WO2007037099A1

WO2007037099A1 - 乳房炎の治療剤

Info

Publication number: WO2007037099A1
Application number: PCT/JP2006/317441
Authority: WO
Inventors: Takatoshi Tamura; Yoshikatsu Miwa
Original assignee: Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo; Biovet, Inc.
Priority date: 2005-09-27
Filing date: 2006-09-04
Publication date: 2007-04-05
Also published as: EP1944037A4; EP1944037A1; EP1944037B1; JPWO2007037099A1

Abstract

　経口、経鼻、注射や乳房内注入などの簡便な投与経路により投与して著効を示し、治療担当者の労力・負担や飼い主の経済的負担が少なく、動物にとっても投与負担の少ない哺乳動物の乳房炎治療剤、及び、その治療剤を用いる乳房炎の治療方法を提供することを課題とし、インターフェロンを有効成分として含有する哺乳動物の乳房炎治療剤、及び、この乳房炎治療剤を用いた哺乳動物の乳房炎の治療方法を提供することにより解決する。

Description

明細書

乳房炎の治療剤

技術分野

[0001] 本発明は乳房炎の治療剤に関し、とりわけ、インターフェロンを有効成分とする乳房炎の治療剤に関するものである。

背景技術

[0002] 授乳期の哺乳動物は、授乳時の物理的な刺激や乳頭付近の傷の発生、環境の変化や出産などによるストレス、これらに起因する免疫力の低下などの種々の要因により、微生物に感染し、乳房炎を発生する頻度が増加することが知られている。なかでも、この乳房炎は、常に乳を出し続けることを要求される乳牛にあっては、その飼育において最も発生が多ぐ死廃事故に至る場合も多数あるため、被害が甚大な疾病となっている。

[0003] 乳牛の乳房炎の殆どは微生物の感染に起因すると!/、われて、るが、ストレスなどの環境因子も大きく発症に影響する。特に、夏場に多い暑熱ストレスや長距離移送のストレスや、これらのストレスに起因する免疫低下により発症頻度が上昇することが知られている。このように複数の要因が関与するため、乳房炎の発症機序は複雑であり、治療を困難なものとしている。

[0004] 乳房炎では発熱や元気喪失などの全身症状、乳房の異常、乳汁の異常、微生物感染などが観察される臨床型乳房炎と、これら臨床症状は認められないが、乳量の低下を伴う乳汁の異常、特に乳汁中に体細胞が分泌される異常乳と微生物感染が観察される潜在性乳房炎がある。

[0005] これらの乳房炎の治療は抗生剤やホルモン剤の投与が一般的であり、これ以外にも多数の治療方法が提案されて!、る（例えば特開 2001— 213784号公報及び特開 2003— 171291号公報参照)。しかし、抗生剤やホルモン剤は、感染源によって効果はバラつき、しかも、薬剤耐性菌の出現や免疫能低下を引き起こすため、難治性乳房炎に移行する可能性も高い。また、薬剤耐性菌を増カロさせることは公衆衛生上からも好ましくなぐ潜在性乳房炎も含め、十分な効果を有する治療方法は確立されていないのが実状である。このように乳房炎は乳牛で多発し、乳量が低下するだけでなぐその生産の停止に至る場合もあるので、経済的にも大きなダメージとなる疾病である。また、ヒトを含めて授乳期にある哺乳類は乳房炎に力かり易くなつているため

、哺乳動物の乳房炎に対する簡便で有効な予防剤及び z又は治療剤の確立が望まれている。

[0006] 一方、最近、ゥシ、ネコ、ブタ、ラット、マウス、 -ヮトリなどの哺乳動物や鳥類などの温血動物の疾患に、比較的小量の同一種或いは異種由来のインターフロン (以下、「IFN」と略記する場合がある。）の経口投与が有効であることが報告されている（例えば、米国特許第 5910304号明細書、特開平 6— 340549号公報、『臨床と微生物』、ジヨセフ、ェム、カミンズアンドウィリアム、ィー、スチュアート Il ieseph M. Cu mmins and William E. Stewart Π)、第 18卷、第 5号、第 631— 635号（199 1年)参照)。また、本出願人らも、小量のヒトインターフェロン α (以下、「HuIFN— a 」と略記する場合がある。）を有効成分とする製剤が、ゥシの消化器疾患の治療剤として有用であることを提案した (特開 2005— 89301号公報参照)。し力しながら、これらの文献には、インターフェロンが乳房炎の予防剤及び Z又は治療剤（以下、併せて「乳房炎の治療剤」という場合がある。）として有用である点については、何ら記載も示唆もされていない。

発明の開示

[0007] 本発明は、経口、経鼻、注射や乳房内注入などの簡便な投与経路により投与して著効を示し、治療担当者の労力 ·負担や飼い主の経済的負担が少なぐ動物にとつても投与負担の少な、乳房炎の治療剤を提供することを第一の課題とし、その治療剤を用いる乳房炎の治療方法を提供することを第二の課題とする。

[0008] 本発明者らは、上記課題を解決する目的で、 IFNによる乳房炎の予防、治療方法について長年に渡り研究を進めてきた。その結果、ヒトを含む哺乳動物の乳房炎の予防、治療に、 HuIFN、とりわけ、 HuIFN— α製剤が有効であり、なかでも、そのサブタイプ α 8を総 HuIFN— α活性中に 10%以上含有する製剤力著効を示すことを見出した。さらに、本発明者らは、乳房炎を発症する動物由来の IFNが、当該動物の乳房炎の予防、治療に著効を示すことを見出し、乳房炎の治療剤を確立すると共に、それを用いた乳房炎の治療方法を確立することにより、本発明を完成させた。すなわち、本発明は、 IFNを含んでなる乳房炎の治療剤を提供することにより、上記課題を解決するものである。

[0009] 本発明による IFNを有効成分とする動物の乳房炎の治療剤及びその治療剤を用いる乳房炎の治療方法は、乳房炎の各種臨床症状の予防、改善、或いは完治 (以下、「予防」、「改善」或いは「完治」を併せて「治療」という場合がある。）に著効を発揮する。

発明を実施するための最良の形態

[0010] 本発明で使用する IFN製剤は、哺乳動物の乳房炎に対する治療効果が高ぐ通常、対象となる動物の体重 kg当たり約 0. 005国際単位乃至 5, 000国際単位と極めて小用量で事足りる。

