution. Soak the tissue specimen in a paraffin infiltration in each tank for a certain period of time.
  • the collected human skin was used as a tissue specimen and immersed in formalin for fixation.
  • This tissue sample was treated under the conditions shown in Table 1 in a tank in which chemical solutions shown in Table 1 below were stored.
  • Table 1 shows the pressure in the pressurized state and the pressure in the reduced pressure state.
  • the tissue specimen in which the infiltrated paraffin is solidified is re-immersed in the baraffin melt maintained at 63 ° C. to remelt the infiltrated paraffin. Furthermore, hold the tissue specimen infiltrated with the remelted paraffin again in a ⁇ 5 ° C atmosphere for 10 minutes to resolidify the remelted paraffin.
  • the block obtained by embedding the obtained tissue specimen in paraffin was sliced by a microtome to obtain a thin piece having a thickness of 3 ⁇ m.
  • Example 2 In Example 1, except that the temperature of the cooling atmosphere was set to room temperature (25 ° C), a paraffin infiltration treatment was performed in the same manner as in Example 1, and then the obtained tissue specimen was embedded in paraffin. The block was sliced with a microtome.
  • Example 2 In this thin cutting, the ease of cutting was reduced as compared with Example 1, but a thin piece having a thickness could be obtained.
  • Example 1 except that sciatic nerve collected from a human body was used as a tissue sample, paraffin infiltration treatment was performed in the same manner as in Example 1, and the obtained tissue sample was embedded in paraffin. The obtained block was sliced with a microtome.
  • Example 2 In this thin cutting, the ease of cutting was reduced as compared with Example 1, but a thin piece having a thickness could be obtained.
