WO2006072349A1 - Thiophen-substituierte pyrazoline - Google Patents

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WO2006072349A1
WO2006072349A1 PCT/EP2005/013219 EP2005013219W WO2006072349A1 WO 2006072349 A1 WO2006072349 A1 WO 2006072349A1 EP 2005013219 W EP2005013219 W EP 2005013219W WO 2006072349 A1 WO2006072349 A1 WO 2006072349A1
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WO
WIPO (PCT)
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substituted
cycloalkyl
trifluoromethyl
alkyl
benzodioxole
Prior art date
Application number
PCT/EP2005/013219
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English (en)
French (fr)
Inventor
Dirk Brohm
Nicole Diedrichs
Walter Hübsch
Britta-Nicole FRÖHLEN
Christoph Gerdes
Mark Jean Gnoth
Elisabeth Perzborn
Verena Vöhringer
Original Assignee
Bayer Healthcare Ag
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bayer Healthcare Ag filed Critical Bayer Healthcare Ag
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system

Definitions

  • the present invention relates to the field of blood clotting.
  • the present invention relates in particular to the use of thiophene-substituted pyrazolines as medicaments, to novel thiophene-substituted pyrazolines and to processes for their preparation and to their use for the production of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular cardiovascular diseases , preferably of thromboembolic disorders.
  • Platelets are a major factor in both hemostasis and thromboembolic disorders. Particularly in the arterial system, platelets are of central importance in the complex interaction between blood components and the vessel wall. Adverse platelet activation can lead to thromboembolic disease and thrombotic complications with life-threatening conditions by the formation of platelet-rich thrombi.
  • thrombin clotting protease thrombin, which is formed on injured blood vessel walls. which, in addition to fibrin formation, leads to the activation of platelets, endothelial cells and mesenchymal cells (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068).
  • thrombin inhibitors inhibit platelet aggregation or the formation of platelet-rich thrombi.
  • arterial thromboses can be successfully treated with inhibitors of platelet function as well as thrombin inhibitors (Bhatt DL, Topol EJ, Nat., Rev. Drug Discov., 2003, 2, 15-28).
  • platelet thrombin antagonists are highly likely to reduce the formation of thrombi and the onset of clinical consequences such as myocardial infarction and stroke. Further cellular thrombin effects, e.g. on vascular endothelial and smooth muscle cells, leukocytes and fibroblasts may be responsible for inflammatory and proliferative disorders.
  • thrombin The cellular effects of thrombin are mediated, at least in part, via a family of G protein-coupled receptors (PARs) whose prototype is the PAR-1 receptor.
  • PAR-I is activated by binding of thrombin and proteolytic cleavage of its extracellular N-terminus. Proteolysis reveals a new N-terminus with the amino acid sequence SFLLRN ..., which acts as an agonist ("tethered ligand") for intramolecular receptor activation and transmission of intracellular signals.
  • Peptides derived from the tethered ligand sequence can be used as agonists of the receptor become and lead to platelets for activation and aggregation.
  • Antibodies and other selective PAR-1 antagonists inhibit thrombin-induced aggregation of platelets in vitro at low to moderate thrombin concentrations (Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H 5 Coughlin SR, J. Clin. 103, 879-887).
  • Another thrombin receptor of potential importance for the pathophysiology of thrombotic processes, PAR-4 has been identified on human and animal platelets.
  • PAR-1 antagonists reduce the formation of platelet-rich thrombi (Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang HC, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).
  • EP-A 466 408, EP-A 438 690, EP-A 532 918 and WO 93/24463 describe structurally similar pyrazoline derivatives and their use as pesticides.
  • WO 02/00651 describes pyrazoline derivatives as factor Xa inhibitors for the treatment of thromboembolic disorders and WO 05/007157 describes pyrazoline derivatives as PAR-I antagonists for the treatment of cardiovascular diseases.
  • the present invention relates to compounds of the formula (I)
  • E is methylene, NH, an oxygen atom or a sulfur atom
  • n 1, 2 or 3
  • R 1 is hydrogen, halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy or difluoromethoxy,
  • R 2 is hydrogen, halogen, cyano, trifluoromethyl, trifluoromethoxy or difluoromethoxy,
  • aryl, heteroaryl, cycloalkyl and heterocyclyl can be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of hydroxyl, amino, halogen, cyano, nitro, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine substituted (Ci-C6) -alkyl, optionally fluorine-substituted
  • aryl, heteroaryl, cycloalkyl, heterocyclyl and 1,2,3,4-tetrahydronaphthyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of hydroxy, amino, halogen, cyano, nitro, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy , difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (Ci-C6) alkyl optionally (C r C6) alkoxycarbonyl, or fluoro-substituted (C] Co) -alkoxy, (Ci-C6) alkylamino, phenyl, benzyl, hydroxycarbonyl, ( C 1 -C 6 -alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, (C 1 -C 6 ) -alkylaminocarbonyl, (C r C6) alkylcarbonyl, (C r C 6) alkylcarbonyloxy, (Ci
  • R 5 represents substituted fluoro-optionally substituted (C r C6) alkyl, (C6 -Cio) aryl, benzyl cyl, (C 3 -C 7) -cycloalkyl or (C 1 -C 6) alkylcarbonyl,
  • aryl, benzyl and cycloalkyl may be substituted with 1 to 3
  • Substituents independently selected from the group consisting of hydroxy, amino, halo, cyano, nitro, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, (Ci-C 6) -alkyl, (C r C6) alkoxy, (C 1 - C 6) - alkylamino, phenyl, benzyl, hydroxycarbonyl, (Ci-C 6) alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, (C r C6) alkylaminocarbonyl, (Ci-C 6) alkylcarbonyl, (C 1 -
  • R 6 is hydroxy, amino, (C, -C 6) alkyl, (C, -C 6) alkylamino, (C r C 6) alkoxy, (C 6 -Cio) aryl, benzyloxy or 5- to 10-membered heterocyclyl,
  • aryl and benzyloxy may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of hydroxy, amino, halogen, cyano, nitro, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, (dC 6 ) alkyl, (C 1 - Ce) -alkoxy, (Ci-C 6) - alkylamino, phenyl, benzyl, hydroxycarbonyl, (Ci-C 6) alkoxycarbonyl, aminocarbonyl, (C 1 -C 6 ) -alkylcarbonyl, (C 1 -
  • Compounds of the invention are the compounds of formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts; the compounds of the formula (I) mentioned below of the formulas and their salts, solvates and solvates of the salts and the compounds of formula (I), hereinafter referred to as exemplary compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the of formula (I), compounds mentioned below are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • the compounds according to the invention can exist in stereoisomeric forms (enantiomers, diastereomers).
  • the invention therefore includes the enantiomers or diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform constituents can be isolated in a known manner.
  • the compounds according to the invention can be present as E and Z isomers on the C-N double bond of the cyanoguanidine group, preference being given to the Z isomer.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • Salts which are preferred in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. However, also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds of the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, e.g. Salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalene disulfonic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzenesulfonic acid, naphthalene disulfonic acid acetic acid, trifluoroacetic acid, propi
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having from 1 to 16 carbon atoms, such as, by way of example and by way of preference, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine, N-methylpiperidine and choline.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (for example sodium and potassium salts), alkaline earth salts (for example
  • solvates are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water.
  • AlkoxycarbonylL alkylaminocarbonvi alkylcarbonylamino and alkylsulfonyl represent a linear ren or branched alkyl radical having 1 to 6 carbon atoms, by way of example and preferably methyl, ethyl, n-propyl, iso-propyl, n-butyl, tert-butyl, n-pentyl and n-hexyl.
  • Alkylene represents a straight-chain or branched alkylene radical with generally 1 to 8, preferably 1 to 6 carbon atoms, which optionally contains one or more double or triple bonds. Examples which may be mentioned are methylene, ethylene, propylene, propane-1,2-diyl, propane-2,2-diyl, butane-1,3-diyl, butane-2,4-diyl, pentane-2,4 -diyl, 2-methyl-pentane-2,4-diyl.
  • Alkoxy is, by way of example and by way of preference, methoxy, ethoxy, n-propoxy, isopropoxy, n-butoxy, tert-butoxy, n-pentoxy and n-hexoxy.
  • Alkylamino represents an alkylamino radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and by way of preference methylamino, ethylamino, n-propylamino, isopropylamino, tert-butylamino, n-pentylamino, n-hexylamino, N, N-dimethylamino, NN- Diethylamino, N-ethyl-N-methylamino, N-methyl-Nn-propylamino, N-isopropyl-N-propylamino, N-tert-butyl-N-methylamino, N-ethyl-Nn-pentylamino and Nn-hexyl- N-methylamino.
  • C 1 -C 3 -alkylamino is, for example, a monoalkylamino radical having 1 to 3 carbon atoms or a dialky
  • Alkylcarbonyl is exemplified and preferably methylcarbonyl, ethylcarbonyl, n-propylcarbonyl, iso-propylcarbonyl, n-butylcarbonyl and tert-butylcarbonyl.
  • Alkylcarbonyloxy is exemplified and preferably methylcarbonyloxy, ethylcarbonyloxy, n-propylcarbonyloxy, iso-propylcarbonyloxy, n-burylcarbonyloxy and tert-butylcarbonyloxy.
  • Alkoxycarbonyl is exemplified and preferably methoxycarbonyl, ethoxycarbonyl, n-propoxycarbonyl, iso-propoxycarbonyl, n-butoxycarbonyl, tert-butoxycarbonyl, n-pentoxycarbonyl and n-hexoxycarbonyl.
  • Alkylaminocarbonyl is an alkylaminocarbonyl radical having one or two (independently selected) alkyl substituents, by way of example and by way of preference for methylaminocarbonyl, ethylaminocarbonyl, n-propylaminocarbonyl, isopropylaminocarbonyl, tert-butylaminocarbonyl, n-pentylaminocarbonyl, n-hexylaminocarbonyl, N, N-dimethylaminocarbonyl, N, N-diethylaminocarbonyl, N-ethyl-N-methylaminocarbonyl, N-methyl-Nn-propylaminocarbonyl, N-isopropyl-Nn-propylaminocarbonyl, N-tert-butyl-N-methylaminocarbonyl, N-ethyl-Nn-pentylaminocarbonyl and Nn-hexy
  • Ci-Cs-Alkylaminocarbonyl is for example a Monoalkylaminocarbonyl radical having 1 to 3 carbon atoms or for a dialkylaminocarbonyl radical having in each case 1 to 3 carbon atoms per alkyl substituent.
  • Alkylcarbonylamino is, by way of example and by way of preference, methylcarbonylamino, ethylcarbonylamino, n-propylcarbonylamino, isopropylcarbonylamino, n-butylcarbonylamino and tert-butylcarbonylamino.
  • Alkylsulfonyl is, by way of example and by way of preference, methylsulfonyl, ethylsulfonyl, n-propylsulfonyl, isopropylsulfonyl, tert-butylsulfonyl, n-pentylsulfonyl and n-hexylsulfonyl.
  • Cycloalkyl is a mono- or bicyclic cycloalkyl group having usually 3 to 7, preferably 5 or 6 carbon atoms, by way of example and preferably cycloalkyl, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl and cycloheptyl.
  • Aryl per se and "aryl” in aryloxy and Arylcarbonylamino stands for a mono- or bicyclic aromatic radical having usually 6 to 10 carbon atoms, by way of example and preferably phenyl and naphthyl.