[0011] IFNは、経口投与しても、非経口投与しても、哺乳動物の乳房炎の治療に著効を発揮する。

[0012] 本発明の治療剤の使用対象となる動物とは、いわゆる哺乳動物（以下、「動物」と略記する場合がある。）であり、具体的には、ヒト、ゥシ、ゥマ、ブタ、ネコ、ィヌをはじめとする、乳房炎を発症する動物、とりわけ、搾乳により過度の乳分泌を強いられる乳牛を挙げることができる。本発明の治療剤は、これらの動物に対して、乳房炎の治療目的のみでなぐその発症予防の目的で、未発症の動物に使用することもできる。

[0013] 本発明でいう乳房炎とは、哺乳動物の乳房に発生する炎症をいい、ヒトでいう乳腺炎などもこれに含まれる。乳房炎の発症頻度が非常に高い乳牛の場合を例に説明すると、乳房炎は乳牛の体表や飼育環境中に存在する細菌を中心とした微生物の乳房内感染、あるいは、様々な理化学的要因、例えば、搾乳刺激等を直接の原因として発生する。乳牛の乳房炎の殆どは細菌性であり、感染した乳汁、乳頭のキズ、人の手足のキズ等に存在し、牛群に伝播する伝染性細菌（黄色ブドウ球菌、無乳性レンサ球菌)と、体表、敷料や糞便中など飼育環境中に常在する環境性細菌 (黄色ブドウ球菌以外のブドウ球菌、環境性レンサ球菌、大腸菌）が原因となる。環境因子も大きく発症に影響する。例えば、乳房が糞便に汚染されやすい牛床の形状、搾乳時の乳房のケア、宿主側の誘因として遺伝、体質、季節'気候変動等の要因があり、ストレス、特に夏場に多い暑熱ストレスや長距離移送のストレスなどに起因する免疫低下などにより発症する。乳房炎は一過性の場合もあるものの、完治が困難な場合が多ぐ多くの場合慢性乳房炎に移行する。これらの乳房炎の症状としては、発熱や元気喪失などの全身症状 (甚急性期、急性期）、乳房の異常 (甚急性期乃至慢性期）、乳汁の異常 (甚急性期乃至慢性期）、微生物感染などが観察される臨床型乳房炎と、これら臨床症状は認められないが、乳汁の異常、特に乳汁中に体細胞が多数分泌される異常乳や微生物感染が観察される潜在性乳房炎がある。潜在性乳房炎の場合には、乳量の減少や、また異常乳汁の分泌が起こる。本発明の乳房炎治療剤は、上記の原因などにより発症する、上記の諸症状を呈する乳房炎の治療に使用することができる。また、本発明の乳房炎治療剤は、抗生剤やホルモン剤などの治療効果が認められな力つたり、十分でない難治性乳房炎に対しても著効を発揮することができる。

[0014] 本発明による動物の乳房炎治療剤に使用する IFNは、対象とする動物の乳房炎に対して治療効果を有する IFNであれば、その由来や製造方法は問わない。通常は、対象とする動物に由来する細胞が産生する天然型の IFN力、該動物由来の細胞から採取した IFN関連遺伝子を導入した微生物、動物細胞、植物細胞、動物若しくは植物が産生する組み換え型の IFNを、公知の方法で精製し、これを有効成分として使用すればよい。また、組み換え型の IFNとしては、天然型の IFNのアミノ酸配列を有するものはもとより、動物の乳房炎に治療効果を有するものであれば、その一部のアミノ酸が、付加、欠失或いは置換したものであっても、複数のサブタイプの活性部位を組み込んだいわゆるコンセンサス配列を有する IFNも、当然、本発明の乳房炎治療剤の有効成分として使用することができる。さらに、これらの IFNにポリエチレングリコールなどの高分子を結合させた徐放性の IFNなどの、化学的に修飾された IF

Nち使用することがでさる。

[0015] 今日、 IFNは、その抗原性や生理活性等の違いに基づき、主として I型 (IFN— a、 IFN - β (動物種によっては、 IFN— a Z jSと称される場合もある））、 Π型（IFN— y )なる三種類、二型に大別されているが、これらは、何れも乳房炎に対する治療効果において多少の違いはあるものの、本発明で使用することができる。また、インターフェロン _τ (タウ）と呼ばれる IFNも使用することができる。その際、本発明の効果が達せられる範囲内で、ただ一種の IFNを使用してもよいし、同じ型或いは異なる型から選ばれる IFNを組合せて使用してもよいし、異なる動物種由来の IFNの二種以上を適宜組み合わせて使用することも随意である。なかでも、ヒト由来の細胞が産生するヒ HFN力、ヒト由来の細胞力採取したヒト IFN関連遺伝子を導入した微生物、若しくは、動物や植物、これらの細胞が産生するヒト IFNを有効成分とするものは、ヒトのみでなぐゥシをはじめとする動物全般の乳房炎に対して優れた治療効果を有することから、汎用性が高ぐ特に有利に利用することができる。また、 IFN- aは複数のサブタイプの存在が知られており、これらの 1種又は 2種以上を組み合わせて使用することも自由である。何れの IFNの場合でも、比活性ができるだけ高いものを使用するのが望ましぐ経口投与には、比活性が約 10⁵国際単位 Zmg蛋白質以上の精製品力また、非経口投与には、約 10⁷国際単位 Zmg蛋白質以上の精製品が望ましぐパイロジェンを除去したものが特に望まし、。

[0016] 本発明者が試験したところ、これら HuIFNのなかでも、とりわけ、 BALL— 1細胞やナマルバ細胞などのヒトリンパ芽球様細胞株が産生する、いわゆる、「天然型 HuIFN α」は、ヒトのみでなく乳牛をはじめとする種々の動物の乳房炎に対する治療効果が高ぐ副作用も僅少という特徴がある。ことに、効果の点で、 HuIFN— αのサブタイプ α 8 (以下、「サブタイプ α 8」という）を HuIFN— aの総活性の 10%以上含有する製剤が望ましぐ且つ、 HuIFN— a中にサブタイプ α 8とサブタイプ a 2 (以下、「サブタイプ ex 2」 t ヽぅ）とを、活性比で、 1： 9乃至 10： 0の割合で含有する製剤が強、治療効果を示すことからさら望ましく、 2： 8乃至 4： 6の割合で含有する製剤が著効を示すことから、特に望ましい。 BALL— 1細胞由来の HuIFN— aは、サブタイプ a 8を HuIFN - aの総活性の約 25%含有し、サブタイプ a 8とサブタイプ a 2とを、活性比で、 1 : 3の割合で含有し、そのバランスは極めて良ぐこの発明に使用して最も優れた効果をもたらした。また、 HuIFN— aとヒト IFN— βゃヒト IFN— yを組み合わせて使用すると、 HuIFN— aの持つ治療効果が相乗的に増強されることも確認された。