  • Example 1 was the same as Example 1 except that it penetrated into the tissue specimen and was not subjected to solidification / remelting of paraffin (only performed up to processing step 14 in Table 1). After performing the paraffin infiltration treatment, an attempt was made to slice a block obtained by embedding the obtained tissue specimen in paraffin with a microtome.
  • microtome could hardly be sliced, and the obtained flakes also had many tears at the tissue or tissue-paraffin boundary, and could not be used for microscopic observation.
  • Comparative Example 1 except that the sciatic nerve from which human strength was also collected was used as a tissue sample, after performing paraffin infiltration treatment as in Comparative Example 1, the obtained tissue sample was embedded in paraffin. The obtained block was sliced with a microtome.

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Abstract

  　従来のパラフィン浸透処理方法では、組織標本内にパラフィンを充分に浸透し難い組織標本でも、充分にパラフィンを浸透し得る組織標本のパラフィン浸透処理方法を提供する。 　脱水及び脱脂処理が施された組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織標本内にパラフィンを浸透処理する際に、該組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織標本の組織内に溶融パラフィンを浸透した後、前記組織標本を冷却して浸透した溶融パラフィンを固化し、次いで、前記組織標本をパラフィン溶融液に再浸漬して、組織標本の内部に浸透している固化パラフィンを再溶融する固化・再溶融処理を、同一組織標本に対して少なくとも一回施すことを特徴とする。

Description

明 細 書
組織標本のパラフィン浸透処理方法及びその処理装置
技術分野
[0001] 本発明は組織標本のパラフィン浸透処理方法及びその処理装置に関し、更に詳細 には脱水及び脱脂処理が施された組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組 織標本内にパラフィンを浸透する組織標本のパラフィン浸透処理方法及びその処理 装置に関する。
背景技術
[0002] 病理検査等において顕微鏡観察に供する組織標本を作製する際には、例えば下 記特許文献 1にも記載されて ヽる様に、人体等力 採取した組織標本をホルマリンに 浸漬して固定した後、脱水、脱脂、ノ《ラフィン浸透の各処理を施し、次いで、ノラフィ ンが浸透された組織標本をパラフィン内に包埋するパラフィン包埋処理 (ブロック化） を施す。その後、ノ ラフィン内に包埋されている組織標本を薄切して得た薄片に、所 望の染色等を施して顕微鏡観察に供す。
この一連の組織標本の作製工程にぉ ヽて、パラフィン浸透処理を施した組織標本 は、その組織内に浸透した溶融パラフィンが溶融状態でパラフィン包埋処理に付せ られる。
特許文献 1 :特開 2001— 133371号公報
発明の開示
[0003] 力かる一連の処理において、組織標本の組織内に充分にパラフィンが浸透してい る場合、ノ フィンに包埋されている組織標本を薄切して薄片とする際に、組織標本 をスムーズに薄切でき、得られた薄片にも割れ等が存在せず、顕微鏡観察に充分に 供することができる。
