DE102004061747A1

DE102004061747A1 - Thiophen-substituierte Pyrazoline

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Publication number: DE102004061747A1
Application number: DE102004061747A
Authority: DE
Inventors: Dirk Dr. Brohm; Nicole Dr. Diedrichs; Walter Dr. Hübsch; Britta-Nicole Dr. Fröhlen; Christoph Dr. Gerdes; Mark Jean Dr. Gnoth; Elisabeth Dr. Perzborn; Verena Dr. Vöhringer
Original assignee: Bayer Healthcare AG
Current assignee: Bayer AG
Priority date: 2004-12-22
Filing date: 2004-12-22
Publication date: 2006-07-06
Also published as: WO2006072349A1

Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Blutgerinnung. Die vorliegende Erfindung betrifft insbesondere die Verwendung von Thiophen-substituierten Pyrazolinen als Arzneimittel, neue Thiophen-substituierte Pyrazoline und Verfahren zu ihrer Herstellung sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembolischen Erkrankungen.

Description

Thrombozyten (Blutplättchen) sind ein wesentlicher Faktor sowohl in der physiologischen Blutstillung (Hämostase) als auch bei thromboembolischen Erkrankungen. Insbesondere im arteriellen System kommt Thrombozyten eine zentrale Bedeutung in der komplexen Interaktion zwischen Blutkomponenten und Gefäßwand zu. Unerwünschte Thrombozytenaktivierung kann durch Bildung plättchenreicher Thromben zu thromboembolischen Erkrankungen und thrombotischen Komplikationen mit lebensbedrohlichen Zuständen führen.

Einer der potentesten Plättchenaktivatoren ist die Gerinnungsprotease Thrombin, die an verletzten Blutgefäßwänden gebildet wird und neben der Fibrinbildung zur Aktivierung von Thrombozyten, Endothelzellen und mesenchymalen Zellen führt (Vu TKH, Hung DT, Wheaton VI, Coughlin SR, Cell 1991, 64, 1057–1068). An Thrombozyten in vitro und in Tiermodellen hemmen Thrombin-Inhibitoren die Plättchenaggregation bzw. die Bildung plättchenreicher Thromben. Beim Menschen können arterielle Thrombosen erfolgreich mit Inhibitoren der Thrombozytenfunktion sowie Thrombin-Inhibitoren behandelt werden (Bhatt DL, Topol EJ, Nat. Rev. Drug Discov. 2003, 2, 15–28). Deshalb besteht eine hohe Wahrscheinlichkeit, dass Antagonisten der Thrombinwirkung auf Blutplättchen die Bildung von Thromben und das Auftreten von klinischen Folgen wie Herzinfarkt und Schlaganfall vermindern. Weitere zelluläre Thrombinwirkungen, z.B. auf Gefäßendothel- und -glattmuskelzellen, Leukozyten und Fibroblasten, sind möglicherweise für entzündliche und proliferative Erkrankungen verantwortlich.

Die zellulären Effekte von Thrombin werden zumindest teilweise über eine Familie G-Protein-gekoppelter Rezeptoren (Protease Activated Receptors, PARs) vermittelt, deren Prototyp der PAR-1-Rezepor darstellt. PAR-1 wird durch Bindung von Thrombin und proteolytische Spaltung seines extrazellulär liegenden N-Terminus aktiviert. Durch die Proteolyse wird ein neuer N-Terminus mit der Aminosäurensequenz SFLLRN... freigelegt, der als Agonist („Tethered Ligand") zur intramolekularen Rezeptoraktivierung und Übertragung intrazellulärer Signale führt. Von der Tethered-Ligand Sequenz abgeleitete Peptide können als Agonisten des Rezeptors eingesetzt werden und führen auf Thrombozyten zur Aktivierung und Aggregation.

Antikörper und andere selektive PAR-1-Antagonisten hemmen die Thrombin-induzierte Aggregation von Thrombozyten in vitro bei niedrigen bis mittleren Thrombinkonzentrationen (Kahn ML, Nakanishi-Matsui M, Shapiro MJ, Ishihara H, Coughlin SR, J. Clin. Invest. 1999, 103, 879–887). Ein weiterer Thrombinrezeptor mit möglicher Bedeutung für die Pathophysiologie thrombotischer Prozesse, PAR-4, wurde auf humanen und tierischen Thrombozyten identifiziert. In experimentellen Thrombosen an Tieren mit einem dem Menschen vergleichbaren PAR-Expressionsmuster reduzieren PAR-1-Antagonisten die Bildung plättchenreicher Thromben (Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855–861).

In den letzten Jahren wurde eine Vielzahl von Substanzen auf ihre plättchenfunktionshemmende Wirkung geprüft. In der Praxis haben sich nur wenige Plättchenfunktionshemmer bewährt. Es besteht daher ein Bedarf an Pharmazeutika, die spezifisch eine gesteigerte Plättchenreaktion hemmen ohne das Blutungsrisiko erheblich zu erhöhen und damit das Risiko von thromboembolischen Komplikationen vermindern. Im Gegensatz zur Inhibition der Proteaseaktivität von Thrombin mit direkten Thrombin-Inhibitoren sollte eine Blockade des PAR-1 zur Hemmung der Thrombozytenaktivierung ohne Verminderung der Gerinnungsfähigkeit des Blutes führen.

Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, neue PAR-1-Antagonisten zur Behandlung von Herz-Kreislauf-Erkrankungen, wie z.B. thromboembolischen Erkrankungen bei Menschen und Tieren zur Verfügung zu stellen.

EP-A 466 408, EP-A 438 690, EP-A 532 918 und WO 93/24463 beschreiben strukturell ähnliche Pyrazolin-Derivate und ihre Verwendung als Pestizide.

WO 02/00651 beschreibt Pyrazolin-Derivate als Faktor Xa-Inhibitoren zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen.

Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I)

in welcher
E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R¹ für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluormethoxy steht,
R² für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluormethoxy steht,
R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (C₁-C₈)-Alkylen-R⁴ steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl,
wobei
R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkylthio, -OR⁵ oder -C(=O)R⁶ steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl- oder Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylamino carbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkyl-carbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl,
R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, Benzyl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl oder (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl steht,
wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl,
R⁶ für Hydroxy, Amino, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkylamino, (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₆-C₁₀)-Aryl, Benzyloxy oder 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl steht,
wobei Aryl und Benzyloxy substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Erfindungsgemäße Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze; die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungsbeispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in stereoisomeren Formen (Enantiomere, Diastereomere) existieren. Die Erfindung umfasst deshalb die Enantiomeren oder Diastereomeren und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können als E- und Z-Isomere an der C-N-Doppelbindung der Cyanoguanidin-Gruppe vorliegen, bevorzugt ist das Z-Isomer.

Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegenden Erfindung sämtliche tautomere Formen.

Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind aber auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind aber beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäßen Verbindungen verwendet werden können.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditionssalze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure, Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.

Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kaliumsalze), Erdalkalisalze (z.B. Calcium- und Magnesiumsalze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C-Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methylmorpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin.

Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
Alkyl per se und "Alk" und "Alkyl" in Alkoxy, Alkylamino, Alkylcarbonyl, Alkylcarbonyloxy, Alkoxycarbonyl, Alkylaminocarbonyl, Alkylcarbonylamino und Alkylsulfonyl stehen für einen linearen oder verzweigten Alkylrest mit 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Methyl, Ethyl, n-Propyl, iso-Propyl, n-Butyl, tert-Butyl, n-Pentyl und n-Hexyl.

