WO2006029778A1 - Vorrichtung, verwendung der vorrichtung und verfahren zur aufzucht von calliphoriden-larven - Google Patents

Vorrichtung, verwendung der vorrichtung und verfahren zur aufzucht von calliphoriden-larven Download PDF

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WO2006029778A1
WO2006029778A1 PCT/EP2005/009747 EP2005009747W WO2006029778A1 WO 2006029778 A1 WO2006029778 A1 WO 2006029778A1 EP 2005009747 W EP2005009747 W EP 2005009747W WO 2006029778 A1 WO2006029778 A1 WO 2006029778A1
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larvae
gauze
vessel
tissue
excipient
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PCT/EP2005/009747
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Inventor
Heike Elfriede Heuer
Original Assignee
Heike Elfriede Heuer
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Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates

Definitions

  • the present invention relates to a device and its use, as well as a self-optimizing method for growing calliphorid larvae.
  • the other parameters such as the amount of oxygen available, the temperature, the humidity of the tissue and the humidity, should be kept close to or at least close to the optimum for the larvae of the respective Calliphorid species to create and maintain good living conditions for the larvae.
  • the development of the larvae are damaging influences of - for example - ultraviolet radiation, Minimize or, if possible, avoid chemicals, foreign organisms or mechanical forces altogether.
  • advantageously acting chemicals, active substances or physical conditions should be able to act on the larvae for as long as possible.
  • the published patent application DE 199 01 134 Al proposes the use of a bag of close-meshed gauze, in which the larvae are locked up, so that they can not escape.
  • the eggs in which the larvae develop are already to be enclosed in a gauze bag from which the larvae can not escape.
  • gauze bags according to DE 199 Ol 134 Al or DE 199 25 996 Al has a number of disadvantages and problems.
  • a corresponding gauze bag may contain only a predetermined number of larvae due to its closed form. An adaptation of the number of larvae to their task, for example the removal of dead tissue, is thus not possible during the application of the gauze bag.
  • gauze When using a gauze with much lower mesh size gauze is either no longer sufficiently mechanically stable or material-like closed, so that an insufficient supply of oxygen and / or dissipation undesirable high amounts of moisture optimal development of the larvae does not allow or even completely prevents their development.
  • the object of the present invention was therefore to provide a device and a method by means of which tissue which has died as quickly as possible can be removed from other parts with the aid of calliphorid larvae.
  • the object is surprisingly achieved by a device for growing carylophorid larvae, with which a very large number of larvae gain access to the dead tissue, whereby the larvae can be removed from the dead tissue when needed, but can not leave the device, as well as Use of this device for removing dead tissue.
  • the process resulting from the use of the device according to the invention for the removal of dead tissue is at the same time a self-optimizing process for the rearing of calliphorid larvae.
  • the device according to the invention comprises a hosiery or hose-like gauze, the open ends of which are connected to one or two or two vessels, the connection between the gauze and the vessel being reversible but tightly closing.
  • gauze Under a tubular gauze is understood to be open at both ends gauze tube.
  • the gauze hose or stocking can be a seam-free gauze hose, such as that produced by circular knitting, for example.
  • the gauze tube can also be made by folding up two opposite edges of a square layer of gauze and then welding the edges to the side opposite the fold.
  • the edges can be welded to a side adjacent to the folding edge.
  • two layers of square gauze may be superimposed and subsequently welded together on two opposite sides or on three of the four sides to obtain a tubular gauze.
  • the layers or sides of the gauze can also be glued together, sewn or otherwise joined together by methods known to those skilled in the art to produce a gauze tube or stocking.
  • gauze tube or stocking which, for example, has a round, oval, triangular, pentagonal or polygonal shape.
  • a correspondingly shaped gauze tube or sock it can be adapted to the shape of the area to be liberated from the dead tissue.
  • a tubular or stocking-like gauze is used whose diameter corresponds approximately to the width of the area to be freed from the dead tissue, but the length of which clearly projects beyond the length of this tissue surface.
  • the gauze for the device according to the invention is a net-like fabric which has meshes with a mesh size through which the larvae can not slip. Therefore, the points for the gauze to be used according to the invention 20 x 20 to 60 x 60 mesh per cm 2 , preferably 35 x 35 to 60 x 60 mesh per cm 2 , when larvae of the first larval stage are to be used. For Larval stage 2 larvae, gauzes of 20 x 20 to 35 x 35 mesh per cm 2 are preferably used.
  • vessels for the device according to the invention containers made of glass, plastic or composite materials are suitable.
  • Plastics-clad glass containers, "glazed" plastic containers or various plastics, such as, for example, polypropylene, polyethylene, polyamide, polyvinyl alcohol, polyvinyl chloride or polycarbonate, are to be understood as meaning vessels which are preferably made of unbreakable vessels have flexible walls, which may for example consist of gauze, fabric, foil or mesh.
  • the gauze stocking is reversibly but tightly connected to a vessel and the gauze tube to one or two vessels so that the larvae of the device can not escape even between the gauze and the vessel.
  • the gauze hose connected to only one vessel the other opening is otherwise, for. B. by means of a lid closed.
  • the open side of the gauze tube / trumpet is in the simplest case by a flexible band, such as a rubber band, or a thread or string at the opening of the vessel attached, so that the vessel can be easily changed if necessary.
  • connection of gauze and vessel may also be by a threaded closure, a SchnappverSchluss, a bayonet, a Velcro closure, a clamp connection or other technical solution that ensures a reversible, but tight, connection between gauze and vessel occur.
  • the gauze tube or sock has an additional opening, so that when using this embodiment, the gauze tube is open to the side of the dead tissue and the larvae can come into direct contact with the surface of the tissue to be ablated.
  • the edges of the additional opening in the gauze tube or gauze sock are reversibly but tightly connected to the tissue surrounding the tissue to be ablated by means known to those skilled in the art so as to prevent the larvae from escaping the device via this additional opening becomes.
  • At least one further substance or an adjuvant can be present in the vessel or vessels, which can be transported by adhesion to or in the larvae to the point at which the effect of the larvae is causally desired.
  • the substances or auxiliaries may be in solid or liquid form, ie in Form of a solid, granules or powder, but also, as a solution, emulsion, suspension, gel, cream, ointment, paste or the like.
  • the liquid is preferably placed in the vessel with a small sponge or other absorbent material impregnated with the solution.
