WO2006021653A2 - Derives d'azasucre, inhibiteurs d'heparanases, leur procede de preparation, les compositions en contenant, leur utilisation - Google Patents

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Definitions

  • the subject of the invention is azasugar derivatives, heparanase inhibitors, their preparation, the compositions containing them and their therapeutic application.
  • Heparanases are endoglucuronidase-type enzymes which have as their substrate polysaccharides of the heparin / heparan sulfate (HS) family. Heparanases type I and II are known (McKenzie et al., Biochem Biophys Res Commun, (2000), Vol.276, pp. 1170-1177). They specifically hydrolyze ⁇ -1 ⁇ 4 type bonds between a D-glucuronic acid type saccharide unit and a D-glucosamine type saccharide unit and release HS fragments of about 10 to 20 saccharide units (Pikas, D S et al., J. BhI Chem., (1998), Vol.273, p.18770-18777).
  • HSPGs heparan sulphates
  • HSPGs heparan Sulfate Proteoglycans
  • HSPGs consist of a core protein covalently bound to HS linear chains (Kjellen et al., Annu Rev. Biochem., (1991), Vol.60, p.443-475).
  • HSPGs are ubiquitous macromolecules.
  • HSPGs are present on the surface of many cell types and in the extracellular matrix (ECM for Extracellular Matrix) (Kjellen et al., (1991), ibid .; Bernfield et al., Annu Rev. Biochem. , (1999), Vol.68, p.729-777, David et al., FASEB J., (1993), Vol.7, p.1023-1030, Lozzo et al., Annu Rev. Biochem., (1998) Vol.67: 609-652).
  • ECM Extracellular Matrix
  • ECM is also a key modulator involved in various cellular mechanisms, including cell differentiation and repair (Folkman et al., Adv Exp Med Med, (1992), Vol 313, 355-364). . Heparanase inhibitor compounds have been described in the prior art.
  • Azasugar derivatives with a single unit of the following formula:
  • the present invention therefore relates to novel azasugar derivatives, heparanase inhibitors. These new compounds have a good inhibitory activity of heparanases.
  • the subject of the invention relates to the compounds corresponding to the general formula (I):
  • R represents a hydrogen atom, a hydroxyl radical, a radical -OSO 3 " , a radical -O- (C 1 -C 5 ) alkyl or a radical -O-aralkyl;
  • Z represents COO radical "or a hydroxyl radical
  • X represents a hydroxyl radical or a saccharide unit of formula A:
  • R 1 represents an oxygen atom, allowing A to bind to the azasugar unit or to another saccharide unit,
  • - R 2 represents -NH 2, -NHCO radial (C r C 5) alkyl, -NHCOaryl radical, an -NHSO 3 ", a hydroxyl group, -O- (Ci-C 5) alkyl an -O-aralkyl radical or a radical -OSO 3 " ,
  • R 3 represents a hydroxyl radical, a radical -OSO 3 " , a radical -O- (C r C 5 ) alkyl or a radical -O-aralkyl,
  • R 4 represents a hydroxyl radical, a radical -OSO 3 ", -O- (C r C 5) alkyl, -O-aralkyl radical or a saccharide unit of formula B:
  • R 6 represents an oxygen atom, allowing B to bind to another saccharide unit of formula A,
  • R 7 and R 8 have the same definition as R 3 as defined above,
  • R 9 represents a hydroxyl radical, a radical -OSO 3 " , a radical -O- (C 1 -C 5 ) alkyl, a radical -O-aralkyl or a saccharide unit of formula A as defined previously, - R 5 has the same definition as R 3 as defined above;
  • Y represents a hydrogen atom, a (CrC 5 ) alkyl radical or a saccharide unit of formula D
  • R 12 and Ri 3 respectively have the same definitions as R 5 , R 3 and R 2 as defined above,
  • R 14 represents a radical -O- (CrC 5 ) alkyl or a radical -OE in which E represents a radical of the following formula:
  • R 15 is -O- (C r C 5) alkyl, -O-aralkyl or a saccharide unit of formula D wherein R 11 represents an oxygen atom,
  • R 16 and R 17 have the same definition as R 3 as defined above, provided however that when X and R each represent a hydroxyl radical, Y does not represent a hydrogen atom, and it being understood that the number of saccharide units comprising the compound of formula (I) is in the range 1 to 10, in free form or in the form of salts with a pharmaceutically acceptable base or acid and in the form of solvates or hydrates. According to one of its preferred aspects, the invention relates to the compounds of general formula (I):
  • R represents a hydroxyl radical
  • Z represents COO radical "or a hydroxyl radical
  • X represents a hydroxyl radical or a saccharide unit of formula A
  • R 1 represents an oxygen atom
  • R 2 represents a radical -NHCOCH 3 , a radical -NHSO 3 " , a radical -OSO 3 " , -R 3 represents a hydroxyl radical or a radical -O- (C 1 -C 5 ) alkyl,
  • R 4 represents a hydroxyl radical, an -O-aralkyl radical or a saccharide unit of formula B:
  • R 6 represents an oxygen atom
  • - R 7 represents a radical -OSO 3
  • R 8 represents a hydroxyl radical, a radical -O- (C 1 -C 5 ) BIkYIe or a radical -O-aralkyl,
  • R 9 represents a radical -OSO 3 " , a radical -O-aralkyl, a radical -O- (C r C 5 ) alkyl or a saccharide unit of formula A as defined previously,
  • R 5 represents a radical -OSO 3 " ,
  • Y represents a hydrogen atom or a saccharide unit of formula D:
  • R 12 represents a hydroxyl radical or a radical -OSO 3 " ,
  • - R 13 represents a radical -NHSO 3 " ,
  • R 11 represents a methylene radical bonded to the azasugar unit or an oxygen atom bonded to E,
  • R 14 an -OCH 3 radical or a radical of formula -O-E in which E represents a radical of formula:
  • R 15 represents a unit D in which R 11 represents an oxygen atom which makes it possible to bind E to D,
  • R 16 represents a radical -OSO 3 ""
  • R 17 represents a hydroxyl radical, it being understood that the number of saccharide units comprised by the compound of formula (I) is between 2 and 10, in free form or in the form of salts with a pharmaceutically acceptable base or acid, and only in the form of solvates or hydrates.
  • Particularly preferred compounds are compounds of formula I wherein Y is a hydrogen atom.
  • the invention encompasses azasugar derivatives in their acid form or in the form of any of their pharmaceutically acceptable salts.
  • the -COO " and -SO 3 " functions are respectively in the form -COOH and -SO 3 H.
  • the present invention relates to the following compounds:
  • a radical (CrC 5 ) alkyl represents an aliphatic radical, which may contain from 1 to 5 carbon atoms, saturated linear or branched.
  • a radical (CrC 5 ) alkyl represents an aliphatic radical, which may contain from 1 to 5 carbon atoms, saturated linear or branched.
  • an -O-aralkyl radical represents an alkyl group as defined above but substituted by a aromatic radical which can itself carry substituents.
  • a (CrC) alkylene radical represents a divalent alkyl group having from 1 to 3 carbon atoms.
  • azasugar derivatives of the invention an azasugar derivative wherein one or more of -COO - and / or -SO 3 - functions are ionically bonded to a pharmaceutically acceptable cation.
  • the preferred salts according to the invention are those whose cation is chosen from alkali metal cations and more preferably still those whose cation is Na + or K + .
  • the process for preparing the compounds according to the invention uses mono-, di- or oligosaccharide-based basic synthons prepared as previously reported in the literature and chosen taking into account in particular the orthogonality of the protective groups.
  • These synthons are then coupled to each other so as to provide a fully protected equivalent of a compound according to the invention.
  • This protected equivalent is then converted to a compound according to the invention using methods well known to those skilled in the art.
  • the compounds of the invention additionally containing an azasugar (or substituted piperidine) unit, their synthesis requires the preparation of a precursor of this unit bearing protective groups compatible with the subsequent couplings to mono-, di-, or oligosaccharides.
  • the precursors of the azasucers are prepared according to methods described in the literature. Reference is made in particular to "Iminosugars as Glycosidase Inhibitors", AE Stetz, Wiley-VCH, 1999.
  • the present invention relates to a process for the preparation of the compounds of formula (I) characterized in that: in a first step, a fully protected equivalent of the desired compound (I) is prepared; in a second step, the negatively charged groups (carboxylates, sulfonates) as well as the free hydroxyls are introduced and / or unmasked.
  • the synthesis of the precursor is carried out according to reactions well known to those skilled in the art using in particular the methods of the osidic synthesis (GJ Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121; WO98 / 03554 and WO99 / 36443) according to which a glycosidic link donor oligosaccharide is coupled with a glycosidic link acceptor oligosaccharide to yield another oligosaccharide whose size is equal to the sum of the sizes of the two reactive species. This sequence is repeated until the desired compound of formula (I) is obtained.
  • the structure of the desired final compound determines the nature of the chemical entities used in the various steps of the synthesis, so as to control the stereochemistry and regioselectivity, according to the rules well known to those skilled in the art.
  • the compounds of the invention are obtained from their completely protected polysaccharide precursors by using, in general, the following sequence of reactions: - Release and substitution of the functions to be converted into N- and / or O-sulfonate groups. - Release of other functions and possible assembly of the fragments together, for example by a reductive amination reaction.
  • the release of the carboxylic acid functions can be carried out at different stages of this process.
  • the compounds of the invention can naturally be prepared using various strategies known to those skilled in the art of osidic and organic synthesis.
  • the process described above is the preferred method of the invention.
  • the compounds of formula (I) can be prepared by other well known methods of sugar chemistry described for example in "Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products", P. M. Collins and RJ. Ferrier, J. Wiley & Sons, 1995 and in GJ. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121.
  • the protecting groups used in the preparation process of the compounds (I) are those commonly used in the chemistry of sugars for example in Protective Groups in Organic Synthesis, Greene TW, PGM Wuts, John Wiley & Sons, New York, 1999.
  • the protecting groups are advantageously chosen for example from acetyl, halomethyl, benzoyl, levulinyl, benzyl, substituted benzyl, optionally substituted trityl, carbamate, tetrahydropyranyl, allyl, pentenyl, tert-butyldimethylsilyl (tBDMS) or trimethylsilylethyl groups.
  • the activating groups are those conventionally used in sugar chemistry according to, for example, G J. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121. These activating groups are chosen for example from imidates, thioglycosides, pentenylglycosides, xanthates, phosphites or halides.
  • the process described above makes it possible to obtain the compounds of the invention in the form of salts.
  • the compounds of the invention in the form of salts are contacted with a cation exchange resin in acid form.
  • the compounds of the invention in the form of acids can then be neutralized with a base to obtain the desired salt.
  • a base for the preparation of the salts of the compounds of formula (I), any inorganic or organic base can be used, giving with the compounds of formula (I), pharmaceutically acceptable salts.
  • Sodium, potassium, calcium or magnesium hydroxide is preferably used as the base.
  • the sodium and calcium salts of the compounds of formula (I) are the preferred salts.
  • the compounds according to the invention have been the subject of biochemical and pharmacological studies. The following tests, which are non-limiting, illustrate the present invention.
  • PET polyethylene terephthalate
  • AM acetoxymethyl
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagle's Medium
  • EDTA ethylenediaminetetraacetic acid
  • Tris tris (hydroxymethyl) aminomethane
  • AT Antithrombin III
  • the activity of heparanase is evidenced by its ability to degrade fondaparinux.
  • the concentration of fondaparinux is determined by its anti-factor Xa activity.
  • Heparanase is produced by Sanofi-Synthélabo (Labège, France).
  • heparanase inhibitor varying dilutions: from 1 nM to 10 ⁇ M
  • a fixed concentration of heparanase for each batch, preliminary experiments make it possible to determine the enzymatic activity sufficient for the degradation of 0.45 ⁇ g / ml of fondaparinux added.
  • the mixture is brought into the presence of fondaparinux and left for 1 hour at 37 ° C.
  • the reaction is stopped by heating at 95 ° C. for 5 minutes.
  • the residual fondaparinux concentration is finally measured by addition of factor Xa and its specific chromogenic substrate (Ref S2222).
  • the anti-factor Xa activity of fondaparinux is measured in the following way:
  • 100 ⁇ l of the solution obtained in step a) are mixed with 100 ⁇ l of AT (0.5 ⁇ / ml). It is maintained for 2 minutes at 37 ° C. and 100 ⁇ l of factor Xa (7 nkat / ml) are then added. It is maintained for 2 minutes at 37 ° C. and then 100 ⁇ l of chromogenic substrate (Ref .: S2222) (1 mM) are added. It is maintained for 2 minutes at 37 ° C. and then 100 ⁇ l of acetic acid (50%) are added. The reading of the optical density is carried out at 405 nm.
  • the compounds according to the present invention have Cl 50 values of between 10 nM and 10 ⁇ M.
  • Compound No. 27 has an Cl 50 of 11 ⁇ 4 nM (mean ⁇ SD, made on two trials)
  • Cells derived from human fibrosarcoma, HT1080 are cultured in DMEM (Ref .: GIBCO 11960-044) containing 5% Fetal Calf Serum, Glutamine (2 mM) (Ref .: GIBCO 25030-024), sodium pyruvate (1 mM) (Ref .: GIBCO 11360-039) and non-essential amino acids (1X) (Ref .: GIBCO 11140-035), on collagen-coated flasks (Becton Dickinson 75 cm 2 , Ref 354523), up to 50 to 80% confluence.
  • DMEM Ref .: GIBCO 11960-044
  • Glutamine (2 mM) Ref .: GIBCO 25030-024
  • sodium pyruvate (1 mM
  • Ref .: GIBCO 11360-039 non-essential amino acids
  • 1X Ref .: GIBCO 11140-035
  • the HT1080 invasion measurements are carried out on Becton Dickinson falcon HTS Fluoroblok Multiwell Insert System Kit in 24-well plates (Ref: 351 158). These measurement chambers provide the cells with conditions for evaluating their invasive properties in vitro.
  • the kit consists of a plate associated with culture inserts containing a 8 micron pore-filled PET membrane on which a uniform layer of Matrigel Matrix (Becton Dickinson, P / N 354230) is deposited.
  • Matrigel is a soluble basement membrane extracted from the EHS tumor (Engelbreth-Holm-Swarm) which, thanks to its composition, solidifies a structure equivalent to a basement membrane.
  • the Matrigel layer occludes the pores of the membrane, thus blocking the migration of non-invasive cells through the membrane.
  • Invasive cells (tumor or non-tumor) will be able to detach and invade the Matrigel layer before migrating through the membrane.
  • Quantification of cell migration is performed by calcein labeling AM (Molecular Probes C-3100).
  • the fluorescent signal emitted is measured using a Perkin Elmer Wallac VICTOR 3 reader and can be directly correlated with the number of cells invading the Matrigel gel. By comparing them with controls carried out in the same experiment as the products studied (response in the presence of 0% and 5% fetal calf serum), it is possible to determine a percentage inhibition of the cellular invasion in the presence of products.
  • a series of independent determinations (ranging from 2 to 4) made it possible to show that at a concentration of between 1 nM and 10 ⁇ M, the compounds according to the invention inhibit, on average, the cellular invasion with a percentage of between 8 and 60. %.
  • compound No. 20 inhibits cell invasion by 53 ⁇ 11%.
  • the compounds of formula (I) according to the present invention thus have a good affinity for heparanases and exhibit an inhibitory effect of heparanases.
  • Tumor biopsies revealed the same correlation (Vlodavsky et al., Isr. J. Med. ScL, (1988), Vol. 24 (9-10), p.464-470). There is therefore a correlation between the increased heparanase secretion and the metastatic potential of tumor cells (Vlodavsky et al., Invasion Matastasis, (1994), Vol.14, p.290-302, Nature Medicine, (1999) Vol.5: 793-802).
  • ECM Heparanases, secreted by tumor cells, degrade HSPGs and HS, major components of ECM. ECM thus perforated, circulates the tumor cells and metastatic and also allows the invasion of neoformed blood vessels (angiogenesis) (Suzanne A. Eccles, Nat. Med., (1999), Vol.5 (7), p.793 -809).
  • Angiogenesis is a process of generating new capillaries from preexisting vessels or by mobilizing and differentiating bone marrow cells. Thus, both uncontrolled proliferation of endothelial cells and mobilization of angioblasts from the bone marrow are observed in neovascularization processes of tumors.
  • cancer or carcinoma
  • metastatic tumor cells such as melanomas, mesothelioma, lymphoma, leukemia, fibrosarcoma, rhabdomyosarcoma, mastocytoma, but also carcinomas affecting a tissue such as the colon, rectum, prostate, lungs, breasts, pancreas, intestine, kidneys, ovaries, uterus, cervix uterus, bladder, liver and stomach.
  • Carcinomas infiltrate adjacent tissues and spread (metastasize) to other distant organs, eg, liver, lungs, brain or bones.
  • a compound having heparanase inhibitory activity such as the compounds of the invention may therefore be useful for the treatment of such cancers (Fang J et al., Proc Natl Acad Sci USA, (2000), Vol.97 (8), pp. 3884-3889, Kondraganti et al., Cancer Res., (2000), Vol.60 (24), pp. 6851-6855), and in particular colorectal cancer, prostate cancer, lung cancer, breast, pancreas, kidney, bladder and ovaries.
  • the p75 receptor a receptor for neurotrophin family (NT) molecules
  • NT neurotrophin family
  • a compound such as the compounds of the invention possessing a heparanase inhibitory activity, may therefore be useful for the treatment of inflammatory diseases, especially inflammatory chronic diseases such as rheumatoid arthritis or IBD (Inflammatory Bowel Disease), consisting of two forms of inflammatory bowel disease: UC (ulcerative colitis) and
  • CD Crohn's
  • a compound, a heparanase inhibitor, according to the invention can present a therapy of choice in these pathologies.
  • heparanases are known to be involved in some cases of renal failure where renal filtration and reabsorption functions may be impaired (FASEB J, (2004), Vol.18, pp. 252-263).
  • a compound, a heparanase inhibitor, according to the invention may present a therapy of choice in such pathologies.
  • ECM HSPGs also appear to play a role as major regulators of cell growth and activation via modulation of growth factors, in particular FGFs (Fibroblast Growth Factors).
  • FGFs Fibroblast Growth Factors
  • the activity of heparanases involves the release of growth factors such as FGFs, which in particular stimulate angiogenesis and promote tumor progression (Bashkin et al., Biochemistry, (1989), Vol.28, p. 1743).
  • FGFs Fibroblast Growth Factors
  • heparanases represent relevant targets for the treatment of diseases in which FGFs are involved.
  • FGFs are significantly involved via autocrine, paracrine or juxtacrine secretions in the phenomena of deregulation of the stimulation of the growth of cancer cells.
  • FGFs initiate tumor angiogenesis, which plays a major role in both tumor growth and metastasizing phenomena.
  • Angiogenesis is a process of generating new capillaries from preexisting vessels or by mobilizing and differentiating bone marrow cells.
  • endothelial cells and mobilization of angioblasts from the bone marrow are observed in neovascularization processes of tumors. It has been shown in vitro and in vivo that several growth factors stimulate endothelial proliferation, and in particular FGF-1 or ⁇ -FGF and FGF-2 or b-FGF.
  • ⁇ -FGF and ⁇ -FGF play an important role in the growth and maintenance of prostate cells (DoII JA et al., Prostate, (2001), Vol.305, p.49-293.
  • Several studies show the presence of ⁇ -FGF and ⁇ -FGF and their FGFR receptors in both human breast tumor lines (including MCF7) and in tumor biopsies.
  • Glioma cells produce in vitro and in vivo a-FGF and b-FGF and have different FGF receptors on their surface.
  • CML chronic myelomonocytic leukemia
  • Proliferation and migration of vascular smooth muscle cells contribute to intimal hypertrophy of the arteries and thus play a prominent role in atherosclerosis and restenosis after angioplasty and endoarterectomy.
  • In vivo studies show, after carotid injury by "balloon injury", local production of ⁇ -FGF and b-FGF.
  • vascular disorders due to diabetes are characterized by impaired vascular reactivity and blood flow, hyperpermeability, exacerbated proliferative response, and increased matrix protein deposition. More specifically, a-FGF and b-FGF are present in the pre-retinal membranes of patients with diabetic retinopathies, in the membranes of the underlying capillaries and in the vitreous humor of patients suffering from proliferative retinopathies.
  • Rheumatoid arthritis is a chronic disease with an unknown etiology. While it affects many organs, the most severe form of RA is synovial inflammation of the progressive joints leading to destruction. Angiogenesis seems to significantly affect the progression of this pathology. Thus, ⁇ -FGF and b-FGF were detected in the synovial tissue and in the joint fluid of RA patients, indicating that this growth factor is involved in the initiation and / or progression of this pathology. In AIA (adjuvant-induced model of arthritis) models in rats, over-expression of b-FGF has been shown to increase the severity of the disease. that an anti-b-FGF neutralizing antibody blocks the progression of RA (Yamashita et al., J. Immunol., (2002), Vol.57, pp. 168-450, Manabe et al., Rheumatol, (1999) Vol.20: 38-714).
  • Angiogenesis and inflammation are also major phenomena involved in the processes involved in osteoarthritis leading to destruction of the joint associated with pain, angiogenesis may also play a role in chondrocyte hypertrophy and ossification thus contributing to changes in the joint (Bonnet CS and Rheumatology. (1) 7-16 2005).
  • IBD inflammatory bowel disease
  • UC ulcerative colitis
  • CD Crohn's disease
  • IBD is characterized by immune dysfunction resulting in inappropriate production of inflammatory cytokines inducing the establishment of a local microvascular system. This angiogenesis of inflammatory origin results in intestinal ischaemia induced by vasoconstriction. Circulating and local levels of important b-FGF have been measured in patients with these conditions (Kanazawa et al., American Journal of Gastroenterology, (2001), Vol.28, pp. 96-822, Thorn et al., Scandinavian Journal of Gastroenterology, (2000), Vol.12, pp. 35-408).
  • a compound having a heparanase inhibitory activity such as the compounds of the invention may therefore be useful for the treatment of diseases related to upregulation of FGFs and / or their receptors.
  • the compounds of the present invention find their application in the treatment of any carcinoma with a high degree of vascularization (lung, breast, prostate, esophagus) or inducing metastases (colon, stomach melanoma) or being sensitive to ⁇ -FGF or to ⁇ -FGF in an autocrine manner or finally in pathologies such as lymphomas and leukemias.
  • vascularization lung, breast, prostate, esophagus
  • metastases colon, stomach melanoma
  • ⁇ -FGF colon, stomach melanoma
  • pathologies such as lymphomas and leukemias.
  • These compounds represent a therapy of choice either alone or in combination with appropriate chemotherapy or radiation therapy or in combination with anti-angiogenic therapy.
  • the compounds according to the invention also find application in the treatment of cardiovascular diseases such as atherosclerosis, post-angioplasty restenosis in the treatment of complications-related diseases.
  • the compounds according to the invention also find application in the treatment of chronic inflammatory diseases such as rheumatoid arthritis or IBD.
  • the products according to the invention also find application in the treatment of macular degeneration.
  • a major feature of vision loss in adults is neovascularization and consecutive hemorrhages that cause significant functional disorders in the eye and result in early blindness.
  • Recently, the study of the mechanisms involved in ocular neovascularization phenomena has made it possible to demonstrate the involvement of pro-angiogenic factors in these pathologies.
  • the compounds of the invention may also be used in combination with one or more anti-cancer treatments, such as surgical treatments, radiotherapy or in combination with compounds blocking angiogenesis.
  • the compounds of the invention may be used alone or in combination with another active ingredient such as cisplatin, cyclophosphamide, methotrexate, 5-fluorouracil, paclitaxel, docetaxel, vincristine, vinblastine, vinorelbine, doxorubicin, tamoxifen, toremifene, acetate megestrol, anastrozole, goserelin, capecitabine and raloxifene or molecules with antiangiogenic activity, for the treatment of cancer.
