WO2011018587A2 - OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE - Google Patents

OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE Download PDF

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Definitions

  • the present invention relates to N-sulfated agonist oligosaccharides of the FGFs / FGFRs system, to their preparation and to their therapeutic application.
  • Angiogenesis is a process of generating new capillaries. When obstruction of a blood vessel, angiogenesis, associated with arteriogenesis (dilation of capillaries), improves revascularization of the obstructed area. It has been shown in vitro and in vivo that several growth factors, such as Fibroblast Growth Factors (FGFs), stimulate the process of neovascularization.
  • FGFs Fibroblast Growth Factors
  • FGF2 (or basic FGF) is an 18 kDa protein. FGF2 induces at the endothelial cells in culture their proliferation, their migration and the production of proteases. In vivo, FGF2 promotes neovascularization phenomena. FGF2 interacts with endothelial cells via two classes of receptors, high affinity receptors with tyrosine kinase activity (FGFRs) and low affinity heparan sulfate proteoglycan (HSPG) receptors.
  • FGFRs tyrosine kinase activity
  • HSPG heparan sulfate proteoglycan
  • tyrosine kinase receptor cell surface receptors associate as a dimer with a complex formed of two ligand molecules and a heparan sulfate molecule. The formation of this complex triggers a cascade of intracellular signals leading to the activation of proliferation and cell migration, two key processes involved in angiogenesis.
  • FGF2 and its receptors represent highly relevant targets for therapies aimed at activating or inhibiting angiogenesis processes.
  • Synthetic oligosaccharides have also been studied in interactions with FGF receptors and showed their inhibitory effects on the binding of FGF-2 to its receptor on smooth muscle cells, with an IC50 of 16 ⁇ g / ml. mL, as well as an inhibition of the proliferation of these cells induced by FGF-2, with an IC50 of approximately 23 ⁇ g / mL (Tabeur et al., Bioorg. & Med. Chem., 1999, 7, 2003-2012, C. Noti et al., Chem Eur Eur, 2006, 12, 8664-8686).
  • the subject of the present invention is new oligosaccharide compounds corresponding to formula (I):
  • Ri represents a group -OSO 3 " or hydroxyl group
  • R 2 represents either an -O-alkyl group or a monosaccharide of formula (II), where R represents an alkyl group:
  • R 3 represents a disaccharide of formula
  • R 4 represents an -OSO 3 " group or a hydroxyl group
  • R 5 represents a disaccharide of formula (IV): in which :
  • - R 6 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 7 represents either a hydroxyl group or a disaccharide of formula (VI)
  • R 8 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 9 represents either a hydroxyl group, an -O-alkyl group or a disaccharide of formula (VII):
  • R 1 represents a -O-alkyl group
  • R 9 represents a hydroxyl group or a -O-alkyl group when R 2 represents a monosaccharide of formula (II) as defined above;
  • R 7 represents a disaccharide of formula (VI) as defined above when R 2 represents a -O-alkyl group; and
  • R 1 , R 4 , R 6 and R 8 do not simultaneously represent hydroxyl groups.
  • alkyl group means a saturated linear or branched aliphatic group comprising from 1 to 4 carbon atoms.
  • groups methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl and tert-butyl are examples of groups methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl and tert-butyl.
  • the alkyl groups advantageously represent methyl groups, except for the substituents R 9 and R 10 , in which the alkyl radicals O-alkyl groups advantageously represent propyl groups.
  • the compounds according to the invention are synthetic oligosaccharides, that is to say that they are compounds obtained by total synthesis from intermediate synthons, as will be described in detail in the following. In this respect, they differ from oligosaccharides obtained by depolymerization or isolation from complex mixtures of polysaccharides, of heparin or heparin type of low molecular weight.
  • the compounds according to the invention have a well-defined structure resulting from their chemical synthesis and are in the form of pure oligosaccharides, that is to say free of other oligosaccharide species.
  • the invention encompasses compounds of formula (I) in acid form or in the form of any of their pharmaceutically acceptable salts.
  • the -COO " and -SO 3 " functions are respectively in the form -COOH and -SO 3 H.
  • salt of the compounds of the invention is meant a compound in which one or more of -COO - and / or -SO 3 - functions are ionically bonded to a pharmaceutically acceptable cation.
  • the preferred salts according to the invention are those whose cation is chosen from alkali metal cations, in particular the Na + cation.
  • the compounds of formula (I) according to the invention also include those in which one or more hydrogen or carbon atoms have been replaced by their radioactive isotope, for example tritium or carbon 14 C.
  • radioactive isotope for example tritium or carbon 14 C.
  • the monosaccharide of formula (II) is bonded to the disaccharide unit represented in formula (I) by the oxygen atom located in position 4 of its uronic acid unit
  • the disaccharide of formula (III) is linked to the disaccharide unit represented in formula (I) by the oxygen atom located in position 1 of its glucosamine unit
  • glucosamine unit is understood to mean the monosaccharide unit of the following formula:
  • the other type of saccharide unit present in the compounds according to the invention is a uronic acid, more specifically an iduronic acid, corresponding to the following formula:
  • the compounds of formula (I) according to the invention may also be represented according to formula (I ') as follows, in which the iduronic units and the glucosamine units are successive and in which R 1 , R 2 , R 4 , R ⁇ and R 7 are as defined previously:
  • the oligosaccharides according to the invention may therefore comprise from 7 to 10 saccharide units.
  • the compounds of formula (I) / (I ') objects of the invention mention may be made of those in which:
  • R 1 , R 3 , R 4 , R 5 and R 6 are as defined above,
  • R 2 represents a monosaccharide of formula (II) as defined above, and
  • R 7 represents a hydroxyl group.
  • Such compounds are heptasaccharides. They correspond to the formula (1-1) below, in which R 7 represents a hydroxyl group and R, R 1 , R 4 and R 6 are as defined above, and are in acid form or in the form of any of their pharmaceutically acceptable salts.
  • Such compounds are octasaccharides or decasaccharides. They correspond to formula (I-2) below, in which R 1 , R 4 , R 6 , R 8 and R 9 are as defined above and R 2 represents a group -O-alkyl, and are present in acid form or in the form of any of their pharmaceutically acceptable salts.
  • R 2 represents a group -O-alkyl
  • R 7 represents a disaccharide of formula (VI) as defined above, in which R 9 represents a disaccharide of formula (VII) as defined above.
  • Such compounds are decasaccharides. They correspond to formula (I-3) below, in which R 1 , R 4 , R 6 , R 8 and R 10 are as defined above, and are in acid form or in the form of one any of their pharmaceutically acceptable salts.
  • formula (I) which are subjects of the invention, there may be mentioned a subgroup of compounds in which:
  • R 2 represents a group -O-alkyl
  • R 7 represents a disaccharide of formula (VI) as defined above, in which R 9 represents either a hydroxyl group or an -O-alkyl group.
  • Such compounds are octasaccharides and correspond to the formula (1-2) above, in which R 1, R 4 , R ⁇ and R 8 are as defined above, R 2 represents a -O-alkyl group and R 9 represents either a hydroxyl group or a -O-alkyl group.
  • the octasaccharides according to the invention are such that R 9 represents an -O-alkyl group.
  • Other subgroups of compounds according to the invention may have several of the characteristics stated above for each of the subgroups defined above.
  • the invention particularly relates to the following oligosaccharides:
  • the process for preparing the compounds according to the invention uses di- or oligosaccharide base synthons prepared as previously reported in the literature.
  • These synthons are then coupled to each other so as to provide a fully protected equivalent of a compound according to the invention.
  • This protected equivalent is then converted into a compound according to the invention.
  • a "donor" di- or oligosaccharide activated on its anomeric carbon, reacts with a "acceptor” di- or oligosaccharide having a free hydroxyl.
  • the present invention thus relates to a process for the preparation of the compounds of formula (I) / (I ') characterized in that: in a first phase, a completely protected equivalent of the desired compound (I) is synthesized,
  • the nature and the charge profile of the desired final compound determine the nature of the chemical entities used in the various steps of the synthesis, according to the rules well known to those skilled in the art.
  • the compounds of the invention can naturally be prepared using various strategies known to those skilled in the art of oligosaccharide synthesis. The process described above is the preferred method of the invention. However, the compounds of formula (I) / (I ') can be prepared by other well known methods of the chemistry of sugars, described for example in "Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural products", PM Collins and RJ. Ferrier, J. Wiley & Sons (1995) and by GJ. Boons in Tetrahedron (1996), 52, 1095-1 121.
  • the protective groups used in the process for the preparation of the compounds of formula (I) / (I ') are those which make it possible, on the one hand, to protect a reactive function such as a hydroxyl or an amine during a synthesis and, d on the other hand, to regenerate the intact reactive function at the end of synthesis.
  • the protective groups commonly used in the chemistry of sugars, as described for example in "Protective Groups in Organic Synthesis", Green et al., 3 rd Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York).
  • the groups Protectives are selected from, for example, acetyl, halomethyl, benzoyl, levulinyl, benzyl, allyl, tert-butyldiphenylsilyl (tBDPS).
  • Activator groups may also be used; these are those conventionally used in sugar chemistry, for example according to GJ. Boons, Tetrahedron (1996), 52, 1095-1121. These activating groups are chosen for example from imidates and thioglycosides.
  • the process described above makes it possible to obtain the compounds of the invention in the form of salts, advantageously in the form of the sodium salt.
  • the compounds of the invention in the form of salts can be contacted with a cation exchange resin in acid form.
  • the compounds of the invention in the form of acids can then be neutralized with a base to obtain the desired salt.
  • any mineral or organic base giving, with the compounds of formula (I) / (I') pharmaceutically acceptable salts may be used.
  • the subject of the invention is also the compounds of formula 2OA below, in which Pg, Pg 'and Pg ", which are identical or different from one another, represent protective groups:
  • Such compounds are useful as synthesis intermediates for the compounds of formula (I) / (I ').
  • the subject of the invention is the compound 2OA in which Pg, Pg 'and Pg "respectively represent benzyl, allyl and acetyl groups,
  • Pg, Pg 'and Pg "respectively represent benzyl, allyl and acetyl groups
  • Rf Retardation factor (retention time measured on the TLC compared to the front of the migration solvent)
  • reaction medium is stirred for 2 hours at room temperature. After concentration, the residue is purified by flash column chromatography on silica gel (cyclohexane / ethyl acetate 5/6 v / v) to give 1.84 g of compound 23.
  • the reaction mixture is cooled to -20 ° C. and a 1M solution of tert-butyldimethylsilyl triflate in dichloromethane (250 ⁇ L) is added to the reaction medium. After 10 minutes, the reaction medium is neutralized by addition of solid sodium hydrogen carbonate.
  • the mixture containing hexasaccharide and octasaccharide 33 is treated according to the above conditions to give after size exclusion chromatography.
  • reaction medium After 1 hour at 0 ° C. and then 4 hours at room temperature, the reaction medium is neutralized with acetic acid and then left at -20 ° C. for 16 hours.
  • the reaction mixture was loaded onto a gel Sephadex ® LH20 eluted with methanol / water 4/1 v / v to give the compound 36 (38.9 mg).
  • a solution of compound 36 (40 mg, 10.8 ⁇ mol) in a 6/9 v / v tert-butanol / water mixture (1 mL) is treated under hydrogen pressure (11 bar) in the presence 10% palladium on carbon (80 mg, 2 x quantity of the compound to be reduced) at 40 ° C. for 4 hours. After filtration (Millipore ® filter LSWP 5 .mu.m), the solution is deposited on a resin column Chelex ® 100 (1 ml_) eluted with water and then concentrated to dryness. The crude compound thus obtained (27 mg) is used as such in the next step.
  • reaction mixture is cooled to -20 ° C. and a 1M solution of tert-butyldimethylsilyl triflate in dichloromethane (181 ⁇ L) is added. After 15 minutes, the middle The reaction is neutralized by addition of solid sodium hydrogen carbonate. After filtration and concentration, the residue obtained is purified by chromatography on a size exclusion column (Sephadex ® LH20, 190 x 3.2 cm, dichloromethane / ethanol 1/1 v / v) followed by chromatography on a gel column silica (toluene / ethyl acetate 1/1 v / v) to give 1.63 g of compound 42.
  • a size exclusion column (Sephadex ® LH20, 190 x 3.2 cm, dichloromethane / ethanol 1/1 v / v)
  • the resulting residue is dissolved in ⁇ -dimethylformanide (210 mL), and potassium hydrogen carbonate (17 g) and methyl iodide (21 mL) are added.
  • the reaction mixture is stirred at ambient temperature for 16 hours, then concentrated under vacuum.
  • the residue is diluted with ethyl acetate and then washed with water, with a saturated aqueous solution of sodium thiosulfate, with a saturated aqueous sodium chloride solution, then dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated.
  • the compound obtained is engaged in the next step without purification.
  • reaction mixture is cooled to -20 ° C. and a 1M solution of tert-butyldimethylsilyl triflate in dichloromethane (27 ⁇ l) is added. After 1 hour, the reaction medium is neutralized by addition of solid sodium hydrogen carbonate. After filtration and concentration, the residue obtained is purified by size exclusion column chromatography (Sephadex ® LH20, 90 ⁇ 3 cm, dichloromethane / ethanol 1/1 v / v) followed by silica gel column chromatography. (toluene / ethyl acetate 2/1 v / v) to give compound 51 (212 mg).
  • the organic phase is washed successively with 10% aqueous potassium hydrogen sulfate solution, with water, with saturated sodium hydrogencarbonate solution and then with water, dried over sodium sulphate, filtered and then evaporated. dried up.
  • the residue is purified by flash chromatography on a silica gel column (cyclohexane / ethyl acetate 1/3) to give 57 (22.6 g).
  • Rf 0.37, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 1/3 v / v
  • Rf 0.23, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 1/3 v / v Methyl (methyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl-4-O-levulinoyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) -3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-fe / f-Butyldiphenylsilyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranoside (59)
  • Rf 0.42, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 2/1 v / v Methyl (methyl 2-O-acetyl-3-O-benzyl- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - 3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-tert-butyldiphenylsilyl-2-deoxy- ⁇ -D-glucopyranoside (60)
  • Rf 0.40, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 2/1 v / v
  • Rf 0.34, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 2/1
  • Rf 0.46, silica gel, toluene / ethyl acetate 4/1 v / v
  • Rf 0.37, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 2/1 v / v
  • the resulting residue is dissolved in ⁇ -dimethylformanide (210 mL), and potassium hydrogen carbonate (17 g) and methyl iodide (21 mL) are added.
  • the reaction mixture is stirred at ambient temperature for 16 hours and then concentrated in vacuo.
  • the residue is diluted with ethyl acetate and then washed with water, with a saturated aqueous solution of sodium thiosulfate, with a saturated aqueous sodium chloride solution, then dried (Na 2 SO 4 ), filtered and concentrated.
  • the compound obtained is engaged in the next step without purification.
  • Rf 0.38, silica gel, cyclohexane / ethyl acetate 3/1 v / v
  • Diagram 17 Preparation of octasaccharides 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86 and 87
  • reaction mixture is deposited on a column of Sephadex ® LH20 gel (120 ⁇ 3 cm) eluted with a 1/1 v / v dichloromethane / ethanol mixture followed by flash chromatography on a column of silica gel (toluene / acetone 100 / 0 ⁇ 85/15 v / v) to give compound 100 (193.2 mg).
  • the compound 103 (17.3 mg, 5.7 ⁇ mol) is treated according to the same procedure as that described for the preparation of the compound 91.
  • the crude compound 104 thus obtained, is again saponified.
  • a solution of the crude compound 104 in a 1/1 v / v tetrahydrofuran / methanol mixture (506 ⁇ l) is added, at 0 ° C., a 0.7 M solution of lithium hydroxide in water (202 ⁇ l, qs to have a final concentration of 0.2 M).
  • reaction mixture is chromatographed on a size exclusion column (Sephadex ® G 25 Fine, 95 x 2 cm, 0.2 M NaCl and then Sephadex ® G 25 Fine, 95 x 2 cm, water) to give compound 104 (6.5 mg).
  • Methyl (methyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triethylammonium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-azido-3-O-benzyl-2-deoxy-6) O-triethylammonium sulfonato- ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1 ⁇ 4) - (methyl-3-O-benzyl-2-O-triethylammonium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2) azido-3-O-benzyl-6-O-te / f-
  • the reaction mixture is filtered (Millipore ® filter LSWP 5 .mu.m) and concentrated to dryness.
  • the residue is loaded onto a gel Sephadex ® G25- thin (95 x 2 cm) eluted with an aqueous solution of NaCl 0.2 M.
  • the fractions containing the expected compound are combined and loaded onto a gel Sephadex ® G-25-f (95 x 2 cm) eluted with water
  • the resulting crude product 111 (14.7 mg) was used as such in the next step.
  • EXAMPLE 1 sodium methyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) ) - ⁇ -D-qlucopyranosyl) - (1 ⁇ 4H (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2) sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-qlucopyranosyl- (1 ⁇ 4) -9- (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4)
  • EXAMPLE 2 sodium methyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) ) - ⁇ -D-qlucopyranosyl) - (1 ⁇ 4H (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4H2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-qlucopyranosyl- (1 ⁇ 4) i3- (2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1 ⁇ 4) -2-deoxy
  • EXAMPLE 5 Sodium methyl (2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-glucopyranosyl) (4) - (2) Sodium-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate H1 ⁇ 4H2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-glucopyranosyl-4H2-O-sodium sulfonate- ⁇ -L-idopyranosyluronate of sodiumH1 ⁇ 4H2-deoxy-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-
  • EXAMPLE 6 Sodium methyl (2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D- glucopyranosyl) - (1 ⁇ 4) - (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1 ⁇ 4) - (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-2-sodium) - ⁇ -L-id
  • EXAMPLE 7 Sodium methyl (2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D- glucopyranosyl) - (1 ⁇ 4) - (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D-glucopyranosyl) - (1 ⁇ 4) - (sodium 2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4H2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-s
  • EXAMPLE 8 sodium methyl (2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) - (1 ⁇ 4) - (2-deoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino) - ⁇ -D- sodium iucopyranosylHd ⁇ 4H2-O-sodium sulfonato- ⁇ -L-idopyranosyluronate) -
  • the compounds according to the invention have been the subject of pharmacological tests for determining their agonist effect of FGF receptors and their activity on angiogenesis, as well as on post-ischemic revascularization.
  • the in vitro angiogenesis model corresponds to a rearrangement of human venous endothelial cells on a biological matrix.
  • the matrix is formed by dispensing into each well of a 96 well plate (Becton Dickinson 353872), 60 .mu.l of Matrigel ® diluted 1/3 (Growth Factor Reduced Matrigel ®: Becton Dickinson 356230) in collagen (Rat Tail collagen, type I: Becton Dickinson 354249).
  • the biological matrix cures after 1 hour at 37 ° C.
  • Human venous endothelial cells (HUVEC ref: C-12200 - Promocell) seeded on the biological matrix at 7800 cells / well in 120 ⁇ l of EBM ® medium (Endothelial Basal Medium, Lonza C3121) + 2% FCS (fetal calf serum - Lonza) + hEGF (Recombinant Human Epidermal Growth Factor - Lonza) 10 ⁇ g / ml.