  • these substances or adjuvants in the vessel may be of various natures.
  • these substances or excipients are substances that have a positive effect on the overall process of healing.
  • Substances which inhibit the development of microorganisms or have a killing effect on microorganisms but are not allowed to have any effect on the development of the larvae are suitable as preferred substances. Polihexanide or comparable guanidines have proven to be particularly suitable for this purpose, whereas other substances with comparable antimicrobial activity, such. As propylene glycol, also damage the larvae.
  • Calliphorid larvae are preferably used with the device according to the invention, which are free from microbiological contamination by using special methods.
  • the device of the invention may equally be used to grow Calliphorid larvae, such as to remove dead tissue from other parts or tissue that has not died, by placing the larvae-containing device on dead human or animal tissue.
  • the invention thus also provides a method for growing calliphorid larvae and an improved method for removing dead tissue, wherein the methods are characterized by the use of the device according to the invention.
  • the degradation of unwanted tissue is faster than when using a closed gauze bag, although the larvae in the inventive device can leave the actual site of action (see Example 1).
  • At least one vessel containing carylophorid larvae is connected to the gauze sock or tube which is placed on the dead tissue to be removed or has already been placed thereon.
  • the site of action can be supplied with sufficient food supply a variety of larvae, of which only the number remains at the site of action, which is optimal for a rapid degradation of the dead tissue. If the food supply decreases, then further, then mostly grown, larvae leave the site of action, so that the number of larvae optimally adapted to the food supply and larvae size remains at the site of action.
  • more than 100 larvae per cm 2 of dead tissue are used, more preferably more as 120 larvae per cm 2 of dead tissue.
  • the larvae to be used for the removal of the tissue can be completely supplied by a single application of a vessel or both vessels, or proportionately by multiple attachment of the vessel (s) to the gauze sock or tube of the device and thus to the dead tissue.
  • the device according to the invention After completion of the treatment, for example, when the dead tissue has been sufficiently ablated, the larvae are ready for pupation or the treatment is to be interrupted for other reasons, the device according to the invention and with it the larvae can be easily removed from the site of action.
  • larvae which have been made free from microbiological contamination (sterile) or at least low in germs by the use of special methods are used in the method according to the invention.
  • antiseptic substances can be used, which kill the odor causing microorganisms or growth inhibit (Example 5).
  • the method according to the invention advantageously makes it possible to additionally store in the vessel (s) to offer one or more other substances or excipients.
  • These substances or adjuvants are brought by adhesion to or in the larvae to the place at which the effect of the larvae is causally desired.
  • the substances or auxiliaries should have a positive effect on the overall process.
  • liquids such as solutions, emulsions or suspensions
  • sponges or other absorbent materials soaked in the appropriate liquid are preferably placed in the vessel (s).
  • larvae are given the opportunity to do so (see Example 1 according to the invention), they surprisingly also leave the site of action with still sufficient food supply and migrate to places without food, which can be soaked, treated or mixed with a substance or an adjuvant.
  • the substances or auxiliaries in the vessel can be of very different nature.
  • substrates can be used to pick them up, such as sponges, alginates, superabsorbents, or other materials that have moisture-binding properties. These can be done after fulfilling their task be removed from the vessel, z. B. in exchange for another vessel.
  • sterile media may be used which can be examined after removal of the container from the apparatus in a suitably equipped laboratory, in particular since it is known that under the action of larvae, infections of Pseudomonas spec. or Proteus spec. may occur. Therefore, their presence should always be checked, which can be easily determined by using containers provided with appropriate media.
  • acidic substrates can be spread in the vessel.
  • fragrance-dispensing or odorant-absorbing sterile substrates which gain adsorption action through the migration of the larvae.
  • polihexanide polyhexanide, CAS 32289-58-0
  • comparable guanidines is used here. Polihexanide in the commercial concentrations surprisingly has no negative effect on the larvae, whereas other substances are more comparable antimicrobial effect, such. As propylene glycol, also damage the larvae.
  • Polihexanide solutions can easily be used according to the invention on small sponges or other absorbent materials.
  • the desired distribution by the larvae has a clear effect on the sterility of the site of action. As expected, this is all the more observable, the more intense the contact of polihexanide and the site of action is, and would be most pronounced if the soaked sponge would be directly on the site of action.
  • this complement the germicidal effect of polihexanide and the extracorporeal digestion of larvae.
  • the amount of externally added solution must remain limited so that the extracorporeal digestive enzymes of the larvae are not unnecessarily diluted and thus restricted in their effect.
  • a polyhexanide comparable effect and compatibility should also have a 0.1% octenidine solution, or up to 2% taurolidine solution.
  • the experimental setup was covered with a damp cloth and left for a further 3 hours. Under these conditions, the local humidity is close to the dew point and the incidence of light was significantly reduced. After the 3 hours, the larvae had spread evenly throughout the test tube and gauze stocking in all parts of the device.
  • the weight loss of two liver pieces was compared. Both pieces of liver have an approximately equal contact surface with the respective gaze bag or gauze sock of the device filled with L. sericata larvae, Larval stage 2.
  • the size of the gauze pouch which is closed all around, is dimensioned such that it roughly covers the contact surface with the liver, but hardly protrudes beyond the contact surface (comparative experiment).
  • the gauze part of the device according to the invention comprising a gauze sump attached to a vessel and a test tube as a vessel, was significantly larger than the contact surface to the liver piece.
  • the gauze bag and the device were loaded with larvae of L. sericata and incubated after the liver pieces on the gauze for 8 hours at 30 0 C.
  • the larvae in the control samples developed normally; the liver was partially consumed after 32 hours.
  • the larvae under the influence of Lavasept 0.1% or Prontosan W (0.1% polihexanide) developed analogously to the larvae in the comparative samples, but were more mobile and the liver was largely or completely consumed after 32 h.
  • the larvae developed somewhat more slowly than when using the 0.1% solutions.
  • the odor development with the use of polihexanide was significantly reduced.
  • Example 6 Flight of the young larvae from a commercially available gauze bag
  • a piece of liver was rolled into household sugar, which is used to clean and disinfect living tissue in humans and animals. 200 larvae of L. sericata were placed on the liver piece. These larvae developed significantly worse than the larvae in corresponding comparative experiments in which the liver had not been treated with sugar, despite the rapid expiry of the sugar solution.