  • Aryloxy is exemplary and preferably phenyloxy and naphthyloxy.
  • Arylcarbonylamino is by way of example and preferably phenylcarbonylamino and naphthylcarbonylamino.
  • Heterocyclyl is a mono- or bicyclic, heterocyclic radical having usually 3 to 10, preferably 5 to 8 ring atoms and up to 3, preferably up to 2 heteroatoms and / or hetero groups from the series N, O, S, SO, SO 2 , wherein a nitrogen atom can also form an N-oxide.
  • the heterocyclyl radicals may be saturated or partially unsaturated.
  • Heteroaryl is an aromatic, mono- or bicyclic radical having usually 5 to 10, preferably 5 to 6 ring atoms and up to 5, preferably up to 4 heteroatoms from the series S, O and N, where a nitrogen atom is also an N-
  • Halogen is fluorine, chlorine, bromine and iodine, preferably fluorine and chlorine.
  • radicals in the compounds of the formula (I), their salts, their solvates or the solvates of their salts are substituted
  • the radicals may, unless otherwise specified, be monosubstituted or polysubstituted or differently substituted. Substitution with up to three identical or different substituents is preferred. Very particular preference is given to the substitution with a substituent.
  • E is methylene, NH, an oxygen atom or a sulfur atom
  • n 1, 2 or 3
  • R 1 is hydrogen, fluorine, chlorine or trifluoromethyl
  • R 2 is hydrogen, fluorine, chlorine or trifluoromethyl
  • aryl, heteroaryl, cycloalkyl and heterocyclyl can be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of hydroxyl, amino, halogen, cyano, nitro, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted ( C 1 -C 6) -alkyl, optionally fluorine-substituted (C r
  • R 4 is hydrogen, 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-l, 3-benzodioxole, 2,3-dihydro-l, 4-benzodioxin, 2,2,4,4-tetrafluoro-4H-l, 3 -benzodioxin, indanyl, 1,2,3,4-tetrahydro-naphthyl, (C 6 -C 0) aryl, 5- to 10-membered heteroaryl, (C 3 -C 7) -cycloalkyl, 5- to
  • aryl, heteroaryl, cycloalkyl, heterocyclyl and 1,2,3,4-tetrahydronaphthyl can be substituted by 1 to 3 substituents, independently of one another selected from the group consisting of hydroxy, amino, halogen, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (C 1 -C 6 ) -alkyl, optionally fluorine-substituted (C r C 6 ) -alkoxy and ( C 1 -C 6 ) - alkylamino,
  • R 5 is optionally fluorine-substituted (C 1 -C 6 ) -alkyl, (C 6 -C 10) -aryl, benzyl or (C 3 -C 7 ) -cycloalkyl,
  • aryl, benzyl and cycloalkyl can be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of hydroxy, amino, halogen, cyano, nitro, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, (C 1 -C 6) -alkyl, (C r C 6 ) -alkoxy and (C 1 -
  • R 6 is (C r C 6 ) -alkyl, (C r C 6 ) -alkylammo or (C r C 6 ) -alkoxy,
  • E is methylene, NH or an oxygen atom
  • n 1, 2 or 3
  • R 1 is hydrogen, fluorine or chlorine
  • R 2 is hydrogen, fluorine or chlorine
  • R 3 for 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-l, 3-benzodioxole, 2,3-dihydro-I, 4-benzodioxin, 2,2,4,4-tetrafluoro-4H-1,3-benzodioxin , Indanyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, (C 3 -C 7 ) -cycloalkyl, 5- to 7-membered heterocyclyl or (C 1 -Cs) -AUCyIBn-R 4 ,
  • phenyl, heteroaryl, cycloalkyl and heterocyclyl may be substituted by 1 to 3 substituents independently of one another selected from the group consisting of hydroxy, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (C 1 -C 6) -alkyl and optionally fluorine -substituted (C] -Co) -alkoxy,
  • R 4 is hydrogen, 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-l, 3-benzodioxole, 2,3-dihydro-l, 4-benzodioxin, 2,2,4,4-tetrafluoro-4H-l, 3 benzodioxin, indanyl, phenyl, 5- or 6-membered heteroaryl, (C 3 -C 7 ) -cycloalkyl, 5- to 7-membered heterocyclyl, hydroxy, cyano, trifluoromethyl or -OR 5 ,
  • phenyl, heteroaryl, cycloalkyl and heterocyclyl can be substituted by 1 to 3 substituents, independently selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (C 1 -Co) - Al] CyI and optionally fluorine-substituted (C r C 6 ) alkoxy,
  • R 5 is (C 1 -C 6) -alkyl optionally substituted by fluorine, phenyl, benzyl or (C 3 -C 7 ) -cycloalkyl,
  • phenyl, benzyl and cycloalkyl may be substituted with 1 to 3 substituents independently selected from the group consisting of hydroxy, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoro- methoxy, (C r C6) alkyl and (C r C 6) alkoxy,
  • E is methylene, NH or an oxygen atom
  • n 1, 2 or 3
  • R 1 is hydrogen or fluorine
  • R 2 is hydrogen, fluorine or chlorine
  • R 3 for 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-1, 3-benzodioxole, 2,3-dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-
  • phenyl, thiazolyl, pyridyl, pyrrolidin-2-yl, pyrrolidin-3-yl, pyrrolinyl, piperidin-1-yl, piperidin-2-yl, piperidin-3-yl, piperidin-4-yl and cycloalkyl may be substituted having 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of hydroxy, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (C 1 -Cs) -alkyl and optionally fluorine-substituted (C 1 -Cs) -AUsOXy,
  • R 4 is hydrogen, 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-l, 3-benzodioxole, 2,3-dihydro-l, 4-benzodioxin, 2,2,4,4-tetrafluoro-4H-l, 3 benzodioxin, phenyl, thienyl, thiazolyl, oxazolyl, pyridyl, pyrimidyl, (C 5 -C 7 ) -cycloalkyl, pyrrolidin-2-yl, pyrrolidin-3-yl, pyrrolinyl, piperidin-1-yl, piperidin-2-yl , Piperidin-3-yl, piperidin-4-yl, morpholin-1-yl, morpholin-2-yl, morpholin-3-yl, hydroxy, trifluoromethyl or -OR 5 ,
  • phenyl, thiazolyl, pyridyl, pyrrolidin-2-yl, pyrrolidin-3-yl, pyrrolinyl, piperidin-1-yl, piperidin-2-yl, piperidin-3-yl, piperidin-4-yl and cycloalkyl substituted may be substituted by 1 to 2 substituents independently selected from the group consisting of hydroxy, halogen, oxo, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluoro-substituted (Ci-C 3 ) -alkyl and optionally fluorine-substituted (C r C 3 ) alkoxy,
  • R 5 is optionally fluorine-substituted (C 1 -C 3 ) -alkyl
  • E is methylene, NH or an oxygen atom
  • n 1, 2 or 3
  • R 1 is hydrogen
  • R 2 is chlorine
  • R 3 is 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-1, 3-benzodioxole, phenyl, pyridyl, (C 5 -C 7 ) -cycloalkyl or (C 1 -C 5 ) -alkylene-R 4 ,
  • phenyl, pyridyl and cycloalkyl can be substituted by 1 to 2 substituents, independently selected from the group consisting of hydroxyl, halogen, Trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (C 1 -C 3 ) -alkyl and optionally fluorine-substituted (C 1 -C 3 ) -alkoxy,
  • R 4 is hydrogen, 1,3-benzodioxole, 2,2-difluoro-1, 3-benzodioxole, phenyl, pyridyl, (C 5 -C 7 ) -cycloalkyl, hydroxy, trifluoromethyl or -OR 5 ,
  • phenyl, pyridyl and cycloalkyl can be substituted by 1 to 2 substituents, independently selected from the group consisting of hydroxy, halogen, trifluoromethyl, trifluoromethoxy, difluoromethoxy, optionally fluorine-substituted (C 1 -C 3 ) -alkyl and optionally fluorine -substituted (dC 3 ) -alkoxy,
  • R 5 is optionally fluorine-substituted (C 1 -C 3 ) -alkyl
  • R 3 is 2,2-difluoro-1, 3-benzodioxole, phenyl, 4-difluoromethoxyphenyl, 3-difluoromethoxyphenyl, 4- (1, 1, 2,2-tetrafluoroethoxy) phenyl, cyclohexyl, 2-phenyleth-1-yl, 2- (4-chlorophenyl) eth-1-yl or 2- (thien-2-yl) eth-1-yl.
  • Another object of the present invention is a process for the preparation of the novel compounds of formula (I), wherein compounds of formula (II)
  • R 1 , R 2 , E and n have the abovementioned meaning
  • R 3 has the meaning indicated above
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from 0 ° C. to the reflux of the solvents under atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane or 1,2-dichloroethane, ethers such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane, or other solvents such as acetone, dimethylformamide, dimethylacetamide, 2-butanone or acetonitrile, is preferred dimethylformamide.
  • halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, trichloromethane or 1,2-dichloroethane
  • ethers such as dioxane, tetrahydrofuran or 1,2-dimethoxyethane
  • other solvents such as acetone, dimethylformamide, dimethylacetamide, 2-butanone or acetonitrile, is preferred dimethylformamide.
  • Bases are, for example, alkali carbonates, e.g. Sodium or potassium carbonate, or hydrogen carbonate, or organic bases such as trialkylamines e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, or DBU, DB ⁇ , pyridine, or mixtures of the bases, preference is given to diisopropylethylamine.
  • alkali carbonates e.g. Sodium or potassium carbonate
  • hydrogen carbonate e.g. Triethylamine, N-methylmorpholine, N-methylpiperidine, 4-dimethylaminopyridine or diisopropylethylamine, or DBU, DB ⁇ , pyridine, or mixtures of the bases, preference is given to diisopropylethylamine.
  • the compounds of the formula (HI) are optionally present as salts, preferably as hydrochlorides.
  • R 1 , R 2 , E and n have the abovementioned meaning
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, alcohols such as methanol, ethanol, ⁇ -propanol or isopropanol, preference is given to where-propanol.
  • the compounds of the formula (IV) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula (V)
  • R 1 , R 2 , E and n have the abovementioned meaning
  • reaction in the first stage is generally carried out in inert solvents, in the presence of a base, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, alcohols, such as methanol, ethanol, ⁇ -propanol or isopropanol, preference is given to ethanol.
  • Bases include, for example, organic bases such as amine bases, e.g. Piperidine, triethylamine, diisopropylethylamine or DBU, piperidine is preferred.
  • organic bases such as amine bases, e.g. Piperidine, triethylamine, diisopropylethylamine or DBU, piperidine is preferred.
  • the reaction in the second stage is generally carried out in inert solvents, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, alcohols, such as methanol, ethanol, 2-propanol or isopropanol, preference is given to ethanol.
  • the compounds of the formula (V) are known or can be prepared by reacting compounds of the formula (VI)
  • R 1 and R 2 have the abovementioned meaning
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, if appropriate in the presence of a base, if appropriate with the addition of potassium iodide, preferably in a temperature range from room temperature to the reflux of the solvent at normal pressure.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, hydrocarbons, such as benzene, xylene, toluene, hexane or cyclohexane, or other solvents, such as ethyl acetate, dimethylformamide, dimethylacetamide, Dimethyl sulfoxide, acetonitrile or pyridine, preferred is dimethylformamide or tetrahydrofuran.