  • another active ingredient such as cisplatin, cyclophosphamide, methotrexate, 5-fluorouracil, paclitaxel, docetaxel, vincristine, vinblastine, vinorelbine, doxorubicin, tamoxifen, to
  • the subject of the present invention is therefore a pharmaceutical composition containing, as active principle, a compound of formula (I) in free form or in the form of salts formed with a pharmaceutically acceptable base or acid, according to the invention, optionally in combination with one or more inert and suitable excipients.
  • Said excipients are chosen according to the desired pharmaceutical form and mode of administration: oral, sublingual, subcutaneous, intramuscular, intravenous, transdermal, trans-mucous, local or rectal.
  • each dosage unit the active principle is present in the amounts adapted to the daily doses envisaged in order to obtain the prophylactic or desired therapeutic.
  • Each dosage unit may contain from 0.1 to 100 mg of active ingredient, preferably 0.5 to 50 mg.
  • compositions of the invention may be intended for oral, sublingual, subcutaneous, intramuscular, intravenous, intratracheal, topical, intranasal, transdermal, rectal, intraocular, vaginal administration.
  • the unit forms of administration may be, for example, tablets, capsules, granules, powders, oral or injectable solutions or suspensions, transdermal patches ("patch"), pen-injectors, suppositories.
  • ointments creams, lotions, eye drops, gels, sprays, oil.
  • Said unit forms are dosed to allow a daily administration of 1 to 100 mg of active ingredient per kg of body weight, according to the dosage form used.
  • a pharmaceutical carrier which may be composed of diluents, for example lactose, microcrystalline cellulose or starch, and formulation adjuvants such as binders, polyvinylpyrrolidone, is added to the active ingredient, which may or may not be micronized. hydroxypropyl methylcellulose, etc.), flow agents such as silica, lubricants such as magnesium stearate, stearic acid, glycerol tribehenate, sodium stearyl fumarate. Wetting agents or surfactants such as sodium lauryl sulphate may also be added.
  • the production techniques can be direct compression, dry granulation, wet granulation or hot melt.
  • the tablets may be bare, sugar-coated, for example with sucrose, or coated with various polymers or other suitable materials. It can be designed to allow rapid, delayed or sustained release of the active ingredient through polymer matrices or specific polymers used in the coating.
  • the active ingredient is mixed with dry pharmaceutical vehicles (simple mixing, dry or wet granulation, or hot melting), liquid or semi-solid.
  • the capsules may be hard or soft, film-coated or not, so as to have a rapid, prolonged or delayed activity (for example for an enteric form).
  • a composition in the form of syrup or elixir or for administration in the form of drops may contain the active ingredient together with a sweetener, preferably acaloric, methylparaben or propylparaben as antiseptic, a flavoring agent and a dye.
  • Water-dispersible powders and granules may contain the active ingredient in admixture with dispersing agents or wetting agents, or dispersing agents such as polyvinylpyrrolidone, as well as with sweeteners and taste-correcting agents.
  • suppositories prepared with binders melting at the rectal temperature for example cocoa butter or polyethylene glycols, are used.
  • aqueous suspensions For parenteral administration, aqueous suspensions, isotonic saline solutions or sterile injectable solutions containing pharmacologically compatible dispersing agents and / or wetting agents, for example propylene glycol or butylene glycol, are used.
  • pharmacologically compatible dispersing agents and / or wetting agents for example propylene glycol or butylene glycol
  • the active ingredient may also be formulated in the form of microcapsules, optionally with one or more supports or additives, or with a polymer matrix or with a cyclodextrin (transdermal patches, sustained-release forms).
  • compositions according to the invention comprise a skin compatible medium. They may be in the form of aqueous, alcoholic or aqueous-alcoholic solutions, gels, water-in-oil or oil-in-water emulsions having the appearance of a cream or a gel, of microemulsions, aerosols, or in the form of vesicular dispersions containing ionic and / or nonionic lipids. These galenic forms are prepared according to the usual methods of the fields considered.
  • the active ingredient may also be formulated in the form of microcapsules, optionally with one or more supports or additives, or with a polymer matrix or with a cyclodextrin (transdermal patches, sustained-release forms).
  • the local compositions according to the invention comprise a medium compatible with the skin. They may be in the form of aqueous, alcoholic or aqueous-alcoholic solutions, gels, water-in-oil or oil-in-water emulsions having the appearance of a cream or a gel, of microemulsions, aerosols, or in the form of vesicular dispersions containing ionic and / or nonionic lipids. These galenic forms are prepared according to the usual methods of the fields considered.
  • TEMPO ® (0.02 molar equivalents) and a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate (4 L / mol) are added to a solution of compound to be oxidized (1 molar equivalent) in tetrahydrofuran (THF) (3.5 L / mol) .
  • THF tetrahydrofuran
  • Bromodan (2 molar equivalents) is added dropwise for 20 min.
  • the reaction mixture is concentrated and the residue is dried by repeated evaporation of dimethylformamide (DMF) (4.95 L / mol).
  • DMF dimethylformamide
  • a solution of Fe / f-butyldimethylsilyl triflate in dichloromethane (0.1 M, 0.15 mol per mole of imidate) is added under argon at -20 ° C. to a solution of the imidate and the glycosyl acceptor in a mixture of dichloromethane / diethyl ether (1: 2, 22.5-45 L / mol) in the presence of 4 A molecular sieve. After 10-45 minutes (TLC), solid sodium hydrogencarbonate is added. The solution is filtered, washed with water, dried and evaporated to dryness.
  • Triethylamine / sulfur trioxide complex (5 moles per hydroxyl function) is added to a solution in dimethylformamide (10 L / mol) of the compound to be sulfated. After 12 to 22 hours at 55 ° C 1 is added at 0 0 C methanol or aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, and after 0.5-24h stirring at room temperature, the reaction medium is purified using an LH-20 column, or two columns Sephadex ® G-25 (successively eluted with an aqueous solution of 0.2M sodium chloride and then with water). The product-containing fractions are then concentrated under high vacuum to yield the desired compound.
  • a solution of the compound in a glacial acetic acid / water / tert-butanol mixture is stirred for 6-16 h (TLC) under a hydrogen atmosphere (3 bars) in the presence of palladium on carbon (equivalent to 0.7-3). times the mass of the compound) at 5 or 10%.
  • TLC TLC
  • the solution is placed atop a column of Sephadex ® G-25 eluted with 0.2M sodium chloride was concentrated fractions containing product and desalted using the same column eluted with water .
  • the final compound is obtained after lyophilization.
  • Step 1a Preparation of 1-benzyl-3- (benzyloxy) -5- (hydroxymethyl) piperidin-4-ol (3R, 4R, 5R) (No. 2)
  • the synthesis of compound 1 is described in TM Jespersen and M. Bols, Tetrahedron (1994) 50 (47), 13449-13460 and in US Pat. No. 5,844,102.
  • the synthesis of compound 2 is described in patent WO98 / 50359.
  • To a solution of the compound 1 (10.8 g, 42.8 mmol) in methanol (590 ml) are successively added sodium cyanoborohydride (5.38 g, 2 molar equivalents), then acetic acid (7.4 ml, 3 molar equivalents).
  • Step 1.b Preparation of methyl 4- (acetyloxy) -1-benzyl-5- (benzyloxy) piperidin-3-yl acetate (3R, 4R, 5R) (No. 3)
  • Step 1.c Preparation of benzyl 4- (acetyloxy) -3- (acetyloxymethyl) -5- (benzyloxy) piperidine-1-carboxoxide (3R, 4R, 5R) (No. 4)
  • Step 1.d Preparation of benzyl 3- (benzyloxy) -4-hydroxy-5- (hydroxymethyl) piperidine-1-carboxylate (3R, 4R, 5R) (No. 5)
  • Step 1.e Preparation of dibenzyl 5- (benzyloxy) -4-hydroxypiperidine-1,3-dicarboxylate (3S, 4R, 5R) (No. 6)
  • Step 2.a Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-azido-3-O- ben2yl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (no. 8)
  • Step 2.b Preparation of (Benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-di-O-acetyl-2) -azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , 3-D-glucopyranose) (No. 9)
  • Step 2.c Preparation of (Benzyl 2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3 O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (no. 10)
  • Step 2.d Preparation of (Be ⁇ zyl 2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3 -Q-benzyl-2-deoxy- ⁇ , 13-D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No. 11)
  • Step 3.a Preparation of (benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3 2-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl H- (4-benzyl-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1, 6- anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (no. 12)
  • Step 3.b Preparation of (benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3 O -benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl-1H-benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4M1, 6-di-O-acetyl-2- azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (no. 13)
  • step 3.a Compound 12 (365 mg, 0.254 mmol) obtained in step 3.a is treated as for the synthesis of compound 9 (step 2.b) to conduct, after purification on silica gel (1: 1 Et 2 O - diisopropyl ether) at 13 (376 mg, 97%).
  • Step 3.c Preparation of (benzyl-2,4-di-Q-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3 O -benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl-1H-benzyl-2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2- azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (hr 14)
  • step 3.b Compound 13 (364 mg, 0.237 mmol) obtained in step 3.b is treated as for the synthesis of compound 10 (step 2.c) to give, after purification on silica gel (7: 3 and 2 O). diisopropyl ether), compound 14 (310 mg, 87%). Mass Spectrum (ESI) m / z 1518.8 [(M + Na) + ].
  • Step 3.d Preparation of (benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3 -O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosylH1-4Hbenzyl-2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl) -2 -azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate) (no. 15)
  • step 3.c Compound 14 (279 mg, 0.187 mmol) obtained in step 3.c is treated as for the synthesis of compound 11 (step 2.d), to provide, after purification on silica gel (1: 1 and 2 O-diisopropyl ether), (230 mg, 75%).
  • Step 3.e Preparation of (benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) -f1-4) - (6-Q-acetyl-2-azido-3-) O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl-1H-benzyl-2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1H-4H-O-acetyl-2-azido-3-O) dibenzyl (3S, 4R, 5R) -benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-qlucopyranosvP- (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oipiperidine-1,3-dicarboxylate) (No.16) The compounds (217 mg, 0.132 mmol) obtained in step 3.d, and 6 (126 mg, 0.264
  • Step 3.f Preparation of (benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-acetamido-3 O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl H 1-4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O- dibenzyl (3S) acetyl-2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate, 4R, 5R)) (No. 17)
  • Step 3.q Preparation of (3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4) - (2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) ) - (1-4) - (3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4) - (2-acetamidb-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) Benzyl (1-4) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-3-carboxylic acid-1-carboxylate (3S, 4R, 5R)) (No.18)
  • Step 3.h Preparation of sodium (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (2-acetamido-3-O-benzyl) Sodium bis (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (3-O-benzyl-2-o-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) -4- (2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy-6-O- sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-
  • Step Aa Preparation of (3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyra ⁇ osyluronic acid) - (1-4) - (2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy r - ⁇ -D-glucopyranosyl) - ( 1-4) - (3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4H 2 -azido-3-O-benzyl [-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - Sodium (3S, 4R, 5R) benzyl-3-carboxylate (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylate) (no. 24)
  • Step 4b Preparation of (acid 3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluroniqueH1-4) - (2-am ' ⁇ no-3-0-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-3- qlucopyranosylH1-4Hacide O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic) - (1-4) - (2-amino-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) Benzyl-3-carboxylic acid-4-oxypiperidine-1-carboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 25)
  • Step 4.c Preparation of sodium (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (3-O-benzyl-2-deoxy) -2-N-sodium sulfonate
  • PREPARATION 5 Synthesis of (Benzyl-2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O- 3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No. 40)
  • Step 5.a Preparation of 1, 6-anhydro-4-O- (tetrahydropyran-2-yl) -2-O- (4-methoxy) benzyl- ⁇ -D-glucopyranose (no. 29)
  • Step 5.b Preparation of 1,6-anhydro-4-O- (tetrahydropyran-2-yl) -2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranose (No. 30)
  • Step 5.c Preparation of 1, 6-anhydro-2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranose (# 31)
  • Step 5.d Preparation of ethyl 2-O-acetyl-4,6-O-isopropylidene-3-Q-methyl-1-thio- ⁇ . ⁇ -L-idopyranoside (# 33)
  • Step 5.e Preparation of (2-O-acetyl-4,6-O-isopropylidene-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1-4) - (1 1 6 -hydro-2- O- (4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No.
  • Step 5.f Preparation of (2-O-acetyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-O- (4-methoxy) benzyl) 3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No. 35 ⁇ ), and (2-O-acetyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1-4) - (1, 6 -Anhvdro-2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No 35 ⁇ )
  • Step 5.g Preparation of (Benzyl-O-acetyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-O, - (3-bromo 4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No. 36)
  • step 5f The 35 ⁇ compound (0.975 g, 1.89 mmol) obtained in step 5f is treated according to
  • Step 5.i Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-di-O-acetyl) -2-Q- (3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (No. 38)
  • Step 5.i Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) - (3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyran () No. 39)
  • Step 5.k Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-Q-levulinoyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) - (3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No. 40) Compound 39 (740 mg, 860 ⁇ mol) obtained in step 5.j is treated as for the synthesis of compound 11 to give, after purification on silica gel (ethyl acetate-dichloromethane 3: 7), the compound 40 (714 mg, 83%). 1 H NMR (CDCl 3 ) ⁇ 6.39 (d, H-1 ⁇ GIc 1 ), 5.76 (d, H-1 ⁇ GIc 1 ).
  • Step 6.a Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-4-O-levuli ⁇ oyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) Dibenzyl (3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5 - ((4-oxyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No. 41)
  • Step 6.b Preparation of (Berizyl 2-O-acetyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O- (3-bromine) 4-methoxy) benzyl-3-O- dibenzyl methyl ( ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-o ⁇ ypiperidine-1,3-dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 42)
  • Step 6.c Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) 3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D8 [ucopyranosyl) - (1-4H-benzyl) -O-acetyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) (- 4) - (6-O-Acetyl-2-O- (3-bromo-4-methoxy) benzyl-3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -Dexf-benzyloxy-1-oxypiperidine-4-dicarboxylate dibenzyl (3S, 4R, 5R)) (No 43)
  • step 6.b A mixture of compound 40 (197.7 mg, 197.7 ⁇ mol, 1.14 molar equivalents) obtained in step 5.k, and compound 42 (210.5 mg, 173.2 ⁇ mol, 1.0 molequiv.) Obtained in step 6.b, is treated according to method 2 to conduct, after purification on Sephadex ® LH-20 column, then on silica gel (toluene-acetone 1: 1), with compound 43 (176 mg, 50%).
  • Mass spectrum (ESI) m / z 2075.0 [(M + Na) + ].
  • Step 6.d Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-4-Q-levulinoyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-3-O) methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl) Dibenzyl 3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No.44)
  • step 6.c To a solution of compound 43 (69 mg, 33.6 ⁇ mol) obtained in step 6.c, in acetonitrile (3 mL) is added, at 0 ° C. and under an argon atmosphere, zirconium tetrachloride (ZrCl). 4 ) (39 mg, 5 molar equivalents). After stirring for 45 minutes at room temperature, the mixture is concentrated under vacuum, and the residue is diluted with ethyl acetate, washed with water, and after drying, filtration and concentration, the residue is purified on silica gel (3: 7 acetone-toluene) to give compound 44 (52 mg, 89%).
  • ZrCl zirconium tetrachloride
  • Step 6.e Preparation of (3-O-methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4) - (3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranosylH 1-4) - (3-O-acid) methyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4M3-O-methyl- ⁇ -D-glucopyranosylH1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylic acid benzyl-3-carboxylic acid (3S 4R, 5R)) (No. 45)
  • Step 6.f Preparation of sodium (3-O-methyl-2,4-di-Q-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (3-O-methyl-2,6) sodium di-O-sodium sulfonato- ⁇ -p-glucopyranosyl- (1-4) - (3-O-methyl-2-o-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - Benzyl-3-carboxylate (3-Q-methyl-2,6-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - ⁇ -4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylate Sodium (3S, 4R, 5R)) (No 46)
  • Step 7.a Preparation of 1, 6-anhydro-4-O- (tetrahydropyran-2-yl) -2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose (no. 48)
  • step 5.a To a solution of 29 (19.96 g, 54.5 mmol) obtained in step 5.a, in DMF (300 mL) is added at 0 ° C., benzyl bromide (5.1 mL), then hydride. sodium (4.6 g). At the end of the addition, the mixture is placed at ambient temperature for 16 hours, then methanol (18 ml) is added at 0 ° C., and after stirring for 1 h at room temperature, the medium is diluted with ethyl acetate (600 mL), washed with water (300 mL), dried (Na 2 SO 4 ), filtered, and concentrated. The residue is purified by flash chromatography (5:95 ethyl acetate-diisopropyl ether) to give 48 (20.6 g, 83%).
  • Step 7.b Preparation of 1,6-anhydro-2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose (no. 49)
  • Step 7.c Preparation of (2-Q-acetyl-4,6-O-isopropylidene-3-O-benzyl- ⁇ , ⁇ -L-idopyranosylH1-4H1,6-anhydro-2-O- (4-methoxy) ) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranase) (No 51)
  • Step 7.d Preparation of (2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-O- (4-methoxy) benzyl) -3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No 52)
  • Step 7.e Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No 53)
  • Step 7.f Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-3-Q-benzyl-4-Q-levulinoyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-O) - (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No 54)
  • Compound 53 (3.2 g, 3.77 mmol) obtained in step 7.e is treated as for the synthesis of 37 (step 5.h), to give 54 (3.17 g, 89%) after purification on silica (acetone toluene 1: 4).
  • Step 7.g Preparation of (Benzyl-2-Q-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-di-O-acetyl) -2-0- (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ . ⁇ -D-glucopyranose) (no. 55)
  • Step 7. h Synthesis of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) - (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (No 56)
  • Compound 55 obtained in step 7.g is treated as for the synthesis of 10 (step 2.c), to conduct, after purification on silica (25:75 diethyl ether-dichloromethane), at 56 (429 mg, 56%).
  • Step 7.i Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-Q-levulinoyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate H 1 -4H 6 -O-acetyl-2-O- (4-methoxy) benzyl) 3-O-benzyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No 57)
  • Step 8.a Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-allyloxycarbonyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1 1 6-anrihydro-2-O - (4-methoxy) benzyl-3-Q-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No 58)
  • Step 8.b Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-allyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-anhydro-2-O) - (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranose) (No 59)
  • step 8.a To a solution in THF (6 mL) of compound 58 (0.805 g, 0.862 mmol) obtained in step 8.a, are successively added palladium diacetate (3.9 mg, 0.017 mmol) and triphenylphosphine (22.6 mg, 0.086 mmol) under an argon atmosphere. The temperature of the mixture is brought to 90 ° C. for 15 min, then the medium is concentrated in vacuo and purified on silica (15:85 acetone-toluene) to yield 59 (0.587 g, 66%).
  • Step 8.d Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-allyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) - (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (No. 61)
  • step 8.c The compound 60 obtained in step 8.c, is treated as for the synthesis of 10 (step 2.c), to conduct, after purification on silica (cyclohexane-ethyl acetate 2: 3), to 61 (240 mg, 70%).
  • Step 8.e Preparation of (Benzyl 2-O-acetyl-4-O-allyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O) - (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ 1 ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No. 62)
  • step 8.d Compound 61 (234 mg, 246 ⁇ mol) obtained in step 8.d is treated as for the synthesis of 11 (step 2.d), to provide, after purification on silica (86:14 acetone-toluene), derivative 62 (249 mg, 93%).
  • Step 9.a Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2- Dibenzyl (3S, 4R, 5R) 0- (4-methoxy) -benzyl-3-O-benyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4H5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate) ) (No.
  • Step 9.b Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-O- (4-methoxy) benzyl-3-Q-benzyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dibenzyl dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No. 64)
  • step 9.a Compound 63 (372 mg, 0.254 mmol) obtained in step 9.a is treated as for the synthesis of 42 (step 6.b), to provide, after purification on silica (ethyl acetate - cyclohexane 2: 3), compound 64 (301 mg, 87%).
  • Step 9 Preparation of benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl) -O -methoxy) benzyl-3-O-, benzyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (benzyl-2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) ) - (6-O-acetyl-2-O- (4-methoxy) benzyl-3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine) 1,3-dibenzyl dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 65)
  • the compounds 57 (124 mg, 0.108 mmol) obtained in stage 7.i, and 64 (150 mg, 0.110 mmol) obtained in stage 9.b are treated according to METHOD 2 to conduct, after purification, at 65 (90 mg, 35%).
  • Step 9.d Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-4-O-levulinoyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-3-0 -benzyl- ⁇ -D-qlucopyranosyl) - (1-4) -
  • Step 9.e Preparation of 3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) (1-4) - (3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) -1- (4-hydroxy) benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4) - (3-O-benzyl- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylate benzyl-3-carboxylic acid (3S, 4R, 5R)) (No 67)
  • Step 9i Preparation of sodium (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (3-O-benzyl-2,6-diol) Sodium-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1-4H3-O-benzyl-2,6 Sodium benzyl-3-carboxylate (3S, 4R, 5R) sodium benzyl-3-carboxylate -di-Q-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) -1- (1-4) -5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylate) (No 68
  • PREPARATION 10 Synthesis of sodium (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (3-O-benzyl-2,6) sodium di-O-sodium sulfonate- ⁇ -D-glucopyranosyl) (1-4) - (3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - Benzyl-3 (3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonate- ⁇ -D-glucopyranosyl [) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylate sodium carboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 73) Step 10.q: Preparation of (benzyl 2-O-ace
  • Step 10 Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-4-O-allyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-3-O) -benzyl- ⁇ -D-qlucopyranosyl) - (1-4) -
  • step 10 g Compound 70 (92 mg, 40.0 ⁇ mol) obtained in step 10 g, is treated as for the synthesis of compound 44 (step 6.d), to provide, after purification on silica (acetone-toluene 17:83) compound 71 (44 mg, 59%).
  • step 10.h The compound 71 (41 mg, 21.6 ⁇ mol) obtained in step 10.h is treated according to method 3.
  • the reaction mixture is deposited on an LH-20 column (210 mL) equilibrated in a 1: 1 mixture of dichloromethane. ethanol.
  • the fractions containing the product are then concentrated and purified on silica to give 72 (30.3 mg, 96%) which can be partially esterified on the carboxylic acid groups.
  • Mass Spectrum (ESI) m / z 1462.4 [(M + H) + ].
  • Step 10.j Preparation of sodium (4-Q-allyl-3-O-benzyl-2-Q-sodiunnaphonato- ⁇ -L-idopyranosyluronateH1-4H3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (3-O-be ⁇ zyl-2-Q-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1-4) - (3-O-benzyl-2,6) sodium benzyl-3-carboxylate (3S, 4R) -di-O-sodium su [fonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1-carboxylate-1-carboxylate. 5R)) (No. 73)
  • Step 11.a Preparation of 1, 6: 2,3-di-anhydro-4-deoxy-4- (prop-1-en-1-yl) - ⁇ -D-mannopyranose (# 76)
  • epoxide 75 (1.2 g, 7.14 mmol) (prepared according to AG Kelly and JS Roberts, J. Chem Soc, Chem Commun, (1980), Vol.288) in ethanol (56.5 mL) ), is added, under argon, rhodium trichloride monohydrate (202 mg, 0.15 molar equivalents). After stirring for 1 h 25 at 75 ° C., the reaction medium is poured into 250 ml of ice water and then, after stirring for 5 minutes, the product is extracted with diethyl ether and dried (Na 2 SO 4 ). and concentrated.
  • Step 11.b Preparation of 1, 6-anhydro-2-azido-2,4-dideoxy-4- (prop-1-en-1-yl) - ⁇ -D-glucopyranose (no. 77)
  • step 11.a The compound 76 obtained in step 11.a is dissolved in a dimethylformamide-water mixture (40 mL, 4: 1), then sodium azide (7.0 g) is added, and the mixture is refluxed for 10.5h. The reaction medium is then extracted with ethyl acetate, washed with water and then with a saturated aqueous sodium chloride solution, dried (Na 2 SO 4 ), concentrated and purified on silica gel to give compound 77 (674 mg, 48%).