[0017] 本発明による乳房炎の治療剤は、 IFN単独の形態はもとより、 IFNとそれ以外の生理的及び製剤学的に許容される、例えば、担体、賦形剤、希釈剤、安定剤、徐放剤、乳化剤さらには、必要に応じて、解熱剤、抗炎症剤、抗菌剤、抗ウィルス剤、ホルモン剤、免疫賦活剤、消化剤、栄養剤、餌料などとの組成物としての形態を包含する。さらに、この発明の治療剤は、投薬単位形態の薬剤をも包含し、その投薬単位形態の薬剤とは、この発明の有効成分たる IFNの、例えば、一日当たりの用量又はその整数倍 (4倍まで)若しくはその約数（1Z4まで）に相当する量を含有し、投与に適する物理的に分離可能な剤型にある薬剤を意味する。また、 IFNの型及び Z又は IFN αの異なるサブタイプの 2種以上を組み合わせて使用する場合には、個々の型の I FN及び Ζ又は IFN αのサブタイプの単剤を組み合わせて使用すること、 2種以上の型の IFNを混合して 1剤として使用すること、或いは、これらの製剤を組み合わせて使用することも随意である。このような投薬形態の薬剤としては、散剤、ゲル状経口用剤、顆粒剤、液剤、錠剤、カプセル剤、舌下剤、注射剤、フィルム状経口用剤などが挙げられる。また、散剤や顆粒剤などを用時に、その投与経路に応じて、蒸留水、生理食塩水、ミルク、代用ミルクなどに溶解して使用することも随意である。

本発明による乳房炎の治療剤の用量、用法について、 HuIFNを使用する場合を例に説明すると、本発明の治療剤は、経口的に投与しても非経口的に投与しても、所期の予防及び Z又は治療効果が得られる。具体的には、動物の種類、原因微生物の種類、症状、用量、用法、使用する IFNの型などに依っても変わるけれども、対象とする動物の症状や様子を観察しながら、通常、動物の体重 kg当たり約 0. 005乃至 5000国際単位 Z回、望ましくは、約 0. 05乃至 500国際単位 Z回、より望ましくは、約 0. 1乃至 50国際単位 Z回の IFNを 1日 1乃至 3回若しくは 1週間に 1乃至 6回、 1 日乃至 6力月間投与すればよい。本発明者が試験したところ、用量が上記の範囲を下回ると所期の治療効果が得られ難くなり、逆に、上回ると、抗体産生や副作用が顕著になったり、治療効果に比べて経済的負担が大きくなることがあり、上記範囲を以つて最良とした。また、ヒト以外の動物に由来する IFNを使用する場合にも、その用法、用量も、 HuIFNを使用した場合に準じればよい。なお、ヒト以外の動物に由来する I FNを使用する場合の活性は、種が異なると、測定方法により多少の変化はあるものの、 VSVウィルスなどのウィルスによる、マウス L 細胞、ラット XC細胞、或いは、ゥ

929

シ MDBK細胞などの細胞変性を抑制する系を用いて、該当する動物か近縁種の動物の公知の IFN標準品に基づき換算すればよぐ活性の測定に、ヒトと該当する動物の IFNの両方に感受性を示す細胞を使用して、 HuIFNの国際標準品に基づき換算してもよい。また、免疫酵素法などを利用して測定した IFN蛋白の質量をもとに、公知の各種動物の IFN標準品に基づき換算して、その活性を計算してもよい。

[0019] なお、本明細書を通じて、 HuIFNの活性は、 HuIFNがシンドビスウィルスによる F L細胞の細胞変性を抑制する度合をマイクロタイター法により測定し、その測定値を世界保健機関による HuIFNの国際標準品「Ga23— 901— 532」に基づき決定される「国際単位」に換算して表示する。

[0020] 本発明の治療剤を経口或いは経鼻投与するには、治療剤を、例えば、散剤、トローチ剤、顆粒剤、液剤、錠剤、舌下剤、飼料などの経口或いは経鼻投与可能な形態に調製し、そのままで、或いは、必要に応じて、餌、ミルク、代用ミルクなどに混合'溶解したり、経口投与器、スプレー、胃ゾンデなどの適宜投与補助器具を使いながら、常法にしたがって口腔内、鼻腔内、食道内若しくは胃内に挿入すればよい。また、非経口投与するには、この発明による注射剤を動物の皮内、皮下、筋肉内、血管内（静脈又は動脈をいう）、乳房内（乳頭からの注入を含む）、若しくは腹腔内に注射すればよい。また、本発明の治療剤は、単一の個体に対して、上記の治療剤の形態と投与経路とを適宜組み合わせて使用することも随意である。

[0021] 治療効果と投与のし易さという観点から個々の投与経路を比較すると、経口投与は、ヒトにあってはもちろんのこと、ゥシゃブタなどの場合にも、一般の飼育場や集積場でも容易に実施できると、う利点がある。所定量の IFNを正確に投与する場合には、血管内、皮内、皮下若しくは筋肉内に投与することも随意である。

[0022] 本発明の治療剤は、乳房炎の予防、治療効果に加えて、ゥシゃブタをはじめとする動物全般の IFN感受性の各種疾患、輸送時などストレスに伴う感染症や体重の減少などに対する予防剤及び Z又は治療剤、各種動物の新生児期、ほ乳期、それ以降の肥育期における肥育促進剤などとしても併せて利用することができる。この場合の用法、用量も、乳房炎の治療の場合に準じればよい。