  • Example 9 Damage to the eggs / larvae by disinfectants

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Abstract

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung zur Aufzucht von Calliphoriden-Larven, umfassend einen an einem seiner Enden oder beiden Enden offenen Gazeschlauch, dessen offene(s) Ende(n) mit je einem Gefäß reversibel, aber dicht schließend, verbunden ist/sind, deren Verwendung sowie ein selbstoptimierendes Verfahren zur Aufzucht von Calliphoriden-Larven, bei dem die Larven enthaltende Vorrichtung mit einem Teil des Gazeschlauchs auf abgestorbenem Gewebe plaziert wird.

Description

Vorrichtung, Verwendung der Vorrichtung und Verfahren zur Aufzucht von Calliphoriden-Larven
Die vorliegende Erfindung betrifft eine Vorrichtung und deren Verwendung, sowie ein selbstoptimierendes Verfahren zur Aufzucht von Calliphoriden-Larven.
Bestimmte Larvalstadien einiger Arten aus der Familie der Calliphoridae ernähren sich von Geweben tierischer Organismen. Die Larven einiger dieser Calliphoriden-Arten ernähren sich ausschließlich von abgestorbenem Gewebe. Aus diesem Grund werden diese Larven auch genutzt, um abgestorbenes Gewebe zu entfernen, beispielsweise bei der Präparation von Tierkörpern, bei der Herstellung besonderer Lederwaren oder für die Wundsäuberung, um deren Heilung zu fördern. Dabei ist die Geschwindigkeit, mit der das unerwünschte Gewebe von den anderen Bestandteilen entfernt wird, von großer Bedeutung. Der einfachste Weg, das Entfernen des abgestorbenen Gewebes zu beschleunigen, besteht in einer Erhöhung der Anzahl der Larven. Eine höhere Anzahl an Larven bedeutet einen höheren Verbrauch des ihnen als Nahrung dienenden toten Gewebes. Für ein optimales Entfernen des toten Gewebes sollten die weiteren Parameter, wie zum Beispiel die zur Verfügung stehende Sauerstoffmenge, die Temperatur, die Feuchtigkeit des Gewebes und die Luftfeuchtigkeit, an oder zumindest dicht an den für die Larven der jeweiligen Calliphoriden-Art geltenden Optima gehalten werden, um gute Lebensbedingungen für die Larven zu schaffen und aufrecht zu halten. Darüber hinaus sind die Entwicklung der Larven schädigende Einflüsse von - beispielsweise - ultravioletter Strahlung, Chemikalien, Fremdorganismen oder mechanischen Kräften zu minimieren oder nach Möglichkeit ganz zu vermeiden. Andererseits sollten sich für die Entwicklung der Larven vorteilhaft auswirkende Chemikalien, Wirkstoffe oder physikalische Bedingungen möglichst lange auf die Larven einwirken können.
Nach erfolgreicher Behandlung gilt es, die Larven einfach und vollzählig von dem zu gewinnenden Gut zu entfernen, um entweder die Behandlung mit anderen Mitteln fortzusetzen oder die Larven anderen Zwecken zuzuführen. Hierzu schlägt die Offenlegungsschrift DE 199 01 134 Al die Verwendung eines Beutels aus engmaschiger Gaze vor, in den die Larven eingesperrt werden, so dass sie nicht entkommen können. In Ergänzung dazu sollen gemäß Offenlegungsschrift DE 199 25 996 Al bereits die Eier, in denen sich die Larven entwickeln, in einen Gazebeutel, aus dem die Larven nicht entfliehen können, eingeschlossen werden.
Die Verwendung von Gazebeuteln gemäß DE 199 Ol 134 Al oder DE 199 25 996 Al birgt jedoch eine Reihe von Nachteilen und Problemen. So kann ein entsprechender Gazebeutel aufgrund seiner geschlossenen Form nur eine vorbestimmte Anzahl von Larven enthalten. Eine Anpassung der Anzahl der Larven an die von ihnen zu bewältigende Aufgabe, beispielsweise das Entfernen von abgestorbenem Gewebe, ist somit während der Anwendung des Gazebeutels nicht möglich.
In DE 199 25 996 Al sowie DE 199 01 134 Al wird auch beschrieben, dass die Eier in den Gazebeutel eingebracht werden können und sich unter günstigen Bedingungen zu Larven entwickeln sollen. Beide Druckschriften unterstellen daher, dass die schlüpfenden Larven in dem Gazebeutel gefangen gehalten werden können, so dass ein Entkommen der Larven ausgeschlossen ist. Zumindest für Beutel, die aus handelsüblicher Gaze mit einer Maschenzahl von 27 x 29 Maschen/cm2 hergestellt sind, ist diese Unterstellung nicht zutreffend, wie die Beispiele 6 und 7 zeigen. Zwar werden die Eier vom Beutel umschlossen, aber die aus den Eiern schlüpfenden Larven sind in ihrem ersten Larvalstadium kaum größer als die Eihüllen, die sie zurücklassen, und zudem deutlich schlanker und wendiger, so dass sie den Gazebeutel zwischen den Maschen durchkriechend verlassen können und dies auch bevorzugt tun.
Bei Verwendung einer Gaze mit wesentlich geringerer Machenweite ist die Gaze entweder nicht mehr ausreichend mechanisch stabil oder stoffartig geschlossen, so dass eine unzureichende Zufuhr von Sauerstoff und/oder Ableitung unerwünscht hoher Mengen Feuchtigkeit eine optimale Entwicklung der Larven nicht ermöglicht oder deren Entwicklung gar ganz unterbindet.