  • ethers such as diethyl ether, methyl tert-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran
  • hydrocarbons such as benzene, xylene, toluene, hexane or cyclohexane
  • solvents such as ethy
  • Bases are, for example, alkali metal hydroxides such as sodium, potassium or lithium hydroxide, or alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or sodium or potassium methoxide, or sodium or potassium ethanolate or potassium nitrate butoxide, or amides such as sodium amide, lithium bis (trimethylsilyl) amide or lithium diisopropylamide, or other bases such as sodium hydride, pyridine or DBU, preferred is sodium hydride.
  • alkali metal hydroxides such as sodium, potassium or lithium hydroxide
  • alkali metal carbonates such as cesium carbonate, sodium or potassium carbonate, or sodium or potassium methoxide, or sodium or potassium ethanolate or potassium nitrate butoxide
  • amides such as sodium amide, lithium bis (trimethylsilyl) amide or lithium diisopropylamide, or other bases such as sodium hydride, pyridine or DBU, preferred is sodium hydride.
  • the reaction is generally carried out in inert solvents, optionally with the addition of potassium iodide, preferably in a temperature range from room temperature to remindfiuss of the solvent at atmospheric pressure.
  • Inert solvents are, for example, ethers, such as diethyl ether, methyl-fer-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran, hydrocarbons, such as benzene, xylene, toluene, hexane or cyclohexane, or other solvents, such as ethyl acetate, dimethylformamide, dimethylacetamide, dimethyl sulphoxide, Acetonitrile or pyridine, preferred is dimethylformamide.
  • ethers such as diethyl ether, methyl-fer-butyl ether, 1,2-dimethoxyethane, dioxane or tetrahydrofuran
  • hydrocarbons such as benzene, xylene, toluene, hexane or cyclohexane
  • solvents such as ethyl acetate, dimethylformamide, dimethyl
  • the compounds of the invention show an unpredictable, valuable pharmacological and pharmacokinetic activity spectrum.
  • These are selective antagonists of the PAR-I receptor, which act in particular as platelet aggregation inhibitors.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, preferably of thromboembolic diseases and / or thromboembolic complications.
  • thromboembolic disorders include, in particular, diseases such as myocardial infarction with ST segment elevation (STEMI) and without ST.
  • diseases such as myocardial infarction with ST segment elevation (STEMI) and without ST.
  • Segmental elevation (non-STEMI), stable angina pectoris, unstable angina pectoris, reocclusions and restenosis following coronary interventions such as angioplasty, stent placement or aorto-coronary bypass, peripheral arterial occlusive disease, pulmonary embolism, deep venous
  • Thromboses and renal vein thrombosis transient ischemic attacks as well as thrombotic and thromboembolic stroke.
  • the substances are therefore also useful in the prevention and treatment of cardiogenic thromboembolism, such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia, in patients with acute, intermittent or persistent cardiac arrhythmias, such as atrial fibrillation, and those undergoing cardioversion patients with valvular heart disease or with artificial heart valves.
  • cardiogenic thromboembolism such as brain ischemia, stroke and systemic thromboembolism and ischaemia
  • cardiac arrhythmias such as atrial fibrillation
  • the compounds of the invention are suitable for the treatment of disseminated intravascular coagulation (DIC).
  • DIC disseminated intravascular coagulation
  • Thromboembolic complications also occur in microangiopathic hemolytic anemias, extracorporeal blood circuits such as hemodialysis, and heart valve prostheses.
  • the compounds according to the invention also have an influence on wound healing, for the prophylaxis and / or treatment of atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the locomotor system, coronary heart diseases, cardiac insufficiency, hypertension, inflammatory diseases such as asthma, inflammatory lung diseases, Glomerulonephritis and inflammatory bowel diseases into consideration, moreover, also for the prophylaxis and / or treatment of Alzheimer's disease.
  • atherosclerotic vascular diseases and inflammatory diseases such as rheumatic diseases of the locomotor system, coronary heart diseases, cardiac insufficiency, hypertension, inflammatory diseases such as asthma, inflammatory lung diseases, Glomerulonephritis and inflammatory bowel diseases into consideration, moreover, also for the prophylaxis and / or treatment of Alzheimer's disease.
  • the compounds of the present invention can inhibit tumor growth and metastasis, microangiopathies, age-related macular degeneration, diabetic retinopathy, diabetic nephropathy and other microvascular diseases and for the prevention and treatment of thromboembolic complications such as venous thromboembolism in tumor patients, especially those undergo major surgery or chemo- or radiotherapy.
  • the compounds of the invention can also be used ex vivo to prevent coagulation, eg for the preservation of blood and plasma products, for cleaning / pretreatment of catheters and other medical aids and devices, for coating artificial surfaces of in vivo or ex vivo used medical Aids and equipment or biological samples containing platelets.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the erf ⁇ ndungswashen connections for the preparation of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using a therapeutically effective amount of a compound of the invention.
  • Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing a compound of the invention and one or more other active ingredients.
  • Another object of the present invention is a method for preventing blood coagulation in vitro, especially in blood or biological samples containing platelets, which is characterized in that an anticoagulatory effective amount of the compound according to the invention is added.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally.
  • they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • the prior art is capable of rapidly and / or modifying the compounds according to the invention which release the compounds according to the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, for example tablets (uncoated or coated tablets, for example, with enteric or delayed dissolving or insoluble coatings, which the Control release of the compound according to the invention), rapidly disintegrating tablets or films / wafers, films / lyophilisates, capsules (for example hard or soft gelatin capsules), dragees, granules, pellets, powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
  • tablets uncoated or coated tablets, for example, with enteric or delayed dissolving or insoluble coatings, which the Control release of the compound according to the invention
  • 'Parenteral administration can avoidance of an absorption step (eg intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal or intralumbar) or (for example intramuscularly, subcutaneously, intracutaneously, percutaneously or intraperitoneally) with inclusion of absorption.
  • absorption step eg intravenous, intraarterial, intracardiac, intraspinal or intralumbar
  • suitable application forms include injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • the oral application is preferred.
  • Inhalation medicines including powder inhalers, nebulizers
  • nasal drops solutions, sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets films / wafers or capsules
  • suppositories ear or ophthalmic preparations
  • vaginal capsules aqueous suspensions (lotions, shake mixtures)
  • lipophilic suspensions ointments
  • creams transdermal therapeutic systems (such as patches)
  • milk Pastes, foams, scattering powders, implants or stents.
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • These adjuvants include, among others. Carriers (for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol), solvents (for example liquid polyethylene glycols), emulsifiers and dispersants or wetting agents (for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate), binders (for example polyvinylpyrrolidone), synthetic and natural polymers (for example albumin ), Stabilizers (eg, antioxidants such as ascorbic acid), dyes (eg, inorganic pigments such as iron oxides), and flavor and / or odor remedies.
  • Carriers for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecy
  • compositions containing at least one compound of the invention preferably together with one or more inert non-toxic, pharmaceutically suitable excipient, as well as their use for the purposes mentioned above.
  • Method 1 (HPLC, Enantiomer Separation): Chiral silica gel selector KBD 5326 (250 mm x 30 mm) based on the selector poly (N-methacryloyl-L-leucine dicyclopropylmethylamide); ethyl acetate; Temperature: 24 ° C; Flow: 25 ml / min; UV detection: 280 nm.
  • Method 5 Instrument: Micromass GCT, GC6890; Column: Restek RTX-35MS, 30m x 250 ⁇ m x 0.25 ⁇ m; constant flow with helium: 0.88ml / min; Oven: 60 ° C; Inlet: 25O 0 C; Gradient: 6O 0 C (hold for 0.30 min), 50 ° C / min -> 120 0 C, 16 ° C / min -> 25O 0 C, 30 ° C / min -> 300 0 C (hold for 1.7 min).
  • Method 6 Instrument: Micromass Quattro LCZ with HPLC Agilent Series 1100; Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A -> 2.5 min 30% A -> 3.0 min 5% A - »4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min 2 ml / min; Oven: 50 ° C .; UV detection: 208-400 nm.
  • Method 7 Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Column: Phenomenex Synergi 2 ⁇ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 l of water + 0.5 ml of 50% formic acid, eluent B: 1 l of acetonitrile + 0.5 ml of 50% formic acid; Gradient: 0.0 min 90% A ⁇ > 2.5 min 30% A -> 3.0 min 5% A ⁇ > 4.5 min 5% A; Flow: 0.0 min 1 ml / min, 2.5 min / 3.0 min / 4.5 min. 2 ml / min; Oven: 5O 0 C; UV detection: 210 nm.
  • Method 8 Device Type MS: Micromass ZQ; Device type HPLC: Waters Alliance 2795;
  • Example 6 In analogy to Example 1, the compounds of Examples 2 to 12 are prepared. Exception: Example 6. Here the reaction time is only 15 minutes, the product precipitates out of the reaction mixture, is filtered off with suction and dried in vacuo. Example 13
  • Example 14 is separated by method 9 into the enantiomers.
  • the active enantiomer elutes second.
  • the identification of agonists of the human Protease Activated Receptor 1 (PARI) as well as the quantification of the efficacy of the substances described here takes place with the aid of a recombinant cell line.
  • the cell is originally derived from a human embryonic kidney cell (HEK293, ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA).
  • the test cell line constitutively expresses a modified form of the calcium-sensitive photoprotein aequorin which, upon reconstitution with co-factor coelenterazine, emits light upon increases in free calcium concentration in the inner mitochondrial compartment (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T .; Nature 1992, 358, 325-327).
  • the cell stably expresses the endogenous human PARI receptor as well as the endogenous purinergic receptor P2Y2.
  • the resulting PARI test cell responds to stimulation of the endogenous PARI or P2Y2 receptor with intracellular release of calcium ions, which can be quantified by the resulting aequorin luminescence with a suitable luminometer (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 17, 235-237).
  • Test Procedure Cells are incubated for two days (48 hrs) prior to testing in culture medium (DMEM F 12 supplemented with 10% FCS 5 2 mM glutamine, 20 mM HEPES, 1.4mM pyruvate, 0.1 mg / ml gentamycin, 0 BioWhittaker CatJ BE04-687Q, B-4800 Verviers, Belgium) in 384-well microtiter plates and kept in a cell incubator (96% humidity, 5% v / v CO 2 , 37 0 C).
  • culture medium DMEM F 12 supplemented with 10% FCS 5 2 mM glutamine, 20 mM HEPES, 1.4mM pyruvate, 0.1 mg / ml gentamycin, 0 BioWhittaker CatJ BE04-687Q, B-4800 Verviers, Belgium
  • the culture medium is replaced by a Tyrodel solution (in mM: 140 NaCl, 5 KCl, 1 MgCl 2 , 2 CaCl 2 , 20 glucose, 20 EEPES) 5 which additionally contains the co-factor coelenterazine (25 ⁇ M) and glutathione (4 mM), and then the microtiter plate is incubated for a further 3-4 hours. Then the test substances are pipetted onto the microtiter plate and 5 minutes after transfer of the test substances into the wells of the microtiter plate, the plate is transferred to the luminometer, a PARl agonist concentration corresponding to EC 50 , and immediately measured the resulting light signal in the luminometer. To distinguish an antagonist substance effect from a toxic effect, the endogenous purinergic receptor with agonist is activated immediately afterwards (ATP, 10 ⁇ M final concentration) and the resulting light signal is measured.