[0023] <実験 1： HuIFN— a標品の調製 >

後述の実施例 1に記載の方法に基づき、 BALL— 1細胞由来の HuIFN— a (以下、「BALL— 1IFN」と略記する場合がある）の精製品（比活性 2 X 10⁸国際単位 Zmg 蛋白質)を、また、実施例 2の方法に基づき、組換え型サブタイプ ex 8 (比活性 2 X 10 ⁸国際単位 Zmg蛋白質)及び組換え型サブタイプ ex 2 (比活性 7 X 10⁷国際単位 Zm g蛋白質)の精製標品を、それぞれ調製した。また、これらとは別〖こ、常法により、ヒト末梢血カゝら分離した白血球にセンダイウィルスを作用させて誘発させた HuIFN— a (以下、「白血球 IFN」と略記する場合がある。）をケー'カンテル (K. Cantell)等、『ザジャーナノレォブジエネラノレノイロロジー (The Journal of General Viro logy) J,第 39卷、第 541〜543頁（1978年）に記載された方法に準じて精製し、比活性約 2 X 10⁶国際単位 Zmg蛋白質の部分精製白血球 IFNを得た。次いで、この部分精製 HuIFNを、後述の実施例 1と同様に、モノクローナル抗 HuIFN— α抗体を用いる抗体カラムクロマトグラフィーによりさらに精製した後、ヒトアルブミン約 0. lm g/mlを含有する燐酸緩衝液 (pH7. 0)で平衡ィ匕させたゲル濾過クロマトグラフィーを適用することにより、精製白血球 IFN (比活性約 2 X 10⁸国際単位 Zmg蛋白質)溶液を得た。これら 2種類の HuIFN— aと、組換え型サブタイプ α 8及び組換え型サブタイプ ex 2を使用して、以下の実験を行った。

<実験 2 :ゥシの分泌する乳汁中の体細胞数に及ぼす IFNの影響 >

分娩直後のゥシは、乳房炎を発症しやすぐそれに伴い乳汁中の体細胞数が増加することが知られている。そこで、ゥシの分泌する乳汁中の体細胞数に及ぼす IFNの影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、実験 1で調製した BALL—1IF Ν標品を、後述の実施例 5の方法に準じて、無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」）を賦形剤として使用し、 4、 200、 2000或いは 400 00国際単位 Zgの BALL— 1IFNを含有する 4種類の粉末状 HuIFN— a製剤を調製した。 3歳乃至 5歳で、体重が 600kg前後のホルスタイン種乳牛 50頭を対象とし、無作為に 1群 10頭を選択し、各群に、乾乳日と分娩予定日の 7日前に、それぞれ、 1 回ずつ、前記 BALL— 1IFN製剤の何れかを、 1頭当たり、約 1. 5gを経口投与し、体重 kg当たりの投与量力 0. 01、 0. 5、 5或いは 100国際単位 Zkg体重 Z回となるように調整した。試験は、主として獣医師が行ない、乾乳日の 1日前（以下、「乾乳日前」という。 )、分娩 6日、 9日、 14日目に乳汁中の体細胞数を測定した。対照群として、残りの 10頭に、無水結晶マルトース 1. 5gを経口投与し、 HuIFN - a製剤投与群と同様に、乳汁中の体細胞数を測定した。 HuIFN— α製剤投与群と対照群の各測定日における乳汁中の体細胞数の平均を求め、各群における、分娩 6日、 9日、 14 日目に乳汁中の体細胞数を、各群の乾乳日前の体細胞数で除し、 100倍して、体細胞増減率 (％)を求め、その結果を表 1に示す。

[表 1]

[0026] 表 1から明らかなように、対照群では、分娩後の乳汁中の体細胞数は、乾乳日前に比して経時的に増加し、分娩及びその後の授乳に伴い、乳房炎の発症乃至増悪が認められた。これに対して、 HuIFN— α製剤経口投与群では、 0. 01、 0. 5、 5或いは 100国際単位 Zkg体重の何れの投与量においても、分娩後の乳汁中の体細胞数力乾乳前に比して経時的に減少した。この結果は、乾乳期の搾乳牛に、 0. 01、 0. 5、 5或いは 100国際単位 Zkg体重の HuIFN— α製剤を経口投与することにより、乳房炎の発症予防及び増悪の治療、さらには乳質の改善が図れることを物語っている。

[0027] <実験 3：ゥシの乳房炎に及ぼす IFNの種類の違いによる影響 >

実験 2で、 IFNが乳牛の乳房炎の治療及び乳質改善に有効であることが確認されたので、 IFNの種類によりその効果に差があるかどうかを確認する試験を以下のように行った。すなわち、実験 1で調製した、 BALL—1IFN標品、白血球 IFN標品、組換え型サブタイプ oc 8標品及び組換え型サブタイプ α 2標品を、実験 2と同様に、無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」）を賦形剤として使用し、各々 200国際単位 Zgを含有する粉末状の HuIFN— α製剤を調製した。なお、組換え型サブタイプ a 8及び組換え型サブタイプ a 2につ!/、ては、サブタイプ a 8とサブタイプひ 2とを、活性比で、 10:0、 9:1、 8:2、 4:6、 2:8、 1:9、 0:10の割合で含有する 7種類の粉末状の製剤を調製した。 3歳乃至 5歳の乳房炎の症状を呈している乳牛 100頭を対象とし、無作為に選択した 10頭を 1群として、各群に、前記 H uIFN- α製剤の何れかを、経口的に、 0. 5国際単位 Zkg体重 Ζ回となるように約 1 . 5gの用量で、毎日 1回、投与開始の日（1日目）から 5日間に亙って投与した。また、対照群として、残ったゥシ 10頭に、無水結晶マルトース 1. 5gを 1日 1回、投与開始の日（1日目）から 5日間に亙って経口投与した。

[0028] 実験は主として獣医師が行ない、投与開始の日から 7日目に、表 2に示す「無効」、「やや有効」、「有効」、「著効」の 4段階の判定基準により、乳房の状態と乳質に対する効果を評価し、乳房の状態についての評価結果を表 3に、乳質についての評価結果を表 4に示す。また、「著効」と「有効」と判定された場合を、「治療効果有り」と評価して、各 HuIFN— α製剤投与群及び対照群において、著効及び有効と判定されたゥシの頭数をその試験群で使用したゥシの総頭数（10頭)で除し、 100倍して、奏功率（％)を求めて、その結果を表 3及び表 4に併せて示す。

[0029] [表 2]