Alkylen steht für einen geradkettigen oder verzweigten Alkylenrest mit in der Regel 1 bis 8, vorzugsweise 1 bis 6 Kohlenstoffatomen, der gegebenenfalls eine oder mehrere Doppel- oder Dreifachbindungen enthält. Beispielsweise und vorzugsweise seien genannt Methylen, Ethylen, Propylen, Propan-1,2-diyl, Propan-2,2-diyl, Butan-1,3-diyl, Butan-2,4-diyl, Pentan-2,4-diyl, 2-Methyl-pentan-2,4-diyl.

Alkoxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxy, Ethoxy, n-Propoxy, iso-Propoxy, n-Butoxy, tert-Butoxy, n-Pentoxy und n-Hexoxy.

Alkylamino steht für einen Alkylaminorest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylamino, Ethylamino, n-Propylamino, iso-Propylamino, tert-Butylamino, n-Pentylamino, n-Hexylamino, N,N-Dimethylamino, N,N-Diethylamino, N-Ethyl-N-methylamino, N-Methyl-N-n-propylamino, N-iso-Propyl-N-n-propylamino, N-tert-Butyl-N-methylamino, N-Ethyl-N-n-pentylamino und N-n-Hexyl-N-methylamino. C₁-C₃-Alkylamino steht beispielsweise für einen Monoalkylaminorest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminorest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylcarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyl, Ethylcarbonyl, n-Propylcarbonyl, iso-Propylcarbonyl, n-Butylcarbonyl und tert-Butylcarbonyl.

Alkylcarbonyloxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonyloxy, Ethylcarbonyloxy, n-Propylcarbonyloxy, iso-Propylcarbonyloxy, n-Butylcarbonyloxy und tert-Butylcarbonyloxy.

Alkoxycarbonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, n-Propoxycarbonyl, iso-Propoxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl, tert-Butoxycarbonyl, n-Pentoxycarbonyl und n-Hexoxycarbonyl.

Alkylaminocarbonyl steht für einen Alkylaminocarbonylrest mit einem oder zwei (unabhängig voneinander gewählten) Alkylsubstituenten, beispielhaft und vorzugsweise für Methylaminocarbonyl, Ethylaminocarbonyl, n-Propylaminocarbonyl, iso-Propylaminocarbonyl, tert-Butylaminocarbonyl, n-Pentylaminocarbonyl, n-Hexylaminocarbonyl, N,N-Dimethylaminocarbonyl, N,N-Diethylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-methylaminocarbonyl, N-Methyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-iso-Propyl-N-n-propylaminocarbonyl, N-tert-Butyl-N-methylaminocarbonyl, N-Ethyl-N-n-pentylaminocarbonyl und N-n-Hexyl-N-methyl-aminocarbonyl. C₁-C₃-Alkylaminocarbonyl steht beispielsweise für einen Monoalkylaminocarbonylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen oder für einen Dialkylaminocarbonylrest mit jeweils 1 bis 3 Kohlenstoffatomen pro Alkylsubstituent.

Alkylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylcarbonylamino, Ethylcarbonylamino, n-Propylcarbonylamino, iso-Propylcarbonylamino, n-Butylcarbonylamino und tert-Butylcarbonylamino.

Alkylsulfonyl steht beispielhaft und vorzugsweise für Methylsulfonyl, Ethylsulfonyl, n-Propylsulfonyl, Isopropylsulfonyl, tert.-Butylsulfonyl, n-Pentylsulfonyl und n-Hexylsulfonyl.

Cycloalkyl steht für eine mono- oder bicyclische Cycloalkylgruppe mit in der Regel 3 bis 7, bevorzugt 5 oder 6 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Cycloalkyl seien genannt Cyclopropyl, Cyclobutyl, Cyclopentyl, Cyclohexyl und Cycloheptyl.

Aryl per se und "Aryl" in Aryloxy und Arylcarbonylamino steht für einen mono- oder bicyclischen aromatischen Rest mit in der Regel 6 bis 10 Kohlenstoffatomen, beispielhaft und vorzugsweise für Phenyl und Naphthyl.

Aryloxy steht beispielhaft und vorzugsweise für Phenyloxy und Naphtyloxy.

Arylcarbonylamino steht beispielhaft und vorzugsweise für Phenylcarbonylamino und Naphtylcarbonylamino.

Heterocyclyl steht für einen mono- oder bicyclischen, heterocyclischen Rest mit in der Regel 3 bis 10, vorzugsweise 5 bis 8 Ringatomen und bis zu 3, vorzugsweise bis zu 2 Heteroatomen und/oder Heterogruppen aus der Reihe N, O, S, SO, SO₂, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann. Die Heterocyclyl-Reste können gesättigt oder teilweise ungesättigt sein. Bevorzugt sind 5- bis 8-gliedrige, monocyclische gesättigte Heterocyclylreste mit bis zu zwei Heteroatomen aus der Reihe O, N und S, beispielhaft und vorzugsweise für Oxetan-3-yl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Tetrahydrofuranyl, Tetrahydrothienyl, Pyranyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Thiopyranyl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Perhydroazepinyl, Piperazin-1-yl, Piperazin-2-yl.

Heteroaryl steht für einen aromatischen, mono- oder bicyclischen Rest mit in der Regel 5 bis 10, vorzugsweise 5 bis 6 Ringatomen und bis zu 5, vorzugsweise bis zu 4 Heteroatomen aus der Reihe S, O und N, wobei ein Stickstoffatom auch ein N-Oxid bilden kann, beispielhaft und vorzugsweise für Thienyl, Furyl, Pyrrolyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Oxadiazolyl, Pyrazolyl, Imidazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, Pyridazinyl, Pyrazinyl, Indolyl, Indazolyl, Benzofuranyl, Benzothiophenyl, Chinolinyl, Isochinolinyl, Benzoxazolyl, Benzimidazolyl.

Halogen steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod, vorzugsweise für Fluor und Chlor.

Wenn Reste in den Verbindungen der Formel (I), ihre Salze, ihre Solvate oder die Solvate ihrer Salze substituiert sind, können die Reste, soweit nicht anders spezifiziert, ein- oder mehrfach gleich oder verschieden substituiert sein. Eine Substitution mit bis zu drei gleichen oder verschiedenen Substituenten ist bevorzugt. Ganz besonders bevorzugt ist die Substitution mit einem Substituenten.

Bevorzugt sind Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R¹ für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht,
R² für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht,
R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (C₁-C₈)-Alkylen-R⁴ steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy und (C₁-C₆)-Alkylamino,
wobei
R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkylthio, -OR⁵ oder -C(=O)R⁶ steht,
wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander aus gewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy und (C₁-C₆)-Alkylamino,
R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, Benzyl oder (C₃-C₇)-Cycloalkyl steht,
wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkoxy und (C₁-C₆)-Alkylamino,
R⁶ für (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkylamino oder (C₁-C₆)-Alkoxy steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R¹ für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht,
R² für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht,
R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl oder (C₁-C₅)-Alkylen-R⁴ steht,
wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy,
wobei
R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl oder -OR⁵ steht,
wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy,
R⁵ für, gegebenenfalls mit Fluor substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, Phenyl, Benzyl oder (C₃-C₇)-Cycloalkyl steht,
wobei Phenyl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl und (C₁-C₆)-Alkoxy,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R¹ Wasserstoff oder Fluor steht,
R² Wasserstof Fluor oder Chlor steht,
R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl oder (C₁-C₅)-Alkylen-R⁴ steht,
wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy,
wobei
R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR⁵ steht,
wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy,
R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I),
in welcher
E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht,
n für 1, 2 oder 3 steht,
R¹ Wasserstoff steht,
R² Chlor steht,
R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl oder (C₁-C₅)-Alkylen-R⁴ steht,
wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy,
wobei
R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR⁵ steht,
wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy,
R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl steht,
und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher E für Methylen steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher n für 1 steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R¹ für Wasserstoff steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R² für Chlor steht.

