WO2006132245A1 - 腫瘍増殖抑制剤 - Google Patents

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WO2006132245A1
WO2006132245A1 PCT/JP2006/311329 JP2006311329W WO2006132245A1 WO 2006132245 A1 WO2006132245 A1 WO 2006132245A1 JP 2006311329 W JP2006311329 W JP 2006311329W WO 2006132245 A1 WO2006132245 A1 WO 2006132245A1
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WO
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tumor growth
growth inhibitor
prorenin
amino acid
sequence
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PCT/JP2006/311329
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English (en)
French (fr)
Inventor
Masaru Ishii
Yuko Kiyono
Harumasa Yokota
Atsuhiro Ichihara
Yuichi Ishida
Original Assignee
Protein Express Co., Ltd.
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Publication date
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/46—Hydrolases (3)
    • A61K38/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • A61K38/488—Aspartic endopeptidases (3.4.23), e.g. pepsin, chymosin, renin, cathepsin E
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Definitions

  • the present invention relates to a tumor growth inhibitor comprising, as an active ingredient, a polypeptide having a partial sequence ability selected from the N-terminal 1 to 18th sequences in the amino acid sequence of the profragment region of prorenin or an equivalent peptide thereof It is about.
  • Tumor growth inhibitors include alkylating agents, antibiotics that affect nucleic acids (such as doxorubicin), platinum complexes, alkaloid antitumor drugs, antimetabolites (such as 5-fluorouracil), toposomerase inhibitors, biological It falls into several categories, such as response modifiers (such as interferon) and hormone therapy (such as tamoxifen). These anticancer agents directly exert a growth inhibitory effect on tumor cells by various action mechanisms.
  • nucleic acids such as doxorubicin
  • platinum complexes such as platinum complexes
  • antimetabolites such as 5-fluorouracil
  • toposomerase inhibitors such as 5-fluorouracil
  • response modifiers such as interferon
  • hormone therapy such as tamoxifen
  • Ang II endogenous angiotensin II
  • Inhibitors of Ang II-producing enzymes and Ang II receptor antagonists each have almost the same organ-protecting action, but have also been suggested to have a tumor growth-suppressing action.
  • Angiotensin-converting enzyme inhibitor (ACE inhibitor) has the effect of inhibiting ACE, an enzyme that converts angiotensin KAng I) into Ang II. The rate was reported to be significantly lower.
  • Ang II is involved in angiogenesis and tumor growth by using Ang II receptor antagonists and Ang II receptor knockout mice (Non-patent Documents 1 and 2).
  • the renin-angiotensin system (RAS) that produces Ang II includes circulating RAS and tissue RAS.
  • RAS renin-angiotensin system
  • tissue RAS Independent of the physiological circulation RAS essential for maintaining homeostasis such as blood pressure and body fluid in the body, the activity of RAS in tissues at the time of disease increased by increasing the concentration of Ang II in the tissues Ang II is thought to be deeply involved in the development and development of hypertension, diabetic complications, kidney disease, heart failure, etc., by specifically acting through receptors.
  • Renin is a rate-limiting enzyme that produces Ang I in RAS. Renin is biosynthesized mainly in the kidney as pre-pro-renin consisting of 406 amino acids as its precursor. The N-terminal 23 amino acids are then cleaved to produce prorenin, followed by a 43 amino acid fragment (also referred to as “profragment” or “pf”) force terminal force and further cleaved to 340 It becomes renin (also referred to as “ripe renin”) that also has amino acid power. Prorenin usually does not show enzyme activity, but when it binds in vitro with an antibody that specifically recognizes the pro-fragment site to form an immune complex, it expresses enzyme activity (renin-like activity) (Patent Documents 1 and 2).
  • tissue RAS activation can be controlled by administering a partial peptide derived from a prorenin profragment to a streptozotocin (STZ) diabetic model animal.
  • STZ streptozotocin
  • renal glomerulosclerotic lesions derived from diabetes can be suppressed by administering a partial peptide derived from prorenin profragment to a model animal with TZ diabetes mellitus (Patent Document 3).
  • Patent Document 1 Japanese Patent No. 3271157
  • Patent Document 2 US Pat. No. 5,945,512
  • Patent Document 3 International Publication No. WO2004 / 073740
  • Non-patent document 1 History of medicine, 207: 35-40, (2003)
  • Non-Patent Document 2 Biochem. Biophys. Res. Commun, 294: 441-447, (2002)
  • An object of the present invention is to provide a novel tumor growth inhibitor.
  • the present invention comprises the inventions described below.
  • a tumor growth inhibitor comprising, as an active ingredient, a polypeptide consisting of a partial sequence selected from the N-terminal 1-18th sequence in the amino acid sequence of the profragment region of prorenin or an equivalent peptide thereof.
  • the novel tumor growth inhibitor of the present invention it is possible to provide a tumor growth inhibitory effect superior to conventionally known ACE inhibitors and the like.
  • This tumor growth inhibitor can usually be used in the treatment of tumors, but other tumor growth inhibitors including ACE inhibitors, etc. are not effective or are less effective! It is likely to be effective.
  • FIG. 1 shows a comparison of the final body weight of mice.