  • the cells are stimulated with FGF2 (R & D Systems / 234-FSE-50) 10 ng / ml or with the products of the invention for 18 hours at 37 ° C in the presence of 5% CO 2 .
  • FGF2 R & D Systems / 234-FSE-50
  • the compounds of the invention have a specific activity of between 10 -6 M and 10 -12 M.
  • Compounds Nos. 1 and 7 are active at 10 -6 M.
  • octasaccharide No. 8 according to the invention, heptasaccharide No. 3 and decasaccharide No. 2 are better activators of FGF-2 than their hexasaccharide analog (compound described by C. Tabeur et al in Bioorg & Med Chem, 1999, 7, 2003-2012).
  • This model is an adaptation of the model described by Andrade et al.
  • Animals (white mice BALB / c inbred J) are anesthetized with Xylazine mixture (Rompun ®, 10 mg / kg) / Ketamine (Imalgene ® 1000, 100 mg / kg) intraperitoneally. The back of the animal is shaved and disinfected with Hexomedine ® . A pocket of air is created subcutaneously on the back of the mouse by injecting 5 ml of sterile air. An incision of about 2 cm, on the upper back of the animal is performed to introduce a sterile cellulose implant (disc 1 cm in diameter, 2 mm thick, Cellspon ® ref 0501) impregnated with 50 ⁇ l of sterile solution containing the product to be tested.
  • mice can receive in the implant the product by an injection through the skin (50 ⁇ l / implant / day) under gas anesthesia (Isoflurane 5% (Aerrane ® , Baxter)) .
  • mice Seven days after laying the sponge, the mice are sacrificed by a lethal dose of Pentobarbital Sodium (CEVA Animal Health) administered intraperitoneally. The skin is then cut, about 1 cm around the sponge avoiding the scar to clear the skin and the sponge. The sponge is then cut into several pieces and placed in a Ribolyser ® tube containing 1 ml of lysis buffer (CeII Death Detection ELISA, Roche). The tubes are shaken 4 consecutive times, for 20 seconds, force 4, with the cell grinder (FastPrep ® FP 120). The tubes are then centrifuged for 10 minutes at 2000 g at 20 ° C. and the supernatants are frozen at
  • the tubes are again centrifuged after thawing and the hemoglobin concentration is measured with Drabkin's reagent (Sigma, volume to volume) by spectrophotometer reading at 405 nm against a standard range of bovine hemoglobin (Sigma ).
  • the concentration of hemoglobin in each sample is expressed in mg / ml according to the polynomial regression performed from the range. The results are expressed in mean value ( ⁇ sem) for each group. Differences between the groups are tested with ANOVA followed by a Dunnett test on the square root of the values.
  • the compounds of the invention have demonstrated a specific activity of between 5 and 45 ng / site.
  • compounds 1 and 7 are active at a concentration of 45 ng / site.
  • the compounds according to the invention have FGF receptor agonist activity and an activity on angiogenesis, as well as on post-ischemic revascularization. These compounds can therefore be used for the preparation of medicaments, especially medicaments useful for the treatment of diseases requiring activation of FGF receptors or drugs useful in pathologies requiring activation of angiogenesis and post-ischemic revascularization.
  • the invention therefore relates to medicaments which comprise a compound of formula (I) / (I ') or compound 10, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. More generally, the subject of the invention is medicaments which comprise a compound of formula (I):
  • - R 1 represents a group -OSO 3 " or hydroxyl group
  • R 2 represents either an -O-alkyl group or a monosaccharide of formula (II), where R represents an alkyl group:
  • R 3 represents a disaccharide of formula
  • R 4 represents an -OSO 3 " group or a hydroxyl group
  • R 5 represents a disaccharide of formula (IV):
  • R 6 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 7 represents either a hydroxyl group, a monosaccharide of formula (V) below, or a disaccharide of formula (VI):
  • R 8 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 9 represents either a hydroxyl group, an -O-alkyl group or a disaccharide of formula (VII):
  • R 1 represents a -O-alkyl group
  • R 9 represents a hydroxyl group or a -O-alkyl group when R 2 represents a monosaccharide of formula (II) as defined above;
  • R 7 represents a disaccharide of formula (VI) as defined above when R 2 represents a -O-alkyl group; and
  • R 1 , R 4 , R 6 and R 8 do not simultaneously represent hydroxyl groups.
  • Such compounds include those of formula (I) / (I ') defined above, as well as the heptasaccharide 10 defined above, described in patent application US 2006/0079483 A1.
  • ischemia cardiac ischemia, arterial ischemia of the lower limbs
  • diseases associated with a narrowing or obstruction of the arteries or arteritis the treatment of angina pectoris.
  • Ischemia is a decrease in the arterial circulation in an organ resulting in a decrease in the oxygen concentration in the injured tissues.
  • angiogenesis is the process of generating new capillaries from pre-existing vessels.
  • Arteriogenesis contributes to the development (increase in size and caliber) of collateral vessels around the ischemic or avascular zone.
  • FGF family and in particular FGF-2 has been most widely described (Post, MJ, Laham, R., Sellke, FW & Simons, M. Therapeutic angiogenesis in cardiology using protein formulations, Cardiovasc Res 49, 522-31, 2001).
  • FGF2 and its receptors represent highly relevant targets for therapies aimed at inducing the processes of angiogenesis and arteriogenesis (Khurana, R. & Simons, M. Insights from angiogenesis trials using fibroblast growth factor for advanced arteriosclerotic disease. Trends Cardiovasc Med 13, 1 16-22, 2003).
  • One of the applications of the compounds of the invention is post-ischemic treatment after occlusion at the cardiac or peripheral arteries.
  • cardiac ischemia one of the most promising clinical trials is a clinical trial in which FGF-2 was sequestered in microspheres of alginate in the presence of heparin (Laham, RJ et al. Local perivascular delivery of basic fibroblast growth factor in undergoing coronary bypass surgery patients: results of a phase I randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Circulation 100, 1865-71, 1999). These micro-spheres were implanted near the ischemic focus at the level of the myocardium. After 90 days, all FGF2-treated patients had no ischemic heart symptoms.
  • FGF2-mimicking compounds may be a therapy of choice for treating the consequences of cardiac ischemia.
  • Buerger's disease or thromboangiitis obliterans affects distal vascular structures and is characterized by distal arteritis of the legs with pain and ulceration.
  • induction of angiogenesis and vasculogenesis would be a therapy for this pathology.
  • the compounds of the present invention represent a therapy of choice for thromboangiitis obliterans.
  • Peripheral neuropathy is an axonal or demyelinating lesion of the motor and / or sensory peripheral nerve that causes desensitization of the distal limbs.
  • One of the major secondary complications of diabetes is the chronic development of peripheral neuropathy.
  • FGF2 induces axonal regeneration which could be a therapy of choice in the treatment of peripheral nerve injury and thus in peripheral neuropathy.
  • Basic fibroblast growth factor isoforms promote axonal elongation and branching of adult sensory neurons in vitro, Klimaschewski L, Nindl W, Feurle J, Kavakebi P, Kostron H. Neuroscience, 2004; 126 (2): 347-53). Because of the FGF receptor agonist activity, the compounds of said invention would be a treatment of choice in peripheral neuropathy in healthy or diabetic patients.
  • FGF2 is an activator of nerve cells during development. Recent results suggest that FGF2 would also be a pivotal factor in promoting neuronal regeneration in adults (Sapieha PS, Peltier M, Rendahl KG, WC Manning, Di Polo A., Fibroblast growth factor-2 gene delivery stimulates axon growth by adult retinal ganglion cells after acute optic nerve injury Mol CeII Neurosci 2003 Nov; 24 (3): 656-72.
  • the compounds of said invention would be a therapy of choice in the repair of post-operative nerve damage, in the repair of nerve deficits such as Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Alzheimer's disease. prion, neuronal degeneration in the alcoholic or in cases of dementia.
  • VEGF vascular smooth muscle cells
  • the vascular network is essential for tissue development and preservation. By promoting the delivery of nutrients, oxygen and cells, blood vessels help maintain the functional and structural integrity of tissues.
  • angiogenesis and vasculogenesis can preserve and perfuse tissues after ischemia.
  • Angiogenic growth factors such as VEGF and FGF2 thus promote revascularization for tissue regeneration.
  • the compounds presented in the invention could represent a treatment of choice in the treatment for the regeneration of muscles.
  • the processes of muscle regeneration on dystrophic or normal muscles depend on the supply of cytokines and angiogenic growth factors at the local level (Fibbi, G., D'Alessio, S., Pucci, M., Cerletti, M. & Dei Rosso, M. Growth factor-dependent proliferation and invasion of muscle satellite cells require the cell-associated fibrinolytic system, Biol Chem 383, 127-36, 2002). It has been proposed that the FGF system is a critical system for muscle regeneration, survival and proliferation of myoblasts (Neuhaus, P.
  • FGF fibroblast growth factor
  • Angiogenesis is an essential phenomenon during cutaneous healing.
  • the newly formed vessels provide the oxygen and nutrients needed for tissue repair.
  • scarring is a slow and difficult process with angiogenesis defects.
  • FGFS is one of the factors most involved in the processes of angiogenesis during the healing phase.
  • FGFs are highly over-regulated in dermal cells after a skin injury. By their FGF receptor agonist activities, the compounds of said invention would be a therapy of choice for the treatment of scarring in healthy or diabetic patients
  • the compounds of said invention represent a therapy of choice in improving the survival of the bioartificial pancreas graft in the diabetic patient and more generally in the improvement of graft revascularization. and therefore in the survival of grafts.
  • Retinitis pigmentosa is a pathology involving progressive degeneration of the retina characterized by degeneration of photoreceptors and obliteration of the retinal vessels.
  • Lahdenranta et al. (An anti-angiogenic state in mice and humans with retinal photoreceptor cell degeneration, Proc Natl Acad Sci USA 98, 10368-73, 2001) have proposed that angiogenic growth factors regulate neural coordination and associated retinal vascularization by functioning. simultaneously as survival factors of photo receptors and as regulator of endothelial cells.
  • Pre-eclampsia is a pathology of the placenta associated with a lack of vascularization (Sherer, DM & Abulafia, O. Angiogenesis during implantation, and placental and early embryonic development, Placenta 22, 1-13, 2001). These defects of vascularization would be due to a defect of angiogenesis and would cause disturbances in the placenta which could lead to the death of the fetus.
  • the compounds of the invention could be a treatment of choice to overcome a lack of angiogenesis in pre-eclamptic placentas.
  • VEGF vascular endothelial growth factor
  • FGF2 growth factors
  • the intrinsic signaling pathway is activated by mitochondria in response to stress such as DNA deprivation or damage
  • the extrinsic signaling pathway is induced by proapoptotic factor binding such as TNF- ⁇ or Fas.
  • VEGF and FGF2 are two endothelial cell survival factors (RoIe of Raf in Vascular Protection from Distinct Apoptotic Stimuli: A Alavi, JD Hood, R.
  • Acute Respiratory Distress Syndrome is characterized by cardiovascular and neuropsychiatric problems.
  • cardiovascular problems patients have significant vascular lesions and in particular an induction of apoptosis of endothelial cells high. Recently, Harnacher & al.
  • bronchoalveolar lavage fluids from ARDS patients exhibited pro-apoptotic activity against microvascular endothelial cells of the lungs (Tumor necrosis factor-alpha and angiostatin are mediators of endothelial cytotoxicity in bronchoalveolar washes of patients with acute respiratory distress syndrome Am J Respir Crit Care Med 2002 Sep 1; 166 (5): 651-6: Harnacher J, Lucas R, Lijnen HR, Buschke S, Dunant Y, Wendel A, Grau GE, Suter PM, Ricou B. ).
  • the products of the invention could present a treatment of choice in the vascular improvement of patients with vascular lesions and in particular patients with ARDS.
  • FGF7 or KGF
  • FGF18 Is Highly Expressed in Hair Follicles and Capable of Inducing Anagen from Telogen Hair Follicles Stage: Mitsuko Kawano, Akiko Komi-Kuramochi, Masahiro Asada, Masashi Suzuki, Junko Oki, Ju Jiang and Toru Imamura).
  • the compounds of said invention could present a treatment of choice for the repair and protection of hair follicles and in the protection and regulation of hair growth.
  • the present invention relates to pharmaceutical compositions comprising, as active principle, a compound according to the invention or a compound 10.
  • These pharmaceutical compositions contain an effective dose of at least one compound according to the invention or compound 10, or a pharmaceutically acceptable salt of said compound, as well as at least one pharmaceutically acceptable excipient.
  • Said excipients are chosen according to the pharmaceutical form and the desired mode of administration, from the usual excipients which are known to those skilled in the art.
  • the subject of the invention is a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising, as active principle, at least one compound of formula (I) in which:
  • Ri represents a group -OSO 3 " or hydroxyl group
  • R 2 represents either an -O-alkyl group or a monosaccharide of formula (II), where R represents an alkyl group:
  • R3 represents a disaccharide of formula
  • R 4 represents an -OSO 3 " group or a hydroxyl group
  • R 5 represents a disaccharide of formula (IV):
  • R 7 represents either a hydroxyl group, a monosaccharide of formula (V) below, or a disaccharide of formula (VI):
  • R 8 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 9 represents either a hydroxyl group, an -O-alkyl group or a disaccharide of formula (VII):
  • R 1 represents a -O-alkyl group
  • R 9 represents a hydroxyl group or a -O-alkyl group when R 2 represents a monosaccharide of formula (II) as defined above;
  • R 7 represents a disaccharide of formula (VI) as defined above when R 2 represents a -O-alkyl group; and
  • R 1 , R 4 , R 6 and R 8 do not simultaneously represent hydroxyl groups,
  • Such compounds include those of formula (I) / (I ') defined above, as well as the heptasaccharide 10 defined above, described in patent application US 2006/0079483 A1.
  • compositions of the present invention for oral, sublingual, subcutaneous, intramuscular, intravenous, topical, local, intratracheal, intranasal, transdermal or rectal the above active ingredient or its salt may be administered in unit dosage form, in admixture with conventional pharmaceutical excipients, to animals and humans for the prevention or control of treatment of the disorders or diseases above.
  • Suitable unit dosage forms include oral forms such as tablets, soft or hard capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions, sublingual, oral, intratracheal, intraocular, intranasal forms of administration by inhalation, topical, transdermal, subcutaneous, intramuscular or intravenous administration forms, rectal administration forms and implants.
  • oral forms such as tablets, soft or hard capsules, powders, granules and oral solutions or suspensions
  • sublingual, oral, intratracheal intraocular, intranasal forms of administration by inhalation
  • topical, transdermal, subcutaneous, intramuscular or intravenous administration forms rectal administration forms and implants.
  • the compounds according to the invention can be used in creams, gels, ointments or lotions.
  • Injectable administration forms are particularly advantageous, comprising conventionally the active compound dissolved in water for injection, in the presence of sodium chloride.
  • the unit dose of active compound must be adapted to the desired therapeutic effect; it may be for example between 0.1 and 100 mg of active ingredient.
  • the present invention also relates to the use of a compound according to the invention or a compound 10, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, for the treatment of the pathologies indicated above.
  • the subject of the invention is a compound of formula (I) in which:
  • - R 1 represents a group -OSO 3 " or hydroxyl group
  • R 2 represents either an -O-alkyl group or a monosaccharide of formula (II), where R represents an alkyl group:
  • R3 represents a disaccharide of formula
  • R 4 represents an -OSO 3 " group or a hydroxyl group
  • R 5 represents a disaccharide of formula (IV):
  • - R 6 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 7 represents either a hydroxyl group, a monosaccharide of formula (V) below, or a disaccharide of formula (VI):
  • R 8 represents a group -OSO 3 " or a hydroxyl group
  • R 9 represents either a hydroxyl group, an -O-alkyl group or a disaccharide of formula (VII):
  • R 10 is -O-alkyl
  • R 9 represents a hydroxyl group or a -O-alkyl group when R 2 represents a monosaccharide of formula (II) as defined above;
  • R 7 represents a disaccharide of formula (VI) as defined above when R 2 represents a -O-alkyl group; and
  • R 1 , R 4 , R 6 and R 8 do not simultaneously represent hydroxyl groups,
  • Such compounds include those of formula (I) / (I ') defined above, as well as the heptasaccharide 10 defined above, described in the patent application US 2006/0079483 A1.
  • the present invention also relates to a method of treatment of the pathologies indicated above which comprises the administration to a patient of an effective dose of a compound according to the invention or a compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof.
  • the drugs, pharmaceutical compositions and treatment method according to the invention may also relate to any one of the subgroups of compounds defined above.

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Abstract

Oligosaccharides N-sulfates activateurs des récepteurs des FGFs, répondant à la formule (I); dans laquelle; R1, R4, R6 et R8 représentent des groupes -OSO3 - ou hydroxyle, R2 représente un groupe -O-alkyle ou un monosaccharide de formule (II), R3 représente un disaccharide de formule (III), R5 représente un disaccharide de formule (IV), R7 représente un groupe hydroxyle ou un disaccharide de formule (Vl) : R9 représente un groupe hydroxyle ou -O-alkyle ou un disaccharide de formule (VII), où R10 représente un groupe -O-alkyle : Leur préparation et leur application en thérapeutique.

Description

OLIGOSACCHARIDES N-SULFATES ACTIVATEURS DES RECEPTEURS DES FGFs, LEUR PRÉPARATION ET LEUR APPLICATION EN THÉRAPEUTIQUE
La présente invention se rapporte à des oligosaccharides N-sulfatés agonistes du système FGFs/FGFRs, à leur préparation et à leur application en thérapeutique.
L'angiogenèse est un processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires. Lors de l'obstruction d'un vaisseau sanguin, l'angiogenèse, associée à l'artériogenèse (dilatation des capillaires), améliore la revascularisation de la zone obstruée. Il a été montré in vitro et in vivo que plusieurs facteurs de croissance, tels que les Fibroblast Growth Factors (FGFs), stimulent le processus de néovascularisation.
Les FGFs sont une famille de 23 membres. Le FGF2 (ou FGF basique) est une protéine de 18 kDa. Le FGF2 induit au niveau des cellules endotheliales en culture leur prolifération, leur migration et la production de protéases. In vivo, le FGF2 favorise les phénomènes de néovascularisation. Le FGF2 interagit avec les cellules endotheliales par l'intermédiaire de deux classes de récepteurs, les récepteurs de haute affinité à activité tyrosine kinase (FGFRs) et les récepteurs de basse affinité de type héparane sulfate protéoglycane (HSPG).
II est connu que les récepteurs de la surface cellulaire à activité tyrosine kinase s'associent sous forme de dimère à un complexe formé de deux molécules de ligand et à une molécule d'héparane sulfate. La formation de ce complexe permet de déclencher une cascade de signaux intracellulaires aboutissant à l'activation de la prolifération et de la migration cellulaire, deux processus clé impliqués dans l'angiogenèse.