Bevorzugt sind auch Verbindungen der Formel (I), in welcher R³ für 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, Phenyl, 4-Difluormethoxyphenyl, 3-Difluormethoxyphenyl, 4-(1,1,2,2-Tetrafluorethoxy)phenyl, Cyclohexyl, 2-Phenyleth-1-yl, 2-(4-Chlorphenyl)eth-1-yl oder 2-(Thien-2-yl)eth-1-yl steht.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der neuen Verbindungen der Formel (I), wobei Verbindungen der Formel (II)

in welcher
R¹, R², E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Verbindungen der Formel (III) H₂N-R³ (III),in welcher
R³ die oben angegebene Bedeutung aufweist,
umgesetzt werden.

Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von 0°C bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Halogenkohlenwasserstoffe wie Methylenchlorid, Trichlormethan oder 1,2-Dichlorethan, Ether wie Dioxan, Tetrahydrofuran oder 1,2-Dimethoxyethan, oder andere Lösemittel wie Aceton, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, 2-Butanon oder Acetonitril, bevorzugt ist Dimethylformamid.

Basen sind beispielsweise Alkalicarbonate, wie z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder -hydrogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine z.B. Triethylamin, N-Methylmorpholin, N-Methylpiperidin, 4-Dimethylaminopyridin oder Diisopropylethylamin, oder DBU, DBN, Pyridin, oder Mischungen der Basen, bevorzugt ist Diisopropylethylamin.

Die Verbindungen der Formel (III) liegen gegebenenfalls als Salze vor, bevorzugt als Hydrochloride.

Die Verbindungen der Formel (II) sind bekannt oder und können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (IV)

in welcher
R¹, R², E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Diphenylcyanocarbonimidat umgesetzt werden.

Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss der Lösungsmittel bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol oder iso-Propanol, bevorzugt ist iso-Propanol.

Die Verbindungen der Formel (IV) sind bekannt oder und können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (V)

in welcher
R¹, R², E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
in einem zweistufigen Verfahren zunächst mit Formaldehyd und anschließend mit Hydrazinhydrat umgesetzt werden.

Die Umsetzung in der ersten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, in Gegenwart einer Base, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol oder iso-Propanol, bevorzugt ist Ethanol.

Basen sind beispielsweise organische Basen wie Aminbasen, z.B. Piperidin, Triethylamin, Diisopropylethylamin oder DBU, bevorzugt ist Piperidin.

Die Umsetzung in der zweiten Stufe erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.

Die Verbindungen der Formel (V) sind bekannt oder und können hergestellt werden, indem Verbindungen der Formel (VI)

in welcher
R¹ und R² die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
mit Verbindungen der Formel (VII)

in welcher
E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen,
umgesetzt werden.

Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls in Gegenwart einer Base, gegebenenfalls unter Zusatz von Kaliumiodid, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethylether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan oder Cyclohexan, oder andere Lösungsmittel wie Essigsäureethylester, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, bevorzugt ist Dimethylformamid oder Tetrahydrofuran.

Basen sind beispielsweise Alkalihydroxide wie Natrium-, Kalium- oder Lithiumhydroxid, oder Alkalicarbonate wie Cäsiumcarbonat, Natrium- oder Kaliumcarbonat, oder Natrium- oder Kaliummethanolat, oder Natrium- oder Kaliumethanolat oder Kalium-tert-butylat, oder Amide wie Natriumamid, Lithium-bis-(trimethylsilyl)amid oder Lithiumdiisopropylamid, oder andere Basen wie Natriumhydrid, Pyridin oder DBU, bevorzugt ist Natriumhydrid.

In einem alternativen Verfahren können auch anstelle von Verbindungen der Formel (VII) Verbindungen der Formel (VIII)

in welcher
E und n die oben angegebene Bedeutung aufweisen, mit Verbindungen der Formel (VI) umgesetzt werden.

Die Umsetzung erfolgt im Allgemeinen in inerten Lösungsmitteln, gegebenenfalls unter Zusatz von Kaliumiodid, bevorzugt in einem Temperaturbereich von Raumtemperatur bis zum Rückfluss des Lösungsmittels bei Normaldruck.

Inerte Lösungsmittel sind beispielsweise Ether wie Diethylether, Methyl-tert-butylether, 1,2-Dimethoxyethan, Dioxan oder Tetrahydrofuran, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Xylol, Toluol, Hexan oder Cyclohexan, oder andere Lösungsmittel wie Essigsäureethylester, Dimethylformamid, Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, Acetonitril oder Pyridin, bevorzugt ist Dimethylformamid.

Die Verbindungen der Formeln (III), (VI), (VII) und (VIII) sind bekannt oder lassen sich nach bekannten Verfahren aus den entsprechenden Ausgangsverbindungen synthetisieren.

Die Herstellung der Verbindungen der Formel (I) kann durch folgendes Syntheseschema verdeutlicht werden.

Schema 1:

Die erfindungsgemäßen Verbindungen zeigen ein nicht vorhersehbares, wertvolles pharmakologisches und pharmakokinetisches Wirkspektrum. Es handelt sich dabei um selektive Antagonisten des PAR-1-Rezeptors, die insbesondere als Thrombozytenaggregationshemmer wirken.

Sie eigenen sich daher zur Verwendung als Arzneimittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten bei Menschen und Tieren.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist der Einsatz der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, vorzugsweise von thromboembolischen Erkrankungen und/oder thromboembolischen Komplikationen.

Zu den „thromboembolischen Erkrankungen" im Sinne der vorliegenden Erfindung zählen insbesondere Erkrankungen wie Herzinfarkt mit ST-Segment-Erhöhung (STEMI) und ohne ST-Segment-Erhöhung (non-STEMI), stabile Angina Pectoris, instabile Angina Pectoris, Reokklusionen und Restenosen nach Koronarinterventionen wie Angioplastie, Stentimplantation oder aortokoronarem Bypass, periphere arterielle Verschlusskrankheiten, Lungenembolien, tiefe venöse Thrombosen und Nierenvenenthrombosen, transitorische ischämische Attacken sowie thrombotischer und thromboembolischer Hirnschlag.

Die Substanzen eignen sich daher auch zur Prävention und Behandlung von kardiogenen Thromboembolien, wie beispielsweise Hirn-Ischämien, Schlaganfall und systemischen Thromboembolien und Ischämien, bei Patienten mit akuten, intermittierenden oder persistierenden Herzarrhythmien, wie beispielsweise Vorhofflimmern, und solchen, die sich einer Kardioversion unterziehen, ferner bei Patienten mit Herzklappen-Erkrankungen oder mit künstlichen Herzklappen. Darüber hinaus sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung der disseminierten intravasalen Gerinnung (DIC) geeignet.