  • FIG. 2 shows the change over time (mm 3 ) in the average tumor volume of human liver cancer transplanted with nude mice.
  • the present invention relates to a tumor growth inhibitor comprising, as an active ingredient, a polypeptide having a partial sequence ability selected from the N-terminal 1 to 18th sequences in the amino acid sequence of the profragment site of prorenin or an equivalent peptide thereof It is about.
  • An anti-human p vehicle which is an antibody that specifically recognizes the profragment site of human prorenin, activates human prorenin in vitro.
  • Human pf peptides derived from the profragment site of human prorenin are known to competitively inhibit human prorenin activity in vitro by anti-human p-navigators.
  • rat pf peptide which is an antigen of anti-rat P vehicle, can competitively inhibit rat prorenin activity in vitro by anti-rat P vehicle.
  • these peptides do not involve changes in the primary structure of rat prorenin due to the protein-protein interaction by competitively inhibiting the binding of prorenin and prorenin-binding protein, but there is an activity associated with higher-order structural changes. (Also referred to as “non-enzymatic prorenin activation”).
  • the present inventors previously obtained an antihypertensive effect when a partial peptide derived from rat prorenin profragment was administered to a rat hypertensive pathological model SHR.
  • these peptides were administered to normal rats, blood pressure Reported that it did not fluctuate.
  • the antihypertensive effect of the peptide was observed over a long period of time, unlike the renin inhibitor (H6137: Sigma) by the renin neutralizing antibody. Therefore, it is considered that the antihypertensive effect by the peptide is not due to inhibition of renin activity (International Publication No. WO01 / 077673).
  • the partial peptide derived from rat prorenin pro-fragment has the ability to significantly reduce renal Ang II in STZ rats and does not change Ang II in normal rats (International Publication No. WO2004 / 07). 3740). These effects are presumed to be due to the fact that the above peptides inhibited the non-enzymatic activity of rat prorenin in vivo.
  • non-enzymatically activated prorenin is the same as the enzyme action of fully-ripened renin (referred to as “renin-like activity”), but is distinguished from the activity of fully-ripened renin. Is.
  • the peptide contained as an active ingredient in the tumor growth inhibitor of the present invention antagonizes the binding between prorenin and its binding protein, thereby exerting an inhibitory effect on nonenzymatic prorenin activity. It is thought that it inhibits tumor angiogenesis and shows a tumor growth inhibitory effect.
  • the above peptide does not have an action of inhibiting the renin activity, which is an important feature of the tumor growth inhibitor of the present invention.
  • This feature inhibits prorenin activity during a disease state that inhibits RAS, which plays an important role in the life-support mechanism of living organisms, like renin inhibitors, and lowers the tissue in the downstream region due to antagonistic inhibition. g II production can be suppressed.
  • the tumor growth inhibitor of the present invention does not have a direct cell growth inhibitory effect on tumor cells like known anticancer agents.
  • amino acid sequence of the prorenin profragment is known (SEQ ID NO: 1 below).
  • the partial peptide which is an active ingredient of the present invention consists of an amino acid sequence selected from the N-terminal first leucine force from the 18th serine sequence (LPTDTTTFKR IFLKRMPS (SEQ ID NO: 2)).
  • the potent partial peptide has a continuous amino acid sequence of 2 to 8, preferably 2 to 5. More preferably, the partial peptide is an amino acid sequence comprising at least one of the N-terminal 11th to 13th sequences, the 13th to 15th sequences, and the 11th to 15th sequences.
  • an N-terminal 11-18th peptide having an amino acid sequence is suitably used.
  • the active ingredient of the present invention may be an equivalent peptide of the above partial peptide.
  • the amino acids that make up a strong equivalent peptide need not necessarily be identical to the amino acid sequence of the profragment site.
  • Equivalent peptides have the same effect as the above partial peptides, that is, inhibition of nonenzymatic prorenin activity. As long as it has a detrimental effect, it includes peptides in which mutations such as deletions, substitutions, additions and insertions are appropriately introduced into the amino acid sequences of the partial peptides.
  • the tumor growth inhibitor of the present invention may contain one of the aforementioned peptides, or may contain two or more in combination! /.
  • the formulation of the tumor growth inhibitor of the present invention known methods can be appropriately applied depending on the physical properties of the peptide.
  • preparation methods such as tablets, capsule preparations, aqueous solution preparations, ethanol solution preparations, ribosome preparations, fat emulsions, and inclusion bodies such as cyclodextrins can be used.
  • Powders, pills, capsules and tablets are excipients such as ratatoses, disintegrants such as starch, lubricants such as magnesium stearate, binders such as polyvinyl alcohol, surfactants such as fatty acid esters, glycerin It can manufacture using plasticizers.
  • solid pharmaceutical carriers are used for the production of tablets and capsules.
  • Suspensions can be produced using water, sugars such as sucrose, glycols such as PEG, and oils.
  • Solutions for injection can be prepared using a carrier that can be a salt solution, a glucose solution, or a mixture of saline and glucose solution.
  • a solution in which the substance is dissolved in a solvent such as ethanol
  • a solution in which the phospholipid is dissolved in an organic solvent is added to a solution in which the phospholipid is dissolved in an organic solvent, and then the solvent is distilled off, and a phosphate buffer is added thereto. After shaking, sonication and centrifugation, the supernatant can be filtered and collected.