Ainsi, le FGF2 et ses récepteurs représentent des cibles très pertinentes pour les thérapies visant à activer ou à inhiber les processus d'angiogenèse. Des oligosaccharides de synthèse ont également fait l'objet d'études d'interactions avec les récepteurs des FGFs et ont montré leurs effets inhibiteurs de la liaison du FGF-2 à son récepteur sur les cellules musculaires lisses, avec une IC50 de 16 μg/mL, ainsi qu'une inhibition de la prolifération de ces cellules induites par le FGF-2, avec une IC50 d'environ 23 μg/mL (C. Tabeur et al., Bioorg. & Med. Chem., 1999, 7, 2003-2012 ; C. Noti et al., Chem. Eur. J., 2006, 12, 8664-8686). Nous avons maintenant trouvé de nouveaux composés oligosaccharidiques de synthèse capables de faciliter la formation du complexe FGF/FGFRs et de favoriser ainsi la survie des cellules endotheliales in vitro et d'augmenter la formation de néovaisseaux in vitro et in vivo.
La présente invention a pour objet de nouveaux composés oligosaccharidiques répondant à la formule (I) :
Figure imgf000004_0001
dans laquelle :
- Ri représente un groupe -OSO3 " ou groupe hydroxyle,
- R2 représente soit un groupe -O-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle :
Figure imgf000004_0002
- R3 représente un disaccharide de formule
Figure imgf000004_0003
dans laquelle :
- R4 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R5 représente un disaccharide de formule (IV) :
Figure imgf000005_0001
dans laquelle :
- R6 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un disaccharide de formule (Vl)
Figure imgf000005_0002
OSO, dans laquelle :
- R8 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) :
Figure imgf000005_0003
dans laquelle Ri0 représente un groupe -O-alkyle,
à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -O-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -O-alkyle ; et R1, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles.
Dans le cadre de la présente invention, et sauf mention différente dans le texte, on entend par « groupe alkyle » un groupe aliphatique saturé linéaire ou ramifié, comprenant de 1 à 4 atomes de carbone. A titre d'exemples, on peut citer les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle et te/f-butyle. Dans les composés selon l'invention, y compris dans chacun des sous-groupes de composés qui seront définis dans ce qui suit, les groupes alkyles représentent avantageusement des groupes méthyles, sauf pour les substituants R9 et R10, dans lesquels les radicaux alkyles des groupes -O-alkyles représentent avantageusement des groupes propyles.
Les composés selon l'invention sont des oligosaccharides de synthèse, c'est-à- dire qu'il s'agit de composés obtenus par synthèse totale à partir de synthons intermédiaires, comme cela sera décrit en détail dans ce qui suit. A ce titre ils diffèrent d'oligosaccharides obtenus par dépolymérisation ou isolement à partir de mélanges complexes de polysaccharides, de type héparines ou héparines de bas poids moléculaires. Notamment, les composés selon l'invention présentent une structure bien déterminée résultant de leur synthèse chimique et se présentent sous forme d'oligosaccharides purs, c'est-à-dire exempts d'autres espèces oligosaccharidiques.
L'invention englobe les composés de formule (I) sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables. Dans la forme acide, les fonctions -COO" et -SO3 " sont respectivement sous forme -COOH et -SO3H.
On entend par sel pharmaceutiquement acceptable des composés de l'invention, un composé dans lequel une ou plusieurs des fonctions -COO" ou/et -SO3 " sont liées de façon ionique à un cation pharmaceutiquement acceptable. Les sels préférés selon l'invention sont ceux dont le cation est choisi parmi les cations des métaux alcalins, notamment le cation Na+.
Les composés de la formule (I) selon l'invention comprennent également ceux dans lesquels un ou plusieurs atomes d'hydrogène ou de carbone ont été remplacés par leur isotope radioactif, par exemple le tritium ou le carbone 14C. De tels composés marqués sont utiles dans les travaux de recherche, de métabolisme ou de pharmacocinétique, en tant que ligands dans les essais biochimiques.
Dans la formule (I) des composés selon la présente invention, il est entendu que :
- le monosaccharide de formule (II) est lié à l'unité disaccharidique représentée dans la formule (I) par l'atome d'oxygène situé en position 4 de son unité acide uronique, - le disaccharide de formule (III) est lié à l'unité disaccharidique représentée dans la formule (I) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine,
- de même, le disaccharide de formule (IV) est lié au disaccharide de formule
(III) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine,
- de même, le disaccharide de formule (Vl) est lié au disaccharide de formule
(IV) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine,
- de même, le disaccharide de formule (VII) est lié au disaccharide de formule (Vl) par l'atome d'oxygène situé en position 1 de son unité glucosamine. On entend par « unité glucosamine » l'unité monosaccharidique de formule suivante :
Figure imgf000007_0001
L'autre type d'unité saccharidique présente dans les composés selon l'invention est un acide uronique, plus précisément un acide iduronique, répondant à la formule suivante :
Figure imgf000007_0002
Ainsi, les composés de formule (I) selon l'invention peuvent également être représentés selon la formule (I') comme suit, dans laquelle se succèdent les unités iduroniques et les unités glucosamines et dans laquelle R1, R2, R4, Rβ et R7 sont tels que définis précédemment :
Figure imgf000007_0003
En fonction des significations de R2 et R7, les oligosaccharides selon l'invention peuvent donc comporter de 7 à 10 unités saccharidiques. Parmi les composé de formule (l)/(l') objets de l'invention, on peut citer ceux dans lesquels :
- R1, R3, R4, R5 et R6 sont tels que définis précédemment,
- R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie précédemment, et
- R7 représente un groupe hydroxyle.
De tels composés sont des heptasaccharides. Ils répondent à la formule (1-1 ) ci-après, dans laquelle R7 représente un groupe hydroxyle et R, R1, R4 et R6 sont tels que définis précédemment, et se présentent sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les composé de formule (l)/(l') objets de l'invention, on peut citer un sous- groupe de composés dans lequel R2 représente un groupe -O-alkyle.
De tels composés sont des octasaccharides ou des décasaccharides. Ils répondent à la formule (I-2) ci-après, dans laquelle R1, R4, R6, R8 et R9 sont tels que définis précédemment et R2 représente un groupe -O-alkyle, et se présentent sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Parmi les composé de formule (l)/(l') objets de l'invention, on peut citer un sous- groupe de composés dans lequel :
- R2 représente un groupe -O-alkyle, et
- R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus, dans laquelle R9 représente un disaccharide de formule (VII) telle que définie ci-dessus.
De tels composés sont des décasaccharides. Ils répondent à la formule (I-3) ci-après, dans laquelle R1, R4, R6, R8 et R10 sont tels que définis précédemment, et se présentent sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Figure imgf000009_0003
Figure imgf000009_0002
Figure imgf000009_0001
Parmi les composé de formule (I) objets de l'invention, on peut citer un sous- groupe de composés dans lequel :
- R2 représente un groupe -O-alkyle, et
- R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus, dans laquelle R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle.
De tels composés sont des octasaccharides et répondent à la formule (1-2) ci-dessus, dans laquelle Ri, R4, Rβ et R8 sont tels que définis précédemment, R2 représente un groupe -O-alkyle et R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle.
De façon avantageuse, les octasaccharides selon l'invention sont tels que R9 représente un groupe -O-alkyle. D'autres sous-groupes de composés selon l'invention peuvent présenter plusieurs des caractéristiques énoncées ci-dessus pour chacun des sous-groupes définis précédemment.
L'invention concerne notamment les oligosaccharides suivants :
- Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-[(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl-(i→4)]2-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 1) ;
- Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy -6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-[(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-
(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl- (1→4)]3-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 2) ; -[Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1 -»4)- [(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)]2-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranoside]-uronate de sodium (n° 3) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 4) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→'4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→'4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→'4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 5) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→A)-{2- O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→'4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→'4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→'4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 6) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→'4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)- (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 7) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium(sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-[(1→4)-(2- O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)]2-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2- (sulfonato)amino-α-D-glucopyranoside (n° 8) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonato)amino-α-D-glucopyranosyl)-[(1→4)-
(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)]2-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-2-sodium
(sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 9).
Dans son principe, le procédé de préparation des composés selon l'invention utilise des synthons de base di- ou oligosaccharidiques préparés comme précédemment rapporté dans la littérature. On se référera notamment aux brevets ou demandes de brevet EP 0 300 099, EP 0 529 715, EP 0 621 282 et EP 0 649 854, ainsi qu'à la publication de C. Van Boeckel et M. Petitou parue dans Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1993, 32, 1671-1690. Ces synthons sont ensuite couplés les uns aux autres de façon à fournir un équivalent entièrement protégé d'un composé selon l'invention. Cet équivalent protégé est ensuite transformé en un composé selon l'invention. Dans les réactions de couplage évoquées ci-dessus, un di- ou oligosaccharide "donneur", activé sur son carbone anomère, réagit avec un di- ou oligosaccharide "accepteur", possédant un hydroxyle libre.
La présente invention concerne donc un procédé pour la préparation des composés de formule (!)/(!') caractérisé en ce que : - dans une première phase, un équivalent complètement protégé du composé (I) désiré est synthétisé,
- dans une seconde phase, les groupes groupes -COO" et -OSO3 " sont introduits et/ou démasqués,
- dans une troisième phase, on déprotège l'ensemble du composé, et
- dans une quatrième phase, les groupements N-sulfates sont introduits.
La synthèse de l'équivalent complètement protégé du composé (I) désiré est réalisée selon des réactions bien connues de l'Homme de l'art, en utilisant les méthodes pour la synthèse d'oligosaccharides (par exemple GJ. Boons, Tetrahedron (1996), 52, 1095-1 121 et demandes de brevets WO 98/03554 et WO 99/36443), dans lesquelles un oligosaccharide donneur de liaison glycosidique est couplé avec un oligosaccharide accepteur de liaison glycosidique pour conduire à un autre oligosaccharide dont la taille est égale à la somme des tailles des deux espèces réactives. Cette séquence est répétée jusqu'à l'obtention du composé de formule (l)/(l'), éventuellement sous forme protégée. La nature et le profil de la charge du composé final désiré déterminent la nature des entités chimiques utilisées dans les différentes étapes de la synthèse, selon les règles bien connues de l'Homme de l'art. On pourra se référer par exemple à C. Van Boeckel et M. Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1993), 32, 1671-1690 ou encore à H. Paulsen, « Advances in sélective chemical synthèses of complex oligosaccharides », Angew. Chem. Int. Ed. Engl. (1982), 21, 155-173.
Les composés de l'invention peuvent naturellement être préparés en utilisant différentes stratégies connues par l'Homme de l'art de la synthèse des oligosaccharides. Le procédé décrit ci-dessus est le procédé préféré de l'invention. Toutefois, les composés de formule (l)/(l') peuvent être préparés par d'autres méthodes bien connues de la chimie des sucres, décrites par exemple dans « Monosaccharides, Their chemistry and their rôles in natural products », P. M. Collins et RJ. Ferrier, J. Wiley & Sons (1995) et par GJ. Boons dans Tetrahedron (1996), 52, 1095-1 121.
Les groupes protecteurs utilisés dans le procédé de préparation des composés de formule (l)/(l') sont ceux qui permettent, d'une part, de protéger une fonction réactive telle qu'un hydroxy ou une aminé pendant une synthèse et, d'autre part, de régénérer la fonction réactive intacte en fin de synthèse. On utilise, pour la mise en œuvre du procédé selon l'invention, les groupes protecteurs couramment utilisés dans la chimie des sucres, tels que décrits par exemple dans « Protective Groups in Organic Synthesis », Green ét al., 3rd Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York). Les groupes protecteurs sont choisis par exemple parmi les groupes acétyle, halogénométhyle, benzoyle, lévulinyle, benzyle, allyle, te/f-butyldiphénylsilyle (tBDPS).
Des groupes activateurs peuvent également être utilisés ; il s'agit de ceux classiquement utilisés en chimie des sucres, par exemple selon GJ. Boons, Tetrahedron (1996), 52, 1095-1121. Ces groupes activateurs sont choisis par exemple parmi les imidates et les thioglycosides.
Le procédé décrit ci-dessus permet d'obtenir les composés de l'invention sous forme de sels, avantageusement sous forme de sel de sodium. Pour obtenir les acides correspondants, les composés de l'invention sous forme de sels peuvent mis en contact avec une résine échangeuse de cations sous forme acide. Les composés de l'invention sous forme d'acides peuvent être ensuite neutralisés par une base pour obtenir le sel souhaité. Pour la préparation des sels des composés de formule (l)/(l'), on peut utiliser toute base minérale ou organique donnant, avec les composés de formule (l)/(l'), des sels pharmaceutiquement acceptables.
L'invention a également pour objet les composés de formule 2OA ci-dessous, dans laquelle Pg, Pg' et Pg", identiques ou différents les uns des autres, représentent des groupes protecteurs :
Figure imgf000014_0001
De tels composés sont utiles en tant qu'intermédiaires de synthèse des composés de formule (l)/(l').
En particulier, l'invention a pour objet le composé 2OA dans lequel Pg, Pg' et Pg" représentent respectivement des groupes benzyle, allyle et acétyle. Un tel composé correspond au disaccharide 20 illustré dans le schéma 2 ci-après, utile pour la synthèse des composés n° 1 et 2 selon l'invention, comme cela sera détaillé dans ce qui suit :
Figure imgf000015_0001
Les exemples qui suivent décrivent la préparation de certains composés et intermédiaires de synthèse conformes à l'invention. Ces exemples ne sont pas limitatifs et ne font qu'illustrer la présente invention. Les composés de départ et les réactifs, quand leur mode de préparation n'est pas expressément décrit, sont disponibles dans le commerce ou décrits dans la littérature, ou bien peuvent être préparés selon des méthodes qui y sont décrites ou qui sont connues de l'Homme du métier. Les abréviations suivantes sont utilisées :
[α]D : pouvoir rotatoire
Ac : acétyle
AII : allyle
Bn : benzyle
Bz : benzoyle
CCM : Chromatographie sur Couche Mince
CrO3 : trioxide de chromeDDQ : 2,3-dichloro-5,6-dicyano-1 ,4-benzoquinone
ESI : Electron Spray Ionisation
h: heure
H2SO4 : acide sulfurique
Lev : lévulinyle
Me : méthyle
min : minute
Rf : Retardation factor (temps de rétention mesuré sur la CCM par rapport au front du solvant de migration)
tBDPS : te/f-butyldiphénylsilyle
Z : benzyloxy-carbonyle Préparation des intermédiaires de synthèse :
SCHEMA 1 : Préparation du disaccharide donneur 15
Figure imgf000016_0001
14 15
(Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)- 1 ,6-anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose (12)
A une solution du composé 11 (1 1 ,6 g, 16,2 mmol) (décrit dans la préparation du composé n° 8 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans le dioxane anhydre (340 ml_), on ajoute successivement la 4-diméthylaminopyridine (2,12 g, 17,3 mmol), le chlorhydrate de 1-(3-diméthylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (6 ,5 g, 34,3 mmol) et l'acide lévulinique (3,6 ml_ ; 34,3 mmol). Après 4h30 d'agitation, on dilue avec le dichlorométhane (1800 ml_). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, avec une solution saturée de chlorure de sodium, avec une solution aqueuse saturée d'hydrogénocarbonate de sodium puis avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 5/1 v/v) pour donner 12,7 g du composé 12.
CCM : Rf = 0,42, gel de silice, toluène/acétone 3/1 v/v
(Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)- 1 ,6-di-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,3-D-glucopyranose (13)
A une solution du composé 12 (12,76 g, 16,2 mmol) dans l'anhydride acétique (160 mL) est ajouté, à O0C, l'acide trifluoroacétique (14,1 mL, 183 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 16 heures à température en ambiante. Après concentration, le mélange est co-évaporé avec du toluène. La purification de résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 4/1 v/v) donne 10,5 g du composé 13.
CCM : Rf = 0,49, gel de silice, (toluène/acétone 4/1 v/v)
(Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-6- O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose (14)
Une solution du composé 13 (10,5 g, 12,0 mmol) et de benzylamine (50 ml_, 457 mmol) dans l'ether diéthylique (360 ml_) est agitée à température ambiante pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est dilué avec de l'éther diéthylique (2000 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 M froid puis à l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec. Le résidu est chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 3/1 v/v) et donne 7,14 g du composé 14.
CCM : Rf = 0,40, gel de silice, toluène/acétone 3/1 v/v
(Benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-6- O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate (15)
Du trichloroacétonitrile (4,3 mL, 42,8 mmol) et du carbonate de césium (1 ,89 g, 13,7 mmol) sont ajoutés à une solution du composé 14 (7,14 g, 8,56 mmol) dans le dichlorométhane (160 mL). Après agitation pendant 30 minutes, le milieu réactionnel est filtré puis concentré. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 2/1 v/v + 0,1% de triéhylamine) pour donner 7,0 g du composé 15.
CCM : Rf = 0,37 et 0,28, gel de silice, toluène/acétone 2/1 v/v
SCHEMA 2 : Préparation du donneur de glycosyle 20
Figure imgf000018_0001
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-(allyloxy)carbonyl-3-O-benzyl -α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)-1 ,6-anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-3-D-glucopyranose (16)
A une solution du composé 11 (1 1 ,7 g, 17,3 mmol) (décrit dans la préparation du composé n° 8 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans le tétrahydrofurane anhydre, on ajoute, à O0C, successivement la pyridine (14 ml_ ; 173 mmol), 4- diméthylaminopyridine (2,12 g, 17,3 mmol) et le chloroformiate d'allyle (18,3 ml_, 173 mmol). Après 16 h d'agitation à température ambiante, on ajoute à 00C de l'eau (47 ml_).
Après 30 min d'agitation, on dilue avec de l'acétate d'éthyle (800 ml_). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10% et de l'eau puis avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium saturée et de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice
(cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v) pour donner 11 ,4 g du composé 16.
CCM : Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v.
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl -α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1 ,6- anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose (17)
Le composé 16 (1 1 ,44 g, 15,1 mmol) est dissous dans le tétrahydrufurane (100 mL). On ajoute de l'acétate de palladium (67,6 mg, 0,30 mmol) et de la triphényl phosphine (395 mg, 1 ,5 mmol). Après 2 h d'agitation à reflux, le milieu réactionnel est concentré à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 3/1 v/v) pour donner 8,0 g du composé 17.
CCM : Rf = 0,33, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v.
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1 ,6-di- O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose (18)
A une solution du composé 16 (7,96 g, 1 1 ,1 mmol) dans l'anhydride acétique (105 ml_) refoidie à 00C est ajoutée de l'acide trifluoroacétique (9,4 ml_). Le milieu réactionnel est agité pendant 16 heures à température ambiante. Après concentration, le mélange est coévaporé avec du toluène (5 x 200 ml_). La purification de résidu par chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v) donne 7,72 g du composé 18.
CCM : Rf = 0,40, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v (Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl -α-L-idopyranosyluronate)-(1 ->4)-6-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,3-D-glucopyranose (19)
Une solution du composé 18 (7,72 g, 9,44 mmol) et de benzylamine (3,9 mL, 35,2 mmol) dans l'ether diéthylique (280 mL) est agitée à température ambiante, pendant 6 heures. Le mélange réactionnel est dilué avec de l'éther diéthylique (800 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 1 M puis avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 5/2 v/v) pour donner 6,14 g du composé 19.
CCM : Rf = 0,45, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 5/3 v/v
(Benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-6-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate (20)
Du trichloroacétonitrile (4 mL, 39,6 mmol) et du carbonate de césium (4,13 g, 12,7 mmol) sont ajoutés à une solution du composé 19 (6,14 g, 7,9 mmol) dans le dichlorométhane (150 mL). Après agitation pendant 30 minutes, le milieu réactionnel est filtré puis concentré. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 4 /1 v/v) pour donner 6,5 g du composé 20.