  • 1 H NMR (CDCl 3 ) ⁇ 5.8-5.6 (m, 2H, CH CH).
  • Step 11.c Preparation of 1,3,6-tri-O-acetyl-2-azido-2,4-dideoxy-4- (prop-1-ene-1-PV-cc ⁇ -D-glucopyranose (No. 78)
  • Step 11.d Preparation of 3,6-di-Q-acetyl-2-azido-2,4-dideoxy-4- (prop-1-en-1-yl) - ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose (n ° 79)
  • Step 11.e Preparation of 3,6-di-O-acetyl-2-azido-2,4-dideoxy-4- (prop-1-en-1-yl) - ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate ( n ° 80)
  • Step 11.f Preparation of methyl (3,6-di-O-acetyl-2-azido-2,4-dideoxy-4- (prop)
  • Step 11.g Preparation of methyl (3,6-di-O-acetyl [-2-azido-2,4-dideoxy-4- (1,2-dihydroxypropyl) - ⁇ -D-glucopyranosyl] -1H-methyl-2-O acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranoside) ( n ° 83)
  • Step 11.h Preparation of methyl (3.6-di-O-acetyl-2-azido-2,4-dideoxy-4- (5-methyl-phenyl) -Dioxolan-4-O- ⁇ -D-glucopyranosyl] -vinylmethyl 2 O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-Q-acetyl-3-Q-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranoside ) (No 84) To a solution of compound 83 (518 mg, 0.466 mmol) obtained in step 11 g, in acetonitrile are added, under argon, CSA (21.6 mg, 0.2 molequiv), and benzylidene dimethyl acetal (160 ⁇ L, 2.3 molar equivalents).
  • Step 11.i Preparation of methyl (2-azido-2,4-dideoxy-4- (5-methyl-2-phenyl-1,3-dioxolan-4-yl) - ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1 -4) - (3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4) - (3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranoside) (85) )
  • the compound 84 (215 mg, 0.18 mmol) obtained in step 11 h is treated according to method 3. After 16 hours of magnetic stirring at room temperature, the medium is diluted with methanol (12.5 ml) and then a solution 4N aqueous sodium hydroxide solution (11.5 ml) is added at 0 ° C. The mixture is stirred for 4 h at 0 ° C., acidified (pH 5) with 6N hydrochloric acid, then is extracted with dichloromethane and washed with Na 2 SO 3. 5%, and finally saturated sodium chloride. After drying and concentrating, the residue is purified on silica to yield compound 85 (157 mg, 86%). Mass Spectrum (ESI) m / z 1017.3 [(M + H) + ].
  • Step 11.i Preparation of Methyl (2-azido-2,4-dideoxy-4- (5-methyl-2-phenyl) -1,3-dioxolan-4-yl) -3,6-di-Q- Sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (sodium 3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate H 1-4) - (3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino -2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranoside) (No 86)
  • Step 11.k Preparation of methyl (2-amino-2,4-dideoxy-4- (1,2-dihydroxypropyl) -3,6-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) -1 ) - (sodium 2- O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4H2-amino-2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranoside) (heading 87)
  • Compound 86 (210 mg, 0.145 mmol) obtained in step 11.j is treated according to. method without acetic acid to give 87 (108 mg, 73%). If necessary, the reaction is repeated several times until complete disappearance of benzyl protons by NMR.
  • Mass spectrum (ESI) m / z 996.1 [(M + H Na -) "].
  • Step 11.1 Preparation of methyl (2-N-sodium sulfonato-2,4-dideoxy-4- (1,2-dihydroxypropyl) -3,6-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1) -4) - (sodium 2- Q-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4H2-N-sodium sulfonato-2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranoside) (No. 88)
  • Step 11.m Preparation of methyl (2-N-sodium sulfonato-2,4-dideoxy-4-formyl-3,6-di-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl H 1-4) - (sodium 2- Q-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1-4H2-N-sodium sulfonato-2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranoside) (No 89)
  • PREPARATION 12 Synthesis of (2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) Sodium benzyl-3-carboxylate-4-oxypiperidine-1-carboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 97)
  • Step a Preparation of (6-O-acetyl-2-azido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) Dibenzyl 4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 94)
  • Step 12.b Preparation of (6-O-acetyl-2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -
  • Step 12.c Preparation of (2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) -f5- (benzyloyl) -4-oxypiperidine-1-carboxylate benzyl-3 carboxylic acid (3S, 4R, 5R)) (No 96) Compound 95 (101 mg, 50.9 ⁇ mol) obtained in step 12.b, is treated according to METHOD 3. The residue is committed crude in the next step.
  • Step 12d Preparation of (2-acetamido-3,4-di-O-benzyl-2-deoxy-6-Q-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl O- (1-4) - (5- (benzyloxy) Sodium benzyl-3-carboxylate -4-oxypiperidine-1-carboxylate (3S, 4R, 5R)) (no. 97)
  • step 12.c The crude compound 96 obtained in step 12.c is treated according to METHOD 4, to provide compound 97 (35 mg, 88% (2 steps)), which can be partially esterified to the carboxylic acid function.
  • Step 13.a Preparation of benzyl 8- (benzyloxy) -2-phenyltetrahydro-4H- [1, 31dioxinor5,4-pyridin-6 (5H) -carboxylate (4aR, 8R, 8aR) (no. 99)
  • Step 13.b Preparation of benzyl 3- (benzyloxy) -5 - [(benzyloyl) methyl-4-hydroxypiperidine-1-carboxylate (3R, 4R 1 5R) (# 100)
  • Step 14.a Preparation of (benzyl-2,4-di-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido-3) -O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - ( 6-O-acetyl-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (3- (benzyloxy) -5- (benzyloxy) methyl-4-oxypiperidine-1-carboxylate benzyl (3R 1 4R, 5R)) (No 101)
  • Step 14.b Preparation of (benzyl ⁇ -di-O-acetyl-SO-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-acetamido-3-O- benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-Q) acetyl-2-acetamido-3-Q-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (3- (benzyloxy) -5-r (benzyloxy) methyl-4-oxypiperidine-1 benzylcarboxylate (3R 1 4R ⁇ R)) (heading 102)
  • Step 14 Preparation of 3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid (1-4) - (2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl H 1-4 ) - (3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronic acid) - (1-4) - (2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) Benzyl (3- (benzyloxy) -5-r (benzyloxy) methyl-4-oipiperidine-1-carboxylate (3R 1 4R, 5R)) (No 103)
  • Step 15.a Preparation of (4,6-O-Isopropylidene-3-O-benzyl-2-O- (4-methoxy) benzyl- ⁇ -L-idopyranosylH] -4H1,6-anhydro-2-azido-3- -O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (no. 106)
  • the compound 106 obtained in the preceding step is brought into the presence of 80% acetic acid in water. After stirring for 15 hours, the reaction mixture is cooled with ice, diluted (dichloromethane) and neutralized with sodium hydrogencarbonate. The organic phase is dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated. The residue obtained is purified on silica (ethyl acetate - cyclohexane 3: 7) to give 107 (63.2 g, 88%, 2 steps). Mass Spectrum (ESI) m / z 672.3 [(M + Na) + ].
  • Step 15.c Preparation of (3-O-benzyl-6-O-ferf-butyldimethylsilyl-2-O- (4-methoxy) benzyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1-4) - (1, 6) -anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (no. 108)
  • Step 15d Preparation of (3-O-benzyl-6-O-fe-but-butyldimethylsilyl-2-O- (4-methoxy) benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1 -4) - (1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (No.109)
  • Step 15.ef Preparation of (2-O-acetyl-3-O-benzyl-6-O-ferf-butyldimethylsilyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyl) - (1-4) - (1, 6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (No. 110)
  • Step 15.qh Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-Q-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1-4H1,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2 3-deoxy-D-glucopyranose) (heading 111)
  • reaction mixture is stirred for 16 hours at room temperature, then is diluted with ethyl acetate, washed with water, dried, filtered, concentrated and purified on gel.
  • silica ethyl acetate-toluene 1: 4 to provide compound 111 (22.6 g, 91%,
  • Step 15.i Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-Q-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-di-O-acetyl) -2-azido-3-Q-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (No 112)
  • Step 15.j Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-Q-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido) -3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , 3-D-glucopyranose) (No. 113)
  • Step 15.k Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1-4H6-O-acetyl-2-azido-3-Q-benzyl-2 deoxy- ⁇ , 3-D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No 114)
  • Step 16.a Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-Q-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido) -3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl H 1-4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyra ⁇ osyluronate) - (1-4) - (1, 6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranose) (No 115) Compound 114 (990 mg, 0.99 mmol) and compound 8 (1.15 g, 1.7 mmol) are treated according to method 2 to provide, after purification, compound 115 (623 mg, 42%). Mass spectrum (ESI) m / z 1533.8
  • Step 16.b Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido) -3-O-benzyl-2-deoxy - "- D-glucopyranosyl) - (1-4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (1,6-Di-O-acetyl-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (No. 116)
  • the compound 115 (590 mg, 0.39 mmol) is treated as for the synthesis of the compound 112 to conduct, after purification on silica gel (7: 3 cyclohexane-ethyl acetate), to 116 (609 mg, 97%).
  • Mass spectrum (ESI) m / z 1636.2 [(M + Na) + ].
  • Step 16.c Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido) 3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl-4 H- (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6- O-acetyl-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose) (no. 117)
  • Step 16.d Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-Q-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido) 3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl-1- (1-4) - (benzyl-2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate H 1-4) - (6-O) -acetyl-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ , ⁇ -D-glucopyranose trichloroacetimidate) (No. 118)
  • Step 16.e Preparation of (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-azido) 3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1 -4) - (benzyl 2- ⁇ -acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 - 4) (6-O-acetyl-2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1, 3 dibenzyl dicarboxylate (3S, 4R, 5R)) (No 119)
  • the compounds 118 (479 mg, 0.279 mmol) and 6 (255 mg, 0.536 mmol) are treated according to METHOD 2 to provide, after purification, the compound 119 (375 mg,
  • Step 16.f Preparation of benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (6-O-acetyl-2-acetamido) 3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1 -4) - (benzyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 - 4) - (6-0-acetyl-2-acetamido-3-0-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-qlucopyranosyl) - (1-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypi réelled ⁇ 'ne-1, 3 ⁇ di carboxylate dibenzyl (3S, 4R, 5R)) (No. 120)
  • Step 16.q Preparation of (benzyl 3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ 1- (4-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4H 2 -acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1-D-glucopyranosyl) -4) - (dibenzyl 5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate (3S 1 4R, 5R)) (No 121) Compound 120 (190 mg, 93.6 ⁇ mol) is treated according to METHOD 3.
  • the polyol obtained is dissolved in dimethylformamide (4.4 ml), and potassium hydrogen carbonate (85 mg, 10 molar equivalents) and also bromide. benzyl (202 ⁇ L, 20 mol equivalents) are added at 0 ° C. The reaction mixture is stirred at room temperature for 16 h, then purified on an LH-20 column.
  • Step 16.h Preparation of (benzyl 3-O-benzyl-4-O-phenylpropyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4) - (2-acetamido-3-O- benzyl-2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl-D -4) - (benzyl 3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1-4 ) - (2-acetamido-3-O-benzyl-2-deoxy-6-O-sodium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosylH-4) - (5- (benzyloxy) -4-oxypiperidine-1,3-dicarboxylate dibenzyl (3S, 4R, 5R)) (
  • the crude compound 68 of PREPARATION 9 is treated according to METHOD 5 to provide 69 (3.8 mg, 25%, two steps).
  • the crude compound 73 of PREPARATION 10 is processed according to METHOD 5 to provide 74 (6.0 mg, 62%, two steps).

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Abstract

La présente invention concerne les composés inhibiteurs d'héparanases, répondant à la formule générale (I) : dans laquelle : R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical -OSO3-, un radical -O-(C1-C5)alkyle ou un radical -O-aralkyle ; Z représente un radical COO- ou un radical hydroxyle X représente -OH ou une unité saccharidique de formule A ; Y représente H, (C1-C5)alkyle ou une unité saccharidique de formule D ; sous forme libre ou sous forme de sels formés avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvats ou d'hydrates. Médicaments.

Description

Dérivés d'azasucre, inhibiteurs d'héparanases, leur procédé de préparation, les compositions en contenant, leur utilisation.
L'invention a pour objet des dérivés d'azasucre, inhibiteurs d'héparanases, leur préparation, les compositions en contenant et leur application en thérapeutique.
Les héparanases sont des enzymes de type endoglucuronidases qui ont pour substrat des polysaccharides de la famille héparine/héparanes sulfate (HS). On connaît des héparanases de type I et II (McKenzie et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., (2000), Vol.276, p. 1170-1177). Elles hydrolysent spécifiquement des liaisons de type β-1→4 entre une unité saccharidique de type acide D-glucuronique et une unité saccharidique de type D-glucosamine et libèrent des fragments d'HS d'environ 10 à 20 unités saccharidiques (Pikas, D. S et al., J. BhI. Chem., (1998), Vol.273, p.18770-18777). Les héparanases dégradent de la même façon les chaînes polysaccharidiques des protéoglycanes contenant des héparanes sulfates (HSPGs, pour Heparan Sulfate Proteoglycans) (Vlodavsky et Friedmann, J. Clin. Invest, (2001), Vol.108, p. 341-347). Les HSPGs sont constitués d'une protéine centrale à laquelle sont liées de façon covalente des chaînes linéaires d'HS (Kjellen et al., Annu. Rev. Biochem., (1991), Vol.60, p.443-475). Les HSPGs sont des macromolécules ubiquitaires. Comme les HS, les HSPGs sont présents à la surface de nombreux types cellulaires et dans la matrice extracellulaire (ECM pour Extracellular Matrix) (Kjellen et al., (1991), ibid. ; Bernfield et al., Annu. Rev. Biochem., (1999), Vol.68, p.729-777 ; David et al., FASEB J., (1993), Vol.7. p.1023-1030 ; Lozzo et al., Annu. Rev. Biochem., (1998), Vol .67. p.609-652). La ECM, composant majeur des tissus conjonctifs des vertébrés et invertébrés, occupe l'environnement extracellulaire. Elle enveloppe les organes et entoure les endothéliums, notamment les endothéliums capillaires (Wight et al., Arteriosclerosis, (1989), Vol.9, p.1-20), jouant ainsi un rôle de maintien et de barrière de protection des organes et endothéliums (McKenzie et al., Biochem. J ; 2003 ; Vol.373 ; p.423-435). La ECM est également un modulateur clé, impliqué dans différents mécanismes cellulaires, notamment la différenciation et la réparation cellulaire (Folkman ét al., Adv. Exp. Med. Biol., (1992), Vol. 313, p. 355- 364). Des composés inhibiteurs d'héparanases ont été décrits dans l'art antérieur. Par exemple, la demande de brevet internationale WO 02/0600374 décrit des dérivés benz-1 ,3-azole, la demande de brevet internationale WO 03/074516 concerne des dérivés d'acide phtalimide carboxylique et benzoxazole, la demande de brevet internationale WO 04/013132 décrit des dérivés de furanethiazoles ou encore la demande de brevet internationale WO 04/046123 décrit des dérivés benzoxazole, benzthiazole et benzimidazole. La synthèse de dérivés d'azasucres à chaîne courte (2 motifs) dans lesquels l'atome d'azote remplace l'atome d'oxygène en position 5 a été décrite dans Takahashi et al, Chem. Lett., (1994), Vol.11 , p. 2119 ; Takahashi et al, Tetrahedron, (2001), Vol.57. p.6915-6926| Cependant, leurs activités in vivo n'a pas été identifiée.
Des dérivés d'azasucres à un seul motif, de formule suivante :
Figure imgf000003_0001
ont déjà été décrits (brevet US 6,583,158 ; Ichikawa et ah, J. Amer. Chem. Soc, (1998). VoM 20. p. 3007).
Il existe toujours une nécessité de trouver et de développer des produits présentant une bonne activité in vitro et in vivo.
II a maintenant été trouvé, de manière surprenante, que des dérivés d'azasucre de synthèse présentent une bonne activité en tant qu'inhibiteurs d'héparanases. La présente invention concerne donc de nouveaux dérivés d'azasucre, inhibiteurs d'héparanases. Ces nouveaux composés présentent une bonne activité inhibitrice d'héparanases.
L'objet de l'invention concerne les composés répondant à la formule générale (I) :
Figure imgf000003_0002
(I) dans laquelle :
R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(Ci-C5)alkyle ou un radical -O-aralkyle ;
Z représente un radical COO" ou un radical hydroxyle
X représente un radical hydroxyle ou une unité saccharidique de formule A :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle :
— R1 représente un atome d'oxygène, permettant à A de se lier à l'unité azasucre ou à une autre unité saccharidique,
— R2 représente un radical -NH2, un radial -NHCO(CrC5)alkyle, un radical -NHCOaryle, un radical -NHSO3 ", un radical hydroxyle, un radical -O-(Ci-C5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou un radical -OSO3 ",
— R3 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(CrC5)alkyle ou un radical -O-aralkyle,
— R4 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(CrC5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule B :
Figure imgf000004_0002
dans laquelle : — R6 représente un atome d'oxygène, permettant à B de se lier à une autre unité saccharidique de formule A,
— R7 et R8 ont la même définition que R3 tel que défini précédemment,
— R9 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(Ci-C5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule A telle que définie précédemment, — R5 a la même définition que R3 tel que défini précédemment ;
Y représente un atome d'hydrogène, un radical (CrC5)alkyle pu une unité saccharidique de formule D
Figure imgf000005_0001
dans laquelle :
— Rio, R12 et Ri3 ont respectivement les mêmes définitions que R5, R3 et R2 tels que définis précédemment,
— Rn représente :
• un radical (Ci-C3)alkylène permettant à D de se greffer sur l'unité azasucre ou
• un atome d'oxygène permettant à D de se greffer sur une autre unité saccharidique,
— R14 représente un radical -O-(CrC5)alkyle ou un radical -O-E dans laquelle E représente un radical de formule suivante :
Figure imgf000005_0002
dans laquelle :
— R15 représente un radical -O-(CrC5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule D dans laquelle R11 représente un atome d'oxygène,
— R16 et R17 ont la même définition que R3 tel que défini précédemment, à la condition toutefois que lorsque X et R représentent chacun un radical hydroxyle, Y ne représente pas un atome d'hydrogène, et étant entendu que le nombre d'unités saccharidiques comportées par le composé de formule (I) est compris entre 1 et 10, sous forme libre ou sous forme de sels formés avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvats ou d'hydrates. Selon un de ses aspects préférés, l'invention concerne les composés de formule générale (I) :
Figure imgf000006_0001
(D
dans laquelle :
R représente un radical hydroxyle ;
Z représente un radical COO" ou un radical hydroxyle
X représente un radical hydroxyle ou une unité saccharidique de formule A
Figure imgf000006_0002
dans laquelle :
— R-i représente un atome d'oxygène,
— R2 représente un radical -NHCOCH3, un radical -NHSO3 ", un radical -OSO3 ", — R3 représente un radical hydroxyle ou un radical -O-(Ci-C5)alkyle,
— R4 représente un radical hydroxyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule B :
Figure imgf000006_0003
dans laquelle :
— R6 représente un atome d'oxygène, — R7 représente un radical -OSO3 ,
— R8 représente un radical hydroxyle, un radical -0-(C1-C5)BIkYIe ou un radical -O-aralkyle,
— R9 représente un radical -OSO3 ", un radical -O-aralkyle, un radical -O-(CrC5)alkyle ou une unité saccharidique de formule A telle que définie précédemment,
— R5 représente un radical -OSO3 ",
Y représente un atome d'hydrogène ou une unité saccharidique de formule D :
Figure imgf000007_0001
dans laquelle :
— Rio a la même définition que R5 tel que défini précédemment,
— R12 représente un radical hydroxyle ou un radical -OSO3 ",
— R13 représente un radical -NHSO3 ",
— R11 représente un radical méthylène lié à l'unité azasucre ou un atome d'oxygène lié à E,
— R14 un radical -OCH3 ou un radical de formule -0-E dans laquelle E représente un radical de formule :
Figure imgf000007_0002
dans laquelle :
— R15 représente une unité D dans laquelle R11 représente un atome d'oxygène permettant de lier E a D,
— R16 représente un radical -OSO3 "",
— R17 représente un radical hydroxyle, étant entendu que le nombre d'unités saccharidiques comportées par le composé de formule (I) est compris entre 2 et 10, sous forme libres ou sous forme de sels avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvats ou d'hydrates. Des composés particulièrement préférés sont des composés de formule 1 dans laquelle Y est un atome d'hydrogène.
L'invention englobe les dérivés azasucres sous leur forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Dans la forme acide, les fonctions -COO" et -SO3 " sont respectivement sous forme -COOH et -SO3H.
Selon un de ses aspects particulièrement préférés, la présente invention concerne les composés suivant :
• (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2- acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido- 2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α~D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4- oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 20)
• (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N- sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 - 4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N- sodium sulfonato-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-
4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°27)
• (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(3-O-méthyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°47)
• (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6- di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-0-sodium sulfonato-α-
L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 69)
• (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1- 4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R1 5R)) (composé n°74).
• (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2- acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-
2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(3-(hydroxy)-5- hydroxyméthyl-4-oxypipéridine (3R, 4R, 5R)) (composé n°123).
• (4-O-phénylpropyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S1 4R, 5R)) (composé n°124).
Dans le cadre de la présente invention : un radical (CrC5)alkyle représente un radical aliphatique, pouvant comporter de 1 à 5 atomes de carbone, saturé linéaire ou ramifié. A titre d'exemples, on peut citer les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, terbutyle, ..., - un radical -O-aralkyle représente un groupement alkyle tel que défini ci-dessus mais substitué par un radical aromatique pouvant lui même porter des substituants. A titre d'exemple on peut citer le p-methoxy-benzyl, phénymethyl, phényléthyl, phénylpropyl, ..., un radical (CrCsJalkylène représente un groupe alkyle bivalent comportant de 1 à 3 atomes de carbone.
On entend par sel pharmaceutiquement acceptable des dérivées azasucres de l'invention, un dérivé azasucre dans lequel une ou plusieurs des fonctions -COO" ou/et -SO3 " sont liées de façon ionique à un cation pharmaceutiquement acceptable. Les sels préférés selon l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins et plus préférablement encore ceux dont le cation est Na+ ou K+.
Dans son principe le procédé de préparation des composés selon l'invention utilise des synthons de base mono-, di- ou oligosaccharidiques préparés comme précédemment rapporté dans la littérature et choisis en tenant compte notamment de l'orthogonalité des groupes protecteurs. On se référera notamment à EP 300099, EP 529715, EP 621282 et EP 649854 ainsi qu'à C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., (1993), Vol.32, p.1671 -1690. Ces synthons sont ensuite couplés les uns aux autres de façon à fournir un équivalent entièrement protégé d'un composé selon l'invention. Cet équivalent protégé est ensuite transformé en un composé selon l'invention en utilisant des procédés bien connus de l'homme de l'art.
Les composés de l'invention contenant en outre un motif azasucre (ou pipéridine substituée), leur synthèse requiert la préparation d'un précurseur de ce motif portant des groupements protecteurs compatibles avec les couplages ultérieurs à des mono-, di-, ou oligosaccharides. Les précurseurs des azasucres sont préparés selon des procédés décrits dans la littérature. On se référera en particulier à l'ouvrage « Iminosugars as Glycosidase Inhibitors », AE Stϋtz, Wiley-VCH, 1999.
Lorsque les synthons nécessaires à l'assemblage de la chaîne sont disponibles, on procède aux couplages de ces synthons entre eux. Dans les réactions de couplage évoquées, un synthon "donneur", activé sur son carbone anomère, réagit avec un synthon "accepteur", possédant au moins un hydroxyle libre.