  • fat emulsification for example, the substance, oil component (vegetable oil, etc.), emulsifier (phospholipid, etc.), etc. are mixed and heated to form a solution, and then the required amount of water is added and emulsification is performed using an emulsifier. This can be done by homogenization. It is also possible to freeze-dry it.
  • emulsification aids to which an emulsification aid may be added when emulsifying fat include glycerin and sugar condyles.
  • the cyclodextrin inclusion complex is prepared by dissolving the substance in a solvent (such as ethanol). A solution obtained by dissolving cyclodextrin in water or the like in water is added to the solution, and then the precipitate formed by cooling is filtered and sterilized and dried.
  • the cyclodextrin to be used may be appropriately selected from cyclodextrins having different pore diameters ( ⁇ , y type) according to the size of the substance.
  • the tumor growth inhibitor of the present invention can be administered intravenously, intramuscularly or other injections, suppositories, transdermal, intraperitoneal administration, or the like, or can be administered orally. Therefore, parenteral administration is preferable.
  • the dosage is determined appropriately according to the individual case in consideration of the symptoms, age of the subject, sex, etc. Normally 0.05 to 100 mg / kg, preferably 0.1 to 50 mg / kg per day per adult More preferably, it is administered in the range of 1 to 20 mg / kg. For example, once a day, the force may be divided into several times to be intravenously administered, or may be continuously administered intravenously in the range of 1 to 24 hours per day or subcutaneously implanted continuously.
  • the dosage varies depending on various conditions, an amount smaller than the above dosage range may be sufficient.
  • it can be frozen after filling into a nozzle, etc., and the liquid can be removed by ordinary freeze-drying treatment. .
  • the type of tumor to which the tumor growth inhibitor of the present invention is applied is not particularly limited, but it is preferably used for solid tumors.
  • solid tumors include liver cancer.
  • a peptide derived from human prorenin and having the sequence IF LKRMPS (SEQ ID NO: 3) from the N-terminal 11th isoleucine to the 18th serine was synthesized by a solid phase method as usual.
  • this peptide was used as an h-human prorenin peptide (also referred to as “pfl 1-18 peptide”).
  • HCC Hepatocel lular Carcinoma
  • HCC cell pieces were spread in a petri dish containing 5 mL of sterile saline and transplanted one by one on the right and left back of nude mice.
  • the cut with scissors was pinched with tweezers and closed.
  • the wound was disinfected with 70% ethanol disinfectant cotton. After that, I waited for the wound to close naturally. Usually, the wound was closed clean in about one day.
  • the h-prorenin peptide (pfl 1-18 peptide) of the present invention was intraperitoneally administered to 5 mice at 10 mg / kg / day and lmg / kg / day every day.
  • the peptide solution to be administered was prepared to have a concentration of 0.25 mg / mL and 2.5 mg / mL, respectively, in a sterile diet.
  • pfl l_18 peptide 5 mg / vial was dissolved in 5 mg / mL sterile saline, then diluted 2 times with sterile saline, and stored at ⁇ 20 ° C.
  • pfl l-18 Peptide 5mg / vial is dissolved in 5mg / mL sterilized saline, and 0.5mL is added to 9.5mL sterilized saline, diluted 20-fold, prepared in 1mL vials, and stored at -20 ° C. did.
  • body weight was measured, and injection was performed at about 100 to 150 L using a 25G needle and a tuberculin syringe.
  • Sterile saline was used for the negative control
  • captopril (ACE inhibitor) was used for the positive control
  • captopril was administered at a concentration of 2.5 mg / mL in the sterile saline so that the concentration was 10 mg / kg / day.
  • the state of the mouse was recorded with a digital camera and video, and body weight and tumor diameter were measured every day. Tumor diameter was measured by measuring longitudinal X transverse using calipers and started on day 13 after liver cancer transplantation.
  • Table 1 shows the results of measuring the amount of endogenous prorenin.
  • FIG. 1 shows the final weight comparison on day 22. There was little difference in final body weight in all groups.
  • Table 2 and FIG. 2 show the time course of the average tumor volume of human liver cancer transplanted from nude mice from day 12 to day 21.
  • the pfl l-18 peptide lmg / kg / day group (c) the pfl l-18 peptide 10 mg / kg / day group (d), and captopril
  • the administration group (b) suppression of increase in tumor volume was observed.
  • the pfl 1-18 peptide 10 mg / kg / day administration group (d) was higher than the pfl 18 peptide lmg / kg / day administration group (c), confirming the tumor volume increase inhibitory effect.
  • the novel tumor growth inhibitor of the present invention a tumor growth inhibitory effect superior to conventionally known angiotensin converting enzyme inhibitors and the like can be brought about.
  • this tumor growth inhibitor is used in the treatment of tumors, side effects are suppressed to a low level, and it may be effective for patients with strong disease states that cannot be obtained with tumor growth inhibitors such as ACE inhibitors. It is considered high.