CCM : Rf = 0,50, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 3/1 v/v
Déplacements chimiques des protons anomériques (500 MHz, CDCI3) δ
5.27 IdoUA", 5.57 Glc'β et 5.28 IdoUA", 6.36 Glc'α
LC-MS m/z 798.2 [(M + Na)+]. TR1 = 13.59 min et TR2 = 13.75 min SCHEMA 3 : Préparation de l'octasaccharide 26
Figure imgf000020_0001
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-
Figure imgf000020_0002
{[(benzyloxy)carbonyl1amino)-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (22)
Un mélange de l'imidate 15 (541 mg, 0,553 mmol), de l'accepteur de glycosyle 21 (650 mg, 0,83 mmol) (préparé selon la méthode décrite dans Carbohydrate Research (1987), 167 67-75) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (412 mg) dans un mélange toluène/dichlorométhane (23 ml_, 20/3 v/v) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -25°C et une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (82,5 μl_) est ajoutée au milieu réactionnel. Après 15 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner 746 mg du composé 22.
CCM : Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4Hméthyl 2-O-acétyl-3-O- benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-6-O-acétyl-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (23)
A une solution du composé 22 (2,3 g, 1 ,44 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 v/v (290 ml_) est ajouté l'acétate d'hydrazine (662,3 mg, 7,2 mmol).
Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Après concentration, le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v) pour donner 1 ,84 g du composé 23.
CCM : Rf = 0,48, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)-(benzyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-qlucopyranosyl-(1→4Hméthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4)-6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside (24)
Un mélange de l'accepteur de glycosyle 23 (1 ,97 g, 1 ,12 mmol), de l'imidate 15 (1 ,63 g, 1 ,66 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (2,6 g) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (75 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (250 μL) est ajouté au milieu réactionnel. Après 10 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 19O x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner 1 ,63 g du composé 24.
CCM : Rf = 0,33, gel de silice, toluène/acétone 3/1 v/v. Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(benzyl 2-O-acétyl-3-O- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- glucopyranosvD-d→4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)- 6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{[(benzyloxy)carbonyl1amino)-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (25)
A une solution du composé 24 (1 ,7 g, 0,73 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 v/v (145 ml_) est ajouté de l'acétate d'hydrazine (338 mg, 3,67 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Après concentration, le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 1/1 v/v) pour conduire au composé 25 (1 ,41 g).
CCM : Rf = 0,47, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/1 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4> (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(benzyl 2-O- acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-qlucopyranosyl-(1→4)l2-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4)-6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside (26)
Un mélange de l'imidate 20 (0,681 mg, 0,74 mmol), de l'accepteur de glycosyle 25 (1 ,10 g, 0,5 mmol), et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (0,555 g) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (26 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (11 1 μL). Après 20 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite® et concentration, le résidu obtenu est chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 19O x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner successivement 468 mg d'octasaccharide 26 et 842 mg d'un mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 26.
Ce mélange (842 mg) est traité selon les conditions ci-dessus pour conduire au composé 26 (513,6 mg) après traitement et chromatographie sur colonne (Sephadex® LH20, 190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
Les deux fractions (468 mg et 513,6 mg) sont réunies et purifiées par chromatographie HPLC préparative sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 2/1 v/v) pour donner le composé 26 (1 ,03 g).
CCM : Rf = 0,44, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 2/1 v/v.
SCHEMA 4 : Préparation de l'octasaccharide 30
26
Figure imgf000023_0001
Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 ^4)-(2-azido-3-
Figure imgf000023_0002
idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl-(1→'4)l9- (méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1^4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (27)
A une solution du composé 26 (819 mg, 0,27 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 v/v (83 ml_) contenant du tamis 3Â (10,3 g) est ajoutée, à 00C, sous atmosphère d'argon une solution 1 M de méthylate de sodium dans le méthanol (1 ,65 ml_). Après 16 heures à -18°C, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la résine Dowex® 50WX4 H+. Après filtration et concentration, le résidu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 4/3 v/v) pour donner 605 mg du composé 27.
CCM : Rf = 0,41 , gel de silice, toluène/acétone 4/3 v/v. Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4H(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateM1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- triéthylammonium sulfonato-α-D-glucopyranosyl-d→4)1?-(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-3-O-benzyl-2- {[(benzyloxy)carbonyl1amino)-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D- glucopyranoside (28)
Le composé 27 (300 mg, 0,12 mmol) est séché par co-distillation de N, N- diméthylformanide (3 x 10 ml_) puis est mis en solution dans le Λ/,Λ/-diméthylformanide (1 1 ml_). A cette solution on ajoute le complexe trioxyde de soufre-triéthylamine (902 mg ; 4,98 mmol). Le mélange est agité pendant 16 heures à 55°C à l'abri de la lumière puis neutralisé avec du méthanol (202 μL, 4,98 mmol). Le milieu réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm) éluée par mélange dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v pour conduire au composé 28 (426 mg).
CCM : Rf = 0,32, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau
1 1/7/1 ,6/4 v/v/v/v.
Méthyl (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithiumH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4H(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de Iithium)-(1→4H2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl-(1→4ïl9-(3-O- benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (29)
A une solution du composé 28 (459 mg, 0,12 mmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (19 mL) est ajoutée, à 00C, une solution 0,7 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (7,6 ml_ ; q.s.p concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 00C puis 16 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est refroidi à 00C, neutralisé avec de l'acide acétique (305 μl_) puis déposé sur une colonne Sephadex® LH20 (95 x 2 cm) éluée par mélange méthanol/eau 4/1 v/v pour conduire au composé 29 (368 mg).
CCM : Rf = 0,25, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 27/19/4,2/1 1 v/v/v/v.
Méthyl (4-O-npropyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosvIuronate de sodium)- (1→4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosvD-d→4)-[2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosvIuronate de sodium)-(1→4)-(2-amino-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl-d→4)]9-(2-O-sulfonato -α-L-idopyranosvIuronate de sodium)-(1→4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside (30)
Une solution du composé 29 (170 mg) dans un mélange te/f-butanol/eau 2/3 v/v (27 ml_) est traitée sous pression d'hydrogène (1 bar) en présence de palladium sur charbon 10% (340 mg) à 300C pendant 24 heures. Après filtration (filtre Millipore®
LSWP 5 μm), on dépose le mélange réactionnel sur une colonne Sephadex® G-25 fine
(90 x 3 cm) éluée par une soltution aqueuse du chlorure de sodium 0,2 M. On concentre les fractions contenant le produit et on dessale en utilisant la même colonne éluée par l'eau. Après concentration à sec, on obtient le composé 30 (205 mg).
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique = 2327,55 ; masse expérimentale : 2239 u.m.a. (acides iduroniques observés sous forme COOH).
SCHEMA 5 : Préparation du décasaccharide 33
15 25
Figure imgf000026_0001
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1 -^4 )-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4H(benzyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-qlucopyranosyl-(1 ^4)l£-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4)- 6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside (31)
Un mélange de l'imidate 15 (250 mg, 0,255 mmol), de l'accepteur de glycosyle 25 (376 mg, 0,169 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (396 mg) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (11 ,4 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute un solution 0,1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (381 μl_). Après 12 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner successivement 150 mg du composé brut 31 et 318 mg d'un mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 31.
Le mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 33 est traité selon les conditions ci-dessus pour donner après chromatographie d'exclusion de taille
(Sephadex® LH20) 151 mg du composé brut 31 et 191 mg d'un mélange contenant l'hexasaccharide 25 et l'octasaccharide 31. Cette opération est répétée deux fois jusqu'à épuisement de l'hexasaccharide 25.
Les fractions contenant l'octasaccharide brut 31 sont réunies et purifiées par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 7/3 v/v) pour donner le composé 31 (351 mg).
CCM : Rf = 0,37, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 7/5 v/v.
Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(benzyl 2-O-acétyl-3- O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α- D-qlucopyranosyl-(1→4ïl£-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)- 6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (32)
A une solution du composé 31 (335 mg, 0,1 1 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 v/v (22 mL) est ajouté de l'acétate d'hydrazine (51 mg, 0,55 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 2 heures à température ambiante. Le mélange réactionnel est dilué avec du dichlorométhane (50 mL). La phase organique est lavée avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 2%, puis de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis concentrée à sec. Le résidu est purifié par chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 7/3 v/v) pour donner le composé 32 (238 mg).
CCM : Rf = 0,50, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 5/6 v/v. Méthyl (benzyl 2-O-acétyl-4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4>
(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(benzyl 2-O- acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-qlucopyranosyl-(1→4%-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4)- 6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside (33) Un mélange de l'imidate 20 (64 mg, 0,066 mmol), de l'accepteur de glycosyle 32
(130 mg, 0,044 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (49 mg) dans un mélange dichlorométhane/toluène 1/1 v/v (2,2 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 0,1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (100 μl_). Après 10 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner successivement 61 mg du composé brut 33 et 87,7 mg d'un mélange contenant l'octasaccharide 32 et le décasaccharide 33.
Le mélange ci-dessus (87,7 mg) est traité selon les conditions ci-dessus pour donner le composé brut 33 (120 mg) après chromatographié sur colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
Les deux fractions contenant le composé brut sont rassemblées et purifiées par chromatographié flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 7/2 v/v) pour donner le composé 33 (120 mg).
CCM : Rf = 0,52, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/1 v/v
SCHEMA 6 : Préparation du décasaccharide 37
33
Figure imgf000029_0001
Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3- O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(méthyl 3-0-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl-(1→4)l3- (méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1^4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (34)
A une solution, refroidie à O0C, du composé 33 (51 ,8 mg, 0,014 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 v/v (982 μl_) contenant du tamis 3Â (125 mg) est ajoutée sous atmosphère d'argon une solution 1 M de méthylate de sodium dans le méthanol (21 ,0 μl_). Après 5 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la résine Dowex® 50WX4 H+. Après filtration et concentration, le résidu est purifié par chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) pour donner le composé 34 (31 ,4 mg).
CCM : Rf = 0,47, gel de silice, dichlorométhane/acétone 7/3 v/v
Méthyl (méthyl 4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosylH1→4H(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthvammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl-d→4)V(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D- qlucopyranoside (35)
Le composé 34 (31 ,5 mg, 10,6 μmol) est traité comme dans la préparation du composé 28 pour donner le composé 35 (47,0 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 100 x 1 ,2 cm, dichlorométhane/méthanol 1/1 v/v).
CCM : Rf = 0,55, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 16/11/2,6/7 v/v/v/v.
Méthyl (4-O-allyl-3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronique de lithiumH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4H(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronique de lithium)-(1→4)- (2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl-d→4)V(3-O- benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronique de lithiumH1→4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (36) A une solution du composé 35 (47 mg, 12,5 μmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (2,0 ml_) est ajoutée, à 00C, une solution 1 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (500 μl_ ; q.s.p. pour avoir une concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 00C puis 4 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé avec de l'acide acétique puis laissé à -200C pendant 16 heures. Le mélange réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex® LH20 éluée par un mélange méthanol/eau 4/1 v/v pour conduire au composé 36 (38,9 mg).
Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4H2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4H2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1→4H2-amino-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl-d→4%-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumH1→4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- qlucopyranoside (37)
Une solution du composé 36 (40 mg, 10,8 μmol) dans un mélange tert- butanol/eau 6/9 v/v (1 mL) est traitée sous pression d'hydrogène (1 1 bars) en présence de palladium sur charbon 10% (80 mg, 2 x quantitée du composé à réduire) à 400C pendant 4 heures. Après filtration (filtre Millipore® LSWP 5 μm), la solution est déposée sur une colonne de résine Chelex® 100 (1 ml_) éluée avec de l'eau puis concentrée à sec. Le composé brut, ainsi obtenu (27 mg), est utilisé tel quel dans l'étape suivante.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2781 ,10 ; masse expérimentale : 2782,05 ± 0,30 u.m.a.
SCHEMA 7 : Préparation de l'heptasaccharide 43
Figure imgf000031_0001
Figure imgf000031_0002
Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylH1→4)-2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosideluronate (40)
Un mélange de l'imidate 38 (1 ,1 g, 1 ,22 mmol), préparé selon la méthode décrite par C. Tabeur et al., BioOrg. Med. Chem. (1999) 7, 2003-2012, de l'accepteur de glycosyle 39 (864 mg, 2,44 mmol), préparé selon la méthode décrit par Koshida, S. et al., Tetrahedron Lett., 1999, 40, 5725-5728, et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (914 mg) dans le toluène (43 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (183 μl_). Après 1 heure d'agitation, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite® et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographié sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v) pour donner le composé 40 (936 mg).
CCM : Rf = 0,38, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)-2-O-acétyl-3-O- benzyl-α-L-idopyranosideluronate (41)
Le composé 40 (2,56 g, 2,34 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23 pour donner le composé 41 (2,17 g) après chromatographié flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v).
CCM : Rf = 0,35, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylHI→4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)-2-O-acétyl-3-O- benzyl-α-L-idopyranosideluronate (42)
Un mélange de l'imidate 38 (1 ,1 g, 1 ,22 mmol), de l'accepteur de glycosyle 41
(1 ,2 g, 1 ,20 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (903 mg) dans le dichlorométhane (42 mL) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C.
Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de tert-butyldiméthylsilyle dans du dichlorométhane (181 μL). Après 15 minutes, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v) pour donner 1 ,63 g du composé 42.
CCM : Rf = 0,30, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
Méthyl [méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)- (6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 2-O- acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosideluronate (43)
Le composé 42 (3,90 g, 2,25 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23. Une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v) donne le composé 43 (3,39 g).
CCM : Rf = 0,33, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v
SCHEMA 8 : Préparation du disaccharide 50
Figure imgf000033_0001
49 48 47
Figure imgf000033_0002
(3.4-Di-O-benzyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-6-O-te/f-butyldiméthylsilyl-α-L- idopyranosylHI→4)-1 ,6-anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose (45) A une solution du composé 44 (32,3 g, 42,2 mmol) (décrit dans la préparation du composé n° 108 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans du N, N- diméthylformamide (210 ml_) est ajouté, à 00C et sous argon, du bromure de benzyle (25 ml_, 211 mmol) puis du NaH à 55% (3 g, 126 mmol). Après 20 minutes d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (30 ml_), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
LC-MS m/z 871 ,7 [(M + NH4)I- TR = 13,86 min (2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiméthylsilyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)-
1 ,6-anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-3-D-glucopyranose (46)
A une solution du composé 45 brut (38,6 g) dans du dichlorométhane (1 ,6 L) sont ajoutés de l'eau (80 mL) puis, à 00C, du DDQ (14,2 g). Après 4h45 d'agitation à 00C, le milieu est dilué par du dichlorométhane et une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium est additionnée. La phase organique est ensuite lavée à l'eau, séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
Le résidu obtenu est dissous dans du dichlorométhane (350 mL), puis de la triéthylamine (13 mL), de la 4-diméthylaminopyridine (2 g) et de l'anhydride acétique (60 mL) sont additionnés. Après 10 minutes d'agitation magnétique à 0°C, puis 1 h45 à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué par du dichlorométhane, puis successivement lavé par une solution aqueuse à 10% d'hydrogénosulfate de potassium, d'eau, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée.
Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle - cyclohexane) pour fournir le composé 46 (26,8 g).
LC-MS m/z 798,3 [(M + Na)+]. TR = 12,97 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1 ,6-anhvdro- 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-3-D-glucopyranose (47)
A une solution du composé 46 (26,3 g, 33,9 mmol) dans l'acétone (1 ,4 L) est additionnée, à 00C, une solution de CrO3 (10,5 g) dans du H2SO4 3.5M aqueux (47 mL). Après 4h d'agitation mécanique à 00C, le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane, lavé à l'eau jusqu'à neutralité, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
Le résidu obtenu est dissous dans du Λ/,Λ/-diméthylformanide (210 mL), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (17 g) ainsi que de l'iodure de méthyle (21 mL) sont additionnés. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16h, puis concentré sous vide. Le résidu est dilué par de l'acétate d'éthyle puis lavé à l'eau, avec une solution aqueuse saturée de thiosulfate de sodium, avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, puis séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
LC-MS m/z 707,3 [(M + NH4)+]. TR = 10,37 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1 ,6-di-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose (48)
Le résidu brut obtenu à l'étape précédente est dissous dans de l'anhydride acétique (177 mL), puis est additionné de l'acide trifluoroacétique (TFA) (17,7 mL). Le mélange réactionnel est agité pendant 16h, puis est concentré, co-évaporé au toluène et purifié sur gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle), pour donner le composé 48
(17,4 g).
LC-MS m/z 809,3 [(M + NH4)I- TR = 10,81 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-6-O-acétyl- 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose (49)
A une solution du composé 48 (7 g, 8,84 mmol) dans de l'éther diéthylique (303 mL) est additionnée, à 00C et sous argon, de la benzylamine (BnNH2) (29,7 mL). Après 1 h d'agitation magnétique à 00C puis 6h à température ambiante, le mélange réactionnel est neutralisé avec une solution aqueuse d'HCI 1 N à froid, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré, et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) pour conduire au composé 49 (5,95 g).
LC-MS m/z 767,7 [(M + NH4)+]. TR = 1 ,64 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-6-O-acétyl- 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,3-D-glucopyranose trichloroacétimidate (50)
A une solution du composé 49 (5,94 g, 7,9 mmol) dans le dichlorométhane (150 mL) sont additionnés, sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (4,1 g), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (3,9 mL). Après 45 minutes d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane + 0,1 % de triéthylamine) pour donner le composé 50 (5,7 g).
LC-MS m/z 912,0 [(M + NH4)+]. TR = 1 ,81 min SCHEMA 9 : Préparation de l'heptasaccharide 55
Figure imgf000036_0001
Méthyl {méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4 H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(méthyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H6-O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→'4)l9-2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranoside)uronate (51)
Un mélange de l'accepteur de glycosyle 43 (200 mg, 0,12 mmol), de l'imidate 50
(163 mg, 0,18 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (137 mg) dans le dichlorométhane (6,5 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C.
Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (27 μl_). Après 1 heure, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration et concentration, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 90 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 2/1 v/v) pour donner le composé 51 (212 mg).
CCM : Rf = 0,38, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 1/1 v/v.
Méthyl {méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4H(méthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)i9-3-O-benzyl-α-L-idopyranoside)uronate (52)
Le composé 51 (271 mg, 0,11 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 27 pour donner le composé 52 (186 mg) après une chromatographie sur colonne d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 5/3 v/v).
CCM : Rf = 0,65, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 4/3 v/v
Méthyl {méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthvammonium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-r(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthyammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- triéthylammonium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4ïl9-3-O-benzyl-2-O- triéthyammonium sulfonato-α-L-idopyranoside)uronate (53)
Le composé 52 (172 mg, 0,08 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 53 (196 mg) après une chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
1H RMN (D2O) δ des principaux protons anomériques : 5,41 ; 5,38 ; 5,34 ; 5,15; 5,14 ; 5,05 ; 5,15 ; 5,02 ppm.
{Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithiumH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4H(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de Iithium)-(1→4H2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosylH1→4)l?-3-O- benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranoside)uronate de lithium (54)
Le composé 53 (186 mg, 70,7 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29 pour donner le composé 54 (141 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
CCM : Rf = 0,24, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 27/19/4,2/11 v/v/v/v
{Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4H2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosylH1→4H(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronatede sodiumH1→4H2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosylH1→4ïl9-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranoside)uronate de sodium (55)
Une solution du composé 54 (60,0 mg, 0,022 mmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (6 ml_) est traitée sous pression d'hydrogène (< 200 mbar) en présence de palladium sur charbon 10% (60 mg) à température ambiante. Après 24 heures d'agitation, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore® LSWP 5 μm) puis concentré à sec. Le produit brut 55 ainsi obtenu (48,7 mg) est utilisé tel quel dans l'étape suivante. SCHEMA 10 : Préparation de l'accepteur de glycoside 60
Figure imgf000039_0001
Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-
(1 ^4)-6-O-acétyl-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (57)
A une solution du composé 56 (23,5 g, 30 mmol ; préparé selon la méthode décrite dans Carbohydrate Research (1987), 167, 67-75) dans le dichlorométhane (600 ml_) sont ajoutés, à O0C et sous atmosphère inerte, la 4-diméthylaminopyridine (733 mg, 6 mmol), l'hydrochlorure de 1-(3-dimétylaminopropyl)-3-éthylcarbodiimide (1 1 ,5 g, 60 mmol) et l'acide lévulinique (6,2 ml_, 60 mmol). Après 16 heures d'agitation à température ambiante, le mélange est dilué avec du dichlorométhane (1 ,5 L). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, avec de l'eau, avec une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium puis avec de l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu est purifié par flash chromatographie sur une colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 1/3) pour donner le composé 57 (22,6 g).
Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/3 v/v
Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (58)
A une solution du composé 57 (20,2 g, 23 mmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 (140 mL) est ajouté, sous atmosphère inerte, du [tBu2SnCI(OH)]2 (226 mg, 0,79 mmol) préparé selon A. Orita et al., Chem. Eur. J. (2001 ) 7, 3321. Le milieu réactionnel est agité pendant 38 heures à 35°C. Après concentration, le résidu (20,8 g) est engagé sans purification dans l'étape suivante.
Rf = 0,23, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 1/3 v/v Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (59)
A une solution du composé brut 58 (23 mmol) dans le dichlorométhane (190 ml_) sont ajoutés, à 00C et sous atmosphère inerte, la triéthylamine (8 ml_, 57,5 mmol), la 4- diméthylaminopyridine (1 ,4 g, 1 1 ,5 mmol) et le chlorure de te/f-butyldiphénylsilyle (12 ml_, 46,0 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 16 heures à température ambiante. Le mélange réactionnel est dilué avec du dichlorométhane. La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse saturée de chlorure de sodium puis avec l'eau, séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée. Le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 ) pour donner le composé 59 (24,4 g).
Rf = 0,42, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-3-O- benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (60)
A une solution du composé 59 (22,6 g, 20,0 mmol) dans un mélange toluène/éthanol 1/2 (2,5 L) est ajouté l'acétate d'hydrazine (9,21 g, 100,0 mmol). Le milieu réactionnel est agité pendant 30 minutes à température ambiante. Après concentration, le résidu est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 ) pour donner 17,6 g du composé 60.
Rf = 0,40, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v
SCHEMA 11 : Préparation du donneur de glycoside 65
Figure imgf000040_0001
61 62 63
Figure imgf000040_0002
65 64 (Méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1- O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranose (62)
A une solution de 61 (1 1 g, 13,7 mmol) (préparé selon la méthode décrite par
C. Tabeur et al., Carbohydr. Res., 281 (1996) 253-276) dans un mélange 1/1 méthanol/tétrahydrofurane (80 ml_) est additionné du [tBu2SnCI(OH)]2 (0,55 g) préparé selon A. Orita et al., Chem. Eur. J. (2001 ) 7, 3321. Après agitation à 35°C pendant 5,5 h, puis à température ambiante pendant 16 h, puis à nouveau à 35°C pendant 4 h, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis purifié par chromatographie pour conduire au composé 62 (5,97 g).
LC-MS m/z 780,2 [(M + Na)+]. TR = 9,14 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-1- O-acétyl-2-azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranose (63)
Le composé 62 (5,97 g, 7,88 mmol) est mis en solution dans du dichlorométhane (63 mL). A 00C et sous argon, sont additionnés successivement du 4- diméthylaminopyridine (0.481 g), de la triéthylamine (2,7 mL), et du chlorure de tert- butyldiphénylsilyle (4 mL). Après 4h d'agitation magnétique, le milieu réactionnel est dilué par du dichlorométhane, lavé par une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle/heptane) pour fournir le composé 63 (7 g).
LC-MS m/z 1018,3 [(M + Na)+]. TR = 12,33 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-2- azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose (64)
A une solution du composé 63 (7 g, 7,03 mmol) dans de l'éther diéthylique (70 mL), est additionnée, à 00C, de la benzylamine (BnNH2) (29 mL). Après 15 minutes d'agitation à 00C, puis 6 h à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué par de l'acétate d'éthyle, puis neutralisé avec de l'HCI 1 N à froid, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré, et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/toluène) pour conduire au composé 64 (5,86 g).
LC-MS m/z 976,3 [(M + Na)+]. TR = 27,6/27,8 min (Méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-2- azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose
trichloroacétimidate (65)
A une solution du composé 64 (6,5 g, 6,81 mmol) dans le dichlorométhane (140 ml_) et en présence de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (7 g), est additionné sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (3,5 g), puis à 00C, du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (3,4 ml_). Après 15 min d'agitation à 00C, puis 5h à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (1/4 acétate d'éthyle/toluène + 0.1% de triéthylamine) pour donner le composé 65 (6,33 g).
LC-MS m/z 1 119,1 [(M + Na)+]. TR = 31 ,2
SCHEMA 12 : Préparation du tétrasaccharide 67
Figure imgf000042_0001
67 Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)-
(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (66) Un mélange de l'accepteur de glycosyle 59 (8,80 g, 9,00 mmol), de l'imidate 65 (6,58 g, 6,00 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (4,50 g) dans le dichlorométhane (210 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (900 μl_). Après 1 h20, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite® et concentration, le résidu obtenu est chromatographié sur colonne Sephadex® LH20 (190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 ) pour donner 8,26 g du composé 66.
Rf = 0,30, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-
3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→'4)-(méthyl 2-O- acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (67)
Le composé 66 (8,26 g, 4,31 mmol) est transformé en composé 67 (6,41 g) selon le même mode opératoire que celui décrit pour la synthèse du composé 23.
Rf = 0,34, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1
SCHEMA 13 : Préparation de l'hexasaccharide 69
Figure imgf000043_0001
69 Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-4-O-lévulinoyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)-(méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4Hméthyl 2-0- acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (68)
Un mélange de l'accepteur de glycosyle 67 (7,42 g, 4,09 mmol), de l'imidate 65 (6,73 g, 6,1 mmol), et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (4,60 g) dans le dichlorométhane (215 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à 25°C. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (920 μl_). Après 1 h30, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite®, le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane (800 ml_). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 2%, avec de l'eau puis séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne Sephadex® LH20 (190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 ) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (toluène/acétate d'éthyle 6/1 ) pour donner 6,13 g du composé 68.
Rf = 0,46, gel de silice, toluène/acétate d'éthyle 4/1 v/v
Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido- 3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)-(méthyl 2- O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-tert- butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4Hméthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl- α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-fe/f- butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (69)
Le composé 68 (7,14 g, 2,59 mmol) est transformé en composé 69 (6,07 g) selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 23.
Rf = 0,37, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v
SCHEMA 14 : Préparation du disaccharide 73
Figure imgf000045_0001
73 72
(3.4-Di-O-benzyl-2-O-(4-méthoxy)benzyl-6-O-te/f-butyldiméthylsilyl-α-L- idopyranosylH1→4)-1 ,6-anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose (70)
A une solution du composé 44 (32,3 g, 42,2 mmol) (décrit dans la péparation du composé n° 108 de la demande de brevet WO 2006/021653) dans du N1N- diméthylformamide (210 ml_) est ajouté, à 00C et sous argon, du bromure de benzyle (25 ml_) puis du NaH à 55% (3 g). Après 20 min d'agitation magnétique, du méthanol est additionné (30 ml_), le milieu réactionnel est concentré sous vide, le brut réactionnel est dilué à l'acétate d'éthyle, lavé à l'eau puis par une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu (38.6 g) est engagé dans l'étape suivante sans purification.
LC-MS m/z 871 ,7 [(M + NH4)I- TR = 13,86 min
(2-O-Acétyl-3,4-di-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiméthylsilyl-α-L-idopyranosyl)-(1→4)- 1 ,6-anhvdro-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-3-D-glucopyranose (71)
A une solution du composé 70 brut (38,6 g) dans du dichlorométhane (1 ,6 L) sont ajoutés de l'eau (80 mL) puis, à 00C, du DDQ (14,2 g). Après 4h45 d'agitation à 00C, le milieu est dilué par du dichlorométhane et une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium est additionnée. La phase organique est ensuite lavée à l'eau, séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
Le résidu obtenu est dissous dans du dichlorométhane (350 mL), puis de la triéthylamine (13 mL), de la 4-diméthylaminopyridine (2 g), et de l'anhydride acétique
(60 mL) sont additionnés. Après 10 min d'agitation magnétique à 0°C, puis 1 h45 à température ambiante, le mélange réactionnel est dilué par du dichlorométhane, puis successivement lavé par une solution aqueuse à 10% d'hydrogénosulfate de potassium, d'eau, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) pour fournir le composé 71 (26,8 g).
LC-MS m/z 798,3 [(M + Na)+]. TR = 12,97 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1 ,6-anhvdro- 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-β-D-qlucopyranose (72)
A une solution du composé 71 (26,3 g, 33,9 mmol) dans l'acétone (1.4 L) est additionnée, à O0C, une solution de CrO3 (10,5 g) dans du H2SO4 3.5M aqueux (47 mL). Après 4h d'agitation mécanique à 00C, le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane, lavé à l'eau jusqu'à neutralité, puis la phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
Le résidu obtenu est dissous dans du Λ/,Λ/-diméthylformanide (210 mL), et de l'hydrogénocarbonate de potassium (17 g) ainsi que de l'iodure de méthyle (21 mL) sont additionnés. Le mélange réactionnel est agité à température ambiante pendant 16h, puis concentré sous vide. Le résidu est dilué par de l'acétate d'éthyle puis lavé à l'eau, avec une solution aqueuse saturée de thiosulfate de sodium, avec une solution aqueuse saturée en chlorure de sodium, puis séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée. Le composé obtenu est engagé dans l'étape suivante sans purification.
LC-MS m/z 707,3 [(M + NH4)+]. TR = 10,37 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-1 ,6-di-O- acétyl-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α,3-D-glucopyranose (73)
Le résidu brut obtenu à l'étape précédente est dissous dans de l'anhydride acétique (177 mL), puis est additionné de l'acide trifluoroacétique (TFA) (17,7 mL). Le mélange réactionnel est agité pendant 16h, puis est concentré, co-évaporé au toluène, et purifié sur gel de silice (cyclohexane - acétate d'éthyle), pour donner le composé 73 (17,4g).
LC-MS m/z 809,3 [(M + NH4)+]. TR = 10,81 min
SCHEMA 15 : Préparation du donneur de glycosyle 77
Figure imgf000047_0001
77 76
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-1-O-acétyl- 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranose (74)
A une solution du composé 73 (5,05 g, 6,3 mmol) dans un mélange 1/1 méthanol/tétrahydrofurane (76 ml_) est additionné du [tBu2SnCI(OH)]2 (0,25 g, 0,88 mmol), préparé selon A. Orita et al., Chem. Eur. J. (2001 ) 7, 3321. Après agitation à température ambiante pendant 72h, le mélange réactionnel est concentré sous vide puis purifié par chromatographie pour conduire au composé 74 (2,89 g).
LC-MS m/z 772,4 [(M + Na)+]. TR = 10,23 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-1-O-acétyl- 2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranose (75)
Le composé 74 (2,89 g, 3,86 mmol) est mis en solution dans du dichlorométhane
(31 mL). A 00C et sous argon, sont additionnés successivement de la triéthylamine (1 ,3 mL), de la 4-diméthylaminopyridine (0,235 g), et du chlorure de te/f-butyldiphénylsilyle (2 mL). Après 3h d'agitation magnétique, le milieu réactionnel est dilué par du dichlorométhane, lavé par une solution aqueuse d'hydrogénosulfate de potassium à 10%, à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré. Le résidu obtenu est purifié sur silice (acétate d'éthyle/cyclohexane) pour fournir le composé 75 (3,4 g).
LC-MS m/z 1010,6 [(M + Na)+]. TR = 13,10 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose (76)
A une solution du composé 75 (3,44 g, 3,48 mmol) dans de l'éther diéthylique (35 mL), est additionnée, à 00C, de la benzylamine (BnNH2) (14,5 mL). Après 8h d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est placé à -18°C pendant 16h, puis à nouveau 2,5h à température ambiante. Le milieu est alors dilué par de l'acétate d'éthyle, puis neutralisé avec de l'HCI 1 N à froid, lavé à l'eau, séché (Na2SO4), filtré et concentré, et purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane 15/85) pour conduire à 76 (3,83 g).
LC-MS m/z 963.6 [(M + NH4)I- TR = 12,37, 12,47 min
(Méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α,β-D-qlucopyranose trichloroacétimidate (77)
A une solution du composé 76 (2,99 g, 3,16 mmol) dans le dichlorométhane (60 mL) et en présence de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (3 g), sont additionnés, à 00C sous argon, du carbonate de césium (Cs2CO3) (1 ,6 g), puis du trichloroacétonitrile (CCI3CN) (1 ,6 mL). Après 20 min d'agitation à 00C, 7h à température ambiante, stockage à -18°C pendant 16h, puis agitation magnétique 8h à température ambiante, stockage à -18°C pendant 16h, et enfin agitation magnétique 1 h à température ambiante, le mélange réactionnel est filtré, puis concentré. Le résidu est purifié sur gel de silice (acétate d'éthyle/cyclohexane 15/85 + 0,1% de triéthylamine) pour donner le composé 77 (2,69 g).
LC-MS m/z 1 113,4 [(M + Na)+]. TR = 14,58 min
SCHEMA 16 : Préparation de l'octasaccharide 79
Figure imgf000049_0001
Méthyl (méthyl 2-O-acétyl-3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2- azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl')-(1→4')- lïméthyl 2-O-acétyl-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate')-(1→4')-(2-azido-3-O-benzyl-6- O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)l2-(méthyl 2-O-acétyl-3-O- benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-fe/f- butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (78)
Un mélange de l'accepteur de glycosyle 69 (3,50 g, 1 ,32 mmol), de l'imidate 77 (2,16 g, 1 ,98 mmol) et de tamis moléculaire 4 Λ en poudre (1 ,48 g) dans le dichlorométhane (69 ml_) est agité sous atmosphère d'argon pendant 1 heure à température ambiante. Le mélange réactionnel est refroidi à -200C et on ajoute une solution 1 M de triflate de te/f-butyldiméthylsilyle dans le dichlorométhane (297 μl_). Après 2h30, le milieu réactionnel est neutralisé par addition d'hydrogénocarbonate de sodium solide. Après filtration sur Celite®, le milieu réactionnel est dilué avec du dichlorométhane (400 ml_). La phase organique est lavée successivement avec une solution aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium à 2%, avec de l'eau puis séchée sur sulfate de sodium, filtrée puis évaporée à sec. Le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur colonne Sephadex® LH20 (190 x 3,2 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 ) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 4/1 ) pour donner 3,04 g du composé 78.
Rf = 0, 30, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 3/1
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(méthyl 3-O- benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl- 2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4ïl9-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)-3-O-benzyl-2-benzyloxycarbonylamino-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (79)
A une solution du composé 78 (2,23 g, 0,623 mmol) dans un mélange dichlorométhane/méthanol 2/3 (187 ml_) contenant du tamis 3Â (78 mg) est ajoutée sous atmosphère d'argon et à 00C une solution 1 M de méthylate de sodium dans le méthanol (99,7 μl_). Après 24 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est neutralisé avec de la résine Dowex AG 50 WX4 H+. Après filtration et concentration, le résidu est chromatographie sur colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 ) suivie d'une chromatographie flash sur colonne de gel de silice (cyclohexane/acétate d'éthyle 100/0→66/34) pour donner 1 ,80 g du composé 79.
Rf = 0,38, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 3/1 v/v
SCHEMA 17 : Préparation des octasaccharides 80, 81 , 82, 83, 84, 85, 86 et 87
Figure imgf000051_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4H(méthyl 3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl- 2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)l£-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (80) Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl- 2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-
(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-α- L-idopyranosyluronate)-(1→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (81)
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 ^4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-
Figure imgf000052_0001
O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1^4)-(méthyl 3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1 ^4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside (82)
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1^4)-r(méthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)l?-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (87)
A une solution du composé 79 (373 mg, 0,11 mmol) dans le méthanol (14 ml_) est ajouté le fluorure d'ammonium (324 mg, 8,74 mmol). Après 20 heures d'agitation à température ambiante, le mélange réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) suivie d'une chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 1/0→7/3 v/v) pour donner successivement :
- Le composé 80 (58,8 mg)
CCM : Rf = 0,63, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v
- Le composé 81 (44,4 mg) CCM : Rf = 0,53, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v
- Le composé 82 (37,7 mg)
CCM : Rf = 0,45, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v
- Un mélange du composé 83 et du composé 84 (54,0 mg)
- Un mélange du composé 85 et du composé 86 (48,3 mg)
- Le composé 87 (26,6 mg)
CCM : Rf = 0,14, gel de silice, toluène/acétone 65/35 v/v
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4Hméthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-α- D-qlucopyranosyl)-(1→4) -(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido- 3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4Hméthyl 3-O- benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-α-D-qlucopyranoside (83)
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-te/f-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4H(méthyl 3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosyl)-(1→4)l?-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O- benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (84)
Le mélange des composés 83 et 84 (260 mg) est purifié par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/méthanol 100/0→85/15 v/v) pour donner le composé 83 (27,8 mg).
CCM : Rf = 0,22, gel de silice, toluène/méthanol 85/15 v/v
Les fractions restantes sont à nouveau purifiées par chromatographie flash sur colonne de gel de silice (dichlorométhane/méthanol 100/0→97/3 v/v pour donner le composé 84 (45,3 mg).
CCM : Rf = 0,13, gel de silice, toluène/méthanol 85/15 v/v Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1 ^4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α- D-glucopyranosvD-d→4Hméthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido- 3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosylH1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyl1amino)-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (85)
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)- (méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f- butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4Hméthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (86)
Le mélange des composés 85 et 86 (135 mg) est purifié par une chromatographie HPLC sur colonne de gel de silice C18 (Waters® Sunfire, 5 μm, 150 x 19 mm, acétonitrile/eau 9/1 + acide trifluoroacétique 0,1 %) pour donner successivement :
- Le composé 85 (32,6 mg), après une chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v)
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2698,96 ; masse expérimentale : 2698,55 ± 0,65 u.m.a.
- Le composé 86 (26,5 mg), après une chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v)
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2698,96 ; masse expérimentale : 2698,95 ± 1 ,05 u.m.a.