し力しながら、皮膚や坐骨神経等の組織標本は、従来のパラフィン浸透処理では、 組織標本の組織内にパラフィンが充分に浸透し難い場合がある。この様に、ノラフィ ンの浸透が不充分な組織標本では、パラフィンに包埋されて 、る組織標本の薄切は 困難であり、且つ得られた薄片にも割れが多く発生している。このため、かかる薄片 は顕微鏡観察には供し得な ヽものである。
そこで、本発明の課題は、従来のパラフィン浸透処理方法では、組織標本の組織 内にパラフィンを充分に浸透し難 、組織標本でも、充分にパラフィンを浸透し得る組 織標本のパラフィン浸透処理方法及びその処理装置を提供することにある。
本発明者等は、前記課題を解決すべく検討した結果、パラフィン溶融液に浸漬して 溶融パラフィンを浸透した組織標本を冷却して、浸透した溶融パラフィンを固化した 後、その組織標本をパラフィン溶融液に再浸漬して、浸透した固化パラフィンを再溶 融する固化 ·再溶融処理を、溶融パラフィンを浸透した組織標本に少なくとも一回施 すことによって、従来のパラフィン浸透処理方法では、組織内にパラフィンを充分に 浸透し難い組織標本でも、充分にパラフィンを浸透し得ることを見出し、本発明に到 達した。
すなわち、本発明は、脱水及び脱脂処理が施された組織標本をパラフィン溶融液 に浸漬して、前記組織標本内にパラフィンを浸透処理する際に、該組織標本をパラ フィン溶融液に浸漬して、前記組織標本の組織内に溶融パラフィンを浸透した後、前 記組織標本を冷却して浸透した溶融パラフィンを固化し、次いで、前記組織標本を パラフィン溶融液に再浸漬して、組織標本の内部に浸透して 、る固化パラフィンを再 溶融する固化'再溶融処理を、同一組織標本に対して少なくとも一回施すことを特徴 とする組織標本のパラフィン浸透処理方法にある。
また、本発明は、脱水及び脱脂処理を施した組織標本をパラフィン溶融液に浸漬し て、前記組織標本内にパラフィンを浸透するパラフィン浸透処理装置であって、該組 織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織標本の組織内に溶融パラフィンを 浸透する浸透処理を施す浸透処理手段と、前記浸透処理手段によって組織標本に 浸透された溶融パラフィンを冷却固化処理する冷却固化処理手段とを具備し、前記 パラフィン溶融液に浸漬して溶融パラフィンが浸透されて 、る組織標本を冷却し、組 織標本の内部に浸透している溶融パラフィンを固化する冷却固化処理と、浸透され た溶融パラフィンが固化された組織標本を、パラフィン溶融液に再浸漬して、組織標 本の内部に浸透している固化パラフィンを再溶融する再溶融処理とを、同一組織標 本に対して少なくとも一回施すように、前記浸透処理手段と冷却固化処理手段とを制 御する制御部が設けられていることを特徴とする組織標本のパラフィン浸透処理装置 でもある。
かかる本発明にお 、て、組織標本に浸透した溶融パラフィンの冷却固化処理を、 前記組織標本をパラフィン溶融液カゝら分離した状態で施すことによって、組織標本の 冷却固化速度を向上できる。
また、この冷却固化処理を、室温以下、特に o°c以下の雰囲気温度下で施すことに よって、パラフィン浸透処理して得られた組織標本をパラフィン包埋して薄切する際 に、組織標本を容易に薄切でき、顕微鏡観察に適した良好な薄片を得ることができる 尚、本発明でいうパラフィン浸透処理には、ノ ラフィン浸透処理工程を終了した組 織標本をパラフィンに包埋してブロックを作成する包埋処理工程の処理は含まない。 皮膚や坐骨神経等の組織標本の場合、溶融パラフィンの浸透処理のみを組織標 本に施した従来の組織標本のパラフィン浸透処理方法で処理した組織標本では、パ ラフィンに包埋してブロック化した組織標本の薄切が極めて困難であり、薄切して得 られた薄片も顕微鏡観察用として使用できな力つた。
この点、本発明によれば、皮膚や坐骨神経等の組織標本であっても、パラフィン浸 透処理後の組織標本をパラフィン包埋後に薄切でき、得られた薄片を顕微鏡観察用 として使用できる。
この様に、従来のノラフィン浸透処理方法では、ノラフィン包埋後の薄切が困難な 組織標本でも、本発明によって処理した組織標本をパラフィン包埋後に薄切できるよ うになつた詳細な理由は不明である力 以下のように考えられる。