  • Table A The results are shown in Table A:
  • SFLLRN thrombin receptor agonist
  • Human whole blood is obtained by venipuncture from volunteer donors and transferred into monovettes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing sodium citrate as anticoagulant (1 part sodium citrate 3.8% + 9 parts whole blood).
  • the Monovettes are centrifuged at 900 revolutions per minute, and 4 0 C over a period of 20 minutes (Heraeus Instruments, Germany; Megafuge 1. ORS).
  • the platelet rich plasma is gently removed and transferred to a 50 ml Falcon tube.
  • the plasma is then mixed with ACD buffer (44 mM sodium citrate, 20.9 mM citric acid, 74.1 mM glucose).
  • the volume of the ACD buffer is one fourth of the plasma volume.
  • washing buffer 113 mM sodium chloride, 4 mM disodium hydrogen phosphate, 24 mM sodium dihydrogen phosphate, 4 mM potassium dichloride, 0.2 mM ethylene glycol bis (2-aminoethyl) -N, N, N'N '). tetraacetic acid, 0.1% glucose) and then filled with washing buffer to a volume equal to that of the plasma. The washing process is carried out a second time.
  • incubation buffer 134 mM sodium chloride, 12 mM sodium bicarbonate, 2.9 mM potassium chloride, 0.34 mM sodium dihydrogencarbonate, 5 mM HEPES, 5 mM glucose , 2mM calcium chloride and 2mM Magnesium chloride
  • the platelet suspension is preincubated with the substance to be tested or the appropriate solvent for 10 minutes at 37 ° C. (Eppendorf, Germany, Thermomixer Comfort).
  • Addition of the agonist 0.5 ⁇ M or 1 ⁇ M ⁇ -thrombin, Kordia, Netherlands, 3281 NIH units / mg or 30 ⁇ g / ml thrombin receptor activating peptide (TRAP6), Bachern, Switzerland
  • TRIP6 thrombin receptor activating peptide
  • a fluorescein-isothiocyanate-conjugated antibody directed against the human glycoprotein (CD41) is used (Immunotech Coulter, France, Cat. No. 0649).
  • Phycoerythrin-conjugated antibody directed against the human glycoprotein P-selectin (Immunotech Coulter, France, Cat No. 1759) can be used to determine the activation state of the platelets.
  • P-selectin (CD62P) is localized in the ⁇ -granules of resting platelets. However, it is translocated to the outer plasma membrane after in vitro or in vivo stimulation.
  • Samples are measured in the FACSCalibur TM Flow Cytometry System from Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA and evaluated and graphed using CellQuest, Version 3.3 (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) software.
  • the level of platelet activation is determined by the percentage of CD62P-positive thrombocytopenia. (CD41 positive events). There are 10,000 CD41 positive events from each sample.
  • the inhibitory effect of the substances to be tested is calculated on the basis of the reduction in thrombocyte activation, which relates to activation by the agonist.
  • Guinea pigs (strain: Dunkin Hartley) are treated in an active or anaesthetized state orally, intravenously or intraperitoneally with test substances in a suitable formulation. As a control, other guinea pigs are treated identically with the appropriate vehicle.
  • blood is obtained from deep anesthetized animals by puncturing the heart or the aorta. The blood is taken up in monocytes (Sarstedt, Nümbrecht, Germany) containing 3.8% anticoagulant sodium citrate (1 part citrate solution + 9 parts blood). To obtain platelet-rich plasma, the citrated whole blood is centrifuged at 2500 rpm for 20 min at 4 ° C.
  • the aggregation is triggered by the addition of a thrombin receptor agonist (SFLLRN, 50 ⁇ g / ml) in an aggregometer and analyzed by Born's turbidimetric method (Bora, GVR, Cross MJ., The Aggregation of Blood Platelets, J. Physiol 1963, 168 , 178-195) at 37 ° C.
  • SFLLRN thrombin receptor agonist
  • the increase in light transmission (amplitude of the aggre- gation curve in%) is determined 5 minutes after addition of the agonist.
  • the inhibitory effect of the administered test substances in the treated animals is calculated by reducing the aggregation, based on the mean of the control animals.
  • the compounds according to the invention can be investigated in thrombosis models in suitable animal species in which thrombin-induced platelet aggregation is mediated via the PAR-I receptor.
  • suitable animal species in which thrombin-induced platelet aggregation is mediated via the PAR-I receptor.
  • guinea pigs and especially primates are suitable
  • the substances according to the invention can be converted into pharmaceutical preparations as follows:
  • Example 1 100 mg of the compound of Example 1, 50 mg of lactose (monohydrate), 50 mg of corn starch, 10 mg of polyvinylpyrrolidone (PVP 25) (BASF, Germany) and 2 mg of magnesium stearate.
  • the mixture of the compound of Example 1, lactose and starch is granulated with a 5% solution (m / m) of the PVP in water.
  • This mixture is compressed with a conventional tablet press (for the tablet format see above).
  • a single dose of 100 mg of the compound of the invention corresponds to 10 ml of oral suspension.
  • the rhodigel is suspended in ethanol, the compound of Example 1 is added to the suspension. While stirring, the addition of water. Until the swelling of the Rhodigels is complete, it is stirred for about 6 hours.
  • Intravenously administrable solution
  • Example 1 The compound of Example 1 is dissolved together with polyethylene glycol 400 in the water with stirring.
  • the solution is sterile filtered (pore diameter 0.22 microns) and filled under aseptic conditions in heat sterilized infusion bottles. These are closed with infusion stoppers and crimp caps.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Blutgerinnung. Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere die Verwendung von Thiophen-substituierten Pyrazolinen (1) als Arzneimittel, neue Thiophen-substituierte Pyrazoline und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembolischen Erkrankungen.

Description

Thiophen-substϊtuierte Pyrazoline
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Blutgerinnung. Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere die Verwendung von Thiophen-substituierten Pyrazolinen als Arzneimittel, neue Thiophen-substituierte Pyrazoline und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwen- düng zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembolischen Erkrankungen.
Thrombozyten (Blutplättchen) sind ein wesentlicher Faktor sowohl in der physiologischen Blutstillung (Hämostase) als auch bei thromboembolischen Erkrankungen. Insbesondere im arteriellen System kommt Thrombozyten eine zentrale Bedeutung in der komplexen Interaktion zwischen Blutkomponenten und Gefäßwand zu. Unerwünschte Thrombozytenaktivierung kann durch Bildung plättchenreicher Thromben zu thromboembolischen Erkrankungen und thrombotischen Komplikationen mit lebensbedrohlichen Zuständen fuhren.
Einer der potentesten Plättchenaktivatoren ist die Gerinnungsprotease Thrombin, die an verletzten Blutgefaßwänden gebildet. wird und neben der Fibrinbildung zur Aktivierung von Thrombozyten, Endothelzellen und mesenchymalen Zellen führt (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057-1068). An Thrombozyten in vitro und in Tiermodellen hemmen Thrombin- Inhibitoren die Plättchenaggregation bzw. die Bildung plättchenreicher Thromben. Beim Menschen können arterielle Thrombosen erfolgreich mit Inhibitoren der Thrombozytenfunktion sowie Thrombin-Inhibitoren behandelt werden (Bhatt DL, Topol EJ, Nat. Rev. Drug Discov. 2003, 2, 15- 28). Deshalb besteht eine hohe Wahrscheinlichkeit, dass Antagonisten der Thrombinwirkung auf Blutplättchen die Bildung von Thromben und das Auftreten von klinischen Folgen wie Herzinfarkt und Schlaganfall vermindern. Weitere zelluläre Thrombinwirkungen, z.B. auf Gefaßendothel- und -glattmuskelzellen, Leukozyten und Fibroblasten, sind möglicherweise für entzündliche und proli- ferative Erkrankungen verantwortlich.
Die zellulären Effekte von Thrombin werden zumindest teilweise über eine Familie G-Protein- gekoppelter Rezeptoren (Protease Activated Receptors, PARs) vermittelt, deren Prototyp der PAR- 1 -Rezeptor darstellt. PAR-I wird durch Bindung von Thrombin und proteolytische Spaltung seines extrazellulär liegenden N-Terminus aktiviert. Durch die Proteolyse wird ein neuer N-Terminus mit der Aminosäurensequenz SFLLRN... freigelegt, der als Agonist („Tethered Ligand") zur intramolekularen Rezeptoraktivierung und Übertragung intrazellulärer Signale führt. Von der Tethered- Ligand Sequenz abgeleitete Peptide können als Agonisten des Rezeptors eingesetzt werden und führen auf Thrombozyten zur Aktivierung und Aggregation. Antikörper und andere selektive PAR-I -Antagonisten hemmen die Thrombin-induzierte Aggregation von Thrombozyten in vitro bei niedrigen bis mittleren Thrombinkonzentrationen (Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H5 Coughlin SR, J. Clin. luvest. 1999, 103, 879-887). Ein weiterer Thrombinrezeptor mit möglicher Bedeutung für die Pathophysiologie thrombotischer Prozesse, PAR-4, wurde auf humanen und tierischen Thrombozyten identifiziert. In experimentellen Thrombosen an Tieren mit einem dem Menschen vergleichbaren PAR-Expressionsmuster reduzieren PAR-I -Antagonisten die Bildung plättchenreicher Thromben (Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861).
In den letzten Jahren wurde eine Vielzahl von Substanzen auf ihre plättchenfunktionshemmende Wirkung geprüft. In der Praxis haben sich nur wenige Plättchenfunktionshemmer bewährt. Es besteht daher ein Bedarf an Pharmazeutika, die spezifisch eine gesteigerte Plättchenreaktion hemmen ohne das Blutungsrisiko erheblich zu erhöhen und damit das Risiko von thromboembolischen Komplikationen vermindern. Im Gegensatz zur Inhibition der Proteaseaktivität von Thrombin mit direkten Thrombin-Inhibitoren sollte eine Blockade des PAR-I zur Hemmung der Throm- bozytenaktivierung ohne Verminderung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes führen.
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue PAR-I -Antagonisten zur Behandlung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, wie z.B. thromboembolischen Erkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen.
EP-A 466 408, EP-A 438 690, EP-A 532 918 und WO 93/24463 beschreiben strukturell ähnliche Pyrazolin-Derivate und ihre Verwendung als Pestizide.
WO 02/00651 beschreibt Pyrazolin-Derivate als Faktor Xa-Inhibitoren zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen und WO 05/007157 beschreibt Pyrazolin-Derivate als PAR-I- Antagonisten zur Behandlung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I)
(D,
Figure imgf000003_0001
in welcher
E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluormethoxy steht,
R2 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluormethoxy steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4- Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C6-Cio)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (Ci-
C8)-Alkylen-R4 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydro- xy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormetho- xy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes
(Ci-C6)-Alkoxy, (Ci-C6)-Alkylamino, Phenyl, Hydroxycarbonyl, (CrC6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkylaminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkylcarbonyl, (CrC6)-Alkyl- carbonyloxy,
Figure imgf000004_0001
und (Ci-C6)-Alkylsulfonyl,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4- benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetra- hydronaphthyl, (C6-Cio)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkylthio, -OR5 oder -C(=O)R6 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluorsubstituiertes (Ci-C6)-Alkyl, gegebenenfalls (CrC6)-Alkoxycarbonyl- oder Fluor- substituiertes (C]-Co)-AIkOXy, (Ci-C6)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (Ci-C6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkylaminocarbonyl, (CrC6)-Alkylcarbonyl, (CrC6)-Alkylcarbonyloxy, (Ci-C6)-Alkylcarbonylamino und (Ci-C6)-Alkylsulfonyl,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkyl, (C6-Cio)-Aryl, Ben- zyl, (C3-C7)-Cycloalkyl oder (C1-C6)-Alkylcarbonyl steht,
wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3
Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (Ci-C6)-Alkyl, (CrC6)-Alkoxy, (C1-C6)- Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (Ci-C6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (CrC6)-Alkylaminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkylcarbonyl, (C1-
C6)-Alkylcarbonyloxy, (Ci-C6)-Alkylcarbonylamino und (C]-C6)- Alkylsulfonyl,
R6 für Hydroxy, Amino, (C,-C6)-Alkyl, (C,-C6)-Alkylamino, (CrC6)-Alkoxy, (C6-Cio)-Aryl, Benzyloxy oder 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl steht,
wobei Aryl und Benzyloxy substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (d-C6)-Alkyl, (C1-Ce)-AIkOXy, (Ci-C6)- Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (Ci-C6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl,
Figure imgf000005_0001
(Ci-C6)-Alkylcarbonyl, (C1-
C6)-Alkylcarbonyloxy, (Ci-C6)-Alkylcarbonylamino und (Ci-C6)- Alkylsulfonyl,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze; die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausfuhrungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Die erfmdungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.