La présente invention concerne un procédé pour la préparation des composés de formule (I) caractérisé en ce que : dans une première étape, on prépare un équivalent complètement protégé du composé (I) désiré; dans une seconde étape, les groupes chargés négativement (carboxylates, sulfonates) ainsi que les hydroxyles libres sont introduits et/ou démasqués.
La synthèse du précurseur est réalisée selon des réactions bien connues de l'homme de l'art en utilisant en particulier les méthodes de la synthèse osidique (GJ. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121 ; WO98/03554 et WO99/36443) selon lesquelles un oligosaccharide donneur de liaison glycosidique est couplé avec un oligosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour conduire à un autre oligosaccharide dont la taille est égale à la somme des tailles des deux espèces réactives. Cette séquence est répétée jusqu'à l'obtention du composé de formule (I) désiré. La structure du composé final désiré détermine la nature des entités chimiques utilisées dans les différentes étapes de la synthèse, de façon à contrôler la stéréochimie et la régiosélectivité, selon les règles bien connues de l'homme de l'art. Les composés de l'invention sont obtenus à partir de leurs précurseurs polysaccharidiques complètement protégés en utilisant, en général, l'enchaînement suivant de réactions : - Libération et substitution des fonctions devant être transformées en groupes N- et/ou O-sulfonate. - Libération des autres fonctions et assemblage éventuel des fragments entre eux, par exemple par une réaction d'amination réductrice.
La libération des fonctions acides carboxyliques peut être effectuée à différents stades de ce procédé.
Les composés de l'invention peuvent naturellement être préparés en utilisant différentes stratégies connues par l'homme de l'art de la synthèse osidique et organique.
Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention. Toutefois, les composés de formule (I) peuvent être préparés par d'autres méthodes bien connues de la chimie des sucres décrites par exemple dans « Monosaccharides, Their chemistry and their rôles in natural products », P. M. Collins et RJ. Ferrier, J. Wiley & sons, 1995 et dans GJ. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095- 1121.
Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparations des composés (I) sont ceux couramment utilisés dans la chimie des sucres par exemple dans Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, PGM Wuts, John Wiley & sons, New-York, 1999.
Les groupes protecteurs sont avantageusement choisis par exemple parmi les groupes acétyle, halogénométhyle, benzoyle, lévulinyle, benzyle, benzyle substitué, trityle éventuellement substitué, carbamate, tétrahydropyranyle, allyle, pentenyle, ferf-butyldiméthylsilyle (tBDMS) ou triméthylsilyléthyle.
Les groupes activateurs sont ceux classiquement utilisés en chimie des sucres selon par exemple G J. Boons, Tetrahedron, (1996), Vol.52, p.1095-1121. Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates, les thioglycosides, les penténylglycosides, les xanthates, les phosphites ou les halogénures. Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels, sont mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide.
Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir le sel souhaité. Pour la préparation des sels des composés de formule (I), on peut utiliser toute base minérale ou organique, donnant avec les composés de formule (I), des sels pharmaceutiquement acceptables. On utilise de manière préférentielle comme base l'hydroxyde de sodium, de potassium, de calcium ou de magnésium. Les sels de sodium et de calcium des composés de formule (I), sont les sels préférés.
Les composés selon l'invention ont fait l'objet d'études biochimiques et pharmacologiques. Les tests qui suivent, non limitatifs, illustrent la présente invention
On définit les termes suivants :
PET : polyethylene terephtalate, AM : acetoxymethyl,
DMEM : milieu de Eagle modifié par Dulbecco,
EDTA : ethylenediaminetetraacetic acid,
Tris : tris(hydroxyméthyl)aminomethane,
AT : Antithrombine III, nkat : nanokatal = unité de mesure enzymatique (donnée par le fabriquant), représentant la quantité de substrat catalysé par unité de temps.
1. Evaluation de l'activité des inhibiteurs d'héparanases dans un système enzvmatique (détermination des Cl sn des composés selon l'invention).
L'activité de l'héparanase est mise en évidence par sa capacité à dégrader le fondaparinux . La concentration de fondaparinux est déterminée grâce à son activité anti-facteur Xa.
A. Matériel et méthodes L'héparanase est produit par Sanofi-Synthélabo (Labège, France).
Les réactifs de dosages du facteur Xa sont commercialisés par Chromogénix
(Montpellier, France).
Des concentrations croissantes d'un composé selon l'invention, inhibiteur d'héparanases (dilutions variables : de 1nM à 10 μM) sont mélangées à une concentration fixe d'héparanase (pour chaque lot, des expériences préliminaires permettent de déterminer l'activité enzymatique suffisante à la dégradation de 0,45μg/ml de fondaparinux ajouté). Après 5 minutes à 370C le mélange est mis en présence du fondaparinux et laissé 1 heure à 37°C. La réaction est arrêtée par chauffage à 95 0C pendant 5 minutes. La concentration de fondaparinux résiduelle est enfin mesurée par addition de facteur Xa et de son substrat chromogène spécifique (Réf. S2222).
Les différents mélanges sont effectués selon la procédure qui suit :
, a) Mélange réactionnel
On mélange 50 μl de tampon acétate de sodium (0.2 M, pH 4.2), avec 50 μl de fondaparinux (0.45 μg/ml) et 59 μl d'une solution d'héparanase). On incube 1 heure à 37 0C, puis 5 minutes à 95°C. On mélange ensuite 100 μl du mélange réactionnel avec 50 μl de tampon Tris 50 mM, NaC1 175 mM EDTA 75 m M, pH 14. On passe ainsi du pH 4.2 à pH 7.
L'activité anti-facteur Xa du fondaparinux est mesurée de la façon qui suit :
b) Dosage de l'activité anti-facteur Xa du fondaparinux
On mélange 100 μl de la solution obtenue à l'étape a) avec 100 μl d'AT (0.5 μ/ml). On maintient pendant 2 minutes à 370C et on ajoute ensuite 100 μl de facteur Xa (7nkat/ml). On maintient pendant 2 minutes à 37°C et on ajoute ensuite 100 μl de substrat chromogénique (Réf. : S2222) (1 mM). On maintient pendant 2 minutes à 37 0C et on ajoute ensuite 100 μl d'acide acétique (50 %). La lecture de la densité optique s'effectue à 405 nm.
Un pourcentage d'inhibition est déterminé par rapport au contrôle sans inhibiteur. Une courbe des pourcentages d'inhibition permet de calculer une Cl50. B. Résultats
Les composés selon la présente invention présentent des Cl50 comprises entre 10 nM et 10 μM. Par exemple, le composé n° 27 présente une Cl50 de 11 ± 4 nM (moyenne ± SD, faite sur deux essais)
2. Effet des inhibiteurs d'héparanases sur l'invasion des cellules tumorales HT1080
L'effet des composés de formule (I), inhibiteurs d'héparanases, a été testé in vitro sur l'invasion des cellules tumorales HT1080.
A. Matériel et méthodes :
a) Culture cellulaire:
Les cellules issues de fibrosarcomes humains, HT1080 (ATCC CCL-121 ) sont cultivées dans un milieu DMEM (Réf. : GIBCO 11960-044) contenant 5% de Sérum de Veau Fœtal, de la glutamine (2 mM) (Réf. : GIBCO 25030-024), du pyruvate de sodium (1 mM) (Réf. : GIBCO 11360-039) et des acides aminés non essentiels (1X) (Réf. : GIBCO 11140-035), sur flasks coatés collagène (Becton Dickinson 75 cm2 ; Réf. 354523), jusqu'à 50 à 80% de confluence.
b) Test d'invasion cellulaire
Les mesures d'invasion des HT1080 sont réalisées sur kit Becton Dickinson falcon HTS Fluoroblok Multiwell Insert System en plaques de 24 puits (Réf. : 351 158). Ces chambres de mesure fournissent aux cellules des conditions permettant d'évaluer leurs propriétés invasives in vitro.
Le kit est composé d'une plaque associée à des inserts de culture contenant une membrane PET trouée de pores de 8 microns sur laquelle on dépose une couche uniforme de Matrigel Matrix (Becton Dickinson ; Réf. 354230). Le matrigel est une membrane basale soluble extraite de la tumeur EHS (Engelbreth-Holm-Swarm) qui, grâce à sa composition, forme en se solidifiant une structure équivalente à une membrane basale.
La couche de Matrigel occlue les pores de la membrane, bloquant ainsi la migration des cellules non-invasives au travers de la membrane. Au contraire, les cellules invasives (tumorales ou non tumorales) seront capables de se détacher et d'envahir Ia couche de Matrigel avant de migrer à travers la membrane. La quantification de la migration cellulaire est réalisée par marquage à la calcéine AM (Molecular Probes C-3100). Le signal fluorescent émis est mesuré à l'aide d'un lecteur Perkin Elmer Wallac VICTOR 3 et peut être directement corré\é avec le nombre de cellules ayant envahi le gel de Matrigel. En les comparant à des contrôles effectués dans la même expérience que les produits étudiés (réponse en présence de 0% et 5 % de sérum de veau fœtal), il est possible de déterminer un pourcentage d'inhibition de l'invasion cellulaire en présence des produits.
B. Résultats
Une série de déterminations indépendantes (variant de 2 à 4, a permis de montrer qu'à une concentration comprise entre 1 nM et 10 μM, les composés selon l'invention inhibent en moyenne l'invasion cellulaire avec un pourcentage compris entre 8 et 60 %.
Par exemple, une série de quatre déterminations indépendantes a permis de montrer que 10 μM du composé n° 20 inhibent en moyenne l'invasion cellulaire avec un pourcentage égal à 40.3 ± 8.3 % (moyenne ± écart-type). De plus, le composé n° 20 a un effet dose dépendant sur l'invasion cellulaire. En effet : à une concentration de 0,3 μM, le composé n° 20 inhibe l'invasion cellulaire de 26 + 3%,
- à une concentration de 1 μM, le composé n° 20 inhibe l'invasion cellulaire de 53 + 11%.
Ces résultats mettent en évidence une augmentation de l'inhibition de l'invasion cellulaire en fonction de Ia dose du composé n° 20.
Les composés de formule (I) selon la présente invention présentent donc une bonne affinité pour les héparanases et présentent un effet inhibiteur des héparanases.
Il a été démontré chez les animaux et chez l'homme que l'augmentation de la sécrétion d'héparanases et la progression cancéreuse sont corrélées (Goldschmit et al., PNAS, (2002), Vol.99(15), p.10031 -10036). Par exemple, un niveau d'héparanases élevé a été détecté dans le sérum d'animaux présentant des tumeurs métastatiques (Vlodavsky et al., Isr. J. Med. Sci., (1988), Vo!.24(9-10), p.464-470) ou encore dans l'urine de patients atteints de cancer, ayant développé de nombreuses métastases (Vlodavsky ef al., Curr. Biol., (1997), VoIJ(I), p.43- 51). Des biopsies de tumeurs ont révélé la même corrélation (Vlodavsky et al., Isr. J. Med. ScL, (1988), Vol .24(9-10), p.464-470). Il existe donc une corrélation entre l'augmentation de sécrétion d'héparanases et le potentiel métastatsique des cellules tumorales (Vlodavsky ef al., Invasion Matastasis, (1994), Vol.14, p.290- 302 ; Nature Medicine, (1999), Vol.5. p. 793-802).
Les héparanases, sécrétées par les cellules tumorales, dégradent les HSPGs et HS, composants majeurs de la ECM. La ECM ainsi perforée, laisse circuler les cellules tumorales et métastasiques et permet également l'invasion de vaisseaux sanguins néoformés (angiogénèse) (Suzanne A. Eccles, Nat. Med., (1999), Vol.5(7), p.793-809). L'angiogénèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir de vaisseaux préexistants ou par mobilisation et différentiation de cellules de la moelle osseuse. Ainsi, à la fois une prolifération incontrôlée des cellules endothéliales et une mobilisation d'angioblastes à partir de la moelle osseuse sont observées dans les processus de néo-vascularisation des tumeurs. Ainsi, les héparanases représentent des cibles pertinentes pour, les thérapies visant à inhiber les processus d'invasion de cellules cancéreuses et de métastasisation d'une part, et d'angiogénèse d'autre part. On entend par cancer (ou carcinome) toute croissance cellulaire maligne de l'épithélium, présent dans la peau mais également et surtout dans la paroi des organes ainsi que l'apparition de cellules tumorales métastasiques telles que les mélanomes, mésothéliome, lymphome, leucémie, fibrosarcome, rhabdomyosarcome, mastocytome, mais également les carcinomes touchant un tissu tels que le colon, le rectum, la prostate, les poumons, les seins, le pancréas, l'intestin, les reins, les ovaires, l'utérus, le col de l'utérus, la vessie, le foie et l'estomac. Les carcinomes infiltrent les tissus adjacents et s'étendent (métastasent) à d'autres organes distants, par exemple, foie, poumons, cerveau ou les os. Un composé possédant une activité inhibitrice des héparanases tels que les composés de l'invention peut donc être utile pour le traitement de tels cancers (Fang J et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, (2000), Vol.97(8), p. 3884-3889 ; Kondraganti et al., Cancer Res., (2000), Vol.60(24), p. 6851-6855), et notamment le cancer colorectal, de la prostate, du poumon, du sein, du pancréas, de rein, de la vessie et des ovaires. Le récepteurs p75, récepteur des molécules de la famille des neurotrophines (NT), a été identifié comme étant un marqueur représentatif du phénomène de métastasisation dans le cerveau. Il a de plus été démontré que la sécrétion de NT implique une augmentation de la sécrétion d'héparanases (Marchetti D. et al, J. CeII. Biochem., (2004), Vol.91 (1), p. 206-215). Ainsi, un composé possédant une activité inhibitrice des héparanases tels que les composés de l'invention peut donc être utile pour diminuer la métastasisation au niveau du système nerveux central en inhibant l'action de l'activation du récepteur P75 (Marchetti D. et ai, Pathol. Oncol. Res., (2003), Vol.9(3), p. 147-158 et Epub, (2003), Review ; Walch ET. et al., Int. J. Cancer, (1999), Vol.82(1), p. 112-120 ; Menter DG. et al., Invasion Metastasis, (1994-95), Vol.14(1-6), p. 372-384 ; Marchetti D. et al., Int. J. Cancer, (1993), Vol. 55(4), p. 692-699).
L'activité des héparanases sur les HSPGs de la ECM semble également être corrélée avec le déclenchement de réactions inflammatoires et auto-immunes
(Vlodavsky et al., Invasion metastasis, (1994), Vol.4, p. 290-302 ; Goldschmit et al., Med. ScL, (2002), Vol.99(15), p. 10031-10036). L'interaction des plaquettes, des granulocytes, des lymphocytes B et T, des macrophages et des mastocytes avec la ECM, est associée à la dégradation des HS par les héparanases (Vlodavsky et al., Invasion Metastasis, (1992), Vol.12, p.112-127). Ainsi, un composé tel que les composés de l'invention, possédant une activité inhibitrice des héparanases, peut donc être utile pour le traitement de maladies inflammatoires, notamment les maladies inflammatoires chroniques comme l'arthrite rhumatoïde ou les IBD (Inflammatory Bowel Disease), comprenant deux formes de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin : les UC (ulcerative colitis) et la maladie de
Crohn's (CD) ou de maladies auto-immunes.
D'autres études laissent penser que les héparanases pourrait jouer un rôle dans le traitement de maladies cardiovasculaires (Journal of Pharmacological Sciences, (2004), 94, No. Supplément 1, pp. 160P, print. ; and Meeting Info.: 77th Annual Meeting of the Japanese Pharmacological Society. Osaka, Japan. March 08-10, 2004. Japanese Pharmacological Society ; and Miller, Heather Ann, Diss. Abstr. Int., (1984), B 2003, 64(5) ; Demir et al., Clin. Appl. Thromb.. Hemost, (2001), Vol.7(2), p. 131-140), telles que Ia resténose post angioplastie, des maladies liées aux complications vasculaires du diabète comme les rétinopathies diabétiques, l'athérosclérose {Atherosclerosis, (1999), Vol.145, p. 97-106 ; J. Clin. Invest, (1997), Vol.100, p. 867-874) ou encore les maladies thromboemboliques et les thromboses artérielles. Ainsi, un composé, inhibiteur d'héparanases, selon l'invention peut présenter une thérapie de choix dans ces pathologies.
Par ailleurs, les héparanases sont connues pour être impliquées dans certains cas d'insuffisance rénale où les fonctions de filtration et de réabsorption rénales peuvent être altérées (FASEB J, (2004), Vol.18. p. 252-263). Ainsi, un composé, inhibiteur d'héparanases, selon l'invention peut présenter une thérapie de choix dans telles pathologies.
Les HSPGs de la ECM, semblent également jouer un rôle de régulateurs majeurs de la croissance et de l'activation cellulaire, via la modulation de facteurs de croissance, en particulier des FGFs (Fibroblast Growth Factors). Par exemple, l'activité des héparanases implique la libération de facteurs de croissance comme les FGFs, qui stimulent notamment l'angiogénèse et favorise la progression tumorale (Bashkin et al., Biochemistry, (1989), Vol.28, p. 1737-1743). Ainsi, les héparanases représentent des cibles pertinentes pour le traitement de maladies dans lesquelles les FGFs sont impliqués.
De manière générale, les FGFs sont impliqués de façon importante par l'intermédiaire de sécrétions autocrines, paracrines ou juxtacrines dans les phénomènes de dérégulation de la stimulation de la croissance des cellules cancéreuses. De plus, les FGFs initient l'angiogénèse tumorale qui joue un rôle prépondérant à la fois sur la croissance de la tumeur mais aussi sur les phénomènes de métastasisation.
L'angiogénèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir de vaisseaux préexistants ou par mobilisation et différentiation de cellules de la moelle osseuse. Ainsi, à la fois une prolifération incontrôlée des cellules endothéliales et une mobilisation d'angioblastes à partir de la moelle osseuse sont observées dans les processus de néo-vascularisation des tumeurs. Il a été montré in vitro et in vivo que plusieurs facteurs de croissance stimulent la prolifération endothéliale, et notamment le FGF-1 ou a-FGF et le FGF-2 ou b-FGF.
Les a-FGF et b-FGF jouent par exemple, un rôle important dans la croissance et le maintien des cellules de la prostate (DoII JA. ét al., Prostate, (2001), Vol.305. p.49- 293. Plusieurs travaux montrent la présence de a-FGF et b-FGF et de leurs récepteurs FGFRs à la fois dans les lignées tumorales humaines du sein (notamment MCF7) et dans des biopsies de tumeurs.
Les cellules de gliome produisent in vitro et in vivo du a-FGF et du b-FGF et possèdent à leur surface différents récepteurs FGFs.
Plus récemment le rôle potentiel d'agents pro angiogéniques et notamment des FGFs dans les leucémies et lymphomes a été documenté (Thomas DA. et ai., Acta Haematol, (2001), Vol.207, p.106-190).
Il existe une corrélation entre le processus d'angiogénèse de la moelle osseuse et les "extramedullar disease" dans les CML (chronic myelomonocytic leukemia).
La prolifération et la migration de cellules musculaires lisses vasculaires contribuent à l'hypertrophie intimale des artères et joue ainsi un rôle prépondérant dans l'athérosclérose et dans la resténose après angioplastie et endoarterectomie. Des études in vivo montrent, après lésion de la carotide par "balloon injury", une production locale de a-FGF et de b-FGF.
Les troubles vasculaires dus au diabète se caractérisent par une altération de la réactivité vasculaire et du flux sanguin, une hyperperméabilité, une réponse proliférative exacerbée et une augmentation des dépôts de protéines matricielles. De manière plus précise le a-FGF et le b-FGF sont présents dans les membranes pré rétiniennes de patients ayant des rétinopathies diabétiques, dans les membranes des capillaires sous jacents et dans l'humeur vitrée de malades souffrants de rétinopathies prolifératives.
L'arthrite rhumatoïde (RA) est une maladie chronique avec une étiologie inconnue. Alors qu'elle affecte de nombreux organes, la forme la plus sévère de RA est une inflammation synoviale des articulations progressive aboutissant à la destruction. L'angiogénèse semble affecter de manière importante la progression de cette pathologie. Ainsi le a-FGF et le b-FGF ont été détectés dans le tissu synovial et dans le fluide articulaire de patients atteints de RA, indiquant que ce facteur de croissance intervient dans l'initiation et / ou la progression de cette pathologie. Dans des modèles de AIA (adjuvant-induced model of arthritis) chez le rat, il a été montré que la sur-expression de b-FGF augmente la sévérité de la maladie alors qu'un anticorps neutralisant anti b-FGF bloque la progression de la RA (Yamashita et al., J.lmmunol., (2002), Vol.57, p. 168-450 ; Manabe et al., Rheumatol, (1999), Vol.20, p. 38-714).
L'angiogénèse et l'inflammation sont également des phénomènes majeurs intervenant dans les processus impliqués dans l"ostéoarthrite conduisant à une destruction de l'articulation associée à de la douleur. L'angiogénèse peut également jouer un rôle dans l'hypertrophie chondrocytaire et l'ossification contribuant ainsi aux modifications de l'articulation (Bonnet CS et a Rheumatology. (1 ) 7-16 2005).
Les IBD (inflammatory bowel disease) comprennent deux formes de maladies inflammatoires chroniques de l'intestin : les UC ( ulcerative colitis) et la maladie de Crohn's (CD). Les IBD sont caractérisées par une dysfonction immunitaire se traduisant par une production inappropriée de cytokines inflammatoires induisant l'établissement d'un système micro-vasculaire local. Cette angiogénèse d'origine inflammatoire a pour conséquence une ischémie intestinale induite par vasoconstriction. Des taux circulants et locaux de b-FGF importants ont été mesurés chez des patients atteints de ces pathologies (Kanazawa et al., American Journal of Gastroenterology, (2001), Vol.28, p. 96-822 ; Thorn et al., Scandinavian Journal of Gastroenterology, (2000), Vol.12, p. 35-408).
Un composé possédant une activité inhibitrice des héparanases tels que les composés de l'invention, peut donc être utile pour le traitement de maladies liées à un une up régulation des FGFs et/ou de leurs récepteurs.
Grâce à leur faible toxicité et leurs propriétés pharmacologiques et biologiques, les composés de la présente invention trouvent leur application dans le traitement de tout carcinome ayant un degré de vascularisation important (poumon, sein, prostate, œsophage) ou induisant des métastases (colon, estomac, mélanome) ou étant sensibles au a-FGF ou au b-FGF de manière autocrine ou enfin dans des pathologies de type lymphomes et leucémies. Ces composés représentent une thérapie de choix soit seul soit en association avec une chimiothérapie ou une radiothérapie adaptée ou en association avec un traitement par des anti- angiogènes. Les composés selon l'invention trouvent également leur application dans le traitement de maladies cardiovasculaires comme l'athérosclérose, la resténose post angioplastie dans le traitement des maladies liés aux complications apparaissant suite à la pose de prothèses endovasculaires et/ou de pontages aorto-coronariens ou de complications vasculaires du diabète comme les rétinopathies diabétiques. Les composés selon l'invention trouvent également leur application dans le traitement de maladies inflammatoires chroniques comme l'arthrite rhumatoïde ou les IBD.
Les produits selon l'invention trouvent également leur application dans le traitement de la dégénérescence maculaire. Un caractère majeur de la perte de la vision chez l'adulte est la néo-vascularisation et les hémorragies consécutives qui causent des désordres fonctionnels importants au niveau de l'oeil et qui se traduisent par une cécité précoce. Récemment, l'étude des mécanismes impliqués dans les phénomènes de néo-vascularisation oculaire a permis de mettre en évidence l'implication de facteur pro-angiogéniques dans ces pathologies.