皮膚や坐骨神経等の組織標本では、脂肪分が多ぐ通常の組織標本のパラフィン 浸透処理方法で採用される脱脂処理では充分に脱脂できな力つた。このことは、予 め著しく長時間の脱脂処理を皮膚や坐骨神経等の組織標本に施した後、従来のパ ラフィン浸透処理方法で処理して得られた組織標本は薄切可能となることからも判る 一方、本発明では、ノ フィン溶融液に浸漬して組織内に溶融パラフィンが浸透さ れた組織標本を冷却し、浸透した溶融パラフィンを一旦固化させた後、この組織標本 をパラフィン溶融液に再浸漬して、組織標本内に浸透されて 、る固化パラフィンを再 溶融する。
この様に、組織標本に浸透されているパラフィンの固ィ匕 '再溶融を、組織標本に対 して少なくとも一回施すことによって、組織標本の細胞内に浸透したパラフィンは固化 状態から溶融状態に変化する。その際に、細胞内のパラフィンの体積は収縮状態か ら膨張状態に変化し、細胞内に残留していた脂肪分を細胞外に排出でき、細胞内を 充分にパラフィンに置換できる。
その結果、本発明によって処理して得られた組織標本の細胞内は、ノラフィンによ つて充分に置換されており、脂肪分の多い皮膚や坐骨神経等の組織標本でも、パラ フィンによって包埋した組織標本を薄切でき、得られた薄片の状態も良好である。 かかる本発明では、ノ ラフィン浸透処理の前に、予め著しく長時間の脱脂処理を施 すことを要しな 、ため、組織標本の処理効率を向上できる。 図面の簡単な説明
[0004] [図 1]本発明に係る組織標本のパラフィン浸透処理装置の一例を説明する説明図で ある。
発明を実施するための最良の形態
[0005] 本発明に係るパラフィン浸透処理装置の一例を図 1に示す。図 1に示すパラフィン 浸透処理装置は、ジャケット 26が周面に設けられた密閉式の処理槽 10を一個設け た 1槽式処理装置である。力かる処理槽 10内には、組織標本が収納されたバスケット 12が挿入されている。
更に、処理槽 10内に挿入されたバスケット 12に収容された組織標本を処理するェ タノールゃキシレンは、収容部 14に収容された複数個の薬液タンク 16, 16 · ·に貯留 されており、凝固点が 60°C近傍のパラフィン溶融液は、ヒータ付薬液タンク 18、 18内 に貯留されている。
力かる薬液タンク 16, 16 · ·及びヒータ付薬液タンク 18、 18の各々に一端が接続さ れた配管 22, 22· · ·は選択バルブ 20に接続され、選択バルブ 20と処理槽 10とは配 管 24によって接続されている。この選択バルブ 20には、複数の薬液タンク側ポート が形成された弁座 20aと処理槽側ポートが形成された弁板 20bとが設けられている。 この弁座 20aの各薬液タンク側ポートには、配管 22, 22 · · ·の対応する他端が接続 されている。
このため、選択バルブ 20によって、所望の薬液が貯留されているタンクと処理槽 10 とを接続し、処理槽 10に所望の薬液を供給できる。一方、処理槽 10から薬液を排出 する際には、処理槽 10と薬液を排出すべきタンクとを選択バルブ 20によって選択し 、処理槽 10内の薬液を排出する。
また、処理槽 10の側面に設けられたジャケット 26には、配管 30aの電磁弁 32aを経 由して冷媒を供給でき、ジャケット 26に供給された冷媒を配管 30bの電磁弁 32bを経 由して排出できる。更に、処理槽 10のジャケット 26には、配管 26aの電磁弁 28aを経 由して熱媒を供給でき、ジャケット 26に供給された熱媒を配管 26bの電磁弁 28bを経 由して 出できる。
更に、力力る選択ノ ノレブ 20、電磁弁 28a, 28b, 32a, 32biま、 ff¾御咅によつて ff¾ 御されているため、ジャケット 26への熱媒及び冷媒の給排を制御して処理槽 10内を 所望温度に制御できる。
図 1に示すパラフィン浸透処理装置を用いて、人体等力も採取した組織標本にパラ フィン浸透処理を施す。このパラフィン浸透処理装置に備え付けられた薬液タンク 16 , 16 · ·の複数槽にはエタノールを貯留する。このエタノールを貯留した複数の薬液タ ンク 16, 16 · ·の一部を、水分量が徐々に少なくなるエタノール系列としてもよい。伹 し、エタノールを貯留した薬液タンク 16, 16 · ·の残りの薬液タンク 16, 16 · ·には、水 分量が実質的に零のエタノールを貯留する。更に、薬液タンク 16, 16 · 'のうち、エタ ノールを貯留した薬液タンク 16, 16 · ·を除いて残った複数槽には、キシレンを貯留 する。