Die erfϊndungsgemäßen Verbindungen können als E- und Z-Isomere an der C-N-Doppelbindung der Cyanoguanidin-Gruppe vorliegen, bevorzugt ist das Z-Isomer.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfϊndungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfϊndungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfϊndungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethan- sulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluor- essigsaure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methyl- morpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin, N-Methylpiperidin und Cholin.
Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfϊndungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.
Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy. Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkylcarbonyloxy. Al- koxycarbonvL Alkylaminocarbonvi Alkylcarbonylamino und Alkylsulfonyl stehen für einen linea- ren oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl.
Alkylen steht für einen geradkettigen oder verzweigten Alkylenrest mit in der Regel 1 bis 8, vorzugsweise 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, der gegebenenfalls eine oder mehrere Doppel- oder Drei- fachbindungen enthält. Beispielsweise und vorzugsweise seien genannt Methylen, Ethylen, Propy- len, Propan-l,2-diyl, Propan-2,2-diyl, Butan- 1,3-diyl, Butan-2,4-diyl, Pentan-2,4-diyl, 2-Methyl- pentan-2,4-diyl.
Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, iso-Propoxy, n-Butoxy, tert-Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy.
Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n- Propylamino, iso-Propylamino, tert-Butylamino, n-Pentylamino, n-Hexylamino, NN-Dimethylamino, NN-Diethylamino, N-Ethyl-N-methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-iso-Propyl-N-n- propylamino, N-tert-Butyl-N-methylamino, N-Ethyl-N-n-pentylamino und N-n-Hexyl-N-methyl- amino. C]-C3-Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkyl- substituent.
Alkylcarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, n- Propylcarbonyl, iso-Propylcarbonyl, n-Butylcarbonyl und tert-Butylcarbonyl.
Alkylcarbonyloxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyloxy, Ethylcarbonyloxy, n- Propylcarbonyloxy, iso-Propylcarbonyloxy, n-Burylcarbonyloxy und tert-Butylcarbonyloxy.
Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n- Propoxycarbonyl, iso-Propoxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl, tert-Butoxycarbonyl, n-Pentoxycarbonyl und n-Hexoxycarbonyl.
Alkylaminocarbonyl steht für einen Alkylaminocarbonylrest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, tert-Butylaminocarbonyl, n- Pentylaminocarbonyl, n-Hexylaminocarbonyl, N.N-Dimethylaminocarbonyl, N,N-Diethyl- aminocarbonyl, N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N-Methyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-iso-Propyl- N-n-propylaminocarbonyl, N-tert-Butyl-N-methylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-n-pentylaminocarbonyl und N-n-Hexyl-N-methyl-aminocarbonyl. Ci-Cs-Alkylaminocarbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminocarbonyl- rest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.
Alkylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonylamino, Ethyl- carbonylamino, n-Propylcarbonylamino, iso-Propylcarbonylamino, n-Butylcarbonylamino und tert- Butylcarbonylamino.
Alkylsulfonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonyl, Ethylsulfonyl, n-Propyl- sulfonyl, Isopropylsulfonyl, tert-Butylsulfonyl, n-Pentylsulfonyl und n-Hexylsulfonyl.
Cycloalkyl steht für eine mono- oder bicyclische Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 7, bevorzugt 5 oder 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkyl seien genannt Cyc- lopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl.
Aryl per se und "Aryl" in Aryloxy und Arylcarbonylamino steht für einen mono- oder bicyclischen aromatischen Rest mit in der Regel 6 bis 10 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Phenyl und Naphthyl.
Aryloxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Phenyloxy und Naphtyloxy.
Arylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Phenylcarbonylamino und Naphtyl- carbonylamino.
Heterocyclyl steht für einen mono- oder bicyclischen, heterocyclischen Rest mit in der Regel 3 bis 10, vorzugsweise 5 bis 8 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe N, O, S, SO, SO2, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann. Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- bis 8-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, beispielhaft und vorzugsweise für Oxetan-3-yl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothienyl, Pyranyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperi- din-3-yl, Piperidin-4-yl, Thiopyranyl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Per- hydroazepinyl, Piperazin-1-yl, Piperazin-2-yl.
Heteroaryl steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest mit in der Regel 5 bis 10, vorzugsweise 5 bis 6 Ringatomen und bis zu 5, vorzugsweise bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O und N, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann, beispielhaft und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyri- midyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl, Chinolinyl, Isochi- nolinyl, Benzoxazolyl, Benzimidazolyl. Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod, vorzugsweise für Fluor und Chlor.
Wenn Reste in den Verbindungen der Formel (I), ihre Salze, ihre Solvate oder die Solvate ihrer Salze substituiert sind, können die Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach gleich oder verschieden substituiert sein. Eine Substitution mit bis zu drei gleichen oder ver- schiedenen Substituenten ist bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem Substituenten.
Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht,
R2 für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4- Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C6-C10)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (C1-
C8)-Alkylen-R4 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydro- xy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, ge- gebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Cr
Co)-AIkOXy und (CrC6)-Alkylamino,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4- benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydro- naphthyl, (C6-Ci0)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis
10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkylthio, -OR5 oder -C(=O)R6 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander aus- gewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Oxo, Trifluor- methyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C1- C6)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkoxy und (C1-C6)- Alkylamino,
" R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkyl, (C6-Cio)-Aryl, Ben- zyl oder (C3-C7)-Cycloalkyl steht,
wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C1-Ce)-AIlCyI, (CrC6)-Alkoxy und (C1-
C6)-Alkylamino,
R6 für (CrC6)-Alkyl, (CrC6)-Alkylammo oder (CrC6)-Alkoxy steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1 , 2 oder 3 steht,
R1 für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht,
R2 für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-I,4-benzodioxin, 2,2,4,4- Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)- Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl oder (C1-Cs)-AUCyIBn-R4 steht,
wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydro- xy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluorsubstituiertes (C1-Ce)-AIlCyI und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C]-Co)-AIkOXy,
wobei R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4- benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6- gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Hydro- xy, Cyano, Trifluormethyl oder -OR5 steht,
wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluor- methoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C1-Co)-Al]CyI und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkoxy,
R5 für, gegebenenfalls mit Fluor substituiertes (C1-Co)-AIlCyI, Phenyl, Benzyl oder (C3-C7)-Cycloalkyl steht,
wobei Phenyl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluor- methoxy, (CrC6)-Alkyl und (CrC6)-Alkoxy,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 Wasserstoff oder Fluor steht,
R2 Wasserstof, Fluor oder Chlor steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4-
Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C5-C7)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2- yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl oder
(CrC5)-Alkylen-R4 steht,
wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1- yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C1-Cs)-AIlCyI und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C1-Cs)-AUsOXy,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4- benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C5-C7)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpho- lin-l-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR5 steht,
wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Pipe- ridin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC3)-Alkoxy,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC3)-Alkyl steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 Wasserstoff steht,
R2 Chlor steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C5-C7)-Cycloalkyl oder (CrC5)-Alkylen-R4 steht,
wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci- C3)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkoxy,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C5-C7)-Cycloalkyl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR5 steht,
wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substi- tuenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (d-C3)-Alkoxy,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkyl steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher E für Methylen steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher n für 1 steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R1 für Wasserstoff steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R2 für Chlor steht.
Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R3 für 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, Phenyl, 4-Difluormethoxyphenyl, 3-Difluormethoxyphenyl, 4-(l,l,2,2-Tetrafluorethoxy)phenyl, Cyclohexyl, 2-Phenyleth-l-yl, 2-(4-Chlorphenyl)eth-l-yl oder 2-(Thien-2-yl)eth-l-yl steht.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der neuen Verbindungen der Formel (I), wobei Verbindungen der Formel (II)
Figure imgf000013_0001
in welcher
R1, R2, E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Verbindungen der Formel (JE)
H2N-R3 (IE),
in welcher
R3 die oben angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von O0C bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normal- druck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Tri- chlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2-Dimethoxyethan, oder andere Lösemittel wie Aceton, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, 2-Butanon oder Ace- tonitril, bevorzugt ist Dimethylformamid.
Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hy- drogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, oder DBU, DBΝ, Pyri- din, oder Mischungen der Basen, bevorzugt ist Diisopropylethylamin.
Die Verbindungen der Formel (HI) liegen gegebenenfalls als Salze vor, bevorzugt als Hydrochlori- de.
Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder und können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (FV)
Figure imgf000015_0001
in welcher
R1, R2, E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Diphenylcyanocarbonimidat umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, π-Propanol oder iso- Propanol, bevorzugt ist wo-Propanol.
Die Verbindungen der Formel (FV) sind bekannt oder und können hergestellt werden, indem Ver- bindungen der Formel (V)
Figure imgf000015_0002
in welcher
R1, R2, E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
in einem zweistufigen Verfahren zunächst mit Formaldehyd und anschließend mit Hydrazinhydrat umgesetzt werden. Die Umsetzung in der ersten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, π-Propanol oder iso- Propanol, bevorzugt ist Ethanol.
Basen sind beispielsweise organische Basen wie Aminbasen, z.B. Piperidin, Triethylamin, Diiso- propylethylamin oder DBU, bevorzugt ist Piperidin.
Die Umsetzung in der zweiten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Nor- maldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, «-Propanol oder iso- Propanol, bevorzugt ist Ethanol.
Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder und können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (VI)
Figure imgf000016_0001
in welcher
R1 und R2 die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Verbindungen der Formel (VH)
Figure imgf000016_0002
in welcher
E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen, umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, gegebenenfalls unter Zusatz von Kaliumiodid, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfiuss des Lösungsmittels bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethy lether, Methyl-tert-buty lether, 1,2-Di- methoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan oder Cyclohexan, oder andere Lösungsmittel wie Essigsäureethylester, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, bevorzugt ist Dimethylformamid oder Tetrahydrofuran.
Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Kalium- oder Lithiumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Natrium- oder Kalium- methanolat, oder Natrium- oder Kaliumethanolat oder KaliunWert-butylat, oder Amide wie Natri- umamid, Lithium-bis-(trimethylsilyl)amid oder Lithiumdiisopropylamid, oder andere Basen wie Natriumhydrid, Pyridin oder DBU, bevorzugt ist Natriumhydrid.