SCHEMA 18 : Préparation de l'octasaccharide 91
Figure imgf000055_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-
Figure imgf000055_0002
idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-
Figure imgf000055_0003
idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium
Figure imgf000055_0004
sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (88)
Le composé 81 (69 mg, 23,5 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 88 (85,1 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
CCM : Rf = 0,62, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 17/9/2,2/5 v/v/v/v.
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosylH1→4)- (méthyl 3-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-(2-azido- 3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- ammonium sulfonato-α-D-glucopyranosylH1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-ammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-6-O-ammonium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (89)
A une solution du composé 88 (85,1 mg, 21 ,1 μmol) dans le méthanol (2,7 ml_) est ajouté le fluorure d'ammonium (31 ,3 mg, 0,846 mmol). Après 48 heures à 55°C, le mélange réactionnel est déposé sur colonne de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm) éluée par le Λ/,Λ/-diméthylformamide pour donner le composé 89 (64 mg).
[α]D 19,4° (c 1 ,0 ; MeOH) Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(3-O-benzyl-2- O- lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(3-O-benzyl-2-O- lithium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- lithium sulfonato-α-D-glucopyranosvD-d→4)-(3-O-benzyl-2-O- lithium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de lithium )-(1 ^4)-3-O-benzyl-2-{[(benzyloxy)carbonyl1amino)-2- désoxy-6-O- lithium sulfonato-α-D-glucopyranoside (90)
Le composé 89 (63,3 mg ; 17,8 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29. Une chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v) donne le composé 90 (49,8 mg).
[α]D 14,6° (c 1 ,0 ; MeOH)
Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4H2- amino-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-d→4H2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumVd→4H2-amino-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)- (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-d→4H2-amino-2-désoxy- 6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosvD-d→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-d→4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- qlucopyranoside (91)
A une solution du composé 90 (7,6 mg ; 2,6 μmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (516 μl_) sont ajoutés, à température ambiante, successivement le formiate d'ammonium (21 ,2 mg ; 0,33 μmol) et le palladium sur charbon 10% (49,4 mg). Après 4 heures d'agitation, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore® LSWP 5 μm) et déposé sur une colonne de gel Sephadex® G-25 fine (95 x 2 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCI 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de gel Sephadex® G-25 fine (95 x 2 cm) éluée par de l'eau. Le produit brut 91 ainsi obtenu (5,5 mg) est utilisé tel quel dans l'étape suivante.
SCHEMA 19 : préparation de l'octasaccharide 95
Figure imgf000058_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-butyldiphenylsilyl-2-désoxy-α-
Figure imgf000058_0002
idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium
Figure imgf000058_0003
sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-te/f-
Figure imgf000058_0004
sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2- désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (92)
Le composé 82 (16,5 mg, 5,6 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 92 (21 ,5 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
CCM : Rf = 0,73, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 28/16/3,8/9 v/v/v/v.
Méthyl (méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3,4-di-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-d→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)- (méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-d→4)-(6-O- ammonium sulfonato 2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)-(méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-d→4)-(2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)-(méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-d→4)-6-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (93)
Le composé 92 (21 ,5 mg, 5,3 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 93 (21 ,5 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 95 x 2 cm. N, N- diméthylformamide).
CCM : Rf = 0,63, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 1 1/7/1 ,6/4 v/v/v/v.
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)-(3-O-benzyl- 2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-d→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithiumVd→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D- qlucopyranosvD-d ^4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithiumVd→4)-3-O-benzyl-2-{r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (94)
Le composé 93 (14,7 mg, 4,1 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 31 pour donner le composé 94 (13,0 mg) après chromatographie d'exclusion de taille (Sephadex® LH20, 95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
CCM : Rf = 0,56, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 28/16/3,8/9 v/v/v/v Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4H2- amino-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumH1→4H2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- qlucopyranosylH1→4H2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4H2-amino-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumH1→4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D- qlucopyranoside (95)
A une solution du composé 94 (13 mg, 4,4 μmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (883 μl_) sont ajoutés du formiate d'ammonium (36 mg, 0,57 mmol) et du palladium sur charbon 10% (34 mg). Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore® LSWP 5 μm) et concentré à sec. Le résidu est déposé sur une colonne de gel Sephadex® G25-fine (95 x 2 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCI 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de gel Sephadex® G-25-fine (95 x 2 cm) éluée par de l'eau. Le produit brut 95 ainsi obtenu (2,5 mg) est utilisé tel quel dans l'étape suivante.
SCHEMA 20 : préparation de l'octasaccharide 99
83
Figure imgf000061_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4H(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f- butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)l9-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D- qlucopyranoside (96)
Le composé 83 (35,1 mg , 12,0 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 96 (46,3 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
[α]D 11 1 ° (c 0,95 ; CH2CI2)
Méthyl (méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3,4-di-O-benzyl- -α-L- idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O-ammonium sulfonato -azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α- D-glucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 2-0-ammonium sulfonato 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)- (méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido- 3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-6-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-2- {[(benzyloxy)carbonyl1amino)-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (97)
Le composé 96 (45,0 mg, 1 1 ,2 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 97 (30,8 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, N, N- diméthylformamide).
[α]D 14,7° (c 0,95 ; MeOH)
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- (1→4H(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)l?-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-glucopyranoside (98)
Le composé 97 (27,1 mg, 7,6 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29 pour donner le composé 98 (20,7 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
[α]D 14,4° (c 1 ,01 ; MeOH) Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-r(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-amino-2-désoxy-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)i9-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1 ^4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside (99) Le composé 98 (17,5 mg, 5,9 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 91 pour donner le composé 99 (9,5 mg).
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2081 ,38 ; masse expérimentale : 1993,28 ± 0,14 u.m.a. (acides iduroniques observés sous forme COOH).
SCHEMA 21 : préparation de l'octasaccharide 104
Figure imgf000063_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H(méthyl 3-0- benzyl-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-6-O-fe/f-butyldiphénylsilyl- 2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4ïl9-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)- (1→4)-6-O-benzoyl-3-O-benzyl-2-fr(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D- qlucopyranoside (100)
Une solution du composé 80 (355 mg , 0,117 mmol), d'anhydride benzoïque (75,8 mg, 0,335 mmol) et de triéthylamine (47,3 μl_, 0,335 mmol) dans le 1 ,2- dichloroéthane (5,6 ml_) est agitée à 600C pendant 24 heures puis 64 heures à température ambiante. Le mélange réactionnel est déposé sur une colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm) éluée par un mélange dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v suivie d'une chromatographie flash sur colonne de gel de silice (toluène/acétone 100/0→85/15 v/v) pour donner le composé 100 (193,2 mg).
CCM : Rf = 0,38, gel de silice, cyclohexane/acétate d'éthyle 2/1 v/v Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O- benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-[(méthyl 3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)1?-(méthyl 3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-6-O-benzoyl 3-O-benzyl-2- {[(benzyloxy)carbonyl1amino)-2-désoxy-α-D-glucopyranoside (101)
Le composé 100 (60,0 mg, 0,018 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 101 (46,1 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v).
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2564,66 ; masse expérimentale : 2563,66 ± 0,19 u.m.a.
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4H(méthyl 3-O-benzyl-2-O- triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1→4ïl?-(méthyl 3-O-benzv-2-O- triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-6-O-benzoyl-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (102)
Le composé 101 (42,9 mg, 0,016 mmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 102 (28,7 mg) après chromatographie sur colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol 1/1 v/v) puis chromatographie flash sur colonne de gel de silice Ciβ (40-60 μm ; A : méthanol, eau 5%, acétate d'ammonium 23 mM ; B : acétonitrile, méthanol 45%, eau 5%, acétate d'ammonium 17 mM ; A→ B 100/0→70/30) suivie d'un dessalage sur colonne Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-d→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4H(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-d→4)-(2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)l9-(3-O- benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-d→4)-3-O-benzyl-2- {r(benzyloxy)carbonyllamino)-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (103)
Le composé 102 (28,7 mg, 7,5 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 29 pour donner le composé brut 103 (17,3 mg).
Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-d→4)-(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-d→4H(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumVd→4H2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)l9-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumVd→4)-2-amino-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside (104)
Le composé 103 (17,3 mg, 5,7 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 91. Le composé brut 104, ainsi obtenu, est de nouveau saponifié. A une solution du composé brut 104 dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (506 μL) est ajoutée, à 00C une solution 0,7 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (202 μL, qsp pour avoir une concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 00C puis 16 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est chromatographie sur une colonne d'exclusion (Sephadex® G 25 fine, 95 x 2 cm, NaCI 0,2 M puis Sephadex® G 25 fine, 95 x 2 cm, eau) pour donner le composé 104 (6,5 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,45 ; 5,44 ; 5,43 ; 5,26 ; 5,25 ; 5,24 ; 5,18 ; 4,98 ppm SCHEMA 22 : préparation de l'octasaccharide 108
Figure imgf000066_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-6-O-te/f-
Figure imgf000066_0002
triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2- désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosylHI→4)-(méthyl 3-O-benzyl- 2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-d→4)-3-O-benzyl-2-désoxy- 2-r(benzyloxy)carbonyllamino-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (105)
Le composé 85 (31 ,4 mg, 1 1 ,6 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 28 pour donner le composé 105 (40,2 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (120 x 3 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v). Méthyl (méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3,4-di-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-d→4H6-O-ammonium sulfonato-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy- - α-D-qlucopyranosylHI→4)-(méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-α-L- idopyranosyluronate)-d→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)- (méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-(1→4)-(6-O- ammonium sulfonato-2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosyl)-d→4)-(méthyl 2-0-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-α-L-idopyranosyluronate)-d→4)-6-O-ammonium sulfonato-3-O-benzyl-2-r(benzyloxy)carbonyllamino-2-désoxy-α-D-qlucopyranoside
(106)
Le composé 105 (38,4 mg, 9,68 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 106 (28,4 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, N, N- diméthylformamide).
Rf = 0.21 (AcOEt-pyridine-AcOH-H2O 28/16/3.8/9). Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-d→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4H3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-d→4)-(2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-α-D-qlucopyranosylH1→4H3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithiumVd→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O- lithium sulfonato-α-D-qlucopyranosyl)-(1→'4)-(3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de lithiumVd→4 )-3-O-benzyl-2-désoxy-2- r(benzyloxy)carbonyllamino-6-O-lithium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (107)
Le composé 106 (28,4 mg, 7,62 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 89 pour donner le composé 107 (28,0 mg) après chromatographie sur colonne de gel Sephadex® LH20 (95 x 2 cm, dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v).
Rf = 0.12 (AcOEt-pyridine-AcOH-H2O 28/16/3.8/9). Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium Vd -4 V(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosylVd-4V(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium Vd -4 V(2-amino-2-désoxy-α-D- qlucopyranosylVd-4V(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium Vd -4 V (2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranosylVd-4V(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium Vd -4 V2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-qlucopyranoside (108)
Le composé 107 (5,8 mg, 2,85 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation du composé 91 pour donner le composé 108 (2,5 mg) qui est utilisé tel quel dans l'étape suivante.
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,45 ; 5,44 ; 5,42 ; 5,26 ;
5,25 ; 5,24 ; 5,17 ; 5,03 ppm
SCHEMA 23 : préparation de l'octasaccharide 11 1
Figure imgf000069_0001
Méthyl (méthyl 3,4-di-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L- idopyranosyluronateH1→4H2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D-qlucopyranosylHd→4)-(méthyl 3-O-benzyl-2-O-triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate)-(1→'4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-
Figure imgf000069_0002
triéthylammonium sulfonato-α-L-idopyranosyluronateH1→4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-6-O-triéthylammonium sulfonato-α-D- qlucopyranoside (109)
Le composé 87 (37,0 mg, 0,15 mmol) est séché par co-distillation de N,N- diméthylformamide (3 x 1 ,4 ml_) puis est mis en solution dans le Λ/,Λ/-diméthylformamide (1 ,4 ml_). A cette solution on ajoute le complexe trioxyde de soufre-triéthylamine (109 mg ; 6,01 mmol). Le mélange est agité pendant 16 heures à 55 0C à l'abri de la lumière puis l'excès de réactif est détruit avec du méthanol (25 μL). Le milieu réactionnel est déposé sur une colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm) éluée par mélange dichlorométhane/éthanol 1/1 pour conduire au composé 109 (59,8 mg).
Rf = 0,26, gel de silice, acétate d'éthyle/pyridine/acide acétique/eau 28/16/3,8/9. Méthyl (3,4-di-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2-azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)- r(1→4H3-O-benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-(2- azido-3-O-benzyl-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-glucopyranosylïl9-(1→4)-(3-O- benzyl-2-O-lithium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de lithium)-(1→4)-3-O-benzyl-2- benzyloxycarbonylamino-2-désoxy-6-O-lithium sulfonato-α-D-glucopyranoside (110)
A une solution du composé 109 (57,3 mg, 13,7 μmol) dans un mélange tétrahydrofurane/méthanol 1/1 v/v (2,2 ml_) est ajoutée, à 0 0C, une solution 0,7 M d'hydroxyde de lithium dans l'eau (0,88 ml_ ; q.s.p concentration finale de 0,2 M). Après 1 heure à 0 0C puis 16 heures à température ambiante, le milieu réactionnel est déposé sur une colonne Sephadex® LH20 (120 x 3 cm) éluée par mélange dichlorométhane/éthanol/eau 50/50/1 v/v/v pour conduire au composé 110 (38,1 mg) [α]D 13,1 ° (c 1 ,0 ; MeOH)
Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosylH(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranosyl)i9-(1→4H2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-amino-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-α-D-glucopyranoside (111) A une solution du composé 110 (40 mg, 12,8 μmol) dans un mélange tert- butanol/eau 1/1 v/v (2,6 ml_) sont ajoutés du formiate d'ammonium (105 mg, 1 ,67 mmol) et du palladium sur charbon 10% (260 mg). Après 4 heures d'agitation à température ambiante, le milieu réactionnel est filtré (filtre Millipore® LSWP 5 μm) et concentré à sec. Le résidu est déposé sur une colonne de gel Sephadex® G25-fine (95 x 2 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCI 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de gel Sephadex® G-25-fine (95 x 2 cm) éluée par de l'eau. Le produit brut 111 , ainsi obtenu (14,7 mg), est utilisé tel quel dans l'étape suivante.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2285,47 ; masse expérimentale : 2197,20 ± 0,34 u.m.a. (acides iduroniques observés sous forme COOH). Exemples de composés selon l'invention :
EXEMPLE 1 : Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- qlucopyranosyl)-(1→4H(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosyl- (1→4)l9-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranoside (composé n° 1)
Figure imgf000071_0001
A une solution du composé 30 (180 mg, 0,077 mmol) dans une solution saturée aqueuse d'hydrogénocarbonate de sodium (15 ml_, 100 mL/mmol) fraîchement préparée sont ajoutés, à 00C et sous atmosphère d'argon, l'hydrogénocarbonate de sodium solide
(1 ,17 g, 13,9 mmol) puis par portions en 30 minutes le complexe pyridine-trioxyde de soufre (985 mg, 6,19 mmol). Après 16 heures à température ambiante, on dépose le mélange réactionnel sur une colonne de Sephadex® G-25 fine (90 x 3 cm) éluée par une solution aqueuse de NaCI 0,2 M. Les fractions contenant le composé attendu sont réunies, et déposées sur une colonne de Sephadex® G-25 fine (90 x 3 cm) éluée par de l'eau. Après concentration des fractions contenant le composé attendu, on obtient 200 mg du composé 1.
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,45 ; 5,42 (2 H) ; 5,22 ; 5,21 ; 5,20 ; 5,18 ; 5,03 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2735,72 ; masse expérimentale : 2734 u.m.a.
EXEMPLE 2 : Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy -6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- qlucopyranosyl)-(1→4H(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosyl- (1→4)i3-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1→4)-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranoside (composé n° 2)
Figure imgf000072_0001
Le composé 37 (29,5 mg, 1 1 ,56 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 2 (7,4 mg) après purification sur chromatographie échangeuse d'ions (colonne SAX, conditions : 0,5 mL/min, A : H2O, B : NaCI 2 M, gradient 30% de B à 90% en 30 min) suivie d'une chromatographie sur colonne de gel Sephadex® G-25 fine (54 x 1 ,7 cm, eau).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,45 ; 5,42 ; 5,41 (2 H) ; 5,22 ; 5,21 (2H) ; 5,20 ; 5,18 ; 5,03 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 3401 ,12 ; masse expérimentale : 3400,40 ± 0,76 u.m.a.
EXEMPLE 3 : [Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumHI→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- qlucopyranosylH1→4H(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosyl)- (1→4)1?-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosidel-uronate de sodium (composé n° 3)
Figure imgf000072_0002
Le composé brut 55 (48,7 mg) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 3 (37,6 mg ).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,43 (2H) ; 5,35 ; 5,25 ; 5,24 ; 5,19 ; 5,18 ; 5,09 ppm. EXEMPLE 4 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosylHI→4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4H2-désoxy-2-sodium
(sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosylH1→4H2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodiumH1→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium
(sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosylH1→4H2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranoside (composé n° 4)
Figure imgf000073_0001
Le composé 91 (5,5 mg, 2,64 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 4 (4,5 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,44 ; 5,40 ; 5,31 ; 5,25 ; 5,24 ; 5,22 ; 5,16 ; 5,03 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2489,55 ; masse expérimentale : 2465,63 ± 0,64 u.m.a.
EXEMPLE 5 : Méthyl (2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosylHI→4)-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranosylHI→4H2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate de sodiumH1→4H2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-
Figure imgf000073_0002
(1 ^4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranoside (composé n° 5)
Figure imgf000073_0003
Le composé 95 (2,5 mg, 1 ,2 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 5 (1 ,9 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,45 ; 5,43 ; 5,33 ; 5,25 ; 5,23 ; 5,21 ; 5,16 ; 5,05 ppm.
EXEMPLE 6 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium
(sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (composé n° 6)
Figure imgf000074_0001
Le composé 99 (8,9 mg, 4,28 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 6 (7,3 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,46 ; 5,32 (2 H) ; 5,26 ; 5,25 ; 5,21 ; 5,20 ; 5,05 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2489,55 ; masse expérimentale : 2488,00 ± 1 ,5 u.m.a.
EXEMPLE 7 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)- (1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato- 2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (composé n° 7)
Figure imgf000075_0001
Le composé 108 (3,7 mg, 1 ,42 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 7 (1 ,8 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,46 ; 5,42 ; 5,31 ; 5,26 ; 5,24 ; 5,22 ; 5,18 ; 5,03 ppm.
EXEMPLE 8 : Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- qlucopyranosylHd→4H2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-
(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- qlucopyranosyl)1?-(1→4H2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-(sulfonato)amino-α-D-qlucopyranoside
(composé n° 8)
Figure imgf000075_0002
Le composé 111 (42 mg, 18,4 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 8 (44,1 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,45 ; 5,44 ; 5,25 ; 5,24 (2H) ; 5,20 ; 5,04 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2693,84 ; masse expérimentale : 2692,97 ± 0,18 u.m.a.