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Abstract

　本発明の課題は、新規な腫瘍増殖抑制剤を提供することである。かかる課題は、プロレニンのプロフラグメント領域のアミノ酸配列において、N末端の１～１８番目の配列より選択される部分配列からなるポリペプチド又はその等価ペプチドを有効成分として含有する腫瘍増殖抑制剤により解決される。前記部分配列は、２～８個のアミノ酸配列であることが好ましい。本発明の腫瘍増殖抑制剤は、従来のアンジオテンシン変換酵素阻害剤等より、高い腫瘍増殖抑制効果を発揮し得ると考えられる。

Description

明 細 書
腫瘍増殖抑制剤
技術分野
[0001] 本発明は、プロレニンのプロフラグメント領域のアミノ酸配列において、 N末端の 1〜 18番目の配列より選択される部分配列力 なるポリペプチド又はその等価ペプチド を有効成分として含有する腫瘍増殖抑制剤に関するものである。
[0002] 本出願は、参照によりここに援用されるところの、日本特許出願特願 2005- 16529 5号からの優先権を請求する。
背景技術
[0003] 腫瘍増殖抑制剤は、アルキル化剤、核酸に影響する抗生物質 (ドキソルビシン等） 、白金複合体、アルカロイド系抗腫瘍薬、代謝拮抗剤 (5-フルォロウラシル等)、トポィ ソメラーゼ阻害剤、生体反応調整剤 (インターフェロン等）、ホルモン療法剤 (タモキシ フェン等）のような幾つかのカテゴリーに分類される。これらの制癌剤は、種々の作用 機序により、直接腫瘍細胞に対して増殖抑制作用を発揮する。
[0004] 近年、内因性のアンジォテンシン II (Ang II)が腫瘍血管新生に関与していることが 明らかになりつつある。 Ang IIの産生酵素の阻害剤や Ang II受容体拮抗剤は、各々 単独で略同等の臓器保護作用を有するが、腫瘍増殖抑制作用を有する可能性も示 唆されている。アンジォテンシン変換酵素阻害剤 (ACE阻害剤）は、アンジォテンシン KAng I)を Ang IIに変換する酵素 ACEを阻害する作用を有し、 ACE阻害剤を連用し ていた患者では、癌による死亡率が有意に低いことが報告された。また、 Ang II受容 体の拮抗剤及び Ang II受容体のノックアウトマウスを用いることにより、血管新生及び 腫瘍増殖に Ang IIが関与していることが確認された (非特許文献 1、 2)。
[0005] Ang IIを産生するレニン一アンジォテンシン系（RAS)には、循環 RASと組織 RASが ある。生体の血圧や体液などの恒常性維持に必須の生理的循環 RASと独立して、病 態時の組織における RASの活性ィ匕は、組織中の Ang IIの濃度を上昇させて、増加し た Ang IIが特異的に受容体を介して働くことにより、高血圧、糖尿病合併症、腎疾患 、心不全等の発症と進展に深く関与していると考えられている。従来、降圧剤として、 ACE阻害剤や Ang II受容体拮抗剤が用いられてきた力 エスケープ現象といわれる Ang II又は Ang II効果の再上昇のため、単独の治療効果には限界の存在が示唆され ている。
[0006] レニンは、 RASにおいて Ang Iを生成する律速酵素である。レニンは、主に腎臓にお いて、その前駆体である 406個のアミノ酸からなるプレブロレニン（pre-pro-renin)とし て、生合成される。その後、 N末端の 23個のアミノ酸が切断されてプロレニンが生じ、 つ ヽで 43個のアミノ酸断片 (「プロフラグメント」又は「pf」とも称する。 )力 末端力 さら に切断されて、 340個のアミノ酸力もなるレニン（「完熟レニン」とも称する。）となる。プ ロレニンは通常は酵素活性を示さないが、前記プロフラグメント部位を特異的に認識 する抗体と in vitroで結合して免疫複合体を形成すると、酵素活性 (レニン様活性)を 発現するようになることが知られて 、る（特許文献 1及び 2)。
[0007] 本発明者等は、先にプロレニンのプロフラグメント由来の部分ペプチドを、ストレプト ゾトシン (STZ)糖尿病病態モデル動物に投与することにより、組織 RASの活性化を制 御しうることを見い出した。また、プロレニンプロフラグメント由来の部分ペプチドを、 S TZ糖尿病病態モデル動物に投与することにより、糖尿病に由来する腎糸球体硬化 病変を抑制しうることを見 ヽ出した (特許文献 3)。
し力しながら、プロレニンのプロフラグメント由来の部分ペプチドを有効成分として含 む腫瘍増殖抑制剤につ 、ての報告はな 、。
特許文献 1：特許第 3271157号
特許文献 2：米国特許第 5945512号
特許文献 3：国際公開第 WO2004/073740号
非特許文献 1：医学のあゆみ， 207: 35-40, (2003)
非特許文献 2 : Biochem. Biophys. Res. Commun, 294: 441-447, (2002)
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0008] 本発明の課題は、新規な腫瘍増殖抑制剤を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0009] 本発明者らは、プロレニンのプロフラグメント領域のアミノ酸配列において、 N末端の 1〜18番目の配列より選択される部分配列力もなるポリペプチドが、腫瘍増殖抑制効 果を有することを見出し、新規な腫瘍増殖抑制剤を提供することを可能にした。