In einem alternativen Verfahren können auch anstelle von Verbindungen der Formel (VIT) Verbindungen der Formel (VIII)
Figure imgf000017_0001
in welcher
E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen, mit Verbindungen der Formel (VI) umgesetzt werden.
Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls unter Zusatz von Kaliumiodid, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfiuss des Lösungsmittels bei Normaldruck.
Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethylether, Methyl-ferf-butylether, 1,2-Di- methoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan oder Cyclohexan, oder andere Lösungsmittel wie Essigsäureethylester, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, bevorzugt ist Dimethylformamid. Die Verbindungen der Formeln (HI), (VI), (VTL) und (VIH) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.
Die Herstellung der Verbindungen der Formel (I) kann durch folgendes Syntheseschema verdeutlicht werden.
Schema 1:
Figure imgf000018_0001
Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches und pharmakokinetisches Wirkspektrum. Es handelt sich dabei um selektive Antago- nisten des PAR-I -Rezeptors, die insbesondere als Thrombozytenaggregationshemmer wirken.
Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembo- lischen Erkrankungen und/oder thromboembolischen Komplikationen.
Zu den „thromboembolischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen ins- besondere Erkrankungen wie Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhöhung (STEMI) und ohne ST-
Segment-Erhöhung (non-STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoris, Reokklusio- nen und Restenosen nach Koronarinterventionen wie Angioplastie, Stentimplantation oder aorto- koronarem Bypass, periphere arterielle Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, tiefe venöse
Thrombosen und Nierenvenenthrombosen, transitorische ischämische Attacken sowie thromboti- scher und thromboembolischer Hirnschlag.
Die Substanzen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thrombo- embolien, wie beispielsweise Hirn-Ischämien, Schlaganfall und systemischen Thromboembolien und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und solchen, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit künstlichen Herzklappen. Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung der disseminierten intravasalen Gerinnung (DIC) geeignet.
Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie Hämodialyse, sowie Herzklappenprothesen.
Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Beeinflussung der Wundheilung, für die Prophylaxe und/oder Behandlung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen wie rheumatische Erkrankungen des Bewegungsapparats, koronaren Herzkrankheiten, von Herzinsuffizienz, von Bluthochdruck, von entzündlichen Erkrankungen, wie z.B. Asthma, entzündlichen Lungenerkrankungen, Glomerulonephritis und entzündlichen Darmer- krankungen in Betracht, darüber hinaus ebenso für die Prophylaxe und/oder Behandlung der AIz- heimer'schen Erkrankung. Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, bei Mikroangiopathien, altersbedingter Makula- Degeneration, diabetischer Retinopathie, diabetischer Nephropathie und anderen mikrovaskulären Erkrankungen sowie zur Prävention und Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur Verhinderung von Koagulation ex vivo eingesetzt werden, z.B. zur Konservierung von Blut- und Plasmaprodukten, zur Reinigung/Vorbehandlung von Kathetern und anderen medizinischen Hilfsmitteln und Geräten, zur Beschichtung künstlicher Oberflächen von in vivo oder ex vivo eingesetzten medizinischen Hilfs- mittein und Geräten oder bei biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfϊndungsgemäßen Ver- bindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, insbesondere bei Blutkonserven oder biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge der erfin- dungsgemäßen Verbindung zugegeben wird.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctivae otisch oder als Implantat bzw. Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.
Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/ oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Filme/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
' Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern.
Bevorzugt ist die orale Applikation.
Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen, -lösungen, -sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale therapeutische Systeme (wie beispielsweise Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überfuhrt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (bei- spielsweise mikrokristalline Cellulose, Laktose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige PoIy- ethylenglycole), Emulgatoren und Dispergier- oder Netzmittel (beispielsweise Natrium- dodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisen- oxide) und Geschmacks- und / oder Geruchskorrigentien.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.
Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 100 mg je 24 Stunden. Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise "10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.
A) Beispiele
Abkürzungen:
Boc fert-Butoxycarbonyl
CDCl3 Deuterochloroform
CO2 Kohlendioxid d Tag
DIEA N,N-Diisopropylethylamin
DMAP 4-N,N-Dimethylaminopyridin
DMF Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid d. Th. der Theorie
EDC N'-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid x HCl eq. Äquivalent
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS) ges. gesättigt h Stunde
HOBt 1-Hydroxy-lH-benzotriazol x H2O
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie konz. konzentriert
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie min. Minuten
MS Massenspektrometrie
MW Molekulargewicht [g/mol]
NMM N-Methylmorpholin
NMR Kernresonanzspektroskopie
Rf Retentionsindex (bei DC)
RP-HPLC Reverse Phase HPLC
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC)
TEA Triethylamin
THF Tetrahydrofuran Methoden
Methode 1 (HPLC, Enantiomerentrennung): Chiraler Kieselgelselektor KBD 5326 (250 mm x 30 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 240C; Fluss: 25 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 2 (HPLC): Chiraler Kieselgelselektor KBD 5326 (250 mm x 4.6 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 240C; Fluss: 2.0 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 3 (HPLC, Enantiomerentrennung): Chiraler Kieselgelselektor SYFO 7266 (250 mm x 30 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-D-leucin-dicyclopropyhnethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 240C; Fluss: 50 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 4 (HPLC): Chiraler Kieselgelselektor SYFO 7266 (250 mm x 4.6 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-D-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 240C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 5 (GC-MS): Instrument: Micromass GCT, GC6890; Säule: Restek RTX-35MS, 30m x 250μm x 0.25μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88ml/min; Ofen: 600C; Inlet: 25O0C; Gradient: 6O0C (0.30 min halten), 50°C/min -> 1200C, 16°C/min -> 25O0C, 30°C/min -» 3000C (1.7 min halten).
Methode 6 (LC-MS): Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A -» 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 208- 400 nm.
Methode 7 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A ■> 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A ■> 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Ofen: 5O0C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 8 (LC-MS): Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795;
Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90%A -> 2.5 min 30%A -> 3.0 min 5%A -> 4.5 min 5%A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 500C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 9 (HPLC, Enantiomerentrennung): Chiraler Kieselgelselektor KBD 6175 (250 mm x 30 mm) basierend auf dem Selektor PolyζN-methacryloyl-L-leucin-D-menthylamid); Essigsäure- ethylester : i-Hexan = 9 : 1; Temperatur: 24°C; Fluss: 30 ml/min; UV-Detektion: 270 nm.
Methode 10 (HPLC): Chiraler Kieselgelselektor KBD 6175 (250 mm x 4.6 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin-D-menthylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 24°C; Fluss: 2.0 ml/min; UV-Detektion: 270 nm.
Ausgangsverbindungen
Beispiel IA
5-Methoxy-3,4-dihydro-2H-pyrrol
",3
Figure imgf000026_0001
20 g (235 mmol) Pyrrolidin-2-on werden zu 22.2 ml (235 mmol) Dimethylsulfat gegeben und die erhaltene Mischung wird 16 h bei 600C gerührt. Nach Abkühlen wird auf 200 ml ges. wässrige Kaliumcarbonat-Lösung gegeben und 30 min gerührt. Es wird dreimal mit Diethy lether extrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernen des Lösungsmittels wird durch Destillation (70 mbar) gereinigt. Man erhält 10.2 g (44% d. Th.) des gewünschten Produktes.
GC-MS (Methode 5): Rt = 2.57 min.
MS (EI): m/z = 99 (M)+
1H-NMR (200 MHz, CDCl3): δ = 1.95-2.12 (m, 2H), 2.46 (dd, 2H), 3.66 (tt, 2H), 3.81 (s, 3H).
Beispiel 2A
1 -[2-(5-Chlor-2-thienyl)-2-oxoethyl]pyrrolidin-2-on
Figure imgf000026_0002
Zu einer Lösung von 78 g (117 mmol) rohem (36 %-ig.) 2-Brom-l-(5-chlor-2-thienyl)ethanon (J.B.
Bagli, E. Ferdinand, Can. J. Chem 53, 2598 (1975)) in 75 ml DMF gibt man 20.9 g (221 mmol) 5-
Methoxy-3,4-dihydro-2H-pyrrol (Beispiel IA) und rührt 18 h bei RT. Das Lösungmittel wird im Hockvakuum weitgehend abgezogen, der Rückstand zwischen ges. Kochsalzlösung und Ethylace- tat verteilt und die Wasserphase noch viermal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird an 1 kg Kieselgel mit Ethylacetat chromatographiert. Man erhält 27.8 g (97% d.Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 6): Rt = 1.81 min.
MS (ESIpos): m/z = 244 (M+H)+
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 2.00 (m, 2H), 2.29 (t, 2H), 3.38 (t, 2H), 4.70 (s, 2H), 7.35 (d, IH), 7.99 (d, IH).
Beispiel 3A
l-{l-[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]vinyl}pyrrolidin-2-on
Figure imgf000027_0001
Zu einer Lösung von 27.8 g ( 114 mmol) der Verbindung Beispiel 2A und 115.7 g (1.425 mol) wässriger Formaldehyd-Lösung (37%-ig) in 120 ml DMF tropft man 12.14 g (142.6 mmol) Piperi- din und rührt 18 h bei 70 0C. Nach dem Abkühlen wird mit Wasser versetzt und fünfmal mit E- thylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird an 600 g Kieselgel mit Isohexan/Ethylacetat (2:3) chromatographiert. Man erhält 7.26 g (25% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 7): R, = 1.99 min.
MS (ESI pos): m/z = 256 (M+H)+
1H-NMR (400 MHz, DMSOd6): δ = 2.10 (m, 2H), 2.85 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 5.08 (s, IH), 5.18 (s, IH), 7.25 (d, IH), 7.57 (d, IH). Beispiel 4A
l-[3-(5-Chlor-2-thienyl)-4,5-dihydro-lH-pyrazol-4-yl]pyrrolidin-2-on
Figure imgf000028_0001
Eine Lösung von 35.7 g (139.6 mmol) der Verbindung Beispiel 3A in 750 ml DMF wird mit 14.26 g (279 mmol) Hydrazinhydrat 18 h bei RT gerührt. Das Lösungmittel wird im Hockvakuum weitgehend abgezogen, der Rückstand zwischen ges. Kochsalzlösung und Ethylacetat verteilt und die Wasserphase noch viermal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Es werden 51.2 g (quarrt.) Rohprodukt erhalten, das ohne Aufreinigung weiter umgesetzt wird.
LC-MS (Methode 6): R4 = 1.80 min.
MS (ESI pos): m/z = 270 (M+H)+
Beispiel 5A
Phenyl-3-(5-chlor-2-thienyl)-N-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-l-yl)-4,5-dihydro-lH-pyrazol-l- carboximidoat
Figure imgf000028_0002
5 g (18.5 mmol) l-[3-(5-Chlor-2-thienyl)-4,5-dihydro-lH-pyrazol-4-yl]pyrrolidin-2-on (Rohprodukt Beispiel 4A) werden mit 5.3 g (22.24 mmol) Diphenylcyanocarbonimidat unter Argon in 50 ml 2-Propanol über Nacht zum Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird der ausgefallene Niederschlag abfiltriert und an Kieselgel mit Isohexan / Ethylacetat (0 bis 80%) chromatographiert. Nach Verrühren mit Ethylacetat werden 0.83 g (11% d. Th.) farbloser Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 8): R1 = 2.08 min.