Es ist weiterhin bekannt, dass mehr Larven pro Gewebefläche mehr abgestorbenes Gewebe pro Zeiteinheit entfernen können als eine geringere Zahl an Larven. Dies ist sowohl durch die größere Biomasse, die versorgt werden muss, als auch durch eine höhere lokale, extrazelluläre Konzentration an von den Larven, die zumeist in Haufen fressen, sezernierten Enzymen zu erklären. Aus Gründen der Kontrollierbarkeit des Gewebeabtrags sowie zur Vermeidung möglicher Nebenwirkungen wurde bislang eine begrenzte Anzahl von Larven, etwa 2 bis maximal 20 Larven/cm2 abzutragendem Gewebe, eingesetzt. Diese geringe Anzahl an Larven wird unter anderem damit begründet, dass die anfangs kleinen Larven innerhalb kurzer Zeit stark wachsen und dabei zunehmend mehr Gewebe vertilgen können. Allerdings erfolgt der Abbau abgestorbenen Gewebes in der Anfangsphase, wenn die Larven noch klein sind, nicht so schnell, wie es wünschenswert ist. Bei Einsatz einer höheren Anzahl von Larven in Gazebeuteln, als sie in DE 199 Ol 134 und DE 199 25 996 beschrieben werden, käme es angesichts der in diesen beiden Druckschriften berichteten Notwendigkeit, die Larven möglichst am Ort ihres Wirkens festzuhalten, zu einer unkontrollierbar hohen lokalen Konzentration der von den Larven zum Abtrag des abgestorbenen Gewebes sezernierten Enzyme. Als Folge davon wäre eine Schädigung des lebenden Gewebes möglich und es könnte auch zu einer Lyse der Larven durch ihr eigenes Sekret kommen, was eine Verringerung der Anzahl aktiver Larven zur Folge hätte. Um diese Nebenwirkungen zu verhindern, wird gemäß den angeführten Druckschriften eine willkürlich begrenzte Anzahl von Larven eingesetzt, die nicht der für den schnellstmöglichen Gewebeabbau optimalen Anzahl entspricht.
Die Aufgabe der vorliegenden Erfindung bestand daher darin, eine Vorrichtung sowie ein Verfahren bereitzustellen, mit der/dem möglichst schnell abgestorbenes Gewebe mit Hilfe von Calliphoriden-Larven von anderen Teilen entfernt werden kann. Die Aufgabe wird überraschenderweise durch eine Vorrichtung zur Aufzucht von CaIliphoriden-Larven gelöst, mit der eine sehr große Anzahl von Larven Zugang zu dem abgestorbenen Gewebe erhält, wobei sich die Larven bei Bedarf vom abgestorbenen Gewebe entfernen, die Vorrichtung jedoch nicht verlassen können, sowie der Verwendung dieser Vorrichtung zum Abtrag abgestorbenen Gewebes. Bei dem sich durch die Verwendung der erfindungsgemäßen Vorrichtung ergebenden Verfahren zum Entfernen abgestorbenen Gewebes handelt es sich gleichzeitig um ein sich selbst optimierendes Verfahren zur Aufzucht von Calliphoriden- Larven.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung umfasst eine Strumpf- oder schlauchartige Gaze, deren offene Enden mit einem bzw. einem oder zwei Gefäßen verbunden ist, wobei die Verbindung zwischen Gaze und Gefäß reversibel, aber dicht schließend, ausgebildet ist.
Unter einer schlauchartigen Gaze wird ein an beiden Enden offener Gazeschlauch verstanden. Bei einer strümpfartigen Gaze handelt es sich um einen an einem Ende verschlossenen Gazeschlauch (= Gazestrumpf) .
Bei dem Gazeschlauch bzw. -strumpf kann es sich um einen nahtfreien Gazeschlauch handeln, wie er beispielsweise durch Rundstricken entsteht. Der Gazeschlauch kann aber auch durch Aufeinanderfalten von zwei einander gegenüberliegenden Kanten einer viereckigen Lage Gaze und nachfolgendes Verschweißen der Kanten auf der Seite, die der Faltkante gegenüber liegt, hergestellt werden. Für die Herstellung eines Gazestrumpfs können zusätzlich die Kanten an einer der Faltkante benachbarten Seite verschweißt werden. Alternativ dazu können auch zwei Lagen viereckiger Gaze aufeinander gelegt und nachfolgend an zwei einander gegenüberliegenden Seiten oder an drei der vier Seiten miteinander verschweißt werden, um eine schlauchförmige bzw. strumpfförmige Gaze zu erhalten.
Die Lagen bzw. Seiten der Gaze können auch miteinander verklebt, vernäht oder anderweitig mittels dem Fachmann bekannter Verfahren miteinander verbunden werden, um einen Gazeschlauch, oder -strumpf herzustellen.
Neben viereckigen Gazen können auch anders geformte Gazen zur Herstellung eines Gazeschlauchs oder -Strumpfs verwendet werden, die dann beispielsweise eine runde, ovale, dreieckige, fünf- oder mehreckige Form aufweisen. Durch Verwendung eines entsprechend geformten Gazeschlauchs oder -Strumpfs kann dieser der Form der vom abgestorbenen Gewebe zu befreienden Fläche angepasst werden.
Vorzugsweise wird eine schlauch- oder strumpfartige Gaze verwendet, deren Durchmesser in etwa der Breite der vom abgestorbenen Gewebe zu befreienden Fläche entspricht, deren Länge jedoch die Länge eben dieser Gewebefläche deutlich überragt.
Bei der Gaze für die erfindungsgemäße Vorrichtung handelt es sich um ein netzartiges Gewebe, das Maschen mit einer Maschenweite aufweist, durch welche die Larven nicht durchschlüpfen können. Daher weist die für die erfindungsgemäße Vorrichtung zu verwendende Gaze 20 x 20 bis 60 x 60 Maschen pro cm2 auf, vorzugsweise 35 x 35 bis 60 x 60 Maschen pro cm2, wenn Larven des ersten Larvalstadiums Verwendung finden sollen. Für Larven im Larvalstadium 2 finden vorzugsweise Gazen mit 20 x 20 bis 35 x 35 Maschen pro cm2 Verwendung.
Als Gefäße für die erfindungsgemäße Vorrichtung sind Behälter aus Glas, Kunststoff oder Kombinationswerkstoffen geeignet. Unter Gefäßen aus Kombinationswerkstoff sind kunststoffummantelte Glasgefäße, „verglaste" Kunststoffgefäße oder aus verschiedenen Kunststoffen, wie beispielsweise Polypropylen, Polyethylen, Polyamid, Polyvinylalkohol, Polyvinylchlorid oder Polycarbonat, bestehende Gefäße zu verstehen. Vorzugsweise werden bruchfeste Gefäße verwendet. Das Gefäß kann ganz hartwandig sein oder teilweise flexible Wände aufweisen, welche beispielsweise aus Gaze, Stoff, Folie oder Netz bestehen können.
Bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung ist der Gazestrumpf mit einem Gefäß und der Gazeschlauch mit einem oder zwei Gefäßen reversibel, aber dicht, verbunden, so dass die Larven der Vorrichtung auch zwischen Gaze und Gefäß nicht entkommen können. Sollte der Gazeschlauch mit nur einem Gefäß verbunden sein, ist dessen andere Öffnung anderweitig, z. B. mittels eines Deckels, verschlossen. Für die Verbindung zwischen Gaze und Gefäß wird die offene Seite des Gazeschlauchs/-Strumpfs im einfachsten Fall durch ein flexibles Band, wie beispielsweise ein Gummiband, oder einen Faden bzw. eine Schnur an der Öffnung des Gefäßes befestigt, so dass das Gefäß bei Bedarf leicht gewechselt werden kann.
Die Verbindung von Gaze und Gefäß kann aber auch durch einen Gewindeverschluss, einen SchnappverSchluss, einen Bajonettverschluss, einen Klettverschluss, eine Klemmverbindung oder eine andere technischen Lösung, die eine reversible, aber dichte, Verbindung zwischen Gaze und Gefäß sicherstellt, erfolgen.
In einer besonderen Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung weist der Gazeschlauch bzw. -Strumpf eine zusätzliche Öffnung auf, so dass bei Verwendung dieser Ausführungsform der Gazeschlauch zur Seite des abgestorbenen Gewebes hin offen ist und die Larven in direkten Kontakt mit der Oberfläche des abzutragenden Gewebes treten können. Bei Verwendung dieser Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung werden die Ränder der zusätzlichen Öffnung im Gazeschlauch bzw. Gazestrumpf mittels dem Fachmann bekannter Maßnahmen reversibel, aber dicht, mit dem das abzutragende Gewebe umgebenden Material verbunden, damit ein Entkommen der Larven aus der Vorrichtung über diese zusätzliche Öffnung unterbunden wird.
In dem Gefäß bzw. den Gefäßen können zusätzlich zumindest eine weitere Substanz oder ein Hilfsstoff vorhanden sein, die durch Haftung an oder in den Larven an die Stelle verbracht werden können, an der die Wirkung der Larven ursächlich gewünscht ist. Die Substanzen oder Hilfsstoffe können in fester oder flüssiger Form vorliegen, d. h. in Form eines Festkörpers, Granulats oder Pulvers, aber auch, als Lösung, Emulsion, Suspension, Gel, Creme, Salbe, Paste oder dergleichen. Bei Verwendung einer flüssigen Substanz wird die Flüssigkeit vorzugsweise mit einem kleinen Schwamm oder einem anderen saugfähigen Material, die mit der Lösung getränkt sind, in das Gefäß plaziert.
Diese Substanzen oder Hilfsstoffe in dem Gefäß können verschiedenster Natur sein. Vorzugsweise handelt es sich bei diesen Substanzen oder Hilfsstoffen um Stoffe, die eine positive Wirkung auf den Gesamtprozess der Heilung haben.
Es können Stoffe zum Einsatz kommen, welche von den Larven als Nahrung anerkannt werden, wodurch die Larven teilweise vom Wirkort abwandern. Es können Schwämme, Alginate, Superabsorber oder andere, Feuchtigkeitbindende Materialien verwendet werden, um vom Wirkort entweichende Flüssigkeiten aufzunehmen. Sterile Medien können Verwendung finden, sofern der Behandlung mit Larven mikrobiologische Untersuchungen folgen sollen. Sofern die Larven in ihrer Vitalität gebremst oder abgetötet werden sollen, können in dem Gefäß saure Substanzen ausgebracht werden. Es können auch Duftstoffabgebende oder Geruchstoffaufnehmende Stoffe, vorzugsweise vor Anwendung sterilisiert, verwendet werden.
Als bevorzugte Stoffe sind Substanzen geeignet, die die Entwicklung von Mikroorganismen hemmen oder abtötend auf Mikroorganismen wirken, aber keine die Entwicklung der Larven beeinträchtigende Wirkung haben dürfen. Als besonders gut geeignete Substanzen dafür haben sich Polihexanid oder vergleichbare Guanidine erwiesen, wohingegen andere Substanzen mit vergleichbarer antimikrobieller Wirkung, wie z. B. Propylenglykol, auch die Larven schädigen.
Polihexanid (= Polyhexanidum = Polyhexanid) ist in Form von Lösungen unter den Namen Lavasept oder Prontosan W im Handel erhältlich und kann in dieser Form leicht auf kleinen Schwämmchen oder anderen saugfähigen Materialien aufgebracht zum Einsatz kommen.
Mit der erfindungsgemäßen Vorrichtung werden vorzugsweise Calliphoriden-Larven verwendet, die durch Anwendung spezieller Verfahren frei von mikrobiologischen Kontaminationen sind.
Die erfindungsgemäße Vorrichtung kann gleichermaßen zur Aufzucht von Calliphoriden-Larven verwendet werden, wie zum Entfernen abgestorbenen Gewebes von anderen Teilen oder noch nicht abgestorbenem Gewebe, indem die Larven enthaltende Vorrichtung auf abgestorbenem menschlichen oder tierischen Gewebe plaziert wird.
Gegenstand der Erfindung ist somit auch ein Verfahren zur Aufzucht von Calliphoriden-Larven sowie ein verbessertes Verfahren zum Entfernen von abgestorbenem Gewebe, wobei sich die Verfahren durch die Verwendung der erfindungsgemäßen Vorrichtung auszeichnen. Überraschenderweise wurde bei Verwendung der erfindungsgemäßen Vorrichtung gefunden, dass der Abbau von unerwünschtem Gewebe schneller erfolgt als bei Verwendung eines geschlossenen Gazebeutels, obwohl die Larven bei der erfindungsgemäßen Vorrichtung den eigentlichen Wirkort verlassen können (vgl. Beispiel 1).
Für die erfindungsgemäßen Verfahren wird zumindest ein Gefäß, das CaIliphoriden-Larven enthält, mit dem Gazestrumpf oder -schlauch verbunden, der auf das zu entfernende, abgestorbene Gewebe (Wirkort) gelegt wird oder bereits vorher darauf gelegt wurde. Diese letztgenannte Möglichkeit ist bei Verwendung einer Ausführungsform der erfindungsgemäßen Vorrichtung, welche zusätzlich auch zur Seite des abgestorbenen Gewebes hin offen ist, die bevorzugte Vorgehensweise, um die Wahrscheinlichkeit, dass Larven über diese zusätzliche Öffnung aus der Vorrichtung entkommen können, so niedrig wie möglich zu halten.