Les composés de l'invention peuvent également être utilisés en combinaison d'un ou plusieurs traitements anticancéreux, comme les traitements chirurgicaux la radiothérapie ou en association avec des composés bloquant l'angiogenèse. Par exemple, les composés de l'invention peuvent être utilisés seuls ou en association avec un autre principe actif tel que cisplatine, cyclophosphamide, methotrexate, 5- fluorouracile, paclitaxel, docetaxel, vincristine, vinblastine, vinorelbine, doxorubicine, tamoxifène, torémifène, acétate de megestrol, anastrozole, goserelin, capecitabine et raloxifène ou des molécules ayant une activité anti- angiogénique, pour le traitement de cancer.
Selon un autre de ses aspects, la présente invention a donc pour objet une composition pharmaceutique contenant, en tant que principe actif, un composé de formule (I) sous forme libre ou sous forme de sels formés avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables, selon l'invention, éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés.
Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaités : orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, transdermique, trans-muqueux, locale ou rectale.
Dans chaque unité de dosage, le principe actif est présent dans les quantités adaptées aux doses journalières envisagées afin d'obtenir l'effet prophylactique ou thérapeutique désiré. Chaque unité de dosage peut contenir de 0,1 à 100 mg de principe actif, de préférence 0,5 à 50 mg.
Les compositions pharmaceutiques de l'invention peuvent être destinées à l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intraveineuse, intratrachéale, topique, intranasale, transdermique, rectale, intraoculaire, vaginale. Les formes unitaires d'administration peuvent être, par exemple, des comprimés, des gélules, des granules, des poudres, des solutions ou suspensions orales ou injectables, des timbres transdermiques ("patch"), des stylos injecteurs, des suppositoires. Pour l'administration locale on peut envisager des pommades, crèmes, lotions, collyres, gels, sprays, huile.
Lesdites formes unitaires sont dosées pour permettre une administration journalière de 1 à 100 mg de principe actif par kg de poids corporel, selon la forme galénique utilisée.
Pour préparer des comprimés on ajoute au principe actif, micronisé ou non, un véhicule pharmaceutique qui peut être composé de diluants, comme par exemple le lactose, la cellulose microcristalline, l'amidon, et des adjuvants de formulation comme des liants, (polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylméthylcellulose, ...), des agents d'écoulement comme la silice, des lubrifiants comme le stéarate de magnésium, l'acide stéarique, le tribehenate de glycerol, le stéarylfumarate de sodium. Des agents mouillants ou tensioactifs tels que le laurylsulfate de sodium peuvent aussi être ajoutés. Les techniques de réalisation peuvent être la compression directe, la granulation sèche, la granulation humide ou la fusion à chaud.
Les comprimés peuvent être nus, dragéifiés, par exemple par du saccharose, ou enrobés avec divers polymères ou autres matières appropriées. Il peuvent être conçus pour permettre une libération rapide, retardée ou prolongée du principe actif grâce à des matrices polymères ou à des polymères spécifiques utilisés dans l'enrobage.
Pour préparer des gélules on mélange le principe actif avec des véhicules pharmaceutiques secs (simple mélange, granulation sèche ou humide, ou fusion à chaud), liquides ou semi-solides. Les gélules peuvent être dures ou molles, pelliculées ou non, de manière à avoir une activité rapide, prolongée ou retardée (par exemple pour une forme entérique). Une composition sous forme de sirop ou d'élixir ou pour l'administration sous forme de gouttes peut contenir le principe actif conjointement à un édulcorant, de préférence acalorique, du méthylparaben ou du propylparaben comme antiseptique, un agent de sapidité et un colorant.
Les poudres et granules dispersibles dans de l'eau peuvent contenir le principe actif en mélange avec des agents de dispersion ou des agents mouillants, ou des agents dispersants comme la polyvinylpyrrolidone, de même qu'avec des édulcorants et des agents correcteurs de goût.
Pour l'administration rectale, on recourt à des suppositoires préparés avec des liants fondant à la température rectale, par exemple du beurre de cacao ou des polyéthylèneglycols.
Pour une administration parentérale, on utilise des suspensions aqueuses, des solutions salines isotoniques ou des solutions stériles injectables contenant des agents de dispersion et/ou des mouillants pharmacologiquement compatibles, par exemple le propylèneglycol ou le butylèneglycol.
Le principe actif peut être formulé également sous forme de micro capsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs, ou bien avec une matrice polymère ou avec une cyclodextrine (timbres transdermiques, formes à libération prolongée).
Les compositions à administration locale selon l'invention comprennent un milieu compatible avec la peau. Elles peuvent se présenter notamment sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques, de gels, d'émulsions eau- dans-huile ou huile-dans-eau ayant l'aspect d'une crème ou d'un gel, de micro émulsions, d'aérosols, ou encore sous forme de dispersions vésiculaires contenant des lipides ioniques et/ou non ioniques. Ces formes galéniques sont préparées selon les méthodes usuelles des domaines considérés.
Le principe actif peut être formulé également sous forme de micro capsules, éventuellement avec un ou plusieurs supports ou additifs, ou bien avec une matrice polymère ou avec une cyclodextrine (timbres transdermiques, formes à libération prolongée). Les compositions locales selon l'invention comprennent un milieu compatible avec la peau. Elles peuvent se présenter notamment sous forme de solutions aqueuses, alcooliques ou hydroalcooliques, de gels, d'émulsions eau-dans-huile ou huile-dans-eau ayant l'aspect d'une crème ou d'un gel, de micro émulsions, d'aérosols, ou encore sous forme de dispersions vésiculaires contenant des lipides ioniques et/ou non ioniques. Ces formes galéniques sont préparées selon les méthodes usuelles des domaines considérés.
Les exemples qui suivent, donnés à titre non limitatif, illustrent la préparation de composés selon la présente invention.
Abréviations utilisées dans le texte qui suit :
Ac = acétyle
AII = allyle
Bn = benzyle
Me = méthyle
Ph = phényle PMB = (4-méthoxy)benzyle
PMBBr = (3-bromo-4-méthoxy)benzyle
Z = benzyloxycarbonyle
CCM = chromatographie sur couche mince
Les exemples qui suivent illustrent la préparation de composés selon l'invention, sans Ia limiter. Avant d'aborder la préparation de ces différents exemples, il est décrit ci-après la préparation de composés (PREPARATION) utiles à l'obtention de composés de l'invention ou à d'autres préparations. Pour les préparations et exemples qui suivent, on utilise les méthodes expérimentales suivantes :
METHODE 1
Oxydation des alcools primaires en acide, puis transformation en ester de benzyle
Du TEMPO® (0.02 équivalent molaire) et une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium (4 L/mol) sont ajoutés à une solution de composé à oxyder (1 équivalent molaire) dans le tétrahydrofurane (THF) (3.5 L/mol). Après refroidissement à 0 0C, du Bromodan (2 équivalents molaire) est ajouté goutte à goutte pendant 20 min. Après 3h d'agitation magnétique le mélange réactionnel est concentré et le résidu est séché par évaporation répétée de diméthylformamide (DMF) (4.95 L/mol). Le composé brut ainsi obtenu est utilisé tel quel dans l'étape suivante. Une solution du composé précédent dans le diméthylformamide (13.1 L/mol) est traitée à température ambiante (1-15h) avec du bromure de benzyle (10 équivalents molaire), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (5 équivalents molaire). Le mélange réactionnel est concentré puis, le résidu est dissous dans l'acétate d'éthyle (35 L/mol), lavé à l'eau, séché (sulfate de sodium), et concentré. Une chromatographie sur colonne donne l'ester de benzyle attendu.
METHODE 2
Couplage aux imidates catalysé par le triflate de ieû-butyldiméthylsilyle
Une solution de triflate de fe/f-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (0,1 M, 0,15 mole par mole d'imidate) est ajoutée, sous argon, à - 20° C, à une solution de l'imidate et de l'accepteur de glycosyle dans un mélange dichlorométhane/éther diéthylique (1:2, 22.5-45 L/mol) en présence de tamis moléculaire 4 Â. Après 10- 45 minutes (CCM), on ajoute de l'hydrogénocarbonate de sodium solide. On filtre la solution, on lave à l'eau, on sèche et on évapore à sec.
METHODE 3
Méthode de saponification des esters.
A une solution de composé à saponifier dans du tétrahydrofurane (160 L/mol) sont additionnés successivement, à -5 0C, de l'eau oxygénée (H2O2) à 30% (7.16 L/mol ester), et une solution aqueuse 0.7 N d'hydroxyde de lithium (2.3 moles par mole d'ester). Après 1h d'agitation à -5 0C, le milieu réactionnel est placé 4h à 0 0C, puis agité à température ambiante jusqu'à consommation des esters. Le brut réactionnel est alors éventuellement purifié sur colonne LH-20.
METHODE 4 Sulfonatation
On ajoute du complexe triéthylamine/trioxyde de soufre (5 moles par fonction hydroxyle) à une solution dans le diméthylformamide (QO L/mol) du composé à sulfater. Après 12 à 22 heures à 55° C1 on ajoute à 0 0C du méthanol ou une solution aqueuse de d'hydrogénocarbonate de sodium, et après 0.5-24h d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est purifié à l'aide d'une colonne LH- 20, ou de deux colonnes Sephadex® G-25 (éluées successivement par une solution aqueuse de chlorure de sodium 0,2 M, puis par de l'eau). Les fractions contenant le produit sont alors concentrées sous vide poussé pour conduire au composé désiré.
METHODE 5
Hydrogénolyse des éthers de benzyle et/ou des esters de benzyle
On laisse agiter pendant 6-16h (CCM) une solution du composé dans un mélange acide acétique glacial / eau / terf-butanol sous une atmosphère d'hydrogène (3- 15 bars) en présence de palladium sur charbon (équivalent à 0.7-3 fois la masse du composé) à 5 ou 10 %. Après filtration, on dépose la solution au sommet d'une colonne de Sephadex® G-25 éluée par du chlorure de sodium 0,2 M. On concentre les fractions contenant le produit et on dessale en utilisant la même colonne éluée par l'eau. Le composé final est obtenu après lyophilisation.
Des préparations utiles à l'obtention des composés selon l'invention sont décrites ci-dessous.
PREPARATION 1 :
Synthèse du 5-(benzyloxy)-4-hydroxypïpéridine-1,3-dicarboxyIate de dibenzyle (3S, 4R, 5R) (n° 6)
Figure imgf000026_0001
Etape la : Préparation du 1-benzyl-3-(benzyloxy)-5-(hvdroxyméthyl)pipéridin-4-ol (3R, 4R. 5R) (n° 2) La synthèse du composé 1 est décrite dans T.M. Jespersen and M. Bols, Tetrahedron (1994) 50 (47), 13449-13460 et dans le brevet US 5,844,102. La synthèse du composé 2 est décrite dans le brevet WO98/50359. A une solution du composé 1 (10.8 g, 42.8 mmol) dans le méthanol (590 mL) sont ajoutés successivement du cyanoborohydrure de sodium (5.38 g, 2 équivalents molaires), puis de l'acide acétique (7.4 mL, 3 équivalents molaire) à -10 0C et une solution de benzylamine (5.1 mL, 1.1 équivalent) dans du méthanol (100 mL). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est porté à 50 0C pendant 2h. Après retour à température ambiante, une solution d'hydrogénocarbonate de sodium 2% (85 mL) est additionnée. Le méthanol est concentré sous vide, puis le résidu est dilué par du dichlorométhane et la phase organique est lavée à l'eau, puis par une solution aqueuse de chlorure de sodium, séchée (Na2SO4), puis concentrée sous vide. Le résidu est engagé directement dans l'étape suivante sans purification.
Etape 1.b : Préparation du [4-(acétyloxy)-1-benzyl-5-(benzyloxy)pipéridin-3-vn acétate de méthyle (3R, 4R. 5R) (n° 3)
A une solution du composé brut 2 (10.8 g) obtenu à l'étape la dans du dichlorométhane (345 mL), sont ajoutés successivement, à 0 0C, sous argon, de la triéthylamine (13.5 mL, 2.25 équivalents molaire), de la 4-(diméthy!amino)pyridine (DMAP) (7.84 g, 1.5 équivalent), et de l'anhydride acétique (61 mL, 15 équivalents molaire). La température est maintenue à 0 0C pendant 10 min, puis le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 16h. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide, et le résidu purifié sur gel de silice pour fournir le composé 3 (7.65g, 43%, 2 étapes).
RMN 1H (CDCI3) δ 7.36-7.18 (m, 10H, Ar), 4.60-4.42 (dd, 2H, OCH2Ph), 2.02, 1.99 (2s, 6H, 2CH3CO).
Etape 1.c : Préparation du 4-(acétyloxy)-3-(acétyloxyméthyl)-5- (benzyloxy)pipéridine-i-carboχylate de benzyle (3R, 4R, 5R) (n° 4)
A une solution du composé 3 (2.31 g, 5.6 mmol) obtenu à l'étape 1.b dans le tétrahydrofurane (28 mL), est ajouté, sous argon, à -10 0C, du chlorure de benzyloxycarbonyle (2.4 mL, 3 équivalents molaire), puis le milieu réactionnel est laissé sous agitation à température ambiante pendant 18h. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide et le résidu est purifié sur gel de silice (1 :9 éther diéthylique - éther diisopropylique) pour conduire au composé 4 (2.14 g, 84%). Spectre de masse (ESI) m/z 478.3 [(M + Na)+].
Etape 1.d : Préparation du 3-(benzyloxy)-4-hydroxy-5-(hydroxyméthyl)pipéridine-1- carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R) (n° 5)
A une solution du composé 4 (1.9 g, 4.2 mmol) obtenu à l'étape 1.c, dans le dioxane (25 mL), est ajouté, à 0 0C, une solution de 0.84 M d'hydroxyde de lithium monohydràte (25 mL, 5 équivalents molaire). Le milieu réactionnel est maintenu à 0 0C pendant 5 minutes, puis est placé à température ambiante, pendant 30 min. Après neutralisation par de l'acide chlorhydrique (HCI : 3 N), le milieu réactionnel est dilué dans du dichlorométhane, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (3:1 acétate d'éthyle - cyclohexane), pour conduire au composé 5 (1.59 g, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 394.4 [(M + Na)+].
Etape 1.e : Préparation du 5-(benzyloxy)-4-hvdroχypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R) (n° 6)
Le composé 5 (3.18 g, 8.6 mmol) obtenu à l'étape 1.d, est traité selon la METHODE 1 pour conduire au composé 6 (2.92 g, 71%). Spectre de masse (ESI) m/z 476.5 [(M + Na)+].
PREPARATION 2 :
Synthèse du (Benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D«glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 11)
Figure imgf000028_0001
10 11 Etape 2.a : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhydro-2-azido-3-O-'ben2yl-2-désoxy-β-D- glucopyranose) (n° 8)
Le composé 7 sous forme 2'-0-acétylée (18.0 g, 31.48 mmol), préparé de la même manière que le composé 2'-O-benzoyIé décrit dans Y. Ichikawa et al., Tetrahedron Lett. (1986) 27 (5) 611-614, est traité selon la METHODE 1 pour conduire, après purification sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyle - cyclohexane), au composé 8 (16.4 g, 77%).
Spectre de masse (ESI) m/z 698.3 [(M + Na)+].
Etape 2.b : Préparation du (Benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1,6-di-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,3-D- glucopyranose) (n° 9)
A une solution du composé 8 (3.74 g, 5.54 mmol) obtenu à l'étape 2. a, dans de l'anhydride acétique (52 ml_, 100 équivalents molaire), est additionné, à 0 0C, de l'acide trifluoroacétique (TFA) (4.7 mL, 11 équivalents molaire). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est agité pendant 16h, puis est concentré, coévaporé au toluène, et purifié sur gel de silice (4:1 toluène-acétate d'éthyle), pour donner le composé 9 (4.33 g, 95%). Spectre de masse (ESl) m/z 842.2 [(M + Na)+].
Etape 2.c : Préparation du (Benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D- qlucopyranose) (n° 10)
A une solution du composé 9 (4.3 g, 5.24 mmol) obtenu à l'étape 2.b, dans de l'éther diéthylique (210 mL), est additionnée, à 0 0C, de la benzylamine (BnNH2) . (22 mL, 38 équivalents molaire). Après 4.5h d'agitation à température ambiante, le milieu est acidifié avec de l'HCI 1 N, puis est extrait à l'acétate d'éthyle, séché (Na2SO4), concentré, et purifié sur gel de silice (35:65 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour conduire à 10 (3.4 g, 83%). Spectre de masse (ESI) m/z 800.2 [(M + Na)+]. Etape 2.d : Préparation du (Beπzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-Q-benzyl-2-désoxy-α,l3-D- qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 11)
A une solution du composé 10 (3.38 g, 4.35 mmol) obtenu à l'étape 2.c, dans le dichlorométhane (82 mL), sont additionnés, sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (2.26 g, 1.6 équivalent molaire), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (1.74 mL, 5.0 équivalents molaire). Après 1.5h d'agitation, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyle- cyclohexane) pour donner 11 (2.96 g, 74%).
RMN 1H (CDCI3) δ 6.43 (d, H-1α GIc'), 5.64 (d, H-1β GIc1), 5.17 (d, IdoUA").
PREPARATION 3 :
Synthèse du (3-O-benzy!-2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodïum)-(1-4)-(2-acétamîdo-3-0-benzyl-2-désoxy-6-0-sodîurn sulfonato-α- D-glucopyranosyI)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium suIfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-beπzyI-2-désoxy-6- 0-sodium sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipérïdine-1-carboxylate de benzyIe-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 19)
Figure imgf000031_0001
12
Figure imgf000031_0002
15
Figure imgf000031_0003
16
Figure imgf000031_0004
17
Figure imgf000031_0005
19 sel de sodium
Etape 3.a : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylHI -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(1 ,6-anhydro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 12)
Le composé 11 (455 mg, 0.50 mmol) obtenu à l'étape 2.d et le composé 8 (675 mg, 1 mmol) obtenu à l'étape 2. a sont traités selon la méthode 2 pour fournir, après purification, ie composé 12 (385 mg, 54%). Spectre de masse (ESI) m/z 1457.6 [(M + Na)+]. Etape 3.b : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylH1-4Hbenzyl 2-0-acétyl-3-0-bβnzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4M1 ,6-di-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose) (n° 13)
Le composé 12 (365 mg, 0.254 mmol) obtenu à l'étape 3.a, est traité comme pour la synthèse du composé 9 (étape 2.b) pour conduire, après purification sur gel de silice (1 :1 Et2O - éther diisopropylique), à 13 (376 mg, 97%). Spectre de masse (ESI) m/z 1560.7 [(M + Na)+].
Etape 3.c : Préparation du (benzyl 2,4-di-Q-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylH1-4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-glucopyranose) (h° 14)
Le composé 13 (364 mg, 0.237 mmol) obtenu à l'étape 3.b, est traité comme pour la synthèse du composé 10 (étape 2.c) pour donner, après purification sur gel de silice (7:3 Et2O-éther diisopropylique), le composé 14 (310 mg, 87%). Spectre de masse (ESI) m/z 1518.8 [(M + Na)+].
Etape 3.d : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosylH1~4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acéty[-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 15)
Le composé 14 (279 mg, 0.187 mmol) obtenu à l'étape 3.c, est traité comme pour la synthèse du composé 11 (étape 2.d), pour fournir, après purification sur gel de silice (1 :1 Et2O - éther diisopropylique), 15 (230 mg, 75%). Spectre de masse (ESI) m/z 1660.6 [(M + Na)+].
Etape 3.e : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-f1-4)-(6-Q-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosylH1-4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosvP-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oχypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 16) Les composés 15 (217 mg, 0.132 mmol) obtenu à l'étape 3.d, et 6 (126 mg, 0.264 mmol) obtenu à l'étape 1.e, sont traités selon la METHODE 2 pour fournir, après purification, le composé 16 (168 mg, 66%). Spectre de masse (ESI) m/z 1976.0 [(M + Na)+].
Etape 3.f : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylH1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 17)
Le composé 16 (138.5 mg, 70.9 μmol) obtenu à l'étape 3.e, est dissous dans la pyridine (1.16 mL), puis de l'acide thioacétique (1.14 mL, 225 équivalents molaire) est ajouté à 0 0C. Le milieu réactionnel est agité 14h à. température ambiante, puis est concentré et purifié sur gel de silice (3:2 cyclohexane-acétate d'éthyle), pour conduire au composé 17 (118 mg, 84%). Spectre de masse (ESI) m/z 2007.7 [(M + Na)+].
Etape 3.q : Préparation de l'(acide 3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(2- acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(2-acétamidb-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-3-acide carboxylique-1- carboxylate de benzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 18)
Le composé 17 (101 mg, 50.9 μmol) obtenu à l'étape 3.f, est traité selon la METHODE 3, puis le milieu réactionnel est acidifié avec de l'acide chlorhydrique 6N (pH 1 ), et extrait au dichlorométhane. La phase organique est lavée au sulfite de sodium (Na2SO3) 5%, puis à l'eau. Après séchage, filtration et concentration, le résidu est engagé brut dans l'étape suivante. Spectre de masse (ESI) m/z 1505.6 [(M + H)+].
Etape 3.h : Préparation du (3-Q-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-benzyl-2-0-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumHI -4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-
• carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R1 5R))' (n° 19)
Le composé 18 brut obtenu à l'étape 3. g, est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 19 (50 mg, 54% (2 étapes)). Spectre de masse (ESI) m/z 2014 [(M - 3Na + 3H)I.
PREPARATION 4 :
Synthèse du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyI-2-désoxy-2-N-sodium sulfonatp-6-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(3-O-benzyI-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodïum)-(1 -4)-(3-O-benzyl-2-désoxy-2-N-sodium sulfonato-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyI)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 26)
16
a)
Figure imgf000035_0001
24
Figure imgf000035_0002
ι( QθBBnn h
Figure imgf000035_0003
26 sel de sodium
Etape A.a : Préparation du (acide 3-O-benzyl-α-L-idopyraπosyluronique)-(1-4)-(2- azido-3-O-beπzyl-2-désoxyr-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(acide3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4H2-azido-3-0-benzv[-2-désoxy-α-D-qlucopyraπosyl)-(1- 4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de • benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 24)
Le composé 16 (175 mg, 89.6 μmol) obtenu à l'étape 3.e, est traité selon la METHODE 3, puis le milieu réactionnel est acidifié avec de l'acide chlorhydrique 6N (pH 2). Le mélange est alors purifié sur colonne Sephadex® LH-20 (1 :1 dichlorométhane - éthanol), pour conduire au composé 24 (100 mg, 76%). Spectre de masse (ESI) m/z 1474.1 [(M + H)+]. Etape 4.b : Préparation du (acide 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluroniqueH1-4)-(2- am'ιno-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1-4Hacide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(2-amino-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S, 4R, 5R)) (n° 25)
A une solution du composé 24 (35 mg) obtenu à l'étape 4. a, dans un mélange 1 :1 méthanol - tétrahydrofurane (1 ml_), est ajouté un complexe 10% Pd/C/éthylènediamine préparé selon la méthode décrite dans H. Sajiki et al., J. Org. Chem. (1998), Vol.63, p. 7990-7992) (107 mg). Le milieu est alors placé sous pression d'H2 (3 bars) à température ambiante pendant 16h. Après filtration et concentration, le brut réactionnel est remis en réaction dans les mêmes conditions, puis est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - pyridine - acide acétique - eau, 6:2:0.6:1 ) pour conduire au composé 25 (12 mg, 44%). Spectre de masse (ESI) m/z 1421.4 [(M + H)+].
Etape 4.c : Préparation du (3-Q-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-désoxy-2-N-sodium sulfonato-
6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-benzyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumMI -4H3-0-benzyl-2-désoxy-2-N- sodium sulfonato-6-O-sodium sulfonato-α-p-qlucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(benzyloxy)- 4-oxypipéridine-1-carboχylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 26)
Le composé 25 (8.5 mg, 5.98 μmol) obtenu à l'étape 4.b, est traité d'après la méthode 4, pour fournir le composé 26 (7 mg, 56%). Spectre de masse (ESI) m/z 2133.8 [(M - H)"].