EXEMPLE 9 : Méthyl (2-0-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodiumHI→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonato)amino-α-D- qlucopyranosylHd→4H2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-
(1→4H2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- qlucopyranosyl)l?-(1→4H2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-qlucopyranoside (composé n° 9)
Figure imgf000076_0001
Le composé 104 (6,5 mg, 2,98 μmol) est traité selon le même mode opératoire que celui décrit pour la préparation de l'exemple 1 pour donner le composé 9 (6,0 mg).
1H RMN [600 MHz] (D2O) δ des protons anomériques : 5,44 (2H) ; 5,43 ; 5,22 (2H) ; 5,19 ; 5,18 ; 5,05 ppm.
Masse : méthode "ESI", mode négatif : masse théorique= 2591 ,60 ; masse expérimentale : 2591 ,80 ± 0,33 u.m.a.
Les composés selon l'invention ont fait l'objet d'essais pharmacologiques permettant de déterminer leur effet agoniste des récepteurs des FGFs et leur activité sur l'angiogenèse, ainsi que sur la revascularisation post-ischémique.
Modèle d'anqioqenèse in vitro : activité spécifique envers le FGF2
Le modèle d'angiogenèse in vitro correspond à un réarrangement de cellules endothéliales veineuses humaines sur une matrice biologique. La matrice est réalisée en distribuant, dans chaque puits d 'une plaque de 96 puits (Becton Dickinson 353872), 60 μl de Matrigel® dilué au 1/3 (Growth factor reduced Matrigel® : Becton Dickinson 356230) dans du collagène (rat Tail collagène, type I : Becton Dickinson 354249 ). La matrice biologique se durcit après 1 heure à 37°C.
Des cellules endothéliales veineuses humaines (HUVEC réf : C-12200 - Promocell) ensemencées sur la matrice biologique à 7800 cellules/puits dans 120 μl de milieu EBM® (Endothelial Basai Médium, Lonza C3121 ) + 2% SVF (sérum de veau fœtal - Lonza) + hEGF (Epidermal Growth Factor Humaine Recombinante - Lonza) 10 μg/ml. Les cellules sont stimulées avec le FGF2 (R&D Systems / 234 - FSE - 0 50) 10 ng/ml ou avec les produits de l'invention pendant 18 heures à 37°C en présence de 5% de CO2. Après 24 heures, les cellules sont observées au microscope (objectif X4) et l'analyse de la longueur des pseudo-tubules est effectuée à l'aide d'un logiciel d'image (BIOCOM-logiciel Visiolab 2000). Dans ce test d'angiogenèse in vitro, les composés de l'invention présentent une activité spécifiq quuee comprise entre 10"6 M et 10"12 M. Par exemple, les composés n° 1 et 7 sont actifs à 10"6 M.
Le composé 10 de formule suivante :
Figure imgf000077_0001
10 testé sous forme de sel de sodium, a lui aussi démontré une activité dans ce test d'angiogenèse in vitro.
Par ailleurs, on a démontré dans un test cellulaire in vitro que l'octasaccharide n° 8 selon l'invention, l'heptasaccharide n° 3 et le décasaccharide n° 2 sont de meilleurs activateurs du FGF-2 que leur analogue hexasaccharidique (composé décrit par C. Tabeur et al. dans Bioorg. & Med. Chem., 1999, 7, 2003-2012). De plus, la plupart des autres composés octasaccharidiques selon l'invention, comme par exemple le composé n° 7, possèdent la même activité que l'octasaccharide n° 8 sur des modèles in vitro.
Modèle d'implant en cellulose chez la souris
Ce modèle est une adaptation du modèle décrit par Andrade et al.
(Microvascular Research, 1997, 54, 253-61 ) afin de tester des produits pharmacologiques susceptibles d'activer l'apparition de l'angiogenèse.
Les animaux (souris blanches BALB/c J consanguines) sont anesthésiées avec un mélange Xylazine (Rompun®, 10 mg/kg) / Kétamine (Imalgène® 1000, 100 mg/kg) par voie intra-péritonéale. Le dos de l'animal est rasé et désinfecté à l'Héxomédine®. Une poche d'air est créée en sous-cutané sur le dos de la souris par injection de 5 ml d'air stérile. Une incision d'environ 2 cm, sur le haut du dos de l'animal est réalisée afin d'introduire un implant de cellulose stérile (disque de 1 cm de diamètre, 2 mm d'épaisseur, Cellspon® ref 0501 ) imprégné avec 50 μl de solution stérile contenant le produit à tester. L'incision est ensuite suturée et nettoyée à l'Héxomédine®. Les jours suivants la pose de l'implant, les souris peuvent recevoir dans l'implant le produit par une injection à travers la peau (50 μl/implant/jour) sous anesthésie gazeuse (Isoflurane à 5% (Aerrane®, Baxter)).
Sept jours après la pose de l'éponge, les souris sont sacrifiées par une dose létale de Pentobarbital sodique (CEVA santé animale), administrée par voie intra- péritonéale. La peau est ensuite découpée, environ 1 cm autour de l'éponge en évitant la cicatrice afin de dégager la peau et l'éponge. L'éponge est ensuite découpée en plusieurs morceaux et placée dans un tube Ribolyser® contenant 1 ml de tampon de lyse (CeII Death Détection ELISA, Roche). Les tubes sont agités 4 fois consécutives, durant 20 secondes, force 4, au broyeur cellulaire (FastPrep® FP 120). Les tubes sont ensuite centrifugés 10 minutes à 2000 g à 200C et les surnageants sont congelés à
-200C en attendant le dosage de l'hémoglobine. Le jour du dosage, les tubes sont à nouveau centrifugés après décongélation et la concentration d'hémoglobine est mesurée avec le réactif de Drabkin (Sigma, volume à volume) par lecture au spectrophotomètre à 405 nm contre une gamme étalon d'hémoglobine bovine (Sigma).
La concentration d'hémoglobine dans chaque échantillon est exprimée en mg/ml d'après la régression polynomiale réalisée à partir de la gamme. Les résultats sont exprimés en valeur moyenne (± sem) pour chaque groupe. Les différences entre les groupes sont testées avec une ANOVA suivie d'un test de Dunnett sur la racine carrée des valeurs.
Dans ce test in vivo, les composés de l'invention ont démontré une activité spécifique comprise entre 5 et 45 ng/site. Ainsi, les composés 1 et 7 sont actifs à la concentration de 45 ng/site. II apparaît donc que les composés selon l'invention ont une activité agoniste des récepteurs des FGFs et une activité sur l'angiogenèse, ainsi que sur la revascularisation post-ischémique. Ces composés peuvent donc être utilisés pour la préparation de médicaments, notamment de médicaments utiles pour le traitement des maladies nécessitant une activation des récepteurs des FGFs ou de médicaments utiles dans des pathologies nécessitant une activation de l'angiogenèse et une revascularisation post- ischémique.
Ainsi, selon un autre de ses aspects, l'invention a donc pour objet des médicaments qui comprennent un composé de formule (l)/(l') ou le composé 10, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ces derniers. Plus généralement, l'invention a pour objet des médicaments qui comprennent un composé de formule (I) :
Figure imgf000079_0001
dans laquelle :
- R1 représente un groupe -OSO3 " ou groupe hydroxyle,
- R2 représente soit un groupe -O-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle :
Figure imgf000079_0002
- R3 représente un disaccharide de formule
Figure imgf000079_0003
dans laquelle :
- R4 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R5 représente un disaccharide de formule (IV) :
Figure imgf000079_0004
dans laquelle :
- R6 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle, - R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (Vl) :
Figure imgf000080_0001
(V) (Vl) dans laquelle :
- R8 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) :
Figure imgf000080_0002
dans laquelle Ri0 représente un groupe -O-alkyle,
à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -O-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -O-alkyle ; et R1, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles. De tels composés regroupent ceux de formule (l)/(l') définis ci-avant, ainsi que l'heptasaccharide 10 défini précédemment, décrit dans la demande de brevet US 2006/0079483 A1.
Ces médicaments trouvent leur emploi en thérapeutique, notamment dans le traitement de l'ischémie (ischémie cardiaque, ischémie artérielle des membres inférieurs), le traitement des maladies associées à un rétrécissement ou à une obstruction des artères ou des artérites, le traitement des angines de poitrine, le traitement de la thromboangéite oblitérante, le traitement de l'athérosclérose, le traitement de l'inhibition de la resténose après angioplastie ou endoartérectomie, le traitement de la cicatrisation, le traitement pour la régénération musculaire, le traitement pour la survie des myoblastes, le traitement de la neuropathie périphérique, le traitement des dommages nerveux post-opératoires, le traitement de déficiences nerveuses telles que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie du prion et la dégénérescence neuronale chez l'alcoolique, le traitement de démences, le traitement pour l'amélioration de la survie du greffon de pancréas bioartificiel chez le patient diabétique, le traitement de l'amélioration de la la revascularisation des greffons et de la survie des greffes, le traitement de la dégénérescence rétinienne, le traitement de la rétinite pigmentaire, le traitement de rostéoarthrite, le traitement de la pré- éclampsie ou le traitement des lésions vasculaires et du syndrome de détresse respiratoire aiguë, le traitement pour la réparation des cartilages, le traitement pour la réparation et la protection osseuse, le traitement pour la réparation et la protection des follicules pileux et pour la protection et la régulation de la croissance capillaire.
L'ischémie est une diminution de la circulation artérielle dans un organe entraînant une baisse de la concentration en oxygène dans les tissus lésés. Dans les mécanismes de revascularisation post-ischémiques, deux mécanismes principaux entrent en jeu : l'angiogenèse et l'artériogenèse. L'angiogenèse est le processus de génération de nouveaux vaisseaux capillaires à partir de vaisseaux pré-existants. L'artériogenèse contribue au développement (augmentation en taille et en calibre) des vaisseaux collatéraux autour de la zone ischémiée ou avasculaire.
Parmi les facteurs de croissance impliqués dans ces processus de revascularisation, la famille des FGF et notamment le FGF-2 a été la plus largement décrite (Post, M. J., Laham, R., Sellke, F. W. & Simons, M. Therapeutic angiogenesis in cardiology using protein formulations. Cardiovasc Res 49, 522-31 , 2001 ).
Ainsi, le FGF2 et ses récepteurs représentent des cibles très pertinentes pour les thérapies visant à induire les processus d'angiogenèse et d'artériogenèse (Khurana, R. & Simons, M. Insights from angiogenesis trials using fibroblast growth factor for advanced arteriosclerotic disease. Trends Cardiovasc Med 13, 1 16-22, 2003).
L'une des applications des composés de l'invention est le traitement post- ischémique après occlusion au niveau cardiaque ou des artères périphériques. En ce qui concerne le traitement de l'ischémie cardiaque, un des essais cliniques les plus prometteurs est un essai clinique où du FGF-2 était séquestré dans des micro-sphères d'alginate en présence d'héparine (Laham, R. J. et al. Local perivascular delivery of basic fibroblast growth factor in patients undergoing coronary bypass surgery: results of a phase I randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Circulation 100, 1865-71 , 1999). Ces micro-sphères étaient implantées proche du foyer ischémique au niveau du myocarde. Après 90 jours, tous les patients traités au FGF2 ne présentaient aucun symptôme cardiaque ischémique. En comparaison, dans le groupe contrôle, 3 des 7 patients possédaient à 90 jours des symptômes persistants et 2 patients ont eu recours à de la chirurgie vasculaire. De façon intéressante, le bénéfice de la thérapie étaient maintenu après 3 ans de suivi. Ces observations suggèrent que des composés mimant le FGF2 peuvent représenter une thérapie de choix pour le traitement des conséquences de l'ischémie cardiaque.
Trois essais cliniques sur l'injection de FGF2 dans l'artère coronaire ont été réalisés lors de traitement du rétrécissement des artères coronaires (Laham, R. J. et al. Intracoronary basic fibroblast growth factor (FGF-2) in patients with severe ischémie heart disease: results of a phase I open-label dose escalation study. J Am CoII Cardiol 36, 2132-9, 2000; Simons, M. et al. Pharmacological treatment of coronary artery disease with recombinant fibroblast growth factor-2: double-blind, randomized, controlled clinical trial. Circulation 105, 788-93, 2002 ; Unger, E. F. et al. Effects of a single intracoronary injection of basic fibroblast growth factor in stable angina pectoris. Am J Cardiol 85, 1414-9, 2000). Le résultat de ces trois essais montre que les infusions intra-coronaires de FGF2 sont bien tolérées et améliorent significativement l'état des patients. Ainsi, les composés décrits dans l'invention peuvent trouver une application dans le traitement des maladies associées à un rétrécissement des artères coronaires et notamment dans le traitement des angines de poitrine. Les maladies des artères distales et notamment les artérites des membres inférieurs sont dues à l'obstruction chronique des artérioles irriguant les extrémités. Ces pathologies touchent principalement les membres inférieurs. Dans un essai clinique de phase I, des patients ayant des pathologies des artères périphériques entraînant la claudication ont reçu des injections de FGF2 (Lazarous, D. F. et al., Basic fibroblast growth factor in patients with intermittent claudication: results of a phase I trial. J Am CoII Cardiol 36, 1239-44, 2000). Dans ce contexte, le FGF2 était bien toléré chez ces patients et les données cliniques suggèrent un effet bénéfique du FGF2 notamment sur l'amélioration de la marche. Ces données cliniques suggèrent que les composés de l'invention représentent un outil thérapeutique de choix pour le traitement des maladies associées à une obstruction des artères distales. La maladie de Buerger ou thromboangéite oblitérante affecte les structures vasculaires distales et se caractérisent par une artérite distale des jambes avec douleurs et ulcérations. Dans ce contexte, une induction de l'angiogenèse et de la vasculogenèse représenterait une thérapie pour cette pathologie. Les composés de ladite invention représentent une thérapie de choix pour la thromboangéite oblitérante.
La neuropathie périphérique est une atteinte axonale ou démyélinisante du nerf périphérique moteur et/ou sensitif qui entraîne une désensibilisation des membres distaux. Une des complications secondaires majeures du diabète est le développement chronique d'une neuropathie périphérique. Dans ce contexte, II a été démontré que le FGF2 induisait une régénération axonale qui pourrait être une thérapie de choix dans dans le traitement de la lésion des nerfs périphériques et donc dans la neuropathie périphérique (Basic fibroblast growth factor isoforms promote axonal elongation and branching of adult sensory neurons in vitro. Klimaschewski L, Nindl W, Feurle J, Kavakebi P, Kostron H. Neuroscience. 2004;126(2):347-53). De par l'activité agoniste des récepteurs du FGF, les composés de ladite invention représenteraient un traitement de choix dans la neuropathie périphérique chez le patient sain ou diabétique.
Il est clairement établit que le FGF2 est un activateur des cellules nerveuses durant le développement. Des résultats récents suggèrent que le FGF2 serait également un facteur pivotai pour promovoir la régénération des neurones chez l'adulte (Sapieha PS, Peltier M, Rendahl KG, Manning WC, Di Polo A., Fibroblast growth factor- 2 gène delivery stimulâtes axon growth by adult retinal ganglion cells after acute optic nerve injury. Mol CeII Neurosci. 2003 Nov;24(3):656-72.). Par leurs activités agonistes des récepteurs des FGF, les composés de ladite invention représenterait une thérapie de choix dans la réparation des dommages nerveux post-opératoires, dans la réparation de déficiences nerveuses tel que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie du prion, la dégénérescence neuronale chez l'alcoolique ou dans les cas de démences.
La prolifération et la migration des cellules musculaires lisses vasculaires contribuent à l'hypertrophie intimale des artères et joue ainsi un rôle prépondérant dans l'athérosclérose et dans la resténose après angioplastie et endoarterectomie. Il a été démontré qu'un facteur angiogène, le VEGF, réduisait significativement l'épaississement de l'intima en accélérant la ré-endothélialisation (Van Belle, E., Maillard, L., Tio, F. O. & Isner, J. M. Accelerated endothelialization by local delivery of recombinant human vascular endothelial growth factor reduces in-stent intimai formation. Biochem Biophys Res Commun 235, 31 1-6, 1997). Ainsi, les composés de la présente invention, possédant une activité pro-angiogène, peuvent être utiles dans le traitement de l'athérosclérose et dans l'inhibition de la resténose après angioplastie ou endoartérectomie.
Le réseau vasculaire est essentiel au développement et à la préservation des tissus. En promouvant la délivrance des nutriments, de l'oxygène et des cellules, les vaisseaux sanguins aident à maintenir l'intégrité fonctionnelle et structurale des tissus. Dans ce contexte, l'angiogenèse et la vasculogenèse permettent de préserver et de perfuser les tissus après une ischémie. Les facteurs de croissance angiogéniques comme le VEGF et le FGF2 favorisent ainsi la revascularisation pour la régénération des tissus. Les composés présentés dans l'invention pourraient représenter un traitement de choix dans le traitement pour la régénération des muscles.
Les processus de régénération musculaire sur les muscles dystrophiques ou normaux dépendent de l'apport de cytokines et de facteurs de croissance angiogéniques au niveau local (Fibbi, G., D'Alessio, S., Pucci, M., Cerletti, M. & DeI Rosso, M. Growth factor-dependent prolifération and invasion of muscle satellite cells require the cell-associated fibrinolytic System. Biol Chem 383, 127-36, 2002). Il a été proposé que le système FGF était un système critique de la régénération musculaire, de la survie et de la prolifération des myoblastes (Neuhaus, P. et al. Reduced mobility of fibroblast growth factor (FGF)-deficient myoblasts might contribute to dystrophic changes in the musculature of FGF2/FGF6/mdx triple-mutant mice. Mol CeII Biol 23, 6037-48, 2003). Le FGF2 ainsi que les composés de ladite invention pourraient être exploités afin de promouvoir la régénération cardiaque. Ils amélioreraient ainsi la perfusion du myocarde après ischémie (Hendel, R. C. et al. Effect of intracoronary recombinant human vascular endothelial growth factor on myocardial perfusion: évidence for a dose-dependent effect. Circulation 101 , 1 18-21 , 2000) ainsi que la survie et la progression de myoblastes transplantés et notamment dans la dystrophie musculaire de Duchenne.
L'angiogenèse est un phénomène essentiel durant la cicatrisation cutanée. Les nouveaux vaisseaux formés apportent l'oxygène et les nutriments nécessaires à la réparation tissulaire. Dans le cas de patient diabétique, la cicatrisation est un processus lent et difficile présentant des défauts d'angiogenèse. Les FGFS font partie des facteurs de croissance les plus impliqués dans les processus d'angiogenèse durant la phase de cicatrisation. Certains FGF sont fortements sur-régulés dans les cellules du derme après une blessure cutanée. Par leurs activités agonistes des récepteurs du FGF, les composés de ladite invention représenteraient une thérapie de choix pour le traitement de la cicatrisation chez le patient sain ou diabétique
La transplantation de pancréas bio-artificiel est une technique très prometteuse pour le traitement de certains type de diabète. Il a été démontré, chez le rat diabétique, que la vascularisation dans les pancréas bio-artificiel était beaucoup plus importante quand les pancréas étaient imprégnées de microsphères portant du FGF2 (Sakurai, Tomonori; Satake, Akira, Sumi, Shoichiro, Inoue, Kazutomo, Nagata, Natsuki, Tabata, Yasuhiko. The Efficient Prevascularization Induced by Fibroblast Growth Factor 2 With a Collagen-Coated Device Improves the CeII Survival of a Bioartificial Pancréas. Pancréas. 28(3):e70-e79, April 2004). Cette revasculaisation améliore ainsi la survie des pancréas bio-artificiel implantés et par conséquent la survie du greffon. Par leurs activités agonistes des récepteurs du FGF, les composés de ladite invention représenteraient une thérapie de choix dans l'amélioration de la survie du greffon de pancréas bioartificiel chez le patient diabétique et de façon plus générale dans l'amélioration de la la revascularisation des greffons et par conséquent dans la survie des greffes.