[0010] すなわち、本発明は以下に記載の発明からなる。
1.プロレニンのプロフラグメント領域のアミノ酸配列において、 N末端の 1〜18番目の 配列より選択される部分配列からなるポリペプチド又はその等価ペプチドを有効成分 として含有する腫瘍増殖抑制剤。
2.前記部分配列が、 2〜8個のアミノ酸配列である前項 1に記載の腫瘍増殖抑制剤
3.前記部分配列力 N末端の 11〜13番目の配列、 13〜15番目の配列、及び 11〜 15番目の配列のうち、少なくともいずれ力 1配列を含むアミノ酸配列である前項 1又 は 2に記載の腫瘍増殖抑制剤。
4.前記部分配列が、 N末端の 11〜18番目のアミノ酸配列である前項 1〜3の何れか 一に記載の腫瘍増殖抑制剤。
5.固型腫瘍に対して使用する前項 1〜4の何れか一に記載の腫瘍増殖抑制剤。
6.肝癌に対して使用する前項 5に記載の腫瘍増殖抑制剤。
発明の効果
[0011] 本発明の新規な腫瘍増殖抑制剤によれば、従来公知の ACE阻害剤等より優れた 腫瘍増殖抑制効果をもたらすことが可能となる。本腫瘍増殖抑制剤は、通常、腫瘍 に対する治療において用いられ得るが、 ACE阻害剤等を含む他の腫瘍増殖抑制剤 では効果が得られな 、又は効果が低!、病態の患者に対して、有効である可能性が 高い。
図面の簡単な説明
[0012] [図 1]マウスの最終体重の比較を示す。
[図 2]ヌードマウス移植ヒト肝癌平均腫瘍体積の経時的変化量 (mm3)を示す。
符号の説明
[0013] a 生食
b カプトプリル 10mg/kg
c pfU- 18ペプチド lmg/kg d pfl 1-18ペプチド lOmg/kg
発明を実施するための最良の形態
[0014] 以下、本発明を詳しく説明するが、本明細書中で使用されている技術的及び科学 的用語は、別途定義されていない限り、本発明の属する技術分野において通常の知 識を有する者により普通に理解される意味を持つ。本明細書中では当業者に既知の 種々の方法が参照されている。そのような引用されている公知の方法を開示する刊 行物等の資料は、それらを引用することにより本明細書中にそれらの全体が完全に 記載されて ヽるものとして導入される。
[0015] 本発明は、プロレニンのプロフラグメント部位のアミノ酸配列において、 N末端の 1〜 18番目の配列より選択される部分配列力 なるポリペプチド又はその等価ペプチド を有効成分として含有する腫瘍増殖抑制剤に関するものである。
[0016] ヒトプロレニンのプロフラグメント部位を特異的に認識する抗体である抗ヒト p航体は 、 in vitroでヒトプロレニンを活性化する。ヒトプロレニンのプロフラグメント部位に由来 するヒト pfペプチドは、抗ヒト p航体による in vitroでのヒトプロレニン活性ィ匕を拮抗阻害 することが既知である。これと同様に、抗ラット p航体の抗原であるラット pfペプチドも、 抗ラット P航体による in vitroでのラットプロレニン活性ィ匕を拮抗阻害することができる。 すなわち、これらのペプチドは、プロレニンとプロレニン結合性蛋白との結合を拮抗 阻害することにより、蛋白質間相互作用によっておこる、ラットプロレニンの一次構造 変化は伴わな 、が高次構造変化を伴う活性ィ匕（「非酵素的なプロレニン活性化」とも 称する。）を阻害することができる。
[0017] 先に本発明者らは、ラット高血圧病態モデル SHRにラットプロレニンプロフラグメント 由来の部分ペプチドを投与すると降圧効果が得られたが、正常ラットにこれらのぺプ チドを投与しても血圧は変動しな力つたことを報告した。また、該ペプチドの降圧効果 は、レニン阻害剤（H6137 : Sigma社)ゃレニン中和抗体によるものとは異なり、降圧効 果が長時間にわたって認められた。よって、該ペプチドによる降圧効果はレニン活性 の阻害によるものではないと考えられる（国際公開第 WO01/077673号)。また、ラット プロレニンプロフラグメント由来の部分ペプチドは、 STZラットでは腎臓内 Ang IIを有意 に減少させる力 正常ラットでは Ang IIを変化させな力つた（国際公開第 WO2004/07 3740号)。これらの効果は、上記ペプチドが、生体内におけるラットプロレニンの非酵 素的な活性ィ匕を阻害したことによるものと推測される。
ここで、非酵素的に活性化されたプロレニンの活性は、完熟レニンが有する酵素作 用と同様のもの（「レニン様活性」と称する。）であるが、完熟レニンの活性とは区別さ れるものである。
[0018] 本発明の腫瘍増殖抑制剤において有効成分として含有されるペプチドは、プロレ ニンとその結合性蛋白との結合に拮抗して、非酵素的プロレニン活性ィ匕の阻害作用 を発揮することにより、腫瘍血管新生を阻害し、腫瘍増殖抑制効果を示すと考えられ る。
また、上記ペプチドはその作用メカニズム力 レニン活性の阻害作用を有しな 、と 考えられ、これは本発明の腫瘍増殖抑制剤の重要な特徴である。この特徴により、生 体の生命維持機構に重要な役割を担っている RASをレニン阻害剤などの様に阻害 することなぐ病態時のプロレニン活性ィ匕を阻害し、拮抗阻害による下流域の組織 An g II産生を抑制することができる。本発明の腫瘍増殖抑制剤は、公知の制癌剤の様 な腫瘍細胞に対する直接的な細胞増殖抑制作用は認められない。