PREPARATION 5 : Synthèse du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-Iévulinoyl-3-0-méthyI-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-0- méthyl-α,β-D-glucopyranose trichloroacétimîdate) (n°40)
Figure imgf000037_0001
28 29 30 31
Figure imgf000037_0002
32 33 34α
Figure imgf000037_0003
35α 36 37
Figure imgf000037_0004
38 39 40
Etape 5.a : Préparation du 1 ,6-anhvdro-4-O-(tétrahydropyran-2-yl)-2-O-(4- méthoxy)benzyl-β-D-qlucopyranose (n° 29)
A une solution du composé 28 (41 g, 180 mmol) (préparé selon H. Paulsen and W. Stenzel, Chem. Ber. (1978) 111 , 2348-57) dans l'alcool para-méthoxybenzylique (25 mL, 1.1 équivalent molaire) est ajouté, à 40 0C, du sodium (1.37 g, 0.33 équivalent molaire). Le mélange réactionnel est ensuite porté à 110 0C pendant 20 min, puis du méthanol (20 mL) est additionné à O 0C, et l'agitation est maintenue 16h à température ambiante. Après concentration, une purification sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyle-éther diisopropylique) conduit à 29 (20.1 g, 31%). Spectre de masse (ESI) m/z 384.2 [(M + Na)+].
Etape 5.b : Préparation du 1 ,6-anhydro-4-O-(tétrahydropyran-2-yl)-2-O-(4- méthoxy)benzyl-3-O-méthyl-β-D-qlucopyranose (n° 30)
A une solution du composé 29 (13.1 g, 35.8 mmol) obtenu à l'étape 5. a, dans le diméthylformamide (107 mL) sont successivement ajoutés, à O 0C et sous atmosphère d'argon, de l'iodure de méthyle (2.67 mL) et de l'hydrure de sodium (2.68 g). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est agité 16h, puis du méthanol est ajouté à 0 0C, le milieu est extrait à l'acétate d'éthyie, séché (Na2SO4), filtré, et concentré, pour donner 30 qui est directement engagé dans l'étape suivante. Spectre de masse (ESI) m/z 403.3 [(M + Na)+].
Etape 5.c : Préparation du 1 ,6-anhvdro-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-méthyl-β-D- glucopyranose (n° 31)
A une solution dans le méthanol (143 ml_) du composé brut 30 obtenu à l'étape 5.b, est ajoutée une solution méthanolique 0.25 M d'acide camphorsulfonique (CSA) (1 équivalent molaire). Après 30 min d'agitation magnétique, le milieu est dilué au dichlorométhane, puis lavé à l'eau, avec une solution aqueuse à 2% d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, séché (Na2SO4), filtré, et concentré. Une purification sur gel de silice (3:7 acétate d'éthyie - cyclohexane) conduit au composé 31 (9.0 g, 85%). . Spectre de masse (ESI) m/z 319.1 [(M + Na)+].
Etape 5.d : Préparation de l'éthyl 2-0-acétyl-4,6-0-isopropylidène-3-Q-méthyl-1- thio-α.β-L-idopyranoside (n° 33)
A une solution du composé brut 32 (1.99 g, 7.1 mmol) (préparé selon P. Duchaussoy et al., Carbohydr. Res. (1999), 317, 63-84) dans le dichlorométhane (37 inL) sont ajoutés successivement, à 0 0C, sous argon, de la triéthylamine (2.2 ml_), du DMAP (173 mg), et de l'anhydride acétique (1.34 mL). La température est maintenue à 0 0C pendant ' 10 min, puis le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 16h. Le mélange réactionnel est alors concentré sous vide, et le résidu purifié sur silice (1 :1 Et2O-cyclohexane) pour fournir le composé 33 (2.1 g, 92%). Spectre de masse (ESI) m/z 343.3 [(M + Na)+].
Etape 5.e : Préparation du (2-O-acétyl-4,6-O-isopropylidène-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyl)-(1-4)-(116-anhvdro-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-méthyl-β-D- glucopyranose) (n° 34α) et du (2-0-acétyl-4,6-0-isopropylidène-3-0-méthyl-β-L- idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6-anhydro-2-Q-(4-méthoxy)benzyl-3-O-méthyl-β-D-. qlucopyranose) (n° 34β) A un mélange sous argon du composé 33 (1.86 g, 5.79 mmol) obtenu à l'étape 5.d, et du composé 31 (1.46 g, 4.94 mmol) obtenu à l'étape 5.c, en présence de tamis moléculaire 4 Â (2.89 g) dans du toluène (50 mL) est ajoutée, à -20 0C, une solution de /V-iodosuccinimide (1.38 g), et d'acide trifluorométhanesulfonique (63.5 μl_) dans un mélange 1 :1 de dichlorométhane - dioxane (16.5 mL). Après 45 min d'agitation, de l'hydrogénocarbonate de sodium solide est ajouté au milieu réactionnel, et après filtration, le mélange est dilué au dichlorométhane, lavé avec une solution aqueuse de thiosulfate de sodium (Na2S2O3) à 10%, et une solution aqueuse de chlorure de sodium saturée. Après séchage et concentration, le résidu est directement engagé dans l'étape suivante. Spectre de masse (ESI) m/z 577.4 [(M + Na)+].
Etape 5.f : Préparation du (2-0-acétyl-3-0-méthyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6- anhvdro-2-Q-(4-méthoxy)benzyl-3-O-méthyl-β-D-qlucopyranose) (n° 35α), et (2-O- acétyl-3-O-méthyl-β-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3- O-méthyl-β-D-glucopyranose) (n° 35β)
A une solution du composé mélange 34α et 34β obtenu à l'étape 5.e, dans du dichloro-1 ,2-éthane (12 mL), est ajouté de l'acide acétique à 70% (55 mL). Le mélange est chauffé à 60 0C pendant 50 min, puis concentré sous vide, et le résidu obtenu est purifié sur gel de silice (3:2 toluène - acétone) pour conduire au composé 35α (1.56 g, 61%, deux étapes), et au composé 35β (0.36 g, 14%, deux étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 537.5 [(M + Na)+].
Etape 5. g : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-0,-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-Q- méthyl-β-D-qlucopyranose) (n° 36)
Le composé 35α (0.975 g, 1.89 mmol) obtenu à l'étape 5f, est traité selon la
METHODE 1 pour donner, après purification sur gel de silice (1 :1 acétate d'éthyle- cyclohexane), le composé 36 (1.09 g, 83%).
RMN 1H (CDCI3) δ 7.54-6.86 (m, 8H, Ar). Etape 5.h : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-Q-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-O- méthyl-β-D-qlucopyranose) (n° 37)
A une solution sous argon du composé 36 (1.09 g, 1.56 mmol) obtenu à l'étape 5. g, dans le dioxane (35 ml_) sont ajoutés successivement du DMAP (43 mg, 0.2 équivalent molaire), de l'hydrochlorure de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3- éthylcarbodiimide (EDCI) (0.675 g, 2 équivalents molaire.), et de l'acide lévulinique (0.361 mL, 2 équivalents molaire.), et après 16h d'agitation, Ie milieu réactionnel est lavé successivement par une solution d'hydrogénosulfate de potassium (KHSO4) 10%, de l'eau, d'hydrogénocarbonate de sodium à 2%, puis la solution est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée pour donner un résidu qui est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - dichlorométhane 2:3) conduisant au composé 37 (1.07 g, 86%). Spectre de masse (ESI) m/z 819.4 [(M + Na)+].
Etape 5.i : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-O-acétyl-2-Q-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-O- méthyl-α,β-D-qlucopyranose) (n° 38)
Le composé 37 (1.07 g, 1.34 mmol) obtenu à l'étape 5.h, est traité comme pour la synthèse du composé 9 (étape 2.b), pour donner, après purification sur gel de silice (acétate d'éthyle - dichlorométhane 2:3), le composé 38 (1.04 g, 87%). Spectre de masse (ESI) m/z 921.4 [(M + Na)+].
Etape 5.i : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-0- méthyl-α,β-D-qlucopyranόse) (n° 39)
Le composé 38 (1.04 g, 1.16 mmol) obtenu à l'étape 5.i, est traité comme pour la synthèse du composé 10 (étape 2.c), pour fournir, après purification sur gel de silice (acétate d'éthyle-dichlorométhane 1:1), le composé 39 (740 mg, 74%). Spectre de masse (ESI) m/z 877.3 [(M + Na)+].
Etape 5.k : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-Q-lévulinoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-0- méthyl-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 40) Le composé 39 (740 mg, 860 μmol) obtenu à l'étape 5.j, est traité comme pour la synthèse du composé 11 pour donner, après purification sur gel de silice (acétate d'éthyle - dichlorométhane 3:7), le composé 40 (714 mg, 83%). RMN 1H (CDCI3) δ 6.39 (d, H-1α GIc1), 5.76 (d, H-1β GIc1)..
PREPARATION 6 :
Synthèse du (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(3-O-méthyl-2,6-dî-O-sodîum sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1 -4)-(3-O-méthyI-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypîpéridîne-1-carboxylate de benzyle-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 46)
Figure imgf000042_0001
41 42
Figure imgf000042_0002
43
NZ
Figure imgf000042_0003
44
Figure imgf000042_0004
Etape 6.a : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévuliπoyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-0- méthyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-('beπzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 41)
Un mélange du composé 40 (94 mg, 0.094 mmol, 1.0 équivalent molaire) obtenu à l'étape 5.k, et du composé 6 (111 mg, 0.234 mmol, 2.5 équivalent molaire) obtenu à l'étape le, est traité selon la METHODE 2 pour conduire, après purification sur colonne Sephadex®' LH-20, puis sur gel de silice (dichlorométhane - acétate d'éthyle 9:1), au composé 41 (62 mg, 50%). Spectre de masse (ESI) m/z 1336.5 [(M + Na)+].
Etape 6.b : Préparation du (berizyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-O- méthyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oχypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 42)
A une solution du composé 41 (60 mg, 45.7 μmol) obtenu à l'étape 6. a, dans un mélange1 :2 toluène/éthanol (9 mL) est ajouté de l'acétate d'hydrazine (21 mg, 10 équivalents molaire). Après 3h d'agitation magnétique, le mélange est concentré sous vide et le résidu est dilué au dichlorométhane, lavé avec une solution d'hydrogénocarbonate de sodium 2%, à l'eau, et la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée, puis concentrée. Le résidu est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 3:2) pour donner le composé 42 (48 mg, 88%). Spectre de masse (ESI) m/z 1238.5 [(M + Na)+].
Etape 6.c : Préparation du (benzyl 2-0-acétyl-4-0-lévulinoyl-3-0-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-f3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-0- méthyl-α-D-g[ucopyranosyl)-(1-4Hbenzyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(3-bromo-4-méthoxy)benzyl-3-O- méthyl-α-D-qlucopyranosyO-d^Vfδ-fbenzyloxyM-oxypipéridine-i ^-dicarboxylate de dibenzyle (3S. 4R, 5R)) (n° 43)
Un mélange du composé 40 (197.7 mg, 197.7 μmol, 1.14 équivalent molaire) obtenu à l'étape 5.k, et du composé 42 (210.5 mg, 173.2 μmol, 1.0 molequiv.) obtenu à l'étape 6.b, est traité selon la méthode 2 pour conduire, après purification sur colonne Sephadex® LH-20, puis sur gel de silice (toluène - acétone 1 :1 ), au composé 43 (176 mg, 50%). Spectre de masse (ESI) m/z 2075.0 [(M + Na)+].
Etape 6.d : Préparation du (benzyl 2-0-acétyl-4-Q-lévulinoyl-3-0-méthyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O-méthyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)- (benzyl 2-O-acétyl-3-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O- méthyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R. 5R)) (n° 44)
A une solution du composé 43 (69 mg, 33.6 μmol) obtenu à l'étape 6.c, dans l'acétonitrile (3 mL), est ajouté, à 0 0C et sous atmosphère d'argon, de tétrachlorure zirconium (ZrCI4) (39 mg, 5 équivalents molaire). Après 45min d'agitation à température ambiante, le mélange est concentré sous vide, et le résidu est dilué par de l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, et après séchage, filtration et concentration, le résidu est purifié sur gel de silice (3:7 acétone - toluène) pour donner le composé 44 (52 mg, 89%).
Spectre de masse (ESI) m/z 1676.7 [(M + Na)+].
Etape 6.e : Préparation du (acide 3-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(3- O-méthyl-α-D-glucopyranosylH1-4)-(acide 3-O-méthyl-α-L-idopyranosyluronique)- (1-4M3-O-rnéthyl-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1- carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S; 4R, 5R)) (n° 45)
Le composé 44 (18 mg, 11 μmol) obtenu à l'étape 6.d, est traité selon la METHODE 3 pour conduire, après purification, au composé 45 (5.8 mg, 47%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acide carboxylique. Spectre de masse (ESl) m/z 1118.4 [(M + H)+].
Etape 6.f : Préparation du (3-O-méthyl-2,4-di-Q-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-p- qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-méthyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-Q-méthyl-2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-π-4)- (5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R. 5R)) (n° 46)
Le composé 45 (7 mg, 6.26 μmol) obtenu à l'étape 6.e, est traité selon la METHODE 4 pour donner, après purification, le composé 46 (10 mg, 77%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acide carboxylique. Spectre de masse (ESI) m/z 1897.0 [(M + Na - H)+].
PREPARATION 7 :
Synthèse du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl- α,β-D-glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 57)
Figure imgf000045_0001
50 51 52
Figure imgf000045_0002
Etape 7.a : Préparation du 1 ,6-anhvdro-4-O-(tétrahvdropyran-2-yl)-2-O-(4- méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D-glucopyranose (n° 48)
A une solution de 29 (19.96 g, 54.5 mmol) obtenu à l'étape 5. a, dans le DMF (300 mL) est ajouté, à O 0C, du bromure de benzyle (5.1 mL), puis de l'hydrure de sodium (4.6 g). A la fin de l'addition, le mélange est placé à température ambiante pendant 16h, puis du méthanol (18 mL) est additionné à O 0C, et après 1 h d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué à l'acétate d'éthyle (600 mL), lavé à l'eau (300 mL), séché (Na2SO4), filtré, et concentré. Le résidu est purifié par chromatographie flash (5:95 acétate d'éthyle - éther diisopropylique), pour fournir 48 (20.6 g, 83%).
Spectre de masse (ESI) m/z 479.3 [(M + Na)+].
Etape 7.b : Préparation du 1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- glucopyranose (n° 49)
Le composé 48 (20.6 g, 45.2 mmol) obtenu à l'étape 7:a, est traité comme pour la synthèse du composé 31 (étape 5.c), pour conduire, après purification sur silice (3:7 acétate d'éthyle - cyclohexane), à 49 (14.4 g, 86%). Spectre de masse (ESI) m/z 395.4 [(M + Na)+].
Etape 7.c : Préparation du (2-Q-acétyl-4,6-0-isopropylidène-3-0-benzyl-α,β-L- idopyranosylH1-4H1 ,6-anhydro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- glucopyranόse) (n° 51)
Le composé 50 (préparé selon (a méthode décrite par C. Tabeur et al. pour le dérivé 2-O-benzoylé, Carbohydr.Res. (1996), 281 , 253-276) (16.91 g, 42.6 mmol) et le composé 49 (14.44 g, 38.8 mmol) obtenu à l'étape 7.b, sont mis à réagir comme pour la synthèse de 34 (étape 5.e), pour conduire, après purification sur silice (15:85 acétate d'éthyle - éther diisopropylique) au composé 51 (17.05g, 62% (56% alpha-L)).
Spectre de masse (ESI) m/z 729.3 [(M + Na)+].
Etape 7.d : Préparation du (2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6- anhydro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D-glucopyranose) (n° 52)
Le composé 51 (12.38, 17.51 mmol) obtenu à l'étape 5.c, est traité comme pour la synthèse de 35 (étape 5.f) pour fournir, après purification sur silice (4:1 toluene- acétone), 52 (10.85 g, 93%).
Spectre de masse (ESI) m/z 689.3 [(M + Na)+].
Etape 7.e : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1,6-anhydro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 53)
Le composé 52 (10.85 g, 16.27 mmol) obtenu à l'étape 7.d, est traité selon la METHODE 1 pour conduire, après purification sur silice (3:7 acétone - cyclohexane), à 53 (8.44 g, 61 %). Spectre de masse (ESI) m/z 793.3 [(M + Na)+].
Etape 7.f : Préparation du (Benzyl 2-0-acétyl-3-Q-benzyl-4-Q-lévulinoyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 54) Le composé 53 (3.2 g, 3.77 mmol) obtenu à l'étape 7.e, est traité comme pour la synthèse de 37 (étape 5.h), pour fournir 54 (3.17 g, 89%) après purification sur silice (acétone-toluène 1 :4).
Spectre de masse (ESI) m/z 891.3 [(M + Na)+].
Etape 7.g : Préparation du (Benzyl 2-Q-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-0-acétyl-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-benzyl- α.β-D-qlucopyranose) (n° 55)
Le composé 54 (1.45 g, 1.53 mmol) obtenu à l'étape 7.f, est traité comme pour la synthèse de 9 mais à 0 0C pendant 1 h pour conduire, après purification sur silice (toluène - acétone 85:15), à 55 (1.25 g, 78%).
Spectre de masse (ESI) m/z 993.3 [(M + Na)+].
Etape 7. h : Synthèse du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-benzyl-α,β-D- glucopyranose) (n° 56)
Le composé 55 obtenu à l'étape 7.g, est traité comme pour la synthèse de 10 (étape 2.c), pour conduire, après purification sur silice (éther diéthylique - dichlorométhane 25:75), à 56 (429 mg, 56%).
Spectre de masse (ESI) m/z 951.3 [(M + Na)+].
Etape 7.i : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-Q-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4H6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-α,β-D- glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 57)
Le composé 56 (429 mg, 426 μmol) obtenu à l'étape 7.h, est traité comme pour la synthèse de 11 (étape 2.d) pour fournir, après purification sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 1 :1), le dérivé 57 (396 mg, 80%).
RMN 1H (CDCI3) δ 6.45 (d, H-1α), 5.89 (d, H-1β).
PREPARATION 8 :
Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- îdopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0"(4-méthoxy)benzyl-3-0-benzyl- α,β-D-glucopyranose trichloroacétimidate) (n° 62)
Figure imgf000048_0001
Etape 8.a : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyloxycarbonyl-3-O-benzyl-α- L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(116-anriydro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-Q-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 58)
A une solution de 53 (0.800 g, 0.9414 mmol) obtenu à l'étape 7.e, dans le THF (9.4 ml_) sont ajoutés, à 0 0C et sous atmosphère d'argon, de la pyridine (759 μl_, 9.41 mmol), du DMAP (115 mg, 0.94 mmol), et du chloroformate d'allyle (995 μl_, 9.41 mmol) en solution dans du THF (2.35 ml_). L'agitation est maintenue pendant la nuit, puis le mélange réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé au KHSO4 à 10%, à l'hydrogénocarbonate de sodium 2%, à l'eau, séché (Na2SO4) , filtré, et concentré. Le résidu est purifié par chromatographie flash (1 :9 acétone - toluène), pour fournir 58 (0.809 g, 92%).
Spectre de masse (ESI) m/z 877.3 [(M + Na)+].
Etape 8.b : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-anhvdro-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-β-D- qlucopyranose) (n° 59)
A une solution dans du THF (6 mL) du composé 58 (0.805 g, 0.862 mmol) obtenu à l'étape 8.a, sont additionnés successivement du palladium diacétate (3.9 mg, 0.017 mmoi) et de Ia triphénylphosphine (22.6 mg, 0.086 mmol), sous atmosphère d'argon. La température du mélange est portée à 90 0C pendant 15 min, puis le milieu est concentré sous vide et purifié sur silice (15:85 acétone - toluène) pour conduire à 59 (0.587 g, 66%).
Spectre de masse (ESI) m/z 833.4 [(M + Na)+]. Etape 8.c : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-aHyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl- α,3-D-plucopyranose) (n° 60)
Le composé 59 (0.587 g, 0.660 mmol) obtenu à l'étape 8.b, est traité comme pour la synthèse du composé 55 (étape 7.g), pour fournir, après purification sur silice (9:1 acétone - toluène), 60 (0.37 g, 57%)
Spectre de masse (ESI) m/z 936.4 [(M + Na)+].
Etape 8.d : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(4-méthoxy)benzvi-3-0-benzyl-α,β-D- qlucopyranose) (n° 61)
Le composé 60 obtenu à l'étape 8.c, est traité comme pour la synthèse de 10 (étape 2.c), pour conduire, après purification sur silice (cyclohexane-acétate d'éthyle 2:3), à 61 (240 mg, 70%).
Spectre de masse (ESI) m/z 893.4 [(M + Na)+].
Etape 8.e : Préparation du (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyi-α1β-D- qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 62)
Le composé 61 (234 mg, 246 μmol) obtenu à l'étape 8.d, est traité comme pour la synthèse de 11 (étape 2.d), pour fournir, après purification sur silice (86:14 acétone - toluène), le dérivé 62 (249 mg, 93%).
RMN 1H (CDCI3) δ 6.40 (d, H-1α), 5.81 (d, H-1 β).
Les synthèses des PREPARATIONS 9 et 10 peuvent être schématisées comme suit :
Figure imgf000050_0001
PREPARATION 9 :
Synthèse du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sυlfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 -4)-(3-O-benzyI-2,6-di«O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyI)-(1 -4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 68)
Etape 9. a : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-beπzyl-α-L- idopyranosyluronate')-(1-4)-(6-0-acétyl-2-0-(-4-méthoxy)beπzyl-3-0-ben2yl-α-D- glucopyranosyl)-(1-4H5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 63) Le composé 57 (396 mg, 0.34 mmol) obtenu à i'étape 7.i, et le composé 6 (405 mg, 0.85 mmol) obtenu à l'étape le, sont traités selon la METHODE 2 pour conduire, après purification, à 63 (369 mg, 73%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.29 (d, H-1 GIc"), 5.13 (d, H-1 IdoUA1").
Etape 9.b : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-O-( 4-méthoxy)benzyl-3-Q-benzyl-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 64)
Le composé 63 (372 mg, 0.254 mmol) obtenu à l'étape 9. a, est traité comme pour la synthèse de 42 (étape 6.b), pour fournir, après purification sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 2:3), le composé 64 (301 mg, 87%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.29 (d, H-1 GIc"), 5.10 (d, H-1 IdoUA1"), 3.97 (dd, H-4 IdoUA1").
Etape 9. c : Préparation du fbenzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétvk2-0-(4-méthoxy)benzyl-3-0-,benzyl-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(benzyl 2-0-acétyl-3-0-benzyl-c^L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(6-O-acétyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 65)
Les composés 57 (124 mg, 0.108 mmol) obtenu à l'étape 7.i, et 64 (150 mg, 0.110 mmol) obtenu à l'étape 9.b, sont traités selon la METHODE 2 pour conduire, après purification, à 65 (90 mg, 35%).
RMN 1H (CDCI3) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), 5.16 (d, H-1 IdoUA1"), 5.13 (d, H-1 ldoUAv), 4.74 (d, H-1 Glclv).
Etape 9.d : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-lévulinoyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-3-0-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-
(benzyl 2-0-acétyl-3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-3-0- benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboχylate de dibenzyle (3S, 4R. 5R)) (n° 66) Le composé 65 (45 mg, 0.19 mmol) obtenu à l'étape 9.c, est traité comme pour la synthèse de 44 (étape 6.d), pour fournir, après purification sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 3:2), le composé 66 (34 mg, 91%).
Spectre de masse (ESI) m/z 1982.0 [(M + Na)+].