La rétinite pigmentaire est une pathologie impliquant la dégénérescence progressive de la rétine caractérisée par une dégénérescence des photorécepteurs et une oblitération des vaisseaux rétiniens. Lahdenranta et al. (An anti-angiogenic state in mice and humans with retinal photoreceptor cell degeneration. Proc Natl Acad Sci USA 98, 10368-73, 2001 ) ont proposé que des facteurs de croissance angiogéniques régulent la coordination neurale et la vascularisation associée de la rétine en fonctionnant simultanément comme facteurs de survie des photo récepteurs et comme régulateur des cellules endothéliales. Dans ce contexte, l'injection intra-vitréenne de FGF2 retarde la dégénérescence des photorécepteurs en agissant sur la survie et sur l'angiogenèse rétinienne (Faktorovich, E. G., Steinberg, R. H., Yasumura, D., Matthes, M. T. & LaVail, M. M. Basic fibroblast growth factor and local injury protect photoreceptors from light damage in the rat. J Neurosci 12, 3554-67,1992). Ces observations démontrent l'intérêt des composés décrits dans l'invention comme thérapie dans la dégénérescence rétinienne et notamment dans la rétinite pigmentaire. Dans le domaine de l'ostéoarthrite, de nombreuses études sont réalisées pour restaurer le cartilage articulaire détruit. Dans ce contexte, il a été reporté que la prolifération et la différenciation des chondrocytes étaient stimulées par le FGF2 in vitro (Kato Y, Gospodarowicz D. Sulfated proteoglycan synthesis by confluent cultures of rabbit costal chondrocytes grown in the présence of fibroblast growth factor. J CeII Biol. 1985 Feb;100(2):477-85). De plus, Cuevas et al. ont montré que le FGF2 induit la réparation du cartilage in vivo (Cuevas P, Burgos J, Baird A. Basic fibroblast growth factor (FGF) promûtes cartilage repair in vivo. Biochem Biophys Res Commun. 1988 Oct 31 ;156(2):611-8). Takafuji et al. ont également montré que des implants de FGF2 amélioraient de façon significative des cartilages temporo-mandibulaires de lapins souffrant d'ostéoarth rites (Takafuji H, Suzuki T, Okubo Y, Fujimura K, Bessho K Régénération of articular cartilage defects in the temporomandibular joint of rabbits by fibroblast growth factor-2: a pilot study. lnt J Oral Maxillofac Surg. 2007 Oct;36(10):934- 7). Ces observations démontrent l'intérêt des composés décrits dans l'invention comme thérapie dans le traitement de l'ostéoarthrite et de la réparation des cartilages.
Dans le domaine de la réparation osseuse, un des besoins essentiels est de trouver des agents qui stimulent la formation de l'os. Parmi les principaux facteurs de croissance, il est établi que l'administration systémique de FGF2 facilite la réparation de l'os (Accélération of fracture healing in nonhuman primates by fibroblast growth factor-2. Kawaguchi H, Nakamura K, Tabata Y, Ikada Y, Aoyama I, Anzai J, Nakamura T, Hiyama Y, Tamura M. J Clin Endocrinol Metab. 2001 Feb;86(2), 875-880). L'application locale de FGF2 dans des matrices de gélatine accélère la réparation osseuse chez des primates suggérant l'utilité clinique du FGF2 dans le traitement des fractures. Par les propriétés agonistes pour les récepteurs du FGF, les composés de ladite invention pourrait représenter un traitement de choix dans la réparation osseuse
La pré-eclampsie est une pathologie du placenta associée à un défaut de vascularisation (Sherer, D. M. & Abulafia, O. Angiogenesis during implantation, and placental and early embryonic development. Placenta 22, 1-13, 2001 ). Ces défauts de vascularisation seraient dus à un défaut d'angiogenèse et entraîneraient des perturbations au niveau du placenta pouvant aboutir à la mort du fœtus. Les composés de l'invention pourraient être un traitement de choix pour pallier à un défaut d'angiogenèse dans les placentas pré-éclamptiques. En plus des effets inducteurs de l'angiogenèse, les facteurs de croissance comme le VEGF ou le FGF2 protègent les cellules endothéliales des inducteurs intrinsèques et extrinsèques de l'apoptose. La voie de signalisation intrinsèque est activée par les mitochondries en réponse à un stress comme la déprivation ou les dommages sur l'ADN, alors que la voie de signalisation extrinsèque est induite par la liaison de facteurs pro-apoptotique comme le TNF-α ou Fas. Il est maintenant clairement décrit que le VEGF et le FGF2 sont deux facteurs de survie des cellules endothéliales (RoIe of Raf in Vascular Protection from Distinct Apoptotic Stimuli : A Alavi, J. D. Hood, R. Frausto, D. G. Stupack, D.A. Cheresh : Science 4 JuIy 2003: Vol. 301. no. 5629, pp. 94-96). Le Syndrome de Détresse Respiratoire Aiguë (ARDS) se caractérisent par des problèmes cardio-vasculaires et neuropsychiatriques. Dans le cadre des problèmes cardio-vasculaires les patients présentent des lésions vasculaires importantes et notamment une induction de l'apoptose des cellules endothéliales élevée. Récemment, Harnacher & al. ont démontré que les fluides de lavages bronchoalvéolaires de patients atteint d'ARDS présentaient une activité pro-apoptotique contre les cellules endothéliales micro-vasculaire de poumon (Tumor necrosis factor- alpha and angiostatin are mediators of endothelial cytotoxicity in bronchoalveolar lavages of patients with acute respiratory distress syndrome. Am J Respir Crit Care Med. 2002 Sep 1 ;166(5):651-6 : Harnacher J, Lucas R, Lijnen HR, Buschke S, Dunant Y, Wendel A, Grau GE, Suter PM, Ricou B.). Par leur activité de survie sur les cellules endothéliales, les produits de l'invention pourraient présenter un traitement de choix dans l'amélioration vasculaire des patients atteints de lésions vasculaires et notamment des patients atteint d'ARDS. La surrégulation endogène de FGF7 (ou KGF) et de FGF18 semble être un important mécanisme pour favoriser la prolifération, la migration et la protection des follicules pileux dans des cas pathologiques ou suite à un traitement tumoral (Comprehensive Analysis of FGF and FGFR Expression in Skin: FGF18 Is Highly Expressed in Hair Follicles and Capable of Inducing Anagen from Telogen Stage Hair Follicles. Mitsuko Kawano, Akiko Komi-Kuramochi, Masahiro Asada, Masashi Suzuki, Junko Oki, Ju Jiang and Toru Imamura). Par leur activité agoniste sur les récepteurs du FGF, les composés de ladite invention pourraient présenter un traitement de choix pour la réparation et la protection des follicules pileux et dans la protection et la régulation de la croissance capillaire. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne des compositions pharmaceutiques comprenant, en tant que principe actif, un composé selon l'invention ou un composé 10. Ces compositions pharmaceutiques contiennent une dose efficace d'au moins un composé selon l'invention ou du composé 10, ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable. Lesdits excipients sont choisis selon la forme pharmaceutique et le mode d'administration souhaité, parmi les excipients habituels qui sont connus de l'Homme du métier.
Ainsi, l'invention a pour objet une composition pharmaceutique comprenant, en tant que principe actif, au moins un composé de formule (I) dans laquelle :
- Ri représente un groupe -OSO3 " ou groupe hydroxyle,
- R2 représente soit un groupe -O-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle :
Figure imgf000088_0001
- R3 représente un disaccharide de formule
Figure imgf000088_0002
dans laquelle :
- R4 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R5 représente un disaccharide de formule (IV) :
Figure imgf000088_0003
dans laquelle : - R6 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (Vl) :
Figure imgf000089_0001
(V) (Vl) dans laquelle :
- R8 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) :
Figure imgf000089_0002
dans laquelle Ri0 représente un groupe -O-alkyle,
à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -O-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -O-alkyle ; et R1, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles,
ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
De tels composés regroupent ceux de formule (l)/(l') définis ci-avant, ainsi que l'heptasaccharide 10 défini précédemment, décrit dans la demande de brevet US 2006/0079483 A1.
Dans les compositions pharmaceutiques de la présente invention pour l'administration orale, sublinguale, sous-cutanée, intramusculaire, intra-veineuse, topique, locale, intratrachéale, intranasale, transdermique ou rectale, le principe actif ci-dessus ou son sel peut être administré sous forme unitaire d'administration, en mélange avec des excipients pharmaceutiques classiques, aux animaux et aux êtres humains pour la prévention ou le traitement des troubles ou des maladies ci-dessus.
Les formes unitaires d'administration appropriées comprennent les formes par voie orale telles que les comprimés, les gélules molles ou dures, les poudres, les granules et les solutions ou suspensions orales, les formes d'administration sublinguale, buccale, intratrachéale, intraoculaire, intranasale, par inhalation, les formes d'administration topique, transdermique, sous-cutanée, intramusculaire ou intraveineuse, les formes d'administration rectale et les implants. Pour l'application topique, on peut utiliser les composés selon l'invention dans des crèmes, gels, pommades ou lotions.
Les formes d'administration injectables sont particulièrement avantageuses, comprenant de façon classique le composé actif mis en solution dans de l'eau pour injection, en présence de chlorure de sodium. La dose unitaire de composé actif doit être adaptée à l'effet thérapeutique recherché ; elle peut être comprise par exemple entre 0.1 et 100 mg de principe actif. La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également l'utilisation d'un composé selon l'invention ou d'un composé 10, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables, pour le traitement des pathologies ci-dessus indiquées. Ainsi, l'invention a pour objet un composé de formule (I) dans laquelle :
- R1 représente un groupe -OSO3 " ou groupe hydroxyle,
- R2 représente soit un groupe -O-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle :
Figure imgf000090_0001
- R3 représente un disaccharide de formule
Figure imgf000091_0001
dans laquelle :
- R4 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R5 représente un disaccharide de formule (IV) :
Figure imgf000091_0002
dans laquelle :
- R6 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (Vl) :
Figure imgf000091_0003
(V) (Vl) dans laquelle :
- R8 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) :
Figure imgf000091_0004
dans laquelle R10 représente un groupe -O-alkyle,
à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -O-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -O-alkyle ; et R1, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles,
ou un sel pharmaceutiquement acceptable dudit composé,
pour le traitement des pathologies ci-dessus indiquées De tels composés regroupent ceux de formule (l)/(l') définis ci-avant, ainsi que l'heptasaccharide 10 défini précédemment, décrit dans la demande de brevet US 2006/0079483 A1.
La présente invention, selon un autre de ses aspects, concerne également une méthode de traitement des pathologies ci-dessus indiquées qui comprend l'administration à un patient d'une dose efficace d'un composé selon l'invention ou d'un composé 10, ou un de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
Les médicaments, compositions pharmaceutiques et méthode de traitement selon l'invention peuvent également concerner l'un quelconque des sous-groupes de composés définis précédemment.

Claims

REVENDICATIONS
1. Composés oligosaccharidiques répondant à la formule (I) :
Figure imgf000093_0001
dans laquelle :
- Ri représente un groupe -OSO3 " ou groupe hydroxyle,
- R2 représente soit un groupe -O-alkyle, soit un monosaccharide de formule (II), où R représente un groupe alkyle :
Figure imgf000093_0002
- R3 représente un disaccharide de formule
Figure imgf000093_0003
dans laquelle :
- R4 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R5 représente un disaccharide de formule (IV) :
Figure imgf000093_0004
dans laquelle : - R6 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un disaccharide de formule (Vl)
Figure imgf000094_0001
dans laquelle :
- R8 représente un groupe -OSO3 " ou un groupe hydroxyle,
- R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle, soit un disaccharide de formule (VII) :
Figure imgf000094_0002
dans laquelle Ri0 représente un groupe -O-alkyle,
à la condition que : R9 représente un groupe hydroxyle ou un groupe -O-alkyle lorsque R2 représente un monosaccharide de formule (II) telle que définie ci-dessus ; R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie ci-dessus lorsque R2 représente un groupe -O-alkyle ; et R1, R4, R6 et R8 ne représentent pas simultanément des groupes hydroxyles ;
sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
2. Composés selon la revendication 1 , dans lesquels R2 représente un monosaccharide de formule (II) et R7 représente un groupe hydroxyle.
3. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 2, répondant à la formule (1-1 ) ci-dessous, dans laquelle R7 représente un groupe hydroxyle et R, R1, R4 et R6 sont tels que définis dans la revendication 1 :
Figure imgf000095_0001
(1-1 ) sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
4. Composés selon la revendication 1 , dans lesquels R2 représente un groupe -O-alkyle.
5. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 4, répondant à la formule (I-2) ci-dessous, dans laquelle R2 représente un groupe -O-alkyle et R1, R4, R6,
R8 et R9 sont tels que définis dans la revendication 1 :
Figure imgf000095_0002
sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
6. Composés selon la revendication 1 , dans lesquels :
- R2 représente un groupe -O-alkyle, et
- R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie dans la revendication 1 , dans laquelle R9 représente un disaccharide de formule (VII) telle que définie dans la revendication 1.
7. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 6, répondant à la formule (I-3) ci-dessous, dans laquelle R2 et R9 sont tels que définis dans la revendication 6 et R1, R4, R6, R8 et R10 sont tels que définis dans la revendication 1 :
Figure imgf000096_0001
(I-3) sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
8. Composés selon la revendication 1 , dans lesquels :
- R2 représente un groupe -O-alkyle, et
- R7 représente un disaccharide de formule (Vl) telle que définie dans la revendication 1 , dans laquelle R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle.
9. Composés selon la revendication 1 ou la revendication 8, répondant à la formule (I-2) ci-dessous, dans laquelle Ri, R4, R6 et R8 sont tels que définis dans la revendication 1 , R2 représente un groupe -O-alkyle et R9 représente soit un groupe hydroxyle, soit un groupe -O-alkyle :
Figure imgf000096_0002
sous forme acide ou sous la forme de l'un quelconque de leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
10. Composés selon la revendication 8 ou la revendication 9, dans lesquels R9 représente un groupe -O-alkyle.
1 1. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 10, caractérisés en ce qu'ils répondent à la formule (I'), dans laquelle Ri, R2, R4, Rβ et R7 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 9 :
Figure imgf000097_0001
12. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 1 1 , choisis parmi les composés suivants :
- Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-[(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl-(i→4)]2-(2-O- sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 1) ;
- Méthyl (4-O-propyl-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy -6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-[(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl- (1→4)]3-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→'4)-2-désoxy-6- O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 2) ;
-[Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1 -»4)- [(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→'4)-(2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)]2-2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranoside]-uronate de sodium (n° 3) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1^4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)- (1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 4) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato- α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)- (1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 5) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2- O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D- glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-
(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 6) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)- (1 -»4)- (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 ^4)-(2-désoxy-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L- idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 7) ;
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1^4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium(sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)-[(1→4)-(2- O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1 ^4)-(2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)]2-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-6-O-sodium sulfonato-2- (sulfonato)amino-α-D-glucopyranoside (n° 8) ; et
- Méthyl (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1^4)-(2- désoxy-6-O-sodium sulfonato-2-sodium (sulfonato)amino-α-D-glucopyranosyl)-[(1→4)- (2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-(2-désoxy-6-O- sodium sulfonato-2-sodium (sulfonatoamino)-α-D-glucopyranosyl)]2-(1→4)-(2-O-sodium sulfonato-α-L-idopyranosyluronate de sodium)-(1→4)-2-désoxy-2-sodium
(sulfonatoamino)-α-D-glucopyranoside (n° 9).
13. Médicament, caractérisé en ce qu'il comprend un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 et dans laquelle R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (Vl), où R8 et R9 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 10 :
Figure imgf000099_0001
(V) (Vl) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
14. Médicament selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comprend un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
15. Médicament selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comprend le composé 10 :
Figure imgf000099_0002
10 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier.
16. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, et dans laquelle R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci-dessous, soit un disaccharide de formule (Vl), où R8 et R9 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 10 :
Figure imgf000100_0001
(V) (Vl) ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
17. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
18. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend le composé 10 :
Figure imgf000100_0002
10 ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, ainsi qu'au moins un excipient pharmaceutiquement acceptable.
19. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12 et dans laquelle R7 représente soit un groupe hydroxyle, soit un monosaccharide de formule (V) ci- dessous, soit un disaccharide de formule (Vl), où R8 et R9 sont tels que définis dans l'une quelconque des revendications 1 à 10 :
Figure imgf000101_0001
pour son utilisation dans le traitement des pathologies nécessitant une activation des récepteurs des FGFs.
20. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, ou sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier, pour son utilisation dans le traitement des pathologies nécessitant une activation des récepteurs des FGFs.
21. Composé 10, ou un sel pharmaceutiquement acceptable de ce dernier :
Figure imgf000101_0002
10 pour son utilisation dans le traitement des pathologies nécessitant une activation des récepteurs des FGFs.
22. Composé selon l'une quelconque des revendications 19 à 21 , pour son utilisation dans le traitement des pathologies nécessitant une activation de l'angiogenèse et une revascularisation post-ischémique.
23. Composé l'une quelconque des revendications 19 à 22, pour son utilisation dans le traitement de l'ischémie, telle que l'ischémie cardiaque et l'ischémie artérielle des membres inférieurs, le traitement des maladies associées à un rétrécissement ou à une obstruction des artères ou des artérites, le traitement des angines de poitrine, le traitement de la thromboangéite oblitérante, le traitement de l'athérosclérose, le traitement de l'inhibition de la resténose après angioplastie ou endoartérectomie, le traitement de la cicatrisation, le traitement pour la régénération musculaire, le traitement pour la survie des myoblastes, le traitement de la neuropathie périphérique, le traitement des dommages nerveux post-opératoires, le traitement de déficiences nerveuses telles que la maladie de Parkinson, la maladie d'Alzheimer, la maladie du prion et la dégénérescence neuronale chez l'alcoolique, le traitement de démences, le traitement pour l'amélioration de la survie du greffon de pancréas bioartificiel chez le patient diabétique, le traitement de l'amélioration de la la revascularisation des greffons et de la survie des greffes, le traitement de la dégénérescence rétinienne, le traitement de la rétinite pigmentaire, le traitement de rostéoarthrite, le traitement de la pré- éclampsie ou le traitement des lésions vasculaires et du syndrome de détresse respiratoire aiguë, le traitement pour la réparation des cartilages, le traitement pour la réparation et la protection osseuse, le traitement pour la réparation et la protection des follicules pileux et pour la protection et la régulation de la croissance capillaire.
24. Composé de formule 2OA, dans laquelle Pg, Pg' et Pg", identiques ou différents les uns des autres, représentent des groupes protecteurs :
Figure imgf000102_0001
25. Composé selon la revendication 24, dans lequel Pg, Pg' et Pg" représentent respectivement des groupes benzyle, allyle et acétyle.
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