また、薬液タンク 16, 16 · ·とは別に設けられたヒータ付薬液タンク 18、 18 · ·には、 パラフィン溶融液を貯留する。
採取した組織標本は、予めホルマリンに浸漬して固定した後、バスケット 12に収納 して処理槽 10に挿入し、通常の処理条件で脱水処理及び脱脂処理を施す。この際 に、電磁弁 28a, 28b, 32a, 32bは閉じており、熱媒も冷媒もジャケットには供給され ない。
先ず、制御部力 の選択バルブ 20への信号によって、エタノールが貯留されてい る薬液タンク 16, 16 · 'のうち、選択した最初の薬液タンク 16からエタノールを処理槽 10に送液して所定時間保持して排出した後、選択した次の薬液タンク 16からエタノ ールを処理槽 10に送液する。この様に、エタノールを貯留した薬液タンク 16, 16 · · 力も所望の順序でエタノールを処理槽 10に送液し、組織標本中の水分をエタノール に置換する。
更に、エタノールの処理が終了した処理槽 10内の組織標本には、制御部からの選 択バルブ 20への信号によって、キシレンが貯留された薬液タンク 16, 16 · 'のうち、 選択した最初の薬液タンク 16からキシレンを処理槽 10に送液して所定時間保持して 排出した後、選択した次の薬液タンク 16からキシレンを処理槽 10に送液する。この 様に、キシレンを貯留した薬液タンク 16, 16 · ·から所望の順序でキシレンを処理槽 1 0に送液し、組織標本中のエタノールをキシレンに置換する。
次いで、キシレンによる処理が終了した処理槽 10内の組織標本には、制御部から の選択バルブ 20への信号によって、ノ ラフィン溶融液が貯留されたヒータ付薬液タ ンク 18、 18のうち、選択した最初のヒータ付薬液タンク 18からパラフィン溶融液を処 理槽 10に供給し所定時間保持して排出した後、選択した次のヒータ付薬液タンク 18 からパラフィン溶融液を処理槽 10に送液して、組織標本中のキシレンをパラフィン溶 融液に置換する。
力かるパラフィン溶融液による処理の際には、処理槽 10内をパラフィンの凝固温度 以上の温度に保持する。このため、制御部力もの信号によって電磁弁 28a, 28bを開 いて、熱媒をジャケットに供給してもよい。
この様にして、処理槽 10内の組織標本内が溶融パラフィンに置換され、ノ ラフィン 溶融液が排出された処理槽 10のジャケット 26には、制御部力もの信号によって電磁 弁 28a, 28bを閉じると共に、電磁弁 32a, 32bを開いて冷媒を供給し、処理槽 10を 冷却する。力かる処理槽 10の冷却によって、組織標本内の溶融パラフィンが固化す る。
次いで、処理槽 10のジャケット 26に、制御部からの信号によって電磁弁 32a, 32b を閉じ且つ電磁弁 28a, 28bを開いて熱媒を供給して処理槽 10を加温すると共に、 ヒータ付薬液タンク 18、 18に貯留したパラフィン溶融液のうち、最後に選択したヒータ 付薬液タンク 18からパラフィン溶融液を処理槽 10に再送液し、組織標本内で固化し たパラフィンを再溶融する。
力かる処理槽 10の冷却及び溶融パラフィンの供給によって、組織標本に浸透した パラフィンの固化及び再溶融を少なくとも一回施すことによって、パラフィン浸透処理 を終了した組織標本は、パラフィンで包埋して容易に薄切でき、得られる薄片も顕微 鏡観察に供給できる良好なものである。
従来の如ぐ組織標本に浸透した溶融パラフィンの固ィ匕'再溶融を施さなつた場合 、ノ フィン浸透処理前に、前述した様に、著しく長時間の脱脂処理等の特別な処理 を施さな力つた皮膚や坐骨神経等の組織標本では、ノ ラフィン浸透処理を施して得 られる組織標本を薄切しても良好な薄片を得ることが困難である。
本発明の様に、組織標本に浸透したパラフィンを固ィ匕 '再溶融することによって、パ ラフィン浸透処理を施した組織標本を容易に薄切できるようになる理由は、パラフィン は、固化すると体積が収縮し、溶融すると体積は膨張する。このため、細胞内に浸透 している溶融パラフィンを固化させた後、再溶融することによって、細胞内に残留して いた脂肪分等を細胞外に排出でき、細胞内を充分にパラフィンに置換できるからで あると考えられる。