Thromboembolische Komplikationen treten ferner auf bei mikroangiopathischen hämolytischen Anämien, extrakorporalen Blutkreisläufen, wie Hämodialyse, sowie Herzklappenprothesen.

Außerdem kommen die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Beeinflussung der Wundheilung, für die Prophylaxe und/oder Behandlung von atherosklerotischen Gefäßerkrankungen und entzündlichen Erkrankungen wie rheumatische Erkrankungen des Bewegungsapparats, koronaren Herzkrankheiten, von Herzinsuffizienz, von Bluthochdruck, von entzündlichen Erkrankungen, wie z.B. Asthma, entzündlichen Lungenerkrankungen, Glomerulonephritis und entzündlichen Darmerkrankungen in Betracht, darüber hinaus ebenso für die Prophylaxe und/oder Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung. Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Inhibition des Tumorwachstums und der Metastasenbildung, bei Mikroangiopathien, altersbedingter Makula-Degeneration, diabetischer Retinopathie, diabetischer Nephropathie und anderen mikrovaskulären Erkrankungen sowie zur Prävention und Behandlung thromboembolischer Komplikationen, wie beispielsweise venöser Thromboembolien, bei Tumorpatienten, insbesondere solchen, die sich größeren chirurgischen Eingriffen oder einer Chemo- oder Radiotherapie unterziehen, eingesetzt werden.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können darüber hinaus auch zur Verhinderung von Koagulation ex vivo eingesetzt werden, z.B. zur Konservierung von Blut- und Plasmaprodukten, zur Reinigung/Vorbehandlung von Kathetern und anderen medizinischen Hilfsmitteln und Geräten, zur Beschichtung künstlicher Oberflächen von in vivo oder ex vivo eingesetzten medizinischen Hilfsmitteln und Geräten oder bei biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer erfindungsgemäßen Verbindung.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend eine erfindungsgemäße Verbindung und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, insbesondere bei Blutkonserven oder biologischen Proben, die Blutplättchen enthalten, das dadurch gekennzeichnet ist, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge der erfindungsgemäßen Verbindung zugegeben wird.

Der Wirkstoff, die erfindungsgemäße Verbindung, kann systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck kann er auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.

Für diese Applikationswege kann der Wirkstoff in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden.

Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende schnell und/oder modifiziert die erfindungsgemäßen Verbindungen abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nichtüberzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten, sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfindungsgemäßen Verbindungen kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Kapseln, Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.

Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Resorptionsschrittes geschehen (intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (intramuskulär, subcutan, intracutan, percutan, oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten und sterilen Pulvern.

Bevorzugt ist die orale Applikation.

Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalationsarzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Nebulizer), Nasentropfen/-lösungen, Sprays; lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- und Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wässrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen), lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, Milch, Pasten, Streupuder, Stents oder Implantate.

Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in an sich bekannter Weise in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies geschieht unter Verwendung inerter, nichttoxischer, pharmazeutisch geeigneter Hilfsstoffe. Hierzu zählen u.a. Trägerstoffe (z.B. mikrokristalline Cellulose), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren (z.B. Natriumdodecylsulfat), Dispergiermittel (z.B. Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Biopolymere (z.B. Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie Eisenoxide) oder Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien.

Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, vorzugsweise zusammen mit einem oder mehreren inerten nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken.

Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 5 bis 250 mg je 24 Stunden zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Menge etwa 5 bis 100 mg je 24 Stunden.

Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt.

Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Die Angabe "w/v" bedeutet "weight/volume" (Gewicht/Volumen). So bedeutet beispielsweise "10% w/v": 100 ml Lösung oder Suspension enthalten 10 g Substanz.

A) Beispiele
Abkürzungen:

Boc: tert-Butoxycarbonyl
CDCl₃: Deuterochloroform
CO₂: Kohlendioxid
d: Tag
DIEA: N,N-Diisopropylethylamin
DMAP: 4-N,N-Dimethylaminopyridin
DMF: Dimethylformamid
DMSO: Dimethylsulfoxid
d. Th.: der Theorie
EDC: N'-(3-Dimethylaminopropyl)-N-ethylcarbodiimid × HCl
eq.: Äquivalent
ESI: Elektrospray-Ionisation (bei MS)
ges.: gesättigt
h: Stunde
HOBt: 1-Hydroxy-1H-benzotriazol × H₂O
HPLC: Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
konz.: Konzentiert
LC-MS: Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektroskopie
min.: Minuten
MS: Massenspektroskopie
MW: Molekulargewicht [g/mol]
NMM: N-Methylmorpholin
NMR: Kernresonanzspektroskopie
R_f: Retentionsindex (bei DC)
RP-HPLC: Reverse Phase HPLC
RT: Raumtemperatur
R_t: Retentionszeit (bei HPLC)
TEA: Triethylamin
THF: Tetrahydrofuran