Durch wiederholtes Ansetzen eines Larvenenthaltenden Gefäßes kann dem Wirkort bei ausreichendem Nahrungsangebot eine Vielzahl von Larven zugeführt werden, von denen nur die Anzahl am Wirkort verbleibt, die optimal für einen schnellen Abbau des abgestorbenen Gewebes ist. Sofern das Nahrungsangebot sinkt, können weitere, dann zumeist gewachsene Larven den Wirkort verlassen, so dass weiterhin die an Nahrungsangebot und Larvengröße optimal angepasste Anzahl an Larven am Wirkort verbleibt.
Vorzugsweise werden mehr als 100 Larven pro cm2 abgestorbenen Gewebes verwendet, besonders bevorzugt mehr als 120 Larven pro cm2 abgestorbenen Gewebes. Die für den Abtrag des Gewebes zu verwendenden Larven können vollzählig durch einmaliges Ansetzen eines Gefäßes oder beider Gefäße, oder anteilig durch mehrfaches Ansetzen des bzw. der Gefäße(s) an den Gazestrumpf bzw. -schlauch der Vorrichtung und somit dem abgestorbenen Gewebe zugeführt werden.
So lange die Larven aktiv sind, werden sie zeitweise auch wieder an den Wirkort zurückkriechen. Erst wenn nahezu das ganze abgestorbene Gewebe von den Larven ingestiert wurde oder die Larven verpuppungsreif sind, werden sich auch die noch am Wirkort verbliebenen Larven vom Wirkort entfernen.
Nach Beendigung der Behandlung, beispielsweise, wenn das abgestorbene Gewebe ausreichend abgetragen wurde, die Larven verpuppungsreif sind oder die Behandlung aus anderen Gründen unterbrochen werden soll, kann die erfindungsgemäße Vorrichtung und mit ihr die Larven leicht vom Wirkort entfernt werden.
Um Geruchsentwicklung und andere Nebenwirkungen zu minimieren, finden bei dem erfindungsgemäßen Verfahren zumeist Larven Verwendung, die durch spezielle Verfahren frei von mikrobiologischer Kontamination (steril) oder zumindest keimarm gemacht worden sind. Unterstützend können bestimmte antiseptische Substanzen zum Einsatz kommen, welche die die Geruchsentwicklung verursachenden Mikroorganismen abtöten oder im Wachstum hemmen (Bsp. 5) .
Das erfindungsgemäße Verfahren ermöglicht vorteilhafterweise, in dem oder den Gefäß(en) zusätzlich eine oder mehrere weitere Substanzen oder Hilfsstoffe anzubieten. Diese Substanzen oder Hilfsstoffe werden durch Haftung an oder in den Larven auf die Stelle verbracht, an der die Wirkung der Larven ursächlich gewünscht wird. Die Substanzen oder Hilfsstoffe sollen eine positive Wirkung auf den Gesamtprozess haben.
Sofern es sich bei diesen Stoffen um Flüssigkeiten handelt, wie beispielsweise Lösungen, Emulsionen oder Suspensionen, werden vorzugsweise mit der entsprechenden Flüssigkeit getränkte Schwämme oder andere saugfähige Materialien in das oder die Gefäß(e) plaziert.
Sofern die Larven die Möglichkeit hierzu geboten bekommen (s. erfindungsgemäßes Beispiel 1), verlassen sie überraschenderweise auch den Wirkort mit noch ausreichendem Nahrungsangebot und wandern zu Orten ohne Nahrung, die mit einer Substanz oder einem Hilfsstoff getränkt, behandelt oder vermischt sein können.
Die Substanzen oder Hilfsstoffe im Gefäß können verschiedenster Natur sein.
1. Soll die Anzahl Larven am Wirkort verringert werden, können Stoffe zu Einsatz kommen, die die Larven als Nahrung anerkennen. Die Larven werden teilweise vom Wirkort abwandern.
2. Wenn vom Wirkort Flüssigkeiten entweichen, können Substrate Einsatz finden, die diese aufnehmen, wie zum Beispiel Schwämme, Alginate, Superabsorber oder andere Materialien, die Feuchtigkeit bindende Eigenschaften haben. Diese können nach Erfüllen ihrer Aufgabe mit dem Gefäß entfernt werden, z. B. im Austausch gegen ein anderes Gefäß.
3. Sollen mikrobiologische Untersuchungen folgen, können sterile Medien Verwendung finden, die nach dem Ausbau des Behälters aus der Vorrichtung in einem entsprechend ausgestattetem Labor untersucht werden können, insbesondere, da bekannt ist, dass unter der Einwirkung von Larven Infektionen von Pseudomonas spec. oder Proteus spec. auftreten können. Daher sollte auf deren Gegenwart stets geprüft werden, was durch Verwendung von mit entsprechenden Medien versehenen Behältern leicht festgestellt werden kann.
4. Sollen die Larven in ihrer Vitalität gebremst oder abgetötet werden, können in dem Gefäß saure Substrate ausgebracht werden.
5. Es können aber auch DuftStoff abgebende oder Geruchstoff aufnehmende sterile Substrate verwendet werden, die durch das Durchwandern der Larven an Adsorptionswirkung gewinnen.
6. Soll die Stelle der Einwirkung der Larven möglichst keimarm gehalten werden, können in dem Gefäß auch Substanzen vorliegen, die hemmend oder abtötend auf die Entwicklung von Mikroorganismen wirken. Hierbei ist besonders zu berücksichtigen, dass diese Substanzen der Entwicklung der Larven nicht entgegenstehen dürfen. Erfindungsgemäß wird hier Polihexanid (= Polyhexanidum = Polyhexanid; CAS 32289- 58-0) oder vergleichbare Guanidine eingesetzt. Polihexanid in den handelsüblichen Konzentrationen hat überraschend keinen negativen Effekt auf die Larven, wohingegen andere Substanzen vergleichbarer antimikrobieller Wirkung, wie z. B. Propylenglykol, auch die Larven schädigen.