+
MS (ESI pos): m/z = 414 (M+H)
1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ = 2.05 (m, 2H), 2.40 (m, 2H), 3.10 (m, IH), 3.40 (m, IH)5 4.20 (dd, IH), 4.35 (dd, IH), 6.13 (dd, IH), 6.88 (d, IH), 7.15 (m, 2H), 7.23 (d, IH), 7.30 (m, IH), 7.42 (m, 2H).
Ausführungsbeisniele:
Beispiel 1
N-[2-(2-Chlorphenyl)ethyl]-3-(5-chlor-2-thienyl)-N'-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-l-yl)-4,5-dihydro- 1 H-pyrazol- 1 -carboximidamid
Figure imgf000030_0001
Zu einer Lösung von 100 mg (0.24 mmol) der Verbindung Beispiel 5A in 1 ml DMF gibt man 75 mg ( 0.48 mmol) 2-(2-Chlorophenyl)ethylamin und rührt 1.5 h bei RT. Die Reaktionsmischung wird über präparativer HPLC gereinigt. Man erhält 108 mg (94% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 8): Rt = 2.37 min.
MS (ESI pos): m/z = 475 (M+H)+
1H-NMR (300 MHz, D6-DMSO): δ = 1.65 - 2.00 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 2.83 (m, IH), 3.03 (t, 2H), 3.35 (IH, überlagert durch Wasser-Signal), 3.62 (q, 2H), 4.20 (m, 2H), 5.95 (m, IH), 6.88 (d, IH), 7.15 (m, 2H), 7.23 (d, IH), 7.28 (m, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.90 (t, IH).
In Analogie zu Beispiel 1 werden die Verbindungen der Beispiele 2 bis 12 hergestellt. Ausnahme: Beispiel 6. Hier beträgt die Reaktionszeit nur 15 min, das Produkt fallt aus der Reaktionsmischung aus, wird abgesaugt und im Vakuum getrocknet.
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000032_0001
Beispiel 13
N-(3-Chlor-4-fluorphenyl)-3-(5-chlor-2-thienyl)-N'-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-l-yl)-4,5-dihydro- 1 H-pyrazol- 1 -carboximidamid
Figure imgf000033_0001
Zu einer Lösung von 70 mg (0.48 mmol) 3-Chlor-4-fluoranilin in 2.5 ml wasserfreiem THF tropft man unter Argon bei O0C 0.24 ml (0.48 mmol) einer 2 M Lösung von LDA in THF und rührt 15 min bei O0C bis RT nach. Bei O0C gibt man nun 100 mg (0.24 mmol) der Verbindung Beispiel 5 A zu und rührt nach Entfernen der externen Kühlung 2 h weiter. Die Reaktionsmischung wird in gesättigte Ammoniumchlorid-Lösung gegossen, dreimal mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten organischen Phasen mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird wird über präparative HPLC (Acetonitril / Wasser) gereinigt. Man erhält 62 mg (55% d.Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 8): R1 = 2.21 min.
MS (ESI pos): m/z = 465 (M+H)+
1H-NMR (300 MHz, DMSOd6): δ = 1.80 - 2.00 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 2.90 (m, IH), 3.20 - 3.50 (m, 3H, überlagert durch Wasser-Signal), 4.17 - 4.35 (m, 2H), 6.00 (dd, IH), 7.20 (d, IH), 7.24 (d, IH), 7.35 (m, IH), 7.43 (m, IH), 7.57 (m, IH).
Beispiel 14
N-(4-Trifluorbutyl)-3-(5-chlor-2-thienyl)-N'-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-l-yl)-4,5-dihydro-lH- pyrazol- 1 -carboximidamid
Figure imgf000034_0001
Zu einer Lösung von 100 mg (0.24 mmol) der Verbindung Beispiel 5 A in 10 ml DMF gibt man 51 mg (0.31 mmol) 4-Trifluorbutylamin-hydrochlorid und 0.09 ml (0.63 mmol) Triethylamin und rührt 3 h bei 5O0C. Die Reaktionsmischung wird in eine Mischung aus halbgesättigter Ammoni- umchloridlösung und Ethylacetat gegeben und die Phasen getrennt. Die organische Phase wird über Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wird über 15 g Kieselgel aufgereinigt (Laufmittel Dichlormethan:Ethylacetat = 5:1 bis 3:1, dann Dichlormethan: Ethylace- tat:Methanol = 30:10:1). Man erhält 55 mg (51% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 7): R4 = 2.44 min.
MS (ESI pos): m/z = 447 (M+H)+
1H-NMR (300 MHz, D6-DMSO): δ = 1.72-1.99 (m, 4H), 2.18-2.37 (m, 4H), 2.83-2.89 (m, IH), 3.30-3.45 (m, 2H), 4.18^.27 (m, 2H), 5.94 (dd, IH), 7.13 (d, IH), 7.21 (d, IH), 7.88 (t, IH).
Beispiel 15
N-(4-Trifluorbutyl)-3-(5-chlor-2-thienyl)-N'-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-l-yl)-4,5-dihydro-lH- pyrazol-1-carboximidamid
Figure imgf000034_0002
Beispiel 14 wird nach Methode 9 in die Enantiomere getrennt. Das aktive Enantiomer eluiert als zweites.
HPLC (Methode 10): R4= 8.70 min. B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Abkürzungen;
DMEM Dulbecco's Modified Eagle Medium
FCS Fetal CaIf Serum
HEPES 4-(2-hydroxyethyl)-l-piperazineethanesulfonic acid
Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden:
In vitro Assays
a) Zellulärer, funktioneller in vitro-Test
Die Identifizierung von Agonisten des humanen Protease Aktivierten Rezeptors 1 (PARI) sowie die Quantifizierung der Wirksamkeit der hier beschriebenen Substanzen erfolgt mit Hilfe einer rekombinanten Zelllinie. Die Zelle leitet sich ursprünglich von einer embryonalen Nierenzelle des Menschen (HEK293; ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA) ab. Die Testzelllinie exprimiert konstitutiv eine modifizierte Form des calcium-sensitiven Photoproteins Aequorin, das nach Rekonstitution mit dem Co-Faktor Coelenterazin bei Erhöhungen der freien Calcium-Konzentration im inneren mitochondrialen Kompartiment Licht emittiert (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T.; Nature 1992, 358, 325-327). Zusätzlich exprimiert die Zelle stabil den endogenen humanen PARI -Rezeptor sowie den endogenen purinergen Rezeptor P2Y2. Die resultierende PARI -Testzelle reagiert auf Stimulation des endogenen PARI oder P2Y2- Rezeptors mit einer intrazellulären Freisetzung von Calcium-Ionen, die durch die resultierende Aequorin-Lumineszens mit einem geeigneten Luminometer quantifiziert werden kann (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 17, 235-237).
Für die Prüfung der Substanz-Spezifϊtät wird deren Wirkung nach Aktivierung des endogenen PARI -Rezeptors mit der Wirkung nach Aktivierung des endogenen purinergen P2Y2-Rezeptors verglichen, der den gleichen intrazellulären Signalweg nutzt.
Testablauf: Die Zellen werden zwei Tage (48 Std.) vor dem Test in Kulturmedium (DMEM F 12, ergänzt mit 10% FCS5 2 mM Glutamine, 20 mM HEPES, l,4mM Pyruvat, 0,1 mg/ml Gentamycin, 0,15% Na-Bicarbonat; BioWhittaker CatJ BE04-687Q; B-4800 Verviers, Belgien) in 384-Loch- Mikrotiterplatten ausplattiert und in einem Zellinkubator (96% Luftfeuchtigkeit, 5% v/v CO2, 370C) gehalten. Am Testtag wird das Kulturmedium durch eine Tyrodelösung (in mM: 140 NaCl, 5 KCl, 1 MgCl2, 2 CaCl2, 20 Glucose, 20 EEPES)5 das zusätzlich den Co-Faktor Coelenterazin (25 μM) und Glutathion (4 mM) enthält, ausgetauscht und die Mikrotiterplatte anschließend für weitere 3-4 Stunden inkubiert. Dann werden die Testsubstanzen auf die Mikrotiterplatte pipettiert und 5 Minuten nach Übertragung der Testsubstanzen in die Wells der Mikrotiterplatte wird die Platte in das Luminometer transferiert, eine PARl-Agonist-Konzentration, die EC50 entspricht, zugeschossen und sofort das resultierende Lichtsignal im Luminometer gemessen. Zur Unterscheidung einer Antagonist-Substanzwirkung von einer toxischen Wirkung wird unmittelbar anschließend der endogene purinerge Rezeptor mit Agonist aktiviert (ATP, 10 μM Endkonzentration) und das resultierende Lichtsignal gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle A gezeigt:
Tabelle A:
Figure imgf000036_0001
b) Thrombozytenaggregation
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natrium Citrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 2500 U/min für 20 min bei 40C zentrifugiert.
Für die Aggregationsmessungen werden Aliquots des plättchenreichen Plasmas mit aufsteigenden Konzentrationen an Prüfsubstanz 10 min bei 370C inkubiert. Anschließend wird die Aggregation durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (SFLLRN) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross MJ., The Aggregation of Blood Platelets; J Physiol. 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt. Die SFLLRN-Konzen- tration, die zur maximalen Aggregation führt, wird jeweils für jeden Spender individuell ermittelt. Zur Berechnung der inhibitorischen Wirkung wird die Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten in Gegenwart und Abwesenheit von Prüfsubstanz ermittelt und die Inhibition berechnet. Aus den Inhibitionskurven wird die Konzentration berechnet, die die Aggregation zu 50% hemmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle B gezeigt:
Tabelle B:
Figure imgf000037_0001
c) Stimulation gewaschener Thrombozyten und Analyse im FACS (Fluorescence Associated Cell Sorter)
Isolierung gewaschener Thrombozyten:
Humanes Vollblut wird mittels Venenpunktion von freiwilligen Spendern gewonnen und in Mo- novetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) überfuhrt, die als Antikoagulans Natriumeitrat enthalten (1 Teil Natriumeitrat 3.8% + 9 Teile Vollblut). Die Monovetten werden bei 900 Umdrehungen pro Minute und 40C über einen Zeitraum von 20 Minuten zentrifugiert (Heraeus Instruments, Deutschland; Megafuge 1. ORS). Das plättchenreiche Plasma wird vorsichtig abgenommen und in ein 50 ml-Falconröhrchen überfuhrt. Nun wird das Plasma mit ACD-Puffer (44 mM Natriumeitrat, 20.9 mM Zitronensäure, 74.1 mM Glucose) versetzt. Das Volumen des ACD-Puffers entspricht einem Viertel des Plasmavolumens. Durch zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C werden die Thrombozyten sedimentiert. Danach wird der Überstand vorsichtig abdekan- tiert und verworfen. Die präzipitierten Thrombozyten werden zunächst vorsichtig mit einem Milliliter Waschpuffer (113 mM Natriumchlorid, 4 mM Dinatriumhydrogenphosphat, 24 mM Natrium- dihydrogenphosphat, 4 mM Kaliunichlorid, 0.2 mM Ethylenglycol-bis-(2-aminoethyl)-N,N,N'N'- tetraessigsäure, 0.1% Glucose) resuspendiert und dann mit Waschpuffer auf ein Volumen aufgefüllt, das dem der Plasmamenge entspricht. Der Waschvorgang wird ein zweites Mal durchgeführt. Nachdem die Thrombozyten durch eine erneute zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C präzipitiert worden sind, werden sie vorsichtig in einem Milliliter Inkubationspuffer (134 mM Natriumchlorid, 12 mM Natriumhydrogencarbonat, 2.9 mM Kaliumchlorid, 0.34 mM Natriumdihydrogencarbonat, 5 mM HEPES, 5 mM Glucose, 2 mM Calciumchlorid und 2 mM Magnesiumchlorid) resuspendiert und mit Inkubationspuffer auf eine Konzentration von 300.000 Thrombozyten pro μl eingestellt.