Etape 9.e : Préparation de l'facide 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)-(1-4)-(3- O-benzyl-α-D-qlucopyranosvP-(1-4Hacide 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)- (1 -4)-(3-O-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 - carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S, 4R, 5R)) (n° 67)
Le composé 66 (25 mg, 12.8 μmol) obtenu à l'étape 9.d, est traité selon la METHODE 3. Le mélange réactionnel est acidifié par de l'acide chlorhydrique 6N (pH 2), puis déposé sur colonne de LH-20 (100 mL) équilibrée dans un mélange 9:1 DMF/eau. Les fractions contenant le produit sont ensuite concentrées et purifiées sur silice (dichlorométhane - méthanol 7:3) pour fournir 67 (10.4 mg, 59%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acides carboxylique.
Spectre de masse (ESI) m/z 1422.7 [(M + H)+].
Etape 9i : Préparation du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-benzyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1-4H3-0-benzyl-2,6-di-Q-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)- f5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S. 4R, 5R)) (n° 68)
Le composé 67 (10.4 mg, 9 μmol) obtenu à l'étape 9.e, est traité selon la METHODE 4 pour fournir 68 qui est engagé directement dans l'étape suivante.
PREPARATION 10 : Synthèse du (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-sodïυm sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato- α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato- α-D-gIucopyranosy[)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridîne-1 -carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n°73) Etape 10.q : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl'-2-O-(4-méthoxy)benzyl-3-O-beπzyl-α-D- qlucopyraπosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-O-acétyl-2-Q-(4-méthoxy)benzyl-3-O-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R1 5R)) (n°70)
Le composé 62 (244 mg, 0.223 mmol) obtenu à l'étape δ.e et le composé 64 (138 mg, 0.101 mmol) obtenu à l'étape 9.b, sont traités selon la METHODE 2 pour conduire, après purification, à 70 (100 mg, 43%).
RMN 1H (CDCI3) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), 5.25 (d, H-1 ldoUAv), 5.16 (d, H-1 IdoUA111), 4.72 (d, H-1 Glcιv).
Etape 1O.h : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-
(benzyl 2-O-acétyl-3-Q-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-Q-acétyl-3-O- benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboχylate de dibenzyle (3S.4R, 5R)) (n° 71)
Le composé 70 (92 mg, 40.0 μmol) obtenu à l'étape 10. g, est traité comme pour la synthèse du composé 44 (étape 6.d), pour fournir, après purification sur silice (acétone - toluène 17:83), le composé 71 (44 mg, 59%).
Spectre de masse (ESI) m/z 1924.0 [(M + Na)+].
Etape 1O.i : Préparation du (acide 4-0-allyl-3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronique)-
(1-4)-(3-O-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(3-0-benzyl-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)- 4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-acide carboxylique (3S, 4R, 5R)) (n°72)
Le composé 71 (41 mg, 21.6 μmol) obtenu à l'étape 10. h, est traité selon la méthode 3. Le mélange réactionnel est déposé sur colonne de LH-20 (210 mL) équilibrée dans un mélange 1:1 dichlorométhane - éthanol. Les fractions contenant le produit sont ensuite concentrées et purifiées sur silice pour fournir 72 (30.3 mg, 96%) pouvant être partiellement estérifié sur les groupements acides carboxylique Spectre de masse (ESI) m/z 1462.4 [(M + H)+].
Etape 10.j : Préparation du (4-Q-allyl-3-O-benzyl-2-Q-sodiunn sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumH1-4H3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(3-0-beπzyl-2-Q-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1-4)-(3-O-benzyl-2,6-di-O-sodium su[fonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)- (5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium (3S.4R. 5R)) (n°73)
Le composé 72 (10.0 mg, 6.44 μmol) obtenu à l'étape 10.i, est traité selon la méthode 4 pour fournir 73 qui est engagé directement dans l'étape suivante.
PREPARATION 11 :
Synthèse du méthyl (2-N-sodïum suIfonato-2,4-didésoxy-4-formyl-3,6-di-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-O-sodïum sulfonato- α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodîum suIfonato-α-D-glucopyranoside) (n° 89)
Figure imgf000055_0001
Figure imgf000055_0003
86 se! de sodium
Figure imgf000055_0002
87 sel de sodium
Figure imgf000055_0004
Figure imgf000055_0005
89 sel de sodium
Etape 11.a : Préparation du 1 ,6:2,3-di-anhydro-4-désoxy-4-(prop-1-ène-1-yl)-β-D- mannopyranose (n° 76)
A une solution d'époxyde 75 (1.2 g, 7.14 mmol) (préparé selon AG Kelly and JS Roberts, J. Chem. Soc, Chem. Commun., (1980), Vol.288) dans de l'éthanol (56.5 mL), est ajouté, sous argon, du trichlorure de rhodium monohydraté (202 mg, 0.15 équivalent molaire). Après 1 h25 d'agitation à 75 0C, le milieu réactionnel est versé sur 250 mL d'eau glacée, puis après 5 min d'agitation, le produit est extrait à l'éther diéthylique, séché (Na2SO4), et concentré. Le résidu est ensuite purifié sur silice (éther diisopropylique - cyclohexane 45:55) et les fractions contenant Ie composé 76 sont partiellement concentrées (76 est volatile). RMN 1H (CDCI3) δ 3.42 (dd, H-2), 3.00 (dd, H-3), 2.64 (dd, H-4).
Etape 11.b : Préparation du 1 ,6-anhvdro-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop-1-ène-1-yl)- β-D-qlucopyranose (n° 77)
Le composé 76 obtenu à l'étape 11. a est dissous dans un mélange diméthylformamide - eau (40 mL, 4:1 ), puis de l'azoture de sodium (7.0 g) est ajouté, et le mélange est porté à reflux pendant 10.5h. Le milieu réactionnel est ensuite extrait à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis par une solution aqueuse de chlorure de sodium saturé, séché (Na2SO4), concentré et purifié sur gel de silice pour donner le composé 77 (674 mg, 48%). RMN 1H (CDCI3) δ 5.8-5.6 (m, 2H, CH=CH).
Etape 11.c : Préparation du 1 ,3,6-tri-O-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop-1-ène- 1 -vP-ccβ-D-qlucopyranose (n° 78)
Le composé 77 (3.5 g, 16.57 mmol) obtenu à l'étape 11.b, est traité comme pour la synthèse du composé 9 (étape 2.b) pour conduire, après purification, au composé 78 (5.88 g, 100%). Spectre de masse (ESI) m/z 378 [(M + Na)+].
Etape 11.d : Préparation du 3,6-di-Q-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy~4-(prop-1-ène-1- yl)-α,β-D-qlucopyranose (n° 79)
A une solution du composé 78 (5.88 g, 16.5 mmol) obtenu à l'étape 11.c, dans le tétrahydrofurane (140 mL) est ajoutée de l'éthanolamine (4.0 mL, 4 équivalents molaire), à 0 0C. Après 16h à +4 0C, le milieu est dilué à l'acétate d'éthyle, acidifié (HCI 1 N), lavé à l'eau, séché (Na2SO4), et concentré pour conduire, après purification, au composé 79 (4.66 g, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 336 [(M + Na)+].
Etape 11.e : Préparation du 3,6-di-O-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop-1-ène-1- yl)-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate (n° 80)
A une solution du composé 79 (4.66 g, 14.9 mmol) obtenu à l'étape 11.d, dans du dichlorométhane (285 mL) est ajouté, sous argon, du carbonate de potassium (K2CO3) (3.34 g, 1.6 équivalent molaire), puis du CCI3CN (7.6 mL, 5 équivalents molaires). Après 17h d'agitation magnétique, le mélange réactionnel est filtré, concentré et purifié sur silice pour donner le composé 80 (5.65 g, 83%). RMN 1H (CDCI3) δ 8.77 (s, NH (isomère α)), 5.70 (dd, H-3), 2.64 (d, H-1β).
Etape 11.f : Préparation du méthyl (3,6-di-O-acétyl-2-azido-2,4-didésoxy-4-(prop~
1 -ène-1 -yl)-α-D-qlucopyranosvO-(1 -4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2- désoxy-α-D-glucopyranoside) (n° 82)
Le composé 80 (5.65 g, 12.3 mmol) obtenu à l'étape 11.e, et le composé 81 (préparé selon J.C. Jacquinet et al., Carbohydr. Res. 130 (1984), 221-241) (11.54 g, 1.2 équivalent molaire) sont mis à réagir selon la METHODE 2 pour conduire après purification, au composé 82 (9.39 g, 71 %). Spectre de masse (ESI) m/z 1077.5 [(M + H)+].
Etape 11.g : Préparation du méthyl (3,6-di-O-acéty[-2-azido-2,4-didésoxy-4-(1 ,2- dihydroxypropyl)-α-D-qlucopyranosylH1-4Hméthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-3-0-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside) (n° 83)
A une solution du composé 82 (513 mg, 0.476 mmol) obtenu à l'étape 11.f, dans un mélange 1 :1 tétrahydrofurane - dichlorométhane (8 ml_) sont ajoutés de la N- méthylmorpholine N-oxide monohydrate (NMO) (1.11 g, 20 équivalents molaire) et du tétraoxyde d'osmium (OsO4) 4% à dans l'eau (8.35 mL, 1 équivalent molaire). Après 3 jours d'agitation à température ambiante, un mélange 1 :1 de dichlorométhane - eau est ajouté, ainsi qu'une solution à 37.5% d'hydrogénosulfite de sodium (NaHSO3), et l'agitation est maintenue 30 min supplémentaires. Le mélange réactionnel est extrait au dichlorométhane, purifié sur silice, et la fraction contenant du produit de départ est remise à réagir dans les conditions ci-dessus jusqu'à consommation complète. Après purification, on obtient finalement Ie composé 83 (293 mg, 66%). Spectre de masse (ESI) m/z 1111.4 [(M + H)+].
Etape 11.h : Préparation du méthyl (3.6-di-O-acétyl-2-azido-2.4-didésoxy-4-(5- méthyl^-phénvI-I.S-dioxolan^-vO-α-D-qlucopyranosylHI^Vfméthyl 2-O-acétyl-3- O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-Q-acétyl-3-Q-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside) (n° 84) A une solution du composé 83 (518 mg, 0.466 mmol) obtenu à l'étape 11. g, dans l'acétonitrile sont ajoutés, sous argon, du CSA (21.6 mg, 0.2 molequiv), et du benzylidène diméthylacétal (160 μL, 2.3 équivalents molaire). Après 1 h30 d'agitation, le milieu est neutralisé avec de la triéthylamine, concentré à sec, puis purifié sur silice pour donner le composé 84 (454 mg, 74%). Spectre de masse (ESI) m/z 1199.5 [(M + H)+].
Etape 11.i : Préparation du méthyl (2-azido-2,4-didésoxy-4-(5-méthyl-2-phényl- 1 ,3-dioxolan-4-yl)-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside) (n° 85)
Le composé 84 (215 mg, 0.18 mmol) obtenu à l'étape 11. h, est traité selon la méthode 3. Après 16h d'agitation magnétique à température ambiante, le milieu est dilué au méthanol (12.5 ml_), puis une solution aqueuse de soude 4N (11.5 ml_) est ajoutée à 0 0C. Le mélange est agité 4h à 0 0C, acidifié (pH 5) par de l'acide chlorhydrique 6N, puis est extrait au dichlorométhane, lavé au Na2SO3 5%, et enfin au chlorure de sodium saturé. Après séchage et concentration, Ie résidu est purifié sur silice pour conduire au composé 85 (157 mg, 86%). Spectre de masse (ESI) m/z 1017.3 [(M + H)+].
Etape 11.i : Préparation du méthyl (2-azido-2,4-didésoxy-4-(5-méthyl-2-phény[-1,3- dioxolan-4-yl)-3,6-di-Q-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(sodium 3-O- benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1-4)-(3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (n° 86)
Le composé 85 (160 mg, 0.157 mmol) obtenu à l'étape 11.i, est traité selon la METHODE 4 pour fournir le composé 86 (215 mg, 95%). Spectre de masse (ES!) m/z 689.1 [(M + H - 3Na)2"].
Etape 11.k : Préparation du méthyl (2-amino-2,4-didésoxy-4-(1 ,2- dihvdroxypropyl)-3,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvP-(1 -4)-(sodium 2- O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4H2-amino-2-désoxy-6-O-sodiurn sulfonato-α-D-qlucopyranoside) (n° 87) Le composé 86 (210 mg, 0.145 mmol) obtenu à l'étape 11.j est traité selon la. méthode 5 sans acide acétique pour donner le composé 87 (108 mg, 73%). Si nécessaire, la réaction est reconduite plusieurs fois jusqu'à disparition totale des protons benzyliques par RMN. Spectre de masse (ESI) m/z 996.1 [(M + H - Na)"].
Etape 11.1 : Préparation du méthyl (2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-(1 ,2- dihydroxypropyl)-3,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2- Q-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronaté)-(1 -4H2-N-sodium sulfonato-2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranoside) (n° 88)
 une solution du composé 87 (106 mg, 0.104 mmol) obtenu à l'étape 11.k, dans l'eau (7 mL), est ajouté, à 0 0C, du complexe pyridine.SO3 (662 mg, 4.16 mmol) tout en maintenant le pH à 9.3 avec de Ia soude 1 N. La température est ensuite remontée à température ambiante, le milieu réactionnel est agité 16h en maintenant le pH à 9.3, puis est purifié sur une colonne de gel Sephadex® G-25 équilibrée par une solution de chlorure de sodium 0.2 M.Après rassemblement des fractions contenant le produit et concentration, le résidu est purifié par la même colonne Sephadex® G-25 éluée à l'eau, pour donner le composé 88 (116 mg, 91%).
Spectre de masse (ESI) m/z 1199.8 [(M + H - Na)-].
Etape 11.m : Préparation du méthyl (2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-formyl- 3,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(sodium 2-Q-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1-4H2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (n° 89)
Du périodate de sodium (22.1 mg, 1.1 équivalent molaire) est ajouté à une solution du composé 88 (115 mg, 94 μmol) obtenu à l'étape 11.1, dans l'eau (1.9 mL). Après 1h d'agitation magnétique, le milieu réactionnel est purifié sur une colonne de gel Sephadex® G-15 équilibrée en eau pour conduire au composé 89 (107 mg, 96%).
PREPARATION 12 : Synthèse du (2-acétamido-3,4-dî-O-benzyl-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α- D-glucopyranosyI)-(1 -4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 -carboxylate de benzyIe-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (n° 97)
Figure imgf000060_0001
93 94 95
Figure imgf000060_0002
sodium
96 97
Etape 12. a : Préparation du (6-O-acétyl-2-azido-3,4-di-O-beπzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboχylate de dibenzyle (3S. 4R, 5R)) (n° 94)
Le composé 93 (préparé selon R. Verduyn et al., Recl. Trav. Chim. Pays-Bas, 109 (1990), 12, 591) (361 mg, 0.631 mmol) et le composé 6 (200 mg, 0.421 mmol) obtenu à l'étape le, sont traités selon la méthode 2 pour fournir, après purification, le composé 94 (224 mg, 60%). Spectre de masse (ESI) m/z 885.4 [(M.+ H)+].
Etape 12.b : Préparation du (6-0-acétyl-2-acétamido-3.4-di-0-benzyl-2-désoxy-α-
D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1.3-dicarboxylate de dibenzyle (3S. 4R, 5R)) (n° 95)
Le composé 94 (56.3 mg, 63.6 μmol) obtenu à l'étape 12. a, est traité comme pour la synthèse de 17 (étape 3.f), pour conduire au composé 95 (54.5 mg, 95%). Spectre de masse (ESI) m/z 901.2 [(M + H)+].
Etape 12.c : Préparation du (2-acétamido-3.4-di-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-f5-(benzyloχy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3- acide carboxyliαue (3S. 4R, 5R)) (n° 96) Le composé 95 (101 mg, 50.9 μmol) obtenu à l'étape 12.b, est traité selon la METHODE 3. Le résidu est engagé brut dans l'étape suivante.
Etape 12.d : Préparation du (2-acétamido-3,4-di-O-benzyl-2-désoxy-6-Q-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvO-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle-3-carboxylate de sodium- (3S, 4R, 5R)) (n° 97)
Le composé 96 brut obtenu à l'étape 12.c, est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 97 (35 mg, 88% (2 étapes)), pouvant être partiellement estérifié sur la fonction acide carboxylique.
Spectre de masse (ESI) m/z 847.2 [(M - H)-].
PREPARATION 13 :
Synthèse du 3-(benzyloxy)-5-[(benzyloxy)méthyl]-4-hydroxypipéridine-1 - carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R) (n° 100)
Figure imgf000061_0001
5 99 100
Etape 13.a : Préparation du 8-(benzyloxy)-2-phényltétrahvdro-4H-[1 ,31dioxinor5,4- c1pyridine-6(5H)-carboxylate de benzyle (4aR, 8R, 8aR) (n° 99)
A une solution du composé 5 (250 mg, 0.67 mmol) dans l'acétonitrile (13.4 mL) est ajouté de l'acide camphorsulfonique (31 mg, 0.2 moléquiv) puis du benzaldéhyde diméthylacétal (0.23 mL, 2.3 moléquiv). Après 1h d'agitation magnétique à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé par de la triéthylamine, concentré, et purifié sur gel de silice (15:85 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour fournir le composé 99 (281 mg, 91%). Spectre de masse (ESI) m/z 482.2 [(M + Na)+].
Etape 13.b : Préparation du 3-(benzyloxy)-5-[(benzyloχy)méthyll-4- hydroxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R, 4R1 5R) (n° 100)
A une solution du composé 99 (141 mg, 0.31 mmol) obtenu à l'étape 13. a dans du dichlorométhane (1.2 mL), sont ajoutés successivement, à 0 0C, sous argon, du triéthylsilâne (0.20 mL, 4 équivalents molaire), de l'acide trifluoroacétlque (0.09 mL, 4 équivalents molaire), et de l'anhydride trifluoroacétique (3 μ!_, 0.07 équivalents molaire). La température est maintenue à 0 0C pendant 5 min, puis le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 3.5 h. Le mélange réactionnel est alors neutralisé par une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium, à l'eau, et la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée, et concentrée sous vide. Le résidu est purifié sur gel de silice pour fournir le composé 100 (76 mg, 54%). Spectre de masse (ESI) m/z 462.3 [(M + H)+].
PREPARATION 14 :
Synthèse du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodïum)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α- D-gIucopyranosyI)-(1 -4)-(3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(3-(benzyloxy)-5-
[(benzyIoxy)méthyl]-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R)) (n° 104)
Figure imgf000062_0001
104 sel de sodium Etape 14.a : Préparation du (benzyl 2,4-di-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-Q-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(3-(benzyloxy)-5- r(benzyloxy)méthyll-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R1 4R, 5R)) (n° 101)
Les composés 15 (123 mg, 0.075 mmol) et 100 (69 mg, 0.149 mmol) sont traités selon Ia METHODE 2 pour fournir, après purification, le composé 101 (117 mg, 80%). Rapport α/β 55/45. Spectre de masse (ESI) m/z 1962 [(M + Na)+].
Etape 14.b : Préparation du (benzyl ∑Λ-di-O-acétyl-S-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-Q-acétyl-2-acétamido-3-Q-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3- (benzyloxy)-5-r(benzyloxy)méthvn-4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R1 4R^R]) (n° 102)
Le composé 101 (117 mg, 60 μmol) est dissous dans la pyridine (1 mL), puis de l'acide thioacétique (1 mL, 225 équivalents molaire) est ajouté à 0 0C. Le milieu réactionnel est agité 17 h à température ambiante, puis est concentré et purifié sur gel de silice (4:96 éthanol - toluène), pour conduire au composé 102 (50 mg, 42%). Spectre de masse (ESI) m/z 1971.9 [(M + H)+].
Etape 14. c : Préparation de l'acide 3-0-benzyl-α-L-idopyranosyluronique-(1-4)-(2- acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(acide 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronique)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-(benzyloxy)-5-r(benzyloxy)méthvn-4-oχypipéridine-1- carboxylate de benzyle (3R1 4R, 5R)) (n° 103)
Le composé 102 (50 mg, 25 μmol) est traité selon la METHODE 3 pour conduire au dérivé 103. Spectre de masse (ESI) m/z 1581.7 [(M + H)+]. Etape 14.d : Préparation du (3-O-benzyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-3-0-benzyl-2-désoxy-6-0- sodium su[fonato-α-D-qlucopyranosylH1-4)-(3-0-benzyl-2-Q-sodium sulfonato-α- L-idopyranosvIuronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-3-Q-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(3-(benzyloxy)-5-r(benzyloxy)méthyll- 4-oxypipéridine-1-carboxylate de benzyle (3R, 4R, 5R)) (n° 104)
Le composé 103 est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 104 (43 mg, 80% (2 étapes)). Spectre de masse (ESI) m/z 2134.3 [(M - Na)I.
PREPARATION 15 :
Synthèse du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D- glucopyranose trîchloroacétimïdate) (n° 114)
Figure imgf000065_0001
Figure imgf000065_0002
114 113
Etape 15.a Préparation du (4,6-O-isopropylidène-3-O-benzyl-2-O-(4- méthoxy)benzyl-α-L-idopyranosylH1-4H1,6-anhydro-2-azido-3--O-benzyl-2- désoxy-β-D-glucopyranose) (n° 106)
A une solution du composé 105 (63.2 g, 111 mmol) (préparé selon C.A.A. van Boeckel ef al., J. Carbohydrate Chemistry (1985) 4 (3), 293-321) dans du DMF (445 ml_) est ajouté, à O 0C et sous argon, du NaH (6.93 g, 1.3 équivalent molaire) puis du chlorure de para-méthoxybenzyle (24 mL, 1.6 équivalent molaire). Après 2 h d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (9 mL), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 15:85) pour fournir 106. Spectre de masse (ESI) m/z 707.3 [(M + NH4)+]. Etape 15.b : Préparation du (3-O-benzyl-2-CH4-méthoxy)benzyl-α-L- idopyranosylH1-4H1 ,6-anhydro-2-azido-3-Q-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 107)
Le composé 106 obtenu à l'étape précédente est mis en présence d'acide acétique à 80% dans l'eau. Après 15 h d'agitation magnétique, le mélange réactionnel est refroidi par de la glace, dilué (dichlorométhane) et neutralisé à l'hydrogénocarbonate de sodium. La phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 3:7) pour fournir 107 (63.2 g, 88%, 2 étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 672.3 [(M + Na)+].
Etape 15.c : Préparation du (3-Q-benzyl-6-O-ferf-butyldiméthylsilyl-2-O-(4- méthoxy)benzyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1 ,6-anhydro-2-azido-3-0-benzyl-2- désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 108)
Le composé 107 (64.2 g) est mis en solution dans du dichlorométhane (200 mL). A 0 0C et sous argon, sont additionnés successivement de la triéthylamine (30.3 mL, 2.2 équivalents molaire), du 4-diméthylaminopyridine (1.21 g, 0.1 équivalent molaire), et du chlorure de ferf-butyldiméthylsilyle (17.04 g, 1.1 équivalent molaire). Après 4 h d'agitation magnétique, 10% de chlorure de terf-butyldiméthylsilyle sont rajoutés, et après une heure, le milieu réactionnel est dilué par du dichlorométhane, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 15:85) pour fournir 108. Spectre de masse (ESI) m/z 786.3 [(M + Na)+].
Etape 15.d : Préparation du (3-O-benzyl-6-O-fe/if-butyldiméthylsilyl-2-Q-(4- méthoxy)benzyl-4-0-phénylpropyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1,6-anhydro-2-azido-3- O-benzyl-2-désoxy-B-D-qlucopyranose) (n° 109)
A une solution du composé 108 dans du diméthylformamide (485 mL) est ajouté, à 0 0C et sous argon, du bromure de phénylpropyle (74 mL, 5 équivalents molaire) puis du NaH (7 g, 1.5 équivalent molaire). Après 5.5 h d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (50 mL), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyie - cyclohexane 15:85) pour fournir 109 (49.3 g, 58%, 2 étapes). Spectre de masse (ESI) m/z 904.3 [(M + Na)+].