Polihexanid-Lösungen (Handelsprodukte wie z. B.: Lavasept, Prontosan W, beides Arzneimittel mit der Indikation Wunddesinfektion) können erfindungsgemäß leicht auf kleinen Schwämmchen oder anderen saugfähigen Materialien zum Einsatz kommen. Die erwünschte Verteilung durch die Larven hat einen deutlichen Effekt auf die Keimfreiheit des Wirkortes. Dies ist erwartungsgemäß um so mehr zu beobachten, je intensiver der Kontakt von Polihexanid und dem Wirkort ist, und wäre am stärksten ausgeprägt, wenn das getränkte Schwämmchen direkt auf dem Wirkort zu liegen käme. Hier ergänzen sich dann die keimtötende Wirkung des Polihexanids und die der extrakorporalen Verdauung der Larven. Dabei muss die Menge an von außen zugesetzter Lösung aber begrenzt bleiben, damit die extrakorporalen Verdauungsenzyme der Larven nicht unnötig verdünnt und damit in ihrer Wirkung eingeschränkt werden. Bevorzugt werden daher Konzentrationen von 0,01% bis 1 % Polihexanid eingesetzt, ganz besonders bevorzugt 0,02 bis 0,5 %, jeweils in wässriger Verdünnung.
Eine dem Polyhexanid vergleichbare Wirkung und Verträglichkeit dürfte auch eine 0,1 %-ige Octenidin-Lösung haben, oder eine bis zu 2 %-ige Taurolidin-Lösung. Beispiel 1: Verteilung von Larven im offenen Gazestrumpf
Etwa 500 Larven von L. sericata, Larvalstadium 2, wurden in nach Waschen mit Wasser „tropfnass" in ein Reagenzglas verbracht. Das Reagenzglas wurde mit einem Gazestrumpf von etwa 19 cm Länge und 3,5 cm Breite mittels eines Gummibandes fest verbunden. Der Gazestrumpf wurde mittig über eine Petrischale gelegt und dort mit einem Stück frischer Rinderleber beschwert. Dieser Versuchsaufbau wurde offen bei einer Temperatur von 22 bis 26 0C und einer relativen Luftfeuchtigkeit von 35 bis 55 % liegen gelassen. Nach etwa 40 Minuten befanden sich nahezu alle Larven unterhalb des Leberstücks.
Dann wurde der Versuchsaufbau mit einem feuchten Tuch abgedeckt und weitere 3 Stunden liegen gelassen. Unter diesen Bedingungen liegt die lokale Luftfeuchtigkeit nahe dem Taupunkt und der Einfall von Licht war deutlich verringert. Nach den 3 Stunden hatten sich die Larven gleichmäßig in allen Teilen der Vorrichtung aus Reagenzglas und Gazestrumpf verteilt.
Unter diesen Bedingungen entwickelten sich die Larven schnell und der Abbau der Leber erfolgte schneller als bei Verwendung eines vergleichbaren, geschlossenen Gazebeutels mit der in ihm Platz findenden Anzahl an Larven. Beispiel 2: Abbaugeschwindigkeit toten Gewebes
Es wurde der Gewichtsverlust zweier Leberstückchen verglichen. Beide Leberstückchen weisen eine in etwa gleich große Kontaktfläche zum jeweiligen, mit L. sericata Larven, Larvalstadium 2, gefüllten Gazebeutel bzw. Gazestrumpf der Vorrichtung auf. Die Größe des rundherum geschlossenen Gazebeutels ist so bemessen, dass er in etwa die Kontaktfläche mit der Leber abdeckt, jedoch kaum über die Kontaktfläche hinaus ragt (Vergleichsversuch) . Der Gazeteil der erfindungsgemäßen Vorrichtung, umfassend ein an einem Gefäß angeschlossenen Gazestrumpf und ein Reagenzglas als Gefäß, war deutlich größer als die Kontaktflache zum Leberstück. Der Gazebeutel und die Vorrichtung wurden mit Larven von L. sericata bestückt und nach Auflage der Leberstückchen auf die Gaze für 8 Stunden bei 30 0C inkubiert.
Bei dem Leberstück, das auf dem rundherum geschlossenen Gazebeutel gelegt worden war, betrug der Gewichtsverlust nach der 8-stündigen Inkubation 23 %, bezogen auf das Ausgangsgewicht des Leberstücks. Bei dem Leberstück, welches auf dem Gazestrumpf der erfindungsgemäßen Vorrichtung gelegt worden war, konnte nach 8 Stunden Inkubation ein Gewichtsverlust von 30 %, bezogen auf das Ausgangsgewicht des LeberStücks, verzeichnet werden. Beispiel 3 :
Ein Stück Kalbsleber wurde für 15 min in sterile physiologische Kochsalzlösung gelegt, ein vergleichbares Stück Leber für 15 min in Prontosan W (enthält 0,1 % Polihexanid) . Beide Stücke wurden anschließend abgetupft und mit Larven, L. sericata im Larvalstadium 2, besetzt. Bis einschließlich Entwicklung der Imagines wurden keine relevanten Unterschiede in der Entwicklung der Larven festgestellt.
Eine Schädigung der Larven durch 0,1 % Polihexanid kann damit ausgeschlossen werden.
Beispiel 4:
In drei parallelen Versuchen wurden jeweils ca. 100 Larven von L. sericata, Larvalstadium 1, auf einem Leberstück plaziert. Die Leberstückchen lagen auf Fließpapier und wurden zuvor mit 1,5 - 1,8 ml Prontosan W befeuchtet. Das Fließpapier hält die Spüllösung fest.
Alle Larven entwickelten sich innerhalb der folgenden Stunden normal. Eine Beeinträchtigung der Larvenentwicklung durch Protonsan W war nicht erkennbar. Beispiel 5 :
Ca. 50 Larven von L. sericata wurden auf einem Stück Leber plaziert und bei 30 0C bebrütet. Das Stück Leber lag auf Fließpapier und war zuvor mit je 1 ml Wirkstofflösung von verschiedenen Polihexanid als Wirkstoff enthaltenden Mitteln behandelt worden. Als Vergleichsproben diente ein unbehandeltes Leberstück sowie ein mit 1 ml physiologischer Kochsalzlösung befeuchtetes Leberstück.