FACS-Färbung und Stimulierung der humanen Thrombozyten mit humanem α-Thrombin in Gegenwart oder Abwesenheit eines PAR-I -Antagonisten:
Die Thrombozytensuspension wird mit der zu prüfenden Substanz bzw. des entsprechenden Lösungsmittels für 10 Minuten bei 37°C vorinkubiert (Eppendorf, Deutschland; Thermomixer Com- fort). Durch Zugabe des Agonisten (0.5 μM bzw. 1 μM α-Thrombin; Kordia, Niederlande, 3281 NIH Units/mg; oder 30μg/ml Thrombin receptor activating peptide (TRAP6); Bachern, Schweiz) bei 37° und unter Schütteln von 500 Umdrehungen pro Minute wird die Thrombozytenaktivierung ausgelöst. Zu den Zeitpunkten 0, 1, 2.5, 5, 10 und 15 Minuten wird jeweils ein Aliquot von 50μl entnommen und in einen Milliliter einfach-konzentrierte CellFix™-Lösung (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) überfuhrt. Zur Fixierung der Zellen werden sie 30 Minuten bei 40C in der Dunkelheit inkubiert. Durch eine zehnminütige Zentrifugation bei 600 g und 4°C werden die Thrombozyten präzipitiert. Der Überstand wird verworfen und die Thrombozyten werden in 400 μl CellWash™ (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) resuspendiert. Ein Aliquot von 100 μl wird in ein neues FACS-Röhrchen überführt, lμl des thrombozyten- identifizierenden Antikörpers und 1 μl des aktivierungszustands-detektierenden Antikörpers werden mit CellWash™ auf ein Volumen von 100 μl aufgefüllt. Diese Antikörperlösung wird dann zur Thrombozytensuspension gegeben und 20 Minuten bei 40C in der Dunkelheit inkubiert. Im An- Schluss an die Färbung wird das Ansatzvolumen durch Zugabe von weiteren 400 μl CellWash™ erhöht.
Zur Identifizierung der Thrombozyten wird ein fluorescein-isothiocyanat-konjugierter Antikörper eingesetzt, der gegen das humane Glykoprotein üb (CD41) gerichtet ist (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 0649). Mit Hilfe des phycoerythrin-konjugierten Antikörpers, der gegen das humane Glykoprotein P-Selektin (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 1759) gerichtet ist, lässt sich der Aktivierungszustand der Thrombozyten bestimmen. P-Selektin (CD62P) ist in den α- Granula ruhender Thrombozyten lokalisiert. Es wird jedoch nach in-vitro- bzw. in-vivo- Stimulierung zur äußeren Plasmamembran translokalisiert.
FACS-Messung und Auswertung der FACS-Daten:
Die Proben werden im Gerät FACSCalibur™ Flow Cytometry System der Firma Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA, vermessen und mit Hilfe der Software CellQuest, Version 3.3 (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) ausgewertet und graphisch dargestellt. Das Maß der Thrombozytenaktivierung wird durch den Prozentsatz der CD62P-positiven Thrombozy- ten (CD41 -positive Ereignisse) bestimmt. Es werden von jeder Probe 10.000 CD41-positive Ereignisse gezählt.
Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird anhand der Reduktion der Throm- bozytenaktivierung berechnet, die sich auf die Aktivierung durch den Agonisten bezieht.
Ex vivo Assay
Thrombozytenaggregation (Meerschweinchen)
Meerschweinchen (Stamm: Dunkin Hartley) werden in wachem oder narkotisiertem Zustand oral, intravenös oder intraperitoneal mit Prüfsubstanzen in geeigneter Formulierung behandelt. Als Kontrolle werden andere Meerschweinchen in identischer Weise mit dem entsprechenden Vehikel behandelt. Nach je nach Applikationsart unterschiedlich langer Zeit wird aus den tief narkotisierten Tieren Blut durch Punktion des Herzens oder der Aorta gewonnen. Das Blut wird in Mono- vetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natrium Citrat 3.8% (1 Teil Cit- ratlösung + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Zitrat-Vollblut bei 2500 U/min für 20 min bei 4°C zentrifugiert.
Die Aggregation wird durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (SFLLRN, 50 μg/ml) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Bora, G. V.R., Cross MJ., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol 1963, 168, 178-195) bei 37°C bestimmt.
Zur Aggregationsmessung wird die Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggre- gationskurve in %) 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten ermittelt. Die inhibitorische Wirkung der verabreichten Prüfsubstanzen in den behandelten Tieren wird durch die Reduktion der Aggregation, bezogen auf den Mittelwert der Kontrolltiere, berechnet.
In vivo Assay
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Thrombosemodellen in geeigneten Tierspezies, in denen die Thrombin-induzierte Plättchenaggregation über den PAR-I -Rezeptor vermittelt wird, untersucht werden. Als Tierspezies eignen sich Meerschweinchen und insbesondere Primaten
(vergleiche: Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinu- ma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL,
D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855-861). C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
Tablette;
Zusammensetzung:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung:
Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).
Orale Suspension;
Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.
Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6h gerührt. Intravenös applizierbare Lösung;
Zusammensetzung:
1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Injektionszwecke.
Herstellung:
Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0,22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel (I)
Figure imgf000042_0001
in welcher
E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluor- methoxy steht,
R2 für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluor- methoxy steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C6- Cio)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (CrC8)-Alkylen-R4 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit
1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C]-C<s)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkoxy, (Ci-C6)-Alkylamino, Phenyl, Hydroxycarbonyl, (Ci-C6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkylamino- carbonyl, (Ci-C6)-Alkylcarbonyl, (Ci-CfO-Alkylcarbonyloxy, (Ci-C6)- Alkylcarbonylamino und (Ci-C6)-Alkylsulfonyl,
wobei R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3- Dihydro- 1 ,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H- 1 ,3 -benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C6-CiO)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano,
5 Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C]-C6)-Alkylthio,
-OR5 oder -C(=O)R6 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy,
10 Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy,
Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C)-C6)-Alkyl, gegebenenfalls (C]-C6)-Alkoxycarbonyl- oder Fluor-substituiertes (Ci-C6)- Alkoxy, (Ci-C6)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C]-C6)- Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkylaminocarbonyl, (Ci-C6)-
15 Alkylcarbonyl, (CrC6)-Alkylcarbonyloxy, (Ci-Ce)- Alkylcarbonylamino und (CrC6)-Alkylsulfonyl,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkyl, (C6-Ci0)- Aryl, Benzyl, (C3-C7)-Cycloalkyl oder (CrC6)-Alkylcarbonyl steht,
20 wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (Ci-C6)- Alkyl, (CrC6)-Alkoxy, (CrC6)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl,
25 Hydroxycarbonyl, (Ci-C6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (Cr
C6)-Alkylaminocarbonyl, (Ci-C6)-AIkylcarbonyl, (Ci-C6)- Alkylcarbonyloxy,
Figure imgf000043_0001
und (Ci-C6)- Alkylsulfonyl,
R6 für Hydroxy, Amino, (Ci-C6)-Alkyl, (CrC6)-Alkylamino, (CrC6)-
30 Alkoxy, (C6-Ci0)-Aryl, Benzyloxy oder 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl steht,
wobei Aryl und Benzyloxy substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (CrC6)-Alkyl, (C]-Ce)-AIkOXy, (C1-Co)-AHSyIaHImO, Phenyl, Benzyl, Hydroxy- carbonyl, (C1-C6)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (Ci-C6)-Alkyl- aminocarbonyl, (C1-C6)-Alkylcarbonyl, (Ci-C6)-Alkylcarbonyloxy,
(Ci-C6)-Alkylcarbonylamino und (C1-C6)-Alkylsulfonyl,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
2. Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1,
in welcher
E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht,
R2 für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3 ,4-Tetrahydronaphthyl, (C6-
Cio)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (CrC8)-Alkylen-R4 steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe beste- hend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-Ce)-AIkVl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-Ce)-Alkoxy und (Ci-C6)-Alkylamino,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3- Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl,
1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C6-Cio)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkylthio, - OR5 oder -C(=O)R6 steht, wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetra- hydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkyl, gegebenenfalls Fluorsubstituiertes (C1-Co)-AIkOXy und (Ci-C6)-Alkylamino,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC6)-Alkyl, (C6-C10)- Aryl, Benzyl oder (C3-C7)-Cycloalkyl steht,
wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der
Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (Ci-Cβ)- Alkyl, (CrC6)-Alkoxy und (CrC6)-Alkylamino,
R6 für (CrC6)-Alkyl, (C1-Ce)-AIlCyIaTOmO oder (CrC6)-Alkoxy steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
3. Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 ,
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht,
R2 für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl oder (CrC5)-Alkylen- R4 steht,
wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C6)-Alkyl und gegebenenfalls Fluorsubstituiertes (Ci-Co)-AIkOXy,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difiuor-l,3-benzodioxol, 2,3- Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,
4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Indanyl,
Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C3-C7)-Cycloalkyl,
5- bis 7- gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl oder -OR5 steht,
wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Triflu- ormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CI-CO)- Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-Co)-AIkOXy,
R5 für, gegebenenfalls mit Fluor substituiertes (Ci-C6)-Alkyl, Phenyl, Benzyl oder (C3-C7)-Cycloalkyl steht,
wobei Phenyl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit
1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Triflu- ormethoxy, Difluormethoxy, (Ci-C6)-Alkyl und (Ci-Ce)-Alkoxy,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1,
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 Wasserstoff oder Fluor steht,
R2 Wasserstof, Fluor oder Chlor steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-l,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-l,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyri- dyl, Pyrimidyl, (C5-C7)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Pi- peridin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl oder (Ci-C5)-Alkylen-R4 steht,
wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Pipe- ridin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der
Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Diflu- ormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkoxy,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, 2,3-
Dihydro- 1 ,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H- 1 ,3 -benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C5-C7)-Cycloalkyl, Pyrro- lidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Pipe- ridin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3- yl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR5 steht,
wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls
Fluor-substituiertes (CrC3)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C,-C3)-Alkoxy,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkyl steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1,
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R1 Wasserstoff steht, R2 Chlor steht,
R3 für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C5-C7)- Cycloalkyl oder (CrC5)-Alkylen-R4 steht,
wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substi- tuenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus
Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (CrC3)-Alkoxy,
wobei
R4 für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-l,3-benzodioxol, Phenyl,
Pyridyl, (C5-C7)-Cycloalkyl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR5 steht,
wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluor- methoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C1-Cs)-AIlCyI und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (Ci-C3)-Alkoxy,
R5 für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C1-Cs)-AIlCyI steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
6. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I), wie in Anspruch 1 definiert, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel (II)
Figure imgf000048_0001
in welcher
R1, R2, E und n die Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen, mit Verbindungen der Formel (IQ)
H2N-R3 m
in welcher
R3 die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt werden.
7. Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
8. Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz- Kreislauf-Erkrankungen.
9. Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen.
10. Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz-Kreislauf-Erkrankungen unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert.
11. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff.
12. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten
Hilfsstoff.
13. Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, dadurch gekennzeichnet, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I), wie wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zugegeben wird.
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