組織標本に浸透した溶融パラフィンの冷却固化を、パラフィン溶融液に組織標本を 浸漬した状態で施してもょ ヽが、組織標本をパラフィン溶融液カゝら分離した状態で施 すことによって、組織標本の冷却固化速度を向上できる。
また、この冷却固化を、組織標本の種類等によっては、室温以下、特に 0°C以下（ 特に好ましくは 0〜一 5°C)の雰囲気温度下で施すことによって、ノ フィン浸透が更 に促進され、得られた組織標本をパラフィン包埋して薄切する際に、組織標本を容易 に薄切でき、顕微鏡観察に適した良好な薄片を得ることができる。
更に、組織標本に浸透したパラフィンの固ィ匕 '再溶融は一回でもよいが、パラフィン が浸透し難 ヽ組織標本では、同一組織標本に対して二回以上繰り返すことが好まし い。 但し、この固ィ匕 '再溶融の繰り返し回数を無暗に増加させても、パラフィンの浸透処 理時間が長くなるものの、奏し得る効果は飽和に達する。このため、顕微鏡観察に供 する組織標本に対して施す、組織標本に浸透したパラフィンの固化 ·再溶融の繰り返 し回数は、予め実験的に求めておくことが好ましい。
ノラフィンの浸透処理が終了した組織標本は、処理槽 10から取り出して、組織標本 をパラフィンに包埋した後、ミクロトームによって薄切することによって、顕微鏡観察用 の薄片を得ることができる。
尚、処理槽 10に収納された組織標本に各種処理を施す際に、処理速度を促進す ベぐ処理温度や処理圧力を変更したり、液撹拌を施してもよい。
以上の説明では、 1槽式処理装置を用いたパラフィン浸透処理方法について説明 してきたが、複数の薬液タンク及びヒータ付薬液タンクを並べ、組織標本が収納され たバスケットを、薬液タンク及びヒータ付薬液タンクの各々に順次所定時間浸漬して 組織標本にパラフィン浸透処理を施してもょ 、。
(実施例 1)
採取した人体の皮膚を組織標本とし、ホルマリンに浸漬して固定した。この組織標 本を下記表 1に示す薬液が貯留されたタンクに、表 1に示す条件下で処理を施した。 表 1に示すエタノール処理及びパラフィン処理では、組織標本の組織内への浸透 を促進すベぐ加圧状態と減圧状態とを数回繰り返した。この際の、加圧状態の圧力 及び減圧状態の圧力を表 1に併記した。 表
処理ステップ 薬液 温 度 浸漬時間 圧力 撹拌
(分）
1 エタノール 90% 37 60 加圧； 35 (kPa) 有
2 エタノール 95% 減圧；— 70 (kPa)
3 エタノール 99.5%
4 エタノール 99.5%
5 エタノール 99.5%
6 エタノール 99.5%
7 エタノール 99.5%
8 キシレン 大気圧
9 キシレン 大気圧
1 0 キシレン 大気圧
1 1 パラフィン 63 加圧； 35 (kPa)
1 2 ラフ ン 減圧； -70 (kPa)
1 3 。ラフィン
1 4 /、°ラフィン
表 1の処理ステップ 14を終了して溶融パラフィンが浸透された組織標本を、雰囲気 温度が 5°Cに保持された雰囲気中に 10分間保持し、組織標本に浸透された溶融 パラフィンを固化する。
次いで、浸透されたパラフィンが固化された組織標本を、 63°Cに保持されたバラフ イン溶融液中に再度浸漬し、浸透されたパラフィンを再溶融する。更に、再溶融パラ フィンが浸透された組織標本を、再度、—5°Cの雰囲気中に 10分間保持して、再溶 融パラフィンを再固化する。
この様に、組織標本内に浸透しているパラフィンの固ィ匕 '再溶融の処理を、同一組 織標本に対して四回繰り返した。
その後、得られた組織標本をパラフィンに包埋して得たブロックを、ミクロトームによ つて薄切して厚さ 3 μ mの薄片を得た。
得られた薄片を観察すると、組織や組織'パラフィンの境界も裂けることなく切れて おり、顕微鏡観察に供し得るものであった。
(実施例 2) 実施例 1において、冷却雰囲気の温度を室温（25°C)とした他は、実施例 1と同様 にしてパラフィン浸透処理を施した後、得られた組織標本をパラフィンに包埋して得 たブロックを、ミクロトームによって薄切した。
この薄切では、実施例 1に比較して、その切易さは低下したが、厚さ の薄片を 得ることができた。
また、得られた薄片を観察すると、組織とパラフィンとの境界に裂け目が存在してい たが、顕微鏡観察に供し得るものであった。
(実施例 3)