* :3x 10⁵個 ml未満

[0030] [表 3] 乳牛の頭数 (匹）

インターフェロンの種奏功率ブプタとサイ 8ひ類やや有治療効果有り

著効有効無効 (%) ブブ性サタイ活 2の tひ. 効 (著効 +有効）

BALL -1IFN 6 2 2 0 8 80

白血球 IFN 1 3 5 1 4 40

10:0 1 4

iJ 3 2 5 50

9:1 2 3 3 2 5 50

8:2 3 3 3 1 6 60

4:6 4 3 2 1 7 70

2:8 5 2 3 0 7 70

1:9 4 2 3 1 6 60

0:10 2 2 3 3 4 40 対照 0 1 1 8 1 10 [表 4]

表 3及び表 4から明らかなように、何れの HuIFN— α製剤を投与した場合にも、対照群に比して、顕著な乳房の状態及び乳質の改善が認められ、 HuIFN— αの経口投与により、乳牛の乳房炎が改善されることが確認された。この改善効果は、乳房の状態及び乳質の何れにおいても、 8八1^ 1 ^^ (サブタィプ0；8を総1111 ?^ー a 活性中に約 25%含有し、サブタイプ a 8とサブタイプ a 2とを、活性比で、 1： 3の割合で含有)を投与した場合に最も顕著であり、その奏功率は 80%に達した。白血球 IF N或いは組換え型サブタイプ α 2のみの投与群では、奏功率が 40%と、低い結果となったのに対して、 BALL— 1IFN、及び、組換え型サブタイプ α 8と組換え型サブタイブ a 2との活性比が 1： 9乃至 10 : 0の製剤を投与した群では、何れも、白血球 IFN 或いは組換え型サブタイプ α 2のみの投与した群よりも高い奏功率が得られた。なかでも、 BALL— 1IFN、及び、組換え型サブタイプ α 8と組換え型サブタイプ α 2との活性比が 1 : 9乃至 8 : 2の製剤を投与した群で、高い奏功率が得られ、 BALL- 1IF Ν、及び、組換え型サブタイプ (X 8と組換え型サブタイプ (X 2との活性比が 2： 8乃至 4 ： 6の製剤を投与した群で、特に高!ヽ奏功率が得られた。

[0033] <実験 4：ゥシの乳房炎に及ぼす IFNの投与量の影響 >

上記知見に基づき、最も乳房炎に対する治療効果の高力つた BALL— 1IFNを用いて、ゥシの乳房炎に及ぼす IFNの投与量の影響を調べる試験を以下のように行つた。すなわち、実験 1で調製した BALL— 1IFN標品を、実験 2と同様に、無水結晶マルトースを賦形剤として使用し、 0. 2、 2、 20、 40、 200、 20000、 200000、 2000 000、及び、 20000000国際単位 Zgの BALL— 1IFNを含有する 9種類の粉末状 HuIFN- α製剤を調製した。乳房炎と診断された、 3歳乃至 6歳で、体重が 600kg 前後のホルスタイン種乳牛 100頭を対象とし、無作為に 1群 10頭を選択し、各群に前記 HuIFN— α製剤の何れかを、経口的に、表 5及び 6に示す 0. 0005乃至 5000 0国際単位 Zkg体重 Ζ回の投与量となるように約 1. 5gの用量で、毎日 1回、投与開始の日（1日目）から 5日間に亙って投与した。また、対照群として、残ったゥシ 10頭に、無水結晶マルトース 1. 5gを 1日 1回、投与開始の日（1日目）から 5日間に亙って経口投与した。

[0034] 試験は、主として獣医師が行ない、投与開始の日から 7日目に、表 2に示す「無効」、「やや有効」、「有効」、「著効」の 4段階の判定基準により、乳房の状態と乳質に対する効果を評価し、乳房の状態についての結果を表 5に、乳質についての結果を表 6に示す。また、「著効」と「有効」と判定された場合を、「治療効果有り」と評価して、各 HuIFN- α製剤投与群において、著効及び有効と判定されたゥシの頭数をその試験群で使用したゥシの総頭数（10頭)で除し、 100倍して、奏功率（％)を求めて、その結果を表 5及び表 6に併せて示す。

[0035] [表 5]

[0036] [表 6] 乳牛の頭数 (匹）

HuIFN— αの投与量奏功率 (国際単位/ kg体重）治療効果有り

著効有効やや有効無効 (%)

(著効 +有効）

0 (対照） 0 0 1 9 0 0

0.0005 0 0 5 5 0 0

0.005 0 3 3 4 3 30

0.05 2 5 2 1 7 70

0.1 3 5 1 1 8 80

0.5 4 4 2 0 8 80

50 5 3 2 0 8 80

500 3 4 3 0 7 70

5000 2 4 4 0 6 60

50000 3 3 3 1 6 60 [0037] 表 5及び表 6から明らかなように、 HuIFN- α製剤を 0. 0005国際単位 Zkg体重 Z回投与した場合には、対照群と同様に、乳房の状態及び乳質の改善は認めらなかった。これに対して、 HuIFN— α製剤を 0. 005乃至 5000国際単位 Zkg体重 Ζ 回投与した場合には、顕著な乳房の状態及び乳質の改善が認められた。この効果は、乳房の状態及び乳質の何れにおいても、 0. 05国際単位 kg体重 Z回以上の投与で「著効」が得られ、 0. 1国際単位 kg体重 Z回以上の投与でさらに顕著となる。しかしながら、 50000国際単位 Zkg体重 Z回の投与では、やや有効例や無効例で副作用の可能性も考えられる、発熱、活動性や乳量の低下が認められた。この結果は、 H uIFN- α製剤を 0. 005乃至 5000国際単位 Zkg体重 Ζ回の HuIFN— α製剤を投与することにより、乳房炎が治療可能であり、その治療効果の点では、 0. 05乃至 5 000国際単位 Zkg体重 Ζ回が望ましぐ 0. 05乃至 500国際単位 Zkg体重 Z回がさらに望ましぐ 0. 1乃至 50国際単位 Zkg体重 Z回が特に望ましいことを物語っている。