[0019] プロレニンのプロフラグメントのアミノ酸配列は公知である（下記の配列番号 1)。
(配列番号 1)
LPTDTTTFKR IFLKRMPSIR ESLKERGVDM ARLGPEWSQP MKR
本発明の有効成分である部分ペプチドは、 N末端の 1番目ロイシン力も 18番目セリ ンの配列（LPTDTTTFKR IFLKRMPS (配列番号 2) )より選択されるアミノ酸配列から なる。力かる部分ペプチドは 2個から 8個、好ましくは 2個から 5個の連続したアミノ酸 配列を有する。さらに好ましくは、部分ペプチドは、 N末端の 11〜13番目の配列、 13 〜15番目の配列、及び 11〜15番目の配列の少なくともいずれかの 1配列を含むァ ミノ酸配列である。このような部分ペプチドとして、 N末端の 11〜18番目の配列力もな るアミノ酸配列力 なるペプチドが好適に用いられる。本発明の有効成分は、上記部 分ペプチドの等価ペプチドであってもよ 、。力かる等価ペプチドを構成するアミノ酸 は、必ずしもプロフラグメント部位のアミノ酸配列と同一である必要はない。等価ぺプ チドは、上記部分ペプチドと同様の作用、すなわち非酵素的プロレニン活性ィ匕の阻 害作用を有するものであればよぐ上記部分ペプチドのアミノ酸配列に、適宜、欠失、 置換、付加、挿入などの変異を導入したペプチドを含む。もちろん、本発明の腫瘍増 殖抑制剤は、上述したペプチドのうち、 1種を含むものであってもよいし、 2種以上を 組み合わせて含むものであってもよ！/、。
[0020] これらペプチドは当該技術分野で公知の種々の方法によって作製することができる
。例えば、固相法により合成することができる。
[0021] 本発明の腫瘍増殖抑制剤の製剤化には、当該ペプチドの物性に応じて適宜公知 の方法が適用できる。例えば、錠剤、カプセル製剤、水溶液製剤、エタノール溶液製 剤、リボソーム製剤、脂肪乳剤、シクロデキストリンなどの包接体などの製剤化方法が 利用できる。
散剤、丸剤、カプセル剤及び錠剤は、ラタトースなどの賦形剤、澱粉などの崩壊剤 、マグネシウムステアレートなどの滑沢剤、ポリビニルアルコールなどの結合剤、脂肪 酸エステルなどの界面活性剤、グリセリンなどの可塑剤などを用いて製造できる。錠 剤やカプセルを製造するには、固体の製薬担体が用いられる。
懸濁剤は、水、シユークロースなどの糖類、 PEGなどのグリコール類、油類を使用し て製造できる。
注射用の溶液は、塩溶液、グルコース溶液、又は、塩水とグルコース溶液の混合物 力 なる担体を用いて調製可能である。
リボソーム化は、例えば、リン脂質を有機溶媒に溶解した溶液に、当該物質を溶媒 ( エタノールなど）に溶解した溶液を加えた後、溶媒を留去し、これにリン酸緩衝液を加 え、振盪、超音波処理及び遠心分離した後、上清を濾過処理して回収することにより 行うことができる。
脂肪乳剤化は、例えば、当該物質、油成分 (植物油など)、乳化剤 (リン脂質など） などを混合、加熱して溶液とした後に、必要量の水を加え、乳化機を用いて、乳化 · 均質ィ匕処理して行い得る。また、これを凍結乾燥ィ匕することも可能である。なお、脂肪 乳剤化するとき、乳化助剤を添加してもよぐ乳化助剤としては、例えば、グリセリン、 糖顆などが例示される。
シクロデキストリン包接ィ匕は、例えば、当該物質を溶媒 (エタノールなど）に溶解した 溶液に、シクロデキストリンを水などに加温溶解した溶液をカ卩えた後、冷却して析出し た沈殿を濾過し、滅菌乾燥することにより行い得る。この際、使用されるシクロデキスト リンは、当該物質の大きさに応じて、空隙直径の異なるシクロデキストリン（ひ、 β y 型)を適宜選択すればよい。
[0022] 本発明の腫瘍増殖抑制剤は、静注、筋注等の注射剤、坐剤、経皮、腹腔内投与等 による非経口投与、あるいは経口投与することができる力 安定性や吸収性を考慮 すると、非経口投与が好ましい。投与量は症状、投与対象の年齢、性別等を考慮し て個々の場合に応じて適宜決定される力 通常成人 1人当たり、 1日にっき 0.05〜10 00mg/kg、好ましくは 0.1〜50mg/kg、より好ましくは l〜20mg/kgの範囲で投与される 。例えば、 1日 1回力も数回に分け静脈内投与される力、又は、 1日 1時間〜 24時間 の範囲で静脈内持続投与、若しくは皮下埋め込み式持続投与をされてもよい。もち ろん前記したように、投与量は種々の条件で変動するので、上記投与量範囲より少 ない量で十分な場合もある。注射剤の場合は、安定性の点から、ノィアル等に充填 後、冷凍し、通常の凍結乾燥処理により水分を除き、使用直前に凍結乾燥物から液 剤を再調製して投与することもできる。
[0023] 本発明の腫瘍増殖抑制剤が適用される腫瘍の種類は、特には限定されないが、固 型腫瘍に対して使用することが好ましい。固型腫瘍としては、肝癌などが例示される。 実施例
[0024] 以下、実施例により本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定され るものではなぐ本発明の技術的思想を逸脱しない範囲内で種々の応用が可能であ る。
[0025] (実施例 1)
ヒトプロレニンに由来する、 N末端の 11番目イソロイシンから 18番目セリンの配列 IF LKRMPS (配列番号 3)を有するペプチドを固相法により常法どおり合成した。以下、 本ペプチドを h-ヒトプロレニンペプチド（「pfl 1-18ペプチド」とも称する。）として使用し た。