Die Larven in den Vergleichsproben entwickelten sich normal; die Leber war nach 32 Stunden teilweise verbraucht. Die Larven unter der Einwirkung von Lavasept 0,1% oder Prontosan W (0,1 % Polihexanid) entwickelten sich analog den Larven in den Vergleichsproben, waren aber mobiler und die Leber war nach 32 h weitgehend bzw. ganz verbraucht. Bei Verwendung einer 1 %-igen Polihexanid-Lösung entwickelten sich die Larven etwas langsamer als bei Verwendung der 0,1 %-igen Lösungen. Die Geruchsentwicklung unter der Anwendung von Polihexanid war deutlich reduziert.
Beispiel 6: Flucht der jungen Larven aus einem handelsüblichen Gazebeutel
Ca. 500 Larven von L. sericata, Larvalstadium 1, wurden in einer Gaze (27 x 29 Maschen/cm2), wie sie technisch zum Einsatz kommt (Lieferant: Biomonde), eingeschweißt. Nach 10 min hatten die ersten Larven den geschlossenen Gazebeutel verlassen. Beispiel 7: Flucht der jungen Larven aus einem handelsüblichen Gazebeutel
Ca. 300 Eier von L. sericata wurden in einer Gaze (27 x 29 Maschen/cm2), wie sie technisch zum Einsatz kommt (Lieferant: Biomonde), eingeschweißt. Direkt nach dem Schlüpfen verließen die Larven problemlos den Gazebeutel.
Beispiel 8: Schädigung der Larven durch Desinfektionsmittel
Ein Stück Leber wurde in Haushaltszucker gewälzt, der zur Reinigung und Desinfektion von lebendem Gewebe bei Mensch und Tier Verwendung findet. 200 Larven von L. sericata wurden auf das Leberstück aufgesetzt. Diese Larven entwickelten sich trotz der zügig ablaufenden Zuckerlösung deutlich schlechter als die Larven in entsprechenden Vergleichsversuchen, in denen die Leber nicht mit Zucker behandelt worden war.
Beispiel 9: Schädigung der Eier/Larven durch Desinfektionsmittel
Ca. 200 Eier von L. sericata wurden auf Leber plaziert und mit Hansaplast®-Sprühpflaster Θingesprüht. Innerhalb der üblichen Entwicklungszeit schlüpften kaum Larven. Beispiel 10: Schädigung der Larven durch. Desinfektionsmittel
Ca. 50 Larven von L. sericata wurden auf Leber plaziert, bei 300C bebrütet und mit verschiedenen antiseptisch wirkenden Mitteln behandelt. Die Leber lag auf Fließpapier und war zuvor mit 1 ml Wirkstofflösung behandelt worden. Als Vergleichsproben diente unbehandelte oder mit 1 ml physiologischer Kochsalzlösung befeuchtete Leber. Die Larven unter der Einwirkung von PVP-Jod (Betaisadona, 10 % verfügbares Jod) oder Aminoquinurid (Herviros) starben oder entwickelten sich kaum. Die Larven in den Vergleichsproben entwickelten sich normal.

Claims

Ansprüche
1. Vorrichtung zur Aufzucht von CaIliphoriden-Larven, umfassend einen an einem seiner Enden oder beiden Enden offenen Gazeschlauch, dessen offene(s) Ende(n) mit je einem Gefäß reversibel, aber dicht schließend, verbunden ist/sind.
2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Gaze eine Maschenzahl von 20 x 20 bis 60 x 60 Maschen/cm2, vorzugsweise von 35 x 35 bis 60 x 60 Maschen/cm2, wenn Larven des ersten Larvalstadium Verwendung finden sollen, oder 20 x 20 bis 35 x 35 Maschen/cm2 für Larven im Larvalstadium 2 aufweist.
3. Vorrichtung nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Gazeschlauch eine zusätzliche Öffnung aufweist.
4. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass das Gefäß aus Glas, Kunststoff oder einem Kombinationswerkstoff besteht.
5. Vorrichtung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das Gefäß bruchfest ist.
6. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass in dem Gefäß zumindest eine weitere Substanz oder zumindest ein weiterer Hilfsstoff enthalten ist.
7. Vorrichtung nach Anspruch 6, dadurch gekennzeichnet, dass die Substanz oder der Hilfsstoff flüssig ist und in einem mit der Substanz oder dem Hilfsstoff getränkten Schwamm oder anderen saugfähigen Material im Gefäß vorliegt.
8. Vorrichtung nach Anspruch 6 oder 7, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Substanz bzw. dem Hilfsstoff um Polihexanid, Octenidin oder Taurolidin handelt.
9. Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche, dadurch gekennzeichnet, dass die Verbindung zwischen Gazeschlauch und Gefäß mittels eines Gummibands, eines Fadens, einer Schnur, eines GewindevβrSchlusses, eines Schnappverschlusses, eines Bajonettverschlusses, eines Klettverschlusses oder einer Klemmverbindung erfolgt.
10. Verwendung einer Vorrichtung nach einem der vorangehenden Ansprüche zur Aufzucht von Larven aus der Familie der Calliphoridae.
11. Verwendung nach Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Vorrichtung mit einem Teil ihres Gazeschlauchs auf abgestorbenes tierisches oder menschliches Gewebe plaziert wird.
12. Verfahren zur Aufzucht von Larven aus der Familie der Calliphoridae, dadurch gekennzeichnet, dass die Larven in einer Vorrichtung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 9 gehalten und die Vorrichtung mit einem Teil des Gazeschlauchs auf abgestorbenem Gewebe plaziert wird.
13. Verfahren nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass mehr als 100 Larven pro cm2 abgestorbenen Gewebes, vorzugsweise mehr als 120 Larven pro cm2 abgestorbenen Gewebes, verwendet werden.
14. Verfahren nach einem der Ansprüche 12 oder 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Larven anteilig oder vollzählig durch Ansetzen des/der Gefäße(s) an den Gazeschlauch dem abgestorbenen Gewebe zugeführt werden.
15. Verfahren nach einem der Ansprüche 12 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass in dem oder den angeschlossenen Gefäß(en) zumindest eine Substanzen oder ein Hilfsstoff angeboten werden.
16. Verfahren nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Substanz bzw. dem Hilfsstoff um Polihexanid, Octenidin oder Taurolidin handelt.
17. Verfahren nach Anspruch 16, dadurch gekennzeichnet, dass die Konzentration an Polihexanid 0,01 bis 1 Gew.-% , vorzugsweise 0,02 bis 0,5 Gew.-%, beträgt.
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