[0038] 本試験の期間中、 50000国際単位 Zkg体重 Z回の投与量以外では、 HuIFN— α製剤の投与に起因すると考えられる、特段の副作用は全く認められず、この発明による治療剤がゥシの乳房炎の治療に極めて効果的、且つ、安全であることを裏付けていた。さらに、これらのゥシの一部について、 5回目の投与後から 30日目と 60日目に、血液検査を実施したところ、 HuIFN- aに起因すると思われる抗体産生は全く検出されな力つた。このことは、この発明による治療剤が、ゥシの乳房炎を治療する目的で、同一のゥシに反復投与しても安全なことを示唆している。

[0039] <実験 5：難治性乳房炎に及ぼす IFNの影響 >

従来乳房炎の治療には、ホルモン剤や抗生剤が使用されてきたものの、十分な治療効果を得られない場合が多ぐ難治性乳房炎を発症している乳牛が多い。そこで、これらの難治性乳房炎に及ぼす IFNの影響を調べる試験を以下のように行った。すなわち、実験 1で調製した BALL— 1IFNを、実験 2と同様に、無水結晶マルトースを賦形剤として使用し、 BALL— 1IFNを 200国際単位 Zg含有する粉末状の HuIFN - α製剤を調製した。難治性乳房炎と診断された、 3歳乃至 6歳で、体重が 600kg 前後のホルスタイン種乳牛 20頭を対象とし、無作為に 10頭づっ 2群に分け、一方の群に前記 HuIFN— α製剤を、経口的に、 0. 5国際単位 Zkg体重 Ζ回となるように約 1. 5gの用量で、毎日 1回、投与開始の日（1日目）から 5日間に亙って投与した。また、対照として、残ったゥシ 10頭に、無水結晶マルトース 1. 5gを 1日 1回、投与開始の日（1日目）から 5日間に亙って経口投与した。

[0040] 実験は、主として獣医師が行ない、投与開始の日から 7日間、毎日、表 2に示す「無効」、「やや有効」、「有効」、「著効」の 4段階の効果の判定基準により、乳房の状態と乳質を評価し、その結果を表 7に示す。また、「著効」と「有効」と判定された場合を、「治療効果有り」と評価して、 HuIFN- α製剤投与群及び対照群において、著効及び有効と判定されたゥシの頭数をその試験群で使用したゥシの総頭数（10)で除し、 100倍して、奏功率（％)を求め、併せて、表 7に示す。

[0041] [表 7]

HuIFN - a 投与開始からの日数

観察項目製剤投与の効果の判定

有無 1 2 3 4 5 6 7

著効 0 0 1 2 2 3 5 有効 0 1 3 3 4 5 3 有やや有効 2 7 4 3 2 1 1

無効 8 2 2 2 2 1 1 乳房のシコ奏功率（％) 0 10 40 50 60 80 80 リ、発疹著効 0 0 0 0 0 0 0

有効 0 0 0 0 0 0 0 無 (対照）やや有効 0 1 1 1 1 1 1

無効 10 9 9 9 9 9 9 奏功率（％) 0 0 0 0 0 0 0

著効 0 0 1 2 2 4 6 有効 0 2 2 4 4 4 2 有やや有効 2 6 5 2 2 1 2

無効 8 2 2 2 2 1 0 奏功率（％) 0 20 30 60 60 80 80 乳質 ·乳量

著効 0 0 0 0 0 0 0 有効 0 0 0 0 0 0 0 無 (対照）やや有効 0 0 0 0 0 1 1

無効 10 10 10 10 10 9 9 奏功率（½) 0 0 0 0 0 0 0

[0042] 表 7から明らかなように、試験期間をつうじて、対照の乳牛の乳房の状態と乳質に、著効や有効を示す、改善例は認められな力つた。これに対して、 HuIFN- α製剤を経口投与した乳牛では、投与 2日目力有効例が認められ、 3日目力は著効例が認められた。また、投与開始 6日目には、乳房の状態及び乳質の何れにおいても、奏功率が 80%となった。

[0043] これらの試験結果は、 HuIFN- a製剤が、一般の難治性乳房炎を含む乳房炎の治療剤として有用であることを物語って、る。

[0044] 以下、実施例に基づき、本発明を具体的に説明する。但し、本発明は、これら実施例に限定されるものではない。実施例 1

[0045] 特公昭 56— 54158号公報に記載された方法に準じ、ハムスター体内で増殖させた BALL— 1細胞に培養培地中でセンダイウィルスを作用させて HuIFN— aを誘発させた。この培養培地を遠心分離して得られた上清を濃縮し、濃縮物にフエ-ルセファロースを用いるァフィユティークロマトグラフィーを適用することにより、比活性約 10⁶ 国際単位 Zmg蛋白質の部分精製 HuIFN— αを得た。次に、この部分精製 HuIFN αを、常法により、モノクローナル抗 HuIFN— α抗体を水不溶性担体に結合させた抗体カラムを用、るァフィユティークロマトグラフィーによりさらに精製した後、ゼラチン約 0. lmg/mlを含有する燐酸緩衝液 (ρΗ7. 0)で平衡ィ匕させたゲル濾過クロマトグラフィーを適用することにより、比活性約 2 X 10⁸国際単位/ mgの精製 HuIFN — αを含有する BALL— 1IFN溶液を得た。本品を、高速液体クロマトグラフィーで分析し、その活性を比較したところ、 HuIFN— αの総活性対して、サブタイプ《8を約 25%とサブタイプ a 2を約 75%含有していた。

[0046] このようにして調製した BALL— 1由来の精製 HuIFN— αを約 5mg蛋白質 Zmlにまで膜濃縮し、 1 % (WZV)ゼラチンと 0. 01M燐酸緩衝液 (pH7. 0)を含有する生理食塩水に HuIFN— α濃度が 300国際単位 Zmlになるよう希釈し、膜濾過して滅菌した後、バイアルに lmlずつ無菌的に充填し、凍結乾燥した。

[0047] 本品は、有効成分として BALL— 1細胞由来の精製 HuIFN— aを含有し、ゥシをはじめとする動物の乳房炎治療用注射剤として有用である。

実施例 2

[0048] <組換え型サブタイプ α 2及びサブタイプ α 8 >

開 2002— 201141号公報の実験 1— 1 (a)及び実験 1— 1 (b)の方法に準じて、組換え型サブタイプ oc 8 (比活性、約 3 X 10⁸国際単位 Zmg蛋白質)及び組換え型サブタイプ a 2 (比活性、約 8 X 10⁷国際単位/ mg蛋白質)の精製標品を調製した。