[0026] (実験例 1)
逾 以下の実験は、ヒト肝癌細胞移植ヌードマウスを用いて行った。
5週齢の BALB/c nu/nuマウス 25匹を準備した。移植ヒト肝癌細胞（HCC:Hepatocel lular Carcinoma)の成長した腫瘍を 50片ほどに細片し、 5週齢（雄） BALB/c nu/nuマ ウス 25匹中、 23匹に移植した。無菌生食水 5mLをカ卩えたシャーレに、 HCC細胞片を 広げ、ヌードマウスの左右の背中右に各一片ずつ移植した。ハサミで切った切り口は そのままピンセットでつまんで閉じた。 70%エタノール消毒綿で傷口を消毒した。その 後、傷口が自然に閉じるのを待った。通常、傷口は 1日程度できれいにふさがった。 その後毎日、本発明の h-プロレニンペプチド（pfl 1-18ペプチド）を、 10mg/kg/day 及び lmg/kg/dayで 5匹のマウスに腹腔内投与した。投与するペプチド溶液は滅菌生 食中に各々 0.25mg/mL及び 2.5mg/mLの濃度となるように調製した。 pfl l_18ペプチド 5mg/バイアルは 5mg/mL滅菌生食で溶解し、その後、滅菌生食で 2倍希釈して調製 し、 - 20°Cで保存した。 pfl l-18ペプチド 5mg/バイアルは 5mg/mL滅菌生食で溶解し、 9.5mL滅菌生食に 0.5mLをカ卩えて 20倍希釈し、 lmLずつバイアルにいれて調製し、 -2 0°Cで保存した。投与前には体重を測定し、 25G注射針、ッベルクリン注射器を用い て、約 100〜150 Lで注射した。陰性コントロールには滅菌生食を、陽性コントロール にはカプトプリル (ACE阻害剤）を用い、カプトプリルは 10mg/kg/dayとなるように、滅 菌生食中 2.5mg/mLの濃度で投与した。
デジタルカメラ及びビデオにて、マウスの様子を記録し、体重の測定、腫瘍径の測 定を毎日行った。腫瘍径の測定は、ノギスを用いて縦 X横を測定することにより行い 、肝癌移植後 13日目から始めた。
実験中、マウス移植肝癌細胞の成長は順調に進み、肝癌移植後 22日目には一部 の腫瘍でネクローシスが始まったので、腫瘍を摘出することとした。 22日目には、最 終体重測定、最終腫瘍重量測定、肝癌腫瘍のサンプリング、血清の採取を行った。 最終重量測定は採取した腫瘍の重量を測定した。肝癌腫瘍のサンプリングは、次の ようにして行った。まず、摘出腫瘍の半分を 10%ホルマリン固定液につけ、塊のまま保 存した。摘出腫瘍の残りの半分を 2〜3個に切り分け、 -80°Cに保存した。血清の採取 は、各マウスについて、それぞれ心臓採血にて血液を採取し、血清分離することによ り行った。 500 μ Lの血液から約 200 μ Lの血清が採取された。これを- 20°Cで保存した 。血清中の内因性プロレニンの量を測定した。
[0028]
結果を表 1、表 2、図 1、図 2に示す。（注:本実験例の投与量ではマウスの死亡例は 認められず、肉眼的副作用は認められな力つた。 )
表 1は内因性プロレニンの量の測定結果を示す。
[表 1] プロレニン (pg/ml)
生食投与ヒト肝癌移植 1 293
ヌ一ドマウス血清 2 36.6
3 N.D
4 N.D
5 N.D
ヒト肝癌非移植 1 N.D
ヌードマウス血清 2 N.D
[0029] 図 1に、 22日目の最終体重比較を示す。最終体重は全ての群でほとんど差が見ら れなかった。
表 2及び図 2は、ヌードマウス移植ヒト肝癌平均腫瘍体積の 12日目〜 21日目まで の経時的変化を示す。陰性コントロールの生食投与群 (a)に比べて、 pfl l-18ぺプチ ド lmg/kg/day投与群（c)、 pfl l- 18ペプチド 10mg/kg/day投与群（d)、及びカプトプリ ル投与群 (b)で腫瘍体積の増加の抑制が見られた。 pflト 18ペプチド lmg/kg/day投 与群 (c)よりも pfl 1-18ペプチド 10mg/kg/day投与群 (d)で高 、腫瘍体積増加の抑制 効果が確認された。また、 111-18ぺプチド1(^§/1¾/(1&投与群((1)では、カプトプリ ル lOmg/kg/day投与群 (b)よりも腫瘍体積増加の抑制効果は高力つた。
[表 2] ヌ-ト 'マウス移植ヒト肝癌平均腫 ffi体積の経時的変化
投与日数 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 生食 0.0 241.3 259.8 342.3 565.1 751.6 897.1 1022.5 1068.2 1528.0
カフ ブリル
0.0 1 17.6 189.3 241.8 340.7 541.3 737.2 748.8 890.3 1080.1
I0mg/kg
pfl l- 18へ Yチト'
0.0 74.1 147.3 243.6 461.1 567.1 783.5 778.8 924.6 1 141 .2
1mg/kg
pfl l - 18へ。プチト'
0.0 54.3 54.7 125.9 196.8 368.6 422.S 342.8 420.4 669.0
I0mg/kg 産業上の利用可能性