Etape 15.e-f : Préparation du (2-O-acétyl-3-O-benzyl-6-O-ferf-butyldirnéthylsilyl-4- 0-phénylpropyl-α-L-idopyranosyl)-(1-4)-(1,6-anhvdro-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy- β-D-glucopyranose) (n° 110)
A une solution de 109 (49.3 g, 55.9 mmoi) dans du dichlorométhane (2.2 L) est ajouté de l'eau (112 mL) puis, à 0 0C, du DDQ (19.03 g, 1.5 équivalent molaire). Après 3 h d'agitation à 0 0C, une solution d'hydrogénocarbonate de sodium est additionnée. La phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est dissous dans de la pyridine (335 mL), puis de l'anhydride acétique (28 mL) et du 4-diméthylaminopyridine (682 mg) sont additionnés. Après 16 h d'agitation magnétique, le mélange réactionnel est concentré sous vide et le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 15:85) pour fournir 110 (34.4 g, 77%, 2 étapes).
Spectre de masse (ESI) m/z 826.4 [(M + Na)+].
Etape 15.q-h : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4H1,6-anhydro-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-3-D- glucopyranose) (n° 111)
A une solution de 110 (25.17 g, 31.3 mmol) dans l'acétone (1.46 L) est ajoutée, à 0 0C, une solution aqueuse 3.5 M d'acide sulfurique (45 mL) contenant de l'anhydride chromique (10 g). Après 3 h d'agitation magnétique à 0 0C, le milieu réactionnel est dilué au dichlorométhane, lavé à l'eau, séché, filtré et concentré pour fournir un brut réactionnel qui est engagé directement dans l'étape suivante. Le résidu précédemment obtenu est mis en solution dans du diméthylformamide (230 mL) et de l'hydrogénocarbonate de potassium (16.7 g, 5 équivalents molaires) ainsi que du bromure de benzyie (39.8 mL, 10 équivalents molaires) sont additionnés. Le mélange réactionnel est agité 16 h à température ambiante, puis est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau, séché, filtré, concentré et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle - toluène 1 :4) pour fournir le composé 111 (22.6 g, 91%,
2 étapes).
Spectre de masse (ESl) mfz 811.3 [(M + NH4)+].
Etape 15.i : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(1 ,6-di-0-acétyl-2-azido-3-Q-benzyl-2-désoxy-α,β-D- qlucopyranose) (n° 112)
A une solution du composé 111 (1.11 g, 1.39 mmol) dans de l'anhydride acétique (13.2 mL, 100 équivalents molaire), est additionné, à 0 0C, de l'acide trifluoroacétique (TFA) (1.14 mL, 11 équivalents molaire). Après retour à température ambiante, le mélange réactionnel est agité pendant 3.5 h, puis est concentré, coévaporé au toluène, et purifié sur gel de silice (85:15 toluène - acétate d'éthyle), pour donner le composé 112 (1.15 g, 93%). Spectre de masse (ESI) m/z 918.3 [(M + Na)+].
Etape 15.j : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-Q-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-α,3-D- glucopyranose) (n° 113)
A une solution du composé 112 (1.13 g, 1.26 mmol) dans de l'éther diéthylique (51 mL), est additionnée, à 0 0C, de la benzylamine (BnNH2) (5.25 mL, 38 équivalents molaire). Après 5h15 d'agitation à température ambiante, le milieu est acidifié avec de l'HCI 1N, puis est extrait à l'éther diéthylique, séché (Na2SO4), concentré, et purifié sur gel de silice (35:65 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour conduire à 113 (0.97 g, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 854.3 [(M + H)+].
Etape 15.k : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronateH1-4H6-0-acétyl-2-azido-3-Q-benzyl-2-désoxy-α,3-D- qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 114)
A une solution du composé 113 (0.95 g, 1.12 mmol) dans le dichlorométhane (21.2 mL), sont additionnés, sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (0.583 g, 1.6 équivalent molaire), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (0.56 mL, 5.0 équivalents molaire). Après 35 min d'agitation, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (25:75 acétate d'éthyle - cyclohexane) pour donner 114 (995 mg, 90%). Spectre de masse (ESI) m/z 1021.5 [(M + Na)+].
PREPARATION 16 :
Synthèse du (benzyf 3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-2-O-sodïum sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyI 3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamfdo-3-O-benzyl-2-désoxy- 6-O-sodïum sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipérîdine-1,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 122)
Figure imgf000070_0001
122 sel de sodium
Etape 16.a : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-beπzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosylH1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyraπosyluronate)-(1- 4)-(1,6-anhvdro-2-azido-3-O-beπzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose) (n° 115) Le composé 114 (990 mg, 0.99 mmol) et le composé 8 (1.15 g, 1.7 mmol) sont traités selon la méthode 2 pour fournir, après purification, le composé 115 (623 mg, 42%). Spectre de masse (ESI) m/z 1533.8 [(M + Na)+].
Etape 16.b : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-0-acétyl-2-azido-3-0-benzyl-2-désoxy-«-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1- 4)-(1,6-di-O-acét,yl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-glucopyranose) (n° 116)
Le composé 115 (590 mg, 0.39 mmol) est traité comme pour la synthèse du composé 112 pour conduire, après purification sur gel de silice (7:3 cyclohexane - acétate d'éthyle), à 116 (609 mg, 97%). Spectre de masse (ESI) m/z 1636.2 [(M + Na)+].
Etape 16.c : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylHI -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose) (n° 117)
Le composé 116 (592 mg, 0.367 mmol) est traité comme pour la synthèse du composé 113 pour donner, après purification sur gel de silice (65:35 cyclohexane - acétate d'éthyle), Ie composé 117 (530 mg, 92%). Spectre de masse (ESI) m/z 1593.9 [(M + Na)+].
Etape 16.d : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-Q-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosvQ-(1-4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1- 4)-(6-O-acétvI-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate) (n° 118)
Le composé 117 (511 mg, 0.325 mmol) est traité comme pour Ia synthèse du composé 114 pour fournir, après purification sur gel de silice (7:3 cyclohexane - acétate d'éthyle), 118 (495 mg, 89%). Analyse élémentaire calculée pour C85H90CI3N7O25: C, 59.49 ; H, 5.29 ; N, 5.71. Trouvée : C, 59.49 ; H, 5.50 ; N, 5.48.
Etape 16.e : Préparation du (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-Q-acétvi-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 119)
Les composés 118 (479 mg, 0.279 mmol) et 6 (255 mg, 0.536 mmol), sont traités selon la METHODE 2 pour fournir, après purification, le composé 119 (375 mg,
66%).
Analyse élémentaire calculée pour Ci11HiI7N7O30: C, 59.49 ; H, 5.29 ; N, 5.71. Trouvée : C, 59.49 ; H, 5.50 ; N, 5.48.
Etape 16.f : Préparation du fbenzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(6-O-acétyl-2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 - 4)-(6-0-acétyl-2-acétamido-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5- (benzyloxy)-4-oxypipéridι'ne-1 ,3^di'carboxylate de dibenzyle (3S, 4R, 5R)) (n° 120)
Le composé 119 (180 mg, 88.7 μmol) est dissous dans la pyridine (1.4 mL), puis de l'acide thioacétique (1.4 mL, 225 équivalents molaire) est ajouté à 0 0C. Le milieu réactionnel est agité 17h à température ambiante, puis est concentré et purifié sur gel de silice (4:1 toluène - acétone), pour conduire au composé 120
(153 mg, 84%).
Spectre de masse (ESI) m/z 2084.8 [(M + Na)+].
Etape 16.q : Préparation du (benzyl 3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-0-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosylH 1 -4)-(benzyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4H2- acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1-4)-(5-(benzyloxy)-4- oxypipéridine-1 ,3-dicarboxylate de dibenzyle (3S1 4R, 5R)) (n° 121) Le composé 120 (190 mg, 93.6 μmol) est traité selon la METHODE 3. Le polyol obtenu est dissous dans du diméthylformamide (4.4 mL), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (85 mg, 10 équivalents molaire) ainsi que du bromure de benzyle (202 μL, 20 équivalents molaire) sont additionnés à 0 0C. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16 h, puis purifié sur colonne LH-20.
Une purification sur gel de silice (acétate d'éthyle - cyclohexane 2:3) permet d'obtenir 121 (108 mg, 62% (2 étapes)). Spectre de masse (ESI) m/z 1884.2 [(M + Na)+].
Etape 16.h : Préparation du (benzyl 3-O-benzyl-4-O-phénylpropyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvD-d -4)-(benzyl 3-O-benzyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-acétamido-3-0-benzyl-2-désoxy-6-0- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosylH1 -4)-(5-(benzyloxy)-4-oxypipéridine-1 ,3- dicarboxylate de dibenzyle (3S, 4R. 5R)) (n° 122)
Le composé 121 (41 mg, 21.6 μmol) est traité d'après la METHODE 4, pour fournir le composé 122 (49 mg, 99%).
Spectre de masse (ESI) m/z 2301.0 [(M - H)"].
Les exemples qui suivent illustrent la préparation de composés de l'invention sans la limiter. Les spectres de masse et R.M.N. confirment les structures des composés obtenus.
EXEMPLE 1 :
Synthèse du (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- gIucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypïpéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 20)
Figure imgf000074_0001
20 sel de sodium
Le composé 19 de la PREPARATION 3 (50 mg, 24.02 μmol) est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 20 (26 mg, 72%).
RMN 1H (D2O) δ 5.23 (d, H-1 GIc"), 5.13 (d, H-1 IdoUA1"), 5.10 (d, H-1 ldoUAv), 5.09 (d, H-1 Glcιv), 3.62, 3.04, 2.64, 2.47 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip1).
EXEMPLE 2 : Synthèse du 2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 21)
Figure imgf000074_0002
(selde sodium)
21
Le composé 97 de la PREPARATION 12 est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 21.
RMN 1H (D2O) δ 5.21 (d, H-1 GIc"), 3.40, 3.40, 3.40, 3.10 (4m, 4H, H-2, H-2', H-6,
H-6' pip1).
EXEMPLE 3 :
Synthèse du (2,4-di-O-sodium sulfonato-oc-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium suIfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipérïdine-3-carboxylate de sodium (3S5 4R, 5R)) (composé n° 22 ) (sel de sodium)
Figure imgf000075_0001
22
De la même manière a été préparé le composé 22.
RMN 1H (D2O) δ 5.19 (d, H-1 GIc"), 5.15 (d, H-1 IdoUA1"), 3.27, 3.23, 3.09, 2.89 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip1).
EXEMPLE 4 :
Synthèse du (2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodîum sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(2-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéιïdine-3-carboxylate de sodium (3S ,4R, 5R)) (Composé n°23 )
Figure imgf000075_0002
(seldesodium)
23
De la même manière a été préparé le composé 23.
RMN 1H (D2O) δ 5.26 (d, H-1 GIc"), 5.14 (d, H-1 IdoUA1"), 5.09 (d, H-1 Glciv).
EXEMPLE 5 :
Synthèse du (2,4-di-O-sodîum sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- g!ucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N-sod!um sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°27) (sel de sodium)
Figure imgf000076_0001
27
Le composé 26 de la PREPARATION 4 (7.0 mg, 3.28 μmol) est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 27 (2.9 mg, 55%).
RMN 1H (D2O) δ 5.53 (d, H-1 GIc"), 5.44 (d, H-1 Glclv), 5.23 (d, H-1 IdoUA1"), 5.21 (d, H-1 ldoUAv), 3.09, 3.07, 2.58, 2.44 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip1).
EXEMPLE 6 :
Synthèse du (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(3-O-méthyl-2,6-di-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-
(1-4)-(3-O-méthyI-2-O-sodium suIfόnato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-
(1-4)-(3-O-méthyl-2,6-dî-O-sodium sulfonato-α-D-gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-
(hydroxy)-4-oxypipérldine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°47)
(sel de sodium)
Figure imgf000076_0002
47
Le composé 46 de la PREPARATION 6 est traité selon la méthode 5 pour donner, après purification, le composé 47 (5 mg, 57%). Spectre de masse (ESI) m/z 1650.9 [(M - Na + H)"].
EXEMPLE 7 :
Synthèse du (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodîum)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium su(fonato-α-D-glucopyranosyI)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 69)
Figure imgf000077_0001
69 sel de sodium
Le composé brut 68 de la PREPARATION 9, est traité selon la METHODE 5 pour fournir 69 (3.8 mg, 25%, deux étapes).
RMN 1H (D2O) δ 5.62 (d, H-1 Glclv), 5.52 (d, H-1 GIc"), 5.21 (d, H-1 ldoUAv), 4.99 (d, H-1 IdollA1").
EXEMPLE 8 :
Synthèse du (4-O-propyl-2-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium su!fonato-α-D-glucopyranosyI)-(1-4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n°74)
Figure imgf000077_0002
74 sel de sodium
Le composé brut 73 de la PREPARATION 10, est traité selon la METHODE 5 pour fournir 74 (6.0 mg, 62%, deux étapes).
RMN 1H (D2O) δ 5.68 (d, H-1 Glclv), 5.55 (d, H-1 GIc"), 5.21 (d, H-1 ldoUAv), 5.18 (d, H-1 IdoUA1"). EXEMPLE 9 :
Synthèse du méthyl (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-îdopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium suIfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-hydroxy-4-oxypipéridin-1 -yl-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R))-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-methyl-3,6- di-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-O-sodium sulfonato-α-L-îdopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (composé n° 90)
Figure imgf000078_0001
90 sel de sodium
A une solution du composé 89 (24 mg, 26.9 μmol) de la PREPARATION 11 , et du composé 22 (61 mg, 1.9 équivalent molaire) de l'EXEMPLE 3 dans du tampon phosphate (pH 7) est ajouté, à O 0C, du cyanoborohydrure de sodium (4.4 mg, 2.4 molequiv). Après 8h d'agitation à O 0C, le milieu réactionnel est placé à température ambiante pendant 16h, puis purifié successivement sur une colonne de gel Sephadex® G-25 éluée par du chlorure de sodium 0.2 M suivi de la même colonne Sephadex® G-25 éluée à l'eau pour donner le composé 90 (17 mg, 31%). Spectre de masse (ESI) m/z 2029.3 [(M + H - Na)"].
EXEMPLE 10 :
Synthèse du méthyl (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-Jdopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-hydroxy-4-oxypipéridin-1-yl~3-carboxyIate de sodium (3S, 4R, 5R))-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-methyl-6-0- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-0-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (composé n° 91)
Figure imgf000079_0001
91 sel de sodium
De la même manière a été préparé le composé 91. Spectre de masse (ESI) m/z 1927.1 [(M + H - Na)'].
EXEMPLE 11 :
Synthèse du méthyl (5-hydroxy-4-oxypipéridin-1-yl-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R))-(1-4)-(2-N-sodium sulfonato-2,4-didésoxy-4-methyl-3,6-di-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(sodium 2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate)-(1-4)-(2-N-sodium suIfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside) (composé n° 92)
Figure imgf000079_0002
92 sel de sodium
De la même manière a été préparé le composé 92. Spectre de masse (ES!) m/z 1321.1 [(M + H - Na)"].
EXEMPLE 12 :
Préparation du (2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- gIucopyranosyl)-(1-4)-(5-hydroxy-4-oxypipéridin-1-méthyl-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 98)
Figure imgf000079_0003
98 sel de sodium Le composé 97 de la PREPARATION 12 (20 mg, 21.3 μmol), est traité selon la METHODE 5 dans un mélange 3:1 :1 méthanol - acide acétique - eau sous courant d'hydrogène pour conduire au composé 98 (6.0 mg, 57%). Spectre de masse (ESI) m/z 456.8 [(M - H)I
EXEMPLE 13 :
Synthèse du (2,4-di-O-sodium suIfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D- gIucopyranosyl)-(1-4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium suIfonato-α-D- glucopyranosyI)-(1-4)-(5-(hydroxy)-3-hydroxyméthyI-4-oxypipéridine-(3R, 4R, 5R)) (composé n° 123)
Figure imgf000080_0001
l£-° sel de sodium
Le composé 104 (41 mg, 19 μmol) est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 123 (10.7 mg, 38%).
RMN 1H (D2O) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), 5.20 (d, H-1 IdoUA1"), 5.17 (d, H-1 ldoUAv),
5.15 (d, H-1 Glcιv), 3.21 , 3.19, 2.68, 2.59 (4m, 4H, H-2, H-2\ H-6, H-61 pip1).
EXEMPLE 14 :
Synthèse du (4-O-phénylpropyI-2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium suIfonato-α-D-glucopyranosyI)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)) (composé n° 124)
Figure imgf000081_0001
124
sel de sodium
Le composé 122 est traité selon la méthode 5 pour conduire au composé 124. RMN 1H (D2O) δ 5.28 (d, H-1 GIc"), "5.21 (d, H-1 ldoUAv), 5.16 (d, H-1 IdoUA1"), 5.16 (d, H-1 Glcιv), 3.23, 3.20, 2.93, 2.75 (4m, 4H, H-2, H-21, H-6, H-61 pip').

Claims

REVENDICATIONS
1. Composés de formule générale (I)
Figure imgf000082_0001
(I)
dans laquelle :
R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(Ci-C5)alkyle ou un radical -O-aralkyle ;
Z représente un radical COO' ou un radical hydroxyle
X représente un radical hydroxyle ou une unité saccharidique de formule A :
Figure imgf000082_0002
dans laquelle :
— R1 représente un atome d'oxygène, permettant à A de se lier à l'unité azasucre ou à une autre unité saccharidique, — R2 représente un radical -NH2, un radial -NHCO(CrC5)alkyle, un radical
-NHCOaryle, un radical -NHSO3 ", un radical hydroxyle, un radical
-O-(C-rC5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou un radical -OSO3 ",
— R3 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical
-O-(Ci-C5)alkyle ou un radical O-aralkyle, — R4 représente un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -0-(C1-
C5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule
B :
Figure imgf000083_0001
dans laquelle :
— R6 représente un atome d'oxygène, permettant à B de se lier à une autre unité saccharidique de formule A : — R7 et R8 ont la même définition que R3 tel que défini précédemment,
— R9 représente un groupe hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(CrC5)alkyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule A telle que définie précédemment, — R5 a la même définition que R3 tel que défini précédemment ;
Y représente un atome d'hydrogène, un radical (C1-C5)alkyle ou une unité saccharidique de formule D
Figure imgf000083_0002
dans laquelle : — R10, R12 et Ri3 ont respectivement les mêmes définitions que R5, R3 et
R2 tels que définis précédemment,
— Rn représente :
• un radical (CrC3)alkylène permettant à D de se greffer sur l'unité azasucre ou • un atome d'oxygène permettant à D de se greffer sur une autre unité saccharidique,
— R-I4 représente un radical -O-(CrC5)alkyle ou un radical de formule -0-E dans laquelle E représente un radical de formule :
Figure imgf000083_0003
dans laquelle : — R15 représente un radical -O-(CrC5)aIkyIe, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule D dans laquelle Ri1 représente un atome d'oxygène,
— Rie et R17 ont la même définition que R3 tel que défini précédemment, à la condition toutefois que lorsque X et R représentent chacun un radical hydroxyle, Y ne représente pas un atome d'hydrogène, et étant entendu que le nombre d'unités saccharidiques comportées par le composé de formule (I) est compris entre 1 et 10, sous forme libre ou sous forme de sels formés avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvates ou d'hydrates.
2. Composés selon la revendication 1 de formule générale (I) :
Figure imgf000084_0001
(i)
dans laquelle :
R représente un atome d'hydrogène, un radical hydroxyle, un radical -OSO3 ", un radical -O-(CrC5)alkyle ou un radical -O-aralkyle ;
Z représente un radical COO' ou un radical hydroxyle
X représente un radical hydroxyle ou une unité saccharidique de formule A :
Figure imgf000084_0002
dans laquelle :
— R1 représente un atome d'oxygène, — R2 représente un radical -NHCOCH3, un radical -NHSO3 ", un radical -OSO3-,
— R3 représente un radical hydroxyle ou un radical -O-(CrC5)alkyle,
— R4 représente un radical hydroxyle, un radical -O-aralkyle ou une unité saccharidique de formule B :
Figure imgf000085_0001
dans laquelle :
— R6 représente un atome d'oxygène, — R7 représente un radical -OSO3 ",
— R8 représente un radical hydroxyle, un radical -O-(Ci-C5)alkyle ou un radical -O-aralkyle,
— Rg représente un radical -OSO3 ", un radical -O-aralkyle, un radical -O-(CrC5)alkyle ou une unité saccharidique de formule A telle que définie précédemment,
— R5 représente un radical -OSO3 " ;
Y représente un atome d'hydrogène ou une unité saccharidique de formule D :
Figure imgf000085_0002
dans laquelle : — R10 a la même définition que R5 tel que défini précédemment,
— R12 représente un radical hydroxyle ou un radical -OSO3 ",
— R13 représente un radical -NHSO3 ",
— R-i 1 représente un radical méthylène lié à l'unité azasucre ou un atome d'oxygène lié à E, — R14 un radical -OCH3 ou un radical de formule -O-E dans laquelle E représente un radical de formule :
Figure imgf000085_0003
dans laquelle :
— Ri5 représente une unité D dans laquelle R11 représente un atome d'oxygène permettant de lier E a D,
— R16 représente un radical -OSO3 ", — R17 représente un radical hydroxyle, étant entendu que le nombre d'unités saccharidiques comportées par le composé de formule générale (I) est compris entre 2 et 10, sous forme libres ou sous forme de sels avec une base ou un acide pharmaceutiquement acceptables ainsi que sous forme de solvats ou d'hydrates.
3. Composés de formule générale (I) selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 dans laquelle Y est un atome d'hydrogène, et Z un radical COO".
4. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, choisis parmi : • (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2- acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-0- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido- 2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4- oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)), • (2,4-di-O-sodium sulfonâto-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N- sodium sulfonato-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 - 4)-(2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-N- sodium sulfonato-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 - 4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)), • (3-O-méthyl-2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-0-méthyl-2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1 -4)-(3-O-méthyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(3-0-méthyl-2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S, 4R, 5R)), • (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6- di-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1 -4)-(2-O-sodium sulfonato-α- L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S1 4R, 5R)), • (4-0-propyl~2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-
4)-(2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2,6-di-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3- carboxylate de sodium (3S, 4R1 5R)).
• (2,4-di-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2- acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)-(2-0- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-
2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1-4)~(3-(hydroxy)-5- hydroxyméthyl-4-oxypipéridine-(3R, 4R, 5R))
• (4-0-phénylpropyl-2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 -4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium suif onato-α-D- glucopyranosyl)-(1-4)-(2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1-4)-(2-acétamido-2-désoxy-6-0-sodium sulfonato-α-D- glucopyranosyl)-(1 -4)-(5-(hydroxy)-4-oxypipéridine-3-carboxylate de sodium (3S1 4R, 5R))
5. Compositions pharmaceutiques contenant, en tant que principe actif, un composé de formule générale (I) selon l'une quelconque des revendications 1 à 4, éventuellement en association avec un ou plusieurs excipients inertes et appropriés.
6. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, utile dans le traitement de maladies dans lesquelles les héparanases sont impliquées.
7. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, utile dans le traitement des carcinomes ayant un degré de vascularisation important, tels que le carcinome de poumon, sein, prostate et œsophage, les cancers induisant des métastases tels que le cancer du colon et le cancer de l'estomac, des mélanomes, des gliomes, des lymphomes ou des leucémies.
8. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, utile dans le traitement de maladies cardiovasculaires telles que l'athérosclérose, la resténose post angioplastie, de maladies liées aux complications apparaissant suite à la pose de prothèse endovasculaires et/ou de pontages aorto-coronariens ou d'autres greffes vasculaires de l'hypertrophie cardiaque ou de complications vasculaires du diabète comme les rétinopathies diabétiques.
9. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, utile dans le traitement de maladies inflammatoires chroniques comme l'arthrite rhumatoïde ou les IBD.
10. Composition pharmaceutique selon la revendication 5, utile dans le traitement de la dégénérescence maculaire.
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