Methoden
Methode 1 (HPLC, Enantiomerentrennung):
Chiraler Kieselgelselektor KBD 5326 (250 mm × 30 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 24°C; Fluss: 25 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 2 (HPLC):
Chiraler Kieselgelselektor KBD 5326 (250 mm × 4.6 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-L-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 24°C; Fluss: 2.0 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 3 (HPLC, Enantiomerentrennung):
Chiraler Kieselgelselektor SYFO 7266 (250 mm × 30 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-D-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 24°C; Fluss: 50 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 4 (HPLC):
Chiraler Kieselgelselektor SYFO 7266 (250 mm × 4.6 mm) basierend auf dem Selektor Poly(N-methacryloyl-D-leucin-dicyclopropylmethylamid); Essigsäureethylester; Temperatur: 24°C; Fluss: 2 ml/min; UV-Detektion: 280 nm.
Methode 5 (GC-MS):
Instrument: Micromass GCT, GC6890; Säule: Restek RTX-35MS, 30m × 250μm × 0.25μm; konstanter Fluss mit Helium: 0.88ml/min; Ofen: 60°C; Inlet: 250°C; Gradient: 60°C (0.30 min halten), 50°C/min → 120°C, 16°C/min → 250°C, 30°C/min → 300°C (1.7 min halten).
Methode 6 (LC-MS):
Instrument: Micromass Quattro LCZ mit HPLC Agilent Serie 1100; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm × 4 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 208–400 nm.
Methode 7 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: HP 1100 Series; UV DAD; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm × 4 mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min. 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 8 (LC-MS):
Gerätetyp MS: Micromass ZQ; Gerätetyp HPLC: Waters Alliance 2795; Säule: Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm × 4mm; Eluent A: 1 l Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 l Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A → 2.5 min 30% A → 3.0 min 5% A → 4.5 min 5% A; Fluss: 0.0 min 1 ml/min, 2.5 min/3.0 min/4.5 min 2 ml/min; Ofen: 50°C; UV-Detektion: 210 nm.
Ausgangsverbindungen
Beispiel 1A
5-Methoxy-3,4-dihydro-2H-pyrrol
20 g (235 mmol) Pyrrolidin-2-on werden zu 22.2 ml (235 mmol) Dimethylsulfat gegeben und die erhaltene Mischung wird 16 h bei 60°C gerührt. Nach Abkühlen wird auf 200 ml ges. wässrige Kaliumcarbonat-Lösung gegeben und 30 min gerührt. Es wird dreimal mit Diethylether extrahiert und die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet. Nach Entfernen des Lösungsmittels wird durch Destillation (70 mbar) gereinigt. Man erhält 10.2 g (44% d. Th.) des gewünschten Produktes.
GC-MS (Methode 5): R_t = 2.57 min.
MS (EI): m/z = 99 (M)⁺
¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃): δ = 1.95-2.12 (m, 2H), 2.46 (dd, 2H), 3.66 (tt, 2H), 3.81 (s, 3H).
Beispiel 2A
1-[2-(5-Chlor-2-thienyl)-2-oxoethyl]pyrrolidin-2-on
Zu einer Lösung von 78 g (117 mmol) rohem (36 %-ig.) 2-Brom-1-(5-chlor-2-thienyl)ethanon (J.B. Bagli, E. Ferdinand, Can. J. Chem 53, 2598 (1975)) in 75 ml DMF gibt man 20.9 g (221 mmol) 5-Methoxy-3,4-dihydro-2H-pyrrol (Beispiel 1A) und rührt 18 h bei RT. Das Lösungmittel wird im Hockvakuum weitgehend abgezogen, der Rückstand zwischen ges. Kochsalzlösung und Ethylacetat verteilt und die Wasserphase noch viermal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird an 1 kg Kieselgel mit Ethylacetat chromatographiert. Man erhält 27.8 g (97% d.Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 6): R_t = 1.81 min.
MS (ESIpos): m/z = 244 (M+H)⁺
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): δ = 2.00 (m, 2H), 2.29 (t, 2H), 3.38 (t, 2H), 4.7 (s, 2H), 7.35 (d, 1H), 7.99 (d, 1H).
Beispiel 3A
1-{1-[(5-Chlor-2-thienyl)carbonyl]vinyl}pyrrolidin-2-on
Zu einer Lösung von 27.8 g (114 mmol) der Verbindung Beispiel 2A und 115.7 g (1.425 mol) wässriger Formaldehyd-Lösung (37%-ig) in 120 ml DMF tropft man 12.14 g (142.6 mmol). Piperidin und rührt 18 h bei 70 °C. Nach dem Abkühlen wird mit Wasser versetzt und fünfmal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird an 600 g Kieselgel mit Isohexan/Ethylacetat (2:3) chromatographiert. Man erhält 7.26 g (25% d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 7): R_t = 1.99 min.
MS (ESI pos): m/z = 256 (M+H)⁺
¹H-NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ = 2.1 (m, 2H), 2.85 (t, 2H), 3.7 (t, 2H), 5.08 (s, 1H), 5.18 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.57 (d, 1H).
Beispiel 4A
1-[3-(5-Chlor-2-thienyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-4-yl]pyrrolidin-2-on
Eine Lösung von 35.7 g (139.6 mmol) der Verbindung Beispiel 3A in 750 ml DMF wird mit 14.26 g (279 mmol) Hydrazinhydrat 18 h bei RT gerührt. Das Lösungmittel wird im Hockvakuum weitgehend abgezogen, der Rückstand zwischen ges. Kochsalzlösung und Ethylacetat verteilt und die Wasserphase noch viermal mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Es werden 51.2 g (quant.) Rohprodukt erhalten, das ohne Aufreinigung weiter umgesetzt wird.
LC-MS (Methode 6): R_t = 1.80 min.
MS (ESI pos): m/z = 270 (M+H)⁺
Beispiel 5A
Phenyl-3-(5-chlor-2-thienyl)-N-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-1-yl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-carboximidoat
5 g (18.5 mmol) 1-[3-(5-Chlor-2-thienyl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-4-yl]pyrrolidin-2-on (Rohprodukt Beispiel 4A) werden mit 5.3 g (22.24 mmol) Diphenylcyanocarbonimidat unter Argon in 50 ml 2-Propanol über Nacht zum Rückfluß erhitzt. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wird der ausgefallene Niederschlag abfiltriert und an Kieselgel mit Isohexan/Ethylacetat (0 bis 80%) chromatographiert. Nach Verrühren mit Ethylacetat werden 0.83 g (11% d. Th.) farbloser Feststoff erhalten.
LC-MS (Methode 8): R_t = 2.08 min.
MS (ESI pos): m/z = 414 (M+H)⁺
¹H-NMR (300 MHz, CDCl₃): δ = 2.05 (m, 2H), 2.4 (m, 2H), 3.1 (m, 1H), 3.4 (m, 1H), 4.2 (dd, 1H), 4.35 (dd, 1H), 6.13 (dd, 1H), 6.88 (d, 1H), 7.15 (m, 2H), 7.23 (d, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.42 (m, 2H).
Ausführungsbeispiele:
Beispiel 1
N-[2-(2-Chlorphenyl)ethyl]-3-(5-chlor-2-thienyl)-N'-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-1-yl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-carboximidamid
Zu einer Lösung von 100 mg (0.24 mmol) der Verbindung Beispiel 5A in 1 ml DMF gibt man 75 mg (0.48 mmol) 2-(2-Chlorophenyl)ethylamin und rührt 1.5 h bei RT. Die Reaktionsmischung wird über präp. HPLC gereinigt. Man erhält 108 mg (94 % d. Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 8): R_t = 2.37 min.
MS (ESI pos): m/z = 475 (M+H)⁺
¹H-NMR (300 MHz, D₆-DMSO): δ = 1.65–2.0 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 2.83 (m, 1H), 3.03 (t, 2H), 3.35 (1H, überlagert durch Wasser-Signal), 3.62 (q, 2H), 4.2 (m, 2H), 5.95 (m, 1H), 6.88 (d, 1H), 7.15 (m, 2H), 7.23 (d, 1H), 7.28 (m, 2H), 7.42 (m, 2H), 7.9 (t, 1H)
In Analogie zu Beispiel 1 werden die Verbindungen der Beispiele 2 bis 12 hergestellt. Ausnahme: Beispiel 6. Hier beträgt die Reaktionszeit nur 15 min, das Produkt fällt aus der Reaktionsmischung aus, wird abgesaugt und im Vakuum getrocknet.
Beispiel 13
N-(3-Chlor-4-fluorphenyl)-3-(5-chlor-2-thienyl)-N'-cyano-4-(2-oxopyrrolidin-1-yl)-4,5-dihydro-1H-pyrazol-1-carboximidamid
Zu einer Lösung von 70 mg (0.48 mmol) 3-Chlor-4-fluoranilin in 2.5 ml wasserfreiem THF tropft man unter Argon bei 0°C 0.24 ml (0.48 mmol) einer 2 M Lösung von LDA in THF und rührt 15 min bei 0°C bis RT nach. Bei 0°C gibt man nun 100 mg (0.24 mmol) der Verbindung Beispiel 5A zu und rührt nach Entfernen der externen Kühlung 2 h weiter. Die Reaktionsmischung wird in ges. Ammoniumchlorid-Lösung gegossen, dreimal mit Ethylacetat extrahiert, die vereinigten org. Phasen mit ges. Kochsalzlösung gewaschen, über Natriumsulfat getrocknet und im Vakuum eingeengt. Der Rückstand wird wird über präp. HPLC (Acetonitril/Wasser) gereinigt. Man erhält 62 mg (55 % d.Th.) der Titelverbindung.
LC-MS (Methode 8): R_t = 2.21 min.
MS (ESI pos): m/z = 465 (M+H)⁺
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-d₆): δ = 1.8–2.0 (m, 2H), 2.25 (m, 2H), 2.9 (m, 1H), 3.2–3.5 (m, 3H, überlagert durch Wasser-Signal), 4.17–4.35 (m, 2H), 6.0 (dd, 1H), 7.2 (d, 1H), 7.24 (d, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.43 (m, 1H), 7. 57 (m, 1H).
B) Bewertung der physiologischen Wirksamkeit
Abkürzungen:

DMEM: Dulbecco's Modified Eagle Medium
FCS: Fetal Calf Serum
HEPES: 4-(2-hydroxyethyl)-1-piperazineethanesulfonic acid

Die Eignung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung von thromboembolischen Erkrankungen kann in folgenden Assaysystemen gezeigt werden:
In vitro Assays
a) Zellulärer, funktioneller in vitro-Test
Die Identifizierung von Agonisten des humanen Protease Aktivierten Rezeptors 1 (PAR1) sowie die Quantifizierung der Wirksamkeit der hier beschriebenen Substanzen erfolgt mit Hilfe einer rekombinanten Zelllinie. Die Zelle leitet sich ursprünglich von einer embryonalen Nierenzelle des Menschen (HEK293; ATCC: American Type Culture Collection, Manassas, VA 20108, USA) ab. Die Testzelllinie exprimiert konstitutiv eine modifizierte Form des calcium-sensitiven Photoproteins Aequorin, das nach Rekonstitution mit dem Co-Faktor Coelenterazin bei Erhöhungen der freien Calcium-Konzentration im inneren mitochondrialen Kompartiment Licht emittiert (Rizzuto R, Simpson AW, Brini M, Pozzan T.; Nature 1992, 358, 325–327). Zusätzlich exprimiert die Zelle stabil den endogenen humanen PAR1-Rezeptor sowie den endogenen purinergen Rezeptor P2Y2. Die resultierende PAR1-Testzelle reagiert auf Stimulation des endogenen PAR1 oder P2Y2-Rezeptors mit einer intrazellulären Freisetzung von Calcium-Ionen, die durch die resultierende Aequorin-Lumineszens mit einem geeigneten Luminometer quantifiziert werden kann (Milligan G, Marshall F, Rees S, Trends in Pharmacological Sciences 1996, 17, 235–237).
Für die Prüfung der Substanz-Spezifität wird deren Wirkung nach Aktivierung des endogenen PAR1-Rezeptors mit der Wirkung nach Aktivierung des endogenen purinergen P2Y2-Rezeptors verglichen, der den gleichen intrazellulären Signalweg nutzt.
Testablauf:
Die Zellen werden zwei Tage (48 Std.) vor dem Test in Kulturmedium (DMEM F12, ergänzt mit 10% FCS, 2 mM Glutamine, 20 mM HEPES, 1,4mM Pyruvat, 0,1mg/ml Gentamycin, 0,15% Na-Bicarbonat; BioWhittaker Cat.# BE04-687Q; B-4800 Verviers, Belgien) in 384-Loch-Mikrotiterplatten ausplattiert und in einem Zellinkubator (96% Luftfeuchtigkeit, 5% v/v CO₂, 37°C) gehalten. Am Testtag wird das Kulturmedium durch eine Tyrodelösung (in mM: 140 NaCl, 5 KCl, 1 MgCl₂, 2 CaCl₂, 20 Glucose, 20 HEPES), das zusätzlich den Co-Faktor Coelenterazin (25 μM) und Glutathion (4 mM) enthält, ausgetauscht und die Mikrotiterplatte anschließend für weitere 3–4 Stunden inkubiert. Dann werden die Testsubstanzen auf die Mikrotiterplatte pipettiert und 5 Minuten nach Übertragung der Testsubstanzen in die Wells der Mikrotiterplatte wird die Platte in das Luminometer transferiert, eine PAR1-Agonist-Konzentration, die EC₅₀ entspricht, zugeschossen und sofort das resultierende Lichtsignal im Luminometer gemessen. Zur Unterscheidung einer Antagonist-Substanzwirkung von einer toxischen Wirkung wird unmittelbar anschließend der endogene purinerge Rezeptor mit Agonist aktiviert (ATP, 10 μM Endkonzentration) und das resultierende Lichtsignal gemessen. Die Ergebnisse sind in Tabelle A gezeigt: Tabelle A:
b) Thrombozytenaggregation
Zur Bestimmung der Thrombozytenaggregation wird Blut von gesunden Probanden beiderlei Geschlechts, die innerhalb der letzten zehn Tage keine die Thrombozytenaggregation beeinflussende Medikation erhalten hatten, verwendet. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natrium Citrat 3.8% (1 Teil Citrat + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Citrat-Vollblut bei 2500 U/min für 20 min bei 4°C zentrifugiert.
Für die Aggregationsmessungen werden Aliquots des plättchenreichen Plasmas mit aufsteigenden Konzentrationen an Prüfsubstanz 10 min bei 37°C inkubiert. Anschließend wird die Aggregation durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (SFLLRN) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178–195) bei 37°C bestimmt. Die SFLLRN-Konzentration, die zur maximalen Aggregation führt, wird jeweils für jeden Spender individuell ermittelt.
Zur Berechnung der inhibitorischen Wirkung wird die Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten in Gegenwart und Abwesenheit von Prüfsubstanz ermittelt und die Inhibition berechnet. Aus den Inhibitionskurven wird die Konzentration berechnet, die die Aggregation zu 50% hemmt. Die Ergebnisse sind in Tabelle B gezeigt: Tabelle B:
c) Stimulation gewaschener Thrombozyten und Analyse im FACS (Fluorescence Associated Cell Sorter)
Isolierung gewaschener Thrombozyten:
Humanes Vollblut wird mittels Venenpunktion von freiwilligen Spendern gewonnen und in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) überführt, die als Antikoagulans Natriumcitrat enthalten (1 Teil Natriumcitrat 3.8% + 9 Teile Vollblut). Die Monovetten werden bei 900 Umdrehungen pro Minute und 4°C über einen Zeitraum von 20 Minuten zentrifugiert (Heraeus Instruments, Deutschland; Megafuge 1.0RS). Das plättchenreiche Plasma wird vorsichtig abgenommen und in ein 50 ml-Falconröhrchen überführ. Nun wird das Plasma mit ACD-Puffer (44 mM Natriumcitrat, 20.9 mM Zitronensäure, 74.1 mM Glucose) versetzt. Das Volumen des ACD-Puffers entspricht einem Viertel des Plasmavolumens. Durch zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C werden die Thrombozyten sedimentiert. Danach wird der Überstand vorsichtig abdekantiert und verworfen. Die präzipitierten Thrombozyten werden zunächst vorsichtig mit einem Milliliter Waschpuffer (113 mM Natriumchlorid, 4 mM Dinatriumhydrogenphosphat, 24 mM Natriumdihydrogenphosphat, 4 mM Kaliumchlorid, 0.2 mM Ethylenglycol-bis-(2-aminoethyl)-N,N,N'N'-tetraessigsäure, 0.1% Glucose) resuspendiert und dann mit Waschpuffer auf ein Volumen aufgefüllt, das dem der Plasmamenge entspricht. Der Waschvorgang wird ein zweites Mal durchgeführt. Nachdem die Thrombozyten durch eine erneute zehnminütige Zentrifugation bei 2500 Umdrehungen und 4°C präzipitiert worden sind, werden sie vorsichtig in einem Milliliter Inkubationspuffer (134 mM Natriumchlorid, 12 mM Natriumhydrogencarbonat, 2.9 mM Kaliumchlorid, 0.34 mM Natriumdihydrogencarbonat, 5 mM HEPES, 5 mM Glucose, 2 mM Calciumchlorid und 2 mM Magnesiumchlorid) resuspendiert und mit Inkubationspuffer auf eine Konzentration von 300.000 Thrombozyten pro μl eingestellt.
FACS-Färbung und Stimulierung der humanen Thrombozyten mit humanem α-Thrombin in Gegenwart oder Abwesenheit eines PAR-1-Antagonisten:
Die Thrombozytensuspension wird mit der zu prüfenden Substanz bzw. des entsprechenden Lösungsmittels für 10 Minuten bei 37°C vorinkubiert (Eppendorf Deutschland; Thermomixer Comfort). Durch Zugabe des Agonisten (0.5 μM bzw. 1 μM α-Thrombin; Kordia, Niederlande, 3281 NIH Units/mg; oder 30μg/ml Thrombin receptor activating peptide (TRAP6); Bachem, Schweiz) bei 37° und unter Schütteln von 500 Umdrehungen pro Minute wird die Thrombozytenaktivierung ausgelöst. Zu den Zeitpunkten 0, 1, 2.5, 5, 10 und 15 Minuten wird jeweils ein Aliquot von 50μl entnommen und in einen Milliliter einfach-konzentrierte CellFix^TM-Lösung (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) überführt. Zur Fixierung der Zellen werden sie 30 Minuten bei 4°C in der Dunkelheit inkubiert. Durch eine zehnminütige Zentrifugation bei 600 g und 4°C werden die Thrombozyten präzipitiert. Der Überstand wird verworfen und die Thrombozyten werden in 400 μl CellWash^TM (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) resuspendiert. Ein Aliquot von 100 μl wird in ein neues FACS-Röhrchen überführt. 1 μl des thrombozyten-identifizierenden Antikörpers und 1 μl des aktivierungszustands-detektierenden Antikörpers werden mit CellWash^TM auf ein Volumen von 100 μl aufgefüllt. Diese Antikörperlösung wird dann zur Thrombozytensuspension gegeben und 20 Minuten bei 4°C in der Dunkelheit inkubiert. Im Anschluss an die Färbung wird das Ansatzvolumen durch Zugabe von weiteren 400 μl CellWash^TM erhöht.
Zur Identifizierung der Thrombozyten wird ein fluorescein-isothiocyanat-konjugierter Antikörper eingesetzt, der gegen das humane Glykoprotein IIb (CD41) gerichtet ist (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 0649). Mit Hilfe des phycoerythrin-konjugierten Antikörpers, der gegen das humane Glykoprotein P-Selektin (Immunotech Coulter, Frankreich; Cat. No. 1759) gerichtet ist, lässt sich der Aktivierungszustand der Thrombozyten bestimmen. P-Selektin (CD62P) ist in den α-Granula ruhender Thrombozyten lokalisiert. Es wird jedoch nach in-vitro- bzw. in-vivo-Stimulierung zur äußeren Plasmamembran translokalisiert.
FACS-Messung und Auswertung der FACS-Daten:
Die Proben werden im Gerät FACSCalibur^TM Flow Cytometry System der Firma Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA, vermessen und mit Hilfe der Software CellQuest, Version 3.3 (Becton Dickinson Immunocytometry Systems, USA) ausgewertet und graphisch dargestellt. Das Maß der Thrombozytenaktivierung wird durch den Prozentsatz der CD62P-positiven Thrombozyten (CD41-positive Ereignisse) bestimmt. Es werden von jeder Probe 10.000 CD41-positive Ereignisse gezählt.
Die inhibitorische Wirkung der zu prüfenden Substanzen wird anhand der Reduktion der Thrombozytenaktivierung berechnet, die sich auf die Aktivierung durch den Agonisten bezieht.
Ex vivo Assay
Thrombozytenaggregation (Meerschweinchen)
Meerschweinchen (Stamm: Dunkin Hartley) werden in wachem oder narkotisiertem Zustand oral, intravenös oder intraperitoneal mit Prüfsubstanzen in geeigneter Formulierung behandelt. Als Kontrolle werden andere Meerschweinchen in identischer Weise mit dem entsprechenden Vehikel behandelt. Nach je nach Applikationsart unterschiedlich langer Zeit wird aus den tief narkotisierten Tieren Blut durch Punktion des Herzens oder der Aorta gewonnen. Das Blut wird in Monovetten (Sarstedt, Nümbrecht, Deutschland) die als Antikoagulans Natrium Citrat 3.8% (1 Teil Citratlösung + 9 Teile Blut) enthalten, aufgenommen. Zur Gewinnung von plättchenreichem Plasma wird das Zitrat-Vollblut bei 2500 U/min für 20 min bei 4°C zentrifugiert.
Die Aggregation wird durch Zugabe eines Thrombin-Rezeptor Agonisten (SFLLRN, 50 μg/ml) in einem Aggregometer ausgelöst und mittels der turbidimetrischen Methode nach Born (Born, G.V.R., Cross M.J., The Aggregation of Blood Platelets; J. Physiol. 1963, 168, 178–195) bei 37°C bestimmt.
Zur Aggregationsmessung wird die Zunahme der Lichttransmission (Amplitude der Aggregationskurve in %) 5 Minuten nach Zugabe des Agonisten ermittelt. Die inhibitorische Wirkung der verabreichten Prüfsubstanzen in den behandelten Tieren wird durch die Reduktion der Aggregation, bezogen auf den Mittelwert der Kontrolltiere, berechnet.
In vivo Assay
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Thrombosemodellen in geeigneten Tierspezies, in denen die Thrombin-induzierte Plättchenaggregation über den PAR-1-Rezeptor vermittelt wird, untersucht werden. Als Tierspezies eignen sich Meerschweinchen und insbesondere Primaten (vergleiche: Kogushi M, Kobayashi H, Matsuoka T, Suzuki S, Kawahara T, Kajiwara A, Hishinuma I, Circulation 2003, 108 Suppl. 17, IV-280; Derian CK, Damiano BP, Addo MF, Darrow AL, D'Andrea MR, Nedelman M, Zhang H-C, Maryanoff BE, Andrade-Gordon P, J. Pharmacol. Exp. Ther. 2003, 304, 855–861).
C) Ausführungsbeispiele für pharmazeutische Zusammensetzungen
Die erfindungsgemäßen Substanzen können folgendermaßen in pharmazeutische Zubereitungen überführt werden:
Tablette:
Zusammensetzung:
100 mg der Verbindung des Beispiels 1, 50 mg Lactose (Monohydrat), 50 mg Maisstärke, 10 mg Polyvinylpyrolidon (PVP 25) (Fa. BASF, Deutschland) und 2 mg Magnesiumstearat.
Tablettengewicht 212 mg. Durchmesser 8 mm, Wölbungsradius 12 mm.
Herstellung:
Die Mischung aus der Verbindung des Beispiels 1, Lactose und Stärke wird mit einer 5%-igen Lösung (m/m) des PVPs in Wasser granuliert. Das Granulat wird nach dem Trocknen mit dem Magnesiumstearat für 5 min. gemischt. Diese Mischung wird mit einer üblichen Tablettenpresse verpresst (Format der Tablette siehe oben).
Orale Suspension:
Zusammensetzung:
1000 mg der Verbindung des Beispiels 1, 1000 mg Ethanol (96%), 400 mg Rhodigel (Xanthan gum) (Fa. FMC, USA) und 99 g Wasser.
Einer Einzeldosis von 100 mg der erfindungsgemäßen Verbindung entsprechen 10 ml orale Suspension.
Herstellung:
Das Rhodigel wird in Ethanol suspendiert, die Verbindung des Beispiels 1 wird der Suspension zugefügt. Unter Rühren erfolgt die Zugabe des Wassers. Bis zum Abschluss der Quellung des Rhodigels wird ca. 6h gerührt.
Intravenös applizierbare Lösung:
Zusammensetzung:
1 mg der Verbindung von Beispiel 1, 15 g Polyethylenglykol 400 und 250 g Wasser für Injektionszwecke.
Herstellung:
Die Verbindung von Beispiel 1 wird zusammen mit Polyethylenglykol 400 in dem Wasser unter Rühren gelöst. Die Lösung wird sterilfiltriert (Porendurchmesser 0,22 μm) und unter aseptischen Bedingungen in hitzesterilisierte Infusionsflaschen abgefüllt. Diese werden mit Infusionsstopfen und Bördelkappen verschlossen.