以上説明したように、本発明の新規な腫瘍増殖抑制剤によれば、従来公知のアン ジォテンシン変換酵素阻害剤等より優れた腫瘍増殖抑制効果がもたらされ得る。本 腫瘍増殖抑制剤は腫瘍に対する治療において用いられるが、副作用が低く抑えられ 、ACE阻害剤等の腫瘍増殖抑制剤では効果が得られな力つた病態の患者に対して 、有効である可能性が高いと考えられる。

Claims

請求の範囲
[1] プロレニンのプロフラグメント領域のアミノ酸配列において、 N末端の 1〜18番目の 配列より選択される部分配列からなるポリペプチド又はその等価ペプチドを有効成分 として含有する腫瘍増殖抑制剤。
[2] 前記部分配列が、 2〜8個のアミノ酸配列である請求の範囲第 1項に記載の腫瘍増 殖抑制剤。
[3] 前記部分配列が、 N末端の 11〜13番目の配列、 13〜15番目の配列、及び 11〜1
5番目の配列のうち、少なくともいずれか 1配列を含むアミノ酸配列である請求の範囲 第 1項又は第 2項に記載の腫瘍増殖抑制剤。
[4] 前記部分配列が、 N末端の 11〜18番目のアミノ酸配列である請求の範囲第 1項〜 第 3項の何れか一に記載の腫瘍増殖抑制剤。
[5] 固型腫瘍に対して使用する請求の範囲第 1項〜第 4項の何れか一に記載の腫瘍 増殖抑制剤。
[6] 肝癌に対して使用する請求の範囲第 5項に記載の腫瘍増殖抑制剤。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180125922A1 (en) * 2012-09-19 2018-05-10 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods of use for (pro)renin receptor antagonists

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001077673A1 (en) * 2000-04-10 2001-10-18 Yuichi Ishida Hypotensors
WO2004073740A1 (ja) * 2003-02-20 2004-09-02 Yuichi Ishida 組織内アンジオテンシンⅱ産生亢進制御剤並びに動脈硬化症、心・脳血管疾患及び／若しくは糖尿病合併症の発症予防又は治療剤

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001077673A1 (en) * 2000-04-10 2001-10-18 Yuichi Ishida Hypotensors
WO2004073740A1 (ja) * 2003-02-20 2004-09-02 Yuichi Ishida 組織内アンジオテンシンⅱ産生亢進制御剤並びに動脈硬化症、心・脳血管疾患及び／若しくは糖尿病合併症の発症予防又は治療剤

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DATABASE MEDLINE [online] NARUSE K. ET AL.: "Immunoreactive prorenin and its profragment peptide are present in human juxtaglomerular cells", XP003007051, accession no. STN Database accession no. (NLM3071582) *
J. HYPERTENS SUPPL., vol. 6, no. 4, 1988, pages S426 - S428 *
KUBA M. ET AL.: "Angiotensin I-converting enzyme inhibitory peptides isolated from tofuyo fermented soybean food", BIOSCI. BIOTECHNOL. BIOCHEM., vol. 67, no. 6, 2003, pages 1278 - 1283, XP003007052 *
See also references of EP1905445A4 *
TAHMASEBI M. ET AL.: "Angiotensin II AT1 receptors and prorenin gene transcription in breast cancer", J. ENDOCRINOL., vol. 151, no. SUPPL., 1996, pages 27, XP009023088 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20180125922A1 (en) * 2012-09-19 2018-05-10 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods of use for (pro)renin receptor antagonists
US10780143B2 (en) * 2012-09-19 2020-09-22 University Of Utah Research Foundation Compositions and methods of use for (pro)renin receptor antagonists

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