[0049] このようにして調製したサブタイプ ex 8標品とサブタイプ ex 2標品を各々約 2mg蛋白質 Zmlにまで膜濃縮後、サブタイプ a 8とサブタイプ a 2とを、活性比で 1： 3となるように混合し、 1 % (WZV)局方精製ゼラチンと 0. 01M燐酸緩衝液 (pH⁷. 0)を含有する生理食塩水に HuIFN— α濃度が 100国際単位 Zmlになるよう希釈し、膜濾過して滅菌した後、バイアルに lmlずつ無菌的に充填し、凍結乾燥した。

[0050] 有効成分として組換え型の精製サブタイプ a 8とサブタイプ a 2とを含有せしめた本品は、治療効果及び副作用において実施例 1の注射剤よりやや劣るものの、ゥシをはじめとする動物の乳房炎治療用注射剤として有用である。

実施例 3

[0051] 実施例 1と同様にして BALL— 1細胞にセンダイウィルスを作用させて調製した精製 BALL—1IFNを、 3% (wZv)ゼラチンと 0. 1M燐酸緩衝液 (pH7. 0)を含有する生理食塩水に HuIFN—ひ濃度が 1, 000国際単位 Zmlとなるように希釈し、膜濾過して滅菌した後、バイアルに lmlずつ充填し、凍結乾燥した。

[0052] 本品は、実施例 1の注射剤と同様、有効成分として BALL— 1細胞由来の精製 Hul FN— αを含有し、対象動物の乳房炎治療用注射剤として有用である。

実施例 4

[0053] 蒸留水にマン-トールを 2% (w/v)溶解し、溶液に実施例 1の方法で調製した BA LL—1細胞由来の部分精製 HuIFN— αを含有する溶液をカ卩え、 lg当たり HuIFN — aを 75国際単位含有する HuIFN— a溶液を得た。この溶液 32質量部に 0. 5質量部の「ツイーン 80」を 15質量部のエタノールに溶解して混合し、さらに、その混合物に 0. 5質量部のトリエタノールアミンを 15質量部のグリセリンに溶解して混合した後、小量のトリエタノールアミンを加えて、 ml当たり HuIFN— αを約 25国際単位含む、ほぼ中性のゲル状製剤を得た。

[0054] 有効成分として BALL— 1細胞由来の HuIFN— aを含有する本品は、適度の口腔内滞留時間を有し、患畜に飲ませ易、乳房炎治療用ゲル状経口用剤である。実施例 5

[0055] 無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」 ) 100質量部に実施例 1の方法で調製した BALL— 1細胞由来の精製 HuIFN— a (約 10⁸国際単位 Zml) 3質量部を均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度 1 00乃至 500ミクロンの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の「ファイントース」を均一に混合し、 lg当たり HuIFN—ひを約 300国際単位含む散剤を得た。

[0056] 本品は適度の口腔内滞留時間と優れた保存安定性を有し、動物の乳房炎治療剤として有用である。本品は適度の甘味を有し、動物の口腔内に投与しても刺激が少なぐ対象動物に飲ませ易い散剤である。

実施例 6

[0057] 無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」 ) 100質量部に実施例 1の方法で調製した BALL— 1細胞由来の部分精製 HuIFNを含有する水溶液 (約 2, 000国際単位 Zml) 15質量部を均一に混ぜた後、打錠機にカゝけて顆粒剤を得た。

[0058] 本品は、 lg当たり HuIFN— aを約 250国際単位含み、優れた保存安定性を有し、動物の乳房炎治療用散剤として有用である。また、本品は適度の甘味を有し、動物の口腔内に投与しても刺激が少なぐ対象動物に飲ませ易い顆粒剤である。

[0059] 健康なゥシ 5頭に、本品 0. 8gを、各々分娩予定日の 7日前に 1回投与した。また、健康なゥシ 8頭に、本品 0. 8g (投与 1回当たり）を、各々、分娩の予定日の 7日前から、 1日 1回連日 3日間投与した。分娩 1ヶ月後及び 2ヶ月後の乳汁中の体細胞数を計測して、その平均値を計算したところ、本品 1回投与群の、分娩 1ヶ月後及び 2ヶ月後の乳汁中の体細胞数は、各々、 11. 7万個 Zmlと 7. 4万個 Zmlとなり、 3回投与群では、各々 11. 7万個 Zmlと 6. 1万個 Zmlとなった。何も投与しな力つた健康なゥシ 6頭の、分娩 1ヶ月後及び 2ヶ月後の乳汁中の体細胞数の平均は、各々 6. 6万個 Z mlと 13. 3万個 Zmlであった。本品を投与した場合には、 1回投与及び 3回投与の何れの場合においても、分娩 1ヶ月後よりも 2ヶ月後の体細胞数が減少していたのに対して、何も投与しな力つたゥシでは、分娩 1ヶ月後よりも 2ヶ月後の体細胞数が増加したことから、本品には、乳房炎の抑制効果があることが確認された。

実施例 7

[0060] 無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」 ) 100質量部に市販の HuIFN— β製剤 (持田製薬株式会社販売、商品名「IFN β注射用 600 万 I. U.」）を蒸留水 lmlに溶解したもの 4質量部を均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度 100乃至 500ミクロンの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の「ファイントース」を均一に混合し、 lg当たり HuIFN— j8を約 100国際単位含む散剤を得た。 [0061] この HuIFN— β製剤を使用して、実験 3の方法に準じて乳房炎の症状を呈する 3 乃至 4歳と推定されるブタ 30頭を使用して、 10国際 (I. U. )単位 Zkg体重を 7日間、経口投与したところ、奏功率は約 47%となり、本品は、無投与群（20頭、奏功率 5 %)に比して、有意に高い奏功率を示したことから、乳房炎に対する治療効果があると判断された。

[0062] また、実験 3の方法に準じて、乳房炎の症状を呈する 3乃至 4歳と推定されるブタ 2 0頭を使用して、前記 HuIFN— |8製剤を 5国際 (I. U. )単位 Zkg体重と実験 4で調製した 200国際単位/ gの組み換え型サブタイプ a 8の製剤 10国際単位/ kg体重とを、 7日間、経口投与したところ、奏功率は 50%となり、本品及び組み換え型サブタイブ a 8製剤の併用は、 20頭のブタにサブタイプ a 8の製剤を 15国際単位/ kg体重投与した群 (奏功率 40%)、及び、無投与群（10頭、奏功率 10%)に比して、有意に高い奏功率を示したことから、ブタの乳房炎に対する優れた治療効果があると判断された。