Claims

Verbindung der Formel (I)
in welcher E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht, n für 1, 2 oder 3 steht, R¹ für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluormethoxy steht, R² für Wasserstoff, Halogen, Cyano, Trifluormethyl, Trifluormethoxy oder Difluormethoxy steht, R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (C₁-C₈)-Alkylen-R⁴ steht, wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl, wobei R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkylthio, -OR⁵ oder -C(=O)R⁶ steht, wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl- oder Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl, R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, Benzyl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl oder (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl steht, wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl, R⁶ für Hydroxy, Amino, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkylamino, (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₆-C₁₀)-Aryl, Benzyloxy oder 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl steht, wobei Aryl und Benzyloxy substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkoxy, (C₁-C₆)-Alkylamino, Phenyl, Benzyl, Hydroxycarbonyl, (C₁-C₆)-Alkoxycarbonyl, Aminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylaminocarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyl, (C₁-C₆)-Alkylcarbonyloxy, (C₁-C₆)-Alkylcarbonylamino und (C₁-C₆)-Alkylsulfonyl, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, in welcher E für Methylen, NH, ein Sauerstoffatom oder ein Schwefelatom steht, n für 1, 2 oder 3 steht, R¹ für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht, R² für Wasserstoff, Fluor, Chlor oder Trifluormethyl steht, R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl oder (C₁-C₈)-Alkylen-R⁴ steht, wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy und (C₁-C₆)-Alkyl-amino, wobei R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, 5- bis 10-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 10-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkylthio, -OR⁵ oder -C(=O)R⁶ steht, wobei Aryl, Heteroaryl, Cycloalkyl, Heterocyclyl und 1,2,3,4-Tetrahydronaphthyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy und (C₁-C₆)-Alkylamino, R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, (C₆-C₁₀)-Aryl, Benzyl oder (C₃-C₇)-Cycloalkyl steht, wobei Aryl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Amino, Halogen, Cyano, Nitro, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkoxy und (C₁-C₆)-Alkylamino, R⁶ für (C₁-C₆)-Alkyl, (C₁-C₆)-Alkylamino oder (C₁-C₆)-Alkoxy steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, in welcher E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht, n für 1, 2 oder 3 steht, R¹ für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht, R² für Wasserstoff, Fluor oder Chlor steht, R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl oder (C₁-C₅)-Alkylen-R⁴ steht, wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituieres (C₁-C₆)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy, wobei R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Indanyl, Phenyl, 5- oder 6-gliedriges Heteroaryl, (C₃-C₇)-Cycloalkyl, 5- bis 7-gliedriges Heterocyclyl, Hydroxy, Cyano, Trifluormethyl oder -OR⁵ steht, wobei Phenyl, Heteroaryl, Cycloalkyl und Heterocyclyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₆)-Alkoxy, R⁵ für, gegebenenfalls mit Fluor substituiertes (C₁-C₆)-Alkyl, Phenyl, Benzyl oder (C₃-C₇)-Cycloalkyl steht, wobei Phenyl, Benzyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 3 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, (C₁-C₆)-Alkyl und (C₁-C₆)-Alkoxy, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1, in welcher E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht, n für 1, 2 oder 3 steht, R¹ Wasserstoff oder Fluor steht, R² Wasserstof, Fluor oder Chlor steht, R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl oder (C₁-C₅)-Alkylen-R⁴ steht, wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy, wobei R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, 2,3-Dihydro-1,4-benzodioxin, 2,2,4,4-Tetrafluor-4H-1,3-benzodioxin, Phenyl, Thienyl, Thiazolyl, Oxazolyl, Pyridyl, Pyrimidyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl, Morpholin-1-yl, Morpholin-2-yl, Morpholin-3-yl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR⁵ steht, wobei Phenyl, Thiazolyl, Pyridyl, Pyrrolidin-2-yl, Pyrrolidin-3-yl, Pyrrolinyl, Piperidin-1-yl, Piperidin-2-yl, Piperidin-3-yl, Piperidin-4-yl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Oxo, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy, R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verbindungen der Formel (I) nach Anspruch 1, in welcher E für Methylen, NH oder ein Sauerstoffatom steht, n für 1, 2 oder 3 steht, R¹ Wasserstoff steht, R² Chlor steht, R³ für 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl oder (C₁-C₅)-Alkylen-R⁴ steht, wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy, wobei R⁴ für Wasserstoff, 1,3-Benzodioxol, 2,2-Difluor-1,3-benzodioxol, Phenyl, Pyridyl, (C₅-C₇)-Cycloalkyl, Hydroxy, Trifluormethyl oder -OR⁵ steht, wobei Phenyl, Pyridyl und Cycloalkyl substituiert sein können mit 1 bis 2 Substituenten, unabhängig voneinander ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus Hydroxy, Halogen, Trifluormethyl, Trifluormethoxy, Difluormethoxy, gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl und gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkoxy, R⁵ für gegebenenfalls Fluor-substituiertes (C₁-C₃)-Alkyl steht, und ihre Salze, ihre Solvate und die Solvate ihrer Salze.
Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I), wie in Anspruch 1 definiert, dadurch gekennzeichnet, dass Verbindungen der Formel (II)
in welcher R¹, R², E und n die Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweisen, mit Verbindungen der Formel (III) H₂N-R³ (III),in welcher R³ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung aufweist, umgesetzt werden.
Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz-Kreislauf-Erkrankungen.
Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thromboembolischen Erkrankungen.
Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herz-Kreislauf-Erkrankungen unter Verwendung einer therapeutisch wirksamen Menge einer Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert.
Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff.
Arzneimittel enthaltend eine Verbindung der Formel (I), wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, in Kombination mit einem inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoff.
Verfahren zur Verhinderung der Blutkoagulation in vitro, dadurch gekennzeichnet, dass eine antikoagulatorisch wirksame Menge einer Verbindung der Formel (I), wie wie in einem der Ansprüche 1 bis 5 definiert, zugegeben wird.