実施例 1において、組織標本として、人体カゝら採取した坐骨神経を用いた他は、実 施例 1と同様にしてパラフィン浸透処理を施した後、得られた組織標本をパラフィンに 包埋して得たブロックを、ミクロトームによって薄切した。
この薄切では、実施例 1に比較して、その切易さは低下したが、厚さ の薄片を 得ることができた。
また、得られた薄片を観察すると、組織とパラフィンとの境界に裂け目が存在してい たが、顕微鏡観察に供し得るものであった。
(比較例 1)
実施例 1にお 、て、組織標本内に浸透して 、るパラフィンの固化 ·再溶融の処理を 施さな力つた (表 1の処理ステップ 14まで実施したのみ)他は、実施例 1と同様にして パラフィン浸透処理を施した後、得られた組織標本をパラフィンに包埋して得たブロッ クを、ミクロトームによって薄切することを試みた。
し力しながら、ミクロトームによる薄切は殆どできず、得られた薄片も、組織や組織- パラフィンの境界に裂け目が多く存在しており、顕微鏡観察に到底供し得ないもので あった。
(比較例 2)
比較例 1において、組織標本として、人体力も採取した坐骨神経を用いた他は、比 較例 1と同様にしてパラフィン浸透処理を施した後、得られた組織標本をパラフィンに 包埋して得たブロックを、ミクロトームによって薄切した。
し力しながら、ミクロトームによる薄切は殆どできず、得られた薄片も、組織や組織 · パラフィンの境界に裂け目が多く存在しており、顕微鏡観察に到底供し得ないもので あった。

Claims

請求の範囲
[1] 脱水及び脱脂処理が施された組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織 標本内にパラフィンを浸透処理する際に、
該組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織標本の組織内に溶融バラフ インを浸透した後、前記組織標本を冷却して浸透した溶融パラフィンを固化し、 次いで、前記組織標本をパラフィン溶融液に再浸漬して、組織標本の内部に浸透 して 、る固化パラフィンを再溶融する固化 ·再溶融処理を、同一組織標本に対して少 なくとも一回施すことを特徴とする組織標本のノ ラフィン浸透処理方法。
[2] 組織標本に浸透した溶融パラフィンの固化を、前記組織標本をパラフィン溶融液か ら分離した状態で施す請求項 1記載の組織標本のパラフィン浸透処理方法。
[3] 組織標本に浸透した溶融パラフィンの固化を、室温以下の雰囲気温度下で施す請 求項 1記載の組織標本のパラフィン浸透処理方法。 雰囲気温度を、 0°C以下とする請求項 3記載の組織標本のパラフィン浸透処理方法
[5] 脱水及び脱脂処理を施した組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織標 本内にパラフィンを浸透するパラフィン浸透処理装置であって、
該組織標本をパラフィン溶融液に浸漬して、前記組織標本の組織内に溶融バラフ インを浸透する浸透処理を施す浸透処理手段と、前記浸透処理手段によって組織標 本に浸透された溶融パラフィンを冷却固化処理する冷却固化処理手段とを具備し、 前記パラフィン溶融液に浸漬して溶融パラフィンが浸透されている組織標本を冷却 し、組織標本の内部に浸透している溶融パラフィンを固化する冷却固化処理と、浸透 された溶融パラフィンが固化された組織標本を、パラフィン溶融液に再浸漬して、組 織標本の内部に浸透している固化パラフィンを再溶融する再溶融処理とを、同一組 織標本に対して少なくとも一回施すように、前記浸透処理手段と冷却固化処理手段 とを制御する制御部が設けられていることを特徴とする組織標本のパラフィン浸透処 理装置。
[6] 組織標本に浸透された溶融パラフィンを冷却固化処理する冷却固化処理手段が、 ノ フィン溶融液力 分離した組織標本内に浸透されている溶融パラフィンを冷却固 化する冷却固化処理手段である請求項 5記載の組織標本のパラフィン浸透処理装 置。 冷却固化処理手段が、溶融パラフィンの浸透している組織標本を室温以下の雰囲 気温度下で冷却する冷却固化処理手段である請求項 5記載の組織標本のパラフィ ン浸透処理装置。
[8] 雰囲気温度が、 0°C以下である請求項 7記載の組織標本のパラフィン浸透処理装 置。
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