[0063] 前記 HuIFN— β製剤は適度の口腔内滞留時間と優れた保存安定性を有して、る。し力も、上記の試験結果は、 HuIFN— |8製剤が、ブタの乳房炎治療剤として有用であること、及び、 HuIFN— β製剤は、 HuIFN— α製剤と併用すると、 HuIFN- a 製剤の治療効果を増強させることができることが判明した。また、この HuIFN— 製剤は適度の甘味を有し、動物の口腔内に投与しても刺激が少なぐ対象動物に飲ませ易い散剤である。

実施例 8

[0064] 無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」 ) 100質量部に、市販されている注射用の組み換え型ネコ IFNの凍結乾燥性剤 (株式会社東レ製造、商品名「インターキャット」）に、 1mlの生理食塩水を加えて溶解 (約 10⁷単位/ ml)したもの 2質量部を均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度 10 0乃至 500ミクロンの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の「ファイントース」を均一に混合し、 lg当たりネコ IFNを約 20単位含む散剤を得た。なお、本品の IFN活性は、商品の添付資料に記載された活性をもとに算出した。

[0065] 本品は適度の口腔内滞留時間と優れた保存安定性を有し、ネコの乳房炎治療剤として有用である。本品は適度の甘味を有し、動物の口腔内に投与しても刺激が少なぐ動物に飲ませ易い散剤である。

実施例 9

[0066] 実験 1でヒト白血球 IFNを製造した方法に準じて、ゥシの末梢血力分離した白血球に、センダイウィルスを作用させてゥシ IFN— aを誘発し、精製して、比活性 1 X 1 0⁷国際単位/ mgの標品を得た。この標品生理食塩水溶液 2質量部 (約 10⁸国際単位 Zml)を無水結晶マルトース (株式会社林原商事販売、商品名「ファイントース」） 1 00質量部に、均一に噴霧し、真空乾燥し、粉砕した後、篩にかけて粒度 100乃至 50 0ミクロンの粉状物を得た。粉状物にさらに適当量の「ファイントース」を均一に混合し、 lg当たりゥシ IFN— αを約 200単位含む散剤を得た。なお、本品のゥシ IFN— a の活性は、シンドビスウィルスによる MDBK細胞（ゥシ腎由来）の細胞変性を抑制する度合いを、 MTTにより測定し、 HuIFN— αの国際標準品を標準として決定される「国際単位」に換算して表示した。

[0067] 本品は適度の口腔内滞留時間と優れた保存安定性を有し、ゥシをはじめとする動物の乳房炎治療剤として有用である。本品は適度の甘味を有し、動物の口腔内に投与しても刺激が少なく、動物に飲ませ易、散剤である。

産業上の利用可能性

[0068] 本発明の治療剤が有効成分として含有する IFNは、動物の乳房炎に小用量でも著効を発揮するので、小用量投与の場合は、飼主の経済的負担を大幅に低減する。同じ理由により、本発明の治療剤によるときには、 IFNを必ずしも動物の血管内に投与する必要が無くなり、経口投与や、皮内、皮下、筋肉内などの血管以外の経路より非経口的に投与することによつても、所期の効果が得られる。これにより、神経質で警戒心が強い動物にも所定量の HuIFNを確実、且つ、容易に投与できることとなり、医者や獣医師等の治療担当者の労力'負担も大幅に低減する。また、本発明の治療剤は乳牛の難治性を含む乳房炎に対しても顕著な治療効果を発揮することから、乳牛の乳房炎による経済的損失を大きく軽減することができる。このような優れた効果を有する本発明は、医学や畜産分野に貢献することとなり、その産業的意義は極めて大きい。

Claims

請求の範囲

[I] 有効成分としてインターフェロンを含んでなる哺乳動物の乳房炎治療剤。

[2] インターフェロンがヒト、ゥシ、ゥマ、ブタ、ネコ、ィヌの何れかに由来するインターフェロン力選ばれる何れか 1種又は 2種以上である請求の範囲第 1項記載の乳房炎治療剤。

[3] インターフェロンがヒトインターフェロン aである請求の範囲第 1項又は第 2項記載の乳房炎治療剤。

[4] インターフェロンがヒトインターフェロン at及びヒトインターフェロン 13である請求の範囲第 1項又は第 2項記載の乳房炎治療剤。

[5] ヒトインターフェロン α中にサブタイプ α 8とサブタイプ α 2とを、活性比で 1： 9乃至 1

0： 0の割合で含有して、る請求の範囲第 3項又は第 4項記載の乳房炎治療剤。

[6] インターフェロンが、治療剤 lg当たり約 0. 005乃至 5, 000国際単位含有せしめられている請求の範囲第 1項乃至第 5項の何れかに記載の乳房炎治療剤。

[7] 投薬形態が経口投与形態、経鼻投与形態または非経口投与形態から選ばれる何れかである請求の範囲第 1項乃至第 6項の何れかに記載の乳房炎治療剤。

[8] 乳房炎が微生物感染に起因することを特徴とする請求の範囲第 1項乃至第 7項の何れかに記載の乳房炎治療剤。

[9] 乳房炎が難治性であることを特徴とする請求の範囲第 1項乃至第 8項の何れかに記載の乳房炎治療剤。

[10] 哺乳動物がヒト、ゥシ、ゥマ、ブタ、ネコ、ィヌの何れかであることを特徴とする請求の範囲第 1項乃至第 9項の何れかに記載の乳房炎治療剤。

[I I] インターフェロンを、ヒトを除く哺乳動物の体重 lkg当たり約 0. 005乃至 5, 000国際単位 Z回投与することを特徴とする哺乳動物の乳房炎の治療方法。

[12] インターフェロンがヒトインターフェロン αである請求の範囲第 11項記載の乳房炎の治療方法。

[13] インターフェロンがヒトインターフェロン at及びヒトインターフェロン 13である請求の範囲第 11項記載の乳房炎の治療方法。

[14] ヒトインターフェロン a中にサブタイプ a 8とサブタイプ (X 2とを、活性比で、 1： 9乃至 10:0の割合で含有している請求の範囲第 12項又は第 13項記載の乳房炎の治療方法。